A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T20:33:01Z : No. of bitstreams: 1 rossignoli_ps_me_botib.pdf: 490866 bytes, checksum: f176efec33b6a37dac4112f62d7e9225 (MD5) / A aromatização da testosterona a estradiol é essencial para a diferenciação sexual do cérebro, o qual está organizado intrinsecamente no tipo feminino, organizando-o então no tipo masculino. Trabalhos em nosso laboratório, no entanto, apontam para existência de vias metabólicas adicionais para os androgênios neste processo, sugerindo a atuação do hormônio masculino per se. Dessa forma, no presente estudo investigou-se o papel da testosterona, durante a fase crítica de diferenciação sexual hipotalâmica, em ratos machos. Para isso, ratas Wistar prenhes receberam 15mg/kg/dia do anti-androgênico flutamida (grupo Flutamida) ou óleo de amendoim (grupo Controle), s.c., no 19º e no 22º dias de gestação, bem como durante os cinco primeiros dias após o parto. Foram avaliados efeitos imediatos e, principalmente, tardios do bloqueio androgênico sobre parâmetros reprodutivos, sexuais e de desenvolvimento físico da prole masculina. Assim, a exposição perinatal a flutamida levou à redução do peso corporal ao desmame, aumento do peso corporal ao atingir a puberdade, redução da distância anogenital (DAG) ao nascimento, retardo para a instalação da puberdade, diminuição dos pesos úmidos dos testículos e da próstata ventral, aumento do peso úmido do epidídimo e menor índice gônado-somático na vida adulta. Fêmeas não tratadas acasaladas com os machos do grupo Flutamida apresentaram reduzidas taxas de implantação, maiores taxas de perdas pré-implantação e baixa taxa de fertilidade, resultando em reduzido número de descendentes. Frente a uma fêmea receptiva normal, os animais do grupo Flutamida apresentaram maior latência para o início da cópula, realizaram maior número de montas sem intromissão peniana, maior número de intromissões até a 1ª ejaculação, com maior latência para a 1ª ejaculação, além de não ejacularem ou ejacularem... / Studies in our laboratory indicate the existence of additional pathways for androgens in THE process of sexual differentiation, suggesting the importance of the male hormone per se. Thus, the present study investigated the role of testosterone during the critical phase of sexual differentiation of hypothalamus in male rats. Therefore, pregnant Wistar rats received 15mg/kg/day of flutamide (Flutamide group) or peanut oil (Control group), s.c. at day 19 of pregnancy and for the first five postnatal days. The perinatal exposure to flutamide led to a reduction in body weight at weaning, aN augmentation in body weight at puberty, reduction in anogenital distance at birth, delay in the puberty installation, decrease in wet weight of testes and ventral prostate, increase in wet weight of epididymis and decrease in gonadosomatic index. Normal females mated with treated males presented more pre-implantation losses, reduced implantation rates, and consequently reduced offspring size. Flutamide group showed increases in latency to copulatory behavior, number of mounts without penis intromission, number of intromissions until ejaculation, latency to ejaculation, and reduced number of ejaculations. after Castration followed by estrogenization, 45.5% of the animals took lying down the mounts of a non-experimental male. Flutamide treated rats presented reductions in percentage of normal spermatozoa, spermatozoa concentration, and daily testicular sperm production. The height of the epithelium of the ventral prostate was not altered by treatment, although there was a 10% reduction in cell nuclei prostatic epithelial marked positively for androgen receptor (AR) and a 60% reduction in plasma testosterone during the adulthood. Thus, the present results indicated that perinatal androgen blockage damaged differentiation process of the brain and peripheral reproductive structures.Thus, the binding of ... (Complete abstract click electronic access below)

Os esteróides sexuais (andrógenos e estrógenos) são importantes reguladores do metabolismo ósseo em machos e fêmeas, respectivamente. A Testosterona, o hormônio andrógeno natural, predominante no sexo masculino, tem papel fundamental em relação à manutenção da massa óssea, pela sua ação sistêmica. O objetivo deste trabalho foi avaliar histologicamente a ação do Propionato de Testosterona (PT) sobre o tecido ósseo, aplicado de forma tópica na tíbia de ratos machos, observando a regeneração óssea e, se ele promove aceleração nesta regeneração. Defeitos ósseos de 1,5mm de diâmetro, foram realizados nas duas tíbias de 30 ratos, sendo que 15 haviam sido castrados previamente e os outros 15 não. Após randomização, numa das tíbias do grupo experimental foi aplicado esponja de colágeno (Gelfoan®(G))+PT e na outra G+Óleo Mineral (OM). No grupo controle, uma das tíbias recebeu apenas Gelfoan e na outra foi realizado apenas o defeito ósseo. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados aos 15 e 30 dias pósoperatórios, e os dos grupos controle, foram sacrificados aos 15 dias pós-operatórios. Os ratos que foram sacrificados aos 30 dias receberam duas aplicações das substâncias em avaliação. Realizou-se análise macroscópica das peças, além das análises histológicas descritiva/comparativa e descritiva semi-quantitativa. Com relação a formação de osso entre as corticais (cicatrização do defeito ósseo criado), tanto G isolado como G+PT ou G + OM, apresentaram diferentes graus de cicatrização óssea entre os diferentes grupos: castrados e não castrados, sacrificados aos 15 dias pós-operatórios e aos 30 dias. Foi achado que o grupo castrado sacrificado aos 15 dias que recebeu G+PT teve cicatrização óssea, contrariamente ao grupo não castrado que não cicatrizou. Também no grupo castrado sacrificado aos 30 dias pós-operatórios observou-se formação de osso lamelar, estruturado nos animais tratados com G+PT. Pode-se dizer que o PT tópico nestes grupos contribuiu para neoformação óssea. Concluiu-se que: 1°) em dois grupos experimentais o PT teve melhores resultados, mas os dados obtidos não permitem uma conclusão definitiva; 2°) a Testosterona empregada de forma tópica mostrou-se promissora quanto a ativação da regeneração óssea; 3°) o Propionato de Testosterona não parece ser a forma farmacêutica mais apropriada, devido a sua forma de liberação muito lenta do hormônio e conseqüente pouca eficiência, devendose utilizar como alternativas para aplicação da Testosterona, a mesma diluída em outro veículo e introduzida nos defeitos através de cápsulas de lisina tricalcio fosfato calcinado ou através de implantes combinando a Testosterona com partículas de poly(D,L-(lactide-co-glycolide)) conforme verificado na literatura. Estes resultados obtidos merecem ser aprofundados e aperfeiçoados, utilizando curvas dose-resposta, outros preparados de Testosterona e tempos distintos.

Resumo não disponível

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Banca: Lara Silvia Corradi Olhê Blanck / Banca: Ana Claudia Polli Lopes / Banca: Sérgio Luis Felisbino / Banca: Luis Antonio Justulin Junior / Resumo: A crisina é um composto natural biologicamente ativo encontrado predominantemente em flores de maracujá azul, em mel, camomila, própolis e casca de frutas. Possui propriedades potentes como efeito anti-inflamatório, antioxidante e tem sido empregada para o tratamento de desordens reprodutivas. Essa flavona tem o potencial de aumentar os níveis de testosterona endógena, tanto por inibir a enzima aromatase, quanto por estimular a esteroidogênese testicular. Alterações no metabolismo hormonal mediadas por interferências exógenas podem interferir na fisiologia prostática resultando em modificações na atividade secretora da glândula e na regulação dos receptores hormonais. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da exposição à crisina sobre a próstata e gônadas de gerbilos adultos. Para avaliar o potencial androgênico da crisina, nós analisamos, comparativamente, os efeitos da testosterona sobre estes mesmos órgãos. Machos e fêmeas de gerbilos com 90 dias de idade foram tratados com crisina (50 mg/kg/dia) ou com cipionato de testosterona (1 mg/kg/semana) e divididos tem 3 subgrupos que foram eutanasiados após 3, 7 e 21 dias de tratamento. As próstatas foram coletadas para análises morfológicas, morfométrico-estereológicas, imuno-histoquímicas e ultraestruturais. Testículos e ovários foram submetidos a análises morfológicas e morfométrico-estereológicas. Os níveis séricos de testosterona e 17β-estradiol foram mensurados por ELISA. Machos e fêmeas tratados com crisina... / Abstract: Chrysin is a naturally occurring biologically active compound found predominantly in blue passion flower, honey, chamomile, propolis and fruit peel. It has potent anti-inflammatory and antioxidant properties and has been used for the treatment of reproductive disorders. This flavone has the potential to increase endogenous testosterone levels both by inhibiting the aromatase enzyme and stimulating testicular steroidogenesis. Changes in hormone metabolism mediated by exogenous interferences may interfere with the prostatic physiology resulting in changes in the secretory activity of the gland and in the regulation of hormonal receptors. Thus, the objective of this study was to evaluate the effects of the exposure to chrysin on the prostate and gonads of adult gerbils. To evaluate the androgenic potential of chrysin, we comparatively analysed the effects of testosterone on these organs. Male and female gerbils aged 90 days were treated with either chrysin (50 mg/kg/day) or testosterone cypionate (1 mg/kg/week), subdivided into 3 subgroups and euthanized after 3, 7 and 21 days of treatment. The prostates and gonads were collected for morphological, morphometric-stereological, ultrastructural and immunehistochemical analyses. The testes and ovaries were subjected to morphological and morphometric-stereological analyses. Serum levels of testosterone and 17β-estradiol were determined using ELISA methods. Males and females treated with chrysin did not show increase in serum ... / Doutor

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Co-orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Estela Sasso Cerri / Banca: Hernandes Faustino de Carvalho / Banca: Francisco Humberto Nociti Junior / Banca: Giuseppe Alexandre Romito / Resumo: A hipótese deste trabalho é que hormônios sexuais participam da etiopatogenia da doença periodontal (DP). Diferentes níveis de evidência científica testaram esta hipótese, avaliando: i. associação entre hormônios sexuais e DP em homens; ii. a influência de níveis sub- e suprafisiológicos de testosterona (T) sobre a DP em ratos; iii. se este mecanismo de ação envolve respostas de osteoblastos e osteoclastos in vitro. Dados do III NHANES relacionados com diagnóstico de DP e mensuração hormonal em homens com 30+ anos foram analisados para correlacionar estas duas variáveis. Em ratos, níveis subfisiológicos foram alcançados através da orquiectomia e níveis suprafisiológicos pelo tratamento com T. Metade dos animais em cada grupo foi submetida à DP utilizando-se modelo de ligadura. In vitro, células RAW264.7 foram diferenciadas em osteoclastos na presença de T (1nM-1μM) e identificados por TRAP. Cultura primária de osteoblastos murinos foi utilizada para avaliar a expressão de osteocalcina, RANKL e OPG na presença de T. Em homens, altos níveis de T biodisponível e baixa razão estradiol:T se correlacionaram significativamente com DP. Em idosos, baixos níveis de AAG, metabólito da dihidrotestosterona, também apresentaram correlação significativa. Em ratos, níveis sub- e suprafisiológicos de T aumentaram significativamente a perda óssea e modularam a expressão de citocinas inflamatórias. In vitro, doses fisiológicas de testosterona preveniram a osteoclastogênese e diminuíram a expressão de osteocalcina, RANKL e razão RANKL:OPG por osteoblastos. Concluiu-se que a T modula a resposta do hospedeiro à DP no sexo masculino, regulando a diferenciação de osteoclastos direta e indiretamente (via osteoblastos). / Abstract: The hypothesis of this work is that sex hormones participate in the etiopathogenesis of periodontal disease (PD). Different levels of scientific evidence tested that hypothesis, evaluating: i. The association between sex hormones and PD in men; ii. The influence of sub- and supraphysiologic testosterone (T) levels on PD in rats; iii. If that mechanism of action involves osteoblast and osteoclast responses in vitro. Data from NHANES III related to diagnosis of PD and hormones measurement in 30+- year-old men were assessed to correlate those two variables. In rats, subphysiologic levels were obtained by orchiectomy and supraphysiolgic levels by T treatment. Half of the animals in each group received PD using a ligature model. In vitro, RAW264.7 cells were differentiated into osteoclastos in the presence of T (1nM-1μM) and identified by TRAP-staining. Murine osteoblast primary culture was used to evaluate the expression of osteocalcin, RANKL and OPG in the presence of T. In men, high levels of bioavailable T and low estradiol:T ratio significantly correlated with PD. In older men, low levels of AAG, a metabolite of dihydrotestosterone, also presented a significant correlation. In rats, low and high T levels significantly increased bone loss and modulated the expression of inflammatory cytokines. In vitro, physiologic T doses prevented osteoclastogenesis and decreased the expression of osteocalcin, RANKL and RANKL:OPG ratio produced by osteoblasts. We concluded that T modulates host response to PD in males, regulating osteoclast differentiation direct and indirectly (through osteoblasts). / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-04Bitstream added on 2014-06-13T20:10:01Z : No. of bitstreams: 1 crespilho_dm_me_rcla.pdf: 275859 bytes, checksum: 7d173afbc11a2f0b83977a420734397e (MD5) / Secretaria de Estado de Educação / Os objetivos do presente estudo foram investigar as adaptações endócrinometabólicas em ratos submetidos ao exercício físico de natação associado com a administração de testosterona durante 8 semanas. Ratos jovens Wistar foram divididos em 4 grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), testosterona sedentário (TS), testosterona treinado (TT). O protocolo de natação consistiu de 1 hora/dia, 5 dias/semanas, durante 8 semanas, suportando durante a natação uma sobrecarga de 5% do seu peso corporal. A testosterona foi administrada 3 dias/semana, na concentração de 5 mg/kg de peso corporal do animal, por via subcutânea, também por 8 semanas. Ao final da sétima semana de experimento, os ratos foram submetidos aos testes de tolerância à glicose (GTT) e teste de tolerância à insulina (ITT). Após 10 semanas os animais foram sacrificados na condição de repouso. Amostras de sangue foram coletadas para a determinação do hematócrito, glicose, insulina, proteínas totais, colesterol total e triglicérides. Os testículos, a próstata e vesícula seminal, os tecidos adiposos foram analisados em balança analítica. O tecido muscular e hepático foram usados para determinação do glicogênio e da razão proteína/DNA. As adrenais foram pesadas e usadas para determinar o conteúdo de colesterol e ácido ascórbico. A análise estatística foi feita por ANOVA e aplicação do teste de post-hoc de Newman-Keuls, onde adequado, com nível de significância pré-fixado em 5%. Os resultados indicam que os ratos treinados tiveram maior tolerância à glicose comparados com os animais sedentários durante o GTT. Nossos dados mostram que a administração crônica da testosterona mais o treinamento físico foi associada ao aumento da sensibilidade à insulina.O grupo treinado administrado com testosterona mostrou uma maior taxa de desaparecimento... / The aims of this study were to investigate the endocrine-metabolic adaptations in rats submitted to chronic swimming exercise associate to administration of testosterone during 8 weeks. Young Wistar rats were divided into four groups: sedentary control (CS), trained control (CT), sedentary testosterone (TS), trained testosterone (TT). Training protocol consisted of swimming 1h/day, 5 days/week, during 8 weeks, supporting a load of 5% body weight. Testosterone was administered 3 times a week, in concentration of 5 mg/kg body weight, during 8 weeks. After 7 weeks rats were submitted to glucose (GTT) and insulin (ITT) tolerance tests. After 8 weeks rats were sacrificed in rest. Blood samples were collected to determine hematocrit, glucose, insulin, total protein, total cholesterol and triglyceride. Hepatic and muscular tissues were used to determine glycogen and protein/DNA ratio. Adrenals were weighed and used to determine cholesterol and ascorbic acid contents. The results were analyzed by ANOVA and Newman- Keuls post-hoc test where appropriate and the significance level was 5%. The results indicate that trained rats showed higher glucose tolerance compared to sedentary animals during GTT. Our data showed that chronic exposure to testosterone plus physical training was associated with increase insulin sensitivity. The animals trained and administered with testosterone, showed higher glucose disappearance rates when compared to other groups. Testosterone administration promoted decrease in testicular mass and increase in prostate and seminal vesicle. Training promoted increase in muscle when compared to the sedentary groups, taking us to presuppose that training stimulated glycogen syntheses. The training protocol, testosterone administration or combination of two treatments, resulted in decrease of epididimal and perirrenal adipose tissues weight... (Complete abstract click electronic access below)

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

A testosterona é um hormônio esteróide androgênico responsável pelas características masculinas, com importante função na fisiologia testicular. A nandrolona é um esteróide sintético derivado da testosterona, com ação anabólica e androgênica. A catequina é um flavonóide encontrado em frutas e chás, que possui efeito antioxidante, anticarcinogênico e antienvelhecimento no organismo. Estudos mostram um possível mecanismo de ação destes esteróides e do flavonóide como agonistas do receptor androgênico de membrana. Objetivo: Verificar a ação não-clássica de andrógenos (testosterona, nandrolona) e catequina nas células de Sertoli de ratos Wistar imaturos. Materiais e Métodos: Eletrofisiologia: O potencial de membrana foi registrado utilizando túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares preenchidos com KCl 3mmol/L acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica do esteróide testosterona (1M), nandrolona (0.1, 0.5 e 1 M) e do flavonóide catequina (0.1, 0.5 e 1, M) isoladamente e também após a perfusão com a flutamida (1M), diazoxida (100 M) e U73122 (1 M). Captação de 45Ca2+: Os testículos (n=5) foram pré incubados em KRb com 45Ca2+ por 60 minutos para equilibrar o meio intra e extra-celular de 45Ca2+após o equilíbrio, as gônadas foram incubadas por 5 minutos em KRb com 45Ca2+ com ou sem nandrolona (1μM) ou catequina. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados da variação do potencial de membrana foram analisados pelo teste T student e ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. Resultados: A testosterona (1M) produziu uma resposta despolarizante sobre o potencial de membrana (PM) alterando de -44,62±0,53mV para -41,41 ±0,81* mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,05) (n=9 células de Sertoli). Esta resposta despolarizante foi observada mesmo após a perfusão com flutamida (1M). A catequina (1M) causou uma resposta de despolarização semelhante à da testosterona, alterando o PM de -40,20 ± 0,51 mV para -35,62 ± 1,07mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,001) (n=9 células de Sertoli). A nandrolona (1μM) provocou uma despolarização alterando o PM de -38,20 ± 0,71 para -33,42± 0,63 *p<0,05. A resposta da catequina e de nandrolona foi observada em diferentes doses e mesmo após a perfusão com flutamida (1M), diazoxida (100μM) e U73122 (2μM) anularam o efeito de nandrolona (1μM) e catequina (1μM). A nandrolona e catequina produziram aumento na captação de 45Ca2+ em 5 minutos de incubação em testículos de ratos imaturos. Conclusão: Os andrógenos testosterona, nandrolona e o flavonóide catequina apresentam uma ação despolarizante sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos Wistar, observada mesmo após o bloqueio do receptor de andrógenos intracelular (flutamida). A perfusão com U73122(bloqueador de PLC) e a perfusão com diazoxida (agonista do canal de K+ATP) anulou o efeito de nandrolona e catequina, indicando a participação da PLC e de canais de K+ATP na resposta despolarizante observada. Estes resultados indicam que nandrolona e catequina atuam em um receptor de andrógenos de membrana, assim como a testosterona, agindo através de uma via não-clássica sobre as células de Sertoli de testículos de ratos. / Testosterone is an androgenic steroid hormone responsible for male characteristics, with an important role in testicular physiology. The synthetic steroid nandrolone ia an anabolic and androgenic derivative of testosterone, Catechin is a flavonoid found in fruits and teas, which have antioxidant, anticarcinogenic and anti-aging effects in the body. Studies show a possible mechanism of action of these steroids and flavonoid as agonists of the androgen receptor membrane. Objective: The aim of this work is to investigate the non-classical effect of androgens (testosterone, nandrolone) and catechin in Sertoli cells from immature rats. Materials and Methods: Electrophysiological experiments: The membrane potential was recorded using isolated seminiferous tubules of testes of rats 15 days old. The intracellular recording of Sertoli cell was performed using microcapillary filled with KCl 3mmol/L coupled to an electrometer. We performed a topical application of testosterone (1M), nandrolone (0.1, 0.5 and 1M) and the flavonoid catechin (0.1, 0.5 and 1M) alone and also after infusion with flutamide (1M), diazoxide (100M) or U73122 (1M). 45Ca2+ uptake : The testes (n=5 in each group) are pre-incubated in KRb with 45Ca2+ (2.7kBq/sample) for 60 min in a Dubnoff metabolic incubator to equilibrate intra- and extracellular 45Ca2+ levels until they reached a plateau. Following equilibration, the gonads were incubated for 5 min in KRb with 45Ca2+, with or without nandrolone (1 μM) or catechin.The results were given as mean ± SEM. The data of the change in membrane potential were analyzed by ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. Results: Testosterone (1M) produced a depolarizing response in the membrane potential (MP) by changing from -44.62 ± 0.53 mV to -41.41 ± 0.81 mV *, at 120 seconds after application (* p <0.05) (n = 9 Sertoli cells.) This depolarizing response was observed even after perfusion with flutamide (1M). Catechin (1  M) showed a similar response to depolarization of testosterone, changing the PM of -40.20 ± 0.51 mV to -35.62 ± 1.07 mV at 120 seconds after application (* p <0.001) (n = 9 Sertoli cells) after its application. The nandrolone (1μM) showed a depolarization of the PM changing -38.20 ± 0.71 to -33.42 ± 0.63 * p <0.05. The response of catechin and nandrolone was observed at different doses and even after perfusion with flutamide (1M). diazoxidae (100μM) and U73122 (2μM) nullified the effect of nandrolone (1μM) and catechin (1μM). Nandrolone and catechin increase 45Ca2+ uptake within 5 minutes of incubation with immature testes. Conclusion: The androgen testosterone, nandrolone and flavonoid catechin have a depolarizing action on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats, observed even after the blockade of intracellular androgen receptor. The U73122 infusion and perfusion with diazoxide nullified the effect of nandrolone and catechin, indicating the involvement of PLC and K+ATP channels in depolarizing response observed. These results indicate that nandrolone and catechin act on an androgen membrane receptor, as well as testosterone through a non-classical pathway on Sertoli cells from rat testes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Kelly Marques (pereira.kelly@gmail.com) on 2009-11-05T16:27:50Z No. of bitstreams: 1 2008_AmandaDanyelleAmorimCaldas.pdf: 510359 bytes, checksum: fb1c4588e47691f96e0c3c6e50ee44a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-21T20:01:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AmandaDanyelleAmorimCaldas.pdf: 510359 bytes, checksum: fb1c4588e47691f96e0c3c6e50ee44a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-21T20:01:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AmandaDanyelleAmorimCaldas.pdf: 510359 bytes, checksum: fb1c4588e47691f96e0c3c6e50ee44a4 (MD5) Previous issue date: 2008 / A síndrome metabólica (SM) situa-se entre os transtornos metabólicos mais comuns da atualidade. No eixo gonadotrófico, pode associar - se a estado de hipogonadismo masculino. Neste trabalho, avaliou - se a freqüência de hipogonadismo em homens portadores de síndrome metabólica e sua relação com a insulina, posteriormente, avaliou - se o efeito do tratamento com um sensibilizador de insulina (metformina) sobre a função gonadal. A primeira parte do estudo foi analítica, retrospectiva e transversal cujos sujeitos foram estratificados em dois grupos segundo as concentrações de testosterona total: grupo 1: 300 ng/dl (função gonadal normal) e grupo 2: <300 ng/dl (hipogonádicos). A segunda parte constituiu – se em estudo analítico, prospectivo, de intervenção, do tipo estudo de casos em homens portadores de síndrome metabólica. Dos 80 homens avaliados, trinta porcento apresentaram baixas concentrações de testosterona total (grupo 2). Esse grupo, quando comparado ao grupo 1, apresentou valores mais elevados de IMC, circunferência do quadril e da cintura, insulina, Homa-IR, Homa- e triglicerídeos, mas valores menores de SHBG e testosterona livre. Observou-se correlação inversa da insulina com a testosterona total e SHBG e do Homa-IR com a testosterona total. O tratamento com a metformina foi efetivo em aumentar as concentrações de testosterona total e livre e reduzir as concentrações de insulina e Homa IR em ambos os grupos. Concluiu - se que a freqüência de hipogonadismo masculino associado à síndrome metabólica é considerável e essa condição pode ser um marcador de pior perfil metabólico com acentuada resistência à insulina. Portanto, deve ser sempre investigada em portadores da síndrome metabólica. O uso da metformina no tratamento do hipogonadismo masculino é promissor e maiores estudos de intervenção são necessários para sua análise. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Metabolic syndrome is among the most common metabolic disorders nowadays. In the gonadotrophic axis, it can be associated with the state of male hypogonadism. The objectives. were evaluate the incidence of hypogonadism in males with metabolic syndrome and its correlation with insulin, then evaluate the effect of the treatment with an insulin sensitizer (metformin) on the gonadal function. The first part of the study was analytical, retrospective and transversal. The selected patients were stratified into two groups according to levels of total testosterone: Group 1: 300 ng / dL (normal gonadal function) and group 2: <300 ng / dL (hypogonadic). The second part was an analytical, prospective and interventional study, of the kind study case in male patients with metabolic syndrome. Of the 80 males evaluated, 30% presented low concentration of total testosterone (group 2). This group, when compared to group 1, presented higher IMC values, waist and hip circumference, insulin, Homa-IR, Homa- and triglycerides, presenting, however, lower SHBG and free testosterone values. Inverse correlations of the insulin with total testosterone and SHBG and of the Homa-IR with total testosterone were observed. The treatment with metformin was effective in increasing concentrations of total and free testosterone and in reducing the concentrations of insulin and HOMA IR in both groups. The incidence of male hypogonadism associated with the metabolic syndrome is sensible and can be a sign of worse metabolic profile with accentuated resistance to insulin. Therefore, it should always be investigated in patients with metabolic syndrome. The use of metformin in the treatment of male hypogonadism is promising and further intervention studies are needed for its analysis.