Orientador :Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Danielle Cardoso Geraldo Maia / Banca: Márcia Antoniazi Michelin / Banca: Dagmar Ruth Stach-Machado / Banca: Leila Aparecida Chiavacci / Resumo: Introdução: a integrina αvβ3 causa adesão celular à vitronectina e está expressa em diversos tumores humanos, mas está em níveis muito reduzidos nos tecidos normais, sendo mais notável em células derivadas da medula óssea. A desintegrina recombinante DisBa-01 se liga à integrina αvβ3, inibindo a adesão celular à vitronectina. Apresenta também uma capacidade antimetastática in vivo e antitrombótica in vitro. As micelas são sistemas de transporte que podem direcionar o fármaco ao tecido alvo de forma passiva, se acumulando onde a microvasculatura esteja mais permeável, como no caso do câncer. Objetivos: verificar a perda de adesão, a liberação de mediadores, a citotoxicidade e a anoikis gerados pela desintegrina DisBa-01, tanto em sua forma livre como incorporada em micelas, em linhagens celulares que expressem ou não a integrina αvβ3. Métodos: a desintegrina foi expressa em bactérias Escherichia coli a partir de um cDNA fusionado ao vetor pET28a, e então purificada por cromatografias e diálises. As micelas controle (M-C) ou contendo a desintegrina (M-DB) foram estruturadas com polissorbato 80 e fosfatidilcolina de soja, e foi observado o diâmetro médio e índice de polidispersidade por espalhamento dinâmico de luz, o potencial zeta por microeletroforese, a eficiência de encapsulação por dosagem protéica de Lowry, a avaliação estrutural da desintegrina encapsulada por espectroscopias de dicroísmo circular e de fluorescência e a estrutura das micelas pela curva de SAXS. As micelas e a proteína livre foram testadas em linhagens HUVEC e SC, contendo a integrina αvβ3, e K562, não contendo esta integrina. Foram avaliados a citotoxicidade pelo teste de MTT, a inibição de adesão celular ou descolamento a vitronectina e fibronectina por quantificação das células aderidas com cristal violeta, a anoikis por observação das células viáveis e em apoptose se aderidas ou não por MTT, Apo-Direct ... / Abstract: Introduction: integrin αvβ3 sustain cellular adhesion to vitronectin and is expressed on a diversity of human tumors but is present at very low levels on normal tissues, with notable expression on bone marrow-derived cells. The recombinant disintegrin DisBa-01 binds to αvβ3 integrin, inhibiting cell adhesion to vitronectin. It also features an in vivo anti-metastatic ability and in vitro anti-thrombotic function. Micelles are a transport system that can direct a drug to the target tissue passively, accumulating where microvasculature is more permeable, which happens on cancer. Objectives: to verify adhesion loss, mediators production, citotoxicity and anoikis generated by disintegrin DisBa-01, both in its free form or incorporated into micelles, in cell lines expressing or not αvβ3 integrin. Methods: the disintegrin was expressed in Escherichia coli using a cDNA fused to vector pET28a, and then purified by chromatography and dialyses. Control micelles (M-C) or containing disintegrin (M-DB) were assembled using polysorbate 80 and soy phosphatidylcholine, and it was observed the average diameter and polydispersity index by dynamic light scattering, zeta potential by microelectrophoresis, the efficiency of encapsulation by protein determination using Lowry reagent, structural assessment of disintegrin encapsulated by circular dichroism spectroscopy and fluorescence spectroscopy and micelles' structure by SAXS curve. The protein free or incorporated into micelles were tested in HUVEC and SC, containing integrin αvβ3, and in K562, not containing this integrin. Cytotoxicity was evaluated by MTT assay, inhibition of cell adhesion and detachment to vitronectin or fibronectin by quantifying the adherent cells with crystal violet, the anoikis by observation of viable cells and apoptosis, whether attached or not, by MTT, Apo-Direct and annexin V, and production of mediators VEGF-A, IL-8, TGF-β, TNF-α, IL-12 and ... / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:57:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340733.pdf: 4900918 bytes, checksum: 4ded1757ae8581e2321959028f243ffc (MD5) Previous issue date: 2016 / Elie Metchnikoff descreveu pela primeira vez os macrófagos e suas funções, uma delas é a fagocitose e eliminação de patógenos. Porém, alguns microrganismos desenvolveram estratégias para sobreviver dentro destas células, um exemplo de sucesso é o Mycobacterium tuberculosis (Mtb), o agente causador da tuberculose. Este bacilo ganha acesso ao interior dos macrófagos utilizando receptores na superfície destas células. Devido à sua grande heterogeneidade, os macrófagos apresentam diversas moléculas em sua superfície, é possível que Mtb utilize diferencialmente essas moléculas para sua sobrevivência intracelular. A heterogeneidade dos macrófagos foi explorada neste trabalho através de duas subpopulações distintas de macrófagos derivados de medula óssea (MMOs). Estas subpopulações foram separadas, por citometria de fluxo, baseadas em características de tamanho, complexidade e por moléculas expressas em sua superfície. A subpopulação maior e mais complexa, foi denominada A e apresenta uma frequência média de 65%, já a subpopulação menor e menos complexa, denominada B, apresenta uma frequência média de 15%. Para estudar a interação destas subpopulações com Mtb, ensaios de adesão e fagocitose foram realizados. Foi possível observar que Mtb adere e é mais fagocitado pela subpopulação B, a qual foi caracterizada como SSCloFSCloF4/80intCD11bint quando comparada à subpopulação A. As análises de citometria de fluxo indicavam que CD195 (CCR5) era um receptor envolvido no aumento da interação entre a subpopulação B e Mtb, porém MMOs derivados de camundongos nocautes para este receptor apresentam o mesmo perfil de adesão que MMOs de camundongos selvagens. Além disso, também foi investigado se o estágio de maturação da subpopulação B poderia estar envolvido com o aumento da adesão destes macrófagos à Mtb, contudo o estágio de maturação não parece participar neste processo. Em conjunto, os dados deste trabalho mostram que macrófagos de medula óssea apresentam duas subpopulações distintas, chamadas A e B. A subpopulação B apresenta maior interação com Mtb e esta interação não é dependente de CD195. Além disso, a subpopulação B foi caracterizada como SSCloFSCloF4/80intCD11bint quando comparada à subpopulação A.<br> / Abstract : Elie Metchnikoff first described macrophages and its functions, one of them is the phagocytosis and killing of pathogens. However, some microorganisms developed strategies to survive inside macrophages, one successful example is Mycobacterium tuberculosis (Mtb), the causing agent of tuberculosis. This bacilli access the macrophage s intracellular environment through surface receptors. Because of its great heterogeneity macrophages express different surface molecules and it is possible that Mtb exploits these differentially expressed molecules to survive inside the cell. The heterogeneity of macrophages was explored here using two distinct subpopulations of bone marrow macrophages (BMMs). These subpopulations were separated by flow cytometry based on size and complexity and also by expression surface molecules. The subpopulation, which was bigger and more complex, was called A and displays a mean frequency of 65%, on the other side the smaller and less complex subpopulation, was called B and displays a mean frequency of 15%. To study the interaction between Mtb and these two subpopulations binding and phagocytosis assays were performed. It was observed that subpopulation B presents higher bacterial binding and phagocytosis and it was phenotypically characterized as SSCloFSCloF4/80intCD11bint when compared to subpopulation A. The flow cytometry analysis indicates that CD195 (CCR5) was involved in higher bacterial binding of subpopulation B, nevertheless BMMs from mice knockout for CD195 showed the same levels of bacterial binding then wild-type BMMs. Furthermore, it was also investigated if the maturation status of subpopulation B could be associated with the augmented mycobacterial binding, however it does not seems to participate in this process. Taken together, these data shows that BMMs presents two distinct subpopulations, which were named A and B. The subpopulation B, displays higher bacterial binding and phagocytosis and CD195 does not participate in these processes. Additionally, subpopulation B was phenotypically characterized as SSCloFSCloF4/80intCD11bint when compared to subpopulation A.

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Wilson Roberto Fernandes / Resumo: A utilização de células-tronco adultas autólogas surgiu como uma alternativa terapêutica no tratamento de equinos, com resultados bastante promissores. Adicionalmente, a terapia com células alogênicas viabiliza a manutenção de um banco de células, proporcionando assim seu uso imediato. O objetivo deste trabalho foi avaliar, morfologicamente, a resposta inflamatória e detectar as células-tronco mesenquimais (CTMs) marcadas, autólogas e alogênicas, após a inoculação no músculo gluteus medius de equinos. Para tal, foram utilizados 15 equinos, divididos igualmente em três grupos de cinco animais, sendo o grupo 1 (controle), grupo 2 (células autólogas), grupo 3 (células alogênicas). Os animais foram submetidos à punção de medula óssea e após o cultivo, essas células foram caracterizadas fenotipicamente por citometria de fluxo e submetidas à diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, para caracterização da linhagem mesenquimal. Em seguida, as células autólogas e alogênicas foram marcadas com o nanocristal Qtracker 655® e inoculadas no músculo gluteus medius dos grupos 2 e 3, respectivamente. No grupo 1 foi inoculado PBS (solução salina tamponada com fosfato). Em cada grupo foi realizada uma biópsia 30 dias antes e outra 24h após o transplante das células e à inoculação do PBS. A análise dos resultados das biópsias demonstrou, por meio de colorações como Hematoxilina-Eosina, Gomori Modificado e NADH-tr, que a morfologia e o metabolismo das fibras foram mantidos tanto no grupo controle como nos grupos tratados. Além disso, foi possível detectar as CTMs marcadas no tecido muscular por meio de imunofluorescência. Portanto, concluiu-se que as CTMs autólogas e alogênicas transplantadas foram detectadas no tecido muscular de equinos e morfologicamente, não provocaram reação inflamatória 24h após o transplante / Abstract: The use of autologous adult stem cells appeared as therapeutic alternative in treatment of horses with promising results. Allogeneic cell therapy enables maintenance a bank of cells, thereby providing immediate use. The aim of this study was to evaluate the inflammatory response and tracker autologous and allogeneic, mesenchymal stem cell (MSCs) after gluteus medius muscle horse injection. In this research, we used fifteen horses that were divided equally into three groups of five animals each, with Group 1 (control), Group 2 (autologous cells) and Group 3 (allogeneic cells). The animals undergo bone marrow aspiration for culture and isolation of mesenchymal cells. These cells, after culture were phenotypically characterized by flow cytometry and differentiation for characterization of the mesenchymal lineage. Upon such identification, autologous and allogeneic cells were marked with Qtracker 655® and inoculated in the gluteus medius muscle of groups 2 and 3, respectively. In group 1 was inoculated an equal volume of PBS (phosphate buffered saline). In each group a biopsy was done thirty days before and 24h after inoculation of the cells and PBS. Biopsies results showed through stains such as hematoxylin-eosin, modified Gomori and NADH-tr, that the tissue integrity and fiber metabolism was maintained in both, control and treated groups. Additionally, was possible to detect MSCs tracked in muscle tissue through immunofluorescence. Therefore, we conclude that autologous and allogeneic BM-MSCs could be detected in muscle tissue and through morphology analysis, caused no inflammatory reaction, 24 hours after transplantation / Mestre

Orientador: Maria Luiza Moretti-Branchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T12:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trabasso_Plinio_D.pdf: 33454772 bytes, checksum: 929d6b15891369e193a83b4f0a4d2cc1 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Receptores de transplante de medula óssea constituem uma população de alto risco para ocorrência de infecções fúngicas invasivas (IFI). O conhecimento das características epidemiológicas locais é fundamental para a defInição das estratégias de prevenção. Foi feito um estudo retrospectivo que envolveu 115 pacientes, 91 receptores de enxerto alogênico e 24 receptores de enxerto autólogo, nos quais foram detectadas 15 (13,0%) IFI, 8 (53,3%) delas com identificação microbiológica do patógeno. As fungemias (n=8; 53,3%) e as sinusites (n=4; 26,7%) foram as localizações mais freqüentes. Cinco (62,5%) infecções foram causadas por espécies de Candida e 2 (25,0%) foram causadas por Fusarium sp. Dentre as espécies de Candida, 60,0% eram não-albicans. Cinqüenta e dois (45,2%) pacientes apresentaram colonização fúngica; receptores de enxerto alogênico apresentaram maior proporção (52,7%) de colonização do que receptores de enxerto autólogo (16,7%) (p=O,003). O fator de risco independente para ocorrência de IFI nos receptores de enxerto alogênico, identificado por regressão logística multivariada, foi neutropenia prolongada (p<0,001; OR=I,17 [IC95%=1,04-1,24]), enquanto que a não realização de irradiação corporal total no condicionamento agiu como fator independente de proteção ao desenvolvimento de IFI (P=O,021; OR=0,16 [IC95%=0,03-0,76). Através de análise de regressão logística multivariada, encontramos que mucosite prolongada foi fator de risco independente para ocorrência de colonização fúngica entre os receptores de enxerto alogênico (P=O,014; OR=I,l1 [IC95%=1,02-1,21]). A mortalidade atribuível à IFI foi 20,0%. Não houve diferença na sobrevida entre pacientes com ou sem IFI (P=0,173) / Abstract: Bone marrow transplant (BMT) recipients are at high risk for developing invasive fungal infections. Deep and prolonged immunosupression have been associated conditions to increase the number of invasive fungal infections in this population. The study of the local and specific epidemiology of these immunosuppressive patients has been an important issue for the treatment and application of preventive measures to reduce the risk of infections. The aim of this study was to evaluate the epidemiology of fungal infections in patients hospitalized in the BMT unit of the Hospital das Clínicas-UNICAMP. Diagnose of invasive fungal infections were made according to the EORTCINIAID criteria. One hundred and fifteen BMT patients, 91 allogenic and 24 autologous recipients were evaluated. Fifteen invasive fungal infections were detected and 8 (53.3%) had microbiological identification of the pathogens. Fungemia (n=8) and sinusitis (n=4) were the most prevalent funga! infections in our study. Five (62.5%) invasive fungal infections were caused by Candida spp. (C. parapsilosis=3) and two (25.0%) by Fusarium sp. Fifty-two (45.2%) patients had fungal colonization. Fungal colonization was more frequent in allogeneic BMT recipients (52.7%) than in autologous recipients (16.7%) (p=O.003). Independent risk factors for invasive fungal infections in allogeneic recipients, identified by multivariate analysis, were prolonged neutropenia (p<0.001) and total body irradiation in the conditioning regimen (P=O.021).The attributable mortality due to fungal infection was 20.0%. There was no difference in survival between patients with or without deep fungal infections (P=O.173) / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Carmino Antonio de Souza, Irene Lorand-Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T07:39:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vigorito_AfonsoCelso_D.pdf: 4352247 bytes, checksum: e10430c1c5080d3ae894381270e3bbe2 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Este é um estudo randomizado, desenvolvido com base na comparação entre os transplantes alogênicos de medula óssea (MO) e aqueles de células progenitoras periféricas (CPP), os quais são utilizados no tratamento de doenças hematológicas malignas. Para tal, deu-se ênfase à pega, à doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) aguda e crônica, bem como às sobrevidas dos pacientes. De 02/1995 até 10/1997, 40 pacientes receberam um transplante HLA idêntico, originado da MO (grupo A) ou CPP (grupo B). O total de pacientes avaliáveis no final do estudo foi de 19 (grupo A) e 18 (grupo B), respectivamente. A mediana de idade foi de 35 anos (17-56) no grupo A e 29,5 (9-51) no grupo B (P=0,17). O regime de condicionamento utilizado foi Bu (16)/Cy (120) em 16 pacientes no grupo A e 17 no grupo B; Bu (16)/ Cy (120)/ VP-16 (40) em 3 pacientes no grupo A e Cy (120)/ irradiação corporal total (ICT) (13,2 Gy) em 1 paciente no grupo B. A profilaxia da DECH utilizada foi ciclosporina (CSP)/Metotrexato em 16 pacientes no grupo A e em 18 pacientes no grupo B; e 3 pacientes receberam CSP/prednisona no grupo A. As CPP foram mobilizadas com G-CSF, lO~gIkgldia, durante 5 dias e colhidas no quinto dia, em uma única sessão de aférese, na maioria dos pacientes. O conteúdo mediano de células CD 34+ x 106 !Kglreceptor foi de 5,26 (1,19-17,55) no Wpo A e 4,71 (1,26-71,61) no grupo B (P=0,40). A mediana de dias para se atingir o número absoluto de neutrófilos (NAN) > 0,5 X }Q9/l foi de 18 (13-30) no grupo A e 16 (11-25) no grupo B (P=0,15). As contagens de plaquetas > 20 x 109/1 ocorreram no dia + 17 (10-40) no grupo A e + 12 (9-36) no grupo B (P=O,OI). A mediana do dia para a alta hospitalar foi +26 (18-48) no grupo" A e +21 (18-42) no grupo B (P=0,08). A probabilidade de DECH aguda;:;:: grau 2 foi de 19% no grupo A e 27% no grupo B, respectivamente (P=0,53). Nossos dados sugerem que a grande maioria dos pacientes que receberam CPP apresentarão DECH crônica, com uma tendência estatística superior nesse grupo (P=0,08). A forma extensa da doença ocorreu em 50% e 100%, nos grupos da MO e CPP, respectivamente (P=0,05). A estimativa de sobrevida global (SG) para os grupos A e B, em 1000 dias, foi de 51% e 47%, respectivamente (P=0,67). A sobrevida livre de doença (SLD) em 1000 dias foi de 52% e 58%, respectivamente (P=0,50). Em conclusão, a pega do enxerto foi similar em ambos os grupos, exceto para a recuperação de plaquetas que ocorreu mais precocemente no grupo que recebeu CPP (P=0,01); a alta hospitalar foi mais precoce no grupo da CPP, porém sem significado estatístico; não houve diferença de acometimento da DECH aguda. Nossos dados sugerem que a grande maioria dos pacientes do grupo que recebeu CPP apresentará DECH crônica, com predomínio da forma extensa. Não houve diferença quanto a SG e SLD em ambos os grupos / Abstract: This is a prospective, randomized study comparing allogeneic bone marrow (BM) and peripheral blood progenitor celI (PBPC) transplantation in the treatment of hematologic malignancies focusing on engraftment, acute and chronic graft versus host disease (GVHD) and survival. From 23/02/1995 until 16/10/1997, 40 patients received HLA identical sibling BM (group A) or PBPC (group B). Evaluable patients at the end were 19 (A) and 18 (B). The median age was 35 (17-56) in A and 29,5 (9-51) in B, respectively (P=O,17). The conditioning regimen was Bu (16) 1 Cy (120) in 16 patients in A and 17 patients in B; Bu (16) 1 Cy (120) 1 VP-16 (40) in 3 patients in A and Cy (120) 1 total boby irradiation (13,2 Gy) in 1 patient in B. The GVHD prophylaxis was cyc1osporin (CSA) 1 methotrexate in 16 patients in A and 18 patients in B. Three patients received CSA 1 Prednisone in A. The donors were treated with G-CSF 10llglkg/day during 5 days and the PBPC were harvested in the fifth day in a single apheresis in the majority of them. The median content o~CD 34+ celIs x 1061 Kg Ireceptor was 5,26 (1,19-17,55) in A and 4,71 (1,26-71,61) in B (P=O, 40). The median of days for an absolute neutrophil count (ANC) > 0,5 x 109/1 was 18 (13-30) in A and 16 (11-25) in B (P=O,15). Platelets counts > 20 x 109/1 occured at + 17 (10-40) in A and + 12 (9-36) in B (P=O,Ol). Median day ofhospital discharge was +26 (18-48) in A and +21 (18-42) in B (P=0,08). The probability of~ 2 grade a-GVHD was 19% (A) and 27% (B) (P=0,53). The probabi1ity of alI grade c-GVHD was 70% with BM. Although the small number in PBPC, our data suggest the great majority will have c-GVHD (P=0,08); extensive disease was present in 50% aIld 100% in A and B, respective1y (P=0,05). The estimates of overalI survival (OS) for A and B at 1000 days are 51% and 47% respectively (P=0,67); disease ftee survival (DFS) at 1000 days are 52% and 58% respectively (P=0,50). In conc1usion, the engraftment was similar for both groups, except for platelet recovery (earlier for PBPC); although no significant, the discharge was earlier for PBPC; there was no difference in acute GVHD. Our data suggest the great majority in the PBPC group wilI have c-GVHD, and more extensive disease has been seen in this group. No differences in OS and DFS have seen so faro / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Orientador : Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:21:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Telis_CeliaMariaTurri_M.pdf: 2474872 bytes, checksum: c96f1e23a463fb24e21c2c5325d53c46 (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: A Ciclofosfamida é uma agente alquilante que inibe a síntese de ácidos mucleicos e portanto reduz o número de células que estão se dividindo. Vários tecidos sofrem o efeito tóxico desta droga, principalmente bexiga, trato gastrintestinal e medula óssea. No estudo citológico da medula óssea, observou-se que 24 horas após o uso de Ciclofosfamida, a celularidade total diminuiu intensamente e restaram apenas neutrófilos maduros, eritroblastos ortocromáticos, linfócitos, plasmócitos e histiócitos. Na análise citofotométrica da série vermelha verificou-se que a quase totalidade dos eritroblastos estavam na fase G1 do ciclo celular. Persistiram portanto, somente células que não se multiplicam mais e que por isso não sofrem ação da droga. No grupo de ratos sacrificado após 72 horas do uso de Ciclofosfamia, houve regeneração celular, às custas, principalmente, da série granulocítica, o que foi visto pelo grande número de mieloblastos e pró-melócitos. Observou-se também o aparecimento de eritroblastos jovens (pró-eritroblastos e eritroblastos basófilos) com características megaloblásticas e que apresentaram valores Feulgen/DNA muito baixos, ou seja, eram hipodiplóides. O achado de células com conteúdo de DNA inferior ao do grupo controle foi interpretado como decorrente de inibição parcial da síntese de DNA pela Ciclofosfamia. Ela teria causado quebras cromossômicas e as células -filhas receberam menor quantidade de material genético... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2015-04-24T16:24:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_SobrevivenciaDispersaoCelulas.pdf: 912810 bytes, checksum: af6e1d7ada611563e2cdf04c1999d261 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-04-27T14:45:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_SobrevivenciaDispersaoCelulas.pdf: 912810 bytes, checksum: af6e1d7ada611563e2cdf04c1999d261 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-27T14:45:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_SobrevivenciaDispersaoCelulas.pdf: 912810 bytes, checksum: af6e1d7ada611563e2cdf04c1999d261 (MD5) Previous issue date: 2015 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estudos experimentais evidenciam o potencial promissor das células da fração mononuclear da medula óssea (CMN-MO) no tratamento de modelos de isquemia cerebral. Sabe-se que as CMN-MOs são sensíveis à modificações microambientais, tal qual aquelas induzidas por uma isquemia, como eventos associados à inflamação. Contudo, pouco se conhece a respeito da biodistribuição e sobrevida dessas células no tecido nervoso pós-lesão. Objetiva-se investigar se a sobrevivência e a disseminação das CMN-MOs são influenciadas pela resposta inflamatória após isquemia estriatal. Parecer CEPAE, protocolo nº 073/12. Transplante heterólogo (5x105 de CMN-MOs) no estriado de ratos Wistar, agrupados entre controles não-tratados (IST) e falso-operado (FO) e tratados (ITCM), perfundidos em 1, 3, 7 e 28 dias. CMN-MO foram impregnadas com Nanocristais Qdot para posterior identificação por microscopia de fluorescência no tecido do receptor. Coloração, por violeta de cresila, e imunoistoquímica básica (IBA1 e ED1) foram aplicadas para análise histopatológica do tecido em microscopia de luz. Testes neurocomportamentais (teste de remoção do adesivo e teste do cilindro) foram realizados para aferir a resposta dos grupos às intervenções. Os achados histopatológicos evidenciam a eficiência do modelo experimental de indução isquêmica em reproduzir a lesão no estriado dorsolateral. O infiltrado celular no grupo IST marca a resposta inflamatória, posteriormente confirmada por imunoistoquímica para ED1 e IBA1; o infiltrado celular no grupo ITCM, evidencia a permanência das CMN-MO em todas as sobrevidas estudadas. O perfil de perda por morte das CMN-MO transplantadas no sítio de lesão é semelhante entre os grupos ITCM e FO, contudo, evidencia que resposta inflamatória do receptor causa maior decaimento do montante celular no grupo ITCM. Procedimentos de infusão celular mais refinados ou automatizados podem melhorar a sensibilidade dos testes comportamentais para discriminar a evolução entre os grupos estudados. Conclui-se que a alteração do microambiente pós-isquemia cria condições que determina a dispersão e a sobrevivência das CMN-MO. Outras análises de imunoistoquímicas podem apontar resultados quanto ao perfil microglial presentes nas sobrevidas estudadas e o grau de imunomodulação pelo estudo da dinâmica das citocinas inflamatórias produzidas. / The studies show the promising potential of bone marrow mononuclear cells (BMMC) for the treatment of stroke models. It is known that the BMMC are sensitive to environmental changes, like those induced by ischemia, such as events associated with inflammation. However, little is known about the biodistribution and survival of these cells in the post-injury nerve tissue. Aims to investigate whether the survival and spread of BMMC are influenced by the inflammatory response after striatum stroke. Heterologous transplantation (5x105 BMMC) in the striatum of rats clustered among untreated controls (CNT) and sham (SHM) and treated (STBC) perfused at 1, 3, 7 and 28 days. BMMC were impregnated with Qdot nanocrystals for identification by fluorescence microscopy in the host tissue. Staining for cresyl violet, and basic immunohistochemistry (IBA1 and ED1) were applied for histopathological analysis of tissue by light microscopy. Neurobehavioral tests (adhesive removal test and cylinder test) were performed to assess the response of groups for interventions. The results show the effectiveness of the experimental model of ischemic induction to reproduce the injury in the dorsolateral striatum. The cell infiltrate in the CNT group shows the inflammatory response, later confirmed by immunohistochemistry for ED1 and IBA1; the cellular infiltrate in STBM group, shows the BMMC of stay in all studied survival. The loss profile for death of BMMC transplanted into the injury site is similar between STBM and SHM groups, however, shows that inflammatory response of the receptor causes more decay of cell amount in STBM group. More refined or automated cell infusion procedures can improve the sensitivity of behavioral tests to discriminate the evolution between groups. To summarize the change of post-ischemic microenvironment creates conditions that determine the distribution and survival of BMMC. Other immunohistochemical procedures may point to the results presented as microglial profile and the degree of the immunomodulation study of the dynamics of inflammatory cytokines produced.

Orientador: João Tadeu Ribeiro-Paes / Banca: Mirian Bassi / Banca: Vanessa Tonin Garrido / Resumo: A Fibrose Pulmonar (FP), também denominada Alveolite Fibrosante, é uma pneumopatia idiopática, crônica e irreversível, que acomete o tecido pulmonar promovendo a deposição de tecido fibroso cicatricial e consequente remodelamento da arquitetura pulmonar. Considerando a inexistência de um tratamento clínico curativo que não seja apenas paliativo, a terapia com células-tronco desponta como alternativa promissora no tratamento da fibrose pulmonar e diversas outras patologias. Neste contexto, este projeto propôs o emprego da terapia celular com células-tronco mesenquimais de tecido adiposo humano (CTMTA) e "pool" de células mononucleares da medula óssea (BMMC), isoladas ou conjuntamente, em modelo experimental de fibrose pulmonar. Foram utilizados 36 ratos Wistar divididos em 6 grupos. O grupo controle recebeu instilação intratraqueal de tampão fosfato. Cinco grupos foram instilados com bleomicina (2U/animal) para a indução da doença e, após 14 dias, submetidos ou não a diferentes tratamentos utilizando células mononucleares da medula óssea e/ou células-tronco mesenquimais de tecido adiposo, sendo que um grupo recebeu tratamento placebo com tampão fosfato. A análise histológica evidenciou o desenvolvimento de fibrose nos animais instilados com bleomicina (p<0,0001) e uma melhora do quadro fibrótico nos animais submetidos ao tratamento, independentemente do tipo celular utilizado (p<0,001). A ventilação pulmonar basal revelou a presença de esforço respiratório nos animais instilad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pulmonary Fibrosis (PF), also known as fibrosing alveolitis, is an idiopathic, chronic, irreversible lung disease that affects the lung tissue by promoting the deposition of fibrous scar tissue and subsequent lung architecture remodeling. Considering the need for curative medical treatment that is not only palliative, stem cell therapy is emerging as a promising alternative for the treatment of pulmonary fibrosis and many other diseases. ln this context, it is proposed in this study the cell therapy with mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue (CTMTA) in association with the pool of mononuclear bone marrow cells (BMMC) in an experimental model of pulmonary fibrosis. The disease was induced in 4 groups of Wistar rats (n = 6) by intratracheal bleomycin (2U/animal). 14 days after instillation, each group was subjected to a specific treatment with BMMC and CTMTA, isolated or combined mode, while a fourth group was treated with phosphate buffer. The control group was instilled and treated with phosphate buffer. Histological analysis showed the development of disease in animais instilled with bleomycin (p<0,0001) and untreated, and improvement in the fibrous framework of animais subjected to cell therapy (p<0,001 ). The basal ventilation revealed the presence of respiratory effort in animais instilled with bleomycin, submitted or not to therapy (p=0,0260). Treatment with BMMC and CTMTA, performed alone or in conjunction mode showed similar results, since both promo... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Rosangela L. Dittrich / Banca: Juliane Gomes Quitzan / Resumo: O trabalho teve por objetivo avaliar clínica e laboratorialmente a viabilidade e a segurança do transplante intratecal de células-tronco mesenquimais autólogas e alogênicas provenientes da medula óssea (CTM-MO) de cães. Foram utilizados 15 cães, sem raça definida, adultos, de ambos os sexos, clinicamente saudáveis, excetuando dois que apresentavam trauma medular crônico. Foram divididos em três grupos, contendo cinco animais cada. As CTM-MO foram obtidas pela punção da medula óssea, isoladas e cultivadas. O grupo A foi transplantado com CTM-MO autólogas por via intratecal através da cisterna magna, enquanto que o grupo B recebeu as CTM-MO alogênicas e o grupo C (controle) foi aplicado solução tampão fosfato-salina (PBS). O líquido cefalorraquidiano (LCR) foi obtido imediatamente antes do transplante das CTM-MO (momento 1) e no quinto dia após (momento 2), para avaliação físico-química, citológica e da concentração de metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9). Todos os animais foram acompanhados por exame físico neurológico pré e pós-transplante. Pelas avaliações clínicas e laboratoriais, não se observaram alterações significativas após o transplante das CTM-MO autólogas e alogênicas por via intratecal, demonstrando ser uma via segura e viável para a utilização de terapia celular em cães / Abstract: The study aimed to evaluate clinical and laboratory viability and safety of intrathecal transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) autologous and allogeneic of dogs. A total of 15 dogs, mixed breed, adults of both sexes, clinically healthy, except two who had chronic spinal trauma. They were divided into three groups with five animals each. BM-MSC were obtained by puncture of the bone marrow, isolated and cultured. Group A was transplanted with autologous BM-MSC intrathecally via the cisterna magna, while group B received allogenic BM-MSC and group C (control) was administered phosphate buffered saline (PBS). Cerebrospinal fluid (CSF) was obtained immediately before transplantation of BM-MSC (moment 1) and the fifth day after (moment 2) for physico-chemical, cytological and the concentration of matrix metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9 .) All Animals were monitored by neurological examination before and after transplantation. By clinical and laboratory evaluations, no significant changes were observed after transplantation of BM-MSC autologous and allogeneic intrathecal, proving to be a safe and viable for the use of cell therapy in dogs / Mestre

Orientador: Cristina Pontes Vicente / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Godoy_JulianaAparecidaPretode_M.pdf: 1738296 bytes, checksum: 42d22e3271b69962a476983e12e359ed (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O dermatan sulfato (DS) é um glicosaminoglicano que pode atuar como um agente antitrombótico, anticoagulante e anti-inflamatório. A aterosclerose é uma doença que acomete os vasos sanguíneos através da formação exacerbada de placas de gordura, interrompendo o fluxo de sangue. A intervenção cirúrgica mais utilizada nesses casos é a angioplastia, entretanto, esse procedimento pode ocasionar uma lesão ao endotélio, onde células e proteínas inflamatórias são recrutadas ao local da lesão, promovendo a migração e proliferação das células musculares lisas ocasionando a reestenose (neointima) do vaso acometido. A recuperação do endotélio, momentos após a lesão, seria uma alternativa terapêutica com o objetivo de se evitar a formação de neointima. Essa recuperação poderia ser feita pelas células progenitoras endoteliais (EPC), existentes na população de células mononucleares (MNC), da medula óssea. Neste estudo, testamos o efeito do DS na inflamação, trombose, formação de neointima e migração de MNC em camundongos selvagens (C57BL06), testamos também o efeito do DS em conjunto com a administração de MNC na formação de neointima em camundongos selvagens, deficientes da proteína cofator II da heparina (HCII-/-) e deficientes em apolipoproteína E (ApoE-/-). Todos os animais analisados passaram por um procedimento cirúrgico na artéria carótida comum esquerda, mimetizando a lesão causada por angioplastia em humanos. Analisamos a formação de trombo, a presença de células inflamatórias e de P-selectina nos animais 1 ou 3 dias após a lesão arterial; a formação de neointima foi analisada 21 após a injúria arterial. Observamos uma inibição da trombose, diminuição de células CD45+ e da expressão de P-selectina no local da lesão nos animais selvagens tratados com DS. Foi observado, também, que nos animais selvagens que receberam MNCs ou MNCs + DS, a formação de neointima foi inibida. Nos animais selvagens tratados com MNC + DS, houve uma maior migração de MNC para o local da lesão. Nos animais HCII-/-, não houve inibição da formação da neointima em nenhum dos dois grupos (tratados com MNC e tratados com MNC + DS). Nos camundongos ApoE-/- a injeção de MNC mesmo em conjunto com o tratamento com DS não foi capaz de inibir a proliferação de neointima; houve melhora apenas quando se administrou o DS isoladamente. Com isso, concluímos que o DS participa da inibição dos processos trombótico e inflamatório, na sua fase inicial, após injúria arterial e promove também a migração de um número maior de MNCs para o local da lesão nos animais selvagens; nos animais ApoE-/-, o DS inibiu a resposta inflamatória inicial e a formação de neointima apenas quando administrado isoladamente, tendo seu efeito anulado quando este foi injetado conjuntamente com as MNC. Este dado sugere que o processo inflamatório local, o estágio de formação das placas de ateroma, o elevado índice de colesterol e os triglicerídeos circulantes podem influenciar no efeito do DS e na capacidade de recuperação do endotélio mediada pela MNCs injetadas nos camundongos ApoE-/-. / Abstract: Dermatan sulfate (DS) is a glycosaminoglycan that can act as an antithrombotic, anticoagulant and anti-inflammatory agent. Atherosclerosis is a disease that affects the blood vessels by an exacerbated fat plaques formation, blocking the blood flow. The most used surgical operation, in these cases, is the angioplasty; however, this procedure can cause a lesion to the endothelium, where inflammatory cells and proteins are recruited to the lesion site, promoting smooth muscle cells migration and proliferation, provoking restenosis (neointima) of the attempted vessel. The endothelium recovery, some time after lesion, would be a therapeutic strategy by preventing the neointima formation. This recovery could be done by the endothelial progenitor cells (EPC), present in mononuclear cells (MNC) population, from bone marrow. In this study, we devise the DS effect on inflammation, thrombosis, neointima formation and MNC migration in wild-type mice (C57BL06); we also devise DS effect together with MNC administration on neointima formation in wild-type mice, heparin cofactor II deficient mice (HCII-/-) and apolipoprotein E deficient mice (ApoE-/-). All analyzed animals suffered surgical operation in left common carotid artery, that mimics the lesion caused by angioplasty in humans. We analyzed thrombus formation, inflammatory cells presence and P-selectin in animals 1 and 3 days after lesion; neointima formation was analyzed 21 days after arterial injury. We observed a thrombus inhibition, decreased CD45+ cells and P-selectin expression at the lesion site in wild-type animals treated with DS. It was also observed in wild-type animals that received MNC or MNC + DS, the neointima formation was inhibited. In wild-type animals treated with MNC + DS, there were a higher MNC migration to the lesion site. In HCII-/- animals, there was not an inhibition in neointima formation in any of the two groups (treated with MNC or treated with MNC + DS). In ApoE-/- mice, the MNC injection even in DS presence, was not able to inhibit neointima proliferation; there was an improvement only when DS was administered alone. It follows that DS participate on thrombotic and inflammatory process inhibition, in the initial stages, after arterial injury and it also promote a higher MNC migration to the lesion site in wild-type animals; in ApoE-/- animals, DS inhibited the initial inflammatory response and neointima formation only when administered alone; its effect was null when it was injected together with MNC. This date suggest that local inflammatory process, atheroma plaque state, elevated cholesterol and triglyceride rates can influence on DS effect and on the capacity of endothelium recovery mediated by injected MNC in ApoE-/- mice. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural