Resumo não disponível.

Orientador: Agnaldo Bruno Chies / Coorientador: Oduvaldo Câmara Marques Pereira / Banca: Liliam Fernandes / Banca: Carlos Alan Cândido Dias Junior / Banca: André Sampaio Pupo / Banca: Osni Lázaro Pinheiro / Resumo: As repercussões fisiológicas da redução a longo prazo dos níveis plasmáticos de testosterona têm sido sistematicamente estudadas, uma vez que retratam algumas situações clínicas comumente observadas em homens, tais como o hipogonadismo e o envelhecimento. Um dos importantes alvos das ações androgênicas é o sistema cardiovascular. Particularmente, existe uma importante lacuna de conhecimento em relação à ação da testosterona em leitos venosos. Observamos anteriormente que a orquidectomia promove aumento das ações vasomotoras da fenilefrina em veia porta de rato e que mecanismos relacionados à endotelina-1 poderiam estar envolvidos neste fenômeno. Assim, o objetivo do presente trabalho foi estudar a influência da orquidectomia, seguida ou não de reposição hormonal com testosterona, sobre as respostas vasomotoras de diferentes veias isoladas de rato a agonistas simpatomiméticos. Para isto, utilizaram-se ratos Wistar machos adultos controles e orquidectomizados, seguidos ou não de reposição hormonal (propionato de testosterona, 10mg/kg, i.p., por 3 semanas, com intervalo de 5 dias entre as doses). Destes animais, anéis (4-5 mm) de veias pulmonar, renal, femoral, mesentérica, assim como de artérias, pulmonar, femoral, mesentérica, aorta torácica e abdominal foram estudados em cubas de órgão isolado. Obtiveram-se curvas concentração-resposta para fenilefrina, noradrenalina, clonidina, metoxamina, assim como para endotelina-1, calculando-se pEC50 e resposta máxima (Rmax). Além disso, determinou-se a expressão do mRNA para endotelina-1 e para os receptores ETA e ETB. Os resultados mostraram que a orquidectomia seguida ou não de reposição hormonal não alterou a capacidade contrátil de veia porta frente à clonidina e metoxamina, tampouco frente à noradrenalina na presença de timolol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The physiological repercussions of a long term reduction in testosterone levels have been systematically investigated, once it can be related with some clinical situations frequently seen in men such as hypogonadism and aging. One of the most important targets of androgen actions is the cardiovascular system. However, androgenic actions upon this system remain controversial especially in venous bed. We have previously observed that orchidectomy induces an increase in vasomotor responses of phenylephrine in rat portal vein. Probably mechanisms related to endothelin-1 could be involved in this phenomenon. Thus, the presented study aimed to investigate the influence of orchidectomy, followed or not by testosterone replacement, upon the response of different isolated veins to sympathomimetic agonists. In this manner, we used control and orchidectomized adult male Wistar rats, with the latter group followed or not by testosterone replacement (testosterone propionate, 10mg/kg, i.p., for 3 weeks, with 5-day intervals between the doses). Rings (3-4 mm) of pulmonary, renal, femoral and mesenteric veins and pulmonary, femoral and mesenteric arteries, as well as thoracic and abdominal aorta were studied in organ baths. Concentration-response curves were obtained to phenylephrine, norepinephrine, clonidine, methoxamine, and to endothelin-1. The maximum response (Rmax) and EC50 were calculated. Furthermore, we determined the mRNA expression of endothelin-1 and the ETA and ETB receptors. The results showed that orchiectomy, followed or not by testosterone replacement did not alter the contractile response of portal vein to clonidine and methoxamine, either face to noradrenaline in the presence of timolol (10-6M) or timolol (10-6M) + yohimbine (10-6M). However, although modifications of portal vein responses to endothelin-1 were not induced by orchidectomy... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-04T12:30:36Z No. of bitstreams: 2 andre_olimpio_martins.pdf: 2403767 bytes, checksum: 4b49a301c8017ae8a0db22438d3dbb77 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-04T12:31:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 andre_olimpio_martins.pdf: 2403767 bytes, checksum: 4b49a301c8017ae8a0db22438d3dbb77 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-04T12:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 andre_olimpio_martins.pdf: 2403767 bytes, checksum: 4b49a301c8017ae8a0db22438d3dbb77 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / A Corrida de aventura ? uma competi??o praticada em contato com a natureza, na qual o competidor utiliza obst?culos naturais para a pr?tica de v?rias modalidades esportivas combinadas. O cortisol salivar (CT) pode ser utilizado como biomarcador do estresse e estados catab?licos. A concentra??o salivar de testosterona (TT) pode representar um marcador de estado anab?lico do, j? que seus efeitos fisiol?gicos est?o relacionados com o repara??o tecidual. A propor??o entre a atividade anab?lica/catab?lica pode ser dada pela an?lise da raz?o testosterona/cortisol (T/C). O objetivo deste trabalho foi quantificar as concentra??es de CT e TT de participantes de uma corrida de aventura, para determina??o do impacto fisiol?gico deste tipo de prova. O estresse e a recupera??o dos atletas foram inferidos pela an?lise da concentra??o de CT e TT e da T/C, 1 semana antes da competi??o (dia 1), 1 dia antes da competi??o (dia 2), no dia da competi??o (dia 3) e 1 dia ap?s a competi??o (dia 4). Frequ?ncia card?aca e VO2m?x foram registrados para avalia??o da intensidade de esfor?o da prova. As concentra??es de CT para o dia 2 e 3, n?o se elevaram em rela??o ?s concentra??es apresentadas no dia 1. Entretanto, no dia 4, as concentra??es de CT foram superiores em compara??o ?s concentra??es dos dias 1, 2 e 3. O ritmo TT normal foi observado nos 04 dias analisados e n?o foi observada varia??o nas concentra??es de TT. A raz?o T/C apresentou-se diminu?da no dia 4 em compara??o ao dia 1. Os resultados mostraram que a T/C apresentou-se reduzida em mais de 75% no dia 4. Conclus?es: 1. Corrida de aventura ? um evento multiesportivo de alta intensidade de esfor?o f?sico e desafia homeostase e alostase corporais; 2. O esfor?o do treinamento e da competi??o possivelmente mostrou-se desajustado ao preparo f?sico dos atletas analisados, j? que, o ritmo CT observado, tanto no per?odo pr?, quanto no p?s-competi??o, indicou estados de exaust?o e catabolismo intenso, respectivamente. Contudo, mais analises s?o necess?rias para compreender se o esfor?o da competicao foi realmente desajustado para o organismo do atleta ou se o esfor?o f?sico n?o foi intenso o suficiente para evocar uma resposta dos eixos end?crinos analisados. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT Adventure racing is a competition practiced in contact with nature where the competitor uses natural obstacles to practice various combined sports. The salivary cortisol (CT) can be used as a biomarker of stress and catabolic states. The concentration of salivary testosterone (TT) may represent a marker of anabolic status since its physiological effects are related tissue repair. The ratio of the anabolic activity/catabolic can be given by analysis of the testosterone/cortisol ratio (T/C). The aim of this study was to quantify the CT and TT concentrations of the participants of an adventure race to determine the physiological impact of such test. Stress and recovery of athletes were inferred by analyzing the TC and TT and T / C concentration of: 1 week before competition (day 1), 1 day before competition (day 2), competition day (day 3) and 1 day after competition (day 4). VO2max and heart rate were recorded to assess the intensity of effort of competition. The concentrations of CT to day 2 and 3 did not increase compared to the concentrations showed on day 1. However, on day 4, the TC concentrations were higher compared to concentrations on days 1, 2 and 3. The TT regular rhythm was observed in 04 days and there was no variation in the concentration of TT. The ratio T/C appeared reduced at day 4 compared to day 1. The results showed that T/C appeared reduced by more than 75% in 4 days. Conclusions: 1. Adventure Racing is a multisport event of high intensity physical exertion and challenges homeostasis and allostasis body; 2. The stress of training and competition possibility proved inadequate to the physical preparation of athletes analyzed, since, CT rhythm observed in both pre and post-competition showed states of exhaustion and intense catabolism, respectively. 3. However, more analyses is necessary to understand if the competition was wrong to the athletic`s organism or if the effort was not intense enough to stimulate an answer from the endocrine axis analyzed.

Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-07-19T13:19:35Z No. of bitstreams: 1 talita_emanuela_domingues.pdf: 1944980 bytes, checksum: c19178f686ffe12e73375417db38510c (MD5) / Rejected by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br), reason: Rever: Refer?ncia ABNT Tipo Nota de disserta??o/Tese Resumos Palavra Chave Ag?ncia Financiadora http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/559 on 2016-07-21T15:25:51Z (GMT) / Submitted by Alexandre Soares (alexandredesoares@yahoo.com.br) on 2016-08-25T11:53:01Z No. of bitstreams: 1 talita_emanuela_domingues.pdf: 1944980 bytes, checksum: c19178f686ffe12e73375417db38510c (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-08-25T12:40:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 talita_emanuela_domingues.pdf: 1944980 bytes, checksum: c19178f686ffe12e73375417db38510c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T12:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 talita_emanuela_domingues.pdf: 1944980 bytes, checksum: c19178f686ffe12e73375417db38510c (MD5) Previous issue date: 2015 / A doen?a renal cr?nica consiste em les?o renal com perda progressiva e irrevers?vel da fun??o dos rins. Nesta fase, os pacientes recebem indica??o de terapia renal substitutiva sendo a Hemodi?lise o recurso mais utilizado. Evid?ncias indicam que a pr?tica de exerc?cio f?sico intradial?tico ? ben?fica. Entretanto, os benef?cios desta modalidade de exerc?cio sobre par?metros end?crino-metab?licos e de estresse oxidativo ainda s?o poucos conhecidos. Objetivo: Avaliar o efeito de uma sess?o de exerc?cio f?sico de intensidade leve a moderada, sobre par?metros end?crino-metab?licos e de estresse oxidativo de pacientes com doen?a renal cr?nica submetidos ? hemodi?lise. M?todos: Doze volunt?rios, alocados de forma randomizada, do Servi?o de Hemodi?lise da Santa Casa de Caridade de Diamantina/MG participaram do estudo. Todos foram cross-over durante o experimento, a fim de comparar os resultados entre os dias de hemodi?lise sem exerc?cio (HD s/ exc) e hemodi?lise com exerc?cio (HD c/exc), e os dias posterior ? sess?o de hemodi?lise sem exerc?cio (P-HD s/ exc) e posterior ? sess?o de hemodi?lise com exerc?cio (P-HD c/exc), para cada volunt?rio. O exerc?cio f?sico intradial?tico ocorreu de maneira supervisionada, e por meio de um cicloerg?metro port?til. A coleta de saliva para avalia??o dos par?metros end?crino-meteb?licos cortisol e testosterona ocorreu durante todos os dias do protocolo experimental, em seis momentos ao longo do dia, a saber: ao acordar (T1) e trinta minutos ap?s (T2), 12:00h (T3), 14:00h (T4), 16:00h (T5) e ?s 19h (T6). As amostras de sangue para avalia??o dos par?metros de estresse oxidativo foram coletadas apenas em dias de hemodi?lise, em dois momentos: antes (T3) e ap?s (T4) a sess?o de hemodi?lise. Resultados: As concentra??es de cortisol e testosterona para os dias de hemodi?lise com exerc?cio f?sico (HD c/exc) n?o se elevaram significativamente em rela??o ?s concentra??es apresentadas no dia de hemodi?lise sem exerc?cio f?sico (HD s/exc), o que tamb?m ocorreu para os dias posteriores ? aplica??o do protocolo de exerc?cio intradial?tico (PHD c/ exc e P-HD s/ exc). Entretanto, a raz?o testosterona/cortisol aumentou significativamente no dia posterior ? sess?o de hemodi?lise com exerc?cio (P-HD c/ exc) quando comparada ao dia posterior ? sess?o de hemodi?lise sem exerc?cio (P-HD s/ exc). Os par?metros de estresse oxidativo n?o apresentaram altera??es induzidas pelo protocolo de exerc?cio f?sico. Conclus?o: O exerc?cio f?sico intradial?tico alterou o status anab?lico 24 horas ap?s ? sua realiza??o e n?o induziu altera??es significativas nos par?metros de estresse oxidativo.sumo / Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2015. / Chronic kidney disease is a kidney injury with progressive and irreversible loss of kidney function. At the severe stage, patients undergo renal replacement therapy and the hemodialysis being the most used medical resource. Evidence indicates that the practical of physical exercise during the hemodialysis sessions is beneficial. However, the benefits of this exercise modality on endocrine-metabolic parameters and on oxidative stress remains unknown. Objective: To evaluate the effect of an exercise session mild to moderate intensity, on endocrine-metabolic parameters and oxidative stress in patients with chronic renal failure undergoing hemodialysis. Methods: Twelve users of the Hemodialysis Service of Santa Casa de Diamantina Charity / MG participated, were assigned randomly as volunteers in the study and were cross-over during all the experiment in order to compare the results between the days of hemodialysis session without exercise (HD s/ exc) and hemodialysis session with exercise (HD c/ exc), and the subsequent days of hemodialysis session without exercise (P-HD s/ exc) and after the hemodialysis session with exercise (P-HD w / exc) for each volunteer. The exercise protocol was performed in a portable bicycle ergometer and its intensity was previously determined for each volunteer as mild to moderate. Saliva samples were collected during all days of the experimental protocol, six times throughout the day, namely on waking (T1) and thirty minutes after (T2), 12: 00 (T3), 14 : 00 (T4), 16: 00h (T5) and 19h (T6) to determine the salivary cortisol concentrations and salivary testosterone concentrations. Blood samples were collected in days of hemodialysis sessions, in two times: pre (T3) and after (T4) hemodialysis session to determine the REDOX status parameters. Results: The concentrations of cortisol and testosterone on the days of hemodialysis with exercise (HD c / exc ) did not increase significantly in relation to the concentrations shown on hemodialysis day without exercise (HD s / exc ), which also happened after the exercise protocol application days (P-HD c/ exc and PHD s/exc). However, the reason testosterone/cortisol increased significantly on the day after the hemodialysis session with exercise (P-HD w / exc) when compared to the day after the hemodialysis session without exercise (P-HD s / exc). The oxidative stress parameters did not show induced changes by the physical exercise protocol. Conclusion: It was shown that the exercise protocol induced changes in the anabolic status 24 hours after its realization and did not induce changes in oxidative stress parameters.

Resumo não disponível

Resumo não disponível.

Em homens, os níveis de testosterona e de testosterona biodisponível (livre e a ligada à albumina) declinam com a idade, apresentando elevado risco de desenvolver resistência à insulina e diabetes tipo II. Já foi demonstrada a ação clássica (efeito genômico) da testosterona sobre a síntese e a liberação de insulina em pâncreas de rato. Os objetivos do presente trabalho são determinar: 1) a ação não clássica específica da testosterona, da nandrolona e de outros esteróides sexuais sobre a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas isoladas de ratos machos adultos; 2) a influência de aminoácidos sobre esta ação; 3) a ação da testosterona sobre o transporte de aminoácidos; 4) a participação dos canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L e dos canais KATP na ação da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2+; 5) a participação da via da fosfolipase C na ação da testosterona sobre a captação de 45Ca2+. As ilhotas foram isoladas de pâncreas de 3 ratos Wistar machos (pesando 180-220g) por experimento pela técnica de Lacy e Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). Nos experimentos de secreção de insulina, amostras de 10μL de ilhotas isoladas foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 3 minutos em presença ou não de testosterona (1μM), T-BSA (1μM), nandrolona (1μM), 17 -estradiol (10 nM) ou progesterona (1μM) em um incubador metabólico Dubnoff em tampão KRb-HEPES com glicose 3 mM a 37ºC, pH 7,4 e gaseificação constante com carbogênio (O2:CO2; 95:5; v/v). Nos experimentos com glutamina, lisina, alanina e leucina, as ilhotas eram incubadas por mais 3 minutos com estes aminoácidos. A incubação foi interrompida em banho de gelo. Os tubos com as ilhotas eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante coletado e a insulina quantificada por radioimunoensaio. No experimento de captação de aminoácido, as ilhotas isoladas (10μL) foram pré-incubadas por 30 minutos e incubadas por 15, 30 ou 60 minutos com 0,2 μCi de [1-14C] ácido a-metil aminoisobutírico mais testosterona (1μM). Após o final da incubação os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G. O sobrenadante (meio externo) era preservado. As ilhotas era transferidas para tubos Eppendorff contendo 1 mL de água destilada (meio interno). Os tubos com as ilhotas eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 100 μL de cada frasco e do respectivo meio externo para contagem da radioatividade. Os resultados foram expressos pela relação entre a radioatividade contida no tecido (meio interno) e no meio de incubação (meio externo). Nos experimentos de captação de 45Ca 2+, as ilhotas isoladas (50μL) eram pré-incubadas por 45 ou 50 minutos com 0,2 μCi 45Ca2+, novamente pré-incubadas por 10 minutos com nifedipina (1μM), diazoxida (100μM), glibenclamida (25μM), ou tolbutamida (10μM) e incubadas com ou sem testosterona (0,1μM) ou nandrolona (0,1μM) por 1 minuto. No experimento com U73122 (2μM), as ilhotas eram pré-incubadas por mais 15 minutos com este fármaco e incubadas com ou sem testosterona (1μM) por 1 minuto. Para a interrupção da incubação, utilizou-se 1 mL de tampão frio com cloreto de lantânio (10 mM) Após, os tubos eram centrifugados por 2 minutos a 45 x G, o sobrenadante desprezado e as ilhotas lavadas duas vezes com a solução de cloreto de lantânio. As ilhotas eram transferidas para tubos tipo Eppendorff contendo 1 mL de água destilada. Os tubos eram congelados por 24 horas e após sonicados por 30 segundos. Eram retiradas amostras de 50 μL de cada frasco para contagem da radioatividade. A testosterona e a nandrolona estimularam a secreção de insulina após incubação de 3 minutos, através do fechamento de canais K+ ATP tendo, como conseqüência, o aumento da captação de Ca2+ e a exocitose do hormônio. A testosterona ligada à albumina, que não entra na célula e interage com receptor de membrana, também estimulou a secreção de insulina em 3 minutos, sugerindo um efeito de membrana dos andrógenos. Em nossas condições experimentais, o 17- -estradiol e a progesterona não mostraram efeito sobre a secreção de insulina. A ação androgênica sobre a secreção de insulina ocorreu somente na ausência de glicose ou em concentrações sublimiares (3mM). A testosterona não estimulou a captação do aminoácido metilaminoisobutírico [14C]. A L-alanina estimulou a secreção de insulina. Porém, quando associadas testosterona e alanina somente, houve redução na secreção. Também foi observado que uma mistura de aminoácidos (MIX- glutamina, lisina, leucina e alanina,) em diferentes concentrações proporcionais foi efetiva na secreção de insulina. Houve aumento significativo na secreção de insulina quando associados testosterona e a concentração 2x maior dos aminoácidos. Também, os andrógenos aumentaram a captação de Ca2+ em 60 segundos. A ação da testosterona sobre a captação de Ca2+ ocorreu em concentrações limiares de glicose (5 e 8 mM), porém não em concentrações elevadas (11 mM). Quando a testosterona foi incubada na presença de nifedipina (bloqueador de canais de Ca2+ dependentes de voltagem do tipo L), seu efeito estimulatório sobre a captação de 45Ca2+ foi anulado. Ocorreu inibição da ação androgênica quando a testosterona foi incubada em presença de diazoxida, a qual aumenta a probabilidade de abertura do canal K+ ATP. O efeito da testosterona e da nandrolona sobre a captação de 45Ca2 é análogo à ação das sulfoniluréias (glibenclamida e tolbutamida), as quais inibem o canal K+ ATP. Ambos os efeitos indicam que a ação da testosterona envolve o fechamento do canal K+ ATP e conseqüente despolarização da membrana da célula . O inibidor da fosfolipase C, o U73122, bloqueou a ação estimulatória de testosterona sobre a captação de 45Ca2+. Nossa conclusão para estes achados seria que a testosterona e a nandrolona, na presença de baixas concentrações de substratos energéticos como a glicose e aminoácidos, estimulariam a liberação da insulina para modular os efeitos catabólicos dos contra-reguladores e, assim, manter a homeostase. O mecanismo de secreção da insulina pelos andrógenos envolve a ativação de PLC via ligação ao receptor de membrana acoplado à proteína Gq, o fechamento de K+ ATP e a entrada de Ca2+ através de canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L. / In men, testosterone and bioavailable testosterone levels ( free and and albumin-bound) decline with age, with high risk of developing insulin resistance and type 2 diabetes. It has been already shown the classic action of testosterone (genomic effect) on the insulin synthesis and release in rat pancreas. The objective of this survey is to determine: 1) the specific non-classical action of testosterone, nandrolone and other sex steroids on insulin secretion in isolated pancreatic islets from adult male rats; 2) aminoacids influence on this action; 3) testosterone action on amino acid transport; 4) the participation of L-type voltagegated Ca2+ channels and KATP channels in the testosterone and nandrolone action on the 45Ca2+ uptake; 5) the participation of phospholipase C via in the testosterone action on the 45Ca2+ uptake. The islets were isolated from the pancreas of 3 male Wistar rats (weighing between 180 and 200g) per experiment by the technique of Lacy and Kostianovsky (Diabetes, 16:35-39, 1967). In the experiments of insulin secretion, samples of 10μL of isolated islets were preincubated for 30 minutes and incubated for 3 minutes in the presence or absence of testosterone (1μM), T-BSA (1μM), nandrolone (1μM), 17 -estradiol (10 nM) or progesterone (1μM) in a Dubnoff metabolic incubator in KRb-HEPES buffer with 3 mM glucose at 37ºC, pH 7,4 and constant gasification constante with carbogen (O2:CO2; 95:5; v/v). In experiments with glutamine, lysine, alanine and leucine, the islets were incubated for another 3 minutes with these amino acids. The incubation was stopped in an ice bath. The tubes containing the islets were centrifuged for 2 minutes at 45xG, the supernatant collected and insulin measured by radioimmunoassay. In the experiment of amino acid uptake, isolated islets (10μL) were pre-incubated for 30 minutes and incubated for 15, 30 or 60 minutes with 0,2 μCi of [1-14C] a-metyl aminoisobutyric plus testosterone (1μM). After the end of incubation, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G. The supernatant (environment) was preserved. The islets were transferred to Eppendorff tubes containing 1mL of distilled water (internal environment). The tubes with islets were frozen for 24 hours and after this sonicated for 30 seconds. Samples of 100 μL were removed from each bottle and respective environment for radioactivity counting. Results were expressed by the relation between the radioactivity contained in the tissue (internal environment) and the incubation environment (external environment) . In the experiments of 45Ca 2+ uptake, the isolated islets (50μL) , were pre-incubated for 45 or 50 minutes with 0,2 μCi 45Ca2+, preincubated again for 10 minutes with nifedipine (1μM), diazoxide (100μM), glibenclamide (25μM), or tolbutamide (10μM) and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. In this experiment with U73122 (2μM), the islets were pre-incubated for more 15 minutes with this drug and incubated with or without testosterone (1μM) for 1 minute. For the interruption of incubation, it was used a cold 1mL buffer with lanthanum chloride (10mM). After, tubes were centrifuged for 2 minutes at 45 x G, the supernatant discarded and the islets washed twice with lanthanum chloride solution. The islets were transferred to Eppendorf tubes containing 1ml of distilled water. The tubes were frozen for 24 hours and after it, sonicated for 30 seconds. Samples of 50 μL were taken from each bottle for radioactivity counting. In isolated pancreatic islets of rats, testosterone and nandrolone have stimulated insulin secretion, after a 3-minute incubation period, closing the K+ ATP channels, having as consequence the increase of Ca2+ inflow and the hormone exocytosis. Testosterone conjugated to bovine serum albumin, which is not membrane permeable and interacts with the receptor of membrane, also stimulated insulin secretion in 3 minutes, suggesting an androgen membrane effect. In our experimental conditions, 17- -estradiol and progesterone have not demonstrated effects in insulin secretion. Testosterone has not stimulated the uptake of methylaminoisobutyric acid [1-14C]. L-alanine has stimulated insulin secretion. However, when testosterone was associated only with alanine, insulin secretion has decreased. It has also been noted that an aminoacid mixture (MIX-alanine, glutamine, lysine and leucine) in different proportional concentrations has been effective in insulin secretion. When associated, testosterone and MIX, there has been an increase in insulin secretion when the concentration of amino acids has been 2 times higher. Also, the androgens have increased the 45Ca2+ uptake in 60 seconds. However, the androgenic action has occurred only in absence of glucose or at sub stimulatory concentrations (3 mM). The action of testosterone on 45Ca2+ uptake has occurred at stimulatory glucose concentrations (5 and 8 mM), but not in high concentrations (11 mM). When testosterone has been incubated in the presence of nifedipine (Ca2+ type L channel blocker), its stimulatory effect on 45Ca2+ uptake has been nullified. When it was used diazoxide to produce the opening of K+ ATP channels, it has occurred the inhibition of androgenic action. The testosterone and nandrolone effect is analogous to the action of sulphonilureias (glibenclamida and tolbutamida), which inhibit the K+ ATP channel. Both effects show that testosterone action involves the K+ ATP channel closing and consequent membrane depolarization of cell. The presence of U73122, which inhibits the activation of PLC, has inhibited the testosterone action on 45Ca2+ uptake. Our conclusion for these results would be that testosterone and nandrolone, in the presence of low concentrations of energetics substrates as glucose and amino acids would stimulate the insulin liberation for modulating the catabolic effects of counter-regulators and, then, sustaining homeostasis. It can also be observed that the associated mechanism involves a Gq protein-coupled membrane receptor-binding, the PLC activation, the K+ ATP closing and Ca2+ entry through the voltage-dependent L-type calcium channels.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-27T10:15:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655848 bytes, checksum: 0ff4198bce278adfb35d72306b750cef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T10:15:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655848 bytes, checksum: 0ff4198bce278adfb35d72306b750cef (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração via oral do óleo de nim sobre a função reprodutiva e o perfil metabólico de carneiros mestiços da raça Santa Inês. Trinta animais foram distribuídos em quatro grupos (G): GI - controle, administração de 20 mL de água por animal por via oral; e GII, GIII e GIV – administração de 1, 2 e 3 mL de óleo de nim/kg de peso vivo (PV) por via oral, respectivamente, durante sete dias. Realizou-se a biometria testicular e coletou-se sêmen duas vezes por semana durante 93 dias para avaliação dos aspectos físicos e morfológicos. Amostras de sangue foram coletadas nos dias D1, D4, D8, D30, D60 e D90, para determinação da concentração plasmática de testosterona e do perfil metabólico plasmático dos animais. Ao final do período experimental, os animais foram abatidos; os testículos, coletados e pesados; e foram obtidas amostras para avaliações histológicas. Houve comportamento linear decrescente (P˂0,05) para ganho de peso. Observou-se comportamento linear decrescente (P˂0,05) para volume seminal, turbilhão e vigor espermático, motilidade progressiva e concentração espermática. Para defeitos maiores verificou-se comportamento linear crescente (P<0,05), e defeitos menores, comportamento linear decrescente (P<0,05). Não houve diferença (P>0,05) para defeitos totais. Perímetro escrotal e consistência testicular apresentaram comportamento linear decrescente (P<0,05). Quanto aos dados da morfometria testicular, observou-se diferença (P<0,05) para volume das células de Leydig, volume do conjuntivo e volume do espaço intertubular, porém não houve diferença (P>0,05) para peso do testículo, índice gonadossomático, porção volumétrica da lâmina basal, lúmen, epitélio germinativo, vasos sanguíneos e linfáticos, tecido conjuntivo, túbulo seminífero, espaço intertubular, volume dos vasos sanguíneos e linfáticos, volume do túbulo seminífero, comprimento total dos túbulos seminíferos, comprimento total dos túbulos seminíferos por grama de testículo, índice leydigossomático e índice tubolossomático. No perfil metabólico, observou-se comportamento quadrático decrescente (P<0,05) para LDL e quadrático crescente (P<0,05) para concentração plasmática de VLDL e triglicerídios. Não houve diferença (P>0,05) para concentração plasmática de colesterol total, HDL, ureia e testosterona. A administração oral de óleo de nim nas concentrações de até 3 mL/kg de peso vivo durante sete dias causou prejuízos à função reprodutiva de carneiros mestiços da raça Santa Inês, mostrou-se dose – dependente e provocou intoxicação dos animais na maior concentração. / The aim of the study was to evaluate the effect of oral administration of Neem oil on the reproductive function and metabolic profile of crossbred Santa Inês sheep. Thirty animals were divided into four groups (G): GI - control, oral administration of 20 mL of water per animal; GII, GIII and GIV – oral administration of 1, 2 and 3 mL of neem oil/kg body weight (BW), respectively, for seven days. Testis size was estimated and semen was collected twice a week for 93 days to evaluate physical and morphological aspects. Blood samples were collected on days D1, D4, D8, D30, D60 and D90 for determination of plasma testosterone and plasma metabolic profile of the animals. At the end of the experimental period, the animals were slaughtered, and the testes were collected, weighed and sampled for histological evaluations. There was a linear decrease (P˂0.05) for weight gain. A linear decrease (P˂0.05) was observed for semen volume, sperm vigor, turmoil, progressive motility, and sperm concentration. A linear increase (P<0.05) was observed for major defects, and a linear decrease (P<0.05), for minor defects. There was no difference (P>0.05) for total defects. Scrotal circumference and testicular consistency decreased linearly (P<0.05). For the morphometric data of the testes, a difference was observed (P<0.05) for Leydig cell volume, volume of tissue and volume of intertubular space. However, there was no difference (P>0.05) for testis weight, gonadosomatic index, volumetric basal lamina, lumen, germinal epithelium, connective tissue, seminiferous tubule, intertubular space, volume of blood and lymph vessels, seminiferous tubule volume, total length of the seminiferous tubules, total length of seminiferous tubules per testicular gram, leydigosomatic index and tubulosomatic index. In the metabolic profile, a quadratic decrease (P<0.05) was observed for LDL and a quadratic increase (P<0.05), for plasma VLDL and triglycerides. There was no difference (P>0.05) for plasma concentration of total cholesterol, HDL cholesterol, urea and testosterone. Oral administration of Neem oil at concentrations of up to 3 mL/kg body weight for 7 days produced damage to the reproductive function of crossbred Santa Inês sheep. It was shown to be dose dependent and poisoned the animals at the highest concentration.

O mecanismo não clássico de testosterona induz resposta celular rápida ao nível de membrana, enquanto que a ação clássica se dá pela ligação da testosterona ao seu receptor androgênico intracelular (iAR) que regula a expressão gênica. A Epitestosterona, o 17α-epímero da testosterona, tem sido descrito como um anti-andrógeno, inibindo o efeito da testosterona ou diidrotestosterona sobre o sobre o iAR. No entanto, a epitestosterona apresenta um efeito não clássico similar ao da da testosterona, despolarizando o potencial de membrana das células de Sertoli e induzindo a captação rápida de Ca2+ nos testículos. O objetivo deste estudo foi analizar o efeito do tratamento com epitestosterona e testosterona em animais castrados quimicamente com a utilização de um antagonista do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), o cetrorelix. Ratos imaturos, a partir do 7º dia de idade receberam durante 7 dias o tratamento pela via intraperitoneal de acordo com os seguintes grupos: Controle (apenas o veículo hidroxipropil-beta-ciclodextrina, castrados (Cetrorelix (500 μg/kg/dia)), castrados com reposição de testosterona (2,5mg/kg/dia) (Cetrorelix+testosterona), castrados com reposição de epitestosterona (2,5mg/kg/dia) (cetrorelix+epitestosterona) e epitestosterona. Foram observados os efeitos dos tratamentos em parâmetros de desenvolvimento sexual de ratos imaturos como: peso corporal, peso testicular e medida da distância anogenital (DAG). Também foram feitos registros eletrofisiológicos da ação no potencial de membrana da testosterona nos túbulos seminíferos de testículos de ratos de todos os tratamentos. Para a avaliação a imunorreatividade ao iAR foi utilizado o anticorpo primário anti-iAR do tipo policlonal na concentração 1:250. Para o controle-negativo da técnica cortes de todas os tratamentos incubados com PBS-T. Para expressão foi utilizado o anticorpo primário anti-iAR do tipo policlonal na concentração de 1:1000 realizada pela técnica de Western Blot. A castração química com cetrorelix resultou na redução no peso dos testículos e da DAG. O tratamento com epitestosterona e testosterona restaurou tanto o peso testicular como a DAG. O efeito despolarizante em resposta à aplicação tópica da testosterona foi observado no grupo controle e no grupo de cetrorelix. Além disso, o grupo castrado com cetrorelix com reposição de epitestosterona impediu o efeito rápido da testosterona na despolarização da membrana celular. No grupo com reposição de testosterona, a resposta eletrofisiológica da testosterona na membrana também foi alterada. O tratamento com epitestosterona nos ratos castrados com cetrorelix produziu diminuição da expressão do iAR. Foi observada redução da imunorreatividade do iAR nos animais tratados com epitestosterona. Pode-se concluir que a epitestosterona participa do desenvolvimento genital em ratos imaturos, ou seja, produziu recuperação de AGD de forma semelhante à testosterona. Este resultado sugere que ambos os hormônios atuam pela mesma via de desenvolvimento deste parâmetro, provavelmente através de um mecanismo não-clássico. Além disso, o tratamento com o antagonista de GnRH e reposição de epitestosterona suprimiu a resposta não clássica da testosterona, mudando o padrão de via de sinalização da testosterona nas células de Sertoli. / The non-classical mechanism of testosterone induces a rapid cellular response at the membrane level, while the classical action is through the binding to the intracellular androgenic receptor (iAR) and the regulation of gene expression. Epitestosterone, the 17α-epimer of testosterone, has been described as an anti-androgen, inhibiting the testosterone or dihyidrotestosterone effect on the iAR. However, epitestosterone presents a non-classical effect similar to testosterone, depolarizing the membrane potential of Sertoli cells and inducing rapid Ca2+ uptake in testes. The aim of this study was to observe the effect of the treatment with epitestosterone and testosterone in rats chemically castrated with a gonadotropin-releasing hormone (GnRH) antagonist cetrorelix. From pnd 7 to pnd 14, the rats were given daily intraperitoneal injections with (i) hormones solvent, (2-hydroxypropyl β-cyclodextrin) as the control group (CTRL); (ii) 500 μg/kg/day of the GnRH antagonist cetrorelix as the cetrorelix group (CET); (iii) 500 μg/kg/day of cetrorelix + 2.5 mg/kg/day of testosterone as the cetrorelix plus testosterone group (CET+T); (iv) 500 μg/kg/day of cetrorelix + 2.5 mg/kg/day of epitestosterone as the cetrorelix plus epitestosterone group (CET+EpiT); and (v) 2.5 mg/kg of epitestosterone alone as the epitestosterone group (EpiT). The effect of different treatments were verified on the body and testicular weight and the anogenital distance (AGD). The potential and the membrane resistance of Sertoli cells were recorded by electrophysiological technique intracellular record. The electrophysiological effect of testosterone on membrane of Sertoli cells were evaluated in seminiferous tubules in testes from rats of the all experimental groups. For evaluating the immunoreactivity to the iAR we used the anti-iAR primary polyclonal antibody type in concentration 1: 250. For the negative control technique cuts all treatments incubated with PBS-T. For iAR expression we used the anti-iAR type polyclonal primary antibody at a concentration of 1: 1000 performed by the Western Blot technique. The chemical castration induced a reduction in testicular weight and AGD. The treatment with both epitestosterone and testosterone restored the AGD and the testicular weight. The depolarizing effect in response to topical testosterone application was observed in the control group and in the GnRH antagonist cetrorelix group. Moreover, in the GnRH antagonist cetrorelix replaced with the epitestosterone group, testosterone was not capable of changing the membrane potential. In the group replaced with testosterone, the membrane response to testosterone was smaller also. The treatment with epitestosterone in castrated rats also reduced the expression of the iAR in testes. The immunoreaction of iAR was reduced in the animals treated with epitestosterone. In conclusion, the effect of epitestosterone on genital development in immature rats, namely recovering of AGD, was similar to testosterone. This result suggest that both hormones act through the same pathway on this development parameter, probably by a non-classical mechanism. Additionally, the treatment with the GnRH antagonist plus epitestosterone suppressed the non-classical testosterone response, changing the pattern of testosterone signaling pathway through a membrane mechanism in Sertoli cells.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A restrição alimentar (RA) é caracterizada pela redução da quantidade total de alimento ingerido, e tem sido utilizada espontaneamente por muitos indivíduos para aumentar a expectativa de vida. Embora a diversidade de benefícios provocados pela baixa ingestão calórica tenha sido muito estudada, as conseqüências da RA no padrão de sono e na resposta sexual em modelos animais ainda permanecem como uma área pouco estudada. Por outro lado, a privação de sono, uma condição cada vez mais prevalente na nossa sociedade, resulta em efeitos adversos ao organismo, exceto pela ação antidepressiva e por aumentar os reflexos genitais em ratos. Nesse sentido, o objetivo do presente estudo foi analisar a arquitetura de sono (Artigo 1), avaliar os reflexos genitais (Artigo 2), e por fim, o comportamento sexual e o perfil hormonal (Artigo 3) em ratos submetidos à RA. A partir do desmame, ratos machos Wistar foram distribuídos em 2 grupos: a) mantido com ração ad libitum (AD), e b) submetidos a RA (6 gramas diárias de ração/animal). Essa quantidade de ração foi aumentada em 1g/semana até totalizar 15g na idade adulta. Para realização dos experimentos referentes ao Artigo 1, foram implantados eletrodos para registro de sono (72 horas). Quanto ao padrão de sono, a RA acarretou marcantes alterações na distribuição do ciclo vigília-sono em virtude do aumento do tempo de sono durante o período escuro e diminuição durante a fase clara, efeito oposto ao padrão normal apresentado por esses animais. Para os experimentos referente ao Artigo 2, os animais foram submetidos à privação de sono paradoxal (PSP) pelo método da plataforma múltipla durante 96 horas e desafiados com administração aguda de salina ou cocaína antes da avaliação dos reflexos genitais. Verificou-se que os animais submetidos a RA crônica e posteriormente a PSP não apresentaram um aumento de reflexos genitais mesmo quando desafiados com cocaína. Para os experimentos de comportamento sexual (Artigo 3), os animais também foram submetidos à PSP ou mantidos em gaiolas de moradia. Foi observada uma diminuição da motivação e do desempenho sexual em ambos os grupos PSP (RA e AD) comparados ao grupo CTRL. No entanto, a RA minimizou os efeitos da PSP, uma vez que somente o grupo RA-PSP não apresentou uma diminuição do número de ejaculações. Em relação às dosagens hormonais observamos que ambos os grupos submetidos à PSP tiveram as concentrações de testosterona diminuídas em relação aos respectivos grupos controles, enquanto que a progesterona apresentou um aumento significativo somente no grupo RA-PSP em relação ao grupo RA-CTRL. Nossos resultados demonstram que a RA acarretou marcantes alterações na distribuição do ciclo vigília-sono, e que embora a RA promova efeitos positivo como de aumentar a longevidade, quando associada a uma situação de falta de sono diminui a resposta sexual. / Food restriction (FR) can be characterized by the reduction of total food intake and has been exercised by many as a means to increase life span. Although the plethora of benefits that low calorie ingestion promotes has been thoroughly examined, the consequences of FR on the sleep pattern and in sexual response in animal models remain to be investigated. It is fact that sleep derivation leads to adverse physiological effects, among which are anti-depressive action and increase of genital reflexes in rats. Thus, the current investigation purported to examine the sleep architecture (Article 1), assess genital reflexes (Article 2), and lastly, observe the sexual behavior and hormonal profile (Article 3) of rats submitted to FR. Once weaned, male Wistar rats were distributed into 2 groups: a) kept with chow ad libitum (AD), and b) those submitted to FR (6 grams of chow daily). The amount of chow was increased 1g/week up to 15g in adulthood. For the experiments described in Article 1, electrodes were implanted for sleep recording (72h). In regards to the sleep pattern, FR led to marked alterations in the distribution of the sleep/wake cycle because of the longer period of sleep in the dark period and reduction of sleep in the light period, a scenario opposite to the normal pattern in these animals. For the experiments of Article 2 the animals were submitted to paradoxical sleep deprivation (PSD) by the multiple platform method for 96h and challenged with acute administration of saline solution or cocaine prior to the assessment of genital reflexes. It was found that the chronic FR animals that underwent PSD did not present increase of genital reflexes not even when challenged with cocaine. For the sexual behavioral studies (Article 3) the animals were also submitted to PSD or kept in home cages. A decrease in motivation and sexual performance was observed in both groups (FR and AD) when compared to controls. However, FR minimized the PSD effects as it was only the FR-PSD group that did not present reduction in the number of ejaculations. As for hormonal concentrations it was verified that both groups submitted to PSD had their testosterone concentrations reduced in relation to their respective controls, while progesterone increased significantly only in the FR-PSD group when compared to the FR-CTRL group. Our results show that FR led to marked alterations in the distribution of the sleep/wake cycle and that although FR does promote positive effects like longer lifespan, it reduces sexual response when associated to shortage of sleep. / FAPESP: 06/58274-5 / FAPESP/CEPID: 98/14303-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações