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Propagação in vitro de orquídeas do grupo Cattleya / In vitro propagation of orchids of the Cattleya groupVentura, Gizella Machado 22 March 2002 (has links)
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Previous issue date: 2002-03-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Algumas espécies da família Orchidaceae, como as do gênero Cattleya, possuem elevada importância econômica no mercado florístico, que está em plena expansão. Isto demonstra a necessidade de se disporem de métodos adequados de propagação massal, como a cultura de tecidos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a capacidade morfogênica de algumas espécies de orquídeas do grupo Cattleya, em grande medida, a formação de novas plantas a partir de explantes específicos, cultivados em diferentes meios de cultivo. No primeiro capítulo, foram descritos os ensaios que subsidiaram os experimentos desta pesquisa. Foram utilizados vários tipos de explante, como ápices radiculares de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro, calos originados de protocormóides, formados in vitro, em temperatura elevada, e gemas axilares dianteiras de brotações de plantas adultas de distintas espécies, cultivadas em distintos meios, objetivando verificar as respostas morfogênicas dos citados explantes, bem como formulações e composição dos meios, condições de cultivo e métodos de desinfestação adequados para a condução dos experimentos. No segundo capítulo, foram utilizados segmentos de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro de Brassolaeliocattleya Sun King Orange x Laelia purpurata, cultivados em meios com concentrações variadas de auxina e citocinina, para estabelecer um meio com adequado balanço hormonal. Concluiu-se que para o híbrido utilizado, pode-se recomendar o cultivo em 47 dias, em um meio de cultivo liquído constituído de minerais nutrientes de MS, adicionando 1,24 mg L-1 de BAP e 0,6 mg L-1 de 2,4-D. No terceiro capítulo, foram usados ápices caulinares de brotações e gemas axilares, extraídos de brotações e da base dos pseudobulbos de plantas adultas, objetivando identificar o melhor explante para Laelia lobata Jenni x L. lobata alba. Embora os três tipos de explantes apresentassem alta porcentagem de oxidação, todos mostraram boa capacidade morfogênica, principalmente as gemas axilares de brotações, potencializando uma via promissora para propagação em escala comercial dessa espécie. No quarto capítulo, utilizou-se pedúnculo de inflorescência de Cattleya White Dream, cujas novas estruturas poderiam ser utilizadas para o desenvolvimento de plântulas. Para esse híbrido, discos de pedúnculos de inflorescências não apresentaram respostas morfogênicas, segundo os procedimentos experimentais adotados. Uma vez que para cada espécie ou híbrido foi necessário um protocolo específico para sua propagação in vitro, obtiveram-se, de modo geral, respostas morfogênicas de algumas espécies, formando plântulas completas e, em alguns casos, em grande número. Dada a importância dos cultivos celulares para esta planta, estudos futuros devem ser conduzidos para se testarem outros tipos de explante, outros meios e condições de cultivo, de modo a otimizar o processo de propagação massal. / Some species of the Orchidaceae family, such as those form the Cattleya, have high economic importance in the flower market, which is in clear expansion. This shows the necessity of adequate methods for mass propagation, like tissue culture. The goals of this work are to verify the morphogenic capacity of some orchid species of the Cattleya group, for a great measure, the formation of new plants from specific explants, grown in different culture media. In the first chapter we describe the essays that subsidized the experiments in this thesis. Various kinds of explants were used, such as root tips from seedlings obtained through in vitro seed propagation, callus originated from protocorm-like bodies, formed in vitro under high temperatures, and forward axillary buds from young shoots of adult plants from different species, grown in different media, aiming to verify the morphogenic response of the aforementioned explants, as well as the formulation and composition of the media, growing conditions and adequate de-infestation methods for the execution of the experiments. In the second chapter, segments of seedling obtained through in vitro seed propagation of Brassolaeliocattleya Sun King 'Orange' x Laelia purpurata, grown in media with different concentrations of auxin and cytokinin, were used to establish a medium with adequate hormonal balance. We concluded that for the hybrid used we can recommend the cultivation in 47 days, in a liquid growing medium composed of MS nutritive minerals, adding 1.24 mg L-1 of BAP and 0.6 mg L-1 of 2.4-D. In the third chapter, young shoot tips and axillary buds, extracted from young shoots and from the basis of adult plant pseudobulbs, were used to identify the best explants for Laelia lobata 'Jenni' x L. lobata alba. Although the three kinds of explants showed high percentage of oxidation, all exhibited good morphogenic capacity, specially the young shoot tips, indicating a promising solution for the propagation of that species in commercial scale. In the fourth chapter, we used inflorescence peduncles of Cattleya White Dream, whose formation of new structures could be used for the growing of seedlings. For that hybrid, sections of inflorescence peduncles did not exhibit morphogenic responses according to the experimental proceedings adopted. Considering that for each species or hybrid a specific protocol was necessary for its in vitro propagation, we achieved, in general, morphogenic responses from some species, forming complete seedlings and, in some cases, in large numbers. Given the importance of cellular cultivation for that plant, future studies must be conducted to test other kinds of explants, other media and growing conditions, in order to optimize the process of mass propagation.
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Morfogênese in vitro e transformação genética da Alfavaca (Ocimum selloi Benth) / In vitro morphogenesis and genetic transformation of Alfavaca (Ocimum selloi Benth)Amaral, Cláudio Lúcio Fernandes 27 March 2001 (has links)
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Previous issue date: 2001-03-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram estudados alguns fatores que influenciam a organogênese, bem como a regeneração in vitro desta espécie, visando fornecer subsídios à transformação genética. Analisando-se o efeito de concentrações de BAP na indução de multibrotações em segmentos caulinares nodais de O. selloi cultivados in vitro, evidenciou-se que quanto maior a concentração de BAP, tanto menor foi o comprimento dos brotos, porém maior o número de brotos. Menores concentrações de BAP relacionam-se a maiores pesos de matéria seca dos brotos. Estudando-se o efeito de concentrações de sacarose e sais no cultivo in vitro de segmentos caulinares nodais de O. selloi constatou-se que a concentração de 100 % de sais do meio MS combinada com a concentração 2 % de sacarose foi a melhor na propagação in vitro de O. selloi, em razão de se ter obtido brotos mais longos e com raízes grandes, resultando em maior peso do material vegetal. Observando-se o efeito de concentrações de ANA e BAP e da posição dos explantes na indução de organogênese in vitro em segmentos caulinares internodais de O. selloi verificou-se que o primeiro, o segundo e o terceiro segmentos caulinares internodais apresentaram, em meio de cultivo -1 -1 complementado com 1,00 mg L de ANA e 0,25 mg L de BAP, freqüência de calogênese de 60,00%, 50,00% e 60,00%, respectivamente. O primeiro, o segundo e o terceiro segmento caulinar internodal apresentaram, respectivamente, freqüência de organogênese de 93,33%, 73,33% e 73,33%, média de órgãos produzidos de 2,80, 1,80 e 1,80 e eficiência de organogênese de 2,60, 1,32 e 1,32 em meio de cultivo suplementado com 0,10 mg L -1 de ANA e 1,00 mg L -1 de BAP. Verificando-se o efeito de concentrações de ANA na indução do enraizamento em brotos de O. selloi, obtidos a partir de segmentos caulinares internodais cultivados in vitro, evidenciou-se que tanto o número de raízes quanto o comprimento de raízes foram crescentes à medida que elevou-se a concentração de ANA de 0,0 a 1,0 mg L -1 . Avaliando-se o efeito de agentes gelificantes na indução de organogênese em segmentos caulinares internodais de O. selloi cultivados in vitro, averigou-se que o primeiro segmento caulinar internodal comportou-se melhor na indução de brotos comparado ao segundo segmento caulinar internodal e combinado ao Phytagel - “Sigma” foi superior ao associado com Agar - “Merck”. O uso de higromicina com timentin foi mais eficiente que o de canamicina com timentin para a seleção de regenerantes, pois para inibir a organogênese usou-se 10 mg L -1 de higromicina com 300 mg L -1 de timentin e 100 mg L -1 de canamicina com 300 mg L -1 timentin. A freqüência de regeneração de brotos em meio seletivo contendo higromicina e timentin foi de 0,5%, enquanto que a de canamicina e timentin foi de 1,0%. Conclui-se que não foi possível obter plantas transgênicas, pois a transformação genética não foi mostrada pelo teste Gus, nem confirmada por PCR. / Some factors that influence the organogenesis have been studied, as well as the regeneration in vitro of this species, with the aim of providing a basis for genetic transformation. By analysing the effect of BAP concentrations in the induction of multishooting in nodal stem segments of O. selloi cultivated in vitro, it has become clear that the higher the BAP concentration, the shorter the shoots were, though they were in a larger number. A lower concentration of BAP is related to a higher amount of dry matter in the shoots. By studying the effect of sucrose and salt concentrations in the cultivation in vitro of nodal stem segments of O. selloi, it has been observed that the concentration of 100% of salt in a MS medium combined to a concentration of 2% of sucrose was the best one for the in vitro propagation of O. selloi , since the shoots obtained were longer and deeper-rooted, resulting in a larger amount of vegetal matter. By observing the effect of NAA and BAP concentrations and the position of explants in the induction of the organogenesis in vitro of the internodal stem segments of O. selloi, it has been verified that the first, second and third internodal stem segments presented a calogenesis frequency of 60,00 %, 50,00% and 60,00% respectively in a medium of cultivation supplemented with 1,00 mg L -1 and 0,25 mg L -1 of NAA of BAP. The first, the second and the third internodal stem segments presented organogenesis frequency of 93,33%, 73,33% and 73,33%, respectively, an average of organs produced of 2,80, 1,80 and 1,80 and organogenesis efficacy of 2,60, 1,32 and 1,32 in a medium of cultivation supplemented with 0,10 mg L -1 of NAA and 1,00 mg L -1 of BAP. By analysing the effect of NAA concentrations in the induction of rooting in O. selloi shoots, obtained from internodal stem segments cultivated in vitro, it has become clear that both the number of roots and their length grew as the concentration of NAA was increased from 0,0 to 1,0 mg L -1 . By evaluating the effect of gelling agents in the induction of organogenesis in internodal stem segments of O. selloi cultivated in vitro, it has been verified that the first internodal stem segment reacted best in the induction of shoots as compared to the second internodal stem segment, and, combined to Phytagel - “Sigma”, it was better than that associated to Agar - “Merck”. The use of hygromycin combined with timetin was more effective than the use of kanamycin combined with timetin for the selection of the regenerants, since it was used 10 mg L -1 of hygromycin combined to 300 mg L -1 of timetin and 100 mg L -1 of kanamycin combined with 300 mg L -1 of timetin. The frequency of the regeneration of the shoots in a selective medium containing hygromycin and timetin was of 0,5%, whereas that of kanamycin and timetin was of 1,0%. The conclusion was that it is not possible to obtain transgenetic plants, since the genetic transformation has not been shown by the GUS test, neither confirmed by PCR.
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Produção de microestacas de clones híbridos de Eucalyptus spp. pela micropropagação / Micro- cuttings production of Eucalyptus spp. hybrid clones via micropropagationGallo, Ricardo 10 December 2014 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-01T10:00:40Z
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Previous issue date: 2014-12-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho visou avaliar a produção de microestacas obtidas pela micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus spp., tendo como objetivos específicos avaliar: 1) o efeito de doses de AIB e de coletas sucessivas de microestacas em tufos de gemas em multiplicação na micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus grandis x E.urophylla e Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via tufos de gemas axilares em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, em diferentes recipientes e substratos; 3) o efeito de trocas gasosas e concentrações de sacarose na produção de microestacas oriundas da micropropagação via proliferação de gemas axilares em Eucalyptus grandis x E. urophylla; e 4) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via microcepas em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, considerando-se posições de origem das microcepas, densidades de microcepas, qualidades de luz e de substratos. O material experimental utilizado neste trabalho foi proveniente da fase de multiplicação in vitro de um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla e de um clone de Eucalyptus urophylla x E. globulus, com 25 e 72 subcultivos, respectivamente. Os experimentos in vitro foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos II do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO), da Universidade Federal de Viçosa (UFV), localizado no município de Viçosa/MG, e os experimentos ex vitro foram conduzidos no Viveiro de Pesquisas do Departamento de Engenharia Florestal da UFV. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: 1) as microestacas in vitro apresentaram boa produção no decorrer das coletas sucessivas, bem como foram ajustados os níveis de AIB para cada clone, variando de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,75 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; nas condições ex vitro, a dosagem de AIB apresentou efeito residual, proporcionando bom enraizamento e sobrevivência nas dosagens de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,50 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) o melhor recipiente para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, é o pote de polipropileno (500 mL); no entanto, quando se deseja maior produção por m 2, o frasco de vidro (250 mL) é mais vantajoso diante da melhor possibilidade de adensamento; os melhores substratos para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, utilizando o recipiente Agripot ®, são o ágar ou a vermiculita; 3) a redução para 15 g L-1 de sacarose apresenta os melhores resultados; o sistema com troca gasosa atua negativamente no comprimento da maior microestaca; os tratamentos realizados in vitro apresentam efeito residual ex vitro, melhorando a sobrevivência das mudas durante todo seu processo de formação; 4) as microcepas oriundas de segmentos nodais basais de microestacas proporcionaram maior número de brotos bem como maior enraizamento; a densidade de três ou quatro microcepas por recipiente proporcionou os melhores resultados, e a iluminação 4 LEDs proporcionou maior vigor para as microestacas; o uso de ágar ou vermiculita apresentou as maiores médias para as características analisadas, porém o uso de ágar proporcionou baixas porcentagens de enraizamento. / This paper aimed to evaluate the micro-cuttings production obtained by the micropropagation of Eucalyptus spp. hybrid clones, with the following evaluations as specific objectives: 1) effect of IBA doses and successive collections of micro- cuttings on bud stumps in the micropropagation of Eucalyptus grandis x E.urophylla and Eucalyptus urophylla x E. globulus hybrid clones; 2) micro-cuttings productivity in micropropagation system via stumps of axillary buds in a Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, in different types of containers and substrates; 3) effect of gas exchange and sucrose concentrations on the micro-cuttings productivity in micropropagation system via axillary bud proliferation in Eucalyptus grandis x E. urophylla; and 4) micro-cuttings productivity in micropropagation system via micro- stumps on Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, considering micro-stumps origin position, micro-stumps density, light quality and substrates. The experimental material used in this work derived from the in vitro multiplication phase of one Eucalyptus grandis x E. urophylla clone and one Eucalyptus urophylla x E. globulus clone, with 25 and 72 subcultures, respectively. The experiments were carried out at the Plant Tissue Laboratory, Institute of Biotechnology Applied to Agriculture (BIOAGRO), Federal University of Viçosa, Viçosa/MG. Based on the results it may be concluded that: 1) in vitro, micro-cutting showed high yield after successive harvesting, as well as the IBA levels for each clone were adjusted, varying from 0.25 to 0.50 mg L-1 of IBA in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, from 0.25 to 0.50 mg L-1 in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.75 to 1,0 mg L-1in the Eucalyptus urophylla x E. globulusclone; in ex vitro conditions the IBA dosage showed residual effect providing high rooting and survival, as well as other morphological parameters in dosages from 0.25 to 0.50 mg L-1in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.50 to 1.0 mg L-1 in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone; 2) the polypropylene pot (500 mL) was the best container for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, however, for increase the productivity per m2, the glass flask (250 mL) are more favorable due to the best fit on the shelves. The agar and vermiculite were the best substrates for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, using the container Agripot TM; 3) the reduction to 15 g L-1 sucrose provides the best results; the gas exchange system acts negatively on the length of the highest micro- cutting; and in vitro, treatments showed ex vitro residual effect, actively acting in the plantlets survival throughout their development process; 4) The micro-stumps originated from micro-cuttings basal nodal segments provide more shoots and roots; the density of three or four micro-stumps per container provided the best results and the 4 LEDs lighting provided more vigorous micro-cuttings; the use of agar or vermiculite showed the highest means for the evaluated parameters, however, the use of agar provided low rooting percentages.
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Amarelecimento do palmito de pupunha (Bactris gasipaes kunth) minimamente processado conservado sob refrigeração / Yellowing of peach palm (Bactris gasipaes Kunth) minimally processed stored under cold storageFonseca, Kelem Silva 25 February 2016 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-03T09:51:23Z
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Previous issue date: 2016-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O palmito de pupunha (Bactris gasipaes Kunth) é o mais indicado para o processamento mínimo, pois não apresenta escurecimento enzimático. No entanto, outros fatores podem resultar em alterações e mudança da cor dos tecidos. Objetivou- se com este trabalho caracterizar a(s) possível (eis) causa(s) do amarelecimento superficial das regiões mediana e basal de hastes de palmito de pupunha minimamente processadas e conservadas sob refrigeração. Essa investigação foi realizada em quatro etapas: Etapa 1- Foi avaliado o efeito de duas concentrações de cloro ativo, 20 e 200 mg L -1 , sobre a intensificação do amarelecimento superficial dos tecidos das regiões mediana e basal da haste de palmito de pupunha; Etapa 2- O conteúdo de compostos fenólicos foi quantificado na bainha externa e raque da região mediana e nas regiões externa e interna da região basal durante a conservação refrigerada; Etapa 3: Avaliou-se o efeito de injúrias mecânicas sobre alterações na cor e qualidade dos tecidos das regiões mediana e basal e Etapa 4- Alterações metabólicas dos tecidos das regiões mediana e basal foram acompanhadas durante o período de refrigeração. Em todas as etapas foi realizado o processamento mínimo das hastes de palmito, com algumas modificações quando necessário: lavagem e retirada das bainhas de proteção, corte (separação das regiões mediana e basal), sanitização, drenagem e embalagem. As regiões foram conservadas a 5 oC, por 12 dias. Observou-se que os tecidos das regiões mediana e basal apresentaram coloração amarelada durante 12 dias de conservação refrigerada. No entanto, esse amarelecimento superficial não ocorreu de maneira homogênea nos tecidos. Além disso, as alterações na cor original dos tecidos não se correlacionaram negativamente com as concentrações de cloro ativo utilizadas, bem como não foi observado aumento do teor de compostos fenólicos após o período de refrigeração. Verificou-se diferença qualitativa na organização das camadas de tecidos fundamentais e de revestimento do palmito que podem influenciar a cor superficial dos tecidos. Observou-se alterações no perfil de metabólitos durante a conservação refrigerada. Em resumo, os resultados sugerem que o amarelecimento superficial dos tecidos pode ser causado por uma interação dos fatores estudados. Ademais, outros fatores tais como pré-colheita, estado hídrico da planta e condições climáticas de cultivo poderiam atuar no amarelecimento superficial dos tecidos. / Palm of peach palm (Bactris gasipaes Kunth) is the most suitable for the minimal processing because does not display enzymatic browning. However, other factors may lead to changes and color variation in the tissues. This study aimed to identify the possible causes of superficial yellowing of the median and basal regions of peach palm stems minimally processed and stored under refrigeration. This research was conducted in four stages: Stage 1- The effect of two active chlorine concentrations, 20 and 200 mg L -1 on improving the superficial yellowing of tissues median and basal regions of the peach palm stem; Stage 2- The content of phenolic compounds was quantified in the outer sheath and rachis of the median region and the outer and inner regions of the basal region during cold storage; Stage 3: It was evaluated the effect of mechanical injuries on changes in the color and quality of tissues from the median and basal regions and Stage 4- Metabolic changes of the tissues of the median and basal regions were accompanied during the cooling period. At every stage we performed the minimal processing of palm stems, with some modifications as needed: washing and removal of the protective sheaths, cutting (separating the median and basal regions), sanitization, drainage and packaging. The regions were stored at 5 °C for 12 days. It was observed that the tissues of the median and basal regions showed yellowing after 12 days of cold storage. However, this superficial yellowing did not occur evenly in the tissue. In addition, changes in the original color of the tissues were not associated negatively with the active chlorine concentrations and was not observed increased content of phenolic compounds after cold storage period. It is qualitative difference in the organization of the layers of core and coating material tissue's palm that can influence the color of the surface tissues. Observed changes in metabolite profile during cold storage. In summary, the results suggest that the surface yellowing of the fabrics can be caused by an interaction of the factors studied. In addition, other factors such as pre-harvest water status of the plant and climatic growing conditions could impact surface yellowing of tissues.
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Regulação do promotor de GmNAC081 durante o desenvolvimento de Nicotiana tabacum e em resposta a estresses abióticos / GmNAC081 promoter regulation in response to abiotic stresses and during development of Nicotiana tabacumAlves, Janaína Roberta 22 September 2014 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T10:20:44Z
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Previous issue date: 2014-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os membros da família de fatores de transcrição NAC (acrônimo de NAM, ATAF e CUC) são específicos de plantas e são conhecidos por atuarem tanto no desenvolvimento quanto na regulação da resposta a estresse. Dentre os genes NAC envolvidos em respostas contras estresses bióticos e abióticos já identificados em soja (Pinheiro et al., 2009, Le et al., 2011),o gene GmNAC081 é induzido pela expressão de NRPs (Faria et al., 2011) e por diferentes condições de estresses fisiológicos (Pinheiro et al., 2009) portanto, é possível que elementos em cis presentes no seu promotor promovam a integração de diferentes sinais que resultem em morte celular mediada por GmNAC081.A presente investigação teve como objetivos principais confirmar a presença de domínios discretos no promotor do gene GmNAC081 responsivos a estresses osmótico, induzido por PEG, e do retículo endoplasmático, induzido por tunicamicina e avaliar a expressão basal e tecido- específica do promotor em condições de cultivo in vitro e em casa de vegetação. Além disso, foi avaliado a atividade do promotor GmNAC081 durante o desenvolvimento. Para isso, foram utilizadas plantas transgênicas contendo o promotor GmNAC081 na extensão de 1000 pb, 750 pb e 500 bp fusionadas ao gene repórter GUS. Análises fluorimétricas quantitativas de GUS revelaram a presença de elementos em cis responsivos a PEG na regiao contida pelas posições -1000 a -750. Pelo menos dois elementos responsivos a tunicamincina devem estar contidos nas regioes -1000 a -750 e -750 a -500. Os resultados da presente investigação revelaram que a atividade do promotor de 1000pb de GmNAC081 está relacionada às condições de cultivo de plantas trangênicas de Nicotiana tabacum, sendo fortemente induzido durante a senescência. Estes resultados foram confirmados por meio de análises histoquímicas. De fato, a região 5’ de -1000pb que flanqueia o gene GmNAC081 é induzível por estresses osmótico e do retículo endoplasmático em diferentes orgãos e tecidos (Rosado, 2012). As sequências de 1000pb do promotor de GmNAC081 foram capazes de direcionar a expressão de GUS no tecido vascular em plantas cultivadas in vitro. Além disso, as análises histoquímicas de atividade de GUS confirmaram que o promotor de GmNAC081 é fortemente induzido em tecidos em estádios avançados de desenvolvimento. Coletivamente, estes resultados demonstram que a inducão do gene GmNAC081 por estresses e durante a senescência ocorre no nível transcricional por meio de elementos cis-regulatórios presentes em regiões discretas do promotor. Além disso, os resultados de atividade do promotor GmNAC081 substanciam o argumento de que GmNAC081 esteja envolvido em resposta a estresse e no processo de senescência natural. / The members of the NAC (NAM, ATAF and CUC acronyms) family are plant- specific transcriptional factors, which are involved in development and stress responses. Among the abiotic and biotic stress response NAC genes already identified in soybean, GmNAC081 is induced by NRP expression and different conditions of physiological stresses; hence it is possible that cis-regulatory elements on its promoter cause the integration of different stimuli that result in GmNAC081 mediated cell death. The present investigation aimed at confirming the presence of discrete domains on the GmNAC081 promoter, which are responsive to osmotic stress, induced by PEG, and endoplasmic reticulum stress, induced by tunicamycin as well as at evaluating the basal and tissue-specific expression of the promoter under in vitro and greenhouse growth conditions. In addition, the GmNAC081 promoter activity was evaluated during development under greenhouse conditions. For this, we used transgenic plants harboring different extensions (up to positions -1000, -750 and -500) of the GmNAC081 promoter fused to the GUS reporter gene. Quantitative fluorometric analyses of GUS revealed the presence of cis-elements responsive to PEG in the region delimitated by the positions -1000 to -750. At least two responsive cis-elements to tunicamycin may be present in the regions -1000 to -750 and -750 to -500. The results of the present investigation also revealed that the GmNAC081 promoter (1000bp) activity is related to the cultivation conditions of Nicotiana tabacum transgenic plants and it is strongly induced during natural senescence. These results were further confirmed through histochemical analyses. In fact, the 1000-bp 5’ flanking sequences of GmNAC081 is induced by osmotic stress and reticulum endoplasmic stress in different organs and tissues. The 1000-bp sequences of the GmNAC081 promoter were capable of directing GUS expression in the vascular tissue of in vitro cultivated plants. Furthermore, the histochemical analyses of GUS activity confirmed a strong induction of the GmNAC081 promoter in tissues under advanced stages of development. Taken together, these results demonstrate that the induction of GmNAC081 expression by stresses and during senescence occurs at the transcriptional level through positive cis-regulatory elements presents in discrete regions of the promoter. In addition, the pattern of the GmNAC081 promoter activity substantiates the argument that GmNAC081 is involved in the process of natural senescence.
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Filtrado de culturas de Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae e ácido fusárico na seleção in vitro de maracujazeiro amarelo / Filtrate of the Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae cultures and the fusaric acid in the in vitro selection of the yellow passionfruit plantFlores, Patrícia Silva 26 August 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Apesar de o Brasil ser o maior produtor mundial de maracujá, a produtividade nacional é muito baixa. A incidência de várias doenças nos pomares de maracujá, aliada à inexistência de cultivares resistentes, tem contribuído para a redução da área plantada. Dentre as doenças que afetam a cultura, destaca-se a murcha de Fusarium que é causada pelo fungo Fusarium oxysporum. A seleção in vitro de plantas resistentes a espécies de Fusarium utilizando toxinas fúngicas como agentes seletivos tem sido descrita com êxito para várias espécies. Assim, no presente trabalho foram realizadas adaptações das metodologias de seleção in vitro utilizadas em outras espécies para obtenção de plantas de maracujazeiro-amarelo insensíveis à fusariose. Para tanto, foram estabelecidos protocolos para a micropropagação de plantas do maracujazeiro-amarelo através de explantes de segmentos nodais utilizando-se doses de BAP (1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1) e água de coco (0, 5 e 10 % v/v) suplementados ao meio de cultura MS. Foram avaliados os efeitos de doses de ácido fusárico na germinação de sementes (0; 0,10; 0,20; 0,30 e 0,40 mM) e no desenvolvimento de plantas (0,0; 0,10; 0,20 e 0,30 mM), in vitro. As plantas insensíveis ao ácido fusárico selecionadas foram então submetidas a doses do filtrado de um isolado do fungo (0, 20, 30, 40 ou 50 % (v/v)) para verificação da correlação das reações das plantas aos dois agentes seletivos. Após, as plantas selecionadas foram transferidas para substrato composto de areia autoclavada contendo a suspensão de esporos do fungo e mantidas em câmara de crescimento para avaliação da resistência das plantas in vivo. Foram testadas também doses de radiação gama (0, 10, 15, 20, 25, 30, 45 e 60 Gy) para obtenção de variantes em segmentos nodais de P. edulis f. flavicarpa sob condições in vitro e analisados os efeitos da radiação sobre o incremento da resistência de P. edulis f. flavicarpa ao fungo. O meio de cultura suplementado com 1 mgL-1 de BAP foi o mais adequado para a micropropagação de plantas de Passiflora edulis f. flavicarpa a partir de explantes de segmentos nodais. O ácido fusárico e o filtrado da cultura fúngica foram eficientes na seleção de genótipos de maracujazeiro-amarelo insensíveis ao fungo. Recomenda-se a dose de radiação gama de 20 Gy para obtenção de variantes mutantes de maracujazeiro-amarelo a partir de segmentos nodais. Através da radiação com raios gama foi possível obter plantas de maracujazeiro-amarelo insensíveis às toxinas de Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae, in vitro. / Although Brazil is the largest producer of passionfruit in world, the national productivity is very low. The incidence of several diseases in the passion fruit orchards, as well as the inexistence of resistant cultivars have been contributing for reduction in the planted area. Among the diseases affecting the crop, the Fusarium wilting caused by the Fusarium oxysporum fungus is distinguished. The in vitro selection of plants that are resistant to Fusarium species, by using fungous toxins as selective agents has been successfully described for several species. So, some adaptations were accomplished in the in vitro selection methodologies used in other species for obtainment of the yellow passionfruit plants that are tolerant to fusariosis. So, protocols for the micropropagation of the yellow passionfruit plants through explants of nodal segments, by using some BAP doses (1.0; 1.5 and 2.0 mg L-1) and coconut water (0, 5 and 10% v/v) supplemented to the MS culture medium. The effects of the fusaric acid doses (0,0; 0,10; 0,20 and 0,30mM) were evaluated either on seed germination and the plant development in vitro. Then, the selected plants that were tolerant to the fusaric acid were submitted to filtrate doses of one isolate of the fungus (0, 20, 30, 40 or 50% (v/v)) in order to verify the correlation of the plant reactions to both selective agents. Following, the selected plants were transferred to the substratum composed by autoclaved sand containing the suspension of the fungus spores and were kept in growth chamber for evaluation of the resistance of the plants in vivo. The gamma-radiation doses (0, 10, 15, 20, 25, 30, 45 and 60 Gy) were also tested for obtaining the variants in nodal segments of P. edulis f. flavicarpa under in vitro conditions, and the effects from radiation on the increase of the P. edulis f. flavicarpa resistance to the fungus. The culture medium supplemented with 1 mgL-1 BAP was most appropriate to micropropagation of the Passiflora edulis f. flavicarpa plants from the explants of nodal segments. The fusaric acid and the fungus culture filtrate were efficient in selecting the yellow passionfruit genotypes that were insensible to the fungus. The gamma radiation dose of 20 Gy is recommended for obtaining the mutants of the yellow passionfruit mutants from the nodal segments. Through radiation with gamma rays, it was possible to obtaining in vitro the yellow passionfruit plants that were insensible to the toxins of Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae.
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Propagação in vitro de orquídeas sem a utilização de câmara de fluxo laminar / In vitro propagation of orchids without using laminar flowRodrigues, Donizetti Tomaz 22 December 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-12-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Há uma grande demanda por técnicas de laboratório mais simples e de menor custo e por procedimentos mais acessíveis a orquidófilos que não têm o embasamento teórico necessário à utilização de métodos usuais de produção seminífera e clonal de orquídeas in vitro. Neste trabalho, três experimentos foram conduzidos com os objetivos de avaliar a desinfestação química com hipoclorito de sódio (NaClO) de sementes e de tecidos de orquídeas para a produção de mudas in vitro, e testar a utilização de seringa descartável para o cultivo de tecidos, de modo a dispensar, em todos os casos, o uso de câmara de fluxo laminar. No primeiro experimento, sementes de Cattleya intermedia foram tratadas com seis concentrações de NaClO, variando de 1,2 a 4.800 mg L-1 de NaClO e semeadas utilizando-se dois métodos de cultivo: inoculação de sementes em frascos via seringa descartável, através de um furo em tampa de frascos de vidro, ou, abrindo-se o frasco, retirando-se a tampa, e colocando as sementes sobre o meio. Em ambos os métodos, as sementes foram inoculadas via 2 mL de suspensão semente-NaClO. Estes métodos foram comparados com o tradicional (controle), conduzido em câmara de fluxo laminar; com as sementes previamente desinfestadas com NaClO na concentração de 2.400 mg L -1 , corresponde a 100 mL L -1 de água sanitária comercial (ASC), e enxaguadas em H 2 O, mas sem a aplicação de NaClO aos meios nos frascos com as sementes. No segundo experimento, estudou-se a eficiência de concentrações de NaClO, variando de 1.200 a 6.000 mg L -1 (50 a 250 mL L -1 de ASC) aplicadas nos meios de cultura, na ausência ou presença de carvão ativado, em comparação à utilização de câmara de fluxo laminar sem a aplicação, neste caso, de NaClO nos meios, com os tecidos (explantes). Foram utilizados explantes de duas espécies de orquídeas: Arundina bambusifolia e Epidendrum ibaguenses. No terceiro experimento, estudou-se a utilização de seringa descartável, em substituição à câmara de fluxo laminar, utilizando três meios (MS1/2, GB5 e VW) e duas concentrações de três reguladores de crescimento (TDZ, ANA e BAP), para a obtenção de mudas de Phalaenopis spp. e de um híbrido de Dendrobium nobile, via cultura de tecidos. Como tratamento controle, utlizou-se o meio MS1/2 com 1,0 mg L -1 de TDZ em tubos de ensaio, com os explantes cultivados em condições normais, utilizando-se de câmara de fluxo. Não houve contaminação dos meios de cultura inoculados com a suspensão semente – NaClO. A presença do NaClO nas menores concentrações promoveu maior taxa de germinação e crescimento das plantas, em relação à sua não utilização (tratamento controle). A câmara de fluxo laminar mostrou-se desnecessária em relação à desinfestação feita com NaClO no meio de cultura. A aplicação de NaClO sobre o meio de cultura inoculado com os tecidos das plantas promoveu eficiente controle da contaminação. As maiores concentrações de NaClO causaram redução no crescimento das plantas. O uso de carvão ativado promoveu melhores resultados em termos de produção de plantas mas, por outro lado, a contaminação foi maior em sua presença. A utilização de seringa descartável mostrou-se viável para a propagação vegetativa das plantas. Embora, com alguns efeitos médios significativos, a diferença entre meios de cultura, reguladores de crescimento e suas concentrações apresentaram tendência geral para a similaridade dos dados de crescimento das plantas, evidenciando a possível simplificação dos procedimentos de desinfestação e cultivo. / There is a great demand for simpler and less costly laboratory techniques and for more accessible procedures for orchid breeders who do not have the necessary theoretical basis to use the traditional seed and clone production methods of orchids in vitro. In this study, three experiments were conducted with the purpose of evaluating chemical disinfection with sodium hypochlorite (NaClO) of orchid seeds and tissues for seedling production in vitro, and to test the use of disposable syringes for tissue culture, to dispense with the use of laminar flow in all cases. In the first experiment, seeds of Cattleya intermedia were treated with six NaClO concentrations between 1.2 and 4,800 mg L -1 NaCl, seeded by two methods: seed inoculation in glass jars with a disposable syringe through a hole in the lid, or by opening the jar, removing the lid, and placing the seeds on the medium. In both methods, seeds were inoculated in 2 mL seed – NaClO suspension. These methods were compared with the traditional (control) method, using laminar flow. After previous disinfection with NaClO at a concentration of 2400 mg L -1 , corresponding to 100 mL L -1 commercial bleach (CB), the seeds were rinsed in H 2 O, but without NaClO application to the media in the jars with the seeds. In the second experiment the effectiveness of NaCl concentrations between 1200 and 6,000 mg L -1 (50–250 mL L -1 CB) for the tissues (explants) was tested, applied to culture media in the absence or presence of activated carbon, in comparison with the use of laminar flow without the NaClO application to the media. Explants of two orchid species, Arundina bambusifolia and Epidendrum ibaguenses, were used. The third experiment tested the use of disposable syringes, instead of laminar flow, in three media (MS1/2, GB5 and VW) and with two concentrations of three growth regulators (TDZ, NAA and BAP) for obtaining Phalaenopis spp. seedlings and a Dendrobium nobile hybrid by tissue culture. In the control treatment, the MS1/2 medium was used with 1.0 mg L -1 TDZ in test tubes, and the explants were cultured under normal conditions, using a flow chamber. No contamination was observed in the culture media inoculated with seed – NaClO suspension. At low NaClO concentrations the germination and plant growth rates were higher than in absence of NaClO (control). In comparison, it was found that the application of NaClO dispensed with the use of laminar flow. The contamination control with NaClO application to the culture medium inoculated with the plant tissues was efficient. The highest NaClO concentrations resulted in reduced plant growth. The use of activated carbon led to the best results in terms of plant production while on the other hand, contamination was higher in their presence. The use of disposable syringes was feasible for the vegetative propagation of plants. However, with some significant mean effects, the difference between culture media, growth regulators and their concentrations generally tended to data similarity regarding plant growth, suggesting a possible simplification of the sterilization and cultivation procedures.
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Desenvolvimento de protocolo para o cultivo de células-tronco em biorreatores de perfusão para a engenharia de tecidosChiot, Bruna Favassa January 2015 (has links)
A engenharia de tecidos é uma área de pesquisa que busca alternativas para a regeneração de tecidos danificados. Uma subárea dessa nova ciência faz uso das células-tronco, capazes de participar do processo de regeneração tecidual. As células são cultivadas em suportes porosos chamados de biomateriais ou scaffolds. As células-tronco mesenquimais de polpa de dente são células multipotentes e fáceis de serem obtidas. A policaprolactona, polímero atóxico, tem sido vastamente utilizada na fabricação de scaffolds devido as suas propriedades mecânicas, adequadas para a regeneração de alguns tecidos. A cultura dinâmica em biorreatores vem sendo utilizada pela sua capacidade de mimetizar as condições do ambiente natural das células-tronco no organismo humano. O objetivo do presente trabalho foi definir um protocolo de cultivo de células-tronco mesenquimais da polpa de dente em scaffolds de policaprolactona em multicamada, utilizando biorreatores de perfusão. Os biorreatores foram projetados com base em informações presentes na literatura. Os scaffolds de policaprolactona foram produzidos por electrospinning e apresentaram um diâmetro de 15 mm, aproximadamente 300 μm de espessura e diâmetro médio das fibras de 0,98 ± 0,24 μm. O cultivo estático, para fins de comparação, foi realizado em triplicata. Para o cultivo dinâmico, analisaram-se 3 diferentes vazões: 0,1 mL.min-1, 0,08 mL.min-1 e 0,05 mL.min-1. Nos dias 1, 3 e 7 de cultivo celular as análises de viabilidade celular foram realizadas pelo ensaio de WST-8, a citotoxicidade pela dosagem de LDH e de adesão celular pela histologia.. As células cultivadas nos scaffolds do topo da estrutura em camadas apresentaram maior viabilidade celular para as vazões de 0,1 e 0,08 mL.min-1 entre os dias 1 e 7 do cultivo celular. O cultivo dinâmico realizado na vazão de 0,05 mL.min-1 obteve um número baixo de células viáveis em todos os dias de análise. No cultivo estático, a viabilidade celular aumentou do primeiro ao sétimo dia de cultivo, mas permaneceu abaixo da maior vazão testada. As análises de histologia confirmaram a presença de células nas superfícies dos scaffolds. Os níveis maiores de citotoxicidade foram encontrados para o cultivo dinâmico, principalmente para a vazão de 0,1 mL.min-1, bem como foi observada maior viabilidade celular para essa vazão. Ainda é necessário repetir ambos os cultivos para confirmar os resultados e validar o protocolo definido para os experimentos. No entanto, no cultivo dinâmico, a vazão de 0,1 mL.min-1 proporcionou resultados promissores para o sistema de perfusão utilizado, podendo comprovar as vantagens do cultivo dinâmico de células-tronco para a medicina regenerativa. / Tissue engineering is an area of research which seeks for alternatives for the regeneration of damaged tissue. A sub-area of this new science uses stem cells, which are able to participate in the process of tissue regeneration. The cells are cultivated in porous supports called biomaterials or scaffolds. The mesenchymal stem cells from teeth pulp are multipotent cells and are easily obtained. Polycaprolactone, an atoxic polymer, has been extensively used in the production of scaffolds, due to its mechanical properties which are suitable for the regeneration of certain types of tissue. The dynamic cultivation using bioreactors is currently used because of its capacity to immitate the conditions of the natural environment of stem cells in the human organism. The aim of the present study has been to define a protocol for the cultivation of mensechymal stem cells from teeth pulp in multi-layered polycaprolactone scaffolds in perfusion bioreactors. The bioreactors were designed based on current information available in the literature. The polycaprolactone scaffolds were produced by electrospinning and had a diameter of 15 mm, with approximately 300 μm thickness and an average fiber diameter of 0.98 ± 0.24 μm. The static cultivation for use as a comparison was carried out in triplicate. Three different flow rates were analyzed for cellular cultivation: 0.1 mL.min-1, 0.08 mL.min-1 and 0.05 mL.min-1. The cellular viability analyses were carried out by WST-8 assay, cytotoxicity through an LDH dosage and cellular adhesion by histology on days 1, 3 and 7 of the cellular cultivation. The cultivated cells on the scaffolds, which were above the structure in layers, presented greater cellular viability when the flow rates 0.1 and 0.08 mL.min-1 were used, between days 1 and 7 of the cellular cultivation. When the flow rate of 0.05 mL.min-1 was used in the dynamic cultivation, the lowest number of viable cells in all the days of the analyses was observed. In the static cultivation, cellular viability increased between the first and seventh day of cultivation but remained lower than the dynamic cultivation with the higher flow rate tested. The histological analyses confirmed the presence of cells on the surface of the scaffolds. Both the greatest levels of cytotoxicity and cellular viability were observed in the dynamic cultivation, mainly with the flow rate of 0.1 mL.min-1. It is necessary to repeat both the cultivations to confirm the results and to test the efficiency of the protocol defined by the experiments. However, in the dynamic cultivation, the flow rate of 0.1 mL.min-1 presented promising results for the perfusion system of this study, showing the advantages of the dynamic cultivation of stem cells for regenerative medicine.
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Comparação das propriedades mecânicas iniciais de 4 métodos de fixação de tendão ao ossoCaputo, Guilherme Velho January 2008 (has links)
Objetivos. Comparar a resistência à tração de 4 métodos de fixação de tendão ao osso, sendo 3 deles passíveis de utilização em pacientes esqueleticamente imaturos. Método. Foram utilizados 40 espécimes ovinos, fêmures e tendões, que foram divididos em 4 grupos: arruela denteada de Titânio (AT), arruela óssea (AO), arruela denteada de Polietileno (AP) e parafuso de Interferência (PI). Cada método de fixação foi submetido a testes de tração com ciclo único, realizados com um dispositivo marca Kratos modelo K-1000, até a falência. Foram obtidas 3 variáveis: carga máxima, carga convergente e rigidez. Na análise estatística, foi usado ANOVA para análise de variâncias e teste Tukey para comparação entre as médias dos grupos. Resultados. Para todas variáveis medidas, o grupo PI apresentou resistência estatisticamente menor do que os 3 outros grupos. O grupo AT apresentou maior média, seguido pelo grupo AP e AO, respectivamente, com diferença estatisticamente significativa somente entre os grupos AT e AO. Conclusão. Os métodos de fixação que podem ser utilizados em pacientes esqueleticamente imaturos, grupos AO, AT e AP, apresentaram resistência à tração estatisticamente superior ao grupo PI.
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Aspectos bioéticos envolvidos na obtenção de órgãos para transplantes : a questão do mercado órgãosAndrade, Daniela Alves Pereira de January 2014 (has links)
O tempo de espera para obtenção de órgão para transplante constitui-se num grande problema na área da saúde em todo o mundo. O número de doadores voluntários não cresce na mesma medida da necessidade de órgãos. Diante deste quadro, surgiu um mercado ilícito de órgãos, em que os compradores e intermediadores se dirigirem aos países onde há uma porcentagem grande de população vulnerável, objetivando adquirir órgãos de indivíduos vivos, mediante pagamento. Neste contexto, esta pesquisa buscou avaliar e comparar as percepções de profissionais de saúde e da população em geral com relação à forma de obtenção dos órgãos, em especial a abordagem de mercado, e comparar a opção desinteressada com outra opção, que tem a percepção do envolvimento da necessidade pessoal ou familiar para obter órgãos com o fim de transplante, utilizando a abordagem de mercado. Para atender aos objetivos deste estudo foi elaborado um questionário para coletar a opinião dos participantes. Sua distribuição foi realizada pessoalmente, de forma aleatória, e também foi elaborada uma versão eletrônica que foi divulgada via página no facebook, criada exclusivamente para este fim. A análise das respostas obtidas foram discutidas ao nível de 5% de significância e consideradas significativas quando o valor de p foi < 0,05. Ao todo, 692 pessoas participaram da pesquisa. Foi identificado que na categoria do profissional de saúde há maior tendência do que entre aqueles que não são profissionais da saúde em discordar dos incentivos indiretos relacionados com a redução de impostos e licença remunerada de 30 dias. Estas foram as únicas associações significativas ligadas aos profissionais da saúde no estudo. A maioria dos participantes (80,1%) concordou que a doação de órgãos deve ser um ato desinteressado e estritamente solidário. Por outro lado, 52% acredita que o mercado poderia ser um sistema justo e benéfico para todos, visando ampliar a possibilidade de realização de transplantes. Em uma situação extrema, de carência absoluta de órgãos, 54,9% dos participantes indicaram que pagariam por um órgão para salvar a sua vida ou a vida de algum familiar. Nesta questão, 24,1% discordaram e 20,2% indicaram que não possuem opinião sobre o assunto. / Waiting in aqueue for obtaining organ transplant constitutes a major problem in healthcare worldwide. The numbers of voluntary donors do not grow to the same extent of the need for organs. Given this situation, there was an illicit market for organs, in which buyers and intermediaries to address the countries where there is a large percentage of low-income population, aiming to acquire organs from living individuals, through payment. In this context, this study aimed to evaluate and compare the perceptions of health professionals and the general public regarding the method of obtaining the organs, especially the market approach and compare the disinterested option with another option, which has the perception of involvement personal or family need for organs for the purpose of transplantation, using the market approach. To meet the objectives of this study, a questionnaire was developed to collect the opinions of participants. Its distribution was held personally randomly and was also prepared an electronic version of the questionnaire was disseminated via facebook page created solely for this purpose. The analysis of the responses were discussed at 5% significance and considered significant when the p value was <0.05. In all, 692 people participated in the survey. It was identified that the health professional category there are more likely than among those who are not health professionals to disagree on the indirect incentives related to the reduction of taxes and paid leave of 30 days for those who make donations. These were the only significant associations related to health professionals throughout the study. Most participants (80.1%) indicated that agree that organ donation must be a disinterested and strictly act of solidarity. On the other hand, 52% believe that the market for organs could be fair and beneficial system for all in order to extend the possibility of performing transplants. In an extreme situation, absolute shortage of organs, 54.9% of respondents indicated they would pay for an organ to save your life or the life of a family member. On the same question, 24.1% disagreed and 20.2% indicated that they have no opinion on the matter.
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