Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), é uma das epidemias mais impactantes do milênio e, desde o início, o número de mulheres jovens infectadas vem aumentando vertiginosamente, principalmente nos países em desenvolvimento onde muitas destas engravidam precocemente. Apesar da grande maioria dos casos de AIDS pediátrico no mundo resultar da transmissão vertical, aproximadamente dois terços dos neonatos expostos ao HIV durante a vida fetal não são contaminados. Neste sentido, seguindo as recomendações do consenso brasileiro (Ministério da Saúde), toda criança cuja transmissão vertical tenha sido descartada laboratorialmente não necessita de acompanhamento ambulatorial particularizado. Entretanto, resultados anteriores obtidos pelo nosso grupo demonstraram que, gestantes infectadas pelo HIV-1 que não controlam a carga viral plasmática (CVP), apresentam níveis elevados de citocinas inflamatórias e, no presente estudo, resultados revelam que neonatos não-infectados nascidos dessas gestantes apresentam anormalidades imunofuncionais no compartimento das células T do cordão umbilical quando expostos in vitro a ativadores policlonais, mas não aos antígenos do HIV-1. Ademais, quando comparada a neonatos não expostos, a ativação in vitro das células T de neonatos expostos ao HIV-1 com anti-CD3/anti-CD28 induziu a produção de níveis elevados de IL-17 e reduzidos de IL-10. Interessantemente, essa tendência das células T em secretar IL-17 parece estar relacionada à liberação de níveis elevados de IL-23 pelas células dendríticas derivadas de monócitos do sangue do cordão umbilical estimuladas com lipopolissacarídeo bacteriano. Uma ausência de sensibilização uterina aos antígenos do HIV-1 sugere que essas alterações possam traduzir um efeito adverso da produção elevada de citocinas inflamatórias maternas sobre o sistema imune do neonato, o que pode desequilibrar os eventos envolvidos na maturação e homeostasia imune fetal e neonatal, favorecendo o predomínio de fenótipos Th anômalos, tal como Th17. Essa hiper-responsividade das células Th17 pode vir a comprometer não apenas a capacidade da criança em responder de forma adequada a diferentes estímulos antigênicos ao longo de sua vida, como também pode torná-la mais suscetível a desordens imunomediadas / The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), caused by human immunodeficiency virus (HIV), is one of the most impelling epidemic in the world, and the HIV-infection in young women has been increasing fast in the recent times, mainly in developing countries where most of them become pregnant precociously. Although the great majority of the pediatric AIDS cases all over the world results from vertical transmission, approximately, two thirds of the children exposed to HIV during fetal life are not contaminated. In this context, following brazilian consensus recommendations (Health Ministry), every child whom vertical transmission had been laboratorialy discarded does not need a specific ambulatorial follow up. However, our previous results demonstrated that HIV-1-infected pregnant women who did not control their plasma viral load presented elevated levels of inflammatory cytokines, and in the present study our results revealed that non-infected neonates, born from these pregnant women display immune functional abnormalities in umbilical cord T cells compartment when exposed in vitro to policlonal activators, but not to HIV-1 antigens. Furthermore, when compared to non-exposed neonates, T cell in vitro activation with anti-CD3/anti-CD28 from neonates exposed to HIV-1 induced production of high IL-17 levels and decreased of IL-10. Interestingly, this T cell bias in secreting IL-17 seem to be related to liberation of high IL-23 levels by dendritic cells derived from umbilical cord blood monocytes following stimulation with bacterial lipopolysacharide (LPS). The lack of uterine sensitization to HIV-1 antigens suggests that, these alterations, may translate an adverse effect of a high level maternal inflammatory cytokines production on neonates immune system, which may unbalance events related to neonatal and fetal immune maturation and homeostasis, favoring Th anomalous phenotypes predominance, such as Th17. This Th17 hyper-responsiveness may then compromise not only the childs capacity to respond in an adequate way to different antigenic stimuli through life, as well as becoming them more susceptible to immune-mediated disorders

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), é uma das epidemias mais impactantes do milênio e, desde o início, o número de mulheres jovens infectadas vem aumentando vertiginosamente, principalmente nos países em desenvolvimento onde muitas destas engravidam precocemente. Apesar da grande maioria dos casos de AIDS pediátrico no mundo resultar da transmissão vertical, aproximadamente dois terços dos neonatos expostos ao HIV durante a vida fetal não são contaminados. Neste sentido, seguindo as recomendações do consenso brasileiro (Ministério da Saúde), toda criança cuja transmissão vertical tenha sido descartada laboratorialmente não necessita de acompanhamento ambulatorial particularizado. Entretanto, resultados anteriores obtidos pelo nosso grupo demonstraram que, gestantes infectadas pelo HIV-1 que não controlam a carga viral plasmática (CVP), apresentam níveis elevados de citocinas inflamatórias e, no presente estudo, resultados revelam que neonatos não-infectados nascidos dessas gestantes apresentam anormalidades imunofuncionais no compartimento das células T do cordão umbilical quando expostos in vitro a ativadores policlonais, mas não aos antígenos do HIV-1. Ademais, quando comparada a neonatos não expostos, a ativação in vitro das células T de neonatos expostos ao HIV-1 com anti-CD3/anti-CD28 induziu a produção de níveis elevados de IL-17 e reduzidos de IL-10. Interessantemente, essa tendência das células T em secretar IL-17 parece estar relacionada à liberação de níveis elevados de IL-23 pelas células dendríticas derivadas de monócitos do sangue do cordão umbilical estimuladas com lipopolissacarídeo bacteriano. Uma ausência de sensibilização uterina aos antígenos do HIV-1 sugere que essas alterações possam traduzir um efeito adverso da produção elevada de citocinas inflamatórias maternas sobre o sistema imune do neonato, o que pode desequilibrar os eventos envolvidos na maturação e homeostasia imune fetal e neonatal, favorecendo o predomínio de fenótipos Th anômalos, tal como Th17. Essa hiper-responsividade das células Th17 pode vir a comprometer não apenas a capacidade da criança em responder de forma adequada a diferentes estímulos antigênicos ao longo de sua vida, como também pode torná-la mais suscetível a desordens imunomediadas / The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), caused by human immunodeficiency virus (HIV), is one of the most impelling epidemic in the world, and the HIV-infection in young women has been increasing fast in the recent times, mainly in developing countries where most of them become pregnant precociously. Although the great majority of the pediatric AIDS cases all over the world results from vertical transmission, approximately, two thirds of the children exposed to HIV during fetal life are not contaminated. In this context, following brazilian consensus recommendations (Health Ministry), every child whom vertical transmission had been laboratorialy discarded does not need a specific ambulatorial follow up. However, our previous results demonstrated that HIV-1-infected pregnant women who did not control their plasma viral load presented elevated levels of inflammatory cytokines, and in the present study our results revealed that non-infected neonates, born from these pregnant women display immune functional abnormalities in umbilical cord T cells compartment when exposed in vitro to policlonal activators, but not to HIV-1 antigens. Furthermore, when compared to non-exposed neonates, T cell in vitro activation with anti-CD3/anti-CD28 from neonates exposed to HIV-1 induced production of high IL-17 levels and decreased of IL-10. Interestingly, this T cell bias in secreting IL-17 seem to be related to liberation of high IL-23 levels by dendritic cells derived from umbilical cord blood monocytes following stimulation with bacterial lipopolysacharide (LPS). The lack of uterine sensitization to HIV-1 antigens suggests that, these alterations, may translate an adverse effect of a high level maternal inflammatory cytokines production on neonates immune system, which may unbalance events related to neonatal and fetal immune maturation and homeostasis, favoring Th anomalous phenotypes predominance, such as Th17. This Th17 hyper-responsiveness may then compromise not only the childs capacity to respond in an adequate way to different antigenic stimuli through life, as well as becoming them more susceptible to immune-mediated disorders

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaLDLA_DISSERT.pdf: 3287914 bytes, checksum: 244a318f2c60d05b41aef3b1d3d6d2a0 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Periapical lesions are chronic inflammatory conditions of periradicular tissues considered direct consequences of infectious diseases resulting from pulp necrosis and subsequent progression to periapical region. The participation of the immune response and bone resorption in the formation of these lesions has been investigated, so that different cell types and cytokines have been identified as contributors to this process. In this perspective, this study aimed to evaluate the immunohistochemical expression of IL-17, TGF-?1 and FoxP3 in periapical granulomas (PGs), radicular cysts (RCs) and residual radicular cysts (RRCs), seeking a better understanding of the etiopathogenesis these periapicopatias. To this end, we selected 20 cases of GPs, 20 CRs and 10 RRCs to undergo morphological analysis and immunohistochemistry for biomarkers above, the latter being performed quantitatively using scores and average percentages of immunostaining for the analysis of IL-17 and TGF- ?1, while for the FoxP3 were counted only the positive lymphocytes. The results showed statistically significant differences between TGF-?1 and FoxP3 imunoexpressions, in relation to the periapical lesions studied (p = 0.002, p <0.001, respectively) but not between IL-17 and these (p = 0.355). Furthermore, the analysis of lymphocytes FoxP3-positive revealed significant statistical differences in that refers to the intensity of inflammatory infiltrate (p = 0.003) and also regarding thickness of the epithelial lining (p = 0.009). Finally, it was observed in the case of PGs, strong positive correlation between the amount of FoxP3- positive lymphocytes and the immunohistochemical expression of TGF-?1 (r = 0.755, p<0.001), as well as moderate positive correlation between IL-17 and TGF-?1 imunoexpressions (r = 0.503, p = 0.024). Thus, we can conclude that interactions between Th17 and Treg cells seem to be established at the site of injury, suggesting the involvement of both pro-inflammatory and immunoregulatory cytokines in the pathogenesis of periapical lesions / Les?es periapicais cr?nicas s?o condi??es inflamat?rias dos tecidos perirradiculares consideradas sequelas diretas de processos infecciosos resultantes da necrose pulpar e consequente progress?o para a regi?o periapical. A participa??o da resposta imunol?gica e da reabsor??o ?ssea na forma??o destas les?es tem sido bastante investigada, de modo que diversos tipos celulares e citocinas foram apontados como colaboradores deste processo. Nesta perspectiva, o presente estudo objetivou avaliar a express?o imuno-histoqu?mica da IL- 17, TGF-?1 e FoxP3 em granulomas periapicais (GPs), cistos radiculares (CRs) e cistos radiculares residuais (CRRs), buscando um melhor entendimento sobre a etiopatog?nese destas periapicopatias. Para tanto, foram selecionados 20 casos de GPs, 20 de CRs e 10 de CRRs para serem submetidos ? an?lise morfol?gica e imuno-histoqu?mica para os biomarcadores supracitados, sendo esta ?ltima realizada quantitativamente atrav?s de escores e percentuais m?dios de imunomarca??o para a an?lise da IL-17 e do TGF-?1, enquanto que para o FoxP3 foram contados apenas os linf?citos positivos. Os resultados demonstraram diferen?as estatisticamente significativas entre as imunoexpress?es do TGF-?1 e do FoxP3 em rela??o as les?es periapicais pesquisadas (p = 0,002; p < 0,001, respectivamente), mas n?o entre a IL-17 e estas (p = 0,355). Al?m disso, a an?lise dos linf?citos FoxP3-positivos revelou diferen?as estat?sticas significativas no que se refere ? intensidade do infiltrado inflamat?rio (p = 0,003) e tamb?m quanto ? espessura do revestimento epitelial (p = 0,009). Por fim, observou-se nos casos de GPs, forte correla??o positiva entre a quantidade de linf?citos FoxP3-positivos e a imunoexpress?o do TGF-?1 (r = 0,755; p < 0,001), assim como moderada correla??o positiva entre as imunoexpress?es da IL-17 e do TGF-?1 (r = 0,503; p = 0,024). Destarte, pode-se concluir que intera??es entre c?lulas Th17 e Treg parecem ser estabelecidas no local da agress?o, sugerindo a participa??o de citocinas tanto pr?inflamat?rias como imunorregulat?rias na patogenia das les?es periapicais

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BarbaraVBM_DISSERT.pdf: 1563576 bytes, checksum: c536e73cdfce0251b3446e74e0f9cc69 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Th17 cells have been strongly associated with the pathogenesis of several autoimmune and inflammatory diseases. IL-17 and IL-23 are important cytokines associated with this lineage. The aim of this study was to analyze, through immunohistochemical methods, the immunoexpression of IL-17 and IL-23 in the inflammatory infiltrate of oral lichen planus (OLP) lesion compared to that of inflammatory fibrous hyperplasia (IFH) and between clinical forms reticular and erosive of OLP. The sample included 41 cases of OLP, of which 23 were reticular and 18 erosive and 10 cases of IFH. The results were subjected to nonparametric statistical tests with a 5% significance level. In OLP lesions histomorphological analysis, the most common findings were: hyperparakeratinization, specimens with atrophic epithelium in erosive clinical form (p = 0.011), epithelial projections in most of reticular type of lesions, in addition Civatte bodies were identified in most samples of both clinical forms. For immunohistochemistry analysis, five fields with strong immunoreactivity for IL-17 and IL-23 were photomicrographed at 400x magnification, images were transferred to a computer where with ImageJ software?, lymphocytes that exhibited cytoplasmic immunostaining for these cytokines were counted. A mean was established after for each case. There was no statistically significant difference in the number of imunopositive lymphocytes for IL-17 and IL-23 among the group of OLP and IFH group, however a larger amount of lymphocytes imunopositive for IL-17 was found in the LPO group (p = 0.079) and significantly higher amounts of those lymphocytes were found in the erosive OLP when compared to the group of reticular OLP and IFH (p = 0.019). Furthermore, a marker epithelial immunopositivity for IL-17 was observed in OLP group. Although the results of this study do not permit the forceful assertion about the participation of Th17 lineage in OLP lesions, the findings of immunopositive lymphocytes counting for IL-17 and IL-23, which are potent proinflammatory cytokines, together with the the marked epithelial immunopositivity found for IL-17 in this study, suggest a possible role of this lineage in the pathogenesis of this disorder / As c?lulas Th17 t?m sido fortemente associadas com a patogenia de diversas doen?as autoimunes e inflamat?rias. A IL-17 e a IL-23 s?o importantes citocinas associadas com esta linhagem. O objetivo do presente trabalho foi analisar, atrav?s de m?todos imunohistoqu?micos, a imunoexpress?o da IL-17 e da IL-23 no infiltrado inflamat?rio das les?es de l?quen plano oral (LPO) comparando ao da hiperplasia fibrosa inflamat?ria (HFI) e entre as formas cl?nicas reticular e erosiva do LPO com o intuito de esclarecer se a linhagem Th17 participa da patog?nese do LPO. Na amostra foram inclu?dos 41 casos de LPO, dos quais 23 eram reticulares e 18 erosivos, al?m de 10 casos de HFI. Os resultados foram submetidos a testes estat?sticos n?o param?tricos com n?vel de signific?ncia de 5%. Na an?lise histomorfol?gica das les?es de LPO, observou-se predom?nio de: les?es hiperparaceratinizadas, esp?cimes com epit?lio atr?fico na forma cl?nica erosiva (p=0,011), proje??es epiteliais nas les?es do tipo reticular, al?m de corpos de Civatte identificados na maior parte da amostra de ambas as formas cl?nicas. Para o estudo imuno-histoqu?mico, cinco campos com forte imunorreatividade para a IL-17 e para a IL-23 foram fotomicrografados sob o aumento de 400x, as fotos foram transferidas para um computador onde com o aux?lio do software ImageJ?, realizou-se a contagem dos linf?citos que exibiram imunomarca??o citoplasm?tica para estas citocinas. Posteriormente, foi estabelecida uma m?dia para cada caso. N?o foram observadas diferen?as estatisticamente significativas na quantidade de linf?citos imunopositivos para a IL-17 e para a IL-23 entre o grupo do LPO e da HFI, no entanto uma maior quantidade desses linf?citos para a IL-17 foi encontrada no grupo do LPO (p=0,079) e uma quantidade significativamente maior de linf?citos imunopositivos para a IL- 23 foi encontrada entre o grupo do LPO erosivo e da HFI (p=0,019). Al?m disto, foi observada uma marcante imunopositividade epitelial para a IL-17 no grupo do LPO. Ainda que os resultados do presente estudo n?o permitam a afirma??o contundente da participa??o da linhagem Th17 nas les?es de LPO, os achados da contagem dos linf?citos imunopositivos para a IL-17 e para a IL-23, que s?o potentes citocinas pr?-inflamat?rias, somados ? marcante imunopositividade epitelial encontrada para a IL-17 neste estudo, sugerem uma poss?vel participa??o desta linhagem na patog?nese desta desordem

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThamaraMMB_DISSERT.pdf: 1856423 bytes, checksum: d77238963a3bf6663f56d36a18db57b6 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Th17 cells have been strongly associated to the pathogenesis of inflammatory and autoimmune diseases, although their influence on the carcinogenesis is still little known, there are reports of anti-tumor and protumoral actions. The objective of this study is to research the presence of Th17 lineage in lip and tongue SCC, using the analysis of the immunoexpression of IL-17 and ROR?t, relating this immunoexpression with clinical and morphological findings in the attempt to better comprehend the role of these cells on the tumoral immunity of OSCCs. The results were submitted to non-parametric statistical tests with significance level of 5%. On the histomorphological analysis, it was observed the predominance of low level lesions on lip and high level lesions on tongue (p=0,024). It was not observed statistical significance between clinical stage and histological gradation of malignancy (p=0,644). For the immunohistochemical study, 5 random fields with greater immunoreactivity of the peritumoral inflammatory infiltrate were photomicrographed on the 400x magnification. It was done the count of lymphocytes which showed cytoplasmic and pericytoplasmic staining for the IL-17 cytokine as well as nuclear and cytoplasmic staining for ROR?t. It was observed statistical significance difference on the quantity of immunopositive lymphocytes to IL-17 between the groups of SCC of lip and tongue (p=0,028). For the ROR?t it was not observed statistical significance difference between the groups of SCC of lip and tongue (p=0,915). It was not observed statistical difference between the immunostaining of IL-17 and ROR?t with histological gradation of malignancy and clinical staging. The findings of this research suggest a possible anti-tumor role of IL-17 for cases of lip. The results of the analysis of the ROR?t are possibly due to the wide duality of the anti-tumor and protumoral role of the Th17 cells and their plasticity which, in the presence of different cytokines expressed on the tumor microenvironment, can alter its phenotype. / As c?lulas Th17 t?m sido fortemente associadas ? patogenia de doen?as autoimunes e inflamat?rias, por?m sua influ?ncia na carcinog?nese ainda ? pouco conhecida, havendo relatos de suas a??es tanto antitumorais quanto pr?-tumorais. O objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presen?a da linhagem Th17 intratumoral em CCE de l?bio e l?ngua, atrav?s da an?lise da imunoexpress?o da IL-17 e do ROR?t, relacionando estes achados com dados cl?nicos e morfol?gicos na tentativa de melhor compreender o papel dessas c?lulas na imunidade tumoral dos CCEOs. Na an?lise histomorfol?gica, observou-se predom?nio de les?es de baixo grau em l?bio e de alto grau em l?ngua (p = 0,024). N?o foi observada signific?ncia estat?stica entre estadiamento cl?nico e grada??o histol?gica de malignidade (p = 0,644). Para o estudo imunoistoqu?mico, 5 campos aleat?rios com maior imunorreatividade do infiltrado inflamat?rio peritumoral foram fotomicrografados no aumento de 400x. Realizou-se a contagem de linf?citos que exibiram marca??o citoplasm?tica e pericitoplasm?tica para a citocina IL-17 bem como nuclear e citoplasm?tica para o ROR?t. Foi observada diferen?a estatisticamente significativa na quantidade de linf?citos imunopositivos para IL-17 entre os grupos de CCE de l?bio e l?ngua (p = 0,028). Para o ROR?t n?o foi observada diferen?a estatisticamente significativa entre os grupos de CCE de l?bio e l?ngua (p = 0,915). N?o foi observada diferen?a estat?stica entre a imunomarca??o da IL-17 e ROR?t com grada??o histol?gica de malignidade e com estadiamento cl?nico. Os achados dessa pesquisa sugerem um poss?vel papel antitumoral da IL-17 para os casos de l?bio. Os resultados da an?lise do ROR?t, possivelmente se devem ? ampla dualidade do papel pr?-tumoral e antitumoral das c?lulas Th17 e ? sua plasticidade que, na presen?a de diferentes citocinas expressas no microambiente tumoral, podem alterar seu fen?tipo

Diabetes tipo 1 (DM1) e uma doenca autoimune que se inicia devido a defeitos na tolerancia imunologica a auto-antigenos, resultando na destruicao autoimune das celulas pancreaticas em individuos geneticamente suscetiveis. Os receptores NOD-like (NLRs) sao receptores intracelulares responsaveis pelo reconhecimento de padroes moleculares associados a patogenos (PAMPs) e padroes moleculares associados ao dano (DAMPs). Estudos recentes tem demonstrado que os receptores NOD1 e NOD2 desempenham um importante papel na ativacao da imunidade inata contra patogenos e na regulacao da imunidade adaptativa, uma vez que sua ativacao leva a producao de citocinas relacionadas a diferenciacao de linfocitos T auxiliares produtores de IL-17 (Th17). Porem, a importancia desses receptores no DM1 ainda e incerto. Nesse sentido, investigamos o papel dos receptores NOD1 e NOD2 na patogenese do DM1, com enfoque na diferenciacao de linfocitos Treg/Th17/Th1 e na plasticidade desses subtipos celulares. Nossos resultados mostram que camundongos deficientes de NOD2, mas nao NOD1 ou RIP2, sao resistentes ao DM1, como comprovado por menor incidencia, hiperglicemia, diminuicao do infiltrado inflamatorio e normalizacao dos niveis de insulina quando comparado aos controles. Foi observado tambem que animais NOD2-/- tiveram uma reducao da populacao de linfocitos Th17, Tc17, Th1 e T citotoxicos nos linfonodos pancreaticos, o que correlaciona com a inibicao da producao de IL-23p19 e IFN- no pancreas. Em paralelo, foi evidenciado o aumento do numero de celulas T reguladoras, macrofagos do perfil M2 nos linfonodos pancreaticos e elevada producao de IL-10 no pancreas de animais NOD2-/-. Alem disso, foi observado que animais NOD2-/- apresentaram uma menor populacao de linfocitos T duplo-positivos (Foxp3+RORt+ e IL-17+IFN+). Posteriormente, foi detectado menor producao de IL- 1, IL-6, IL-23p19 e IL-12p40 por celulas dendriticas de animais deficientes de NOD2. De forma interessante, foi observada a translocacao de bacterias para os linfonodos pancreaticos de animais diabeticos. Adicionalmente, animais tratados com antibioticos tornaram-se resistentes ao DM1, o que nos fornece indicios da contribuicao da microbiota intestinal na inducao da doenca. Por fim, comprovamos alta expressao genica de NOD2 nos linfonodos pancreaticos e no pancreas na fase inicial (pre-diabetica) em outro modelo de DM1, utilizando camundongos NOD (nonobese diabetic mice). Portanto, nossos dados indicam que a ativacao do receptor NOD2 por componentes bacterianos da microbiota intestinal induz a producao de citocinas pro-inflamatorias com subsequente diferenciacao/conversao de linfocitos do perfil Th17/Th1 e progressao do DM1. Dessa forma, estes dados apontam o bloqueio do receptor NOD2 como uma potencial terapia imunomoduladora para o DM1 em humanos. / Type 1 diabetes is an autoimmune disease that precipitates due to defects in the self tolerance to auto- antigens, resulting in the autoimmune destruction of the pancreatic cells in genetically susceptible individuals. NOD-like (NLRs) receptors are intracellular receptors responsible for the recognition of pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and damage associated molecular patterns (DAMPs). Recent studies have shown a role of NOD1 and NOD2 receptors in the innate immune response against pathogens and in the adaptive immune response, since its activation leads to the generation of cytokines related to the differentiation of IL-17-producing T helper cells (Th17). However, the role of these receptors in T1D remains elusive. Therefore, we investigated the role of NOD1 and NOD2 receptors in the pathogenesis of T1D, focusing on the differentiation of Treg/Th1/Th17 lymphocytes and in the plasticity of these subtypes. Our data demonstrate that NOD2-/- mice, but not NOD1-/- or RIP2-/-, are resistant to T1D, as shown by the lower incidence, hyperglycemia, less insulitis and normal insulin production when compared to wild type mice. It was also observed that NOD2-/- mice have a reduction in the Th17, Tc17, Th1 and cytotoxic T lymphocyte population within the pancreatic lymph nodes (PLNs), which correlates with the inhibition of IL-23p19 and IFN production in the pancreas. In parallel, there was an increase in Treg cells, M2 macrophages in the PLNs and IL-10 production in the pancreatic tissue of NOD2-/- mice. Also, NOD2-/- mice presented a downregulation of Foxp3+RORt+ and IL-17+IFN+ double-positive T cells. Later, it was shown that IL-1, IL-6, IL-23p19 and IL-12p40 production was downregulated in mice deficient to the NOD2 receptor. Interestingly, we observed a bacterial translocation to the pancreatic lymph nodes in diabetic mice, what could be triggering NOD2 activation, thus contributing to T1D development. As expected, mice pre-treated with antibiotics failed to become diabetic, suggesting a possible role of the gut microbiota in the development of the disease. Lastly, we observed a higher relative expression of NOD2 in the PLNs and pancreas of pre-diabetic mice, using another mouse model of the disease, the nonobese diabetic (NOD) mouse. Collectively, our data suggest that components from the gut microbiota are capable of translocating to the PLNs, thus triggering the activation of NOD2, which in turn induces the production of proinflammatory cytokines related to the differentiation of Th1/Th17 cells, thus contributing to T1D development in a mouse model of the disease. Therefore, the blockade of NOD2 appears as an interesting therapeutical target in the treatment of type 1 diabetes in humans.

O trato gastrointestinal é um sítio de alta exposição antigênica, por isso requer a presença de mecanismos de regulação imunológica mediada por linfócitos T reguladores e T auxiliares produtores de IL-17 (Th17) na mucosa intestinal. Se houvera falha na indução desses mecanismos, pode ocorrer o desequilíbrio das populações de bactérias comensais da microbiota intestinal, denominado de disbiose, geralmente associado à ruptura da barreira intestinal e translocação de bactérias ou LPS para o sangue. Neste sentido, alguns estudos têm evidenciado a importância dos linfócitos Th17 no intestino, já que estas células tem a capacidade de manter a integridade da barreira intestinal e, como conseqüência controlar a colonização e translocação bacteriana. Em adição, em pacientes e animais diabéticos têm sido observada a correlação de altos níveis de LPS circulantes e resistência à insulina. Baseado nessas evidências, nosso objetivo foi avaliar o papel da citocina IL-17 no controle das alterações inflamatórias e metabólicas no modelo de diabetes do tipo 2 (DM2). Para isso, foram utilizados camundongos C57BL/6 selvagens (WT) ou deficientes do receptor da citocina IL-17 (IL-17R-/-) submetidos à dieta controle (DN), composta por 10% de gorduras, 70% de carboidratos e 20% de proteínas ou à dieta hiperlipídica (DH), composta por 60% de gorduras, 20% de carboidratos e 20% de proteínas. Nossos dados demonstraram que a deficiência do receptor de IL-17 protegeu os animais contra a obesidade, mas os mesmos desenvolveram maior hiperglicemia e hiperinsulinemia decorrente da resistência à insulina. Além disso, foi verificada a hiperplasia das ilhotas pancreáticas, anormalidades na arquitetura e intenso infiltrado inflamatório no intestino (íleo) dos animais IL-17R-/- comparados aos WT após DH. Esse fato parece estar correlacionado a um defeito da migração de neutrófilos para a mucosa intestinal, uma vez que foi detectada reduzida expressão gênica da quimiocina CXCL-1 e do receptor CXCR-2 no íleo desses animais. De maneira interessante, as populações de neutrófilos (CD11b+Ly6G+) e de macrófagos anti-inflamatórios (CD11b+CX3CR1+) mostraram-se aumentadas nos linfonodos mesentéricos dos animais IL-17R-/- após DH. Em seguida, foi constatada maior translocação bacteriana no sangue tanto de animais IL-17R-/- submetidos à DN como DH. Entretanto, a análise metagenômica do gene 16S revelou a prevalência de bactérias Bacteroidetes e Proteobacterias, principais representantes de bactérias gram-negativas, somente nas fezes dos animais IL-17R-/- submetidos à DH. Em conjunto, estes dados indicam que o eixo IL-17/IL-17R é importante na manutenção da homeostase intestinal e na regulação das alterações inflamatórias e metabólicas associadas ao DM2 / The gastrointestinal tract is a high antigenic exposure site, so it requires the presence of immune regulation mechanisms mediated by regulatory T lymphocytes and IL-17- producing T helper lymphocytes (Th17) in the intestinal mucosa. If there is a failure in the induction of these mechanisms, may occur the imbalance in the populations of commensal bacteria of the intestinal microbiota, called dysbiosis, generally associated with the break of the intestinal barrier and translocation of bacteria or their products like LPS into the blood. In this regard, some studies have evidenced the importance of Th17 lymphocytes in the intestine, since these cells have the ability to maintain the integrity of the intestinal barrier, and consequently controlling the colonization and bacterial translocation. In addition, in patients and diabetic animals have been observed correlation between high circulating levels of LPS and insulin resistance. Based on this evidence, our objective was to evaluate the role of IL-17 cytokine in the control of inflammatory and metabolic changes in the type 2 diabetes (T2DM). For this reason, were used C57BL/6 wild-type mice (WT) or lacking of IL-17 cytokine receptor (IL-17R-/-) mice undergoing to the control diet (ND) comprising 10% fat, 70% carbohydrate and 20% protein or high fat diet (DH), comprising 60% fat, 20% carbohydrates and 20% protein. These data demonstrate that IL-17 receptor deficiency protected the animals against obesity, but these mice developed hyperglycemia and hyperinsulinemia due to insulin resistance. Furthermore, we verified a hyperplasia of the pancreatic islets, abnormalities in architecture and intense inflammation in the intestine (ileum) of IL-17R-/- animals undergoing DH compared to WT. This appears to be correlated to a defect in the neutrophil migration to the intestinal mucosa, since was detected reduced gene expression of the CXCL-1 chemokine and CXCR-2 receptor in the ileum of these animals. Interestingly, the populations of neutrophils (CD11b+Ly6G+) and antiinflammatory macrophages (CD11b+CX3CR1+) were shown to be increased in the mesenteric lymph nodes of IL-17R-/- animals after DH. Later, it was found more bacterial translocation in blood, both in IL-17R-/- mice with ND or DH. However, the metagenomic analyzes of the 16S gene revealed increased of Proteobacteria and Bacteroidetes phyla, the main representatives of gram-negative bacteria, only in the faeces of IL-17R-/- mice underwent DH. Together, these data indicate that IL-17/IL-17R axis is important in maintaining intestinal homeostasis and the regulation of inflammatory and metabolic alterations associated to T2DM

INTRODUÇÃO: Atualmente as células da microglia têm recebido grande atenção dentro da resposta imune, isto devido ao fato de que sua ativação por citocinas inflamatórias é capaz de promover a infiltração e destruição do sistema nervoso central (SNC) durante algumas doenças, principalmente no caso da esclerose múltipla (EM). Além de seu papel pró-inflamatório, já demonstrou-se que estas também são capazes de expressar moléculas supressoras como a indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO), capaz de suprimir a proliferação de células T. Contudo, ainda pouco se sabe sobre seu verdadeiro papel na patogenia da EM. Recentemente tem sido descrita uma população de células T chamadas Th17, capaz de secretar grandes quantidades de IL-17, IL-21 e GM-CSF possuindo uma importância fundamental na patogenia da EM e de seu modelo murino, a EAE. Nesse contexto, a relação entre as Th17 e as células da microglia pode nos fornecer dados importantes acerca dos mecanismos envolvidos nas lesões observadas no SNC. OBJETIVO: Este trabalho teve como objetivo melhor elucidar a relação existente entre a expressão das moléculas imunes por células da microglia e a ação que estas promovem sobre as células T. MÉTODOS: Utilizamos culturas de células da microglia de linhagem, chamadas C8-B4, assim como cultura primária de células da microglia obtidas a partir sistema nervoso de camundongos C57BL/6 adultos. Caracterizamos o perfil imune da microglia, avaliando a transcrição de genes para citocinas através de PCR em tempo real assim como a expressão de suas moléculas ativadoras por citometria de fluxo. A avaliação da IDO se deu através da expressão da mesma por células da microglia ativadas ou não por LPS ou IFN-?. Ja sua capacidade funcional foi medida através da atividade proliferativa de linfócitos T CD4 específicos para MOG 35-55. RESULTADOS: Nossos resultados demonstraram que as células de ambas as culturas possuem a capacidade de expressar diversas moléculas imunes, tanto pró quanto anti-inflamatórios. Dentre estas observamos TLR-4, TLR-2, IL-6, IL-10 e TGF-?. Além disso, confirmamos a expressão da enzima IDO por estas células. O bloqueio de tal enzima impede o controle que a microglia tem sobre a proliferação dos linfócitos T CD4, tanto in vitro quanto in vivo. No modelo in vivo tal efeito repercute em uma encefalomilite mais severa, onde o quadro clínico do animal não regride. CONCLUSÃO: Os resultados aqui obtidos nos dão a certeza da influência das microglias dentro do contexto inflamatório, afirmando sua capacidade de modular a resposta imune. Além disto, fica clara a importância da enzima IDO, cuja ação dentro do controle de uma autoimunidade demonstra ser altamente necessária / INTRODUCTION: Microglia cells has gained great attention recently because its activation by inflammatory cytokines can promote infiltration and destruction of Central Nervous System (CNS) during some disease, mainly in the case of Multiple Sclerosis (MS). On the other hand, these cells may also express suppressor molecules such as the indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), able to suppress T cell proliferation. However, still little is known about its role in MS pathogenesis. Recently it has been described a new population of T cells called Th17, able to secrete high amounts of IL-17, IL-21 and GM-CSF, with a fundamental importance on MS and its murine model, EAE. In this context, the relationship between Th17 and microglia cells can provide us important data about the mechanisms involved in the establishment of CNS lesions. OBJECTIVES: This work had the objective to better elucidate the relationship between the expression of some molecules by microglia and its role T cell activation. METHODS: Through a cellular lineage knowing as C8-B4 and primary cultures of microglia obtained from CNS of adult mice C57BL6 we investigated the transcription of several genes for cytokines and membrane expression of several pattern recognition receptors. The IDO evaluation was performed after activation with LPS or rIFN-?. Its functional capacity was measured trough its action over T cell proliferation. RESULTS: Our results demonstrated that both cells have the capacity of express several immune molecules, both pro and anti-inflammatory. Among this, we observed TLR-4, TLR-2, IL-6, IL-10 and TGF-?. We also confirmed IDO expression by these cells. The blockade of such enzyme prevents the control of microglia above T CD4 lymphocytes proliferation, both in vitro and in vivo. Using the in vivo model, IDO blocker rendered a encephalomyelitis more severe. Conclusion: The results here obtained give us the certainty of microglia influence in inflammatory context, stating its capacity of modulating the immune response

Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico patogênico agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose endêmica no Brasil. A busca por alternativas para reduzir o tempo de tratamento da PCM levou ao desenvolvimento de uma vacina de DNA contendo a sequência do peptídeo P10 de P. brasiliensis. Neste trabalho, avaliamos a geração de células T de memória e células T reguladoras em camundongos imunizados com esta vacina de DNA antes e após o desafio com o fungo, através da análise de seus esplenócitos e linfócitos pulmonares por citometria de fluxo. Os resultados mostram um aumento no percentual de células T reguladoras e de memória no baço e pulmões dos animais imunizados antes e depois de 30, 60 e 120 dias do desafio em comparação com os grupos controle e não imunizado. Outro experimento revelou que o modelo experimental da PCM in vivo é capaz de induzir a expressão de ROR&#947t. Este estudo mostra que nossa vacina de DNA contra a PCM gera células com fenótipo de reguladoras e de memória, caracterizando seu potencial para o tratamento desta micose. / Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungal pathogen that is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a mycosis endemic in Brazil. The search for new alternatives to reduce the duration of PCM treatment led to the development of a DNA vaccine encoding the peptide P10 of P. brasiliensis. Presently, we evaluated the generation of memory and regulatory T cells in mice immunized with this DNA vaccine, before and after the challenge with the fungus by analizing their splenocytes and pulmonary lymphocytes by flow cytometry. The results show an increase in the percentage of regulatory and memory T cells on spleens and lungs of immunized mice before and after 30, 60 and 120 days of challenge compared with the control and untreated groups. Another experiment revealed that the PCM in vivo infection model is capable of inducing ROR&#947t expression. This study demonstrates that our DNA vaccine against PCM generates cells with a regulatory and memory phenotype, which shows its potencial in the treatment of this mycosis.

Neste trabalho foi estudado o potencial imunorregulador da crotoxina (CTX) obtida do veneno de C. d. terrificus, em modelo experimental de colite induzida pelo TNBS em camundongos. A CTX foi capaz de diminuir a perda de peso, o score clínico e histológico, síntese de MPO e citocinas pró-inflamatórias. Menor número de neutrófilos e macrófagos com fenótipos M1 e M2 na lâmina própria foi observado nos grupos TNBS/CTX em relação ao TNBS. A CTX induziu TGF-b e IL-10, PGE2 e LXA4. A neutralização in vivo dessas citocinas ou o bloqueio da síntese desses eicosanoides indica que estas moléculas exercem papel relevante na ação moduladora da CTX no quadro inflamatório. As análises das diferentes populações celulares da lâmina própria, linfonodos e Placas de Peyer mostraram que não houve diferença nos linfócitos CD4+Tbet+ entre os grupos TNBS e TNBS/CTX. No entanto, a CTX promoveu aumento de CD4+FoxP3+ e diminuição de CD4+RORg+. Estes resultados indicam que a CTX é capaz de modular a resposta inflamatória aguda intestinal melhorando o quadro clinico observado nos animais. / In this work it was analyzed the immunomodulatory effect of crotoxin (CTX) isolated from C.d. terrificus snake venom, on the experimental model of colitis induced by TNBS in mice. The CTX was able to inhibit the weight loss, clinical and histological score, MPO synthesis and pro-inflammatory cytokines. Lower number of neutrophils and macrophage (M1 and M2) in lamina propria was observed in TNBS/CTX mice compared with the TNBS group. In contrast, the CTX induced increased TGF-b, IL-10, PGE2 and LXA4. The in vivo neutralization of these cytokines or eicosanoids synthesis indicates that these molecules exert significant role in the modulatory effect of CTX. The analyzes of distinct cell populations from lamina propria, lymph nodes and Peyers pathes showed no difference in CD4+Tbet+ between TNBS or TNBS/CTX mice. However, CTX induced an increase of CD4+FoxP3+ and decreased CD4+RORgt+. Together, these results indicate that CTX is able to modulate intestinal acute inflammatory response induced by TNBS improving the clinical status of the mice.