ARAÚJO, Ana Jérsia. Estudo das propriedades citotóxica da nor-ß-lapachona e seu derivado nitrofenilamino em células HL-60. 2009. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T15:41:13Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_ajaraújo.pdf: 1934517 bytes, checksum: 316a2f473392dc4b8e5c026431688ffa (MD5) Previous issue date: 2009 / The quinone moiety has been identified as an important pharmacophoric group for cytotoxic activity of several compounds clinically used, constituting just one of the major classes of anticancer agents. β-lapachone is one of the most studied quinones in the last years. Its most important applications are related to its action against several cancer cells. Its derivative, nor-β-lapachone (compound 1), has similar anticancer activity. Thus, the aim of this work was to evaluate the mechanism of action involved in nor--lapachone and its nitrophenylamino derivative (compound 2) cytotoxicity in a leukemia cells model of HL-60 cell line. Initially it was investigated the effect of both the compounds on HL-60 cells viability after 24 hours of incubation, showing IC50 values of 2.92 and 0.48 μM to compounds 1 and 2, respectively. Considering the selectivity, compound 1 showed strong selectivity to cancer cells, while its derivative was only partially selective. Studies performed in HL-60 cells, after 24 hours, indicated that compound 2 induces cell death by apoptosis as showed by morphological changes, DNA fragmentation, mitochondrial membrane depolarization and phosphatidylserine externalization. Both tested compounds increased generation of reactive oxygen species (ROS). Our results suggest that a nitrophenylamino radical introduction at position 3 of the furane ring enhances the cytotoxicity of nor--lapachone in HL-60 cell line. These findings highlight the potential of these synthetic quinones as prototypes molecules to produce new compounds with anticancer properties. / O esqueleto quinona foi identificado como um importante grupo farmacofórico para atividade citotóxica de vários compostos utilizados na clínica, constituindo ainda uma das maiores classes de agentes anticâncer. A β-lapachona é uma das quinonas mais estudadas nos últimos anos. Suas aplicações mais importantes estão relacionadas às ações contra várias células tumorais. Seu derivado, nor-β-lapachona (composto 1), tem atividade anticâncer similar. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o mecanismo de ação envolvido na citotoxicidade do composto 1 e de seu derivado nitrofenilamino (composto 2) em células leucêmicas HL-60. Inicialmente foi investigado o efeito desses compostos na viabilidade de células HL-60 após 24 horas de incubação, mostrando CI50 de 2,92 e 0,48 μM para os compostos 1 e 2, respectivamente. Acerca da seletividade celular, o composto 1 mostrou forte seletividade para células tumorais, enquanto que o seu derivado foi apenas parcialmente seletivo. Estudos feitos em células HL-60 indicaram que o composto 2 induz morte celular por apoptose como mostrado pelas mudanças morfológicas, fragmentação do DNA, despolarização da membrana mitocondrial e externalização da fosfatidilserina. Ambos compostos aumentaram a geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). Nossos resultados sugerem que a introdução do radical nitrofenilamino na posição 3 do anel furano aumenta a citotoxicidade da nor--lapachona em células HL-60. Esses achados apontam para o potencial dessas quinonas sintéticas como modelo para a produção de novos compostos com propriedades anticâncer.

EVANGELISTA, Janaína Serra Azul Monteiro. Estudo de efeitos vasculares, renais e citotóxicos do veneno da serpente Crotalus durissus cascavella. 2008. 178 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-13T12:32:42Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-13T13:28:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-13T13:28:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_jsamevangelista.pdf: 5846569 bytes, checksum: 95e07a530bc842bb394b2949ffdb755e (MD5) Previous issue date: 2008 / The snakes from the genus Crotalus in Brazil are represented by only one specie, Crotalus durissus. The poisoning by a sub-specie Crotalus durissus cascavella leads to systemic alterations, and is responsible for preliminary cause of death after the ophidic accident. This study aimed to evaluate the pharmacological effects of the snake venom Crotalus durissus cascavella - Ce (Cdcasca). This work looked at the actions of Cdcasca on the vascular system, assessing the physiological parameters of blood pressure and analyzing the histological changes in the heart, kidney, lung, brain and liver removed after the trials of blood pressure. The cytotoxic activity of Cdcasca was examined in four lines of human tumor cells: leukemia, breast tumor, colon tumor and nervous system tumor. There was an investigation of the likely mechanism of action of Cdcasca using the methods of viability cell by the exclusion of Trypan Blue, inhibition in the synthesis of ADN, antiproliferative activity of mononuclear cells (Alamar Blue). The integrity of the cell membrane, the ADN fragmentation and alteration of the mitochondrial transmembranic potential were analyzed by flow cytometry. It was Investigated the action of a Natriuretic Peptide (NPcasca) isolated from the venom of Cdcasca on a blood pressure system, on aortic rings assay and renal perfusion. After renal perfusion, the kidneys were subjected to histological analysis and study of its molecular biology. All parameters studied were analyzed by ANOVA and Student t-test, p <0.05. It was observed that the Cdcasca on the vascular system caused a significant decrease in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. There was made a pharmacological blockade with L-Name and the effects on heart and respiratory rates and mean arterial pressure were abolished. The total venom Cdcasca did not produced effects on the arteriolar mesenteric vascular bed. The whole venom Cdcasca was strongly cytotoxic on tumor line for leukemia, where there was a decrease in cell viability, as well as an increase in fragmentation of ADN. The NPcasca produced a decreased in heart and respiratory rates, and in the mean arterial pressure, with an increase in the production of nitric oxide in the blood of treated animals. In the experiments using NPcasca on aortic rings, there was a vasorelaxation dependent on endothelium. The NPcasca promoted a significant increase in perfusion pressure, and in renal vascular resistance. The urinary flow and the glomerular filtration rate also increased significantly. The perfused kidneys histological alterations were discrete, compared to the changes observed by the total venom Cdcasca. In experiments with isolated kidneys there was no change in gene expression of inflammatory mediators. Through these results we conclude that any component of poison Cdcasca is responsible for lowering effect and cytotoxicity in tumor cells. The NPcasca presented a hypotensive effects and increased the diuresis and natriurese. There was no change in gene expression of inflammatory mediators in kidney tissue. / As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil por apenas uma espécie, a Crotalus durissus, o envenenamento pela sub-espécie Crotalus durissus cascavella conduz à alteração sistêmica, sendo responsável pela causa preliminar de morte após o acidente ofídico. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacológicos do veneno da serpente Crotalus durissus cascavella – Ce (Cdcasca). Neste trabalho estudou-se as ações do Cdcasca no sistema vascular, avaliando os parâmetros fisiológicos da pressão arterial e analisando as alterações histológicas no coração, pulmão, rim, cérebro e fígado retirados após os experimentos de pressão arterial. A atividade citotóxica do Cdcasca foi avaliada em quatro linhas humanas de células tumorais: leucemia, tumor de mama, tumor de cólon e tumor do sistema nervoso. Realizou-se uma investigação do provável mecanismo de ação do Cdcasca utilizando-se as metodologias de viabilidade celular por exclusão de Azul de Tripan, inibição na síntese de DNA, atividade antiproliferativa de células mononucleares (Alamar Blue). A integridade da membrana celular, fragmentação do DNA e a alteração do potencial transmembrânico mitocondrial foram analisados por citometria de fluxo. Investigou-se a ação do Peptídeo Natriurético (NPcasca) isolado do veneno da Cdcasca nos sistemas de pressão arterial, anel de aorta e perfusão renal. Após a perfusão renal, os rins foram submetidos à análise histológica e ao estudo da biologia molecular. Todos os parâmetros estudados foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,05. Observou-se que o Cdcasca no sistema vascular causou uma diminuição significativa nas freqüências cardíaca e respiratória, bem como na pressão arterial média, havendo um aumento na produção de óxido nítrico no sangue dos animais tratados. Realizou-se o bloqueio farmacológico com L-Name e os efeitos nas freqüências cardíaca e respiratória e na pressão arterial média foram abolidos. O veneno bruto Cdcasca não apresentou efeitos no leito vascular arteriolar mesentérico. O veneno bruto da Cdcasca foi fortemente citotóxico na linhagem tumoral de leucemia, onde ocorreu uma diminuição na viabilidade celular, bem como um aumento na fragmentação do DNA. O NPcasca diminuiu as freqüências cardíaca e respiratória e pressão arterial média. Ocorreu um aumento na produção de nitrito no sangue dos animais tratados. Nos experimentos de anel de aorta onde utilizou-se o NPcasca, observou-se um relaxamento dependente de endotélio. O NPcasca promoveu aumento significativo na pressão de e na resistência vascular renal. O fluxo urinário e o ritmo de filtração glomerular também aumentaram significativamente. As alterações histológicas dos rins perfundidos foram discretas, comparando-as com as alterações observadas com o veneno total. Nos experimentos com rim isolado não houve alteração de expressão gênica de mediadores inflamatórios. Através destes resultados concluímos que algum componente do veneno Cdcasca seja responsável pelo efeito hipotensor e citotoxicidade em células tumorais. O NPcasca apresentou um efeito hipotensor e aumentou a diurese e natriurese. Não houve alteração de expressão gênica de mediadores inflamatórios no tecido renal.

Atualmente, ocorre um grande aumento na geração de resíduos sólidos como consequência do crescimento populacional, juntamente com a expansão da industria. O manejo inadequado dos resíduos sólidos gerados pode afetar a saúde pública e o meio ambiente. Neste contexto, os aterros sanitários são uma alternativa adequada de destinação destes resíduos, no entanto a confinação seguida pela decomposição dos resíduos gera um efluente líquido denominado chorume. O chorume é um líquido escuro de odor desagradável e com alta carga de compostos orgânicos o qual, sem tratamento correto pode causar a poluição das águas subterrâneas e adjacentes. Estudos prévios demonstram uma relação entre a exposição ao chorume e o aumento de radicais livres e índices de lipoperoxidação em diferentes órgãos, inclusive no cérebro e fígado de roedores. Portanto, o estresse oxidativo pode ser um mecanismo bioquímico relacionado à toxicidade de xenobióticos como o chorume de aterros sanitários. A partir dessas informações torna-se necessária a busca por formas de tratamento eficientes para os agentes potencialmente tóxicos presentes no chorume. Uma alternativa de tratamento são os Processos Oxidativos Avançados (POAs) como o tratamento fotoeletrooxidativo que possui elevada capacidade e velocidade de degradação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a neurotoxicidade e hepatotoxicidade induzidas pela exposição in vitro ao chorume de aterro sanitário em roedores. Além disso, o chorume submetido ao tratamento fotoeletrooxidativo também foi testado em roedores para avaliar a eficiência do tratamento. Nossos resultados demonstraram que o chorume pode induzir estresse oxidativo em estruturas cerebrais e fígado tanto em camundongos quanto em ratos. Nós também observamos que o hipocampo é menos vulnerável ao dano oxidativo induzido pelo chorume do que o estriado e o cerebelo. No entanto, o estriado e o cerebelo, são mais suscetíveis ao dano quando comparados ao fígado. O chorume submetido ao tratamento fotoeletrooxidativo também induziu estresse oxidativo, principalmente, no estriado e no fígado e diminuiu a atividade da enzima glutationa S-transferase no estriado. Adicionalmente, nós podemos sugerir que a fotoeletrooxidação foi incapaz de alterar eficientemente os compostos tóxicos presentes no chorume. / In the last decades, the solid waste has been increasing by great amounts due to world’s population growth together with the expansion of the industrialization. The inadequate treatment of the solid waste constitutes an important environmental problem and can affect the public health. In this context, the landfills are an appropriate alternative for the destination of the waste; however, the confinement followed by decomposition of the solid waste produce a liquid efluent known as leachate. Leachate is a dark liquid formed within landfills with elevated concentrations of chemical compounds. The absense of its treatment may cause severe pollution to the groundwater aquifer and to the adjacent surface waters. Previous studies demonstrated a relationship between the leachate exposure and the increase of free radicals and lipid peroxidation in different organs of rodents, including the brain and liver. Therefore, oxidative stress may be a biochemistry mechanism related to toxicity of xenobiotics such as landfill leachate. In view of the toxicity induced by leachate, the development of new technologies of treatment becomes necessary. In this context, one of the alternatives are the Advanced Oxidation Processes such as the photoelectrooxidative process which is formed by combination of two methods and has a high capacity and speed of degradation. The aim of this study was to evaluate the neurotoxicity and hepatotoxicity induced by in vitro exposure to landfill leachate in rodents. Moreover, leachate submitted by the photoelectrooxidative process was tested in rodents to evaluate the efficiency of the treatment. Our results showed that the landfill leachate can induce oxidative stress in brain structures and liver in both rats and mice. Additionally, we observed that the hippocampus is less vulnerable to oxidative stress induced by leachate when compared to striatum and cerebellum. However, brain structures are more susceptible to oxidative damage compared to liver. Leachate submitted to photoelectrooxidative process also induced increase on oxidative parameters in different structures evaluated, and decreased the glutathione S-transferase activity in striatum. Finally, we can suggest that photoelectrooxidation was unable to alter efficiently the toxic compounds presents in leachate.

Atualmente, ocorre um grande aumento na geração de resíduos sólidos como consequência do crescimento populacional, juntamente com a expansão da industria. O manejo inadequado dos resíduos sólidos gerados pode afetar a saúde pública e o meio ambiente. Neste contexto, os aterros sanitários são uma alternativa adequada de destinação destes resíduos, no entanto a confinação seguida pela decomposição dos resíduos gera um efluente líquido denominado chorume. O chorume é um líquido escuro de odor desagradável e com alta carga de compostos orgânicos o qual, sem tratamento correto pode causar a poluição das águas subterrâneas e adjacentes. Estudos prévios demonstram uma relação entre a exposição ao chorume e o aumento de radicais livres e índices de lipoperoxidação em diferentes órgãos, inclusive no cérebro e fígado de roedores. Portanto, o estresse oxidativo pode ser um mecanismo bioquímico relacionado à toxicidade de xenobióticos como o chorume de aterros sanitários. A partir dessas informações torna-se necessária a busca por formas de tratamento eficientes para os agentes potencialmente tóxicos presentes no chorume. Uma alternativa de tratamento são os Processos Oxidativos Avançados (POAs) como o tratamento fotoeletrooxidativo que possui elevada capacidade e velocidade de degradação. O objetivo deste trabalho foi avaliar a neurotoxicidade e hepatotoxicidade induzidas pela exposição in vitro ao chorume de aterro sanitário em roedores. Além disso, o chorume submetido ao tratamento fotoeletrooxidativo também foi testado em roedores para avaliar a eficiência do tratamento. Nossos resultados demonstraram que o chorume pode induzir estresse oxidativo em estruturas cerebrais e fígado tanto em camundongos quanto em ratos. Nós também observamos que o hipocampo é menos vulnerável ao dano oxidativo induzido pelo chorume do que o estriado e o cerebelo. No entanto, o estriado e o cerebelo, são mais suscetíveis ao dano quando comparados ao fígado. O chorume submetido ao tratamento fotoeletrooxidativo também induziu estresse oxidativo, principalmente, no estriado e no fígado e diminuiu a atividade da enzima glutationa S-transferase no estriado. Adicionalmente, nós podemos sugerir que a fotoeletrooxidação foi incapaz de alterar eficientemente os compostos tóxicos presentes no chorume. / In the last decades, the solid waste has been increasing by great amounts due to world’s population growth together with the expansion of the industrialization. The inadequate treatment of the solid waste constitutes an important environmental problem and can affect the public health. In this context, the landfills are an appropriate alternative for the destination of the waste; however, the confinement followed by decomposition of the solid waste produce a liquid efluent known as leachate. Leachate is a dark liquid formed within landfills with elevated concentrations of chemical compounds. The absense of its treatment may cause severe pollution to the groundwater aquifer and to the adjacent surface waters. Previous studies demonstrated a relationship between the leachate exposure and the increase of free radicals and lipid peroxidation in different organs of rodents, including the brain and liver. Therefore, oxidative stress may be a biochemistry mechanism related to toxicity of xenobiotics such as landfill leachate. In view of the toxicity induced by leachate, the development of new technologies of treatment becomes necessary. In this context, one of the alternatives are the Advanced Oxidation Processes such as the photoelectrooxidative process which is formed by combination of two methods and has a high capacity and speed of degradation. The aim of this study was to evaluate the neurotoxicity and hepatotoxicity induced by in vitro exposure to landfill leachate in rodents. Moreover, leachate submitted by the photoelectrooxidative process was tested in rodents to evaluate the efficiency of the treatment. Our results showed that the landfill leachate can induce oxidative stress in brain structures and liver in both rats and mice. Additionally, we observed that the hippocampus is less vulnerable to oxidative stress induced by leachate when compared to striatum and cerebellum. However, brain structures are more susceptible to oxidative damage compared to liver. Leachate submitted to photoelectrooxidative process also induced increase on oxidative parameters in different structures evaluated, and decreased the glutathione S-transferase activity in striatum. Finally, we can suggest that photoelectrooxidation was unable to alter efficiently the toxic compounds presents in leachate.

Made available in DSpace on 2012-09-05T18:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 144.pdf: 1525597 bytes, checksum: 9f9de0db68622ddd07bb59ea2006609e (MD5) Previous issue date: 2002 / Grande parte dos resíduos produzidos nas cidades brasileiras é disposto em vazadouros a céu aberto e aterros controlados. Além dos resíduos urbanos, resíduos industriais - principalmente não-inertes e inertes - também têm sido encaminhados para estes locais. Freqüentemente, além de não possuírem infra-estrutura adequada, essas áreas localizam-se nas proximidades de núcleos populacionais e ecossistemas importantes. O principal objetivo deste estudo foi determinar a toxicidade de resíduos urbanos e industriais, através de análises químicas e testes de toxicidade com peixes, a fim de se avaliar o potencial de contaminação que essas áreas podem representar como exportadoras de substâncias químicas normalmente presentes em resíduos considerados não perigosos. Resultados dos testes de toxicidade com peixes mostraram alta toxicidade do chorume, com a CL50 na faixa de 2,2 a 5,7 por cento; o que evidencia o grande impacto para a vida aquática ocasionado pelo despejo deste efluente continuamente nos cursos d'água superficiais existentes nas proximidades das áreas de disposição. Análises de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) em amostras de chorume de lixo e de resíduos industriais identificaram, dentre outros, a presença de benzo[a]pireno, benzo[a]antraceno, benzo[b]fluoranteno, benzo[k]fluoranteno, dibenzo[a,h]antraceno e indeno[1,2,3-cd]pireno. Esses compostos são de importância tanto do ponto de vista ambiental como do saúde, por serem substâncias com potencial carcinogênico. Com relação aos resíduos industriais, dos principais parâmetros que contribuíram para a classificação das amostras em resíduos não-inertes pode-se destacar alumínio, ferro, manganês e fenol que, além das suas características de toxicidade, apresentaram concentrações até 300 vezes maiores do que o limite eselecido. Estes resultados indicam que vazadouros e aterros controlados representam importantes focos de contaminação ambiental e humana, uma vez que os resíduos passíveis de serem depositados nessas áreas apresentaram em sua composição substâncias de interesse toxicológico que estão sendo acumuladas e exportadas para outros compartimentos ambientais (principalmente o aquático). Implicando em riscos não só para o ambiente como para a saúde das populações direta ou indiretamente afetadas por essas áreas.

PEREIRA, Márcio Roberto Pinho. Avaliação experimental da atividade antitumoral da vacina peptídica anticâncer (vacina Hasumi®). 2003. 100 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-02T15:55:24Z No. of bitstreams: 1 2003_dis_mrppereira.pdf: 1905896 bytes, checksum: 9896982c8fedf4f22f9b6571e2817001 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-03T15:56:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2003_dis_mrppereira.pdf: 1905896 bytes, checksum: 9896982c8fedf4f22f9b6571e2817001 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-03T15:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003_dis_mrppereira.pdf: 1905896 bytes, checksum: 9896982c8fedf4f22f9b6571e2817001 (MD5) Previous issue date: 2003 / The Hasumi vaccine is based on peptides of plasmatic membrane of tumor cells and a extract of bovine spleen associated with immunostimulants substances. The aim of the present work was to evaluate the possible anticancer effect of the Hasumi vaccine and its mechanism of action in animals inoculated with experimental tumors. For the evaluation of the in vivo antitumoral activity, two groups of female Wistar rats were subcutaneously inoculated with 1.0 X 106 cells of the Walker 256 carcinossarcoma in the armpit area. The groups were subcutaneously vaccinated immediately with 500 µL of Hasumi vaccine (250 µL of peptides) or 500 µL of saline, and then, they received boosters of these doses every other day until their death. It was analyzed their survival function and the volume of tumor growth during the treatment period. The blood of these animals was taken for cell count. Other two groups of rats were also inoculated with 1.0 X 106 cells of the Walker 256 carcinossarcoma but they suffered surgical excision of the tumor 5 days after inoculation. After surgery, they received the same treatment of the above mentioned groups. In another set of experiments, four groups of mice C57BL/6 were inoculated with 1.0 X 106 melanoma B/16 cells maintained in culture. Three groups were subcutaneously vaccinated with 1 µL, 10 µL, 100 µL of Hasumi vaccine (0.006 g, 0.06 g, and 0.6 g of peptides) diluted in 200 µL of saline solution, and the fourth group received only 200 µL of saline. The animals received reinforcements of those doses every 7 days until their death. During the treatment, it was measured the volume of the tumor and the survival time of the animals. Other four groups of mice C57BL/6 were also treated in the same way that the previous groups, however the vaccination were performed by intraperitoneal injection. For the evaluation of the immunogenicity of the Hasumi vaccine, five groups of Swiss mice were immunized with 200 µL (100 µg of peptides) of Hasumi vaccine. Egg-albumine (100 µg) was used as positive control. The results showed that inoculated animals treated with Hasumi vaccine had their tumor partially inhibited. The total blood count revealed the Hasumi vaccine reverted the leukocytes rising observed in control group, suggesting an anti-inflammatory activity of the vaccine. The animals that suffered surgical retreat of the tumor plus vaccination also presented an inhibition of the tumor growth, and an animal was completely cured. The Hasumi vaccine was also active in mice inoculated with melanoma, and the vaccine seemed to be more efficient when injected intraperitoneally. The presence of antibodies IgG1 was verified by the method of PCA, indicating an immune answer of the Th2 type that is favorable to the anti-inflammatory activity, but it was not possible to detect antipeptides antibodies using ELISA assay. Our results suggest that Hasumi vaccine, as the most alike against cancer vaccines, shows an antitumor in vivo activity with some efficiency, suiting an induction of an immune response of Th2 type. / A vacina Hasumi é formada de peptídeos localizados na membrana plasmática de células tumorais e um extrato de baço bovino associado a substâncias imunoestimulantes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o possível efeito anticâncer da vacina Hasumi, e seu possível mecanismo de ação, em animais inoculados com tumores experimentais. Para a avaliação da atividade antitumoral in vivo foram utilizados dois grupos de ratos Wistar fêmeas inoculados com 1,0 X 106 células do carcinossarcoma de Walker 256 via subcutânea na região da axila. Os animais dos grupos controle e tratado foram imediatamente vacinados com 500 µL de vacina Hasumi (3 µg de peptídeos) e 500 µL de salina, respectivamente, pela via subcutânea e receberam reforços dessas doses em dias alternados até sua morte. Os parâmetros avaliados foram a sobrevida e o crescimento tumoral durante o período de tratamento. Amostras de sangue foram coletadas dos animais controles e tratados para a obtenção do hemograma. Outros dois grupos de ratos também foram inoculados com 1,0 X 106 células do carcinossarcoma de Walker 256 mas sofreram excisão cirúrgica do tumor 5 dias após a sua inoculação. Após a cirurgia, receberam o mesmo tratamento dos outros dois grupos acima citados. Em um outro experimento, quatro grupos de camundongos C57BL/6 foram inoculados com 1,0 X 106 células de melanoma B/16 mantido em cultura. Três grupos foram imediatamente vacinados com 1 µL, 10 µL, 100 µL de vacina Hasumi (0,006 µg, 0,06 µg, e 0,6 µg de peptídeos) diluídos em 200 µL de solução salina, e o quarto grupo recebeu 200 µL de salina pela via subcutânea. Todos os camundongos receberam reforços dessas doses a cada 7 dias até a sua morte. Foram avaliados o crescimento tumoral e a sobrevida do animal. Outros quatro grupos de camundongos C57BL/6 também foram tratados da mesma forma que os grupos anteriores, a não ser pela vacinação intraperitoneal. Para a avaliação da imunogenicidade da vacina Hasumi, cinco grupos de camundongos Swiss foram imunizados pela via subcutânea com 200 µL (2,4 µg de peptídeos) de vacina Hasumi para identificação de anticorpos anti-peptídeos. Como controle positivo, outro grupo de camundongos foi imunizado com 100 µg de Ovalbumina. Os ratos inoculados com carcinosarcoma de Walker 256 vacinados tiveram seu tumor parcialmente inibido. O hemograma revelou a ausência de aumento da quantidade de leucócitos 10 dias após a inoculação do tumor nos animais imunizados, sugerindo uma atividade antiinflamatória da vacina. Os ratos que sofreram retirada cirúrgica do tumor de Walker 256 e foram vacinados também sofreram inibição do crescimento do tumor, sendo que um animal ficou completamente curado. Os camundongos inoculados com o melanoma e vacinados pela via intraperitoneal tiveram seu cresimento tumoral inibido de forma significativamente superior quando comparados aos animais vacinados pela via subcutânea em todas as doses testadas. Foi constatado a presença de anticorpos IgG1 anti-peptídeos pelo método do PCA, indicando uma resposta imune do tipo Th2 que é favorável à atividade antiinflamatória, mas não foi possível detectar anticorpos anti-peptídeos pelo método de ELISA. Nossos resultados sugerem que a vacina Hasumi, assim como a maioria das vacinas anticâncer em estudo, apresenta uma atividade antitumoral in vivo com eficiência diferente para cada animal, favorecendo a indução de uma resposta imune do tipo Th2.

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CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O esqueleto quinona foi identificado como um importante grupo farmacofÃrico para atividade citotÃxica de vÃrios compostos utilizados na clÃnica, constituindo ainda uma das maiores classes de agentes anticÃncer. A &#946;-lapachona à uma das quinonas mais estudadas nos Ãltimos anos. Suas aplicaÃÃes mais importantes estÃo relacionadas Ãs aÃÃes contra vÃrias cÃlulas tumorais. Seu derivado, nor-&#946;-lapachona (composto 1), tem atividade anticÃncer similar. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o mecanismo de aÃÃo envolvido na citotoxicidade do composto 1 e de seu derivado nitrofenilamino (composto 2) em cÃlulas leucÃmicas HL-60. Inicialmente foi investigado o efeito desses compostos na viabilidade de cÃlulas HL-60 apÃs 24 horas de incubaÃÃo, mostrando CI50 de 2,92 e 0,48 &#956;M para os compostos 1 e 2, respectivamente. Acerca da seletividade celular, o composto 1 mostrou forte seletividade para cÃlulas tumorais, enquanto que o seu derivado foi apenas parcialmente seletivo. Estudos feitos em cÃlulas HL-60 indicaram que o composto 2 induz morte celular por apoptose como mostrado pelas mudanÃas morfolÃgicas, fragmentaÃÃo do DNA, despolarizaÃÃo da membrana mitocondrial e externalizaÃÃo da fosfatidilserina. Ambos compostos aumentaram a geraÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio (EROs). Nossos resultados sugerem que a introduÃÃo do radical nitrofenilamino na posiÃÃo 3 do anel furano aumenta a citotoxicidade da nor-&#61538;-lapachona em cÃlulas HL-60. Esses achados apontam para o potencial dessas quinonas sintÃticas como modelo para a produÃÃo de novos compostos com propriedades anticÃncer. / The quinone moiety has been identified as an important pharmacophoric group for cytotoxic activity of several compounds clinically used, constituting just one of the major classes of anticancer agents. &#946;-lapachone is one of the most studied quinones in the last years. Its most important applications are related to its action against several cancer cells. Its derivative, nor-&#946;-lapachone (compound 1), has similar anticancer activity. Thus, the aim of this work was to evaluate the mechanism of action involved in nor-&#61538;-lapachone and its nitrophenylamino derivative (compound 2) cytotoxicity in a leukemia cells model of HL-60 cell line. Initially it was investigated the effect of both the compounds on HL-60 cells viability after 24 hours of incubation, showing IC50 values of 2.92 and 0.48 &#956;M to compounds 1 and 2, respectively. Considering the selectivity, compound 1 showed strong selectivity to cancer cells, while its derivative was only partially selective. Studies performed in HL-60 cells, after 24 hours, indicated that compound 2 induces cell death by apoptosis as showed by morphological changes, DNA fragmentation, mitochondrial membrane depolarization and phosphatidylserine externalization. Both tested compounds increased generation of reactive oxygen species (ROS). Our results suggest that a nitrophenylamino radical introduction at position 3 of the furane ring enhances the cytotoxicity of nor-&#61538;-lapachone in HL-60 cell line. These findings highlight the potential of these synthetic quinones as prototypes molecules to produce new compounds with anticancer properties.

A necessidade de se considerar o sedimento na análise da qualidade de corpos de água motivou a realização desse estudo, visando contribuir para o estabelecimento de protocolos de testes com o anfípoda Hyalellla, critérios para a avaliação da toxicidade de sedimentos de água doce e um quadro da situação atual das principais bacias do Estado de São Paulo, em termos ecotoxicológicos. Desta forma, inicialmente, foi comparada a sensibilidade de duas espécies de Hyalella, ou seja H. azteca e Hyalella sp., adotando diferentes substâncias e sedimentos. Também comparou-se a taxa de fecundidade e sobrevivência destas duas espécies em determinadas condições de cultivo. Após a escolha da espécie teste mais adequada, Hyalella azteca, foram avaliadas diferentes condições de cultivo (tipo e quantidade de alimento) e de ensaio (sistema estático e semi-estático, razão de sedimento e água 1:4 e 1:2, os critério de avaliação sobrevivência e crescimento) com amostras de sedimento, apresentando diferentes graus de contaminação. Esse estudo permitiu estabelecer uma condição de cultivo (100 organismos em recipientes com 2,5L de água natural ou reconstituída, a planta aquática Elódea como substrato e, como alimento, ração de coelho granulada mais uma solução de ração de peixe digerida, levedura e óleo de prímula). Esta condição permitiu obter um número médio de jovens/fêmea/semana de H. azteca de 9,2 com um desvio padrão de 2,7. Para avaliar a condição de ensaio que melhor representaria as do ambiente, os resultados dos testes de toxicidade com Hyalella azteca foram comparados com dados químicos e da comunidade bentônica, de amostras coletadas no mesmo local e data. Dessa forma verificou-se que a melhor condição de teste de toxicidade, com a duração de 10 dias, com H. azteca foi em sistema semi-estático com trocas de água a cada dois dias, adotando a razão de sedimento e água de 1:2 e avaliando a mortalidade e o crescimento. A partir desses dados, foram elaborados critérios que expressam classes de qualidade de sedimentos, ou seja: bom, quando o sedimento não apresentou toxicidade; regular, efeito sub-letal (redução do crescimento); ruim, mortalidade <50% e péssimo, mortalidade >=50%. Esse critério foi aplicado nos estudos realizados para avaliação da qualidade dos sedimentos em 12 das 22 das Unidades de Gerenciamento de Recursos Hídricos, para os quais foram compilados e selecionados dados ecotoxicológicos, além de químicos e da comunidade bentônica, quando disponíveis. A análise integrada desses resultados, utilizando classes de qualidade para as variáveis químicas, ecotoxicológicas e índices para a comunidade bentônica, permitiu estabelecer uma melhor avaliação da qualidade dos sedimentos. Além disso, verificou-se a importância de se integrar outros dados, como deformidade em Chironomus e teste de mutagenicidade, para se confirmar ou não a presença e estabelecer possíveis grupos de compostos, que poderiam estar causando impactos na comunidade de organismos que vivem no sedimento. A integração dessas diferentes linhas de evidências é que permitiu o estabelecimento do diagnóstico ou das análises a serem realizadas para se determinar o tipo de agentes estressores que possam estar presentes em um dado local em estudo. Portanto, testes de toxicidade se mostraram úteis e necessários na caracterização e em estudos para avaliar e identificar a qualidade de sedimentos, e devem ser adotados no monitoramento, junto com outras variáveis. / The need to include the sediment evaluation in the quality assessment of surface waters, motivated this study, in order to contribute to the establishment of testing protocols with the amphipod Hyalella, to toxicity evaluation criteria. It was also motivated by a lack of a survey of the São Paulo State freshwater quality sediment watersheds situation in terms of toxicity. Initially, the sensitivity of two Hyallela species, H. azteca and Hyalella sp. (previously named H. meinerti), were compared using different substances and sediment samples. The rates of fecundity and survival of these two species were compared in standardized culture conditions. After the selection of the most suitable species, Hyalella azteca, different culturing conditions (food type and quantity) and assays design (semi-static and static system, water/sediment ratio 1:2 and 1:4, evaluation criteria for survival and growth) were studied using sediment with different contamination levels. The best culturing conditions were: 100 organisms/2.5 liters of natural or reconstituted water; the aquatic plant Elodea as substrate and rabbit granulated food plus a mixture of digested fish food, yeast and primula oil. Adopting this culturing conditions it was possible to obtain 9.2 juvenile Hyalella azteca for each female/week with a standard error of 2.7 for around three months. In order to evaluate the best test conditions, the toxicity tests results were compared with chemical analysis and benthic community data. These results were obtained with samples collected in the same sites and at the same time. The analyses of the results showed that the best condition for 10 days exposition time was semi-static system with water exchange every two days, 1:2 sediment/water ratio and evaluation of mortality and growth as endpoints. Based in these results, a toxicity criteria that express sediment quality classes were elaborate. The classes established were: good, when the sediment was non toxic, regular when sublethal effect were observed (growth reduction), bad, when the mortality was less than 50% and extremely bad, when mortality was equal or greater than 50%. These criteria were applied to analyze toxicity data from different sediment quality studies performed in 12 from the 22 Freshwater Watershed Management Units of São Paulo State that were compiled and selected, using ecototoxicological, chemical and benthic community data when available. Only using sediment classes for these three variables it was possible to establish the sediment quality of the survey data. Other variables (benthic deformities and mutagenicity) were considered important to confirm, or not, the presence and establish the possible chemical groups that could be causing effects on benthic organisms. Only by the integration of these different evidence lines it was possible to define the sediment quality or which analyses should to be done in order to point out the stressor types that could be present at the studied sites. The conclusion was that toxicity tests with aquatic organisms are reliable and necessary for the quality evaluation and identification of toxicity of the sediments and should be used in monitoring studies together with other tools.

O presente trabalho teve como objetivo analisar a qualidade da água das represas de captação do Ribeirão das Anhumas e do Ribeirão das Cruzes, bem como da água tratada da estação de tratamento Fonte Luminosa, no município de Araraquara (SP). Para tanto, foram realizadas análises das características físicas, químicas e biológicas da água, estudo de comunidade fitoplanctônica, e testes de toxidade aguda e crônica com o microcrustáceo Ceriodaphnia silvestrii (Cladocera, Crustacea). O período de estudo foi de dezembro de 2000 a novembro de 2001. Na água da represa da Ribeirão das Anhumas, a concentração de oxigênio dissolvido foi, em geral, inferior ao limite estabelecido pela legislação para águas naturais. Tanto na água da represa do Ribeirão das Cruzes como em Anhumas, alguns metais apresentaram concentrações superiores ao limite estabelecido pela legislação para águas naturais. Na água tratada, alguns metais também apresentaram concentrações superiores ao limite estabelecido pela legislação para água potável. As águas das represas de captação não causaram toxicidade aguda nem crônica ao organismo-teste. A água da entrada (após aplicação de cal) da estação de tratamento causou efeitos crônicos principalmente sobre a fecundidade do organismo-teste. A água tratada causou toxicidade aguda e crônica ao organismo-teste. As diatomáceas (Bacillariophyceae) foram dominantes na represa do Ribeirão das Cruzes e, principalmente, em Anhumas. As algas Chlorophyceae foram as mais abundantes na água tratada em ambos os períodos estudados. / The present work analysed the water quality of the reservoirs Ribeirão das Cruzes and Ribeirão das Anhumas, used to store and supply water for the Fonte Luminosa water treatment plant, in Araraquara, SP. For that, physical, chemical and biological analyses of water were performed, as well as a study of phytoplankton community. The work also included acute and chronic toxicity testing of the water before and after treatment with the microcrustacean Ceriodaphnia silvestrii (Cladocera, Crustacea) as a test organism. The period of study was between December/2000 to November/2001. Dissolved oxygen was below the established limit by legislation for natural waters at the Ribeirão das Anhumas reservoir. Some metals in the Ribeirão das Anhumas and Ribeirão das Cruzes reservoirs were over the established limit by legislation for natural waters. Some metaIs in treated water were also over legislation for potable water. Reservoir waters did not cause neither acute nor chronic toxicity on test organism. Water with lime, from water treatment plant, caused chronic effects on the reproduction of the test organism. Treated water cause acute and chronic toxicity on test organism, with harmful effects on survival and reproduction. Diatoms (Bacillariophyceae) dominated in the phytoplankton of Ribeirão das Cruzes and Ribeirão das Anhumas reservoirs. Chlorophyceae were the most abundant algae in treated water.