A associação de matrizes produzidas por electrospinning (ES) e células-tronco tem sido apontada como uma alternativa promissora na reconstituição de tecidos. A associação de moléculas bioativas, tais como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) em nanofibras, permite a libertação controlada do fator incorporado. Isso pode contribuir para a migração e diferenciação celular, tornando-se uma opção interessante para a regeneração de tecidos. Neste trabalho foi analisado a influência da incorporação do VEGF em matrizes de poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) produzidas por ES. As análises de adesão, viabilidade celular e citotoxicidade dos biomateriais foram realizadas em três grupos de matrizes: (1) PLGA/BSA/VEGF, (2) PLGA/BSA, (3) PLGA 13%. As análises físico-químicas das matrizes como morfologia, diâmetro da fibra, degradabilidade, solvente residual, ângulo de contato, propriedades mecânicas, eficiência de incorporação e liberação controlada do VEGF foram realizadas. As nanofibras apresentaram superfície lisa sem beads com poros interconectados, semelhantes às da MEC. Observou-se melhora na adesão celular nas matrizes PLGA/BSA/VEGF quando comparadas aos demais grupos. As matrizes foram atóxicas para as células. Portanto, a associação entre matrizes de nanofibras com fatores de crescimento incorporados e células-tronco pode ser uma estratégia útil para a engenharia de tecidos (ET). / The association of matrices produced by electrospinning (ES) and stem cells has been considered as a promising alternative for the recovery of tissue. The association of bioactive molecules, such as vascular endothelial growth factor (VEGF) in nanofibres, allows the controlled release of the incorporated factor. It can contribute to cellular migration and differentiation, becoming an interesting option for tissue regeneration. In this work, the influence of VEGF incorporation on a poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) scaffold produced by ES was analyzed. The analysis of cell adhesion, cell viability and biomaterials cytotoxicity was carried out in three matrice groups: (1) PLGA/BSA/VEGF; (2) PLGA/BSA, (3) PLGA 13%. The physical-chemical analysis assessment of morphology, fiber diameter, residual solvent, degradability, contact angle, mechanical properties, loading efficiency and controlled release of VEGF were performed. Nanofibres showed smooth surfaces without beads with interconnected pores, similar to those of ECM. An improvement in cell adhesion was observed for the matrices of PLGA/BSA/VEGF when compared to the other groups. The matrices were non toxic for the cells. Therefore, the association between nanofibre matrices loaded with growth factors and stem cells may be a useful strategy for tissue engineering.

Os scaffolds produzidos por electrospinning (ES) são ferramentas bastante atrativas para a engenharia de tecidos (ET). Mimetizando fisicamente a matriz extracelular natural, esses scaffolds atuam como suportes para o desenvolvimento celular. Contudo, uma ocupação celular uniforme nesses scaffolds permanece sendo um problema a ser resolvido. Neste trabalho, células-tronco foram integradas a scaffolds de PLGA ainda durante a sua produção com o objetivo de se obter uma melhor distribuição celular por toda a estrutura do biomaterial. Para a obtenção desses scaffolds contendo células-tronco (SCCT), as técnicas de ES e bio-electrospraying (BES) foram associadas. Os SCCT foram caracterizados quanto a suas propriedades físico-químicas e biológicas. As fibras produzidas apresentaram-se lisas, bem distribuídas e com características mecânicas e de degradação adequadas a diferentes aplicações na ET. As células integradas aos SCCT mantiveram-se viáveis e foram capazes de se proliferar dentro dessa estrutura ao longo do período de cultivo. Cortes histológicos dos SCCT demonstraram que as células estavam bem distribuídas em toda a arquitetura do biomaterial. Esses resultados sugerem que a associação do ES e BES é uma técnica interessante para a produção de scaffolds tridimensionais integrados a células, tornando-se uma alternativa viável para uso na engenharia de tecidos. / Scaffolds produced by electrospinning (ES) are very attractive tools for tissue engineering (TE). These scaffolds act by mimicking physically the native extracellular matrix as carriers for cell growth. However, a uniform cell occupation of scaffolds remains a problem to be solved. In this study, stem cells were integrated into the PLGA scaffolds during their production in order to obtain better cell distribution throughout the biomaterial structure. The ES and bio-electrospraying (BES) techniques were associated to obtain these scaffolds containing stem cells (SCCT). The SCCT were characterized by their physicochemical and biological properties. Smooth and well distributed fibers, with suitable mechanical and degradation characteristics were obtained which allows different applications in TE. The cells incorporated onto SCCT remained viable and are capable of proliferating in this structure during cell culture. The cells were well distributed throughout the biomaterial architecture as observed in histological sections of SCCT. These results suggest that association between ES and BES is an interesting technique to produce 3D cell integrated scaffolds, making it a viable alternative for tissue engineering.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-03T17:45:20Z No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T12:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GilbertoSantosJunior.pdf: 443022 bytes, checksum: f2a030805f67eb3070ecb0072c6b1f94 (MD5) / Estudos relacionados à criopreservação de germoplasma de raças localmente adaptadas, visam disponibilizar esse material com custo reduzido e maior variabilidade genética. O objetivo desse estudo foi testar protocolos de criopreservação do sêmen que resultassem em um produto de melhor qualidade. Para cada experimento, foram coletados quatro ejaculados de quatro suínos localmente adaptados, com intervalos de 5 a 7 dias. No primeiro experimento foram testados três curvas de congelação: 0h, 2h e 4h de estabilização em BTS após coleta à temperatura de 22-24°C. Foi observado que a estabilização por duas horas resultou em melhor qualidade de sêmen pós congelação (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (14,3±6,3%C vs 29,7±6,1A vs 22,9±8,2B, respectivamente) e percentual de células com membrana celular e acrossoma íntegros (9,6±4,2%B vs 17,5±4,7A vs 12,9±6,8A). No segundo experimento, foram testados protocolos utilizando diluentes de 2% e 3% de glicerol no volume final, sem e com (quinze minutos) estabilização pré congelação. Os resultados obtidos com diluente de congelação contendo 3% do volume final de glicerol, estabilizados por quinze minutos foram superiores (P>0,05) para os parâmetros motilidade total (28,1±5,5B vs 31,8±5,0AB vs 29,1±4,9B vs 37,9±5,4A) e percentual de células com membrana celular e acrossomal íntegras (15,1±5,0C vs 18,4±5,7BC vs 19,8±6,4B vs 25,1±5,3A). Os protocolos cujo sêmen foi submetido à estabilização em BTS por duas horas e com concentração final de glicerol a 3% resultaram em sêmen de melhor qualidade ao final do processo de criopreservação. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Studies related to germplasm cryopreservation of locally adapted breeds, aim to eventually reduce cost and gain genetic variability. The aim of this study was to test sperm cryopreservation protocols that could lead to greater quality results after the cryopreservation process. Four ejaculates were collected by intervals of 5-7 days, from four national swine. The first experiment tested three freezing curves: after collected, semen were equilibrated for 0h, 2h and 4h in BTS at a temperature of 22-24 ° C. It was noted that the two hour equilibration resulted in greater semen quality after freezing (P> 0.05) for total motility (14.3±6.3%C vs 29.7±6.1A vs 22.9±8.18B, respectively) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (9.6±4.2%B vs 17.5±4.7A vs 12.9±6.8A). The second experiment tested protocols using liquid storages with 2% and 3% of glycerol in the final volume, with and without fifteen minutes of pre freezing equilibration. The results obtained with the liquid storage that contained 3% of glycerol in the final volume, equilibrated for fifteen minutes, were superior (P> 0.05) for total motility (28.1±5.5B vs 31.8±5.0AB vs 29.1±4.9B vs 37.9±5.4A) and percentage of cells with membrane and acrosome integrity (15.1±5.0C vs 18.4±5.7BC vs 19.8±6.4B vs 25.1±5.3A). Protocols in which semen were submitted to a two hour equilibration in BTS and a final glycerol concentration of 3%, resulted in greater semen quality by the end of the cryopreservation process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-13T00:25:54Z No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-13T12:58:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JoseLuizJivagodePaulaRolo.pdf: 3609925 bytes, checksum: 551d692980de399bc948d25b7d70b901 (MD5) / O objetivo desse trabalho foi definir as características populacionais, morfológicas e ultraestruturais de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) e comparar o efeito das técnicas de criopreservação de congelamento lento (CL) e vitrificação (V) de tecido ovariano de cadela sobre a morfologia dos FOPA. A média da estimativa da população de FOPA de cadelas foi de 48541±18366, onde 94,25% eram primordiais (45145±16076), 4,92% primários (2358±1253) e 0,83% secundários (397±351). A média de diâmetro do folículo, ovócito e núcleo do ovócito e número de células da granulosa de folículos primordiais foram 27,5±4,2μm, 21,7±2,7μm e 11,3±1,6μm e 6,0±1,8 respectivamente. Para folículos primários foram, respectivamente, 42,6±12,5μm, 27,8±7,5μm, 13,7±2,6μm e 15,0±7,0. Para folículos secundários, foi 101,6±62,9μm para diâmetro do folículo, 48,0±12,6μm para diâmetro do ovócito, 18,7±4,2μm para diâmetro do núcleo do ovócito e 61,5±63,5 células da granulosa. A porcentagem total de FOPA morfologicamente normais foi de 93,66±6,81% para o grupo controle, 86,16±11,05% para o CL e 68,14±12,75% para a V. Para folículos primordiais a porcentagem de FOPA normais foi 96,69±4,72% no controle, 89,51±10,39% no CL e 75,32±9,23% na V. Para folículos primários e secundários os valores foram, respectivamente, 94,80±6,91% e 87,62±17,12% para o controle, 86,8±12,15% e 76,35±26,34% para CL e 61,53±14,78 e 52,25±22,13% para a V. Não houve diferença significativa na porcentagem de FOPA morfologicamente normais entre o CL e o grupo controle. Já na V essa porcentagem foi significativamente inferior aos outros 2 grupos (P<0,05). A ultraestrutura de folículos pré-antrais de cadela mostrou ser semelhante à descrita para outras espécies. Após criopreservação por CL os folículos apresentaram danos ultraestruturais, enquanto após vitrificação os folículos primordiais e primários estavam bem preservados. No entanto, os folículos secundários foram muito danificados em ambos os tratamentos. Em conclusão, este trabalho descreveu as características morfométricas, ultraestruturais e populacionais dos FOPA de cadela. A vitrificação foi mais eficiente em preservar a ultraestrutura dos folículos primordiais e primários que o congelamento lento. Os dois métodos de criopreservação testados apresentam resultados promissores, mas ainda precisam de aperfeiçoamento, especialmente em relação à preservação de folículos secundários. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to define the population, morphological and ultrastructural characteristics of bitch preantral follicles (PAF) and to compare the effects of two cryopreservation techniques - slow freezing (SF) and vitrification (V) - of bitches ovarian tissue on the morphology of PAF. The average population of PAF was 48,541 ± 18,366, where 94.25% were primordial (45145 ± 16076), 4.92% primary (2358 ± 1253) and 0.83% secondary (397 ± 351). The average diameter of the follicle, oocyte and the oocyte nucleus and the number of granulosa cells for primordial follicles were 27.5 ± 4.2μm, 21.7 ± 2.7μm, 11.3 ± 1.6μm and 6.0 ± 1.8, respectively. For primary follicles the values were, respectively, 42.6 ± 12.5μm, 27.8 ± 7.5μm, 13.7 ± 2.6μm and 15.0 ± 7.0. For secondary follicles follicle diameter was 101.6 ± 62.9μm, oocyte diameter was 48.0 ± 12.6μm, nucleus diameter was 18.7 ± 4.2μm, and the number of granulosa cells was 61.5 ± 63.5. The overall percentage of morphologically normal PAF was 93.66 ± 6.81% for the control group, 86.16 ± 11.05% for SF and 68.14 ± 12.75% for V. The percentage of normal primordial follicles was 96.69 ± 4.72% in control, 89.51 ± 10.39% in SF and 75.32 ± 9.23% in V. For primary and secondary follicles values were respectively 94.80 ± 6.91% and 87.62 ± 17.12% for control, 86.8 ± 12.15% and 76.35 ± 26.34% for SF and 61.53 ± 14.78 and 52.25 ± 22.13% for V. There was no significant difference on the percentage of normal PAF among SF and the control. However, V presented a significantly lower percentage of normal PAF than the other two groups (P<0.05). The ultrastructure of bitch PAF was similar to that described for other species. After, SF follicles presented ultrastructural damage, while after V, primordial and primary follicles were well preserved. Secondary follicles, however, suffered many damages in both cryopreservation techniques. In conclusion, this work described the morphometric and ultrastructural characteristics and the population of bitch PAF. Vitrification was more effective in preserving the ultrastructure of primordial and primary follicles than slow freezing. Both methods are promising, but need improvement, especially concerning secondary follicles preservation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-16T17:26:26Z No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) Previous issue date: 2007 / O transplante de ilhotas pode ser uma opção para o tratamento do Diabetes do tipo I em função do aumento do controle metabólico e da qualidade de vida do paciente transplantado. As maiores limitações para a aplicação dessa técnica em larga escala são o alto número de ilhotas necessárias para a obtenção de um bom funcionamento do transplante e a deteriorização de ilhotas, causados por dano isquêmico por preservação a frio. Aqui propomos o uso de nova tecnologia denominada TAT- PTD como transportador de moléculas terapêuticas para o interior de ilhotas e pâncreas com a intenção de prevenir morte de ilhotas, aumentando, assim, o número e a qualidade das ilhotas para transplante de pacientes diabéticos. Resultados da Parte I: Construímos uma proteína de fusão composta por Heme oxigenase -1 (HO1) e o domínio de transdução protéica TAT- PTD (TAT) um peptídeo viral com 11 aminoácidos provenientes do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e com capacidade de penetrar em membrana plasmática. A transdução de TAT-PTD-HO1 em células produtoras de insulina protege contra a ação citotóxica de TNF-α. A transdução de TAT-HO1 para o interior de células produtoras de insulina não danifica a fisiologia de ilhotas como foi mostrado quando estas são transplantadas em camundongos imunodeficientes e com Diabetes quimicamente induzida. Finalmente, mostramos que transdução de ilhotas com a proteína de fusão melhora a viabilidade de ilhotas em cultura. Essa abordagem pode ter um impacto positivo no aumento da disponibilidade de ilhotas para transplante. Resultados da Parte II: A produção de proteínas de fusão ligadas a TAT-PTD pode ser obtida em larga escala e eficientemente com a expressão protéica em E. coli. No entanto, a contaminação com endotoxina representa um problema para a aplicação dessas proteínas in vitro e in vivo. Desenvolvemos várias proteínas de fusão ligadas a TAT que têm aplicação terapêuticas em ilhotas. Apresentamos aqui um novo método para a eficiente remoção de endotoxina de soluções protéicas usando tubos de polipropileno em combinação com tratamento em pH ácido, mantendo a atividade biológica da proteína com bom rendimento protéico. Resultados da Parte III: Para poder detectar possíveis moléculas que possam ser citoprotetoras e que possam ser associadas à tecnologia de TAT-PTD, estabelecemos um modelo de isquemia a frio em pâncreas de ratos. Isso nos permitiu estudar a modulação de vias ativadas por sinal de stress que levam ao impedimento da recuperação da qualidade e função de ilhotas. Observamos que JNK e p38 são proteínas kinase ativadas por stress (SAPK) que estão presentes por causa de dano causado por isquemia pancreática e isolamento de ilhotas. Um experimento preliminar usando TAT-D-JNKi, inibidor de JNK, tentou prevenir dano causado pela ativação de JNK. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Islet transplantation can become a therapeutic option for the treatment of Type I Diabetes due to increased metabolic control and quality of life for transplanted patients. The major limitations for widespread application of this technique are, high number of islets needed to attain good function after transplantation and islet deterioration caused by pancreatic injury through cold ischemia storage. We here propose the use of a new technology using TAT-PTD as a transporter of therapeutic molecules into islets/pancreas with the attempt to prevent islet cell death and increase islet number/quality for transplantation of diabetic patients. Results from Part I: We have generated a fusion protein composed of HO-1 and TAT protein transduction domain (TAT/PTD), an 11-aa cell penetrating peptide from the human immunodeficiency virus TAT protein. Transduction of TAT/PTD–HO-1 to insulin producing cells protects against TNF-a-mediated cytotoxicity. TAT/PTD–HO-1 transduction to islets does not impair islet physiology, as assessed by reversion of chemically induced diabetes in immunodeficient mice. Finally, we report that transduction of HO- 1 fusion protein into islets improves islet viability in culture. This approach might have a positive impact on the availability of islets for transplantation. Results from Part II: While production of TAT-PTD-bound protein can be efficiently attained by E. coli protein replication, contamination with endotoxin represents a major hindrance for application of these proteins in the context of in vitro and in vivo testing. We have developed several TAT-attached proteins that have therapeutic cytoprotection applications on islet. Here we present a novel method for efficient removal of endotoxin from proteins in polypropylene tubes in combination with acidic pH treatment that does not interfere with biological activity of the protein and has good protein recovery. Results from part III: In order to identify possible molecular targets for islet cell cytoprotection by TAT-PTD technology, we have established a rat pancreas cold ischemia model and readout systems allowing for the study of the modulation of stress-activated cellular pathways leading to impairment of islet cell recovery and quality. We have observed that JNK and p38 stress activated protein kinases (SAPKs) are activated as a result of pancreas ischemia and islet isolation. A preliminary experiment was done using TAT-D-JNK inhibitor to try to prevent or reduce islet damage caused by activation of this SAPK pathway using this stringent model system.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, Departamento de Ciências Fisiológicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-02-10T13:51:22Z No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / No Brasil, todas as espécies de felinos selvagens estão sob risco de extinção. Desta forma, técnicas de reprodução assistida aplicáveis a tais espécies são recursos valiosos para a conservação das mesmas. O gato doméstico (Felis catus) tem sido um excelente modelo experimental para estudos que visem aplicação em felinos selvagens. O presente trabalho teve como objetivos testar o efeito de diferentes protocolos de criopreservação, além da eficácia do autotransplante ovariano em manter a viabilidade e retomar o desenvolvimento de folículos pré-antrais inclusos em ovários de gatas domésticas. Um teste de criopreservação foi realizado comparando a eficácia de etilenoglicol (EG), dimetilsulfóxido (DMSO) e a associação de ambos (EG+DMSO) na preservação de folículos a aovarianos após descongelamento (1 Etapa). Na 2 Etapa do experimento, cinco gatas foram submetidas à cirurgia de ovariohisterectomia bilateral. Os animais tiveram seis fragmentos de ovário fresco transplantados para o tecido subcutâneo da região dorsal do pescoço.Foram realizadas cinco biopsias (7, 14, 28, 49 e 63 dias). O tecido ovariano foi fixado em Carnoy, processado para histologia clássica e analisado por microscopia de luz. Durante o período de transplante, foram realizadas análises ultrassonográficas para acompanhar o desenvolvimento do tecido ovariano. Na Etapa 1, a criopreservação com DMSO a 1,5 M mostrou-se mais eficaz. Durante as avaliações ultrassonográficas, foi possível identificar a presença de círculos hipoecóicos com diâmetro aproximado de 1 mm, nos animais 3,4 e 5. Tais estruturas correspondiam a folículos antrais. Nas biopsias , foi possível identificar folículos em todos os estágios do desenvolvimento. As porcentagens médias (±DP) de folículos morfologicamente normais encontrados nos fragmentos referentes às biopsias , realizadas nos dias 7, 14, 28, 49 e 63 pós-transplante, foram, respectivamente, 44,36±30,56, 46,95±13,97, 51,41±14,38, 54,80±36,47 e 37,70±31,11. A maioria dos folículos primordiais foi classificada como normal. Nas biopsias dos dias 7 e 14, houve grande concentração de folículos com o citoplasma do ovócito muito acidófilo e com ausência de núcleo (degeneração tipo 1). A partir do dia 14, muitos apresentaram-se com células da granulosa justapostas, que cobriam o local do ovócito, que estava ausente nestas estruturas (degeneração tipo 2). Em conclusão, é possível manter a morfologia folicular após criopreservação de tecido ovariano felino com DMSO a 1,5 M. Também é mantida a viabilidade e funcionalidade de tecido ovariano felino fresco após autotransplante. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, all wild felids species are endangered. This way, assisted reproduction techniques are a valuable resource to keep these species against extinction. The domestic cat (Felis catus) has been an excellent experimental model for studying new techniques to apply to wild felids. The aim of this work was to test different protocols of cryopreservation and the capacity of ovarian autotransplantation to keep the viability and resume preantral follicle development in domestic cats. The cryopreservation test was performed to compare ethylene glycol (EG), dimethyl sulfoxide (DMSO) and the association of both (EG+DMSO) in the preservation of preantral follicles included st nd in ovarian tissue (1 stage). In the 2 stage of the experiment, five cats were submitted to bilateral ovarian hysterectomy. In these animals, six fragments of fresh ovary were immediately transplanted to the subcutaneous tissue of the dorsal neck Five biopsies were performed after 7, 14, 28, 49 and 63 days of transplantation. The ovarian tissue was fixed in Carnoy, processed for classical histology and analysed under light microscopy. During the transplantation period, the ovarian tissue development and localization was monitored by ultrassonographic analysis. In the Stage 1 of the experiment, the cryopreservation with DMSO 1,5 M showed to be more efficient. During the ultrassonographic evaluation it was possible to identify the presence of hypoechoic circles with approximately 2 mm of diameter in the transplanted tissue of animals 3, 4 and 5. These structures corresponded to antral follicles. In the biopsies it was possible to identify follicles in all developmental stages. The mean (±SD) percentages of morphologically normal follicles found in the biopsies at days 7, 14, 28, 49 and 63 post-transplantation were respectively 44.36±30.56, 46.95±13.97, 51.41±14.38, 54.80±36.47 e 37.70±31.11. The majority of the primordial follicles were classified as normal. At days 7 and 14 biopsies there was a great number of follicles with acidophilic cytoplasm and with absent of nucleus (Type 1 degeneration). From day 14 on, a lot of follicles showed juxtaposed granulosa cells covering the place where the oocyte should be (Type 2 degeneration). Both these follicles were classified as degenerated. In conclusion, it is possible to keep the morphology of ovarian follicles after cryopreservation with DMSO 1,5 M. It is possible to keep the viability and function of fresh feline ovarian tissue after autotransplantation.

A associação de matrizes produzidas por electrospinning (ES) e células-tronco tem sido apontada como uma alternativa promissora na reconstituição de tecidos. A associação de moléculas bioativas, tais como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) em nanofibras, permite a libertação controlada do fator incorporado. Isso pode contribuir para a migração e diferenciação celular, tornando-se uma opção interessante para a regeneração de tecidos. Neste trabalho foi analisado a influência da incorporação do VEGF em matrizes de poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) produzidas por ES. As análises de adesão, viabilidade celular e citotoxicidade dos biomateriais foram realizadas em três grupos de matrizes: (1) PLGA/BSA/VEGF, (2) PLGA/BSA, (3) PLGA 13%. As análises físico-químicas das matrizes como morfologia, diâmetro da fibra, degradabilidade, solvente residual, ângulo de contato, propriedades mecânicas, eficiência de incorporação e liberação controlada do VEGF foram realizadas. As nanofibras apresentaram superfície lisa sem beads com poros interconectados, semelhantes às da MEC. Observou-se melhora na adesão celular nas matrizes PLGA/BSA/VEGF quando comparadas aos demais grupos. As matrizes foram atóxicas para as células. Portanto, a associação entre matrizes de nanofibras com fatores de crescimento incorporados e células-tronco pode ser uma estratégia útil para a engenharia de tecidos (ET). / The association of matrices produced by electrospinning (ES) and stem cells has been considered as a promising alternative for the recovery of tissue. The association of bioactive molecules, such as vascular endothelial growth factor (VEGF) in nanofibres, allows the controlled release of the incorporated factor. It can contribute to cellular migration and differentiation, becoming an interesting option for tissue regeneration. In this work, the influence of VEGF incorporation on a poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) scaffold produced by ES was analyzed. The analysis of cell adhesion, cell viability and biomaterials cytotoxicity was carried out in three matrice groups: (1) PLGA/BSA/VEGF; (2) PLGA/BSA, (3) PLGA 13%. The physical-chemical analysis assessment of morphology, fiber diameter, residual solvent, degradability, contact angle, mechanical properties, loading efficiency and controlled release of VEGF were performed. Nanofibres showed smooth surfaces without beads with interconnected pores, similar to those of ECM. An improvement in cell adhesion was observed for the matrices of PLGA/BSA/VEGF when compared to the other groups. The matrices were non toxic for the cells. Therefore, the association between nanofibre matrices loaded with growth factors and stem cells may be a useful strategy for tissue engineering.

Os scaffolds produzidos por electrospinning (ES) são ferramentas bastante atrativas para a engenharia de tecidos (ET). Mimetizando fisicamente a matriz extracelular natural, esses scaffolds atuam como suportes para o desenvolvimento celular. Contudo, uma ocupação celular uniforme nesses scaffolds permanece sendo um problema a ser resolvido. Neste trabalho, células-tronco foram integradas a scaffolds de PLGA ainda durante a sua produção com o objetivo de se obter uma melhor distribuição celular por toda a estrutura do biomaterial. Para a obtenção desses scaffolds contendo células-tronco (SCCT), as técnicas de ES e bio-electrospraying (BES) foram associadas. Os SCCT foram caracterizados quanto a suas propriedades físico-químicas e biológicas. As fibras produzidas apresentaram-se lisas, bem distribuídas e com características mecânicas e de degradação adequadas a diferentes aplicações na ET. As células integradas aos SCCT mantiveram-se viáveis e foram capazes de se proliferar dentro dessa estrutura ao longo do período de cultivo. Cortes histológicos dos SCCT demonstraram que as células estavam bem distribuídas em toda a arquitetura do biomaterial. Esses resultados sugerem que a associação do ES e BES é uma técnica interessante para a produção de scaffolds tridimensionais integrados a células, tornando-se uma alternativa viável para uso na engenharia de tecidos. / Scaffolds produced by electrospinning (ES) are very attractive tools for tissue engineering (TE). These scaffolds act by mimicking physically the native extracellular matrix as carriers for cell growth. However, a uniform cell occupation of scaffolds remains a problem to be solved. In this study, stem cells were integrated into the PLGA scaffolds during their production in order to obtain better cell distribution throughout the biomaterial structure. The ES and bio-electrospraying (BES) techniques were associated to obtain these scaffolds containing stem cells (SCCT). The SCCT were characterized by their physicochemical and biological properties. Smooth and well distributed fibers, with suitable mechanical and degradation characteristics were obtained which allows different applications in TE. The cells incorporated onto SCCT remained viable and are capable of proliferating in this structure during cell culture. The cells were well distributed throughout the biomaterial architecture as observed in histological sections of SCCT. These results suggest that association between ES and BES is an interesting technique to produce 3D cell integrated scaffolds, making it a viable alternative for tissue engineering.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1562_1.pdf: 1103626 bytes, checksum: 29e0e4b87eca2e6d722ce5c11983e139 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dentre os feijões cultivados, o feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] se destaca pelo alto conteúdo protéico e pela capacidade de crescer em condições adversas. Sendo assim, esta espécie se tornou uma das culturas de subsistência mais importantes para a população do agreste nordestino. No entanto, a salinização dos solos, devido à irrigação inadequada, tem provocado além de crescentes problemas ambientais, a redução da produtividade de várias espécies vegetais, inclusive a do feijão-caupi. Sendo assim, o uso de técnicas biotecnológicas, como a mutagênese in vitro, mostra-se como alternativa para o desenvolvimento de novas cultivares. Com a finalidade de produzir variedades de feijão-caupi tolerantes à salinidade, a indução de mutação in vitro com uso de raios gama foi aplicada no presente trabalho. Foi escolhida a cultivar BR14-Mulato por ter sido aquela que em estudos primários mostraram satisfatória capacidade regenerativa in vitro tratando-se de importante cultivar para a agricultura do Nordeste brasileiro. O segundo passo foi estabelecer um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas através da determinação da concentração de NaCl que inibisse a regeneração, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM (1% - Tratamento 1), 258 mM (1,5% - Tratamento 2), 344 mM (2% - Tratamento 3) e 0 mM (Tratamento Controle), chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados in vitro, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado (0 Gy) e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte e, após verificada a possível mutação, retirado da condição de salinidade e preparado, através da indução de enraizamento, para futuras análises em campo e molecular. Os resultados obtidos forneceram subsídio com o desenvolvimento de protocolos bem estabelecidos para estudos posteriores de regeneração e indução de mutação in vitro, com os prováveis mutantes (induzidos ou espontâneos) oferecendo possibilidade de geração de variedade tolerante à salinidade

Orientador: Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T03:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dantas_SoniaReginaPerezEvangelista_D.pdf: 889695 bytes, checksum: 05158533bac81d5fd086b21ddd4d3117 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo:OBJETIVOS: Determinar a incidência de infecções hospitalares em receptores adultos de transplante renal de acordo com a origem do enxerto e estudar os fatores de risco associados com a ocorrência de infecções urinárias e de ferida cirúrgica, na unidade de Nefrologia do Hospital das Clínicas- Unicamp. MÉTODOS: No período de janeiro de 2000 a dezembro de 2001 foi realizado um estudo prospectivo de coorte para determinação dos fatores de risco para aquisição de infecções hospitalares do trato urinário (ITU) e da ferida cirúrgica pós-transplante renal, onde foram comparados receptores com e sem infecção. Também foi realizado um estudo do perfil genômico das cepas de Enterobacter cloacae multidroga-resistentes, encontrados como agentes etiológicos de maior incidência em urina desta população. RESULTADOS: Foram estudados 163 receptores de rim durante a hospitalização, 98 (60,1%) do sexo masculino e 65 (39,9%) do feminino. Cento e dez (67,5%) dos receptores eram de enxertos de doadores cadáveres e 53 (32,5%) de doadores vivos relacionados. Infecção hospitalar de origem bacteriana ocorreu em 89 (54,6%) receptores, sendo 21 (39,6%) de doador vivo e 68 (61,8%) de doador cadáver (p=0,019). Vinte e nove (17,8%) receptores tiveram dois ou mais episódios de infecção durante a hospitalização. Foram diagnosticados 121 episódios de infecção hospitalar bacteriana, 82 (67,8%) ITU, 1 (0,8%) pielonefrite, 10 (8,3%) pneumonias, 18 (14,9%) da ferida cirúrgica, 7 (5,8%) primária da corrente sangüínea, 1 (0,8%) sangüínea relacionada ao cateter vascular central de curta permanência e 2 (1,6%) outras infecções. Na análise multivariada dos fatores de risco para infecção urinária a regressão logística demonstrou que a infecção urinária foi relacionada com a duração de uso de cateter vesical prévio à infecção (OR=1,5 [IC95%=1,1; 1,9]), tempo de internação antes da infecção (p=0,0002; OR=0,9 [IC95%=0,8; 0,9]), enxerto de doador cadáver (p=0,006; OR=6,6 [IC95%=2,2;19,5]) e troca do esquema imunossupressor de manutenção (p=0,0001; OR=17.0 [IC95%=4,0;71,5]). Na análise univariada dos fatores de risco para infecção cirúrgica a troca do tratamento de imunossupressão de manutenção e o cirurgião estiveram relacionados com a aquisição desta infecção. Seis diferentes perfis de DNA de Enterobacter cloacae multidroga-resistentes foram identificados em urina de 6 receptores renais e foi documentado um caso de contaminação cruzada. CONCLUSÕES: A ITU é a infecção hospitalar de maior incidência pós-transplante renal com significativa diferença entre receptores de doador vivo ou cadáver. A ocorrência de ITU nos primeiros dias após o transplante sugere que a manipulação do trato urinário durante a cirurgia pode ser causa de contaminação e infecção nesta população / Abstract: OBJECTIVE: To determine the incidence of nosocomial infections in renal transplant recipients as well as the risk factors associated with urinary tract infections (UTI) and surgical sites of infection (SSI) in patients hospitalized in the University hospital of the State University of Campinas, São Paulo, Brazil. METHODS: A prospective cohort study was done from January 2000 through December 2001, to determine the rate of bacterial nosocomial infections in renal transplant recipients. The patients were divided into two groups according to the origin of the allograft, namely deceased or living related donors. The strains of Enterobacter cloacae, the most prevalent multidrug-resistant bacteria isolated from UTI, were determined based on genomic analysis using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). RESULTS: One hundred and sixty-three patients who received renal transplants were reviewed during hospitalization. In 110 (67.5%) renal transplants, the kidneys were from deceased donors and in 53 (32.5%) they were from living related donors. The median of length hospitalization was 12 days (range, 9 to 75 days) for transplants from living related donors and 26 days (range, 2 to 98 days) for transplants from deceased donors (P<0.0001). Twenty-one (39.6%) recipients of kidneys from living related donors and 68 (61.8%) recipients of kidneys from deceased donors had bacterial nosocomial infections episodes (P=0.019). The post-transplant nosocomial infections diagnosed during hospitalization included UTI (44.8%), SSI (11%), pneumonia (6.1%), bloodstream catheter-related infections (0,6%) and others (1.3%). Multivariate analysis showed that the risk factors for UTI in the included a kidney from deceased donor recipient, substitution of the initial immunosuppressive regimen, the duration of urinary bladder catheterization and the length of hospitalization before the infection. The median delay until the diagnosis of UTI in patients with an indwelling urinary catheter was five days (ranging from 3 to 35days). Substitution of the initial protocol of the post-transplant immunosuppressive regimen and of the surgeon was also associated with SSI. Six E. cloacae strains with multiple resistance to antibiotics were identified in UTI and hospital dissemination was documented. CONCLUSIONS: UTI was the single most important type of hospital infection in renal transplant patients, with a significant difference in the incidence of UTI between recipients of living related donors and those who received a kidney from deceased donors. The high incidence of UTI in the early post-transplant period suggested that manipulation of the urinary tract during surgery may be an important cause of UTI / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica