Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-05T17:34:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) KATHARINA MARQUES DINIZ_PPGBI 2016.1.pdf: 1206691 bytes, checksum: d4698af7702f5f5f20193cef85026be8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T17:34:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) KATHARINA MARQUES DINIZ_PPGBI 2016.1.pdf: 1206691 bytes, checksum: d4698af7702f5f5f20193cef85026be8 (MD5) Previous issue date: 2016-03-25 / CAPES / A Resistência bacteriana aos antibióticos é considerada um alarmante problema de saúde pública. Visando o controle dessa situação a Organização Mundial de Saúde preconiza o uso consciente e controlado dos antibióticos. Além disso, a fim de combater cepas bacterianas resistentes é preciso que novos agentes biocidas sejam pesquisados e avaliados quanto a sua atividade antibacteriana. O óleo essencial de Melaleuca alternitifolia ou tea trea oil (TTO) apresenta propriedades biológicas, como atividade antimicrobiana, anti-inflamatória e antiparasitária. O TTO é constituído por monoterpenos e alguns álcoois e cetonos, que podem desencadear reações irritantes. Dessa forma, estudos têm sido realizados a fim de incorporar o TTO a materiais que possam diminuir os efeitos adversos do óleo. Quitosana é um biopolímero atóxico, biodegradável, com atividade antimicrobiana de amplo espectro e que apresenta a capacidade de reduzir a toxicidade de certas substâncias quando associada às mesmas. Neste contexto, o presente estudo objetivou realizar a prospecção da atividade antimicrobiana e citotóxica do gel de quitosana associado ao TTO. As quitosana de alto e de baixo peso molar (QAB) adquiridas da Sigma® foram misturadas nas proporções de 1:1 e diluídas em ácido acético 1% para obtenção de uma solução a 10mg/mL do polímero. A quitosanas obtida foi caracterizada quanto suas características estruturais, grau de desacetilação e peso molar, respectivamente, pelas técnicas de espectrofotometria de infravermelho, ressonância magnetca nuclear de hidrogênio e viscosidade. A quitosana apresentou grupos funcionais característicos do polímero, grau de desacetilação de 80,66% e peso molar de 6,03 x 104g/mol. O TTO foi adquirido da Ferquima®, que disponibilizou sua composição química, tendo como compostos predominantes terpineno-4-Ol e gamma-terpineno. A atividade antimicrobiana da QAB, do TTO e da associação QAB+TTO foi determinada através da técnica de microdiluição, obtendo-se as Concentrações Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericia Mínima (CBM), frente as cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. Os valores encontrados para CIM e CBM para S.aureus foram, respectivamente, de 4mg/mL para QAB, 13,5mg/mL para TTO e 3mg/mL/13,5mg/mL e de 2mg/mL/9mg/mL para associação QAB+TTO. Em cepas E.coli os resultados de CIM e CBM foram, respectivamente, de 2mg/mL e 4 mg/mL para QAB, 22,5mg/mL e 9mg/mL para TTO e de 1,5mg/mL/6,75mg/mL e 3mg/mL/13,5mg/mL para associação QAB+TTO. A análise para presença de sinergismo entre TTO e QAB foi realizada por planejamento fatorial 22 usando concentrações sub-CIM de ambas as drogas. Verificou-se que a associação foi classificada como indiferente. O potencial irritante das susbtâncias testes foi determinado através do teste da Membrana Corioalontoide do ovo de galinha (HET-CAM) fecundado e incubado por um período de 9-10 dias. Para determinar o grau de irritabilidade pelo HET-CAM, foram observadas a presença de lise, coagulação e hemorragia, até 5 minutos após a exposição às substâncias testes. O TTO1% apresentou-se altamente irritante, enquanto a QAB e a associação TTO/QAB não foram irritantes. Com isso pode-se concluir que mesmo não apresentando sinergismo entre os compostos a quitosana apresentou um importante efeito sobre o TTO, reduzindo o índice de irritabilidade assim como a concentração de TTO necessária para apresentar atividade bactericida frente aos microorganismos testes. / Bacterial resistance to antibiotics is considered an alarming public health problem. For the control of situation the World Health Organization recommends the conscious and controlled use of antibiotics. However, in order to fight resistant bacterial strains is necessary that the new biocidal agents are researched and evaluated for their antibacterial activity. The essential oil of Melaleuca alternifolia or tea tree oil (TTO) has biological properties such as antimicrobial, anti-inflammatory and anti-parasitic. The TTO is composed of monoterpenes and some alcohols and cetonos, which can cause irritating reactions. Therefore, many studies are being performed to incorporate TTO to other materials to diminish its adverse effects. Chitosan is a polymer nontoxic, biodegradable, with a broad spectrum antimicrobial activity, which has the ability to reduce the toxicity of certain substances when associated therewith. The present work aimed to prospect the anti-microbial activity and cytotoxicity from the chitosan gel associtated with TTO. The chitosan high and low molecular weight (CHL), purchased from Sigma®, were mixed 1: 1 and diluted in 1% acetic acid to obtain a solution of 10mg / ml of polymer. The chitosan obtained was characterized about the structural characteristics, deacetylation degree and molecular weight, respectively, by techniques of IR spectrophotometry, nuclear magnetic resonance of hydrogen and viscosity. A quitosana apresentou grupos funcionais característicos do polímero, grau de desacetilação de 80,66% e peso molar de 6,03 x 104g/mol. Essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) was purchased from Ferquima®, which released its chemical composition, which had as terpinene-4-ol and gamma-terpinene as predominant compounds. The antimicrobial activity of the CHL, the TTO and CHL + TTO association was determined by the microdilution technique, obtaining the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) and Minimum Bactericia (MBC) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The values for MIC and MBC for S. aureus were, respectively, 4mg/mL for CHL, 13,5mg/mL for TTO and 3mg/mL/13,5mg/mL and 2mg/mL/9mg/mL for association CHL+ TTO. In E.coli strains the MIC and MBC results were, respectively, 2mg/mL and 4mg/mL for CHL, 22,5mg/mL and 9 mg/mL for TTO and 1.5mg/mL/6,75mg/mL and 3mg/mL/13,5mg/mL for CHL + TTO association. The analysis to measure the synergy between TTO and QAB was performed by factorial analysis using the sub-MIC concentrations for either drug and the association of drugs was classified as indifferent. It was also examined the cytotoxicity of the drugs by Hen's Egg Test – Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) fertilized and incubated for a period of 9-10 days. To determine the degree of irritability by the HET-CAM were observed the presence of lysis, coagulation and bleeding, up to 5 minutes after exposure to the test substances. TTO 1% showed the highest degree of irritation, while CHL and the association of the compounds were considered non-irritating. Thus, although no synergy was observed between the compounds, the chitosan showed an important effect over the TTO by reducing the irritability rate as well as the final concentration of TTO needed to induce anti-bacterial activity against the tested microorganisms.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-12T20:10:08Z No. of bitstreams: 1 TESE Kézia Santana de Moura.pdf: 5302858 bytes, checksum: d80168b021f26923f250d62a588dd228 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T20:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Kézia Santana de Moura.pdf: 5302858 bytes, checksum: d80168b021f26923f250d62a588dd228 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / FACEPE / A ampla utilização das sementes de Moringa oleifera no tratamento de água torna necessários estudos para determinação da segurança do uso para a população. As sementes de M. oleifera contêm lectinas (proteínas hemaglutinantes que ligam carboidratos). Dentre elas, há a lectina WSMoL (do inglês water-soluble M. oleifera lectin), que é um dos agentes responsáveis pelas propriedades coagulantes e que possui atividade larvicida contra Aedes aegypti. Os objetivos deste trabalho foram: (1) determinar a toxicidade do extrato de sementes sobre células humanas normais GN1 (linhagem celular não-tumorigênica derivada de fibroblastos) e HaCaT (linhagem não-tumorigênica derivada de queratinócitos humanos); (2) avaliar a cinética de coagulação promovida por WSMoL em modelo de água turva utilizando caolin, através de medidas de densidade óptica e variação de resistência elétrica, na ausência e presença de carboidratos e íons; (3) investigar o efeito de WSMoL na sobrevivência e atividade de enzimas digestivas de larvas de Culex quinquefasciatus, mosquito vetor da filariose e chikungunya. O extrato aquoso de sementes de M. oleifera reduziu o número de células viáveis com CE50 (48 h) de 1,32 e 1,23 μg/mL de proteínas para HaCaT e GN1, respectivamente. A análise por citometria de fluxo revelou que o extrato induziu a morte de GN1 por necrose enquanto que as células HaCaT não apresentaram marcação para necrose ou apoptose. A avaliação da expressão do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) revelou uma redução de 45,4±1,3% em células HaCaT tratadas, confirmando um efeito antiproliferativo. O tratamento de GN1 e HaCaT com o extrato aumentou os níveis mitocondrial e citosólico de espécies reativas de oxigênio, bem como causou uma diminuição do consumo de O2. A detecção de toxicidade do extrato de sementes sobre células humanas normais indica cautela em relação à dosagem utilizada para o tratamento da água. WSMoL apresenta massa molecular nativa de 60 kDa e ponto isoelétrico 5,5. Em SDS-PAGE, foram observados três bandas polipeptídicas com aproximadamente 30, 20 e 10 kDa. Foi detectada redução tanto da densidade óptica quanto da resistência elétrica na suspensão de caolin tratada com WSMoL, o que indica que a atividade coagulante se deve à desestabilização das partículas em suspensão, seguida por interações químicas entre as partículas e a lectina. A incubação da lectina com os monossacarídeos N-acetilglicosamina, glicose e frutose (em concentrações que inibiram a atividade hemaglutinante) ou com íons cálcio e magnésio promoveram a redução da atividade coagulante de WSMoL. Esses resultados sugerem que grupos presentes no domínio de ligação a carboidratos podem estar envolvidos na atividade coagulante de WSMoL, bem como que a conformação da lectina necessária para essa propriedade é afetada pela ligação de carboidratos e íons. WSMoL revelou-se larvicida sobre C. quinquefasciatus com CL50 de 1,05 mg/mL. A incubação de extratos do intestino das larvas com a lectina não afetou a atividade de α-amilase e tripsina, porém reduziu significativamente a ação catalítica de protease, sugerindo que a atividade larvicida pode-se estar ligada à interferência no processo de digestão e absorção de nutrientes. / The wide use of Moringa oleifera seeds in the treatment of water makes studies necessary to determine the safety for the population. The seeds of M. oleifera contain lectins (hemagglutinating proteins that bind carbohydrates). Among them, there is the WSMoL (water-soluble M. oleifera lectin), which is one of the agents responsible for the coagulant properties and that has larvicidal activity against Aedes aegypti. The aims of this work were: (1) to determine the toxicity of the seed extract on normal human cells GN1 (non-tumorigenic cell line derived from fibroblasts) and HaCaT (non-tumorigenic line derived from human keratinocytes); (2) to evaluate the kinetics of coagulation promoted by WSMoL in turbid water model using kaolin, through measurements of optical density and of electrical resistance variation, in the absence and presence of carbohydrates and ions; (3) to investigate the effect of WSMoL on the survival and activity of digestive enzymes of Culex quinquefasciatus larvae, vector mosquito of filariasis and chikungunya. The aqueous extract of M. oleifera seeds reduced the number of viable cells with EC50 (48 h) of 1.32 and 1.23 μg/mL of proteins for HaCaT and GN1, respectively. Flow cytometry analysis revealed that the extract induced the death of GN1 by necrosis while HaCaT cells showed no labeling for necrosis or apoptosis. Evaluation of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression revealed a 45.4±1.3% reduction in treated HaCaT cells, confirming an antiproliferative effect. The treatment of GN1 and HaCaT with extract increased the mitochondrial and cytosolic levels of reactive oxygen species, as well as a decrease in O2 consumption. The detection of toxicity of the seed extract on normal human cells indicates caution regarding the dosage used for the treatment of water. WSMoL has a native molecular mass of 60 kDa and isoelectric point 5.5. In SDS-PAGE, three polypeptide bands with approximately 30, 20 and 10 kDa were observed. Reduction of both the optical density and the electrical resistance were detected in the kaolin suspension treated with WSMoL, indicating that the coagulant activity is due to the destabilization of the suspended particles, followed by chemical interactions between the particles and the lectin. Incubation of the lectin with the monosaccharides N-acetylglucosamine, glucose and fructose (at concentrations that inhibited hemagglutinating activity) or with calcium and magnesium ions promoted the reduction of the coagulant activity of WSMoL. These results suggest that groups present in the carbohydrate binding domain may be involved in the coagulant activity of WSMoL, as well as that the conformation of the lectin required for this property is affected by the binding of carbohydrates and ions. WSMoL showed to be larvicidal on C. quinquefasciatus with LC50 of 1.05 mg/mL. Incubation of larval intestinal extracts with lectin did not affect α-amylase and trypsin activity, but significantly reduced the catalytic action of protease, suggesting that larvicidal activity may be linked to interference in the digestion and absorption of nutrients.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-13T19:42:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T17:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Karla Mirella Roque Marques.pdf: 1930620 bytes, checksum: 68db38f01378c0217e921e42bca39fb6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / CAPES / Nitro-heterocíclicos e tiossemicarbazonas são compostos que despertam o interesse da comunidade científica por apresentarem importantes propriedades citotóxicas e antineoplásicas, entre outras. Neste sentido, com o presente estudo se propôs a avaliar o potencial antitumoral de nove novos derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos em diferentes linhagens de células tumorais humanas, assim como seus possíveis mecanismos de ação associados. Os ensaios de citotoxicidade com o método do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) frente a sete linhagens de células neoplásicas (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 e NCIH-292) e células mononucleares do sangue periférico humano utilizando o reagente alamar blue. A análise morfológica foi realizada através de microscopia óptica, por coloração com hematoxilina/eosina. Os estudos de mecanismos de ação foram feitos através dos testes de inibição da topoisomerase II, despolarização de membrana mitocondrial e análise do ciclo celular. O estudo de docking foi realizado usando o sitio ativo da enzima Ribonucleotídeo Redutase, PDB id: 4X3V com auxílio do programa Autodock. Os resultados dos testes de citotoxicidade, revelaram que oito compostos foram capazes de promover a inibição do crescimento celular com percentual superior a 80% em pelo menos uma das linhagens avaliadas, com destaque para o composto LNN-05 que exibiu citotoxicidade frente ao maior número de linhagens com valores de CI50 entre 0,5 e 1,9 μg/mL. No teste do Alamar Blue, os derivados avaliados apresentaram CI50 > 4,0 μg/mL em células saudáveis, mostrando-se menos tóxicos que a doxorrubicina. Os testes de atividade hemolítica em eritrócitos humanos também indicaram ausência de hemólise em 100% para os compostos testados até a concentrações máxima avaliada (250 μg/mL). A avaliação morfológica por microscopia óptica, demonstrou que as células de K-562 apresentaram características de morte celular por apoptose, quando tratadas com o derivado LNN-05 nas concentrações de 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL. Contudo, os estudos de mecanismo de ação conduzidos com o derivado LNN-05 indicaram que sua atividade não se dá por inibição da enzima topoisomerase II. No entanto, a avaliação do potencial transmembrânico e a análise do ciclo celular evidenciaram que o LNN-05, na concentração de 2,8 μg/mL, causa despolarização mitocondrial em 64,2 ± 2,5%; e indução de parada do ciclo celular na fase G1 em células K-562, na dose de 1,4 μg/mL com acúmulo de 86,1% de células nesta fase. Estudo de docagem molecular indicou que os compostos se ligam à enzima ribonucleotídeo redutase, através dos resíduos Glicina50, Valina51, Treonina52, Metionina14 e principalmente, a Arginina21 e que o melhor ligante potencial é o composto LNN-03 com Evalue = -7,84 Kcal/mol, sendo LNN-05 um dos derivados com menor afinidade de ligação com Evalue = -6,39 Kcal/mol. Com base nesses resultados foi possível identificar que derivados 5-nitrotiofeno-tiossemicarbazônicos possuem promissor potencial citotóxico em células neoplásicas humanas, porém estudos adicionais para elucidação dos possíveis mecanismos de ação ainda necessitam ser conduzidos para completo entendimento de seus modos de ação. / Nitro-heterocyclic and thiosemicarbazone are compounds that have aroused the scientific community interest due to, but not limited to its cytotoxic and antineoplastic activities. In this regard, we propose in this project to evaluate the antitumor potential of nine new 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives against several human cancer cell lines, as well as its possible mechanisms of action. The cytotoxicity tests to evaluate the derivatives activity were the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] test for the seven cancer cell lines (HEp-2, HL-60, HT-29, K-562, MCF-7, MOLT-4 and NCIH-292), and peripheral blood mononuclear human cells utilizing the alamar blue test. To analyse the cells morphology, cells were stained with hematoxylin/eosin dyes and visualized through optical microscopy. The mechanism of action studies was accessed via topoisomerase II inhibition, mitochondrial depolarization and cell cycle analysis. Docking analysis using the active site of the ribonucleotide reductase enzyme, PBD id:4X3V was performed utilizing the Autodock software. The results obtained from the MTT test demonstrated that eight compounds were capable of inhibit cell growth more than 80% in at least one of the cell lines, with a highlight for the LNN-05 compound which exhibited cytotoxic activity against most of the cell lines with the lowest IC50 value (0.5 and 1.9 μg/mL). In the alamar blue test, the derivatives showed IC50 value > 9.0 μg/mL against non-cancer cells (peripheral blood mononuclear cells), which means that the compounds are less toxic than doxorubicin. The haemolytic activity test using human erythrocyte also indicated absence of haemolysis for all tested compounds with a maximum dose of 250 μg/mL. The morphological evaluation showed that K-562 cells presented characteristics of cellular death by apoptosis, when treated with the derivative LNN-05 at 0,7, 1,4 e 2,8 μg/mL concentrations. The mechanism of action studies was carried out using the LNN-05 derivative and the analysis suggests that its activity is not by the inhibition of the topoisomerase II enzyme. However, the evaluation of the transmembrane potential and the cell cycle analysis revealed that LNN-05 causes mitochondrial depolarization of 64.2 ± 2.5% at the concentration of 2.8 μg/mL and cell cycle arrest in G1 phase, totalizing 86.1 ± 0.3% at 1.4 μg/mL against K-562 cells. The docking analysis indicated that the compounds bind to the enzyme through the residues of glicine50, valine51, threonine52, methionine14, and mainly arginine21. In addition, the best ligand was LNN-03 with Evalue = -7.84 Kcal/mol, and LNN-05 one of the weakest ligand with Evalue = -6.39 Kcal/mol. Concerning this study, we could identify that the 5-nitrothiophene-thiosemicarbazone derivatives have promising cytotoxic potential against human neoplastic cells; however, further studies are needed to fully elucidate the mechanisms of action of the tested derivatives.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-04T18:22:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Marques Maciel.pdf: 949269 bytes, checksum: 6fdbdf68b085f91edadead362316fa1e (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T18:45:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Marques Maciel.pdf: 949269 bytes, checksum: 6fdbdf68b085f91edadead362316fa1e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T18:45:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Marques Maciel.pdf: 949269 bytes, checksum: 6fdbdf68b085f91edadead362316fa1e (MD5) Previous issue date: 2013-08-15 / CNPq / O petróleo e seus derivados são a principal fonte de energia em todo o mundo, porém as atividades que os envolvem podem causar sérios danos ao meio ambiente e à saúde humana. Neste contexto, é imprescindível o desenvolvimento de tecnologias que eliminem ou reduzam esses poluentes e consequentemente, sua toxicidade. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade de micro-organismos, isoladamente e em consórcio, na degradação de óleo diesel. Inicialmente foram utilizados 6 fungos e 3 bactérias, e estes, foram submetidos ao teste que investiga o potencial de degradação de petroderivados pelos micro-organismos. Em seguida, estas culturas foram submetidas à concentrações crescentes de óleo diesel (1% a 10%) a uma temperatura de 300C (+2°C) de forma estática. Com base nos resultados dos ensaios de aclimatação, foram selecionadas as linhagens para a formação do consórcio. Após a seleção do consórcio microbiano, este foi submetido a uma aclimatação e em seguida, a um planejamento experimental, em que foram utilizadas como variáveis: o inóculo, a concentração de nitrogênio e a temperatura, visando a obtenção das melhores condições favorecendo o processo de degradação. Dentre as bactérias, Bacillus sp. apresentou os maiores percentuais de degradação e entre os fungos, a levedura L24. Os resultados do planejamento experimental com o consórcio misto indicaram que, uma menor quantidade de inóculo (1 bloco/gelose) e uma maior concentração da fonte de nitrogênio (C:N 50:1) foi a condição que mais favoreceu a biodegradação da fonte oleosa. As culturas testadas isoladamente, apresentaram percentual de degradação acima de 70% enquanto que em consórcio os maiores valores foram de 30%. Nos ensaios de fitotoxicidade, todos os micro-organismos em consórcio, e isoladamente, apresentaram valores de redução da toxicidade do óleo diesel, sendo que, isoladamente mostraram-se mais eficientes, apresentando valores de IG entre 60% e 100%. / Oil and its derivatives are the main source of energy in the world, but the activities that involve them can cause serious damage to the environment and human health. In this context, it is essential to develop technologies that eliminate or reduce these pollutants and consequently its toxicity. This study aimed to evaluate the ability of micro-organisms, alone and in partnership, in the degradation of diesel oil. Initially we used 6 3 fungi and bacteria, and these were tested to investigate the potential of petroderivados degradation by micro-organisms. Then, these cultures were subjected to increasing concentrations of diesel oil (1% to 10%) at a temperature of 300C statically. Based on the results of tests of acclimatization, the strains were selected for the formation of the consortium. After selecting the microbial consortium, has been subjected to an acclimatization and then the experimental design, in which were used as variables: the inoculum, nitrogen concentration and temperature in order to obtain the best conditions favoring the degradation process. Among bacteria, Bacillus sp. showed the highest percentage of degradation among fungi, yeast L24. The results of the experimental design with the mixed consortium indicated that a smaller amount of inoculum (1 block / agar) and a higher concentration of the nitrogen source (C: N 50:1) was the condition that most favored the biodegradation of oil supply. The cultures tested alone, had percentage of degradation is above 70% while the highest values in a consortium was 30%. In phytotoxicity tests, all micro-organisms in a consortium, and separated showed reduced toxicity values diesel oil, and, separately shown to be more effective, with GI values between 60% and 100%.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8209_1.pdf: 2729975 bytes, checksum: fd5b7ebb2dd2e6ae9f350e1656113cc4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A Resolução CONAMA (Conselho Nacional do Meio Ambiente) Nº 357/2005 que revogou a de Nº 20/1986, estabelece a avaliação e classificação da qualidade das águas, passou a ser exercida pelos órgãos ambientais baseada nas análises físicas, químicas, biológicas e pelos testes de toxicidade crônica e aguda. Deste modo, torna-se possível o conhecimento do efeito tóxico das substâncias lançadas na água, fato esse de grande relevância na constatação de casos de poluição hídrica. Este estudo teve por finalidade utilizar os testes de toxicidade aguda com fotobactérias (Vibrio fischeri) e microcrustáceos (Daphnia magna) no monitoramento da qualidade das águas da bacia hidrográfica do rio Ipojuca, PE. As amostras para a realização dos testes foram coletadas bimensal, utilizando-se frascos de polietileno, entre outubro de 2002 e outubro de 2004, em 9 estações preestabelecidas pelo Programa de Monitoramento de Bacias Hidrográficas do Estado de Pernambuco. Os resultados obtidos mostram que, das cento e oito amostras avaliadas, vinte e três (12%) apresentaram toxicidade aguda. Da totalidade de estações de amostragem, três apresentaram toxicidade aguda para fotobactérias e duas toxicidade aguda para microcrustáceos, enquanto que quatro estações não apresentaram resposta aos testes realizados. Foram evidenciadas três áreas consideradas tóxicas, sendo as de maior toxicidade as estações IP-26 e IP-49, localizadas no rio Bitury, principal afluente do rio Ipojuca, à jusante do município de Belo Jardim e rio Ipojuca, à jusante da cidade de Caruaru, respectivamente. Os resultados ressaltam a importância da inclusão dos testes de toxicidade na avaliação da qualidade das águas superficiais, contribuindo desta forma na orientação das medidas de controle a serem adotadas

Orientador: Alba R. M. Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T09:34:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DeniseAparecidade_M.pdf: 1891538 bytes, checksum: 9531d707782ea16a1bb6911bddf290db (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Estudos recentes mostraram a eficácia dos derivados de E/Z-3-(4'-bromo-[l, l' -bifenil]-4-il)-( 4-X-fenil)-N,N -dimetil-2-propeno-1-amina sobre as três formas do protozoário Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. O derivado não-substituído (X=H) foi um dos mais ativos e menos tóxicos desta série. Neste trabalho, o composto (X=H) foi preparado e seus isômeros Z e E foram isolados por cromatografia de camada delgada preparativa para a realização dos ensaios biológicos. O isômero Z foi mais ativo que o E sobre formas tripomastigotas do T. cruzi. Nos ensaios de quantificação de DNA (DNA) e de redução do sal de tetrazólio (MTT), usando células fibroblásticas V79, o isômero Z foi o mais tóxico. No método de incorporação do corante vermelho neutro, a mistura isomérica e os isômeros isolados apresentaram toxicidades equivalentes. Os compostos foram mais tóxicos neste método em comparação com MTT e DNA. O isômero E foi o mais tóxico na avaliação da toxicidade aguda sobre a bactéria Escherichia coZi e sobre camundongos. Não houve alteração comportamental em camundongos tratados com a mistura I isomérica, em relação ao controle, no ensaio do Campo Aberto. Os estudos da atividade do composto (X=H) sobre o fungo Trichophyton rubrum e sobre epimastigotas do T. cruzi, sugerem a inibição da biossíntese do ergosterolcomo um possível mecanismo de ação tripanossomicida / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Maria Edwiges Hoffmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T13:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fanan_Simone_M.pdf: 3709051 bytes, checksum: f6eaf9d25517cc0dc4912e984bd7a64a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A melatonina, honnônio produzido pela glândula pineal, apresenta um gr-ande interesse na atualidade, devido à demonstração de sua ação antioxidante tanto in vitro como in vivo. Neste trabalho, foi investigado o potencial de risco genético e toxicológico da melatonina em culturas de células, e sua atividade antimutagênica. A mutagenicidade da melatonina foi determinada pelo teste de Ames, na presença e na ausência de ativação metabólica (fração S9), nas linhagens de Salmonella typhimurium TA97, Tal00 e TA102. A exposição das culturas por 30 minutos, à diferentes concentrações de melatonina (29-1160 _g/placa) não induziu nenhum aumento significativo do número de colônias revertentes, tanto na presença como na ausência de ativação metabólica. A melatonina mostrou, também, uma reversão dose-dependente (29 ¿ 232 _g/placa) dos efeitos mutagênicos causados pelo H2O2 (0,5 mM), na linhagem T A1O2. A atividade citotóxica da melatonina para fibroblastos de hamster chinês (linhagem V79) foi determinada pela medida de seus efeitos sobre a viabilidade e proliferação celular. A melatonina não alterou a viabilidade celular, medida pela redução do MTT, na faixa de concentração entre 0,0001 a 1 mM. A exposição das células por 30 minutos a diferentes concentrações de melatonina (0,01 - 5 mM) não causou inibição significativa do crescimento celular, no período de 24 horas subsequente ao tratamento. Entretanto, a exposição das células por 24 horas a concentrações de melatonina entre 0,5 a 5 mM causou inibição significativa do crescimento celular, de fonna dependente da dose. A melatonina mostrou ser um antioxidante altamente eficiente em solução, inibindo a oxidação degradativa da desoxirribose, induzida pelo sistema H2O2/Fe+3/NTA, de forma dependente da dose. Este hormônio foi 10 vezes mais eficiente que a glutationa e 200 vezes mais que o manitol, ao sequestrar os radicais hidroxila. Porém, o trolox foi 15 vezes mais eficaz que a melatonina. Entretanto, ao avaliar crescimento celular em fibroblastos V79, a melatonina (0,001 mM) mostrou uma proteção apenas parcial (50+ 7%) do efeito inibitório induzido por H2_ (50 µM). Contudo, a melatonina não protegeu a membrana mitocondrial de fibroblastos V79 contra os ataques dos oxidantes H2O2 e HPC (2,5 mM), como demonstrado pela ausência de proteção no ensaio do MTT. Já em eritrócitos humanos, ela mostrou ser um antioxidante eficiente contra a peroxidação lipídica, induzida pelo H2O2 (5 mM), apresentando um efeito protetor dose-dependente. Estes resultados indicam que a melatonina não é mutagênica e, além disso, inibe a mutação induzida pela H2O2 . A análise da toxicidade da melatonina pelas células V79 mostrou que a melatonina é citotóxica somente quando presente em altas concentrações e por tempo prolongado. A melatonina mostrou ser um eficiente antioxidante em sistema livre de células, em cultura de fibroblastos V79 apresentou proteção apenas parcial contra os efeitos da H2O2 . Entretanto, em eritrócitos mostrou eficiente proteção contra danos de membrana induzidos por este oxidante / Abstract: The melatonin, hormone produced 1>y the pineal gland,presents _ great interest at the present time due to the demonstration of its antioxidant action as in vitro as in vivo. In this work, the potential of toxicological risk of the melatonin was investigated in bacterias and in mammal cells,and its antioxidant activity was examined in cell tree systems, in human fibroblast V79 and in erythrocyte. The mutagenicity of the melatonin was determined by Ames Test, in the presence and in the absence of metabolic activation (S9-traction), in the strains of Salmonella typhimurium TA97, TA100 and TA102. The exposition of cultures by 30 minutes, to different melatonin concentrations (29 to 1,160 µg/plate) didn't induce any significant increase of the number of reverted colonies, after 48 hours of cultivation, so much in the presence as in the absence of metabolic activation. The melatonin also showed, a dose dependent reversion (29 to 232 µg/plate) ofthe mutagenics effects caused by the hydrogen peroxide (0.5 mM), in the TA102 straip.. Theçytotmric activity of the melatonin to V79 Chinese hamster fibroblasts was determined by the measure of its effects on proliferation. The melatonin didn't chage the cellular viability mesured by the reduction of MTT, in the concentration range trom 0.0001 to 1 mM. The exposition of the cells for 30 minutes to different melatonin concentrations (0.01 -5 mM) didn't caus_significant iphibitionof the cellular growth, in the period of subsequent 24 hours of treatment. However, the exposition of the cells for 24 hours to increasing melatonin concentrations between 0.5 and 5 mM, caused significant inhibition in the cellular growth, in dependent way of the dose. The .melatonin,showed to be ahighly efficient antioxidant in solution, inhibiting thedegradative oxidation of the deoxyribose, induced by the system H2O2/Fe3+/NTA, in a dependent way to the dose. This honnone was more than 10 times efficient than the glutathione and 200 times more efficient than the manit04 when scaveng the hydroxil radical. Even so, the trolox was more than 15 times effective than the melatonin. However, when evaluating cellular growth in fibroblasts V79, the melatonin just showed a partial protection (50+ 7%) ofthe inhibition effect induced by H2O2 (50µM), in _low concentration (0.001 mM). However, the melatonin up to lmM didn't protect the mitochondrional membrane of fibroblasts V79 against the attacks of the hydrogen peroxide and cumene hydroperoxide (2.5 mM), as demonstrated by the absence of protection related to the inhibition of the MTT reduction induced by these oxidizers. Yet in human erythrocytes, it showed to be an efficient antioxidant against lipid peroxidation, induced in the membrane by hydrogen peroxide (5 mM), presenting a dose-dependent protecting effect. These results indicate that melatonin is not mutagenic; besides, it inhibits mutations induced by H2O2 . The analysis of melatonin toxicity through the cells V79 showed that melatonin is citotoxic, on1y when it is present in high concentrations, for a long time. Melatonin showed to be na efficient antioxidant in a cell ftee system, but in cultures of fibroblasts V79 it showed just a partial protection against the effects of H2O2 . However, in erythrocytes, it showed an efficient protection against membrane injuries caused by this oxidant / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Danielle Karla Martins Silva (danielle.martins@ufpe.br) on 2015-03-04T14:18:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) GEÓRGIA GOMES DA CRUZ DISSERTAÇÃO DEFINITIVA.pdf: 1216647 bytes, checksum: 8ba64d9bfde489073582f35262a9d659 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T14:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) GEÓRGIA GOMES DA CRUZ DISSERTAÇÃO DEFINITIVA.pdf: 1216647 bytes, checksum: 8ba64d9bfde489073582f35262a9d659 (MD5) Previous issue date: 2012 / As atividades que envolvem a utilização do petróleo ou de seus derivados têm sido motivo constante de preocupação pelos danos causados ao ecossistema. No entanto, com avanço de tecnologias restauradoras de ecossistemas, técnicas corretivas e de controle, que sejam atraentes economicamente e ecologicamente viáveis, têm sido pesquisadas, destacando-se a biorremediação. Esta técnica tem como base, a degradação dos hidrocarbonetos pelos micro-organismos, que os utilizam como fonte de carbono. Assim, este trabalho teve como objetivo determinar um consórcio misto de fungos e bactérias que apresente potencialidade para degradar querosene, estabelecendo as condições adequadas em processo de biorremediação ex situ. As linhagens, previamente selecionadas, foram aclimatadas isoladamente e em consórcio à concentrações crescentes de querosene (1% a 10%). Um ensaio em pararelo foi realizado adicionando-se glicerol para avaliar sua influência no processo de degradação por meio de análises cromatográficas e teste de fitotoxicidade. Em seguida foi aplicado um planejamento experimental, variando o inóculo, concentração de glicerol e fonte de nitrogênio, a fim de obter as condições ideais para o ensaio em biorreator. Nesse ensaio as condições foram controladas para otimização do processo de biodegradação, que ao final para avaliar sua eficiência foi realizado testes de toxicidade. Os resultados obtidos nos ensaios indicaram que o glicerol proporcionou o aumento da degradação e menor produção de metabólitos tóxicos. E as melhores condições encontradas no planejamento fatorial para a degradação, foram: menor inóculo, menor concentração de nitrogênio e uma maior concentração de glicerol. O ensaio em biorreator revelou que houve um aumento na degradação do querosene, já que o ensaio foi realizado em condições otimizadas e controladas, no entanto, a toxicidade dos subprodutos formados foi aumentando afetando a germinação e crescimento da raiz do vegetal testado.

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-24T04:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reginatto_Valeria_D.pdf: 2819317 bytes, checksum: 5838a5798232d7fa6cc84b10de5913aa (MD5) Previous issue date: 1998 / Doutorado

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-13T21:08:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandrine Maria de Arruda Lima.pdf: 3262152 bytes, checksum: a8690471279e77c24ff02a21a444cecc (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-18T14:46:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandrine Maria de Arruda Lima.pdf: 3262152 bytes, checksum: a8690471279e77c24ff02a21a444cecc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-18T14:46:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Sandrine Maria de Arruda Lima.pdf: 3262152 bytes, checksum: a8690471279e77c24ff02a21a444cecc (MD5) Previous issue date: 2017-01-18 / CAPES / Os micro-organismos, em particular bactérias do gênero Streptomyces, são conhecidos por produzir um vasto número de metabólitos secundários bioativos de interesse farmacêutico. O objetivo deste estudo foi investigar as atividades antioxidante, antimicrobiana e anticâncer de metabólitos bioativos produzidos por Streptomyces spp., bem como sua toxicidade. A identificação taxonômica das linhagens foi realizada utilizando as técnicas de caracterização fenotípica e molecular. A produção dos metabólitos bioativos foi avaliada através de fermentação submersa e semi-sólida. Paralelamente, a atividade antioxidante foi analisada por meio dos ensaios DPPH, ABTS e fosfomolibdênio e a atividade antimicrobiana investigada pela concentração mínima inibitória. Os testes de atividade anticâncer foram realizados através do ensaio antiproliferativo do MTT, seguido dos testes de mecanismos de ação por citometria de fluxo para analisar a capacidade do composto em despolarizar a membrana mitocondrial, promover parada de ciclo celular e causar fragmentação no DNA. Para determinar a DL50 (dose letal mediana responsável por matar 50% de uma população em teste) foi realizada uma toxidade aguda in vivo utilizando camundongos albinos Swiss. Streptomyces sp UFPEDA 3370 foi identificado como S. hygroscopicus. Os extratos apresentaram baixa atividade antioxidante, sendo o extrato metanólico da fermentação submersa o melhor para atividade antimicrobiana e citotóxica comparado aos demais. A elaiofilina foi isolada a partir desse extrato, sendo identificada por métodos espectroscópicos, apresentando menor concentração mínima inibitória frente Enterococcus faecalis. Na atividade anticâncer, a elaiofilina apresentou potencial inibitório em todas as linhagens neoplásicas testadas, com melhor atividade frente às células leucêmicas. Os testes por citometria de fluxo revelaram que a substância causa despolarização mitocondrial, parada de ciclo na fase G1 e fragmentação do DNA, o que indica uma provável atuação na via apoptótica de morte celular. A toxidade aguda revelou que a fração EB1, rica em elaiofilina, apresenta DL50 de 1000 mg/kg. Estes resultados demonstram que a substância em estudo tem potencial antimicrobiano e antiproliferativo, tornando-se um candidato para estudos clínicos. / Microorganisms, particularly bacteria of the Streptomyces genus, are known for producing several active secondary metabolites of pharmaceutical interest. The main goal of this study was to evaluate the antioxidant, antimicrobial and anticancer activities of the bioactive secondary metabolites produced by Streptomyces spp., and their toxicity. The taxonomic identification of the strains lineages was accessed by utilizing techniques of molecular and phenotypic characterization. The production of the bioactive metabolites was evaluated through submerged and semi-solid fermentation. In parallel, the antioxidant activity was analyzed through DPPH, ABTS and phosphomolybdenum and the antimicrobial activity was investigated using the microdilution method. The anticancer activity test was accessed by the MTT test followed by mechanisms of action tests using a flow cytometer, which could analyze the ability of the compound to depolarize the mitochondrial membrane, promote cell cycle arrest, and cause DNA fragmentation. To determine the LD 50 (median lethal dose responsible for killing 50% of a population under test) an acute toxicity was performed in vivo using Swiss albino mice. Ours results shows that Streptomyces sp UFPEDA 3370 was identified as S. hygroscopicus. The extracts present low antioxidant activity, being the methanolic extract of the fermentation in submerged culture the best for antimicrobial and cytotoxic activity compared to the others. The elaiophyline isolated starting from this extract, identified by spectroscopic methods, showed the smallest minimum inhibitory concentration against Enterococcus faecalis. In the anticancer activity, elaiophiline showed inhibitory potential in all tested cancer cell lines, with the best results against leukemic cells. The flow cytometer tests showed that the substance causes D mitochondrial depolarization, cycle stop in G1 phase and DNA fragmentation, which indicates that the compound might act through apoptosis. The acute toxicity test revealed that an EB1 fraction, rich in elaiophylin, had a LD50 of 1000 mg/kg. These results demonstrate that our substance has antimicrobial and antiproliferative properties, which makes it a promissory candidate for clinical studies.