A regulação do processo de maturação e manutenção do metabolismo das células de Sertoli é fundamental para a promoção adequada da fertilidade masculina. Além dos hormônios andrógenos, com a testosterona (T), os retinóides possuem papel fundamental na regulação e manutenção da espermatogênese. Sabe-se que além dos efeitos individuais, os retinóides interagem com outros hormônios, modulando suas ações. Este trabalho teve como objetivos estudar as possíveis interações nas vias de sinalização do retinol e da T em rápidas respostas mediadas pela membrana plasmática, verificando a influência destes hormônios sobre o influxo de cálcio, analisando a influência dos canais de cálcio dependentes de voltagem do tipo L (CCDV-L) e dos canais de potássio dependentes de voltagem (Kv) em testículos de ratos imaturos de 10 dias de idade. Também foi objetivo deste trabalho analisar a resposta eletrofisiológica destes hormônios em cultura primária de células de Sertoli. Na técnica de influxo de cálcio foi realizada curva de dose-resposta, onde os tecidos foram tratados com retinol ou testosterona, por 2 minutos, nas concentrações 10-12, 10-9 e 10-6 M e 10-9 e 10-6 M, respectivamente. Após definido a concentração para os demais experimentos, foi analisado a interação entre estes dois hormônios. Em seguida foi verificada a influência dos canais CCDV-L e Kv, através da utilização dos bloqueadores nifedipina e cloreto de tetraetilamônio (TEA), respectivamente. Também foi realizada a técnica de eletrofisiologia Patch Clamp em whole cell onde foi analisada a atividade das correntes de potássio através da ação não clássica destes hormônios. Concluímos que o retinol estimula o influxo de cálcio em testículos de ratos imaturos. Este efeito estimulatório ocorre através dos CCDV-L e em parte através dos canais Kv. A T também estimula o influxo de cálcio em testículos de ratos imaturos. Este efeito estimulatório ocorre através dos canais Kv e em parte através dos CCDV- L. Além disso, o retinol e a T estimulam as correntes do íon potássio através da abertura dos canais de Kv das células de Sertoli imaturas de cultura primária. O retinol e a T interagem entre si, agindo de forma sinérgica, estimulando ainda mais o influxo de cálcio quando aplicados simultaneamente, demonstrando que sua ação é 6 desencadeada pela abertura de diferentes tipos de canais iônicos.

O objetivo da presente dissertação foi investigar o efeito da territorialidade e do nível do adversário nas respostas hormonais e comportamentais de jogadores de basquetebol. Para tanto, foram realizados dois estudos. No primeiro, investigou-se o efeito da territorialidade nas respostas hormonais e comportamentais decorrentes de jogos oficiais de basquetebol. Dezoito jogadores, do sexo masculino, de duas equipes da categoria sub-19 (ranqueadas em primeiro e segundo lugar na competição) foram avaliados. As equipes jogaram entre si e, portanto, cada equipe realizou um jogo \"em casa\" e um jogo \"fora de casa\". Amostras de saliva foram coletadas antes e após as duas partidas, para análise dos hormônios testosterona (T) e cortisol (C). Antes do aquecimento, os atletas responderam um questionário de ansiedade pré-competitiva, (Competitive State Anxiety Inventory-2; CSAI-2), e 30 minutos após a partida, classificaram a magnitude do esforço através do método da percepção subjetiva de esforço da sessão (PSE da sessão). A concentração de T PRÉ-jogo foi maior na condição \"casa\" (versus \"fora de casa\"); verificou-se um aumento da concentração de T e C do momento PRÉ- para o PÓS-jogo, independentemente do local do jogo; correlações significantes foram apresentadas entre as respostas hormonais e comportamentais. Esses resultados sugerem a ocorrência do fenômeno da territorialidade, e confirmam que a competição é um evento estressor capaz de alterar a concentração hormonal. No segundo estudo, a influência do nível do adversário nas respostas hormonais e comportamentais de jogadores de basquetebol foi investigada. Dez atletas de uma equipe sub-19 foram avaliados em três jogos oficiais distintos e em uma sessão de treinamento (ST). Em cada um dos jogos oficiais, a equipe enfrentou adversários de diferentes níveis de qualificação, a saber: jogo fácil (JF), jogo médio (JM) e jogo difícil (JD). A classificação do nível do adversário foi realizada por um membro da comissão técnica no início da temporada e monitorada de acordo com a posição de cada uma das equipes durante o campeonato. Foram realizadas coletas de saliva antes e após as quatro condições (três jogos e uma sessão de treinamento) para análise da concentração de T e C. Antes do aquecimento, em todas as condições, os jogadores responderam o questionário CSAI-2 e, aproximadamente 30 minutos após o jogo, responderam a PSE da sessão. A concentração de T aumentou de PRÉ para PÓS no ST e JD; a concentração de T PRÉ-JD foi maior em relação a situação PRÉ-ST. A concentração de C aumentou de PRÉ para PÓS em ST, JM e JD, e a concentração C PRÉ- e PÓS-JD foi maior quando comparada aos mesmos momentos na ST. As ansiedades somática e cognitiva se mostraram maiores no JM e JD em relação ao JF. A autoconfiança foi maior na ST quando comparado com o JM e JD. A PSE da sessão foi maior nos JM e JD em relação à ST. Os resultados do presente estudo indicam que jogos oficiais contra adversários de diferentes níveis podem promover diferentes respostas hormonais e perceptuais / The aim of this dissertation was to investigate the effect of territoriality and the level of opponent on hormonal and behavioral responses in basketball players. Two studies were conducted. In the first one, in order to investigate the effect of territoriality on hormonal and behavioral responses from official basketball matches, eighteen male players, from two under-19 teams (ranked matches in first and second place in the competition) were investigated. The teams played against each other, so each team performed a game \"at home\" and \"away from home\" game. Saliva samples were collected before and after the two matches for hormone analysis [testosterone (T) and cortisol (C)]. Before warm-up, a pre-competitive anxiety questionnaire was answered (Competitive State Anxiety Inventory-2, CSAI-2), and 30 minutes after the matches, the athletes classified the magnitude of effort by means of session-RPE. It was observed a higher value for T PRE game during \"at home\" condition when compared to \"away from home\"; there was a rise in T and C concentrations from moment PRE to POST in both conditions (\"at home\" and \"away\"); significant correlations were observed between hormonal and behavioral responses. These results show the occurrence of territoriality phenomenon, demonstrated by the higher T concentration during \"at home\" PRE game moment, and that official competitive condition is a stressor event capable of altering hormonal concentration. In the second study, the purpose was to verify the influence of the level of the opponent on hormonal and behavioral responses in basketball players. Twelve athletes from an under-19 team were evaluated in three different official matches and one training session (TS). Each official match was played against an opponent with different level of quality: weak match (WM), medium match (MM) and strong match (SM). The classification of the level of the opponent was made by a member of the coaching staff at the beginning of the competitive season and monitored in accordance with the position of the teams during the championship. Saliva samples were collected before and after the four conditions (three games and a training session) for T and C analyzing. Before warm-up, players answered the CSAI-2 questionnaire and approximately 30 minutes after the game, answered session-RPE. It was demonstrated an increase in T concentration from PRE to POST moments in response to TS and SM conditions and T concentration during PRE-SM was higher when compared to PRE-TS condition. The concentration of C increased from PRE to POST moments during TS, MM, and SM and C concentration during PRE and POST-SM were higher compared to the same moments for TS condition. Athletes reported higher values of somatic and cognitive anxieties in MM and SM when compared to WM condition. Self-confidence values were greater during TS compared to MM and SM. Session-RPE presented higher scores in MM and SM compared to TS. The results of the present investigation indicate that official games against opponents of different levels may promote hormonal and perceptual responses of distinct magnitudes

O objetivo da presente dissertação foi investigar o efeito da territorialidade e do nível do adversário nas respostas hormonais e comportamentais de jogadores de basquetebol. Para tanto, foram realizados dois estudos. No primeiro, investigou-se o efeito da territorialidade nas respostas hormonais e comportamentais decorrentes de jogos oficiais de basquetebol. Dezoito jogadores, do sexo masculino, de duas equipes da categoria sub-19 (ranqueadas em primeiro e segundo lugar na competição) foram avaliados. As equipes jogaram entre si e, portanto, cada equipe realizou um jogo \"em casa\" e um jogo \"fora de casa\". Amostras de saliva foram coletadas antes e após as duas partidas, para análise dos hormônios testosterona (T) e cortisol (C). Antes do aquecimento, os atletas responderam um questionário de ansiedade pré-competitiva, (Competitive State Anxiety Inventory-2; CSAI-2), e 30 minutos após a partida, classificaram a magnitude do esforço através do método da percepção subjetiva de esforço da sessão (PSE da sessão). A concentração de T PRÉ-jogo foi maior na condição \"casa\" (versus \"fora de casa\"); verificou-se um aumento da concentração de T e C do momento PRÉ- para o PÓS-jogo, independentemente do local do jogo; correlações significantes foram apresentadas entre as respostas hormonais e comportamentais. Esses resultados sugerem a ocorrência do fenômeno da territorialidade, e confirmam que a competição é um evento estressor capaz de alterar a concentração hormonal. No segundo estudo, a influência do nível do adversário nas respostas hormonais e comportamentais de jogadores de basquetebol foi investigada. Dez atletas de uma equipe sub-19 foram avaliados em três jogos oficiais distintos e em uma sessão de treinamento (ST). Em cada um dos jogos oficiais, a equipe enfrentou adversários de diferentes níveis de qualificação, a saber: jogo fácil (JF), jogo médio (JM) e jogo difícil (JD). A classificação do nível do adversário foi realizada por um membro da comissão técnica no início da temporada e monitorada de acordo com a posição de cada uma das equipes durante o campeonato. Foram realizadas coletas de saliva antes e após as quatro condições (três jogos e uma sessão de treinamento) para análise da concentração de T e C. Antes do aquecimento, em todas as condições, os jogadores responderam o questionário CSAI-2 e, aproximadamente 30 minutos após o jogo, responderam a PSE da sessão. A concentração de T aumentou de PRÉ para PÓS no ST e JD; a concentração de T PRÉ-JD foi maior em relação a situação PRÉ-ST. A concentração de C aumentou de PRÉ para PÓS em ST, JM e JD, e a concentração C PRÉ- e PÓS-JD foi maior quando comparada aos mesmos momentos na ST. As ansiedades somática e cognitiva se mostraram maiores no JM e JD em relação ao JF. A autoconfiança foi maior na ST quando comparado com o JM e JD. A PSE da sessão foi maior nos JM e JD em relação à ST. Os resultados do presente estudo indicam que jogos oficiais contra adversários de diferentes níveis podem promover diferentes respostas hormonais e perceptuais / The aim of this dissertation was to investigate the effect of territoriality and the level of opponent on hormonal and behavioral responses in basketball players. Two studies were conducted. In the first one, in order to investigate the effect of territoriality on hormonal and behavioral responses from official basketball matches, eighteen male players, from two under-19 teams (ranked matches in first and second place in the competition) were investigated. The teams played against each other, so each team performed a game \"at home\" and \"away from home\" game. Saliva samples were collected before and after the two matches for hormone analysis [testosterone (T) and cortisol (C)]. Before warm-up, a pre-competitive anxiety questionnaire was answered (Competitive State Anxiety Inventory-2, CSAI-2), and 30 minutes after the matches, the athletes classified the magnitude of effort by means of session-RPE. It was observed a higher value for T PRE game during \"at home\" condition when compared to \"away from home\"; there was a rise in T and C concentrations from moment PRE to POST in both conditions (\"at home\" and \"away\"); significant correlations were observed between hormonal and behavioral responses. These results show the occurrence of territoriality phenomenon, demonstrated by the higher T concentration during \"at home\" PRE game moment, and that official competitive condition is a stressor event capable of altering hormonal concentration. In the second study, the purpose was to verify the influence of the level of the opponent on hormonal and behavioral responses in basketball players. Twelve athletes from an under-19 team were evaluated in three different official matches and one training session (TS). Each official match was played against an opponent with different level of quality: weak match (WM), medium match (MM) and strong match (SM). The classification of the level of the opponent was made by a member of the coaching staff at the beginning of the competitive season and monitored in accordance with the position of the teams during the championship. Saliva samples were collected before and after the four conditions (three games and a training session) for T and C analyzing. Before warm-up, players answered the CSAI-2 questionnaire and approximately 30 minutes after the game, answered session-RPE. It was demonstrated an increase in T concentration from PRE to POST moments in response to TS and SM conditions and T concentration during PRE-SM was higher when compared to PRE-TS condition. The concentration of C increased from PRE to POST moments during TS, MM, and SM and C concentration during PRE and POST-SM were higher compared to the same moments for TS condition. Athletes reported higher values of somatic and cognitive anxieties in MM and SM when compared to WM condition. Self-confidence values were greater during TS compared to MM and SM. Session-RPE presented higher scores in MM and SM compared to TS. The results of the present investigation indicate that official games against opponents of different levels may promote hormonal and perceptual responses of distinct magnitudes

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-20Bitstream added on 2014-08-13T18:01:13Z : No. of bitstreams: 1 000734624_20150920.pdf: 150475 bytes, checksum: 8dbec8de00e101f635a8f53e65dbd329 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-21T13:18:50Z: 000734624_20150920.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-21T13:19:50Z : No. of bitstreams: 1 000734624.pdf: 3715563 bytes, checksum: 0b1fb2f56cd46b26072d41d3ac6fc793 (MD5) / A hipótese deste trabalho é que hormônios sexuais participam da etiopatogenia da doença periodontal (DP). Diferentes níveis de evidência científica testaram esta hipótese, avaliando: i. associação entre hormônios sexuais e DP em homens; ii. a influência de níveis sub- e suprafisiológicos de testosterona (T) sobre a DP em ratos; iii. se este mecanismo de ação envolve respostas de osteoblastos e osteoclastos in vitro. Dados do III NHANES relacionados com diagnóstico de DP e mensuração hormonal em homens com 30+ anos foram analisados para correlacionar estas duas variáveis. Em ratos, níveis subfisiológicos foram alcançados através da orquiectomia e níveis suprafisiológicos pelo tratamento com T. Metade dos animais em cada grupo foi submetida à DP utilizando–se modelo de ligadura. In vitro, células RAW264.7 foram diferenciadas em osteoclastos na presença de T (1nM-1μM) e identificados por TRAP. Cultura primária de osteoblastos murinos foi utilizada para avaliar a expressão de osteocalcina, RANKL e OPG na presença de T. Em homens, altos níveis de T biodisponível e baixa razão estradiol:T se correlacionaram significativamente com DP. Em idosos, baixos níveis de AAG, metabólito da dihidrotestosterona, também apresentaram correlação significativa. Em ratos, níveis sub- e suprafisiológicos de T aumentaram significativamente a perda óssea e modularam a expressão de citocinas inflamatórias. In vitro, doses fisiológicas de testosterona preveniram a osteoclastogênese e diminuíram a expressão de osteocalcina, RANKL e razão RANKL:OPG por osteoblastos. Concluiu-se que a T modula a resposta do hospedeiro à DP no sexo masculino, regulando a diferenciação de osteoclastos direta e indiretamente (via osteoblastos). / The hypothesis of this work is that sex hormones participate in the etiopathogenesis of periodontal disease (PD). Different levels of scientific evidence tested that hypothesis, evaluating: i. The association between sex hormones and PD in men; ii. The influence of sub- and supraphysiologic testosterone (T) levels on PD in rats; iii. If that mechanism of action involves osteoblast and osteoclast responses in vitro. Data from NHANES III related to diagnosis of PD and hormones measurement in 30+- year-old men were assessed to correlate those two variables. In rats, subphysiologic levels were obtained by orchiectomy and supraphysiolgic levels by T treatment. Half of the animals in each group received PD using a ligature model. In vitro, RAW264.7 cells were differentiated into osteoclastos in the presence of T (1nM-1μM) and identified by TRAP-staining. Murine osteoblast primary culture was used to evaluate the expression of osteocalcin, RANKL and OPG in the presence of T. In men, high levels of bioavailable T and low estradiol:T ratio significantly correlated with PD. In older men, low levels of AAG, a metabolite of dihydrotestosterone, also presented a significant correlation. In rats, low and high T levels significantly increased bone loss and modulated the expression of inflammatory cytokines. In vitro, physiologic T doses prevented osteoclastogenesis and decreased the expression of osteocalcin, RANKL and RANKL:OPG ratio produced by osteoblasts. We concluded that T modulates host response to PD in males, regulating osteoclast differentiation direct and indirectly (through osteoblasts).

As células de Sertoli são células fundamentais que fornecem fatores essenciais para a progressão da espermatogênese. Do período fetal ao imaturo, as células de Sertoli estão proliferando. A via não-clássica dos androgênios é caracterizada por rápido evento que conduz à ativação de cascatas de sinalização citosólicas desencadeadas por receptores de membrana. Diferente dessa, na via clássica são necessárias horas ou até mesmo dias para a produção de novas proteínas. Existe um receptor de membrana específico para os andrógenos que estimula a cascata de sinalização não-clássica nas células de Sertoli por interação com o ZIP9, um transportador de zinco. Esse estudo teve por objetivos: avaliar o envolvimento do receptor ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em resposta à aplicação de testosterona ou de nandrolona. Avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre o potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos e avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre a resposta eletrofisiológica da testosterona e da nandrolona em túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos imaturos. O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos túbulos seminíferos de animais entre o 12º e o 15º dpn foram aplicados e/ou perfundidos, DMSO (veículo) n = 8; quelante de zinco (TPEN) nas concentrações 10 nM n = 7; 20 nM n = 6; e 40 nM n = 8; Testosterona (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n= 7; Nandrolona (N) 1 μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n =12; N + TPEN 40 nM n= 9. Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas, seguida do pós-teste de Bonferroni. O projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais – CEUA/UFRGS nº 29644. A aplicação tópica de DMSO e a perfusão de TPEN nas diferentes concentrações não altera o potencial de membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica de T e de N resultou em despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli e em aumento da resistência da membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica da T e da N em meio com perfusão de TPEN, nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, não alterou o potencial de membrana e a resistência da membrana de células de Sertoli de ratos imaturos. Concluímos que o quelante de zinco afeta o receptor de membrana de andrógenos na membrana de células de Sertoli de ratos entre o 12º e o 15º dpn. E podemos inferir que há envolvimento do ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em respostas à aplicação de T e de N. / Sertoli cells are key cells that provide essential factors for the progression of spermatogenesis. From the fetal to the immature period, Sertoli cells are proliferating. The non-classical signaling pathway is characterized by a rapid event that leads to the activation of cytosolic signaling cascades triggered by membrane receptors. On the other hand, in the classical pathway it takes hours or even days are necessary for the production of new proteins. There is an androgen-specific membrane receptor that stimulates the non-classical signaling cascade in Sertoli cells by interaction with ZIP9, a zinc transporter. This aim of this study was to evaluate the involvement of the ZIP9 receptor in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to the application of testosterone or nandrolone. Also, to evaluate the role of zinc chelator TPEN at 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats and to evaluate the role of zinc chelator TPEN in 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations in the electrophysiological response of testosterone and nandrolone in seminiferous tubules isolated from testes of immature rats. The membrane potential and membrane resistance of Sertoli cells were recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. In the seminiferous tubules of animals between post-natal day (pnd) 12 and 15 were applied and/or perfused, DMSO (vehicle) n = 8; Zinc chelator (TPEN) at concentrations of 10 nM n = 7; TPEN 20 nM n = 6; and TPEN 40 nM n = 8; Testosterone (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n = 7; Nandrolone (N) 1μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n = 12; N + TPEN 40 nM n = 9. For statistical analyses it was used ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test. This study was approved by the Ethics Committee for Animal Research of UFRGS (CEUA/UFRGS nº 29644). Topical application of DMSO and perfusion of TPEN at different concentrations did not cause membrane potential depolarization of Sertoli cells. Topical application of T and N cause membrane potential depolarization of Sertoli cells and increased the cell resistance of Sertoli cells. Topical application of T and N in TPEN infusion at concentrations of 10 nM, 20 nM and 40 nM did not cause membrane potential depolarization and the cell resistance of the Sertoli cell membrane of immature mice. In summary, zinc chelator affects the androgen membrane receptor on the Sertoli cell membrane of rats between pnd 12 and 15. We can infer that there is the involvement of the ZIP9 in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to T and N.

Resumo não disponível

Os esteróides sexuais (andrógenos e estrógenos) são importantes reguladores do metabolismo ósseo em machos e fêmeas, respectivamente. A Testosterona, o hormônio andrógeno natural, predominante no sexo masculino, tem papel fundamental em relação à manutenção da massa óssea, pela sua ação sistêmica. O objetivo deste trabalho foi avaliar histologicamente a ação do Propionato de Testosterona (PT) sobre o tecido ósseo, aplicado de forma tópica na tíbia de ratos machos, observando a regeneração óssea e, se ele promove aceleração nesta regeneração. Defeitos ósseos de 1,5mm de diâmetro, foram realizados nas duas tíbias de 30 ratos, sendo que 15 haviam sido castrados previamente e os outros 15 não. Após randomização, numa das tíbias do grupo experimental foi aplicado esponja de colágeno (Gelfoan®(G))+PT e na outra G+Óleo Mineral (OM). No grupo controle, uma das tíbias recebeu apenas Gelfoan e na outra foi realizado apenas o defeito ósseo. Os animais dos grupos experimentais foram sacrificados aos 15 e 30 dias pósoperatórios, e os dos grupos controle, foram sacrificados aos 15 dias pós-operatórios. Os ratos que foram sacrificados aos 30 dias receberam duas aplicações das substâncias em avaliação. Realizou-se análise macroscópica das peças, além das análises histológicas descritiva/comparativa e descritiva semi-quantitativa. Com relação a formação de osso entre as corticais (cicatrização do defeito ósseo criado), tanto G isolado como G+PT ou G + OM, apresentaram diferentes graus de cicatrização óssea entre os diferentes grupos: castrados e não castrados, sacrificados aos 15 dias pós-operatórios e aos 30 dias. Foi achado que o grupo castrado sacrificado aos 15 dias que recebeu G+PT teve cicatrização óssea, contrariamente ao grupo não castrado que não cicatrizou. Também no grupo castrado sacrificado aos 30 dias pós-operatórios observou-se formação de osso lamelar, estruturado nos animais tratados com G+PT. Pode-se dizer que o PT tópico nestes grupos contribuiu para neoformação óssea. Concluiu-se que: 1°) em dois grupos experimentais o PT teve melhores resultados, mas os dados obtidos não permitem uma conclusão definitiva; 2°) a Testosterona empregada de forma tópica mostrou-se promissora quanto a ativação da regeneração óssea; 3°) o Propionato de Testosterona não parece ser a forma farmacêutica mais apropriada, devido a sua forma de liberação muito lenta do hormônio e conseqüente pouca eficiência, devendose utilizar como alternativas para aplicação da Testosterona, a mesma diluída em outro veículo e introduzida nos defeitos através de cápsulas de lisina tricalcio fosfato calcinado ou através de implantes combinando a Testosterona com partículas de poly(D,L-(lactide-co-glycolide)) conforme verificado na literatura. Estes resultados obtidos merecem ser aprofundados e aperfeiçoados, utilizando curvas dose-resposta, outros preparados de Testosterona e tempos distintos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-10-23T15:48:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T15:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alguns alimentos e determinados nutrientes têm sido associados com o sucesso reprodutivo dos animais ao longo da história. Entre estes, a melancia (Citrullus lanatus), uma fruta pertencente à família Cucurbitaceae, destaca-se por conter importantes componentes fitoquímicos , como o licopeno e a citrulina, sendo que a L-citrulina é um aminoácido isolado da melancia e tem papel na reprodução. Neste trabalho buscou-se avaliar os efeitos da suplementação com extratos de melancia e o aminoácido L-citrulina, sobre os parâmetros testiculares, através de análises morfométricas, estereológicas e hormonal, utilizando-se camundongos albinos Swiss adultos como modelo experimental. Foi feita a extração alcóolica de cada parte da melancia em separado, sendo este extrato submetido à quantificação do aminoácido L-citrulina. Utilizamos 80 camundongos Swiss adultos, com 230 dias de idade, divididos em 8 grupos. O grupo (G1) recebeu água destilada; o grupo (G2) recebeu o aminoácido L-citrulina, na dose de 30 mg/kg de peso corporal; o grupo (G3) recebeu Citrato de Sildenafila, na dose equivalete a um humano de 70kg de peso corporal; o grupo (G4) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G5) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G6) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G7) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina e o grupo (G8) recebeu 0,035 g de liofilizado do extrato da semente de melancia ressuspendido em água destilada. O volume diário que cada animal recebeu foi de 0,8mL, ministrados por gavagem, em dose única, durante 39 dias. Os grupos G4, G5, G6, G7, e G8 mostraram aumento no diâmetro do epitélio do túbulo seminífero em comparação com o grupo não tratado (G1) e também com os grupos G2 e G3. Foi observado em G7 aumento da altura do epitélio, sendo que nos demais grupos tratados as alturas do epitélio foram maiores, embora sem significância em relação ao grupo não tratado. O grupo G8 destacou-se dos demais na produção do hormônio testosterona. Os extratos promoveram aumento dos parâmetros como diâmetro de túbulo e altura do epitélio, bem como dos níveis de testosterona sérica. Houve ainda aumento das áreas tubular e epitelial, evidenciando incremento da espermatogênese. / Nutrition has been associated with the reproductive success of animals throughout history. The watermelon (Citrullus lanatus) is a fruit belonging to the family Cucurbitaceae, being one of the cultivars more produced in the world and of great economic importance. Among the main phytochemical components of watermelon are lycopene and citrulline. L-citrulline is an amino acid isolated from watermelon and has a role in reproduction. The aim of this study was to evaluate the effects of supplementation with watermelon extracts on testicular parameters through morphometric, stereological and hormonal analyzes using adult Swiss albino mice as an experimental model. The alcoholic extraction of each part of the watermelon was done separately, being this extract subjected to the quantification of the amino acid L-citrulina. Were used 80 adult Swiss mice, with 230 days of age, divided into 8 groups. Group (G1) received only distilled water; The G2 group received the amino acid L- citrulline at a dose of 30 mg / kg body weight; The group (G3) received Sildenafil citrate, the dose being calculated in equivalence to a human of 70 kg body weight; Group (G4) received bark / ribs extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg body weight; The group (G5) received bark / ribs extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; Group (G6) received pulp extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; (G7) received pulp extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight and group (G8) received 0.035 g of lyophilized extract of the watermelon seed resuspended in distilled water. The daily volume that each animal received was 0.8 mL, given by gavage in a single dose for 39 days. Groups G4, G5, G6, G7, and G8 showed an increase in the diameter of the seminiferous tubule epithelium compared to the untreated group (G1) and also to the G2 and G3 groups. G7 increased the height of the epithelium, and in the other treated groups the epithelium heights were higher, although not statistically significant in relation to the untreated group. The watermelon extract promoted increased parameters such as tubule diameter and height of the epithelium, as well as serum testosterone levels. There was also an increase in epithelial area signaling increasing spermatogenesis.

A testosterona é um hormônio esteróide androgênico responsável pelas características masculinas, com importante função na fisiologia testicular. A nandrolona é um esteróide sintético derivado da testosterona, com ação anabólica e androgênica. A catequina é um flavonóide encontrado em frutas e chás, que possui efeito antioxidante, anticarcinogênico e antienvelhecimento no organismo. Estudos mostram um possível mecanismo de ação destes esteróides e do flavonóide como agonistas do receptor androgênico de membrana. Objetivo: Verificar a ação não-clássica de andrógenos (testosterona, nandrolona) e catequina nas células de Sertoli de ratos Wistar imaturos. Materiais e Métodos: Eletrofisiologia: O potencial de membrana foi registrado utilizando túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares preenchidos com KCl 3mmol/L acoplados a um eletrômetro. Foi realizada a aplicação tópica do esteróide testosterona (1M), nandrolona (0.1, 0.5 e 1 M) e do flavonóide catequina (0.1, 0.5 e 1, M) isoladamente e também após a perfusão com a flutamida (1M), diazoxida (100 M) e U73122 (1 M). Captação de 45Ca2+: Os testículos (n=5) foram pré incubados em KRb com 45Ca2+ por 60 minutos para equilibrar o meio intra e extra-celular de 45Ca2+após o equilíbrio, as gônadas foram incubadas por 5 minutos em KRb com 45Ca2+ com ou sem nandrolona (1μM) ou catequina. Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados da variação do potencial de membrana foram analisados pelo teste T student e ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni. Resultados: A testosterona (1M) produziu uma resposta despolarizante sobre o potencial de membrana (PM) alterando de -44,62±0,53mV para -41,41 ±0,81* mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,05) (n=9 células de Sertoli). Esta resposta despolarizante foi observada mesmo após a perfusão com flutamida (1M). A catequina (1M) causou uma resposta de despolarização semelhante à da testosterona, alterando o PM de -40,20 ± 0,51 mV para -35,62 ± 1,07mV, aos 120 segundos após a sua aplicação (*p<0,001) (n=9 células de Sertoli). A nandrolona (1μM) provocou uma despolarização alterando o PM de -38,20 ± 0,71 para -33,42± 0,63 *p<0,05. A resposta da catequina e de nandrolona foi observada em diferentes doses e mesmo após a perfusão com flutamida (1M), diazoxida (100μM) e U73122 (2μM) anularam o efeito de nandrolona (1μM) e catequina (1μM). A nandrolona e catequina produziram aumento na captação de 45Ca2+ em 5 minutos de incubação em testículos de ratos imaturos. Conclusão: Os andrógenos testosterona, nandrolona e o flavonóide catequina apresentam uma ação despolarizante sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos Wistar, observada mesmo após o bloqueio do receptor de andrógenos intracelular (flutamida). A perfusão com U73122(bloqueador de PLC) e a perfusão com diazoxida (agonista do canal de K+ATP) anulou o efeito de nandrolona e catequina, indicando a participação da PLC e de canais de K+ATP na resposta despolarizante observada. Estes resultados indicam que nandrolona e catequina atuam em um receptor de andrógenos de membrana, assim como a testosterona, agindo através de uma via não-clássica sobre as células de Sertoli de testículos de ratos. / Testosterone is an androgenic steroid hormone responsible for male characteristics, with an important role in testicular physiology. The synthetic steroid nandrolone ia an anabolic and androgenic derivative of testosterone, Catechin is a flavonoid found in fruits and teas, which have antioxidant, anticarcinogenic and anti-aging effects in the body. Studies show a possible mechanism of action of these steroids and flavonoid as agonists of the androgen receptor membrane. Objective: The aim of this work is to investigate the non-classical effect of androgens (testosterone, nandrolone) and catechin in Sertoli cells from immature rats. Materials and Methods: Electrophysiological experiments: The membrane potential was recorded using isolated seminiferous tubules of testes of rats 15 days old. The intracellular recording of Sertoli cell was performed using microcapillary filled with KCl 3mmol/L coupled to an electrometer. We performed a topical application of testosterone (1M), nandrolone (0.1, 0.5 and 1M) and the flavonoid catechin (0.1, 0.5 and 1M) alone and also after infusion with flutamide (1M), diazoxide (100M) or U73122 (1M). 45Ca2+ uptake : The testes (n=5 in each group) are pre-incubated in KRb with 45Ca2+ (2.7kBq/sample) for 60 min in a Dubnoff metabolic incubator to equilibrate intra- and extracellular 45Ca2+ levels until they reached a plateau. Following equilibration, the gonads were incubated for 5 min in KRb with 45Ca2+, with or without nandrolone (1 μM) or catechin.The results were given as mean ± SEM. The data of the change in membrane potential were analyzed by ANOVA for repeated measures with Bonferroni post-test. Results: Testosterone (1M) produced a depolarizing response in the membrane potential (MP) by changing from -44.62 ± 0.53 mV to -41.41 ± 0.81 mV *, at 120 seconds after application (* p <0.05) (n = 9 Sertoli cells.) This depolarizing response was observed even after perfusion with flutamide (1M). Catechin (1  M) showed a similar response to depolarization of testosterone, changing the PM of -40.20 ± 0.51 mV to -35.62 ± 1.07 mV at 120 seconds after application (* p <0.001) (n = 9 Sertoli cells) after its application. The nandrolone (1μM) showed a depolarization of the PM changing -38.20 ± 0.71 to -33.42 ± 0.63 * p <0.05. The response of catechin and nandrolone was observed at different doses and even after perfusion with flutamide (1M). diazoxidae (100μM) and U73122 (2μM) nullified the effect of nandrolone (1μM) and catechin (1μM). Nandrolone and catechin increase 45Ca2+ uptake within 5 minutes of incubation with immature testes. Conclusion: The androgen testosterone, nandrolone and flavonoid catechin have a depolarizing action on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats, observed even after the blockade of intracellular androgen receptor. The U73122 infusion and perfusion with diazoxide nullified the effect of nandrolone and catechin, indicating the involvement of PLC and K+ATP channels in depolarizing response observed. These results indicate that nandrolone and catechin act on an androgen membrane receptor, as well as testosterone through a non-classical pathway on Sertoli cells from rat testes.

As células de Sertoli são células fundamentais que fornecem fatores essenciais para a progressão da espermatogênese. Do período fetal ao imaturo, as células de Sertoli estão proliferando. A via não-clássica dos androgênios é caracterizada por rápido evento que conduz à ativação de cascatas de sinalização citosólicas desencadeadas por receptores de membrana. Diferente dessa, na via clássica são necessárias horas ou até mesmo dias para a produção de novas proteínas. Existe um receptor de membrana específico para os andrógenos que estimula a cascata de sinalização não-clássica nas células de Sertoli por interação com o ZIP9, um transportador de zinco. Esse estudo teve por objetivos: avaliar o envolvimento do receptor ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em resposta à aplicação de testosterona ou de nandrolona. Avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre o potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos e avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre a resposta eletrofisiológica da testosterona e da nandrolona em túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos imaturos. O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos túbulos seminíferos de animais entre o 12º e o 15º dpn foram aplicados e/ou perfundidos, DMSO (veículo) n = 8; quelante de zinco (TPEN) nas concentrações 10 nM n = 7; 20 nM n = 6; e 40 nM n = 8; Testosterona (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n= 7; Nandrolona (N) 1 μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n =12; N + TPEN 40 nM n= 9. Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas, seguida do pós-teste de Bonferroni. O projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais – CEUA/UFRGS nº 29644. A aplicação tópica de DMSO e a perfusão de TPEN nas diferentes concentrações não altera o potencial de membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica de T e de N resultou em despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli e em aumento da resistência da membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica da T e da N em meio com perfusão de TPEN, nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, não alterou o potencial de membrana e a resistência da membrana de células de Sertoli de ratos imaturos. Concluímos que o quelante de zinco afeta o receptor de membrana de andrógenos na membrana de células de Sertoli de ratos entre o 12º e o 15º dpn. E podemos inferir que há envolvimento do ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em respostas à aplicação de T e de N. / Sertoli cells are key cells that provide essential factors for the progression of spermatogenesis. From the fetal to the immature period, Sertoli cells are proliferating. The non-classical signaling pathway is characterized by a rapid event that leads to the activation of cytosolic signaling cascades triggered by membrane receptors. On the other hand, in the classical pathway it takes hours or even days are necessary for the production of new proteins. There is an androgen-specific membrane receptor that stimulates the non-classical signaling cascade in Sertoli cells by interaction with ZIP9, a zinc transporter. This aim of this study was to evaluate the involvement of the ZIP9 receptor in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to the application of testosterone or nandrolone. Also, to evaluate the role of zinc chelator TPEN at 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats and to evaluate the role of zinc chelator TPEN in 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations in the electrophysiological response of testosterone and nandrolone in seminiferous tubules isolated from testes of immature rats. The membrane potential and membrane resistance of Sertoli cells were recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. In the seminiferous tubules of animals between post-natal day (pnd) 12 and 15 were applied and/or perfused, DMSO (vehicle) n = 8; Zinc chelator (TPEN) at concentrations of 10 nM n = 7; TPEN 20 nM n = 6; and TPEN 40 nM n = 8; Testosterone (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n = 7; Nandrolone (N) 1μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n = 12; N + TPEN 40 nM n = 9. For statistical analyses it was used ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test. This study was approved by the Ethics Committee for Animal Research of UFRGS (CEUA/UFRGS nº 29644). Topical application of DMSO and perfusion of TPEN at different concentrations did not cause membrane potential depolarization of Sertoli cells. Topical application of T and N cause membrane potential depolarization of Sertoli cells and increased the cell resistance of Sertoli cells. Topical application of T and N in TPEN infusion at concentrations of 10 nM, 20 nM and 40 nM did not cause membrane potential depolarization and the cell resistance of the Sertoli cell membrane of immature mice. In summary, zinc chelator affects the androgen membrane receptor on the Sertoli cell membrane of rats between pnd 12 and 15. We can infer that there is the involvement of the ZIP9 in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to T and N.