Made available in DSpace on 2014-10-09T12:44:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06882.pdf: 5110355 bytes, checksum: 668c71c778c1cbf8aaae51261934b794 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Coorientador: João Ferreira de Lima Neto / Banca: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Resumo: O estudo avaliou a viabilidade in vitro do biomaterial "Selante de Fibrina derivado de veneno de serpente" (SF), como arcabouço para células tronco mesenquimais (CTMs) de ratos. O SF é um material caracterizado como adesivo biológico, e foi produzido e fornecido pelo Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, CEVAP, Brasil. As CTMs foram coletadas a partir da medula óssea de fêmures e tíbias de ratos e foram caracterizadas por meio de citometria de fluxo com auxilio de marcadores positivos: CD 44 e CD 90 (CTMs) e marcador negativo: CD 34 (células tronco hematopoiéticas). Cultivos foram induzidos para diferenciarem-se em linhagens específicas (osteogênico, condrogênico e adipogênico). Para avaliação do crescimento in vitro e a viabilidade celular em conjunto ao biomaterial foram utilizadas microscopia óptica de luz invertida, microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O SF em contato com as CTMs não induziu a diferenciação espontânea para as linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. As diferentes técnicas de avaliação microscópica utilizadas mostraram que o SF foi capaz de realizar a captura e manutenção das CTMs e houve interação das células com o interior e superfície do biomaterial. Portanto, a coleta, o cultivo e a caracterização das CTMs de ratos foram possíveis. O SF mostrou-se eficiente como arcabouço biológico e interagiu com as células tronco mesenquimais mantendo-as viáveis, oferecendo-se como uma ferramenta de uso clínico-cirúrgico alternativa para processos regenerativos visando terapias mais eficientes / Abstract: This study evaluated the in vitro viability of biomaterial Fibrin Sealant (FS) derived from snake venom as a scaffold for rat mesenchymal stem cells (MSCs). The FS is characterized as a biological adhesive material, and is produced and was supplied by the Center for the Study of Venoms and Venomous Animals, CEVAP, Brazil. MSCs were collected from the bone marrow of femurs and tibias of rat and were characterized using flow cytometry with CD 44 and CD 90 positive markers (MSC) and CD34 negative marker (mononuclear stem cells). Cultivations were induced to differentiate into specific cell lineage (osteogenic, chondrogenic and adipogenic). To evaluate the in vitro growth and cell viability with the biomaterial were used inverted light optical microscopy, fluorescence microscopy and scanning electron microscopy and transmission. The SF did not cause the spontaneous differentiation in contact with MSCs to osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineage. Different microscopy techniques showed that the SF was able to accomplish the capture and maintenance of MSCs and there was interaction with the cell interior and surface of the biomaterial. Finally, the collection, cultivation and characterization of rat MSCs were possible. The SF was effective as a biological scaffold and interacted with the MSCs keeping them viable offering itself as a tool for clinical and surgical alternative providing clinical and surgical therapies more efficient for regenerative processes / Mestre

A despeito da elevada diversidade de serpentes na região da Serra do Mar, o estado de conservação dessa fauna permanece praticamente desconhecido. A escassez de conhecimento sobre as populações dessas serpentes torna difícil avaliar sua vulnerabilidade à extinção de acordo com os critérios da IUCN. Neste estudo, avaliamos a vulnerabilidade à extinção de 76 serpentes que ocorrem na Serra do Mar produzindo índices de vulnerabilidade natural (IVN) a partir de oito fatores intrínsecos que supostamente afetam sua sobrevivência (tamanho do corpo, tamanho da ninhada, grau de especialização alimentar, grau de especialização em hábitat, área da distribuição geográfica, amplitude climática da distribuição, amplitude altitudinal da distribuição e capacidade de colonizar áreas alteradas). O IVN variou de 0,5 para Philodryas patagoniensis e Thamnodynastes strigatus até 2,9 para Corallus cropanii. Dentre as 76 espécies estudadas, 13 (17,1%) apresentaram IVN entre 0 e 1, 48 (63,2%) apresentaram IVN entre 1,1 e 2 e 15 (19,7%) espécies apresentaram IVN entre 2,1 e 3. As espécies pertencentes ao primeiro grupo apresentam distribuição bastante ampla e quase todas ocorrem em mais de nove ecorregiões e apresentam amplitude latitudinal superior a 20º. Todas as espécies pertencentes ao último grupo apresentam distribuição restrita, nenhuma delas ocorre em mais de três ecorregiões diferentes e quase todas estão restritas a menos de 5º de latutide. Os fatores relacionados à distribuição geográfica e à capacidade de persistir em áreas alteradas parecem ser os mais importantes na determinação da vulnerabilidade à extinção das serpentes da Serra do Mar. Encontramos resultados satisfatórios ao comparar nosso ranqueamento com as listas vermelhas globais e regionais pré-existentes. Os escores das espécies para os fatores considerados mostraram sinal filogenético, provavelmente porque os fatores biológicos tendem a ser conservados. Comparando as diferentes linhagens filogenéticas, Viperidae, Dipsadinae, Echinantherini e Pseudoboini parecem ser as mais vulneráveis à extinção, e especial atenção deve ser dada a essas linhagens em futuros programas de conservação. / Despite the high diversity of snakes in the Serra do Mar region of southeastern Brazil, the conservation status of this fauna is virtually unknown. The scarcity of information on their populations makes it difficult to evaluate their vulnerability to extinction using the IUCN categories and criteria. We evaluated the vulnerability to extinction of 76 species that occur in the Serra do Mar region by producing indices of natural vulnerability (INV) based on eight intrinsic factors which supposedly affect the survival of snakes (body size, litter size, degree of food specialization, degree of habitat specialization, distribution area, climatic range of distribution, altitudinal range, and capacity to persist in human disturbed areas). The INV varied from 0.5 for Philodryas patagoniensis and Thamnodynastes strigatus to 2.9 for Corallus cropanii. Among the 76 species studied, 13 (17.1%) showed INV from 0 and 1, 48 (63.2%) showed INV from 1.1 to 2, and 15 (19.7%) species showed INV from 2.1 to 3. Species in the first group showed large distribution ranges and almost all occurred in more than nine WWF ecoregions and showed latitudinal ranges (= climatic ranges) above 20º. Among the species in the third group (higher INV) all showed small distribution ranges, all occur in less than four WWF ecoregions, and almost all are restricted to less than 5º of latutide. Factors related to geographic distribution and capacity to persist in human disturbed areas seem to be more important in determining vulnerability of extinction in the snakes of Serra do Mar. Our vulnerability ranking compared reasonably well with the global and regional red lists. The scores of species for the factors used showed phylogenetic signal, probably because biological factors tend to be conserved. Comparing INV among the lineages which compose the Serra do Mar snake fauna, we found that Viperidae, Dipsadinae, Echinantherini, and Pseudoboini tended to be more vulnerable than the remaining lineages; thus, especial attention should be devoted to these groups in future conservation programs.

Crotalfina é um peptídeo sintetizado a partir da sequência de um composto analgésico purificado do veneno de serpentes Crotalus durissus terrificus. Apesar da atividade opióide, ensaios moleculares indicam que esse peptídeo não se liga diretamente aos receptores opióides, sugerindo que a liberação de opióides endógenos sejam os responsáveis pela atividade analgésica. Baseado em dados da literatura que demonstram a estreita relação entre o sistema canabinóide e o sistema opióide, o objetivo deste projeto foi avaliar o possível efeito da crotalfina sobre o sistema canabinóide. Os resultados indicam que receptores canabinóides CB2 estão envolvidos na antinocicepção acarretada pela crotalfina, na vigência de hiperalgesia induzida por PGE2. Ainda, este efeito é dependente de liberação de opióides endógenos, particularmente dinorfina A, agonista endógeno de receptores opióides do tipo kappa, sendo essa liberação dependente da ativação de receptores CB2. / Crotalphine is a peptide synthesized based on the sequence of the analgesic compound purified from the Crotalus durissus terrificus snake venom. Despite the opioid activity, molecular assays indicate that this peptide does not directly bind to opioid receptors, suggesting that the endogenous opioid release could be responsible for analgesic activity. Based on data from literature demonstrating the close relationship between the cannabinoid and the opioid systems, the goal of this project was to evaluate the possible effect of crotalphine on the cannabinoid system. Results demonstrated that CB2 cannabinoid receptors are involved in the antinociception induced by crotalphine during PGE2-induced hyperalgesia. In agreement, this effect is dependent of the release of endogenous opioids, particularly dynorphin A, the endogenous agonist of kappa opioid receptors. This release is dependent of the CB2 receptor activation.

O adrenoceptor <font face=\"symbol\">b está presente na glândula de veneno de Bothrops jararaca, tanto no estado quiescente como no ativado por 4 dias, entretanto, quando estimulado, aumenta os níveis de AMPc somente em células secretoras no estado quiescente. Neste trabalho, estudamos funcionalmente o adrenoceptor <font face=\"symbol\">b durante o ciclo de produção de veneno e verificamos a sua função. Mostramos que a estimulação do adrenoceptor <font face=\"symbol\">b promove aumento na taxa de acidificação do meio extracelular em células quiescentes e ativadas por 4 dias, mas não por 15 dias. Em células quiescentes, a estimulação do adrenoceptor <font face=\"symbol\">b também promove o influxo de cálcio, via canais operados por voltagem e por receptor e a liberação de cálcio de estoques intracelulares sensíveis a tapsigargina. Em células ativadas por 4 dias, o aumento de cálcio citosólico é significativamente menor do que em células quiescentes, confirmando a dessensibilização deste receptor. PKA não participa desta sinalização. Dados in vivo mostram que o adrenoceptor <font face=\"symbol\">b é importante para desencadear o ciclo de produção de veneno. / <font face=\"symbol\">b adrenoceptor is present in quiescent and 4 days activated secretory cells of venom gland of Bothrops jararaca snake, however its stimulation increase cAMP production only in quiescent cells. In this work, we functionally characterized <font face=\"symbol\">b adrenoceptor during the venom production cycle and verified its function in venom production. We showed that the stimulation of <font face=\"symbol\">b adrenoceptor increases the rate of extracellular acidification in quiescent and 4 days activated cells, but not in 15 days activated cells. In quiescent cells, <font face=\"symbol\">b adrenoceptor stimulation also triggers calcium influx through voltage-operated and receptor-operated calcium channels, and calcium release from tapsigargin-sensitive stores. In 4 days activated cells, <font face=\"symbol\">b adrenoceptor stimulation promotes smaller increases in citosolic calcium concentration than in quiescent cells, confirming that this adrenoceptor undergoes to dessensitization. PKA does not participate in calcium signaling. In vivo experiments showed that <font face=\"symbol\">b adrenoceptor is important to trigger the cycle of venom production.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:36:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 04487.pdf: 6202047 bytes, checksum: d6f9351f75eefa6c4071a16adc9fca21 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06006.pdf: 3042340 bytes, checksum: 62a6ebd206107cfeefee505a16da38f3 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

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Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2016-08-26T11:30:14Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Diversos estudos de serpentes têm mostrado que algumas substâncias componentes de seus venenos possuem eficiência na atividade antitumoral nos ensaios realizados em laboratório em células in vitro e in vivo. O veneno da cascavel Crotalus vegrandis possuem atividades neurotoxica, miotoxica e hemorrágica. A crotoxina simile é um importante componente desse veneno sendo formada por uma proteína que possui uma unidade ácida (Crotapotina) ligada a uma subunidade básica (PLA2). Devido ao fato de existirem poucos estudos relativos ao veneno de Crotalus vegrandis, torna-se necessário o isolamento e a caracterização de suas biomoléculas e uma maior investigação do seu potencial e sua eficácia como agente terapêutico contra células tumorais. No presente trabalho, foi realizado o isolamento e a caracterização da crotoxina simile de Crotalus vegrandis, bem como seu efeito citotóxico em células L929 e B16F10. Realizou-se o cultivo dessas células em placas com 96 poços, para, então, serem colocadas em contato direto com diferentes frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis por um tempo total de 48 horas. Para efeitos de comparação realizou-se o mesmo ensaio com frações do veneno purificado da cascavel brasileira Crotalus durissus terrificus. Para a avaliação da viabilidade celular o tratamento com as frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis e Crotalus durissus terrificus, realizou-se os ensaios com MTT. Os resultados mostraram uma atividade de grande toxicidade para ambos os venenos em células tumorais B16F10 e pouca toxicidade para as células normais L929. Ainda nos ensaios comparativos com os dois venenos, verificou-se que, para uma dada concentração, as frações do veneno de Crotalus vegrandis possuem uma maior eficiência que qualquer concentração do veneno de Crotalus durissus terrificus, havendo uma maior especificidade para as células B16F10. A crotoxina símile isolada do veneno de Crotalus vegrandis apresentou atividade citotóxica mais preponderante na linhagem celular tumoral B16F10, após 48 horas concentrações de 250 e 125 ug/mL. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2016-12-21T18:09:44Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-12-21T18:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A Austrália é um país cuja fauna é um repositório de potenciais novos biofármacos, pois se encontram no continente os animais mais mortais do planeta, dentre eles, as serpentes. A serpente Pseudechis australis (Mulga snake) é a maior serpente venenosa da Austrália e tem ampla distribuição geográfica. Os venenos de serpentes são complexas misturas com proteínas e peptídeos que apresentam uma variedade de atividades biológicas. Devido à riqueza de seus componentes, várias moléculas encontradas no veneno vêm sendo utilizadas com fins terapêuticos, como agentes anticoagulantes ou analgésicos. Apesar dessas informações, existem poucos dados disponíveis sobre os componentes específicos deste veneno. O presente trabalho tem como objetivo isolar e caracterizar as proteases desse veneno, ainda não descritas, um primeiro passo para compreender o papel destas enzimas no processo de envenenamento, assim como seus inibidores endógenos. Estes desempenham uma função protetora da glândula de veneno, inibindo a ação das enzimas in loco, prevenindo assim a degradação do tecido glandular por estas toxinas. O interesse nestes inibidores está relacionado ao seu potencial uso na terapia de diversas doenças como distúrbios da coagulação, hipertensão e câncer. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP