Spelling suggestions: "subject:"crecidos"" "subject:"acecidos""
321 |
Análise histomorfológica e molecular de lesões granulomatosas sugestivas de tuberculose bovinaSouza, Renata Furlan Pereira de [UNESP] 13 June 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2013-06-13Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1
000814079.pdf: 449763 bytes, checksum: 35a86182a6a6ea1a298c0d76125e9c24 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / tuberculose bovina é uma enfermidade infectocontagiosa granulomatosa crônica de carácter zoonótico causada pelo Mycobacterium bovis. Essa bactéria pertence ao complexo Mycobacterium tuberculosis que corresponde a um grupo de micobactérias filogeneticamente relacionadas, que apresentam considerável dificuldade no diagnóstico direto em amostras teciduais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar linfonodos por meio de diagnóstico histopatológico e molecular, visando à detecção direta do agente em tecido. Durante a linha de inspeção de abate em frigorífico, foram selecionados 150 linfonodos com lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose. Na análise histológica pela coloração de Hematoxilia-Eosina (HE), 100% das amostras apresentaram lesões microscópicas compatíveis com tuberculose. A coloração de Zielh-Neelsen (ZN) evidenciou a presença de bacilos álcool ácido resistentes (BAAR) em 6 (4%) amostras. O método de extração para a análise molecular apresentou bons resultados, mas a amplificação dos fragmentos de DNA dos genes hsp65 e IS6110 resultaram em baixa sensibilidade. Contudo a reamplificação do gene IS6110, resultou em positividade de 63,3%, indicando que a dificuldade do diagnóstico molecular em amostras teciduais esta relacionada a quantidade reduzida de bactérias presentes nas amostras. Palavras-chave: diagnóstico, histopatologia, Mycobacterium, reação em cadeia da polmerase, tecidos / Bovine tuberculosis is a chronic granulomatous infectious disease of zoonotic nature caused by Mycobacterium bovis. This bacterium belongs to the Mycobacterium tuberculosis complex which corresponds to a group of phylogenetically related mycobacteria, which have considerable difficulty in diagnosing directly in tissue samples. The objective of this study was to evaluate lymph nodes through histopathologic diagnosis and molecular targeting the direct detection of the agent in tissue. During the inspection line slaughter in a fridge, we selected 150 nodes with macroscopic lesions suggestive of tuberculosis. In histological analysis by staining Hematoxilia-eosin (HE), 100% of the samples had microscopic lesions compatible with tuberculosis. The coloring Zielh-Neelsen (ZN) revealed the presence of acid- resistant bacilli (AFB) in 6 (4%) samples. The extraction method for molecular analysis showed good results, but the amplification of DNA fragments of hsp65 genes and IS6110 resulted in low sensitivity. However, the reamplification of IS6110 gene resulted in 63.3% positivity, indicating the difficulty of tissue samples for molecular diagnosis related to this reduced amount of bacteria present in samples
|
322 |
Estudos comparativos de três diferentes scaffolds pra crescimento de célula tronco mesenquimal, fibroblastos e queratinócitosNunes, Helga Caputo [UNESP] 19 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2014-02-19Bitstream added on 2015-01-26T13:30:41Z : No. of bitstreams: 1
000793457.pdf: 4940625 bytes, checksum: 33d37f3e9d163f7bc90f3beb34d29c57 (MD5) / Introdução: A Engenharia de Tecidos consiste na regeneração de órgãos e tecidos, obtidos através da coleta de partes de órgãos ou tecidos do indivíduo, que, dissociados em células, são cultivadas sobre suportes biológicos ou sintéticos (scaffolds), tendo como principal premissa o reestabelecimento e recuperação da funcionalidade do tecido lesado ou perdido. Esta tecnologia, portanto, abre novos caminhos para gerar transplantes funcionais e vitais. Dentro da Engenharia Biomédica e de Biomateriais, o Laboratório de Engenharia Celular do Hemocentro de Botucatu possui, desde 2001, pesquisas na área de produção de curativos biológicos, que são aqueles que interagem de forma ativa nas diversas fases do processo cicatricial, nos vários tipos de feridas. Diante da realidade de que o tratamento das feridas crônicas englobam altos custos econômicos, sociais e humanos, comprometendo a vida dos indivíduos acometidos e da necessidade de se otimizar e minimizar o impacto negativo do descarte de hemocomponentes excedentes da prática transfusional, o desafio é buscar alternativas de scaffolds para Terapia Celular. Objetivos: Avaliar o desempenho de diferentes arcabouços biológicos como a cola de fibrina, gel de plaquetas e membrana de quitosana dopada com fatores de crescimento extraídos de plaquetas, para cultura de células. Material e Métodos: Foi coletado um fragmento de pele e um de gordura de cinco pacientes diferentes. Estes tecidos foram submetidos a protocolos de dissociação mecânica, enzimática e por explante, seguido de isolamento, semeadura e expansão das células obtidas: células-tronco mesenquimais, fibroblastos e queratinócitos. As células foram cultivadas até ao menos a quarta passagem, caracterizadas e separadas em dois grupos: testes pré-scaffold e pós-scaffold, que consistiu nas análises de imunofenotipagem, imunocitoquímica, dosagem de citocinas inflamatórias no sobrenadante de cultura, teste do ... / Introduction: Tissue engineering comprises in organ and proper tissue regeneration achieved by collecting small tissue fragments that are dissociated into cells and then cultivated into biological or synthetics scaffolds. The main characteristic of these constructs is their capacity to behave as their biological matrix counterparts, providing mechanical support and the required micro environment to the cells. This technology paves the way for the creation of functional and vital tissues for transplants. Within Biomedical Engineering and Biomaterials, the Cell Engineering Laboratory of the Botucatu Blood Transfusion Center has been investigating these topics since 2001, starting with the production of biological dressings. Biological dressings interact actively with the several phases of chronic wounds, which involves high economic, social and psychological costs, often condemning the patients quality of life. Considering this reality, the contribution of tissue engineering is to develop alternatives on cell therapy using scaffold technology. Aims: To assess the performance of different biological scaffolds such as fibrin glue, platelet gel and chitosan membrane for cell culture. Material and Methods: Five fragments of adipose tissue and skin were collected, dissociate with mechanical, enzymatic and explant techniques, and the resulting cells were seeded on tissue culture flasks, amplified and characterized using multiparameter techniques. Following characterization, these cells were cultivated into three different scaffolds made of fibrin glue, platelet gel and chitosan - which was performed in two distinct ways, on its natural form and incorporated with platelet-derived growth factors to analyze this interaction. Discussion and Results: cell cultures were amplified and cultivated making a good cell bank. However, keratinocytes were difficult to grow and the rest of experiments were unfeasible to drawn up. Immunocytochemistry analysis ...
|
323 |
Estratégias de propagação de barueiro (Dipteryx alata Vog.) e jatobazeiro do cerrado (Hymenaea stigonocarpa MART)Larson, Léia Carla Rodrigues dos Santos [UNESP] 16 July 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2014-07-16Bitstream added on 2015-01-26T13:30:22Z : No. of bitstreams: 1
000801451.pdf: 2109700 bytes, checksum: 623a46bdb6d18b0550d89d0505fd58de (MD5) / As espécies nativas brasileiras devem ser preservadas e pesquisadas para manutenção e perpetuação no seu bioma de origem. De forma geral, as frutíferas nativas são fontes de geração de renda para a população local, devido os seus diversos usos na alimentação humana e animal, além de interesses sociais e ambientais. Entre as diversas espécies frutíferas nativas destacam-se o barueiro e o jatobazeiro, que podem ser utilizadas a madeira, a semente, a polpa, a resina, as folhas e ainda podem fazer parte de algum sistema de produção como agrossilvopastoril. Entretanto, a exploração do jatobazeiro e do barueiro não podem ocorrer só através do extrativismo predatório, devem ser implantadas de forma comercial, devido ao comportamento sazonal de produção e a demanda de consumo. Contudo, para diminuição da utilização predatória das espécies nativas florestais, técnicas de propagação e cultivo devem ser pesquisadas, pois a produção de sementes não ocorre o ano todo, e muitas sementes possuem diversos tipos de dormência. É importante conhecer o melhor método de propagação destas espécies para produção de mudas e a adaptação em diferentes tipos de nutrições de solos ou substratos. Desta forma, objetivou-se com este trabalho a produção de mudas de barueiro e jatobazeiro em diferentes tipos de substratos e desenvolver protocolos para micropropagação do baru. Foi possível verificar que no solo puro ocorreu o melhor desenvolvimento das mudas, e que a calagem e a adubação mineral proporcionaram incremento no crescimento das mudas. A adição de esterco ao substrato não beneficiou a produção de muda das espécies, devido o excesso de alguns nutrientes, que ocasionou um desbalanceamento nutricional. O baru pode ser micropropagado em laboratório, e suas sementes germinaram in vitro / Brazilian native species should be preserved and researched for maintenance and perpetuation of origin in your biome. Generally, the native fruits are sources of income generation for the local population, because their many uses in food and feed, as well as social and environmental interests. Among the various native fruit species include the barueiro and jatobazeiro and which can be used as wood, seeds, pulp, resin, and the sheets may also be part of a production system as farming areas. However, the exploitation of jatobazeiro and barueiro may not occur only through predatory extraction, should be deployed commercially, due to seasonal production and consumer demand. However, to maximize the use of predatory native forest species, propagation and cultivation techniques should be investigated, since seed production does not occur throughout the year, and many seeds have various types of dormancy. It is important to know the best method of propagation of these species for seedling production and adaptation in different types of soils or substrates nutritions. Thus, the aim of this work was to produce seedlings and barueiro jatobazeiro on different types of substrates and develop protocols for micropropagation of the baru. It was possible to verify that the pure soil was the best seedling development, and that liming and mineral fertilization provided increased growth of seedlings. The manure applied to the substrate did not benefit seedling production of species, because the excess of some nutrients, which caused a nutritional imbalance. The baru can be micropropagated in the laboratory, and their seeds germinated in vitro
|
324 |
Estratégias para a embriogênese somática e conservação ex situ de germoplasma de macaúba [Acrocomia aculeata (Jacq.) Lodd. ex Mart.]Luis, Zanderluce Gomes 09 September 2013 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-01T17:28:27Z
No. of bitstreams: 1
2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-01T20:49:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-01T20:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / O presente trabalho objetivou estabelecer estratégias para a clonagem por embriogênese somática e conservação ex situ de macaúba (Acrocomia aculeata). Para a embriogênese somática a partir de embriões zigóticos (EZ), foram avaliados o efeito das auxinas 2,4-D, dicamba e picloram nas concentrações de 0, 1,5 e 3,0 mg L-1, assim como os meios de cultura de MS e Y3. Na diferenciação de embriões somáticos (ES) as concentrações das auxinas foram reduzidas para 0,5 e 1,0 mg L-1. A regeneração de plantas foi realizada em meio de cultura desprovido de auxina. A formação de calos embriogênicos (CE) foi observada em todas as auxinas e concentrações testadas e, entre os meios de cultura foi observado resultados significativos com o uso de meio Y3. ES foram observados após 60 dias em meio de diferenciação e a frequência de regeneração de plantas atingiu valores de até 31,9%. Na embriogênese somática a partir de segmentos foliares de plantas in vitro, EZ foram germinados em meio Y3 contendo 0 e 225 μM de 2,4-D (pré-tratamento). A parte aérea das plantas foi dividida e seccionada em quatro regiões: meristemática, basal, mediana e apical. Os segmentos de cada região foram inoculados em meio contendo 450 μM de picloram para a indução de calos. Neste experimento, a diferenciação de ES ocorreu em meio com 40 e 80 μM de picloram. O uso do pré-tratamento de indução aumentou a capacidade de formação de CE e de ES. A região meristemática foi a que apresentou os melhores resultados. Em ambos os meios de diferenciação observou-se ES formados. Para aquisição da competência para formação de calos a partir de folhas e ovários imaturos de plantas adultas, foram avaliados o efeito das auxinas 2,4-D, dicamba e picloram, os meios de cultura de MS e Y3, as regiões basal e apical do palmito, quatro tipos de explantes provenientes de ovários imaturos e três classes quanto ao estádio de desenvolvimento das inflorescências. A auxina picloram associada à concentração de 450 μM proporcionou resultados superiores na indução de CE, em ambos os explantes testados. O meio Y3 aumentou a formação de calos em explantes foliares, porém, não teve influência nos explantes provenientes de flores femininas. Para a conservação de germoplasma de macaúba a médio-longo prazo, as sementes foram avaliadas quanto a tolerância à dessecação por até 168 horas. Após a determinação da melhor umidade para o armazenamento (5% de umidade), as sementes foram armazenadas a -196, -20, 6 e 25 °C por períodos de 0, 90, 180 e 360 dias. Para avaliar a viabilidade e germinação após cada período de armazenamento, as sementes foram desinfestadas e os EZ excisados e cultivados in vitro. Os resultados indicaram que as sementes de macaúba podem ser dessecadas para valores de até 4,3% de umidade, sem perda da viabilidade e com germinabilidade superior a 90%. As sementes armazenadas apresentaram perda da viabilidade ao longo dos períodos de avaliação em todas as temperaturas de conservação testadas, indicando que a categoria subortodoxa seja mais adequada para classificar as sementes desta espécie. No experimento de criopreservação de embriões zigóticos, esses foram extraídos de sementes e reidratados por 15 h em meio contendo 3% de sacarose. Em seguida, os EZ foram submetidos a dessecação por até 8 horas. Para cada período, parte dos embriões foi inoculada em meio de germinação e parte foi colocada em criotubos estéreis e imersos diretamente em nitrogênio líquido por até 360 dias. Após os período de armazenamento, foi realizado o descongelamento rápido dos criotubos em banho-maria a 40 °C por 90 segundos. Os resultados revelaram que há diminuição da germinabilidade com o aumento do tempo de dessecação dos EZ, com médias de 97 e 75% para 0 horas e 8 horas de dessecação, respectivamente. Para os embriões zigóticos criopreservados, a maior percentagem de germinação (81%) foi obtida após 6 horas de dessecação, quando os embriões apresentavam 11% de umidade. O presente trabalho contribui com informações relevantes tanto para a propagação vegetativa quanto para a conservação dessa espécie. Verificou-se que a embriogênese somática pode ser obtida a partir de diferentes fontes de explantes e a criopreservação pode representar uma nova estratégia para a conservação de germoplasma de macaúba por longos períodos. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to establish strategies for cloning by somatic embryogenesis from different explants and evaluate the desiccation tolerance and medium to long term storage of seeds and zygotic embryos of macaw palm (Acrocomia aculeata) for ex situ conservation. For the somatic embryogenesis from zygotic embryos (ZE) the effect of the auxin 2,4-D, dicamba and picloram at concentrations of 0, 1.5, and 3.0 mg L -1 and culture media MS and Y3, were evaluated. For the differentiation of somatic embryos (SE), the concentrations of auxin was reduced to 0.5 and 1.0 mg L- 1. Plant regeneration was performed in culture medium without auxin. The formation of embryogenic calli (EC) was higher in Y3 medium. SE were observed after 60 days in differentiation medium. The frequency of plant regeneration reached values of up to 31.9%. In somatic embryogenesis from leaf segments of in vitro plants, the effect of using a pre-induction treatment on calli and somatic embryo formation and was evaluated and more responsive explants characterized. For this, ZE were germinated in Y3 containing 0 and 225 μM of 2,4-D (pre-treatment). The aerial part of the plant was sectioned into four regions: meristematic, basal, median and apical. The segments from each region were inoculated in medium containing 450 μM of picloram for calli induction. The differentiation of SE occurred in medium with 40 and 80 μM of picloram. The use of the pretreatment increased the ability to induce the formation of EC as well as SE. The meristematic region showed superior results in the induction of EC and SE compared to the other regions tested. In both differentiation media we observed differentiated SE. In the acquisition of competence for calli formation from young imature and ovaries, we evaluated the effect of auxins 2,4-D, dicamba and picloram, the culture media MS and Y3, the basal and apical foliar regions of the palmetto tree, four types of explants from ovaries and three inflorescence development stage classes. The auxin, picloram associated with concentration of 450 μM, showed superior results in the induction of EC in both explants tested. The Y3 medium increased calli formation in leaf explants, however, it did not influence explantes from ovaries. For the conservation of macaw palm seed germplasm over the medium to long term, the seeds were evaluated for tolerance to desiccation for up to 168 hours. After determining the best moisture content for storage (5% moisture), seeds were stored at -196, -20, 6, and 25° C for 0, 90, 180 and 360 days. To assess the viability and germination after each storage period, the seeds were desinfested and ZE excised and cultivated in vitro. The results indicated that the macaw palm seeds can be desiccated to up to 4.3% moisture, without loss of viability and with a germination rate above 90%. Seeds stored for 360 days showed loss of viability over the evaluation periods at all storage temperatures tested, indicating that the suborthodox category is more appropriate to classify the seeds of this species. Based on the seed conservation results obtained, cryopreservation of zygotic embryos presents a viable alternative for the germplasm conservation of this species. For this experiment, ZE were extracted from seeds and rehydrated for 15 h in medium containing 3% sucrose. The ZE were then subjected to drying in a laminar flow chamber 0, 2, 4, 6 and 8 hours. For each period, a portion of the embryos was inoculated in germination medium and a portion was placed in sterile vials and immersed directly into liquid nitrogen for up to 360 days. After each storage period, rapid thawing of the cryotubes was conducted in a water bath at 40° C for 90s. The desiccation results showed that germinability decreases with increased drying time, averaging 97 and 75% for 0 hours and 8 hours of desiccation, respectively. For cryopreserved zygotic embryos, the highest germination percentage (81%) was obtained after 6 hours of desiccation, when the embryos had 11 % moisture. Embryos cryopreserved with 11% moisture content for up to 360 days showed 75% survival. This study contributes information relevant to both vegetative propagation and for the conservation of genetic resources of this species. Somatic embryogenesis can be obtained from different explant sources, and cryopreservation of zygotic embryos may represent a new strategy for the conservation of macaw palm germplasm for long periods.
|
325 |
Avaliação molecular e funcional de embriões bovinos produzidos in vitro vitrificados por Cryotop / Molecular and functional evaluation of bovine in vitro produced embryos vitrified by Cryotop MethodLeme, Ligiane de Oliveira 03 May 2017 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-10T21:23:06Z
No. of bitstreams: 1
2017_LigianedeOliveiraLeme.pdf: 1254618 bytes, checksum: 056b35332f8c0d914e9ba088b6e79b03 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-26T15:37:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2017_LigianedeOliveiraLeme.pdf: 1254618 bytes, checksum: 056b35332f8c0d914e9ba088b6e79b03 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T15:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2017_LigianedeOliveiraLeme.pdf: 1254618 bytes, checksum: 056b35332f8c0d914e9ba088b6e79b03 (MD5)
Previous issue date: 2017-09-26 / O sucesso da criopreservação de embriões bovinos é essencial para melhor aproveitamento de embriões produzidos em excesso, para o estabelecimento de bancos de germoplasma e para comercialização de genética. Neste estudo, foi analisada a alteração na expressão de genes induzida pelo procedimento de vitrificação por Cryotop em blastocistos bovinos usando lâminas de microarranjo EmbryoGENE. Embriões bovinos produzidos in vitro em estágio de blastocisto (144 a 156 horas pós-inseminação) foram vitrificados com Cryotop e não vitrificados (controle). Após 4 horas de cultivo, embriões que re-expandiram ou evoluíram para o estágio de blastocisto expandido foram usados para análises do microarranjo e para quantificação em reação de cadeia de polimerase em tempo real (qPCR). As análises da expressão global revelaram 43 genes diferencialmente expressos em embriões vitrificados comparados aos do grupo controle (p<0,05). Um total de 9 genes foram validados por qPCR, dos quais o FOSL1, envolvido no processo de apoptose, mostrou expressão diferencial (p<0,05) para ambos os métodos, estando super-expresso em embriões vitrificados. Os resultados sugerem que a apoptose tem um papel fundamental na resposta de embriões ao processo de vitrificação. Considerando que a resposta à vitrificação está muito relacionada à qualidade do embrião, levantou-se a hipótese de que a seleção dos embriões para a vitrificação poderia influenciar também a diferença na proporção macho:fêmea, devido a velocidade de desenvolvimento e tolerância ao estresse. Por isso, na segunda etapa deste estudo, foi avaliado o efeito de touros na cinética do desenvolvimento embrionário e na resposta dos embriões à criopreservação. Para isso foram utilizados 5 touros e comparou-se além da produção de embriões, a resposta à criopreservação pelo método Cryotop dos embriões produzidos. Inicialmente, embriões em estágio de blastocisto foram vitrificados (144 a 156 horas pós-inseminação), para avaliação da criotolerância relativa aos touros; enquanto que embriões em estágio de blastocisto expandido foram removidos do cultivo no D6, D7 e D8, e sexados, para avaliação da cinética de desenvolvimento. Na segunda etapa, embriões em estágio de blastocisto expandido foram vitrificados (168 horas pós-inseminação). Todos os embriões (re-expandidos, evoluídos para o estágio de blastocisto eclodido e degenerados), de ambos tratamentos, com 24 horas de cultivo pós-vitrificação foram usados para sexagem. Os resultados sugerem que a escolha do touro, apesar de não interferir na cinética de desenvolvimento embrionário (p>0,05), afeta a produção de blastocistos e também a resposta à criopreservação (p<0,05). E ainda, que os touros que produzem embriões mais crioresistentes nem sempre são os que produzem maior taxa de embriões PIV. Além disso, embriões macho e fêmea têm a mesma capacidade de resposta à vitrificação por Cryotop. / The cryopreservation success of bovine embryos is essential for the better use of excess produced embryos, for the establishment of germplasm banks and genetics commercialization. In this study, gene expression alteration induced by the Cryotop vitrification procedure in bovine blastocysts using EmbryoGENE microarray slides was analyzed. Bovine in vitro produced embryos at blastocyst stage (144 to 156 hours postinsemination) were vitrified with Cryotop and non-vitrified (control). After 4 hours of culture, re-expanded or expanded blastocyst stage embryos were submitted to microarray analyzes and real time polymerase chain reaction (qPCR) quantification. Global gene expression analysis revealed 43 differentially expressed genes in vitrified embryos compared to control group (p <0.05). Nine genes in total were evaluated by qPCR, of which FOSL1, involved in apoptosis process, showed differential expression (p <0.05) for both methods, being overexpressed in vitrified embryos. The results suggest that apoptosis plays a key role in embryos response of vitrification process. Considering that vitrification response is closely related to embryo quality, it was hypothesized that embryos selection for vitrification could also influence the difference in male:female ratio due to developmental speed and stress tolerance. Therefore, in the second stage of this study, the bull´s influence on embryo developmental kinetics and embryo response to cryopreservation was evaluated. For this, five bulls were taken and embryos cryopreservation by Cryotop method was compared in addition to embryo production. Initially, blastocyst stage embryos were vitrified (144 to 156 hours post-insemination), to evaluate the cryotolerance relative to the bulls; while expanded blastocyst stage embryos were removed from culture at D6, D7 and D8, then sexed for developmental kinetics. As a second experiment, expanded blastocyst stage embryos were vitrified (168 hours post-insemination). All embryos (re-expanded, hatched blastocyst stage e, and degenerated) of both treatments, with 24 hours post-vitrification culture were used for sexing. The results suggest that sire´s choice, although not interfering in embryonic development kinetics, affects the blastocysts rates and the cryopreservation response. Besides, bulls producing more cryoresistent embryos are not always the ones that produce the highest IVP embryo rate. In addition, male and female embryos have the same Cryotop vitrification response.
|
326 |
Fatores psicossocias relacionados à manutenção da abstinência alcoólica no pós-transplante hepático / Psychosocial factors related to maintenance of alcohol abstinence after hepatic transplantationRocha, Heidmilene Gonçalves 02 August 2017 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, Programa de Pós-graduação em Psicologia Clínica e Cultura, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-10-24T18:46:36Z
No. of bitstreams: 1
2017_HeidmileneGonçalvesRocha.pdf: 1798164 bytes, checksum: 2698c43af6f52acbec266307f0b22c2c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-11-03T16:48:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2017_HeidmileneGonçalvesRocha.pdf: 1798164 bytes, checksum: 2698c43af6f52acbec266307f0b22c2c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-03T16:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2017_HeidmileneGonçalvesRocha.pdf: 1798164 bytes, checksum: 2698c43af6f52acbec266307f0b22c2c (MD5)
Previous issue date: 2017-11-03 / O Transplante Hepático (TH) é uma terapêutica que visa substituir parcial ou totalmente o fígado de um doador para um receptor, decorrente de sequelas graves a esse órgão. Dentre as várias indicações para esse tratamento no Brasil, a Doença Hepática Alcoólica (DHA) é a segunda maior, ocasionada pelo uso abusivo e prolongado do álcool. A recaída é uma questão complexa, multifatorial e diz respeito à singularidade de cada pessoa. A avaliação pré- transplante deve seguir diretrizes seguras e contemplar a compreensão global do paciente. O presente estudo teve como objetivo geral identificar fatores protetivos e de risco relacionados à recaída e a não recaída alcoólica no pós-transplante, em pessoas com DHA submetidas a transplantes de fígado, e as variáveis psicológicas associadas às duas condições. O estudo transversal e descritivo, com amostra por conveniência, foi realizado com quinze adultos transplantados de fígado, com média de idade igual a 52,2 anos, 14 do sexo masculino, a maioria casada, com filhos, representando 22% do total de transplantados com DHA de um centro transplantador de Brasília. O método incluiu duas etapas: (a) análise de prontuários, quando foram coletados dados referentes aos pacientes já transplantados com até seis anos de cirurgia prévia, dividindo os participantes triados em dois grupos: recaída (GR) e não recaída (GNR); (b) aplicação de entrevista semiestruturada, da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HADS) e do Inventário de Habilidades de Enfrentamento Antecipatório para Abstinência de Álcool e Outras Drogas (IDHEA-AD), para ambos os grupos. A análise mista, qualitativa e quantitativa, identificou dez participantes no GNR e cinco no GR. Em média, a amostra tinha diagnóstico de cirrose hepática alcoólica há cerca de seis anos, com 28,8 anos de uso de fermentados e destilados, com mais de dez doses por dia, em associação com outras substâncias psicoativas e abstinência alcoólica pré-TH de 3,7 anos. Não houve diferença significativa entre o GR e o GNR nos escores médios de ansiedade, depressão e dos fatores da IDHEA-AD; no entanto, o GR teve média mais baixa na habilidade em assertividade para recusar bebidas e alta em sintomas de ansiedade. De modo geral, ambos os grupos tinham percepções concordantes sobre o uso do álcool antes e após o transplante, com motivações internas para se manterem abstêmios (opinião sobre a bebida e manutenção da saúde) e externas (indicação médica e influência familiar). A família foi descrita como fator de risco (problemas familiares) e de proteção (influência familiar) para a manutenção da abstinência alcoólica pós-transplante. As razões relatadas pelo GR para retomar o uso de álcool foram problemas familiares, a incapacidade laboral, a sensação de bem-estar póstransplante e a influência de terceiros sobre o uso da Substância Psicoativa (SPA). Os participantes referiram satisfação com o tratamento pós-TH e a importância do profissional psicólogo para auxiliar no enfrentamento das questões referentes ao etilismo, ao adoecimento e à recuperação da saúde. O estudo pode aludir ao fato de que homens, com histórico de dependência do álcool, com problemas familiares, baixa habilidade para recusa do álcool, com problemas em relação a atividade laboral pós-operatória e associação de transtornos psiquiátricos em especial ansiedade e depressão tem maiores chances de recaída no uso de álcool após o transplante. O trabalho com essa população deve ser preventivo, contínuo e multiprofissional, com intervenções psicológicas e da equipe baseadas em evidências, especializadas e efetivas nas fases pré e pós-transplante. / Severe sequelae to the liver might be treated by Liver Transplantation (LT), which aims to partially or totally replace it from a donor to a recipient. Alcoholic Liver Disease (ALD) resulting from the chronic alcohol abuse is the second most common indication for this treatment in Brazil. Relapse is a complex, multifactorial and subjective phenomenon. The pre-transplant evaluation should follow safe guidelines and comprehend a global understanding of the patient. The present study aimed to identify protective and risk factors, as well as psychological variables, related to alcohol relapse and non-relapse in people with ALD after liver transplant. This cross-sectional and descriptive study used convenience sample and was performed with fifteen adults, 14 males and 1 female, which have undergone liver transplant, mean age of 52.2 years, mostly married and have children, representing 22% of the total of transplanted patients with ADL in a hepatic transplant center in Brasília. The method included two steps: (a) chart analysis of the transplanted patients who had up to six years from previous surgery, dividing the participants into two groups relapse (GR) and non-relapse (GNR); (b) the use of a semistructured interview for both groups: the Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) and the Inventory of Anticipatory Coping Abstinence Abilities for Alcohol and Other Drugs (IDHEA-AD). The mixed qualitative and quantitative analysis identified ten participants in the GNR and five in the GR. On average, the sample had been diagnosed of alcoholic liver cirrhosis for about six years, with 28.8 years of use of daily fermented and distilled beverages, with more than ten doses per day, in association with other psychoactive substances and alcoholic pre-LT 3.7 years. There was no significant difference between GR and GNR in the mean anxiety, depression and IDHEA-AD scores; however, GR had the lowest mean in the ability to assertiveness to refuse drinks and high in anxiety symptoms. In general, both groups had concurrent perceptions about pre-transplant alcohol use, and internal motivation to maintain abstemiousness (drink opinion, health maintenance) and external motivations (medical indication and family influence). Family was described as a risk factor (family conflicts) and protective factor (good support and functional family dynamics) for the maintenance of posttransplant alcohol withdrawal. The reasons reported by GR to resume alcohol use were family problems, work incapacity, post-transplant well-being and the influence of third parties on the use of Psychoactive substance (PAS). Participants reported satisfaction with post LT treatment and the importance of the professional psychologist to help address issues related to alcoholism, illness, and health recovery. The study may refer to the fact that men with a history of alcohol dependence, family problems, low ability to refuse alcohol, problems with postoperative work activity, and association with psychiatric disorders, especially anxiety and depression, have higher chances of relapse to alcohol use after transplantation. Working with this population require not only preventive, continuous and multiprofessional actions, but also psychological and staff interventions based on evidences and effective and specialized in pre and post-transplantation.
|
327 |
Resíduos organoclorados em sangue, leite materno e tecido adiposo humanos em regiões definidas do Estado do Rio Grande do Sul, BrasilCaleffi, Gerda Horn January 2005 (has links)
Foram pesquisados resíduos organoclorados em três tecidos humanos: sangue, leite materno e tecido adiposo. Sangue foi colhido de 122 indivíduos, leite materno de 19 lactantes e tecido adiposo de 23 pacientes submetidos a diversas cirurgias. Para cada tecido foram compostos dois grupos: um urbano e outro residente em áreas de intensa atividade agrícola. Os resíduos organoclorados pesquisados foram: α - HCH; γ-HCH; Aldrin; Dieldrin; Endrin; Heptacloro; Heptacloro epóxido; HCB; Mirex; o,p´DDD; o,p´DDT; Oxiclordane; p,p´Metoxicloro; p,p´DDD; p,p´DDE; p,p´DDT e Transnonacloro. Todos os doadores responderam a questionário com quesitos sobre idade, sexo, peso, atividade, local de residência, contato ou não com pesticidas. Foi testada, através de análise estatística, a relação entre presença/ausência de organoclorados nos diferentes tecidos e os dados levantados no questionário. Todas as amostras urbanas foram negativas para os organoclorados analisados. As amostras obtidas nas áreas de atividade agrícola foram positivas, com níveis crescentes de contaminação na seqüência sangue, leite materno, tecido adiposo. Os resultados das análises do presente trabalho foram comparados com resultados préexistentes no Rio Grande do Sul. Entre a pesquisa atual e as pesquisas anteriores usadas para comparação, verificou-se diminuição da incidência de organoclorados em todos os tecidos pesquisados. O OC p,p´DDE foi o único organoclorado encontrado em todos os tecidos e em todas as pesquisas, tanto atuais como anteriores usadas para comparação.
|
328 |
Aspectos epidemiológicos e morfológicos das córneas retiradas para transplantes no Distrito Federal/BrasilVicter, Thayssa Neiva da Fonseca 23 February 2018 (has links)
Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-28T20:07:59Z
No. of bitstreams: 1
2018_ThayssaNeivadaFonsecaVicter.pdf: 2759052 bytes, checksum: 513634ec128d67fcb1ee6d8afa4d77f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-31T20:31:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2018_ThayssaNeivadaFonsecaVicter.pdf: 2759052 bytes, checksum: 513634ec128d67fcb1ee6d8afa4d77f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-31T20:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2018_ThayssaNeivadaFonsecaVicter.pdf: 2759052 bytes, checksum: 513634ec128d67fcb1ee6d8afa4d77f6 (MD5)
Previous issue date: 2018-08-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ). / O programa de transplante de órgãos sólidos e tecidos do Brasil é um dos maiores do mundo. O transplante de córnea é o procedimento aplicado para tratamento para a maioria dos casos de cegueira, os quais estão relacionados a problemas na córnea. Os Bancos de Olhos possuem a função primordial na procura, captação, preservação e distribuição de córneas para fins de transplante e ao longo dos anos vêm buscando meios para aumentar a qualidade das córneas ofertadas. Existem vários fatores que podem influenciar no aspecto qualitativo da córnea como idade do doador, número das células endoteliais, além do tempo entre morte, enucleação e preservação do tecido. Visando a melhor qualidade das córneas ofertadas pelo Banco de Olhos do Distrito Federal, este trabalho caracterizou a influência morfológica ao longo do tempo na preservação dos tecidos oculares, causa mortis dos doadores e motivos para o descarte das córneas retiradas do banco para transplantes. Identificamos 1547 notificações de potenciais doadores resultando em um total de 3074 córneas doadas ao Banco de Olhos do DF. As características sócio demográficas demonstraram diferença entre gêneros (masculino, 74,8% e feminino, 25,2%), média de idade dos doadores foi de 40±15,9 anos. 25% das causas de morte foram por doenças cardiovasculares, seguido por 19,6% de perfuração por arma de fogo e 14,2% foram politraumatismos. Aproximadamente 60% (n=1836) foram transplantadas e 40% (n=1238) foram descartadas. Em relação às causas de descarte, 68% (n = 841) foram devidas a exames sorológicos positivos ou indeterminados e 39% (n = 486) por vencimento (período máximo garantido expirado de preservação da córnea). O tempo máximo de armazenamento conhecido para as córneas doadoras no meio de preservação Optisol-GS é limitado a 14 dias. Analisamos a morfologia de cada camada de 10 córneas preservadas em meio Optisol-GS, a 4 ° C, por microscopia especular em até 48 horas após a preservação e microscopia ótica, eletrônica de varredura e transmissão, com intervalos de preservação de 7, 10, 12, 14, 16 e 20 dias. Observamos discretas alterações morfológicas para as amostras do 10º dia e mais severas para o 14º, 16 º e 20º dias. Como as lamelas estromais incompactas, diminuição ou ausência de células epiteliais e do endotélio, descontinuidade do padrão hexagonal, ruptura do citoplasma e desorganização stromal. Também registramos a estrutura morfológica da camada de Dua em imagem de alta qualidade. Tecidos da córnea armazenados por mais de 10 dias não são apropriados para transplantes ópticos. / The Brazilian solid and tissue organ transplantation program is one of the largest in the world. Corneal transplantation is the procedure used to treat most of the cases of blindness, which are related to corneal impairment. The Eye Banks have the primary function in the search, capture, preservation and distribution of corneas for the purpose of transplantation and over the years have been looking for ways to increase the quality of the corneas offered. There are several factors that influence the qualitative aspect of the cornea such as donor age, number of endothelial cells, plus time between death, enucleation and tissue preservation. Aiming at the best quality of the corneas offered by the Bank of Eyes of the Federal District, this work characterized the morphological influence over time in the preservation of ocular tissues, donors causa mortis and reasons for the disposal of the corneas removed from the bank for transplants. We identified 1547 notifications of potential donors resulting in 3074 corneas donated to DF Eye Bank. The socio-demographic characteristics showed a difference between genders (male, 74.8% and female, 25.2%), mean age of the donors was 40 ± 15.9 years. 25% of the causes of death were due to cardiovascular diseases, followed by 19.6% of firearms and 14.2% were polytrauma. Approximately 60% (n = 1836) were transplanted and 40% (n = 1238) were discarded. Regarding the causes of discharge, 68% (n = 841) were due to positive or indeterminate serological tests and 39% (n = 486) by maturity (maximum guaranteed expired period of corneal preservation). The known maximum storage time for donor corneas in the Optisol-GS preservation medium is limited to 14 days. We analyzed the morphology of each layer of 10 corneas preserved in Optisol-GS medium, at 4 ° C, by specular microscopy up to 48 hours and optical and electronic scanning and transmission electron microscopy, with preservation intervals of 7, 10, 12, 14, 16 and 20 days. We observed discrete morphological changes for the samples of the 10th day and more severe for the 14th, 16th and 20th days. Like incompressed stromal lamellae, decreased or absent epithelial and endothelial cells, hexagonal pattern discontinuity, cytoplasmic rupture, and stromal disorganization. We also recorded the morphological structure of the Dua layer in high quality image. Corneal tissues stored for more than 10 days are not appropriate for optical transplants.
|
329 |
Do diálogo ao transplante : educação permanente na perspectiva de FreireAguiar, Fernando de 02 October 2014 (has links)
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Educação da Universidade do Extremo Sul Catarinense-UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Educação. / The contextualization on transplantation, organ donation and its educational practices is relevant today given the great need for donors, and their corresponding number of people waiting for an organ. This study started from the need to understand how to make permanent education practices of health professionals focused on public policies on organ transplantation. It is understanding that organ donation is inserted in a moment of extreme vulnerability on the part of the donor's family, by dealing directly with his death. Is the health professional that is next to the family at the time of the donation decision. Assuming freirean education referential problematical, it is understood that the educational practice of the Professional with the people served should if guided by critical reflection, not by induction. And the permanent education of this professional would be a mediation for its performance in this regard. In this way, an attempt was made to seek the understanding of the following question: How is the permanent education of health professionals within the organ donation policy? As specific objectives we had: Characterize the policy of permanent education in organ donation in the State of SC; Identify how to give permanent education practices in organ donation in the State of Santa Catarina in the perspective of liberating education; Analyze the permanent education in organ donation under the optics of ministrantes courses and organizing team; Understand the educational activities from the perspective of health professionals who receive; Know the main difficulties encountered by health professionals, in their daily life with regard to organ donation. This research was characterized as exploratory, qualitative and empirical approach, and had as its subject 05 caregivers (instructors) and 14 involved (who receive instruction) in the process of permanent education for organ donation in the State of Santa Catarina, in one of the courses developed. As data collection tools was employed the questionnaire and observation. As a result, we have that there is a policy of permanent education in organ donation in the State. Thei educational practices do not express themselves according to the freirean referential, however, there are times of critical reflection in these courses. Both for instructors and for the professionals who make the courses, the importance of these refers to its contents, update of information and tweaking of the explant, not being too placed the issue of criticality. However, it is present in the courses observed, in some moments in which they focus on the debates. The major difficulties encountered in relation to donation is the lack of professional preparation, which reiterates the importance of permanent education. The benefits of this research to the company direct for the improvement of the services responsible for conducting the transplantation of organs, through a critical reflection of permanent education in health developed that, rather than perfecting a technique, should promote awareness. / A contextualização sobre transplante, doação de órgãos e suas práticas educativas se faz relevante hoje dada a grande necessidade de doadores, e seu correlativo número de pessoas a espera de um órgão. Este estudo partiu da necessidade de se compreender como se fazem as práticas de educação permanente dos profissionais de saúde voltadas para as políticas públicas em transplante de órgãos. Parte-se do entendimento de que a doação de órgãos se insere em um momento de vida de extrema vulnerabilidade por parte do familiar do doador, por lidar diretamente com sua morte. É o profissional de saúde que está junto à família no momento da decisão da doação. Partindo do referencial freireano de educação problematizadora, entende-se que a prática educativa do profissional junto às pessoas atendidas deva se pautar pela reflexão crítica, não pela indução. E a educação permanente deste profissional seria uma mediação para sua atuação neste sentido. Desta forma, tentou-se buscar o entendimento da seguinte questão de estudo: Como se caracteriza a educação permanente dos profissionais de saúde dentro da política de doação de órgãos? Como objetivos específicos, tivemos: Caracterizar a política de educação permanente em doação de órgãos no estado de SC; Identificar como se dão as práticas de educação permanente em doação de órgãos no estado de SC na perspectiva da educação libertadora; Analisar a educação permanente em doação de órgãos sob a ótica dos ministrantes dos cursos e da equipe organizadora; Compreender as ações educativas sob a ótica dos profissionais de saúde que as recebem; Conhecer as principais dificuldades encontradas, junto aos profissionais de saúde, em seu cotidiano no tocante à doação de órgãos. Esta pesquisa se caracterizou por ser exploratória, com abordagem qualitativa e empírica, e teve como sujeitos 05 profissionais responsáveis (instrutores) e 14 envolvidos (que recebem a instrução) no processo de Educação Permanente para doação de órgãos do estado de Santa Catarina, em um dos cursos desenvolvidos. Como instrumentos de coleta de dados foi empregado o questionário e a observação. Como resultados, temos que existe uma política de educação permanente em doação de órgãos no estado. Suas práticas educativas não se expressam segundo o referencial freireano, no entanto, há momentos de reflexão crítica nestes cursos. Tanto para os instrutores como para os profissionais que fazem os cursos, a importância dos mesmos se refere ao seu conteúdo de atualização, de informação e de aperfeiçoamento do processo de explante, não sendo muito colocada a questão da criticidade. Porém, ela está presente nos cursos observados, em alguns momentos em que se privilegiam os debates. As maiores dificuldades encontradas em relação à doação é a falta de preparo dos profissionais, o que reitera a importância da educação permanente. Os benefícios desta pesquisa à sociedade se direcionam para a melhoria dos serviços responsáveis pela realização do transplante de órgãos, mediante uma reflexão críticas da educação permanente em saúde desenvolvida que, mais do que aperfeiçoar uma técnica, deve promover a conscientização.
|
330 |
Implante da membrana amniótica criopreservada em associação ou não com transplante de limbo no tratamento de úlceras profundas de córnea em cãesFerreira, Gabriel Thadeu Nogueira Martins [UNESP] 04 September 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2012-09-04Bitstream added on 2014-06-13T20:50:08Z : No. of bitstreams: 1
ferreira_gtnm_me_araca.pdf: 473953 bytes, checksum: f471fe3fe294467c9ef7539797d814f9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: avaliar a aplicação clínica do implante da membrana amniótica canina criopreservada associada ou não ao transplante de limbo e do recobrimento conjuntival 360º no tratamento de úlceras de córnea profundas. Métodos: quinze cães com ulceração corneal clínica profunda foram alocados em três grupos: GI= recobrimento conjuntival 360º (n=5); GII= implante no bordo da úlcera de membrana amniótica associada ao recobrimento com a terceira pálpebra (n=5) e GIII= implante de membrana amniótica associado ao transplante de limbo córneoescleral autólogo e ao recobrimento com a terceira pálpebra (n=5). Os parâmetros clínicos avaliados foram: blefarospasmo, secreção ocular, vascularização corneal, defeito epitelial, opacificação corneal e qualidade cicatricial em seis momentos (inicial, 1, 3, 7, 15 e 30 dias de posoperatório). Resultados: no GI, não se observou aderência do recobrimento conjuntival 360º na úlcera (n=2), deiscência da sutura do recobrimento conjuntival (n=2), sinéquia anterior (n=2) e intensa quemose (n=1). Nos GII e GIII não foram observadas estas complicações. Os animais do GII e GIII apresentaram cicatrização epitelial no M15 e o GI somente M30 (p<0,05). Com relação aos outros parâmetros oftálmicos, a diferença foi significante entre momentos inicial e final no mesmo grupo (blefarospasmo, secreção ocular, vascularização). A cicatriz corneal apresentouse de maneira mais intensa, densa e desorganizada no GI. Conclusão: o implante da membrana amniótica associada ou não ao transplante de limbo demonstrou ser mais eficaz no tratamento de úlceras profunda de córnea, quando comparado ao recobrimento conjuntival 360º / Purpose: to evaluate the clinical application of implant of the canine cryopreserved amniotic membrane (DMEM plus DMSO 1:1) with or without limbal transplantation and 360° conjunctival flap in the treatment of progressive corneal ulceration. Methods: 15 dogs of the different breeds, males and females, aging four months to four years old with deep corneal ulceration and different clinical progression were divided in two groups: GI=360° conjunctival graft (n=5); GII=implant of amniotic membrane, sutured at the edge of the ulcer with epithelial side facing up, associated with the third eyelid flap (n=5) and GIII=implant of amniotic membrane associated with the transplantation of autologous limbal cornealscleral and covering with the third eyelid flap (n=5). The comparative analysis between groups was: complications of the technique used, blepharospasm, ocular secretion, corneal vascularization, epithelial defect and corneal opacification in six moments (first emergency care, surgery and 3, 7, 15 and 30 days of postoperative). It was used a score scale for subjective quantified of the ocular signs. Results: in GI, it was observed the non adherence of the conjunctival graft to the ulcer (n=2), dehiscence of the suture (n=2), anterior synechia (n=2) and intense chemosis (n=1). In GII and GIII, it was not observed these complications. GII and GIII showed epithelial healing in M15 and GI only M30 (p<0,05). The other ophthalmic parameters, the difference was significant between initial and final in the same group (blepharospasm, ocular discharge, vascularization). The corneal scar presented in a more intense, dense and disorganized in GI. Conclusions: According to the clinical results, the cryopreserved amniotic membrane implant or not in association with transplantation of limbo showed to be more effective in the treatment of deep corneal ulcers compared to the 360° conjunctival flap
|
Page generated in 0.1027 seconds