Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-11-13T21:13:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T21:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) DESEMPENHO DA TÉCNICA DE CITOMETRIA DE FLUXO, NO.pdf: 3747193 bytes, checksum: ef571a9dce24b87b45d8fd8d89916048 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O diagnóstico de rotina pós-natal da toxoplasmose congênita é baseado na detecção de anticorpos IgM e/ou IgA anti-T. gondii no soro dos neonatos. No entanto, em um número significativo de neonatos infectados esses anticorpos não são detectados, dificultando o diagnóstico precoce da doença. Portanto, neste estudo foi avaliado o desempenho da pesquisa de anticorpos anti-T. gondii por citometria de fluxo no diagnóstico sorológico pós-natal precoce da toxoplasmose congênita. Foram avaliados 88 amostras de soro de crianças com infecção congênita pelo T. gondii (TOXO) e 19 amostras de soro de crianças não infectadas (NI). A sensibilidade do teste foi de 47,6% para IgM, 72,6% para IgA e 75% para IgG, com 100% de especificidade para todos os testes. Quanto a pesquisa de subclasses de IgG, a sensibilidade foi de 73,9% para IgG1, 60,2% para IgG2 e 83% para IgG3 com 100% de especificidade para todos os testes. A sensibilidade de IgG4 foi superior às demais, alcançando 94,7%, embora apresentou uma baixa especificidade de 4,6%. A pesquisa da avidez de IgG quando aplicada para segregação dos grupos TOXO e NI, apresentou um ótimo desempenho com 97% de sensibilidade e 93% de especificidade. Foi também realizado uma análise comparativa da presença de IgG e IgG3 em crianças do grupo TOXO e NI com suas respectivas mães. Nossos resultados mostraram que as crianças infectadas apresentaram uma reatividade média desses anticorpos equivalentes a de suas respectivas mães, o que sugere estarem sintetizando estes anticorpos em resposta a infecção pelo T. gondii. Em contraste, as crianças não infectadas apresentaram uma menor reatividade média desses anticorpos em relação à suas respectivas mães. Além disso, nosso estudo propôs um algoritmo para o diagnóstico da toxoplasmose congênita utilizando o teste de IgM por métodos convencionais disponíveis na rotina dos laboratórios clínicos como estratégia inicial seguido da pesquisa de IgG3 e avidez de IgG pela citometria de fluxo com desempenho final de 98% de sensibilidade e 93% de especificidade. A análise dos dados demonstrou a aplicabilidade da citometria de fluxo para a pesquisa de anticorpos IgG3 e avidez de IgG anti-T. gondii como uma ferramenta complementar para o diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita. / The routine diagnosis of pos-natal congenital toxoplasmosis is based on the detection of IgM and/or IgA anti-T. gondii antibodies in neonates sera. However, in a significant number of infected newborns these antibodies are not detected, hindering the early diagnosis of the disease. Therefore, in this study it was evaluated the performance of the detection of anti-T. gondii antibodies by flow cytometry in the sorological diagnosis of early pos-natal congenital toxoplasmosis., Eight eight sera samples of children with congenital infection by T.gondii (TOXO) and 19 sera samples of uninfected children were evaluated. The sensitivity of the test was 47.6% for IgM, 72.6% for IgA, and 75% for IgG, with 100% of specificity for all tests. As to the IgG subclasses, the sensitivity was 73.9% for IgG1, 60.2% for IgG2, and 83% for IgG3 with 100% of specificity for all tests. The sensitivity of IgG4 was superior to the aformentioned subclasses reaching 94.7%, although achieved a poor specificity of 4.6%. The IgG avidity when employed to segregate TOXO and NI groups presented a great performance, with 97% of sensitivity and 93% of specificity. It was also done a comparative analysis of the presence of IgG and IgG3 in children of TOXO and NI groups with their respective mothers. Our results showed that the children with congenital toxoplasmosis presented an average reactivity of these antibodies equivalent to their respective mothers, which suggests that they are producing antibodies in response to T.gondii infection. In contrast, uninfected children presented a lower average reactivity of those antibodies in comparison to their respective mothers. In addition, our study proposed an algorithm for the diagnosis of congenital toxoplasmosis using IgM test performed by conventional methods available in routine clinical laboratories as the initial approach followed by the search for IgG3 and IgG avidity using flow cytometry, reaching a final performance of 98% of sensitivity and 93% of specificity. Data analysis showed the applicability of flow cytometry for the detection of IgG3 antibodies and IgG anti-T. gondii avidity as a complementary tool for the early diagnosis of congenital toxoplasmosis.

A Toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita que ocorre principalmente em indivíduos imunodeprimidos, gestantes e em pacientes em terapia anti-câncer. Na Medicina Veterinária, animais como ovelhas, cabras e porcos são seriamente afetados podendo ocorrer abortos e com isto perdas significativas em termos econômicos. Atualmente não se dispõem de vacinas contra a toxoplasmose, mas tem-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a enfermidade. Os modelos atualmente utilizados, possuem limitações, por exemplo, não é possível ensaiar no modelo rata um imunógeno de Toxoplasma gondii, uma vez que todas as linhagens de ratas disponíveis são resistentes. Portanto não se pode ensaiar desafios vacinais altamente exigentes neste modelo. Por isso é aconselhável contar com experimentos efetuados em diversas espécies animais. Está sendo proposto testar o Hamster (Mesocricetus auratus), com o intuito de estabelecer se é ou não um modelo que se aproxima das respostas esperadas nos humanos.Antes de se comprometer a custos muito elevados com ensaios finais de vacinações, o aconselhável é contar com ensaios em diversas espécies, pois os animais respondem de formas dIferentes aos mesmos imunógenos. Na transmissão congênita crônica dez Hamsters foram inoculados com 40 oocistos por via oral da cepa Me-49 do T.gondii e após sessenta dias foram postas para cruzarem com os machos. Obteve-se resultados promissores uma vez que a transmissão congênita aos seus filhotes nesta fase crônica da infecção foi nula. Na transmissão congênita aguda da infecção, obteve-se 42,9% de taxa de transmissão de T.gondii. Não foi observada a transmissão lactogênica, do toxoplasma, na fase aguda da infecção. / Taxoplasmosis is a cosmopolitan disease that causes a lot of damage to immunocompromised people, pregnant women, patients who have had transplants and people undergoing anticancer therapy. Animals like sheep, goats and pigs are seriously affected causing abortions and consequently significant economic losses. This is why, the importance of studing the transmission, the mechanisms of transmission and the forms of infection. Currently, vaccines against toxoplasmosis are not available, but animals’ models, in rats and mice, have been developed to an immune assay against this disease. These models considered to the study have some limitations, however it is not possible to apply a toxoplasma immune assay on a rat model, because it is a susceptible race and it has already been proven that rats are resistant to toxoplasma. We proposed to test the hamster (Mesocrisetua auratus) with the intention of establishing if it is or not one model that approaches the same results expected on human beings, therefore before compromising high costs with final assays of vaccinations, the advisable thing to do is to turn to assays on diverse species, because animals have different answers to the same immune. We intended to test hamster (Mesocrisetus auratus), with the intention of establishing if it is or no a model that approaches the expected ansewer from diferential ways to the same strains. In the chronic congenital transmit, in Hamsters was obtained promising results because yours creates didn’t present title when their organs (liver and lung), they were bioassayed in mice and twenty five days after they were bled and their serum tested with direct agglutination of Desmonts and Remington (1980), confirming that the passage wasn’t made during the gestation of females infected before the conception. In the sharp congenital transmission of the infection, it was obtained 42,9% that passed to their descendants antibodies of T. gondii. In the lactogenic transmission, wasn’t have title for T.gondii

Atualmente não se dispõe de vacinas contra a toxoplasmose humana, mas têm-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a toxoplasmose. No entanto, estes modelos têm mostrado certas limitações. É aconselhável contar com ensaios efetuados em diversas espécies animais antes de comprometer-se com custosos ensaios finais de vacinação, já que as diversas espécies animais, respondem diferentemente frente aos mesmos imunógenos. O objetivo geral do presente trabalho foi então, indagar a aplicabilidade de um modelo hamster para o estudo da imunidade contra a toxoplasmose congênita. Os objetivod específicos foram: verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio crônico da infecção; verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio agudo da infecção; verificar a ocorrência da transmissão lactogênica no desenho experimental proposto, e questionar a proteção contra a toxoplasmose congênita, conferida pela imunidade estéril e mediante a premunição. O cumprimento dos objetivos possibilitará o uso de imunizações (com Toxoplasma gondii viável) em futuros estudos, assim como conhecer a eficácia dos desafios efetuados em hamster, e também permitirá conhecer se o imunógeno mais simples disponível é suficiente para conferir proteção contra a toxoplasmose congênita. Quanto ao ensaio da imunidade na fase crônica da toxoplasmose foi possível comprovar nas condições deste experimento que ela não ocorre, pois as 10 fêmeas hamster inoculadas com 40 oocistos da cepa ME-49 antes de serem acasaladas, tiveram filhotes negativos para anticorpos anti-T.gondii. No modelo de infecção aguda, 100% das fêmeas inoculadas com 102 oocistos da cepa Prugniaud durante a gestação foram positivas, e houve 60% de transmissão transplacentária para seus filhotes e 40% de transmissão transmamária para filhotes adotados. Também, 100% das fêmeas inoculadas com 103 oocistos da mesma cepa durante a gestação foram positivas e nos seus filhotes ocorreram 100% de transmissão transplacentária, e em 40% dos filhotes adotados houve transmissão transmamária. Num terceiro experimento, em fêmeas inoculadas com a cepa RH e medicadas houve sobrevivência de 86,6% e a extinção da cepa RH em 46,15% dos cérebros. No modelo para testar a proteção com cepa RH contra oocistos de T. gondii de cepa heteróloga, não houve transmissão de toxoplasmose congênita em 100% das mães imunizadas com RH e desafiadas com Prugniaud e em 50% das mães imunizadas com RH e desafiadas com M3. O desafio heterólogo após imunização com a cepa RH, nesse experimento conferiu total proteção (100%) em hamsters duas vezes imunizadas com a cepa RH contra desafio com bradizoítos e oocistos com as cepas Prugniaud e M-7741, mas a proteção com oocistos de M3 foi parcial (67%). As conclusões foram o hamster é um modelo promissor para o estudo da toxoplasmose congênita, uma vez que a infecção crônica antes da prenhez, com oocistos da cepa ME49, protegeram as ninhadas e a infecção aguda durante a prenhez, com a cepa Prugniaud, resultou em transmissão transplacentária. Houve transmissão lactogênica mas não foi confirmada sua importância epidemiológica com a metodologia empregada. O hamster também se mostrou promissor para o estudo da proteção contra T. gondii tendo em vista que a infecção com cepa RH conferiu proteção total (contra Prugniaud e M7741) ou parcial (contra M3) das ninhadas contra cepas heterólogas. / Nowadays there are no vaccines against human toxoplasmosis, but it has been developed animal models in rats and mice for immunologic assay against toxoplasmosis. However, these models have showed certain limitations. It is advisable to count on assays done in several animal species before pledging with expensive final vaccination assays, since several animal species differently answered to the same immunogens. The general objective of this work was to investigate the applicability of a hamster model for the study of immunity against congenital toxoplasmosis. The specific objectives were: to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the chronic phase of the infection; to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the acute phase of infection; to verify the occurrence of lactogenic transmission in the experimental trial which was proposed, and to question the protection against congenital toxoplasmosis given by the sterile immunity and by the means of premonition. The fulfillment of the objectives will enable the use of immunizations (with viable gondii Toxoplasma) in future studies, as well as, the knowledge of the efficacy about the challenges done in hamsters. It will also allow us to know whether the simplest immunogen available is enough to give protection against congenital toxoplasmosis. Regarding the immunity assay in the chronic phase of toxoplasmosis we were able to prove that it does not occur because 10 female hamsters inoculated with oocysts of ME- 49 strain before being coupled had negative offspring for anti-T. gondii antibodies. In the model of acute infection, 100% of females inoculated with 102 oocysts of Prugniaud strain during their gestation were positive and there were 60% of transplacental transmission for their offspring and 40% of transmammary transmission for foster offspring. Also, 100% of females inoculated with 103 oocysts of the same strain during the gestation time were positive and in their offspring there was 100% of transplacental transmission, and in 40% of their foster offspring there was transmammary transmission. In a third experiment, in females which were medicated and inoculated with RH strain there was a survival of 86.6% and the extinction of RH strain in 46.15% of the brains. In the model to test the protection with RH strain against oocysts of Toxoplasma gondii of heterologic strain, there was no transmission of congenital toxoplasmosis in 100% of mothers immunized with RH and challenged with Prugniaud and in 50% of mothers immunized with RH and challenged with M3. In this experiment, the heterologous challenge after the immunization with RH strain gave total protection (100%) in hamsters which were twice immunized with RH strain against challenge with bradyzoites and oocysts with Prugniaud and M-7741 strains, however, the protection with M3 oocysts was partial (67%). The conclusions were that the hamster is a promising model for the study of congenital toxoplasmosis, since chronic infection before pregnancy, with oocysts of ME49 strain protected their offspring and the acute infection during pregnancy, with Prugniaud strain, resulted in transplacental transmission. There was lactogenic transmission but it was not confirmed its epidemiologic importance with the methodology applied. Hamsters have also showed to be promising for the study of protection against T. gondii having in mind the infection with RH strain gave total protection (against Prugniaud and M7741) or partial (against M3) of offspring against heterologous strains.

Submitted by FLÁVIO GONÇALVES BRITO (britofilhoo@hotmail.com) on 2017-10-04T16:19:06Z No. of bitstreams: 1 TESE DE DOUTORADO final impresso flavio.pdf: 3777537 bytes, checksum: fb617dcd0c40ddcc6eeb32ed0bc1f810 (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-10-04T17:40:59Z (GMT) / Submitted by FLÁVIO GONÇALVES BRITO (britofilhoo@hotmail.com) on 2017-10-09T10:44:22Z No. of bitstreams: 2 TESE DE DOUTORADO final impresso 01 FICHA CATALOGRAFICA.pdf: 1508912 bytes, checksum: 2933176614c440b0061502a7637f9c64 (MD5) TESE DE DOUTORADO final impresso 01 FICHA CATALOGRAFICA.pdf: 1508912 bytes, checksum: 2933176614c440b0061502a7637f9c64 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-09T19:05:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 brito_fg_dr_bot.pdf: 1508912 bytes, checksum: 2933176614c440b0061502a7637f9c64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T19:05:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 brito_fg_dr_bot.pdf: 1508912 bytes, checksum: 2933176614c440b0061502a7637f9c64 (MD5) Previous issue date: 2017-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O interesse pelo estudo das zoonoses, enfermidades comuns aos humanos e aos animais, aumentou acentuadamente nos últimos anos, sugerindo maior integração, conhecimento e relacionamento entre profissionais da área da saúde. Dentre estas zoonoses a brucelose, a toxoplasmose, a leptospirose e a doença de Chagas (DC) têm elevada importância veterinária e para a saúde pública, pela gravidade e potencial letalidade com que se apresentam em humanos. Atenção especial deve ser dada às pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA), pois a imunossupressão à que estão sujeitas pode agravar ainda mais o seu quadro clínico, fato que gera necessidade de diagnósticos mais eficientes para essas infecções. Com o objetivo de determinar o perfil sorológico destas zoonoses em PVHA, atendidos no Serviço de Ambulatório Especializado de Infectologia “Domingos Alves Meira” (SAEI-DAM), entidade pertencente ao complexo de assistência da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, bem como relacionar aos hábitos, comportamentos e fatores de risco de exposição a essas doenças, além da obtenção de dados referentes ao grau de conhecimento em relação às zoonoses estudadas. Foram analisadas 236 amostras de soro desses pacientes para a presença de anticorpos anti- Brucella abortus, que mostraram-se negativas para todas as amostras. Para leptospirose quatro (1,69%) amostras foram positivas, para a toxoplasmose 154 (65%) amostras positivas, sendo 146 (94,8%) somente para anticorpos da classe IgG, dois (1,3%) somente para a classe IgM e seis (3,9%) para as duas classes de imunoglobulinas anti-Toxoplasma gondii. Para doença de Chagas encontrou-se quatro (1,69%) das amostras positivas para anticorpos anti Trypanosoma cruzi. Para neurotoxoplasmose e toxoplasmose ocular encontraram-se 21 (8,89%) e seis (2,54%) respectivamente de pacientes diagnosticados. / The interest in the study of zoonoses, common diseases to humans and animals, has increased sharply in recent years, suggesting greater integration, knowledge and relationships among health professionals. Among these zoonoses, brucellosis, toxoplasmosis, leptospirosis and Chagas' disease (DC) are of high veterinary and public health importance due to the seriousness and potential lethality that they present in humans. Special attention should be given to people living with HIV / AIDS (PLWHA), since the immunosuppression to which they are subject may further aggravate their clinical condition, which generates a need for more efficient diagnoses for these infections. The objective of this study was to determine the serological profile of these zoonoses in PLWHA treated at the Domingos Alves Meira Specialized Ambulatory Service (SAEI-DAM), an entity belonging to the assistance center of Botucatu Medical School - UNESP, as well as to relate to the habits, behaviors and risk factors of exposure to these diseases, besides obtaining data regarding the degree of knowledge regarding the zoonoses studied, 236 serum samples of these patients were analyzed for the presence of anti-Brucella abortus antibodies, which showed Negative for all samples. For leptospirosis, four (1.69%) samples were positive for toxoplasmosis, with 154 (65%) positive samples, 146 (94.8%) only for IgG class antibodies, two (1.3%) for IgM class and six (3.9%) for the two classes of anti-Toxoplasma gondii immunoglobulins. For Chagas disease, four (1.69%) of the samples positive for anti-Trypanosoma cruzi antibodies were found. For neurotoxoplasmosis and ocular toxoplasmosis, 21 (8.89%) and 6 (2.54%) respectively of diagnosed patients were found.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlosAAG.pdf: 323369 bytes, checksum: 093c86d6d5662ee9fb5d64b4afd66037 (MD5) Previous issue date: 2004-02-19 / The objective of this study is to estimate the prevalence of Ocular Toxocariasis, Diffuse Unilateral Subacute Neuroretinitis (DUSN), Toxoplasma gondii infection and Ocular Toxoplasmosis in a student population in Natal-RN/Brazil and relate it to demographic, epidemiologic and socio-economic risk factors. The incidence of DUSN was observed in patients at the Federal University of Rio Grande do Norte Ophthalmology Service and the Prontoclinica de Olhos Ophthalmology clinic in Natal. In cases where a worm was found in the subretinal space, the result of treatment with photocoagulation using Green Laser (Eye Light ALCON) was evaluated in relation to final visual result. The sample was randomly selected among the schools of the four districts of Natal, according to the type of institution (public or private), its level (elementary or secondary), and study period (morning, afternoon or evening). The school population was studied from March to May, 2001. Initially, the students answered a questionnaire to evaluate demographic, epidemiologic and socio-economic risk factors. Afterwards, the following procedures were carried out: blood samples were taken for Toxoplasmosis (IgG, IgM) serology, hemogram, ophthalmological examination, consisting of clinical history, measurement of visual acuity, refraction under cycloplegia, biomicroscopy of the anterior segment and annexa, funduscopy and examination of extrinsic motility. The prevalence of Toxocariasis was 0.2% or 2 per one thousand students. The sample was insufficient to estimate the prevalence of DUSN. Seventy patients with DUSN diagnosis were examined from January, 2001 to January, 2003. A live worm was found in the subretinal space of all four patients in the acute phase, and these were treated with laser photocoagulation. After follow-up (average = 11.5 months), visual acuity improved in three eyes and remained unaltered in one eye. Worms were found in 22 of the 66 patients in the chronic phase, and these also were treated with laser photocoagulation. After a follow-up period of 13.1 months, on average, visual acuity improved in two of the patients, remained unchanged in 19 and worsened in one. The comparison of visual result before and after treatment was not statistically significant (p = 0.302). The diagnosis of DUSN in the acute phase, followed by prompt localization and destruction of the worm by photocoagulation, can improve the patient s vision. However, destruction of the worm by laser photocoagulation in eyes with DUSN in the chronic phase does not improve visual acuity. Seroprevalence for IgG was 46% (Confidence Interval CI 95%-42.9-49.2%) and for IgM it was 1.4% (CI 95% = 0.8-2.4%). The prevalence of ocular lesion was 1.15% (CI 95% = 0.6 - 2.0%). Socio-economic conditions were determinants in the prevalence of Systemic and Ocular Toxoplasmosis in the bivaried analysis and confirmed in the multivaried analysis (mother s scholarity illiterate/ OR = 2.9 and p < 0.001). The T. gondii infection prevalence, although high, was less than that found in studies performed in the South and Southeast of Brazil and that of Ocular Toxoplasmosis was completely discrepant, varying from 5 to 17 times less. Although important epidemiological variables such as owning a cat, drinking unfiltered water, and coming into contact with rivers or lakes showed an association in the preliminary analysis, they lost their influence when included in the logistic model. Future studies are scheduled to begin in March, 2004, in collaboration with other Brazilian and American universities in an attempt to discover the reason for these findings, as well as identifying the different strains of Toxoplasma gondii, and studying the sources of water utilized by the population of Natal Brazil / Esta pesquisa teve como objetivo, estimar a preval?ncia da Toxocar?ase Ocular, Neuroretininte Sub-aguda Difusa Unilateral (DUSN), Infec??o pelo Toxoplasma gondii e Toxoplasmose Ocular na popula??o de escolares de Natal-RN/Brasil e relacion?-la aos fatores de risco demogr?ficos, epidemiol?gicos e socioecon?micos. Estudar a incid?ncia de DUSN em pacientes atendidos no Servi?o de Oftalmologia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte e Prontoclinica de Olhos, em Natal, bem como, avaliar, nos casos em que foi encontrada larva no espa?o sub-retiniano, o resultado do tratamento com fotocoagula??o utilizando o Laser Verde (Eye Light ALCON) em rela??o ao resultado visual. A amostra foi selecionada aleatoriamente e distribu?da nas escolas dos quatro distritos da cidade de Natal de acordo com a natureza da institui??o (p?blica ou privada), seu n?vel (fundamental ou m?dio) e turno em que o escolar estudava (matutino, vespertino ou noturno). A popula??o de escolares foi estudada no per?odo de mar?o a maio de 2001. Inicialmente, responderam a um question?rio para avalia??o de fatores de risco demogr?fico, epidemiol?gico e socioecon?mico. Depois foram feitos os seguintes procedimentos: coleta de sangue para realiza??o de sorologia para Toxoplasmose (IgG, IgM), hemograma, exame oftalmol?gico constando de hist?ria cl?nica, medida da acuidade visual, refra??o sob cicloplegia, biomicroscopia do segmento anterior e anexos, fundoscopia e exame da motilidade extr?nseca. A preval?ncia de Toxocar?ase foi de 0,2% ou 2 por mil escolares. A amostra n?o foi suficiente para estimar a preval?ncia de DUSN. Foram examinados 70 pacientes com diagn?stico de DUSN, no per?odo de janeiro de 2001 a janeiro de 2003. Foi encontrada larva viva no espa?o sub-retiniano de todos os quatro que se encontravam na fase aguda, e tratados com fotocoagula??o a laser. Ap?s acompanhamento dos pacientes (m?dia = 11,5 meses), a acuidade visual melhorou em tr?s olhos e permaneceu inalterada em um olho. Dos 66 pacientes na fase cr?nica, foi encontrada larva em 22 deles e tratados com fotocoagula??o a laser. Ap?s acompanhamento por um per?odo de 13,1 meses em m?dia, a acuidade visual melhorou em dois, permaneceu a inicial em 19 e diminuiu em um paciente. A compara??o do resultado visual antes e ap?s o tratamento, n?o foi estatisticamente significante (p = 0,302). O diagn?stico de DUSN na fase aguda, seguida por pronta localiza??o e destrui??o da larva por fotocoagula??o, pode melhorar a vis?o dos pacientes. No entanto, a destrui??o da larva por fotocoagula??o a laser em olhos com DUSN, na fase cr?nica, n?o melhora a acuidade visual. A soropreval?ncia para IgG foi de 46% (Intervalo de Confian?a -IC 95% - 42,9-49,2%) e para IgM foi 1,4% (IC 95% = 0,8-2,4%). A preval?ncia de les?o ocular foi 1,15% (IC 95% = 0,6 2,0%). As condi??es socioecon?micas foram determinantes na preval?ncia da Infec??o pelo T. gondii e Toxoplasmose Ocular na an?lise bivariada e confirmada na an?lise multivariada (escolaridade da m?e n?o alfabetizada/OR = 2,9 e p< 0,001). A preval?ncia de Toxoplasmose Sist?mica, embora elevada, foi menor do que a encontrada em estudos realizados no Sul e Sudeste do Brasil e, a da Toxoplasmose Ocular foi totalmente discrepante, variando de 5 a 17 vezes menos. Embora importantes vari?veis epidemiol?gicas, tais como possuir gato, beber ?gua n?o filtrada, ter contato com lagoas ou rios, tenham mostrado associa??o na an?lise preliminar, perderam sua influ?ncia quando inclu?das no modelo log?stico. Estudos futuros j? est?o planejados para ter inicio em mar?o pr?ximo, em colabora??o com outras Universidades do Brasil e dos Estados Unidos com a finalidade de encontrar a raz?o destes achados, bem como, identificar diferentes tipos de cepas do Toxoplasma gondii, e estudar as fontes de ?gua utilizadas pela popula??o de Natal-RN

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-06Bitstream added on 2014-06-13T18:39:11Z : No. of bitstreams: 1 contente_apa_me_botfmvz.pdf: 140898 bytes, checksum: c165ef6056310c9a82a051e2dd8285bc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, podendo acometer mamíferos e aves. O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em avestruzes de criatórios comerciais do Estado de São Paulo, como forma de auxiliar no conhecimento do comportamento e importância do parasito nesta espécie animal. Foram colhidas 195 amostras de soro de avestruzes (Struthio camelus), provenientes de Sorocaba, Campinas, São Carlos, Araçatuba, São Paulo, Vale do Ribeira, Botucatu e São José do Rio Preto, estado de São Paulo. As amostras foram analisadas pela Técnica de Aglutinação Direta Modificada (MAT), para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii. Os exames sorológicos revelaram 14,36% de animais sororreagentes ao T. gondii. A titulação mínima considerada foi a diluição maior ou igual a 1:16, e a maior diluição encontrada foi 1:16384. Não foi constatada diferença significativa entre os sexos. Apenas duas regiões (São Paulo e São José do Rio Preto) não apresentaram animais sororreagentes. Esses resultados salientam a importância de um estudo mais aprofundado sobre a infecção em avestruzes, e também sobre práticas de manejo que venham a minimizar os riscos de transmissão da toxoplasmose para essas aves e, por conseqüência, para o consumidor final. / Toxoplasmosis is a widespread zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a protozoan that may infect mammals and birds. The aim of the present study was to measure the prevalence of T. gondii in ostriches (Struthio camelus) from commercial farms of São Paulo State, as a way to help in the knowledge and importance of the parasite in this animal specie. 195 serum samples were collected from ostriches proceeding from Sorocaba, Campinas, São Carlos, Araçatuba, São Paulo, Vale do Ribeira, Botucatu e São José do Rio Preto, São Paulo State. These samples were tested using the Modified Agglutination Test (MAT) to the investigation of Toxoplasma gondii antibodies. This search detected 14,36% seropositive animals to Toxoplasma gondii. The minimum titration considered was the larger dilution or same to the 1:16, and the higher dilution was 1:16384. It was not found any significant statistical difference between males and females. In only two regions (São Paulo and São José do Rio Preto), there was no seropositive animals. Those results point out the importance of a study more deepened about this infection in ostriches, and about management practices that could minimize the toxoplasmosis transmission risks to these birds and, by consequence, to the final consumer.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:17:50Z : No. of bitstreams: 1 castro_apb_me_botfmvz.pdf: 208554 bytes, checksum: 0ef69e5e00358dd8ecdb9255b9ddff62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose. / Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose.

Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: João Luis Garcia / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O elevado índice de ovinos naturalmente infectados por Toxoplasma gondii, a grande possibilidade destes animais se reinfectarem com este protozoário e a inexistência de dados sobre a transmissão congênita em uma reinfecção, motivaram a realização deste projeto de pesquisa. O objetivo deste experimento foi estudar a transmissão congênita em ovelhas, infectadas e reinfectadas experimentalmente com oocistos de T. gondii, em três fases gestacionais. Vinte ovelhas em idade reprodutiva, sorologicamente negativas para T. gondii (RIFI-IgG), foram selecionadas e primoinfectadas experimentalmente com a cepa ME49 (Dia zero). Três carneiros, sorologicamente negativos para toxoplasmose, neosporose, leptospirose e brucelose, foram utilizados para monta natural (RIFI≤512). Posteriormente ao diagnóstico de gestação, estas ovelhas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: GI - cinco ovelhas reinfectadas com T. gondii no 40º dia de gestação (DG), GII - cinco no 80º DG, GIII - cinco no 120º DG e GIV - cinco receberam solução salina no 120º DG (controle não reinfectado). Cinco fêmeas sorologicamente negativas (RIFI<64) para infecção toxoplásmica foram mantidas como controle negativo (não infectado) - GV. Sete dias antes da primoinfecção, imediatamente antes da inoculação, a cada três dias até o 30º dias pós-inoculação e a cada sete dias até o término da gestação, exames clínicos e pesquisa de anticorpos (RIFI-IgG) contra T. gondi foram realizados nas 25 ovelhas. Exames ultrassonográficos foram efetuados para diagnóstico de gestação, posteriormente à reinoculação, a periodicidade deste exame foi quinzenal. Amostras de sangue (soro), de todos os cordeiros provenientes das ovelhas experimentais foram obtidas, imediatamente após o nascimento, no 3º e 14º dia de idade, para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The high occurrence of naturally infected sheep with Toxoplasma gondii, the great possibility of reinfection and the lack of data on congenital transmission in a reinfection were the motivation of this research project. The aim this study was evaluate the congenital transmission in experimentally reinfected and infected ewes, by oocysts T. gondii, in three pregnancies phases. Twenty ewes, negative serologically for T. gondii (indirect fluorescent antibody test-IgG), were selected and experimentally infected with ME49 strain (Day0). Three ram, negative serologically for toxoplasmosis, neosporosis, leptospirosis and brucellosis were used for natural mating (IFAT≤512). After the diagnosis of pregnancy, these ewes were distributed in four experimental groups: GI - five ewes reinfected with T. gondii on the 40th day of gestation (DG), GII - five in the 80th DG, GIII - DG 120th in five and GIV - five received saline solution in 120th DG (unreinfected). Five ewes, negative serologically (IFA <64) for T. gondii infection were kept as negative control (uninfected) - GV. Seven days before the first infection, immediately prior to inoculation, every three days until the 30th day after inoculation and every seven days until the end of pregnancy, clinical examinations and blood samples (IFAT-IgG against T. gondii) were performed in 25 ewes. Ultrasonographic examinations were performed in the diagnosis of pregnancy and fortnightly after reinfection. Serum samples, from all the lambs were obtained immediately after birth (pre-colostral), at 3 and 14 days of life, for T. gondii (IFAT-IgG). Parasitism by T. gondii was investigated (histopathology, mouse inoculation and PCR) in tissue fragments of female and fetuses, stillbirths and/or dead lambs after birth. Twenty ewes showed T. gondii antibodies specific on post-inoculation day (PID) 11. The most serological title... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Paulo Francisco Domingues / Banca: Roberta Lemos Freire / Banca: Germano Biondo / Resumo: A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, podendo acometer mamíferos e aves. O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em avestruzes de criatórios comerciais do Estado de São Paulo, como forma de auxiliar no conhecimento do comportamento e importância do parasito nesta espécie animal. Foram colhidas 195 amostras de soro de avestruzes (Struthio camelus), provenientes de Sorocaba, Campinas, São Carlos, Araçatuba, São Paulo, Vale do Ribeira, Botucatu e São José do Rio Preto, estado de São Paulo. As amostras foram analisadas pela Técnica de Aglutinação Direta Modificada (MAT), para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii. Os exames sorológicos revelaram 14,36% de animais sororreagentes ao T. gondii. A titulação mínima considerada foi a diluição maior ou igual a 1:16, e a maior diluição encontrada foi 1:16384. Não foi constatada diferença significativa entre os sexos. Apenas duas regiões (São Paulo e São José do Rio Preto) não apresentaram animais sororreagentes. Esses resultados salientam a importância de um estudo mais aprofundado sobre a infecção em avestruzes, e também sobre práticas de manejo que venham a minimizar os riscos de transmissão da toxoplasmose para essas aves e, por conseqüência, para o consumidor final. / Abstract: Toxoplasmosis is a widespread zoonosis caused by Toxoplasma gondii, a protozoan that may infect mammals and birds. The aim of the present study was to measure the prevalence of T. gondii in ostriches (Struthio camelus) from commercial farms of São Paulo State, as a way to help in the knowledge and importance of the parasite in this animal specie. 195 serum samples were collected from ostriches proceeding from Sorocaba, Campinas, São Carlos, Araçatuba, São Paulo, Vale do Ribeira, Botucatu e São José do Rio Preto, São Paulo State. These samples were tested using the Modified Agglutination Test (MAT) to the investigation of Toxoplasma gondii antibodies. This search detected 14,36% seropositive animals to Toxoplasma gondii. The minimum titration considered was the larger dilution or same to the 1:16, and the higher dilution was 1:16384. It was not found any significant statistical difference between males and females. In only two regions (São Paulo and São José do Rio Preto), there was no seropositive animals. Those results point out the importance of a study more deepened about this infection in ostriches, and about management practices that could minimize the toxoplasmosis transmission risks to these birds and, by consequence, to the final consumer. / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A toxoplasmose em ovinos é uma doença parasitária de grande importância médica veterinária, zootécnica e de saúde pública, uma vez que acarreta prejuízos na criação animal, gerado pelas perdas reprodutivas e econômicas, além de sua implicação na saúde humana, já que o consumo de carne e leite contaminados podem facilitar a transmissão zoonótica. Este estudo tem como propósito maior investigar a resposta imunológica das infecções naturais por Toxoplasma gondii em ovelhas, pela análise seqüencial de imunoglobulinas, objetivando a diferenciação entre os estágios agudo e crônico da doença, bem como a pesquisa do DNA do agente no leite pela técnica de PCR. Para realização do estudo utilizaram-se ovelhas em lactação, naturalmente infectadas por T. gondii, divididas em dois grupos: G1, com sorologia positiva, e G2, sorologicamente negativo, composto por 20 ovelhas cada um. A diferenciação dos estágios da infecção toxoplásmica, agudo ou crônico foi realizada pela técnica de aglutinação direta modificada (MAT) com antígeno fixado com formalina (MAT-AF) e metanol (MAT-AM) e pela Reação de Imunofluorescência Indireta para pesquisa de imunoglobulinas IgM e IgG. Os resultados sorológicos evidenciaram que as ovelhas demonstravam perfil sorológico de cronicidade da infecção. A detecção do parasito no leite foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), detectando-se o DNA do T. gondii em sete amostras de leite, provenientes de cinco ovelhas soropositivas, sendo que em duas ovelhas o DNA foi detectado no leite por duas vezes. A identidade molecular dos produtos amplificados foi confirmada pelo sequenciamento., obtendo-se de 97 a 100% de identidade com T. gondii, constituindo-se em resultado relevante quanto aos aspectos de saúde pública. / Abstract: Toxoplasmosis is a major parasitary disease in sheep, due its importance in veterinary medicine and animal science and in public health, causing reproductive and economic losses to the herd, and also the prejudice to human health for the consumption of contaminated meat and milk, which can facilitate the zoonotic transmission. This study aims to investigate the immune response of natural infections by Toxoplasma gondii in sheep by sequence analysis of immunoglobulins, aiming to compare the acute and chronic stages of disease as well as DNA research agent in milk by the technique PCR. To accomplish the goal of this study, naturally infected by T. gondii lactating ewes were used, divided in two groups: G1, serologically positive, and G2, serologically negative, each group were composed by 20 ewes. The differentiation between the acute and chronic stages of the illness was made by the modified direct agglutination test (MAT) with antigens fixed with formaline (MAT-AF) and methanol (MAT-AM) and by the indirect fluorescent antibody test searching for IgM and IgG immunoglobulins. The serological results showed that the sheep showed serological profile of chronic infection. The detection of the parasite in milk was performed by polymerase chain reaction (PCR), detecting the DNA of T. gondii in seven milk samples from five seropositive sheep, and in two sheep DNA was detected in milk twice. The molecular identity of the amplified products was confirmed by sequencing, getting up for 97 to 100% identity with T. gondii, constituting an important result regarding the public health aspects / Mestre