Rickettsia rickettsii é uma bactéria intracelular obrigatória e agente etiológico da febre maculosa brasileira, uma grave enfermidade para humanos. Na América do Sul, o principal vetor para o agente é o carrapato Amblyomma cajennense. Alguns animais exercem um papel importante na manutenção da bactéria na natureza, uma vez que a mantêm em níveis altos na corrente sanguínea por alguns dias ou semanas, garantindo que novos carrapatos se infectem. Os equinos são um dos principais hospedeiros para A. cajennense, porém sua importância como hospedeiro amplificador de R. rickettsii ainda não havia sido estudada. Objetivou-se no presente trabalho detectar, em equinos experimentalmente infectados com R. rickettsii, possíveis alterações clínicas, ocorrência e duração de riquetsemia e ocorrência de transmissão da bactéria dos equinos para carrapatos A. cajennense, além de observar a curva de anticorpos IgG anti-R. rickettsii nestes animais. Para tanto, quatro equinos foram infectados com a amostra Taiaçu de R. rickettsii, sendo dois por meio de infestação com carrapatos A. cajennense infectados e dois por meio de inoculação intraperitoneal. Durante 30 dias, os animais foram examinados diariamente e amostras de sangue foram coletadas a cada dois dias para realização de hemograma, PCR em tempo real do sangue para detecção de Rickettsia e inoculação do sangue em cobaias. Adicionalmente, exames bioquímicos foram realizados a cada seis dias e RIFI para detecção de anticorpos IgG foi realizada até os animais se tornarem soronegativos. Para verificar a capacidade de transmissão para carrapatos, os equinos foram infestados com larvas, ninfas e adultos de A. cajennense não infectados. Após serem retirados dos equinos, estes carrapatos foram alimentados em coelhos e/ou testados pela PCR em tempo real e PCR convencional para detecção de Rickettsia. Os equinos não apresentaram sinais clínicos nem alterações significativas no hemograma e testes bioquímicos. Todas as amostras de sangue foram negativas na PCR em tempo real e nenhuma cobaia inoculada com sangue dos equinos apresentou sinais clínicos compatíveis com infecção por R. rickettsii, nem soroconversão. Os equinos apresentaram anticorpos detectáveis a partir de 10 ou 12 dias pós-inoculação ou infestação e permaneceram soropositivos por no mínimo 177 dias. Nenhum coelho infestado com carrapatos previamente alimentados nos equinos apresentou sinais clínicos ou soroconversão após 21 dias da infestação. Apenas um carrapato, originário de um equino infectado via carrapatos infectados, foi positivo concomitantemente na PCR em tempo real e PCR convencional. Conclui-se que equinos experimentalmente infectados com uma amostra brasileira de R. rickettsii não apresentam alterações clínicas nem bacteremia detectável e transmitem a bactéria para uma quantidade ínfima de carrapatos, porém desenvolvem boa resposta humoral. Pode-se inferir que, em condições naturais, equinos não são importantes como hospedeiros amplificadores para R. rickettsii. / Rickettsia rickettsii is an obligate intracellular bacterium and the etiological agent of Brazilian spotted fever, a severe illness of humans. In South America, the main vector for the agent is the tick Amblyomma cajennense. Some animals play an important role in maintenance of the bacterium in nature, since they develop high levels of bacteremia for a few days or weeks, ensuring that new ticks become infected. Horses are one of the major hosts for A. cajennense, but its importance as an amplifier host for R. rickettsii had not yet been studied. This study aimed to evaluate possible clinical changes, the occurrence and duration of rickettsemia, and the occurrence of transmission of the bacterium from horses to A. cajennense ticks in horses experimentally infected with R. rickettsii, in addition to observe the kinetics of anti-R. rickettsii IgG antibodies. Therefore, four horses were infected with R. rickettsii strain Taiaçu, two by infestation with infected A. cajennense ticks and two by intraperitoneal injection. For 30 days, the animals were examined daily and blood samples were collected every two days for hemogram, real-time PCR of whole blood for the detection of Rickettsia, and inoculation of guinea pigs with blood. Additionally, biochemical tests were performed every six days and IFA test for detection of IgG antibodies was performed until the animals become seronegative. In order to verify the ability of the horses to transmit the infection to ticks, horses were infested with uninfected A. cajennense larvae, nymphs and adults. After being removed from horses, these ticks were fed on rabbits and/or tested by real-time PCR and conventional PCR. The horses showed no clinical signs or significant changes in the blood count and biochemical tests. All blood samples were negative in the real-time PCR and no guinea pig inoculated with the horse blood showed clinical signs consistent with infection by R. rickettsii, neither seroconversion. Horses had detectable antibodies from 10 or 12 days post-inoculation or infestation and remained seropositive for at least 177 days. None of the rabbits infested with ticks previously fed on the horses showed clinical signs or seroconversion after 21 days of infestation. Only one tick fed on a horse infected by infected ticks was positive in the real-time PCR and conventional PCR. The results allows to conclude that horses, experimentally infected with a Brazilian strain of R. rickettsii, do not exhibit clinical changes or detectable bacteremia, and transmit the bacterium to a very small amount of ticks, but develop good humoral response. We can infer that horses are not important as amplifiers hosts for R. rickettsii under natural conditions.

Dentro do gênero Rhipicephalus, há o chamado complexo sanguineus formado por várias espécies presentes apenas no Velho Mundo, das quais apenas a espécie Rhipicephalus sanguineus é considerada de ocorrência no Novo Mundo. Como as espécies deste complexo apresentam grande similaridade morfológica, é possível que mais de uma espécie do complexo sanguineus esteja ocorrendo nas Américas. Um trabalho recente relatou parâmetros biológicos e genéticos significativamente diferentes entre uma população de R. sanguineus do Brasil e outra da Argentina, sugerindo que o status biosistemático de R. sanguineus na América do Sul deva ser revisto. Diante disto, e da inquestionável importância medico-veterinária de R. sanguineus na América do Sul, este projeto objetivou realizar uma análise genética de 32 populações de R. sanguineus, sendo 17 do Brasil (englobando 13 estados), 3 do Chile, 2 da Venezuela, 2 da Colômbia e 1 de cada um dos seguintes países: Argentina, Uruguai, Itália, Espanha, África do Sul, Costa Rica, Panamá, México. Uma amostra de Rhipicephalus turanicus da Espanha e uma da África do sul também foram analisadas. Para tal, carrapatos oriundos das diferentes populações foram analisados geneticamente através de seqüências dos genes mitocondriais 16S rDNA. O resultado deste trabalho permitiu inferir sobre a possibilidade da existência no mínimo de dois grupos distintos de carrapatos sob o táxon R. sanguineus na América Latina, um se aproximando dos carrapatos de origem africana e com distribuição na América tropical e subtropical e outro se aproximando das amostras européias e com distribuição temperada do sul da América do Sul / Among the genus Rhipicephalus, there is the sanguineus complex composed by many species of distribution restricted to the Old World. It has been considered that Rhipicephalus sanguineus is the only species from this complex to be present in the New World. Due to the high similarity between the sanguineus complex species, it is possible that more than one species is present in the Americas, as suggested by recent papers. The present study performed a genetic evaluation based on 16S rDNA mitochondrial gene sequences of ticks representative 26 R. sanguineus populations from South America, one from: Italy, Spain, South Africa, Costa Rica, Panama, Mexico. Additionally, Rhipicephalus turanicus ticks from South Africa and Spain were also used. The results confirm the existence of genetically distinct populations of the \"sanguineus\" complex in the Americas

Avaliou-se o impacto da fragmentação florestal na diversidade de carrapatos de vida-livre e a presença de patógenos nestes carrapatos em remanescentes florestais do Pontal do Paranapanema, estado de São Paulo, Brasil. Estes fragmentos florestais abrigam uma rica e importante biodiversidade, com espécies endêmicas e ameaçadas como o mico-leão-preto (Leontopithecus chrysopygus), a anta (Tapirus terrestris), a onça pintada (Panthera onca), o macuco (Tinamus solitarius) e várias outras espécies de aves, mamíferos, répteis, anfíbios e peixes. Aproximadamente 90% das espécies de carrapatos parasitam exclusivamente hospedeiros selvagens. O restante pode ter animais domésticos e humanos como hospedeiros. Embora a maioria das pesquisas tenha sido dirigida a espécies de importância econômica, os carrapatos que parasitam animais selvagens possuem relevante papel na manutenção dos níveis de patógenos em populações de vida livre. Algumas destas espécies, por exemplo, demonstraram que podem parasitar hospedeiros não selvagens e promover o surgimento de zoonoses. Em habitats fragmentados, a diversidade de espécies vertebradas é menor se comparado a habitats com pouca alteração antrópica. Portanto, a fragmentação do habitat diminui a diversidade de espécies de carrapatos também. Para estudar a relação entre a fragmentação florestal e a ecologia das populações de carrapatos foram coletados carrapatos em 8 fragmentos florestais pelo método de arrasto de flanela e inspeção visual da vegetação. Os índices de comparação utilizados foram de similaridade de Jaccard, de diversidade de Shannon e complexidade do fragmento florestal de Patton. Utilizou-se o modelo de regressão linear para compara os índices de Shannon e Patton. Um total de 2149 ninfas de Amblyomma spp foi coletado e foram identificadas as espécies de 629 carrapatos. As espécies coletadas foram Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). Nenhum indivíduo testado foi positivo pelo teste da hemolinfa. Os resultados mostraram uma tendência de correlação entre a fragmentação floresta, e a diversidade de espécies de carrapatos. / This study evaluated the impact of forest fragmentation on diversity of freeliving ticks and prevalence of tick pathogens in remaining forest fragments in the Pontal do Paranapanema, São Paulo state, Brazil. These forest fragments shelter rich and important biodiversity, with endemic and threatened species such as the black lion tamarin (Leontopithecus chrysopygus), the tapir (Tapirus terrestris), jaguar (Panthera onca), the solitary tinamou (Tinamus solitarius) and various other species of birds, mammals, reptiles, amphibians and fish. Approximately 90% of tick species parasitize exclusively wild hosts. The remainder can also have domestic animals and humans as hosts. Although most research has been directed to species of economic importance, ticks that parasitize wild animals are also relevant due to their role in maintaining enzootic pathogen levels in wild populations. Some of these species, for example, have been shown to cross-over onto non-wild hosts and promote emergent zoonoses. In fragmented habitats, the diversity of vertebrate species is normally lower than comparable habitats with minimal anthropic alteration. Thus, habitat fragmentation decreases the diversity of tick species too. To study the relationship between forest fragmentation and population ecology of ticks, ticks were collected in 8 forest fragments using dragging and visual inspection of vegetation. The index used were Jaccard´s similarity, diversity f Shannon and Patton. The linear regression model was used to compare Shannon and Patton indexes. A total of 2149 nymphs of Amblyomma spp. And 629 identified ticks was collected. The species of ticks collected was Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). All ticks were negative by hemolimph test. The results showed a tendency of correlation between forest fragmentation and diversity of tick species.

O gênero Rickettsia compreende bactérias intracelulares obrigatórias e há por enquanto 22 espécies que, comprovadamente, são patogênicas ao homem. A transmissão da maioria das espécies de riquétsias está associada a carrapatos, mas também podem ser veiculadas por pulgas, piolhos e ácaros. O presente estudo teve por objetivos avaliar a infecção de Rickettsia parkeri em carrapatos da espécie Amblyomma triste (Acari: Ixodidae) e também avaliar a infecção de Rickettsia spp. em algumas espécies de Ornithonyssus Sambon (Acari: Macronyssidae). Foram obtidas fêmeas de A. triste de um cervo-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) atropelado e as posturas testadas por PCR para o estabelecimento de uma colônia naturalmente infectada com R. parkeri (grupo infectado) e outra livre de infecção (grupo controle). Para avaliar a infecção de Rickettsia spp. em ácaros foram realizadas 15 campanhas de capturas de pequenos mamíferos terrestres nos estados de São Paulo e Paraná. Após anestesisa e escovação, os ácaros foram removidos dos hospedeiros e mantidos em nitrogênio líquido para a tentativa de isolamento através da técnica de shell vial. Foram estudadas quatro gerações de A. triste infectada e não infectada com R. parkeri. Os resultados revelaram que R. parkeri é moderadamente patogênica para A. triste e a fase do ciclo biológico do carrapato mais sucetível ao efeito deletério da bactéria é o estágio ninfal. Foram capturados 165 mamíferos silvestres das seguintes espécies: Akodon cursor, Akodon montensis, Didephis aurita, Euryzoryzomys russatus, Metachirus nudicaudatus, Monodelphis sp., Nectomys squamipes, Oecomys sp., Oligoryzomys sp, Oxymycterus sp., Sciurus aestuans and Thaptomys nigrita. Destes, somente 13 estavam infestados com três espécies de Ornithonyssus spp. Foi obtido um isolado de O. vitzthumi que parasitavam Oxymycterus sp., contudo não foi possível sua caracterização, pela não amplificação pelos marcadores clássicos para o gênero Rickettsia. / The genus Rickettsia comprises obligate intracellular bacteria and there are so far 22 species that are proven to be pathogenic to humans. The transmission of most species of rickettsiae is associated with ticks, but also can be transmitted by fleas, lice and mites. The present study aimed to evaluate the infection of Rickettsia parkeri in Amblyomma triste. (Acari: Ixodidae) and also to evaluate the infection of Rickettsia spp. in some species of Ornithonyssus spp. Sambon (Acari: Macronyssidae). A. triste females were obtained from a marsh deer (Blastocerus dichotomus). Through PCR on their offspring, it was established of a colony naturally infected with R. parkeri (infected group) and another colony uninfected (control group). To assess the infection of the Rickettsia spp. in mites, 15 capture campaigns of small terrestrial mammals were performed in the states of São Paulo and Paraná. After anesthesia and brushing, the mites were removed from hosts and kept in liquid nitrogen for isolation of rickettsiae using the shell vial technique. Four consecutive generations of A. triste were studied in the laboratory. The results showed that R. parkeri is moderately pathogenic to A. triste, especially to the nymphal stage. A total of 165 wild small mammals of the following species were captured: Akodon cursor, Akodon montensis, Didephis aurita, Euryzoryzomys russatus, Metachirus nudicaudatus, Monodelphis sp., Nectomys squamipes, Oecomys sp., Oligoryzomys sp, Oxymycterus sp., Sciurus aestuans and Thaptomys nigrita. Of these, only 13 were infested with three species of Ornithonyssus spp. A bacterial isolate was obtained from mites removed from a Oxymycterus sp. However, it was not possible the molecular characterization by classical markers for the genus Rickettsia.

Estudos recentes demonstraram a existência de Rickettsia felis, riquétsia do Grupo da Febre Maculosa, em sangue de pacientes com quadro clínico compatível com a doença e em pulgas infectadas. Este projeto visa determinar a prevalência de R. felis em vetores (pulgas e carrapatos) e em potenciais reservatórios (gambás, cães, gatos, eqüinos e humanos), procedentes de áreas endêmicas (Mogi das Cruzes, Pedreira, Piracicaba e São Paulo), e não endêmicas (Pirassununga) para FM no Estado de São Paulo. Foram utilizados métodos moleculares (reação em cadeia pela polimerase e sequenciamento de DNA), diagnóstico sorológico e cultivo celular. Em gambás capturados (Didelphis aurita e Didelphis albiventris) foram colhidas 312 pulgas, pertencentes às Famílias Pulicidae (141), Rhopalopsyllidae (170) e Ctenophthalmidae (1) e 709 carrapatos (Amblyomma spp e Ixodes loricatus). Nos cães foram colhidos 212 pulgas (Ctenocephalides felis felis) e 115 carrapatos (Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Nos gatos foram colhidos 66 pulgas (59 C. felis felis e 7 Rhopalopsyllus lutzi lutzi) e 10 carrapatos (R. sanguineus e Amblyomma spp). A colheita de sangue foi realizada em 94 gambás, 55 cães, 25 gatos, 85 eqüinos e 238 humanos. Rickettsia felis foi detectada em 42-45,8% das pulgas C. felis felis de gambás, cães e gatos; em 4% das pulgas Polygenis (N) atopus de gambás e em 1,8% e 0,7% de carrapatos I. loricatus e Amblyomma spp, respectivamente, colhidos de gambás. Rickettsia bellii foi detectada em carrapatos I. loricatus (59,1%), A. dubitatum (8,7%) e Amblyomma spp (0,9%) e em uma pulga P. (N.) atopus (1%). Não foi possível a detecção de infecção por Rickettsia spp em sangue dos animais e humanos. Contudo, constatou-se presença anticorpos frente aos antígenos de Rickettsia rickettsii, Rickttesia parkeri, R. felis e R. bellii nas áreas estudadas. A titulação obtida sugere infecção por R. rickettsii em gambás, cães, eqüinos e humanos e por R. parkeri em gambás, cães e eqüinos. R. felis e R. bellii foram isoladas e cultivadas com a utilização de células C6/36 e VERO, respectivamente. / Recent studies have showed the presence of Rickettsia felis, a spotted fever group Rickettsiae, in human blood with clinical signs compatible with spotted fever and in infected fleas. This work aims to determine the prevalence of R. felis in potential vectors (fleas and ticks) and reservoirs (opossums, dogs, cats, equines and humans) from endemic (Mogi das Cruzes, Pedreira, Piracicaba e São Paulo), and non-endemic (Pirassununga) areas for spotted fever in the State of São Paulo. Molecular probes (polimerase chain reaction and DNA sequencing), serologic diagnoses and cell culture were used. From trapped opossums (Didelphis aurita and Didelphis albiventris) a total of 312 fleas, belonging to Family Pulicidae (141), Rhopalopsyllidae (170) and Ctenophthalmidae (1) and 709 ticks (Amblyomma spp and Ixodes loricatus) were collected. On dogs a total of 212 fleas (Ctenocephalides felis felis) and 115 ticks (Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum and Rhipicephalus sanguineus) were collected. On cats, 66 fleas (59 C. felis felis and 7 Rhopalopsyllus lutzi lutzi) and 10 ticks (R. sanguineus and Amblyomma spp) were collected. Blood samples were collected from 94 opossums, 55 dogs, 25 cats, 85 equines and 238 humans. Rickettsia felis was detected in 42-45,8% of the C. felis felis collected on opossums, dogs and cats. This same Rickettsia species was detected in 4% of Polygenis (N.) atopus fleas, and 1,8% and 0,7% of I. loricatus and Amblyomma spp ticks, respectively, collected from opossums. Rickettsia bellii was found in ticks I. loricatus (59,1%), A. dubitatum (8,7%) and Amblyomma spp (0,9%) and in a flea P. (N.) atopus (1%). No Rickettsia DNA was detected in animal or human blood samples. However antibodies against Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, R. felis and R. bellii were detected in all locations. The titers suggest infection by R. rickettsii in opossums, dogs, equines and humans and by R. parkeri in opossums, dogs and equines. R. felis and R. bellii were isolated and cultivated with the C6/36 and VERO cells, respectively.

Lyme borreliosis (LB) is the most frequent vectorborne disease in the Northern Hemisphere. It is a complex bacterial zoonosis involving vertebrate hosts and hard ticks of the genus Ixodes. The causative agents, bacteria of the LB group of spirochaetes, form a species complex comprising 17 named species. As is the case for most microbial pathogens, epidemiological and ecological studies require appropriate genotyping. Although the use of single loci may provide rapid results, there are serious disadvantages, in particular when inferring evolutionary relationships or geographic population structure. A novel multilocus sequence analysis (MLSA) system of the LB group spirochaetes has been developed based on housekeeping genes to overcome these problems. Here, the system is optimized and tested using extracted spirochaetal DNA directly from ticks and then utilized to obtain insights into the migration and spread of individual species as well as to investigate the evolutionary origins of the species complex. Species belonging to the LB group of spirochetes display different patterns and levels of host specialisation which makes this an ideal system to study the impact of host associations on spread of zoonotic tickborne diseases. For example, Borrelia valaisiana and B. garinii are transmitted exclusively by birds while B. afzelii is transmitted by rodents. I demonstrate that the migration of the LB species is dependent on, and limited by, the migration of their respective hosts. I also show the presence of B. afzelii strains in England and, through the use of the MLSA scheme, demonstrate that the strains are highly structured. A close evolutionary relationship between B. afzelii and its rodent host species is shown. Furthermore, through phylogenetic analyses, some evidence of a coevolutionary relationship between the LB group species and their major group of vector species, the Ixodes persulcatus species complex, is presented and a Eurasian origin for the species group is suggested.

Resumo:Nós investigamos a presença de formas promastigotas de Leishmania spp. pelo método de imuno-histoquímica em intestinos, ovários e glândulas salivares de carrapatos Rhipicephalus sanguineus em cães. Neste estudo, foram utilizados, 66 cães positivos e 33 negativos para Leishmania spp. pelo teste Imunoenzimático (ELISA), por exame citológico direto e por meio do método da Reação em cadeia da polimerase (PCR). Um total de 990 carrapatos foram colhidos desses 99 cães, sendo 10 por animal e estes foram dissecados, com posterior separação dos intestinos, ovários e glândulas salivares. Lâminas contendo os órgãos supramencionados foram confeccionadas para a execução da imuno-histoquímica (IHQ). Também foi efetuada a PCR em tempo real desses órgãos, bem como a quantificação da sua carga parasitária. Pela PCR em tempo real dos intestinos, ovários e glândulas salivares dos carrapatos, foram detectadas positividades de 93,94%, 46,97% e 27,27%, respectivamente. As cargas parasitárias médias no intestino foram de 9027,90 Leishmania/μL, nos ovários 411,66 Leishmania/μL e nas glândulas salivares 305,56 Leishmania/μL. Com relação as leituras das lâminas de IHQ, em 98,48% dos intestinos, 13,64% dos ovários e 7,58% das glândulas salivares houve imunomarcação positiva para Leishmania spp. Em virtude destes resultados evidenciados pela técnica de IHQ, com utilização do anticorpo primário lipofosfoglicano (LPG), nós consideramos a possibilidade da presença de formas promastigotas de Leishmania spp. em órgãos de R. sanguineus / Abstract:We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / Orientador:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Jancarlo Ferreira Gomes / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Banca:Gisele Fabrino Machado / Banca:Mônica Regina Vendrame Amarante / Doutor

Submitted by Rosina Valeria Lanzellotti Mattiussi Teixeira (rosina.teixeira@unisantos.br) on 2015-05-05T11:40:02Z No. of bitstreams: 1 Monica Luzia de Arruda Botelho.pdf: 2799331 bytes, checksum: af7b5537fd607b7e7bccb6a491e79d7c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-05T11:40:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monica Luzia de Arruda Botelho.pdf: 2799331 bytes, checksum: af7b5537fd607b7e7bccb6a491e79d7c (MD5) Previous issue date: 2013-04-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Between August 2011 and May 2012, 100 samples of ticks were collected from infected environments and domestic or stray dogs in the city of Cubatão, with a total amount of 828 specimens, 827 Rhipicephalus sanguineus and 01 Amblyomma ovale. The parasites were subdivided into three groups: a) collected from dogs taken to the city pound; b) collected from dogs in the city¿s veterinary clinic c) collected from dogs during a zoosanitary visit. In this group, parasites collected in infested homes were included. A convenience sample of 26 ticks was separated according to the address of collection and the investigation of Rickettsia sp, spotted fever Rickettsias and the Ehrlichia sp group in these ticks was conducted by means of Polymerase Chain Reaction (PCR). All samples showed negative for Rickettsia sp. For Ehrlichia sp all samples were negative for the dsb gene and six samples showed positive for the 16S gene (RNA ribosomal). The results demonstrate positivity in these specimens for a bacteria from the Anaplasmataceae family, which was also present in the only specimen of Amblyomma ovale collected. In conclusion, although no positivity was found for Rickettsia sp, the zoonotic risk for erlichiosis should be considered. Besides this, an increase in the sampling submitted to PCR could furnish more information concerning the risk of infection by Rickettsia sp in ticks in the city studied. / Durante o período compreendido entre agosto de 2011 e maio de 2012 foram identificados morfologicamente 828 espécimes de carrapatos, sendo 827 Rhipicephalus sanguineus e 01 Amblyomma ovale. Esse número de parasitos totaliza 100 amostras colhidas em ambientes infestados, bem como na superfície corporal de cães domiciliados e errantes no Município de Cubatão, observando-se os seguintes critérios: a) carrapatos colhidos em cães apreendidos ao canil do Serviço de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de Cubatão; b) carrapatos colhidos em cães apresentados à consulta ambulatorial gratuita mantida pelo mesmo serviço; c) animais de propriedade de munícipes solicitantes de orientação técnica quanto à infestação de carrapatos nos domicílios e seus métodos de controle. Neste grupo foram incluídos também os parasitos encontrados no meio ambiente durante as visitas zoossanitárias às residências, com ou sem a presença de cães. Foi separada uma amostra de conveniência composta de 26 carrapatos de acordo com os locais de origem dos animais. A investigação de patógenos (Rickettsia sp, Rickettsias do grupo da febre maculosa e Ehrlichia sp) nos carrapatos foi realizada por meio da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Todos os carrapatos submetidos à extração de DNA e PCR mostraram-se negativos quanto à infecção por Rickettsias. Para Ehrlichia sp as mesmas amostras mostraram-se negativas para o gene dsb e seis amostras mostraram-se positivas para o gene 16S (RNA ribossomal). Os resultados demonstram que existe positividade nesses espécimes para bactéria da família Anaplasmartaceae, inclusive no único espécime de Amblyomma ovale coletado. Conclui-se que, embora não tenha sido demonstrada positividade para Rickettsia sp na amostra examinada, o risco zoonótico para erliquiose deve ser avaliado. Estudos futuros em amostra mais abrangente poderão trazer mais informações acerca da possível presença de Rickettsia sp nos carrapatos infestantes dos cães domiciliados ou errantes no município.

Resumo: Rhipicephalus (Boophilus) microplus é considerado o mais importante parasito de bovinos no Brasil. Atualmente seu controle é dificultado pela exigüidade de moléculas acaricidas geradas, e pelo rápido desenvolvimento de resistência dos carrapatos. O presente trabalho teve por objetivo estudar o efeito de quatro extratos oleosos de sementes de Nim (Azadirachta indica) contento 2.000, 5.000, 9.000 e 10.000 ppm de azadiractina (AZA) quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fêmeas ingurgitadas e larvas de R. (B.) microplus, in vitro. Para os ensaios com fêmeas ingurgitadas foi usado o Teste de Imersão de Adultas e para os ensaios com as larvas o Teste do Pacote com Larvas. Os resultados obtidos nos ensaios com fêmeas ingurgitadas mostraram que o principal efeito tóxico produzido pelos extratos, está relacionado à inibição da reprodução deste parasito. Foram verificadas reduções nas taxas de ovipostura e eclodibilidade das larvas oriundas das fêmeas tratadas com várias diluições dos extratos, em relação aos controles. Nos cálculos de Eficácia do produto (EP) para todas as soluções testadas, observou-se que a solução de 10.000ppm de AZA (N10) apresentou a maior eficácia. Os resultados das análises dos ensaios mostraram significância (p<0,01) dos dois efeitos incluídos no modelo, indicando variações significativas tanto devidas à concentração de AZA, quanto do ensaio realizado. Nas concentrações letais para as fêmeas ingurgitadas verificou-se que as CL50 não apresentaram variações, enquanto que as CL90 apresentaram grandes variações entre os extratos estudados. Nos ensaios com as larvas, não foram observadas mortalidade das larvas, indicando eficácia zero de todos os extratos testados. Os resultados dos ensaios com fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus mostraram que os extratos oleosos de Nim apresentaram atividade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rhipicephalus (Boophilus) microplus is considered the most important cattle parasite in Brazil. Nowadays, his control is complicated by the slowness that acaricides molecules are generated, synthesized through and by the fast development of the resistance of these ticks to the market available products. This work aims to study the effect of four extracts of Neem seed oil (Azadirachta indica) containing 2.000, 5.000, 9.000 and 10.000 ppm of azadirachtin (AZA) quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) on engorged females and larvae of R. (B.) microplus, in vitro. For the tests with engorged females, the Adult Immersion Test was used and for the larvae was used the Larvae Package Test. The test results with the engorged females showed that the main toxic effect produced by the extracts is related to the inhibition of the parasite reproduction. Were observed reductions in oviposition and hatchability rates of the larvae derived from the female treated with several dilutions of extracts, compared to controls. In the Product Effectiveness (PE) for all the test solutions, the 10.000ppm (N10) solution showed the highest efficiency. The analysis results from the tests showed significance (p<0,01) of the two effects included in the model, indicating variations both due to AZA and to the test performed. In the lethal concentration to the engorged females was verified that the CL50 did not show great variation, while the CL90 showed great variation between the studied extracts. In the tests with larvae was not observed mortality of them, indicating zero effectiveness of all tested extracts. The results of the tests with R. (B.) microplus engorged females demonstrated that the extract of Neem seeds oils showed acaricide activity. Thus, it is suggested that further studies can be conducted, such as development of the methods and of excrection, and characterization of other secondary ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Moacir Rossi Forim / Mestre

Rickettsia rickettsii é o agente etiológico da Febre Maculosa das Montanhas Rochosas, que no Brasil é transmitida pelos carrapatos Amblyomma cajennense e A. aureolatum. Para elucidar os mecanismos de virulência sobre seus vetores, construímos bibliotecas subtrativas utilizando RNA de A. aureolatum infectados ou não com o patógeno. Com a análise bioinformática, foram obtidas 56 sequências únicas com expressão induzida e 12 com expressão reprimida pela infecção. Após a validação dos dados por RT-qPCR 3 genes foram caracterizados por RNAi: uma hebraeína, uma proteína dissulfeto isomerase (PDI) e uma proteína com domínio Kunitz-type. Um maior número de carrapatos adquiriu R. rickettsii quando a expressão gênica da hebraeína e da PDI foi silenciada, sugerindo que elas participam na defesa do carrapato contra a infecção. Nenhum efeito foi observado sobre a transmissão da bactéria para o hospedeiro ou sobre o fitness de carrapatos nos três genes analisados. O presente estudo apontou genes importantes que possibilitam uma melhor compreensão da relação carrapato-riquétsia. / Rickettsia rickettsii is the etiological agent of Rocky Mountain Spotted Fever and, in Brazil, it is transmitted by Amblyomma cajennense and A. aureolatum. To elucidate mechanisms of virulence to its vectors, we construct cDNA libraries with RNA of ticks A. aureolatum infected or not with this pathogen. After bioinformatic analysis, 56 unique sequences were obtained representing up-regulated genes and 12 down-regulated by infection. After data validation by RT- qPCR, 3 genes were characterizated by RNAi: a hebraein, a protein disulfide isomerase (PDI), and a protein with Kunitz-type domain. A higher number of ticks acquired R. rickettsii when the gene expression of hebraein and PDI was silenced, suggesting that both proteins participate in the defense of the tick against infection. No effect on the transmission of the bacterium to the host or on the fitness of ticks was observed after knockdown of the 3 analyzed genes. Data obtained by the present study pointed out important genes that provide information to better understand of the tick-rickettsia relationship.