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Análise do genoma completo de um isolado de Sapovirus no Distrito Federal e expressão do capsídeo do vírus para a produção de "Virus-like particles" pelo sistema de baculovírus recombinantes

Anjos, Karoline dos 15 February 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-18T13:33:46Z No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-19T18:39:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-19T18:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_KarolinedosAnjos.pdf: 3589277 bytes, checksum: 7b03dec6adca57f1166616d32f22f689 (MD5) / A família Caliciviridae é formada por vírus pertencentes a cinco gêneros: Sapovirus, Norovirus, Lagovirus, Vesivirus e Nebovirus. Alguns sapovírus e norovírus são conhecidos como agentes causadores de gastrenterites em humanos, sendo sapovírus o segundo agente viral mais importante depois dos norovírus. O genoma do sapovírus é linear, de senso positivo, ssRNA, com tamanho de cerca de 7,5 kb, poliadenilado na região terminal 3'. Os sapovirus, atualmente, são divididos em sete genogrupos (GI-GVII) que infectam humanos, suínos e visons. Essa classificação é baseada, principalmente na sequência da proteína do capsídeo. Nesse estudo, o genoma completo de um sapovírus isolado (Sapovirus Hu/GI.2/BRDF01/ BRA/2009) em Brasília, Brasil, foi analisado com todas as sequências de sapovírus disponíveis para determinar sua relação filogenética e possíveis eventos de recombinação intra- e inter-genogrupos. Foi determinada uma proximidade filogenética com uma sequência obtida em 2005 em Bangladesh. Uma possível recombinação inter-genogrupo entre GI (humano) e GIII (suíno) assim como recombinações intra-genogrupo foram encontradas nas análises. Outro achado relevante é a região RdRp-CP como sítio de recombinação. Devido à ausência de ferramenta eficaz de diagnóstico imunológico do vírus baseada em procedimento de ELISA, surgiu à demanda de se expressar o capsídeo viral utilizando sistema de expressão de proteína heteróloga para obter anticorpo específico. Dessa forma o segundo objetivo desse trabalho foi produzir VLP de sapovírus utilizando o sistema de baculovírus recombinante. Para a confirmação da montagem dessa particular além de análise em microscopia eletrônica foi produzido um anticorpo policlonal contra a porção variável da proteína do capsídeo (P2). A análise ao microscópio eletrônico de transmissão demonstrou partículas esféricas com tamanhos de 20-40 nm, no entanto a ligação entre o anticorpo anti-P2 e possível VLP expressa não foi demonstrada. Esses resultados indicam que maiores estudos quanto a expressão e purificação de VLP de sapovírus devem ser realizados. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The family Caliciviridae consists of viruses belonging to five genera: Sapovirus, Norovirus, Lagovirus, Vesivirus and Nebovirus. Certain sapovirus and norovirus strains are well-known causative agents of serious human gastroenteritis. Sapovirus is the second most important causative agent of human diseases next to norovirus. The sapovirus genome is linear, positive-sense, single-stranded RNA, of approximately 7,5kb that is polyadenylated at the 3’ terminus. Sapovirus is divided into, at moment, seven genogroups (GI-GVII). This classification is based mainly on capsid protein sequence divergence. In this study, the entire genome of one sapovirus isolated in Brasília, Brazil (Sapovirus Hu/GI.2/BRDF01/ BRA/2009) was evaluated with all available sequences of sapovirus to determine its phylogenetic relationship and possible intra- and inter-genogroups recombination events using RDP3 program. It was determined the identity between the Brazilian sequence and one sequence collected in 2005 in Bangladesh and its possible recombination such as a possibility of an inter-genogroup recombination event between GI (human) and GIII (porcine). Another relevant found is the region of RdRp-CP as a hot spot of recombination. Due to the lack of the efficient diagnostic tools based on ELISA procedure, the preparation of capsid protein of the virus using heterologous protein expression system was requested. Thus the second objective of this work was to produce VLP sapovirus using recombinant baculovirus system. To confirm this particle assembly besides electronic microscopy analysis a polyclonal antibody was produced against the variable region (P2) of the capsid protein. The analysis by transmission electron microscope showed spherical particles with sizes of 20-40 nm, however the response between the anti-P2 and the possible VLP could not be demonstrated. These results indicate that further studies regarding the expression and purification of VLP sapovirus should be performed.
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Detecção por imunoensaio e caracterização molecular de isolados de Norovírus genogrupo II do Distrito Federal de 2006 a 2008

Takamatsu, Denise 03 March 2011 (has links)
Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-11-29T13:29:54Z No. of bitstreams: 1 2011_DeniseTakamatsu.pdf: 9119373 bytes, checksum: 141b36ca97f1837de6484ae5ef965e47 (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-11-29T13:46:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_DeniseTakamatsu.pdf: 9119373 bytes, checksum: 141b36ca97f1837de6484ae5ef965e47 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-29T13:46:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_DeniseTakamatsu.pdf: 9119373 bytes, checksum: 141b36ca97f1837de6484ae5ef965e47 (MD5) / A doença diarréica aguda, ou gastroenterite aguda, representa um grande problema de saúde pública no mundo, afetando mais de 1 bilhão de crianças e adultos a cada ano. A mortalidade associada a essa síndrome é estimada em 6 milhões de casos por ano. A etiologia das gastroenterites é bastante diversa, incluindo bactérias, parasitas e vírus. Os patógenos virais são os agentes mais comumente associados a essa patologia. Dentre os agentes virais, destacam-se os norovírus, considerados atualmente, os principais agentes causais de epidemias de gastroenterites virais no mundo. O gênero Norovirus é constituído por 5 genogrupos (GI, GII, GIII, GIV e GV), sendo o GII o que apresenta maior prevalência em humanos. Dentro deste genogrupo, destaca-se o genótipo 4 (GII/4), por ser o principal causador de gastroenterites em humanos. Recentes trabalhos indicam novas variantes de GII/4 disseminadas pelo mundo. Este trabalho teve como objetivo estudar a variação gênica de norovírus GII que ocorreu no Distrito Federal no período entre 2006-2008. Inicialmente, os isolados do DF foram detectados por meio de tiras imunocromatógráficas, utilizando um total de 182 amostras diarréicas cujos resultados para a presença de bactérias patogênicas, rotavírus e adenovírus foram negativos. A região N terminal do gene que codifica para a proteína do capsídeo foi amplificada por RT-PCR e seqüenciada. A análise filogenética dos 17 norovírus isolados juntamente com sequências referências mostrou que 16 isolados pertencem ao GII/4 e um ao GII/3. Uma amostra de GII/4 foi selecionada para sequenciamento de aproximadamente metade do genoma a partir da região 3’. A análise filogenética do gene que codifica para o capsídeo, de cerca de 1.5 kb, indicou que a estirpe brasileira pertence ao subtipo “2004” ou variante Hunter. Os dados mostraram a utilidade da tira imunocromatográfica para detecção dos norovírus e genótipo dos 17 isolados no Distrito Federal. Para subtipagem, mais estudos são necessários para elucidar a minuciosa circulação de NoV GII/4 no Brasil em relação com a disseminação global. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Acute diarrhea or acute gastroenteritis is a major problem in public health worldwide, affecting more than 1 billion of children and adults per year. The mortality associated with this syndrome is estimated to be 6 million cases a year. The etiology of gastroenteritis is diverse including bacteria, parasites and virus. Viruses are the most common casual agents for this syndrome. Among viruses, nowadays, norovirus is considered the major causative pathogen of epidemics gastroenteritis in the world. A Norwalk virus (Norovirus), the monotipic species of genus Norovirus consisted of 5 genotypes (GI, GII, GIII, GIV and GV), and GII is the most prevalent genotype in humans. Within genogroup II, genotype 4 (GII/4) is the major causative agent in the world. Recent works showed that new variants of GII/4 disseminate worldwide. This study is aimed to moleculary-characterize the norovirus GII isolated in the Federal District during years from 2006 to 2008. At first, norovirus isolates were identified by immunochromatografic strips using a total of 182 diarrheic samples which were negative for bacteria, Rotavirus and Adenovirus. The capsid gene region of Nterminal capsid protein was amplified by RT-PCR and sequenced. Phylogenetic analysis of 17 norovirus isolates with reference sequences showed that 16 isolates belonged to GII/4 and one to GII/3. One GII/4 isolate was selected to be sequenced almost half of its genome at 3’ region. Phylogenetic analysis of whole capsid gene of 1.5 kb showed that this Brazilian isolate belonged to subtype “2004” or Hunter variant. Our results showed that the usefulness of immunochromatografic stripe for norovirus detection and genotype of 17 noroviruses isolated in the Federal District. For subtyping, futher study will be necessary to elucidate the detailed circulation of norovirus GII/4 in Brazil in relation to the global dissemination.
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Produção de Virus Like Particles de Norovírus GII.4 para seleção de anticorpos monoclonais humanos a partir de biblioteca apresentada em fagos

Lamounier, Thaís Alves da Costa 29 July 2013 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-10-31T11:53:56Z No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-04T10:30:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-04T10:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Os Norovírus (NV) são responsáveis pela maioria das gastroenterites humanas não bacterianas em todo o mundo. Devido ao fato das estirpes de NV humanos não possuírem a capacidade de replicação em culturas celulares, a utilização de Virus like particles (VLPs) na compreensão dos fatores imunológicos e físico-químicos torna-se uma boa alternativa para o estudo do genogrupo II genótipo 4 que é considerado o mais prevalente e está associado à epidemia global. O objetivo deste estudo foi produzir VLP de NV variante 2006b e selecionar anticorpos monoclonais humanos a partir de biblioteca apresentada em fagos após a purificação das proteínas. A maior vantagem em utilizar a técnica de Phage Display é a possibilidade da seleção de fragmentos de anticorpos monoclonais totalmente humanos que podem ser utilizados em ensaios clínicos. Foram comparados os métodos de purificação de cloreto de césio (CsCl) e cromatografia de troca iônica, sendo que esta última apresentou um melhor rendimento no que diz respeito à quantidade e pureza das proteínas de capsídeo obtidas. Dos 58 clones analisados após 4 ciclos de seleção utilizando VLP de NV como antígeno, dez foram analisados com Sfi I e BstO I com relação ao perfil e diversidade. Porém, as possíveis recombinações existentes determinaram a esperada diminuição da diversidade da biblioteca ao longo dos ciclos de seleção apesar dos Fabs reconhecerem especificamente o antígeno diferentemente da diversidade inicial, ou seja, na construção da biblioteca. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Norovirus (NV) are responsible for most human nonbacterial gastroenterites worldwide. Because human strains of NV do not have the ability to replicate in cell cultures, the use of virus-like particles (VLPs) in understanding the immunological and physicochemical aspects becomes a good alternative for the study of genogroup II genotype 4, which is considered the most prevalent and is associated with the global epidemic. The aim of this study was to produce VLPs NV 2006b variant and select human monoclonal antibodies from phage-displayed library after purification of proteins. The major advantage in using the technique of phage display is the possibility of selecting fragments of fully human monoclonal antibodies that can be used in clinical trials. The methods of purification of cesium chloride (CsCl) and ion exchange chromatography were compared and the latter had a better performance as regards the amount and purity of the capsid proteins obtained. Of the 58 clones analyzed after 4 cycles of selection using the NV VLP as antigen, ten were analyzed with Sfi I and BstO I with respect to the profile and diversity. However, the possible existing recombinations led to an expected decrease of the library’s diversity during the selection cycles, though Fabs specifically recognized the antigen differently from the initial variety, that is on the construction of the library.
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Desnutrição em pacientes com câncer gastrointestinal : efetividade de diferentes métodos de diagnóstico /

Prado, Corina Dias do. January 2013 (has links)
Orientador: Juliana Alvares Duarte Bonini Campos / Coorientador: João Bosco Faria / Banca: Marisa Veiga Capela / Banca: Patricia Petromilli Nordi Sasso Garcia / Banca: Sergio Vicente Serrano / Banca: Paula Garcia Chiarello / Resumo: Objetivo: verificar a associação do estado nutricional com as características demográficas e clínicas de pacientes com câncer gastrointestinal e estimar a efetividade de diferentes métodos de diagnóstico do estado nutricional frente à Avaliação Subjetiva Global - Produzida Pelo Paciente Escore (ASG-PPP escore). Métodos: Participaram 143 pacientes adultos com câncer gastrointestinal, atendidos na Enfermaria de Oncologia Clínica do Hospital Amaral Carvalho (Jaú-SP), no período de novembro de 2010 a outubro de 2011. Foram levantadas informações para a caracterização demográfica e clínica. Os métodos de diagnóstico do estado nutricional testados foram a relação entre o Peso Real e o Peso Habitual (PR/PH), o Índice de Massa Corporal (IMC), o Índice de Risco Nutricional (NRI) e a Porcentagem de Adequação (Escore %) e como método padrão-ouro utilizou-se a ASG-PPP escore. Para estudos das associações de interesse utilizou-se o teste de qui-quadrado (2). Estimou-se a razão de prevalência (RP). A efetividade dos métodos para detecção do risco de desnutrição ou da presença de desnutrição foi avaliada. Construiu-se a curva ROC e sua área (AUROC) foi estimada. As áreas foram comparadas pela estatística z. Para cada método estabeleceu-se o melhor ponto de corte. Adotou-se nível de significância de 5%. Resultados: A prevalência de desnutrição entre os pacientes avaliados foi de 44,8%. Observou-se que os indivíduos com baixo nível de escolaridade e expostos a alguns sintomas relatados na ASG-PPP escore apresentaram maior chance (RP) de serem classificados como desnutridos. Todos os métodos apresentaram adequada capacidade discriminatória para detecção do risco de desnutrição e presença de desnutrição. O IMC foi significativamente melhor para detecção de desnutrição do que do risco de desnutrição... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: To investigate the association between nutritional status and demographic and clinical characteristics of patients with gastrointestinal cancer and estimate the effectiveness of different methods of diagnosing nutritional status across the Scored Patient-Generated Subjective Global Assessment (scored PG-SGA). Methods: The participants were 143 adult patients with gastrointestinal cancer, cared for in the Infirmary of the Oncology Clinic of the Hospital Amaral Carvalho (Jaú- SP), from November 2010 to October 2011. A survey was conducted to collect information for the purpose of demographic and clinical characterization. Diagnostic methods of nutritional status were tested to the ratio between Real Weight and Habitual Weight (RW/HW), Body Mass Index (BMI), Nutritional Risk Index (NRI) and Percentage Adequacy (Score %) and as gold standard method the scored PG-SGA was used. For the associations of interest the Chi-square (2) test was used. The prevalence ratio (PR) was estimated. The effectiveness of the methods for detecting the risk for or presence of malnutrition was evaluated. A ROC curve was constructed and its area (AUROC) was estimated. The areas were compared using z statistics. For each method the best cut-off point was established. The level of significance adopted was 5%. Results: The prevalence of malnutrition was 44.8%. It was observed that individuals with low education level and exposed to some of the symptoms related in the scored PG-SGA presented greater chance (PR) of being classified as undernourished. All the methods showed adequate discriminatory capacity for detecting the risk of malnutrition and presence of malnutrition. The BMI was significantly better for detecting malnutrition than for the risk of malnutrition. The RW/HW was significantly better... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Desnutrição em pacientes com câncer gastrointestinal: efetividade de diferentes métodos de diagnóstico

Prado, Corina Dias do [UNESP] 21 October 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-21Bitstream added on 2014-06-13T19:01:20Z : No. of bitstreams: 1 salustiano_cdp_dr_arafcf_parcial.pdf: 86471 bytes, checksum: ee7a3f86ed5d954c992727084adad5fe (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-25T13:00:52Z: salustiano_cdp_dr_arafcf_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-25T13:03:16Z : No. of bitstreams: 1 000726367_20151121.pdf: 77715 bytes, checksum: 9ef1ca3d6fb280acf83fda564061eb3b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-27T16:10:06Z: 000726367_20151121.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-27T16:10:44Z : No. of bitstreams: 1 000726367.pdf: 1071257 bytes, checksum: aa7fdbf896155c5ee4a1761c2b89829b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: verificar a associação do estado nutricional com as características demográficas e clínicas de pacientes com câncer gastrointestinal e estimar a efetividade de diferentes métodos de diagnóstico do estado nutricional frente à Avaliação Subjetiva Global – Produzida Pelo Paciente Escore (ASG-PPP escore). Métodos: Participaram 143 pacientes adultos com câncer gastrointestinal, atendidos na Enfermaria de Oncologia Clínica do Hospital Amaral Carvalho (Jaú-SP), no período de novembro de 2010 a outubro de 2011. Foram levantadas informações para a caracterização demográfica e clínica. Os métodos de diagnóstico do estado nutricional testados foram a relação entre o Peso Real e o Peso Habitual (PR/PH), o Índice de Massa Corporal (IMC), o Índice de Risco Nutricional (NRI) e a Porcentagem de Adequação (Escore %) e como método padrão-ouro utilizou-se a ASG-PPP escore. Para estudos das associações de interesse utilizou-se o teste de qui-quadrado (2). Estimou-se a razão de prevalência (RP). A efetividade dos métodos para detecção do risco de desnutrição ou da presença de desnutrição foi avaliada. Construiu-se a curva ROC e sua área (AUROC) foi estimada. As áreas foram comparadas pela estatística z. Para cada método estabeleceu-se o melhor ponto de corte. Adotou-se nível de significância de 5%. Resultados: A prevalência de desnutrição entre os pacientes avaliados foi de 44,8%. Observou-se que os indivíduos com baixo nível de escolaridade e expostos a alguns sintomas relatados na ASG-PPP escore apresentaram maior chance (RP) de serem classificados como desnutridos. Todos os métodos apresentaram adequada capacidade discriminatória para detecção do risco de desnutrição e presença de desnutrição. O IMC foi significativamente melhor para detecção de desnutrição do que do risco de desnutrição... / Objective: To investigate the association between nutritional status and demographic and clinical characteristics of patients with gastrointestinal cancer and estimate the effectiveness of different methods of diagnosing nutritional status across the Scored Patient-Generated Subjective Global Assessment (scored PG-SGA). Methods: The participants were 143 adult patients with gastrointestinal cancer, cared for in the Infirmary of the Oncology Clinic of the Hospital Amaral Carvalho (Jaú- SP), from November 2010 to October 2011. A survey was conducted to collect information for the purpose of demographic and clinical characterization. Diagnostic methods of nutritional status were tested to the ratio between Real Weight and Habitual Weight (RW/HW), Body Mass Index (BMI), Nutritional Risk Index (NRI) and Percentage Adequacy (Score %) and as gold standard method the scored PG-SGA was used. For the associations of interest the Chi-square (2) test was used. The prevalence ratio (PR) was estimated. The effectiveness of the methods for detecting the risk for or presence of malnutrition was evaluated. A ROC curve was constructed and its area (AUROC) was estimated. The areas were compared using z statistics. For each method the best cut-off point was established. The level of significance adopted was 5%. Results: The prevalence of malnutrition was 44.8%. It was observed that individuals with low education level and exposed to some of the symptoms related in the scored PG-SGA presented greater chance (PR) of being classified as undernourished. All the methods showed adequate discriminatory capacity for detecting the risk of malnutrition and presence of malnutrition. The BMI was significantly better for detecting malnutrition than for the risk of malnutrition. The RW/HW was significantly better... (Complete abstract click electronic access below)
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Avaliação do Helicobacter em cães oriundos do Biotério Central da Unesp - Campus de Botucatu

Souza, Maria Lúcia de [UNESP] January 2003 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:30:03Z : No. of bitstreams: 1 souza_ml_me_botfm.pdf: 633844 bytes, checksum: fe0b935ff3a3529cee98b24f3b1e8d82 (MD5) / O presente trabalho foi delineado para investigar a freqüência de infecção pelo Helicobacter em cães oriundos do Biotério Central da UNESP – Campus de Botucatu - e a incidência da espécie Helicobacter pylori(Hp) nos animais. Os animais utilizados foram capturados em várias cidades, desconhecendo-se seus hábitos alimentares até a captura, mas é provável que foram pertencentes ou conviveram com pessoas de classe sócio-econômica de baixo poder aquisitivo, onde a incidência de Hp em seres humanos é mais elevada. Foram utilizados os métodos de teste rápido da urease, teste imunocromatográfico (kit H. pylori one step teste) e o método histoquímico de coloração pelo Giemsa. A coleta de material foi feita em 109 caninos sem raça definida, sendo 49 machos e 60 fêmeas. O sangue foi retirado da veia jugular e as amostras gástricas e duodenais foram obtidas por endoscopia (61/109) e pela técnica aberta (48/109). As análises, pelo teste rápido da urease e coloração pelo Giemsa, mostraram que, em 97,96% dos machos (48/49) e em 100% das fêmeas (60/60), foi detectada reação positiva para Helicobacter, sendo 99,08% (108/109) na totalidade dos animais. Não foram observadas alterações estatisticamente significativas entre os dois sexos... / The present work was delineated to investigate the infection frequency for Helicobacter in dogs originating from Central Animal House of UNESP - Campus of Botucatu - and the incidence of the species pylori in the animals. The used animals were captured in several towns, being ignored their alimentary habits until the capture, but it is probable that they belonged or they lived together with people of socioeconomic class of low purchasing power, where the incidence of H. pylori in humans is higher. The methods used were of fast urease test, immunocromatograph test (kit H. pylori one step test) and histochemical coloration method for Giemsa. The material collection was made in 109 mongrel dogs, being 49 males and 60 females. The blood was removed of the jugular vein and the gastric and duodenal samples were obtained by endoscopy (61/109) and by the open technique (48/109). The analyses for the fast test of the urease and coloration for Giemsa showed that, in 97,96% of the males (48/49) and in 100% of the females (60/60), positive reaction was detected for Helicobacter, being 99,08% (108/109) in the totality of the animals. No statistically significant alterations significant were observed between the two sexes... (Complete abstract, click electronic address below)
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Efeito do geraniol sobre a doença ulcerosa péptica experimental /

Carvalho, Katharinne Ingrid Moraes de. January 2012 (has links)
Orientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Marcos José Salvador / Banca: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: A úlcera péptica é causada por um desequilíbrio entre os fatores protetores e lesivos da mucosa. A expansão global no consumo de álcool e DAINEs têm contribuído para um aumento da incidência da doença na população. Um dos maiores problemas relativo à úlcera péptica consiste na recidiva da mesma após a terapêutica, justificando-se a busca por novos tratamentos mais eficazes. Relatos científicos mostram que os óleos essenciais derivados das plantas possuem uma variedade de atividades biológicas, tais como ansiolíticos, antioxidantes, antiinflamatórios e antiulcerogênicos. Baseando-se nessa premissa resolvemos avaliar a atividade gastroprotetora do monoterpeno geraniol. Os resultados do estudo mostraram que o geraniol na dose de 7,5 mg/Kg foi efetivo no modelo de úlcera induzida por etanol absoluto com 70% de proteção. Essa ação gastroprotetora mostrou-se dependente da presença de óxido nítrico, dos grupamentos sulfidrilas e do aumento na produção de muco gástrico. No modelo de úlcera gástrica induzida por indometacina o geraniol não teve ação antiulcerogênica, sugerindo-se que a proteção desse monoterpeno esteja associada à metabólitos da via da COX, tais como: as prostaglandinas. No modelo de úlcera induzida por etanol em ratos pré-tratados com indometacina, os resultados indicaram que a gastroproteção do geraniol está relacionada com as PGs, uma vez que na presença de um inibidor da COX, ele perdeu sua proteção. Os dados apontam ainda para uma atividade antioxidante, comprovada no modelo de isquemia e reperfusão, onde o geraniol conferiu uma proteção à mucosa gástrica de 71%, e no modelo de úlcera duodenal induzida por cisteamina cuja proteção observada foi de 68%. No modelo de ligadura de piloro observou-se a ausência de atividade antisecretória gástrica e verificou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A peptic ulcer is caused by an imbalance between the protective and the agressive factors of the mucosa. The global expansion in the consumption of alcohol and NSAIDs have contributed to an increased incidence of disease in the population. One of the biggest problems relative on peptic ulcer is recurrence of it after the treatment, justifying the search for new more effective treatments. Scientific reports show that essential oils derived from plants have a variety of biological activities, such as anxiolytics, antioxidants, anti-inflammatory and antiulcerogenics. Based on this assumption we decided to evaluate the gastroprotective activity of the monoterpene geraniol. The study results showed that geraniol at a dose of 7.5 mg/Kg was effective in the model of ulcer induced by absolute ethanol with 70% protection. This gastroprotective action was dependent on the presence of nitric oxide, sulfhydryl groups (SHs) and increased production of gastric mucus. In the model of gastric ulcer indomethacin-induced geraniol (7.5 mg / kg) did not had antiulcerogenic action, suggesting that protection this monoterpene is associated with metabolites of the COX pathway, such as prostaglandins. In the model of ethanol-induced ulcer in rats pretreated with indomethacin the results indicated that the geraniol's gastroprotection is related to the prostaglandins, since in the presence of a COX inhibitor, it lost its protection. The results also point to an antioxidant activity, proven in the model of ischemia and reperfusion, where geraniol gave a protection to the gastric mucosa of 71% and the model of duodenal ulcer cysteamine-induced whose protection observed was 68%. In the pylorus ligation model was observed the absence of gastric antisecretory activity and was verified through the model of activated charcoal that this monoterpene... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Diagnóstico morfológico e molecular de Haemonchus spp. em bovinos e ovinos /

Silva, Maria Regina Lucas da. January 2014 (has links)
Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Resumo: Infecções por nematódeos gastrintestinais causam consideráveis perdas na pecuária. Haemonchus spp. é o principal nematódeo que acometem bovinos e ovinos principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Portanto este estudo teve por objetivo avaliar metodologias de diagnóstico baseado em analises morfológicas e moleculares de larvas infectantes e adultos de Haemonchus spp. Foram utilizados 23 bezerros e 20 cordeiros naturalmente infectados por nematódeos gastrintestinais. Antes da necropsia dos animais, fezes foram coletadas para realização de coproculturas e obtenção de larvas infectantes, que foram morfometricamente analisadas. Logo após o sacrifício dos animais, os abomasos foram removidos e congelados, para posterior recuperação dos exemplares de Haemonchus spp. que foram armazenados em álcool 70º. No caso dos ovinos, os parasitas permaneceram estocados em alcool 70º por mais de um ano antes de serem analisados, enquanto que os parasitas dos bovinos foram armazenados por apenas quatro meses. O diagnóstico morfológico dos Haemonchus machos foi realizado por meio da análise de sínlofe e mensuração de espículos. Os mesmos parasitas utilizados na análise morfológica foram submetidos à análise molecular, com utilização da PCR, com os primers 52/154, 75/86 e Hplacbotu. A técnica padrão ouro para identificação de Haemonchus similis foi análise de espículos e para Haemonchus placei foi PCR com os primes HplacBotu. Todas as amostras de ovinos foram consideradas como sendo de Haemonchus contortus, devido à especificidade parasitária e nenhuma evidencia de outras espécies de Haemonchus nas análises moleculares. Os resultados demonstraram diferença estatística no comprimento da distância entre o final da L3 e o final da bainha das larvas infectantes das três espécies. Houve sobreposição de medidas de apenas 1,26% entre as espécies H. placei e H. contortus. Na análises moleculares o par ... / Abstract: Nematodes gastrointestinal infection causes considerable losses in the livestock industry. Haemonchus spp. is major nematode that affects cattle and sheep mainly in tropical and subtropical region. Therefore, the aim of the present study was to assess diagnosis methodologies based in morphological and molecular analysis of infective larvae and adults of Haemonchus spp. Twenty-three calves and twenty lambs naturally infected with gastrointestinal nematodes were utilized. Before necropsy of animals, faecal samples were collated for preparing faecal cultures and obtaining infective larvae that were morphometrically analyzed. After the euthanasia of animals the abomasums were removed and frozen for posterior recovered Haemonchus specimens that were stored in alcohol 70º. In the case sheep, the parasites remained stored in alcohol 70º for more than one year before be analyzed, while the parasites of cattle were stored for only four months. The morphological diagnosis of males Haemonchus spp. was released by synlophe analysis and spicule measurements. The same parasites used in the morphological analysis were submitted in the molecular analysis, using PCR, with primers 52/159, 75/86 and HplacBotu. The "gold standard" method used to identify Haemonchus similis was spicules analysis and to identify Haemonchus placei was PCR with the primers HplacBotu. All Haemonchus specimens recovered from sheep were assumed to be Haemonchus contortus based on host specificity, and because the molecular analysis did not show any evidence of other Haemonchus species. The results presented statistic differences in the sheath tail length of infective larvae of three species. There was overlapping of measurements was only 1.26% between H.contortus and H. placei. In the espicule analysis also were observed same overlapping of measurements that caused misidentification of H. placei and H. contortus. In relation the synlophe most samples ... / Mestre
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Diagnóstico morfológico e molecular de Haemonchus spp. em bovinos e ovinos

Silva, Maria Regina Lucas da [UNESP] 28 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-12-02T11:21:18Z : No. of bitstreams: 1 000784203.pdf: 2707587 bytes, checksum: 60463c95eda02952a5fde820ad4e0531 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-11-19T17:38:36Z : No. of bitstreams: 1 000784203_20160228.pdf: 79467 bytes, checksum: 21171e215aeff9c2ee4e0d2294237064 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-29T12:16:28Z: 000784203_20160228.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-29T12:17:26Z : No. of bitstreams: 1 000784203.pdf: 2707582 bytes, checksum: 3f7192c7784f1822d5d754fa4604956e (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000784203_20180228.pdf: 109002 bytes, checksum: 424f5f1795170ba23918fbed01d7890b (MD5) Bitstreams deleted on 2018-03-02T12:40:00Z: 000784203_20180228.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-03-02T12:40:57Z : No. of bitstreams: 1 000784203.pdf: 2707585 bytes, checksum: 744cb15abdfa0446e7f2731acecf8660 (MD5) / Infecções por nematódeos gastrintestinais causam consideráveis perdas na pecuária. Haemonchus spp. é o principal nematódeo que acometem bovinos e ovinos principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Portanto este estudo teve por objetivo avaliar metodologias de diagnóstico baseado em analises morfológicas e moleculares de larvas infectantes e adultos de Haemonchus spp. Foram utilizados 23 bezerros e 20 cordeiros naturalmente infectados por nematódeos gastrintestinais. Antes da necropsia dos animais, fezes foram coletadas para realização de coproculturas e obtenção de larvas infectantes, que foram morfometricamente analisadas. Logo após o sacrifício dos animais, os abomasos foram removidos e congelados, para posterior recuperação dos exemplares de Haemonchus spp. que foram armazenados em álcool 70º. No caso dos ovinos, os parasitas permaneceram estocados em alcool 70º por mais de um ano antes de serem analisados, enquanto que os parasitas dos bovinos foram armazenados por apenas quatro meses. O diagnóstico morfológico dos Haemonchus machos foi realizado por meio da análise de sínlofe e mensuração de espículos. Os mesmos parasitas utilizados na análise morfológica foram submetidos à análise molecular, com utilização da PCR, com os primers 52/154, 75/86 e Hplacbotu. A técnica padrão ouro para identificação de Haemonchus similis foi análise de espículos e para Haemonchus placei foi PCR com os primes HplacBotu. Todas as amostras de ovinos foram consideradas como sendo de Haemonchus contortus, devido à especificidade parasitária e nenhuma evidencia de outras espécies de Haemonchus nas análises moleculares. Os resultados demonstraram diferença estatística no comprimento da distância entre o final da L3 e o final da bainha das larvas infectantes das três espécies. Houve sobreposição de medidas de apenas 1,26% entre as espécies H. placei e H. contortus. Na análises moleculares o par ... / Nematodes gastrointestinal infection causes considerable losses in the livestock industry. Haemonchus spp. is major nematode that affects cattle and sheep mainly in tropical and subtropical region. Therefore, the aim of the present study was to assess diagnosis methodologies based in morphological and molecular analysis of infective larvae and adults of Haemonchus spp. Twenty-three calves and twenty lambs naturally infected with gastrointestinal nematodes were utilized. Before necropsy of animals, faecal samples were collated for preparing faecal cultures and obtaining infective larvae that were morphometrically analyzed. After the euthanasia of animals the abomasums were removed and frozen for posterior recovered Haemonchus specimens that were stored in alcohol 70º. In the case sheep, the parasites remained stored in alcohol 70º for more than one year before be analyzed, while the parasites of cattle were stored for only four months. The morphological diagnosis of males Haemonchus spp. was released by synlophe analysis and spicule measurements. The same parasites used in the morphological analysis were submitted in the molecular analysis, using PCR, with primers 52/159, 75/86 and HplacBotu. The “gold standard” method used to identify Haemonchus similis was spicules analysis and to identify Haemonchus placei was PCR with the primers HplacBotu. All Haemonchus specimens recovered from sheep were assumed to be Haemonchus contortus based on host specificity, and because the molecular analysis did not show any evidence of other Haemonchus species. The results presented statistic differences in the sheath tail length of infective larvae of three species. There was overlapping of measurements was only 1.26% between H.contortus and H. placei. In the espicule analysis also were observed same overlapping of measurements that caused misidentification of H. placei and H. contortus. In relation the synlophe most samples ...
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Avaliação do Helicobacter em cães oriundos do Biotério Central da Unesp - Campus de Botucatu /

Souza, Maria Lúcia de January 2003 (has links)
Resumo: O presente trabalho foi delineado para investigar a freqüência de infecção pelo Helicobacter em cães oriundos do Biotério Central da UNESP - Campus de Botucatu - e a incidência da espécie Helicobacter pylori(Hp) nos animais. Os animais utilizados foram capturados em várias cidades, desconhecendo-se seus hábitos alimentares até a captura, mas é provável que foram pertencentes ou conviveram com pessoas de classe sócio-econômica de baixo poder aquisitivo, onde a incidência de Hp em seres humanos é mais elevada. Foram utilizados os métodos de teste rápido da urease, teste imunocromatográfico (kit H. pylori one step teste) e o método histoquímico de coloração pelo Giemsa. A coleta de material foi feita em 109 caninos sem raça definida, sendo 49 machos e 60 fêmeas. O sangue foi retirado da veia jugular e as amostras gástricas e duodenais foram obtidas por endoscopia (61/109) e pela técnica aberta (48/109). As análises, pelo teste rápido da urease e coloração pelo Giemsa, mostraram que, em 97,96% dos machos (48/49) e em 100% das fêmeas (60/60), foi detectada reação positiva para Helicobacter, sendo 99,08% (108/109) na totalidade dos animais. Não foram observadas alterações estatisticamente significativas entre os dois sexos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work was delineated to investigate the infection frequency for Helicobacter in dogs originating from Central Animal House of UNESP - Campus of Botucatu - and the incidence of the species pylori in the animals. The used animals were captured in several towns, being ignored their alimentary habits until the capture, but it is probable that they belonged or they lived together with people of socioeconomic class of low purchasing power, where the incidence of H. pylori in humans is higher. The methods used were of fast urease test, immunocromatograph test (kit H. pylori one step test) and histochemical coloration method for Giemsa. The material collection was made in 109 mongrel dogs, being 49 males and 60 females. The blood was removed of the jugular vein and the gastric and duodenal samples were obtained by endoscopy (61/109) and by the open technique (48/109). The analyses for the fast test of the urease and coloration for Giemsa showed that, in 97,96% of the males (48/49) and in 100% of the females (60/60), positive reaction was detected for Helicobacter, being 99,08% (108/109) in the totality of the animals. No statistically significant alterations significant were observed between the two sexes... (Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Luiz Eduardo Naresse / Coorientador: Rogério Saad Hossne / Mestre

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