Introdução e objetivo: Existem poucos estudos a respeito da imunidade inata em dermatofitoses (tinhas), este trabalho estudou a expressão dos receptores toll-like 2 e 4 em dermatofitoses por T. rubrum. Casuística e método: Estudaram-se sete pacientes com dermatofitose extensa, definida como pelo menos três segmentos corporais acometidos, e oito com a forma localizada. Inexistia qualquer imunodepressão primária ou secundária nos pacientes. Realizou-se em cada doente biópsia de área da pele lesada e sã, esta última distando pelo menos 4 cm da lesão. Outros 20 fragmentos de pele foram obtidos a partir de cirurgias estéticas. Utilizou-se a imuno-histoquímica com anticorpos anti-TLR2 e TLR4. As imagens foram analisadas pelo programa Image Pro Plus. A epiderme foi dividida em superficial e profunda, para análise da imunomarcação, considerando-se o ponto de divisão como 50% da sua espessura. Resultados: A análise da expressão do TLR4 em pacientes com tinha na epiderme superficial apresentou menores índices de densidade óptica (IDO), média 108,8±7,73 e 110,86±15,57 em pacientes com tinha localizada e extensa, respectivamente, em relação aos controles (145,26 ±21,88) com significância estatística. Também houve redução da expressão do TLR4 na epiderme profunda com IDO de 111,19±13,45 em dermatofitoses extensas e 144,65±17,20 nos controles (p=0,001). A análise da expressão do TLR2 na epiderme profunda em indivíduos com dermatofitose localizada evidenciou menor expressão na área lesada do que na sã do mesmo indivíduo, média 109,28±30,9 e 118,75±36,84, respectivamente (p 0.018). Embora não tenha havido redução da expressão do TLR2 na epiderme superficial comparativamente aos controles, na epiderme profunda encontrou-se, na área lesada das dermatofitoses extensas, menor expressão em relação aos controles, sendo 6,29±9,73 e 27,8±18,6, respectivamente. Conclusões: Encontrou-se menor expressão de TLR4 na epiderme superficial e profunda em indivíduos com dermatofitose comparativamente aos controles sadios. Em dermatofitoses extensas também a expressão de TLR2 está diminuída na epiderme profunda. Não existe diminuição da expressão do TLR2 na epiderme superficial provavelmente para manter a função de barreira da epiderme, onde este receptor é importante para coesão dos queratinócitos. Observou-se ainda menor expressão de TLR2 na pele lesada comparada à sã de indivíduos com dermatofitose localizada o que justificaria o fato destas lesões permanecerem limitadas a uma única área. / Introduction & Objectives: There are few studies to concern the role of innate immune response in dermatophytosis, so we conducted an investigation to define the involvement of TLRs in the course of tinea due T. rubrum infection. Patients & Methods: We allocated 8 patients with localised dermatophytosis and 7 with widespread one, defined as at least on three body segments. The skin was biopsied in two points: from lesion (active lesion) and healthy skin distant at least 4 cm. Twenty controls were obtained from cosmetic surgery. We use immunohistochemical staining with antibodies for antigens TLR 2 and 4. Images were analyzed. Results: (i) analysis of the expression of TLR4 of patients with tinea, found on the upper epidermis, average optical density index of 108,8±7,73 and 110,86±15,57 in localised and widespread tinea, respectively, and 145,26 ±21,88 in control skin; similar reduction maintain at lower one with average optical density index 111,19±13,45 in widespread tinea and 144,65±17,20 in controls p=0,001; (ii) analysis of TLR2 expression in the lower epidermis of patients with tinea met reduced optical density index in skin with localised tinea than in healthy skin, average 109,28±30,9 and 118,75±36,84, respectively, p 0.018. There were no reduction in TLR2 expression in upper epidermis compared to controls, although it was significant reduced in lower epidermis in widespread tinea, average 27,8±18,6 and 6,29±9,73. Conclusions: We found reduced expression of TLR4 in the lower and upper epidermis skin with tinea compared to controls in widespread and localised dermatophytosis. There was no reduction of TLR2 at upper epidermis probably in order to mantain the epidermal barrier function. We found yet a reduced expression of TLR2 in the infected skin compared to healthy one of the same patient with localised dermatophytosis which could explain that in these cases the tinea was not spread in extension.

Introdução e objetivo: Existem poucos estudos a respeito da imunidade inata em dermatofitoses (tinhas), este trabalho estudou a expressão dos receptores toll-like 2 e 4 em dermatofitoses por T. rubrum. Casuística e método: Estudaram-se sete pacientes com dermatofitose extensa, definida como pelo menos três segmentos corporais acometidos, e oito com a forma localizada. Inexistia qualquer imunodepressão primária ou secundária nos pacientes. Realizou-se em cada doente biópsia de área da pele lesada e sã, esta última distando pelo menos 4 cm da lesão. Outros 20 fragmentos de pele foram obtidos a partir de cirurgias estéticas. Utilizou-se a imuno-histoquímica com anticorpos anti-TLR2 e TLR4. As imagens foram analisadas pelo programa Image Pro Plus. A epiderme foi dividida em superficial e profunda, para análise da imunomarcação, considerando-se o ponto de divisão como 50% da sua espessura. Resultados: A análise da expressão do TLR4 em pacientes com tinha na epiderme superficial apresentou menores índices de densidade óptica (IDO), média 108,8±7,73 e 110,86±15,57 em pacientes com tinha localizada e extensa, respectivamente, em relação aos controles (145,26 ±21,88) com significância estatística. Também houve redução da expressão do TLR4 na epiderme profunda com IDO de 111,19±13,45 em dermatofitoses extensas e 144,65±17,20 nos controles (p=0,001). A análise da expressão do TLR2 na epiderme profunda em indivíduos com dermatofitose localizada evidenciou menor expressão na área lesada do que na sã do mesmo indivíduo, média 109,28±30,9 e 118,75±36,84, respectivamente (p 0.018). Embora não tenha havido redução da expressão do TLR2 na epiderme superficial comparativamente aos controles, na epiderme profunda encontrou-se, na área lesada das dermatofitoses extensas, menor expressão em relação aos controles, sendo 6,29±9,73 e 27,8±18,6, respectivamente. Conclusões: Encontrou-se menor expressão de TLR4 na epiderme superficial e profunda em indivíduos com dermatofitose comparativamente aos controles sadios. Em dermatofitoses extensas também a expressão de TLR2 está diminuída na epiderme profunda. Não existe diminuição da expressão do TLR2 na epiderme superficial provavelmente para manter a função de barreira da epiderme, onde este receptor é importante para coesão dos queratinócitos. Observou-se ainda menor expressão de TLR2 na pele lesada comparada à sã de indivíduos com dermatofitose localizada o que justificaria o fato destas lesões permanecerem limitadas a uma única área. / Introduction & Objectives: There are few studies to concern the role of innate immune response in dermatophytosis, so we conducted an investigation to define the involvement of TLRs in the course of tinea due T. rubrum infection. Patients & Methods: We allocated 8 patients with localised dermatophytosis and 7 with widespread one, defined as at least on three body segments. The skin was biopsied in two points: from lesion (active lesion) and healthy skin distant at least 4 cm. Twenty controls were obtained from cosmetic surgery. We use immunohistochemical staining with antibodies for antigens TLR 2 and 4. Images were analyzed. Results: (i) analysis of the expression of TLR4 of patients with tinea, found on the upper epidermis, average optical density index of 108,8±7,73 and 110,86±15,57 in localised and widespread tinea, respectively, and 145,26 ±21,88 in control skin; similar reduction maintain at lower one with average optical density index 111,19±13,45 in widespread tinea and 144,65±17,20 in controls p=0,001; (ii) analysis of TLR2 expression in the lower epidermis of patients with tinea met reduced optical density index in skin with localised tinea than in healthy skin, average 109,28±30,9 and 118,75±36,84, respectively, p 0.018. There were no reduction in TLR2 expression in upper epidermis compared to controls, although it was significant reduced in lower epidermis in widespread tinea, average 27,8±18,6 and 6,29±9,73. Conclusions: We found reduced expression of TLR4 in the lower and upper epidermis skin with tinea compared to controls in widespread and localised dermatophytosis. There was no reduction of TLR2 at upper epidermis probably in order to mantain the epidermal barrier function. We found yet a reduced expression of TLR2 in the infected skin compared to healthy one of the same patient with localised dermatophytosis which could explain that in these cases the tinea was not spread in extension.

Infecções microbianas podem ser causadas por bactérias, fungos, vírus, parasitas e algas. O presente estudo avaliou a atividade in vitro de formulações de lípides catiônicos contra bactérias multirresistêntes (MRs), fungos e microalgas de interesse médico humano e veterinário. A atividade biocida de bicelas de brometo de dioctadecildimetilamônio (DBB) foi avaliada contra bactérias gram-negativas produtoras de β-lactamases de amplo espectro e carbapenemases mundialmente disseminadas. Para fungos (Candida albicans, Trichophyton rubrum) e microalgas (Prototheca zopfii), a atividade biocida de DBB, sem e com a associação a drogas antifúngicas (ex., miconazol, terbinafina e anfotericina B), foi avaliada determinando-se adicionalmente a atividade sinérgica. Nanodispersões catiônicas de DBB exibiram atividade bactericida, fungicida e algicida, mesmo para patógenos MRs, sendo que a sua associação com outros antimicrobianos resultou em uma atividade sinérgica que poderia favorecer a produção de formulações com potencial para aplicação clínica humana e veterinária. / Microbial infections can be caused by bactérias, fungi, virus, parasites and algae. This study evaluated in vitro activity from cationic lipds formulations against multiresistant bacterias (MRs), fungi and e microalgae from human and veterinary. The Biocidal activity from bromide dioctadecildimetilammonium biceles (DBB) was evaluated against gram-negative bactérias β-lactamases producers and carbapenemases from broad spectrum with wide spread dissemination. For fungi (Candida albicans, Trichophyton rubrum) and microalgae (Prototheca zopfii), the biocidal activity from DBB wuth and without antifungal drugs (ex., miconazole, terbinafine e amphotericin B), was also evaluated by synergistic activity. Cationic nanodispertions of DBB has shown bactericidal, fungicidal and algicidal activity, even for MRs patogens, thus , the association with the others antimicrobials resulted in a synergistic activity wich could foment the production of the formulations with a potential application in human and veterinary medicine.

Dermatofitoses são infecções fúngicas de natureza crônica cujo principal agente etiológico é Trichophyton rubrum. Apesar de sua alta ocorrência mundial, pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos envolvidos nestas infecções. Neste trabalho investigamos a participação de duas classes de receptores de imunidade inata (NLRs e CLRs) na resposta a T.rubrum e avaliamos o perfil proteômico de macrófagos quando estimulados com o fungo. Observamos que T.rubrum foi capaz de induzir a produção de IL-1β dependente do inflamassomo NLRP3 e destacamos o papel da sinalização de IL-1 na modulação da resposta de IL-17. Determinamos os CLRs dectina-1 e dectina-2 como receptores essenciais na produção de citocinas inflamatórias e para o controle da infecção experimental. Curiosamente, a IL-17 e os linfócitos T e B foram dispensáveis para a eliminação do fungo. Também identificamos a proteína CLEC1A como uma novo receptor para fungos, envolvido no reconhecimento de glicolipídeos de T.rubrum. Por fim, a análise proteômica de macrofagos revelou a vimentina e a plastina-2 como duas proteínas potencialmente envolvidas na relação patógeno-hospedeiro. / Dermatophytosis are chronic fungal infections whose main causative agent is Trichophyton rubrum. Despite its high incidence worldwide, the immunological mechanisms underlying these infections remain largely unknown. Here we investigated the involvement of two classes of innate immune receptors (NLRs and CLRs) in the reponse to T.rubrum and performed a proteomic profiling of macrophages upon T.rubrum stimulation. We observed that T.rubrum was able to drive NLRP3 inflammasome-derived IL-1β production and highlighted IL-1 signaling as an important component in the shaping of the IL-17 response. We defined the CLRs dectin-1 and dectin-2 as key receptors for the induction of inflammatory cytokines and for the infection control in the in vivo settings. Curiously, IL-17 cytokines and T and B lymphocytes were dispensable for fungal clearance. In addition, we uncovered CLEC1A as a new receptor in fungal sensing, involved in the recognition of T.rubrum glycolipids. Finally, the proteomic analysis revealed Vimentin and Plastin-2 as two proteins potentially involved in the host-pathogen interaction.

O dermatófito Trichophyton rubrum é um fungo filamentoso, queratinofílico e antropofílico, sendo o principal agente etiológico de micoses cutâneas em humanos. Sua distribuição cosmopolita e seu acometimento grave em pacientes imunocomprometidos fazem dele um dos desafios a ser enfrentado pelos serviços de saúde pública mundial. As interações patógeno-hospedeiro envolvem diferentes processos relacionados com a degradação de queratina e com modificações metabólicas que permitem sua adesão e posterior penetração nos tecidos infectados. Essas alterações são importantes para o sucesso do processo infeccioso e envolvem mecanismos que modulam a expressão gênica, a secreção de proteínas específicas, a adaptação metabólica e as alterações no pH cutâneo, fundamentais para o estabelecimento da infecção. Dentre as proteínas que participam do processo de interação patógeno-hospedeiro estão as proteínas de choque térmico HSPs (Heat Shock Proteins), relacionadas aos mais diversificados processos celulares. Nesse sentido, a hipótese desse trabalho foi avaliar se os genes hsps de T. rubrum, bem como seu principal fator de transcrição (Hsf1), estão envolvidos nos processos de resposta a situações adversas e na interação com o microambiente hospedeiro, e se estes genes são modulados pelo fator de transcrição pacC, um regulador envolvido na sinalização do pH ambiente. Para tanto, a expressão dos genes hsps foi analisada em resposta ao cultivo de T. rubrum em diferentes meios de cultura, durante a exposição a antifúngicos, estresse térmico e interação com fragmentos de unha e pele humanas. O envolvimento da Hsp90 na modulação da expressão gênica, na suscetibilidade a antifúngicos e na interação de T. rubrum com fragmentos de unha humana foi avaliado utilizando-se um inibidor químico específico para esta proteína. Os resultados indicam uma expressão variável dentre os genes hsps e até mesmo dentro de cada família HSP, em resposta a cada condição ambiental ou interação a que o fungo foi exposto. Além disto, temos indício de que a expressão dos genes hsps seja modulada pelo fator de transcrição PacC, através da modulação do fator de transcrição Hsf1. Constatamos ainda, a influência de Hsp90 na susceptibilidade de T. rubrum às drogas Itraconazol e Micafungina, e no desenvolvimento de T. rubrum em fragmentos de unha humana. Esses resultados revelam a participação das proteínas HSPs em diversos aspectos do metabolismo de T. rubrum, e sugerem a participação de Hsp90 na patogenicicade e na suscetibilidade a drogas deste dermatófito / The dermatophyte Trichophyton rubrum is a filamentous, keratinophilic, and anthrophophilic fungi, being the major etiologic agent of cutaneous mycoses in humans. Its cosmopolitan distribution and the severe infection in immunocompromised patients make it one of the challenges to be faced by public health agencies worldwide. Hostpathogen interactions involve different processes related to keratin degradation and metabolic changes that allow adhesion and subsequent penetration of the infected tissue. These changes are important to the success of the infectious process and involve mechanisms that modulate gene expression, secretion of specific proteins, and metabolic adaptation, and cutaneous pH changes, essential to the establishment of the infection. Among the proteins that participate in the host-pathogen interaction are the heat shoch proteins (HSPs), related to diverse cellular processes. Thus, the hypothesis of this work was to evaluate whether T. rubrum hsp genes, as well as their major transcription factor (Hsf1), are involved in the response to adverse situations and in the interaction with the host microenvironment, and if these genes are regulated by the transcription fator PacC, a regulator of the pH signaling pathway. The expression of the hsp genes was evaluated in response to the cultivation of T. rubrum in different culture medium, during exposure to antifungal drugs, heat stress, and interaction with human nail and skin. The involvement of T. rubrum Hsp90 in the modulation of gene expression, susceptibility to antifungal drugs, and interaction with human nails was evaluated by using a chemical inhibitor, specific to this protein. Our results indicate a variable expression of the hsp genes, even among members of the same HSP family, in response to each environmental condition or interaction, to which the fungus was exposed. Furthermore, we have evidence that the hsp gene expression is modulated by the PacC transcription factor, by modulating the expression of the Hsf1 coding gene. We also found that Hsp90 is involved in T. rubrum susceptibility to the drugs Itraconazole and Micafungin, and in the development of this dermatophyte in human nails. These results reveal the involvement of HSPs in several aspects of T. rubrum metabolism, suggesting a role for Hsp90 in the pathogenicity and drug susceptibility in this dermatophyte

Os dermatófitos são um grupo de fungos que têm a capacidade de invadir o tecido queratinizado (pele, pêlos e unhas) de seres humanos e animais para produzir uma infecção denominada de dermatofitose. O Trichophyton rubrum é o principal patógeno causador de dermatofitose. As lesões causadas por estas espécies são crônicas e de carater pouco inflamatória. A doença apresenta evolução lenta e pacientes cronicamente infectados não respondem bem a terapia antifúngica. Assim como na maioria dos patógenos, o sistema imune inato é determinante na resposta antifúngica. Neutrófilos, macrófagos e células dendríticas constituem as células efetoras do sistema imune. A resposta imune aos dermatófitos ainda não está bem elucidada. Atualmente é aceito que a resposta imune mediada por células é responsável pelo controle da infecção. Poucos estudos têm focado a resposta imune inata a esses fungos. Assim, fomos estudar a interação de células dendríticas de pacientes com dermatofitose com conídios de T. rubrum. Nossos resultados mostraram que células dendríticas derivadas de monócitos (CDDM) foram capazes de fagocitar conídios de T. rubrum e ainda verificamos que estas células permaneceram viáveis após fagocitose. Quando analisamos a viabilidade dos conídios de T. rubrum, após 24 e 48 horas de interação com CDDM, verificamos que após 48horas houve um aumento no número de conídios viáveis quando estes foram fagocitados por células de pacientes, mostrando que CDDM de paciente não conseguem matar os conídios após fagocitose. Avaliamos a liberação de óxido nítrico por CDDM e a análise dos resultados mostrou que não houve diferença significativa na liberação de NO pela CDDM na presença de conídio de T. rubrum. Analisamos a expressão de moléculas co-estimulatórias como CD80, CD86, CD83, CD40 e HLA-DR em pacientes com dermatofitose e em indivíduos controle, observamos que não houve diferença na expressão dessas moléculas na presença de conídios de T. rubrum quando comparadas com culturas de CDDM sem conídios. Entretanto, houve uma diminuição do número de células de pacientes que expressam estas moléculas na presença de conídio de T. rubrum. Foi detectado um aumento significativo na secreção de TNF-α e de IL-12 pelas CDDM de pacientes quando em contato com conídio de T. rubrum. Avaliamos a capacidade das CDDM de indivíduos controle e pacientes pulsadas com concentrações crescentes de tricofitina em ativar linfócitos T CD4 e também verificamos o perfil de citocinas secretadas pelos linfócitos T CD4 após proliferação. Os resultados demonstraram que as CDDM foram capazes de estimular a proliferação de linfócitos somente em pacientes com dermatofitose. Foi detectado um aumento significativo na secreção de IL-4 pelos LT CD4 de indivíduos controle. Nossos resultados sugerem uma diferença no perfil de secreção de citocinas em indivíduos controle e pacientes. Indivíduos controle não produzem IL-12 e estimulam preferencialmente linfócitos T CD4 secretores de IL-4. Por outro lado, células dendríticas de pacientes produzem IL-12 e induzem a ativação de linfócitos T produtores de IL-4 e IL-10 / The dermatophytes are a group of fungi that have the capacity to invade the keratinized tissue (skin, hair and nails) of humans and animals to produce an infection called dermatophytosis. The Trichophyton rubrum is the main causative pathogen of dermatophytosis. Injuries caused by these species are chronic inflammatory and little character. The disease shows slow evolution and chronically infected patients do not respond well to antifungal therapy. Like most pathogens, the innate immune system is crucial in the antifungal response. Neutrophils, macrophages and dendritic cells are the effector cells of the immune system. The immune response to dermatophytes is not yet well elucidated. Currently it is accepted that the immune response mediated by cells is responsible for controlling the infection. Few studies have focused on the innate immune response to these fungi. Thus, we study the interaction of dendritic cells from patients with dermatophytosis with conidia of T. rubrum. Our results showed that dendritic cells derived from monocytes (CDDM) were capable of phagocytosed conidia of T. rubrum and found that these cells remained viable after phagocytosis. When we analyze the viability of conidia of T. rubrum after 24 and 48 hours of interaction with CDDM shows that after 48hours an increase in the number of viable conidia when they were phagocytized by cells of patients, showing that CDDM not kill the patient after the conidia phagocytosis. Evaluated the release of nitric oxide by CDDM and analysis of results showed that there was no significant difference in the release of NO by CDDM in the presence of conidia of T. rubrum. We analyzed the expression of co-stimulatory molecules such as CD80, CD86, CD83, CD40 and HLA-DR in patients with dermatophytosis and in control subjects, we observed that there was no difference in expression of these molecules in the presence of conidia of T. rubrum compared with cultures of CDDM without conidia . However, there was a decrease in the number of cells of patients who express these molecules in the presence of conidia of T. rubrum. It was observed a significant increase in the secretion of TNF-α and IL-12 by CDDM of patients when in contact with conidia of T. rubrum. Evaluate the capacity of individuals to control and CDDM patients pulsed with increasing concentrations of trichophytin to activate CD4 T lymphocytes and also see the profile of cytokines secreted by CD4 + T lymphocytes after proliferation. The results showed that the CDDM were able to stimulate the proliferation of lymphocytes only in patients with dermatophytosis. We observed a significant increase in the secretion of IL-4 by CD4 L T to control individuals. Our results suggest a difference in the profile of secretion of cytokines in control subjects and patients. Control subjects did not produce IL-12 and preferentially stimulate CD4 T lymphocytes secreting IL-4. Furthermore, dendritic cells of patients produce IL-12 and induce the activation of T lymphocytes producing IL-4 and IL-10

Espécies de fungos dos gêneros Candida e Trichophyton e Cryptococcus neoformans são os mais importantes agentes causadores de micoses em humanos. A seleção de linhagens tolerantes aos fungicidas atualmente utilizados torna extremamente necessário o desenvolvimento de novas estratégias para o controle desses patógenos. A inativação fotodinâmica (IF) de fungos baseia-se na utilização de um fotossensibilizador (FS) que se acumula preferencialmente nas células-alvo e que pode ser ativado por exposições à luz visível. A ativação do FS induz a formação de espécies reativas de oxigênio que matam a célula fúngica. O uso de FS para o tratamento de micoses é uma aplicação recente e promissora da IF de fungos. No presente estudo, foram avaliados os efeitos dos tratamentos fotodinâmicos (TF) com os FS fenotiazínicos azul de metileno (MB), azul de toluidina (TBO), novo azul de metileno (NMBN), o derivado pentacíclico do azul de metileno S137 e com uma cloroalumínio ftalocianina em nanoemulsão (ClAlPc/NE) nas leveduras Candida albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis, Cryptococcus neoformans e nos microconídios dos dermatófitos Trichophyton mentagrophytes e T. rubrum. Os efeitos dos TF com os diferentes FS fenotiazínicos também foram avaliados na linhagem celular L929 de camundongo. Inicialmente, a eficácia dos TF foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de cada FS para cada dose de luz. Adicionalmente, nas condições otimizadas, também foram determinados os efeitos dos TF na sobrevivência das diferentes espécies de fungos. Os MICs variaram tanto entre FS como entre espécies e diminuíram com o aumento da dose de luz. Entre os FS fenotiazínicos, para a maioria dos tratamentos (espécies e doses de luz), o NMBN e o S137 apresentaram os menores MICs. Os MICs para o NMBN e para o S137 foram <= 2,5 ?M para todas as espécies de Candida, para doses >= 20 J cm-2. MICs para a ClAlPc/NE foram tão baixos quanto 0,01 ?M para algumas das espécies de Candida. O TF com NMBN e S137 resultaram em redução de pelo menos 3 logs na sobrevivência de todas as espécies de Candida e de Trichophyton. O TF com ClAlPc/NE resultou em redução de até 4 logs na sobrevivência de C. albicans e C. tropicalis e de até 6 logs na sobrevivência de células melanizadas de C. neoformans. A internalização da ClAlPc foi confirmada por microscopia confocal de fluorescência e a quantidade incorporada pelas células foi dependente da concentração do FS. As toxicidades relativas entre os diferentes FS para as células de mamífero foram semelhantes às observadas em fungos, por exemplo maior toxicidade e fototoxicidade do NMBN e do S137 comparada às do MB e TBO / Fungal species of the genera Candida and Trichophyton and Cryptococcus neoformans are the main responsible for mycoses in humans. The selection of fungal strains resistant to currently used fungicides makes the development of alternative fungus-control techniques highly desirable. Fungal photodinamic inactivation (PI) is based on the use of a visible light-activate photosensitiser (PS) that preferentially accumulates in the cell of the target microorganism. The activation of the PS starts photochemical processes that produce a series of reactive oxygen species (ROS) that kill the fungal cell. The use of PS to treat mycoses is a novel and promising application of PI. In the present study, the effects of the photodynamic treatments (PDT) with the phenothiazinium PS methylene blue (MB), toluidine blue O (TBO), new methylene blue N (NMBN), the novel pentacyclic photosensitiser S137 and with a chloroaluminum phthalocyanine nanoemulsion (ClAlPc/NE) on the yeasts Candida albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis and Cryptococcus neoformans and on microconidia of the dermatophytes Trichophyton mentagrophytes and T. rubrum were evaluated. The effects of the PDT with the phenothiazinium PS were also evaluated on the mouse fibroblast cell line L929. The efficacies of the PDT were evaluated initially by determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of each PS for each light dose. Additionally, for the optimized conditions, the effects of the PDT on the survival of the different fungal species were also determined. MICs varied both among PS and species and decreased with light dose increase. Among the phenothiazinium PS, for most treatments (species and light doses), NMBN and S137 showed the lowest MICs. MICs for NMBN and S137 were <= 2.5 ?M for all the Candida species to light doses >= 20 J cm-2. MICs for ClAlPc/NE were as low as 0.01 ?M for some of the Candida species. PDT with NMBN and S137 resulted in a reduction of at least 3 logs in the survival of all Candida and Trichphyton species. PDT with ClAlPc/NE resulted in reductions up to 4 logs in the survival of C. albicans and C. tropicalis and up to 6 logs in the survival of C. neoformans melanized cells. Internalization of ClAlPc by C. neoformans was confirmed by confocal fluorescence microscopy, and the degree of uptake was dependent on PS concentration. The relative toxicities among the different PS to mammalian cell were similar to the antifungal data, i.e. greater toxicity and phototoxicity with NMBN and S137 compared to MB and TBO.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OswaldoHenriqueBarolliReis-Dissertacao.pdf: 707277 bytes, checksum: 3b71c133dbad0b57929d4b255619719c (MD5) Previous issue date: 2011-02-23 / In swine culture, the study of mycology contributes to food security in the understanding of various diseases. A knowledge of fungal agents on the skin of healthy animals and surface pathologies is important for effective control of the potential risks of infection, especially when associated with confined species, where the imbalance in the microbiota of the environment can be crucial in the interactions between environment and animals. The objective was to investigate the in vitro antimicrobial activity of essential oil of Rosa alba L. petals on microbial growth of yeasts Candida albicans (ATCC 10231) and filamentous fungi that causes opportunistic infectious processes in the skin of pigs, such as Microsporum nanum (ATCC 11832), Trichophyton mentagrophytes (ATCC 9533), Trichophyton rubrum (ATCC 10218) and Trichophyton tonsurans (ATCC 10870). The oils were extracted by the process of hydrodistillation in Clevenger apparatus, using fresh white rose petals. Microbiological tests were performed by the agar diffusion method (pour-plate) with Sabouraud-dextrose. Wells 5 mm in diameter, produced in the agar, were filled with 15 &#956;L of essential oil and the plates containing filamentous fungi were incubated in an inverted position at 28 °C for 10 days and the plates containing yeast were incubated at 30 °C for 48 hours. After this time, the inhibition circles were measured. The data were subjected to analysis of variance and means were compared by Tukey`s test at 5% probability. It was found that the activity of essential oil under study is significant in relation to the growth of microbial species tested. / Na suinocultura, o estudo da micologia contribui tanto na segurança alimentar como no entendimento de diversas patologias. O conhecimento dos agentes fúngicos presentes na pele de animais saudáveis e com patologias superficiais é importante para um controle eficaz dos riscos potenciais de infecção, principalmente quando associados a espécies confinadas, onde o desequilíbrio da microbiota ambiental pode ser decisivo nas interações entre o ambiente e os animais. Objetivou-se investigar a atividade antimicrobiana in vitro do óleo essencial de pétalas de Rosa alba L. sobre o crescimento microbiano de leveduras Candida albicans (ATCC 10231) e fungos filamentosos causadores de processos infecciosos oportunistas na pele de suínos, tais como Microsporum nanum (ATCC 11832), Trichophyton mentagrophytes (ATCC 9533), Trichophyton rubrum (ATCC 10218) e Trichophyton tonsurans (ATCC 10870). Os óleos foram extraídos pelo processo de hidrodestilação em aparelho de Clevenger, utilizando partes frescas das pétalas de rosa branca. Os testes microbiológicos foram realizados pelo método de difusão em ágar ( pour-plate ) com meio de cultura ágar Sabouraud-dextrose. Poços de 5 mm de diâmetro, produzidos no ágar, foram preenchidos com 15 &#956;L do óleo essencial e, em seguida, as placas contendo os fungos filamentosos foram incubadas de forma invertida, a 28 ºC por 10 dias; e as placas contendo a levedura foram incubadas a 30 ºC por 48 horas. Passado este tempo, os halos de inibição tiveram seus diâmetros medidos. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas através do teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade. Verificou-se que a atividade do óleo essencial em estudo é significativa em relação ao crescimento das espécies microbianas testadas.

Tinea pedis is a chronic fungal infection of the feet, very often observed in patients who are immuno-suppressed or have diabetes mellitus. The practicing allergist may be called upon to treat this disease for various reasons. Sometimes tinea infection may be mistaken for atopic dermatitis or allergic eczema. In other patients, tinea pedis may complicate allergy and asthma and may contribute to refractory atopic disease. Patients with recurrent cellulitis may be referred to the allergist/immunologist for an immune evaluation and discovered to have tinea pedis as a predisposing factor. From a molecular standpoint, superficial fungal infections may induce a type2 T helper cell response (Th2) that can aggravate atopy. Th2 cytokines may induce eosinophil recruitment and immunoglobulin E (IgE) class switching by B cells, thereby leading to exacerbation of atopic conditions. Three groups of fungal pathogens, referred to as dermatophytes, have been shown to cause tinea pedis: Trychophyton sp, Epidermophyton sp, and Microsporum sp. The disease manifests as a pruritic, erythematous, scaly eruption on the foot and depending on its location, three variants have been described: interdigital type, moccasin type, and vesiculobullous type. Tinea pedis may be associated with recurrent cellulitis, as the fungal pathogens provide a portal for bacterial invasion of subcutaneous tissues. In some cases of refractory asthma, treatment of the associated tinea pedis infection may induce remission in airway disease. Very often, protracted topical and/or oral antifungal agents are required to treat this often frustrating and morbid disease. An evaluation for underlying immuno-suppression or diabetes may be indicated in patients with refractory disease.

Introdução: os dermatófitos afetam 40% da população mundial, e no sul do Brasil encontrase o maior número de portadores de HIV/habitante do país, sendo necessário, portanto, um controle epidemiológico desses fungos. Objetivo: determinar a prevalência dos dermatófitos na região metropolitana de Porto Alegre, Brasil, e comparar as espécies a partir dos dados dos pacientes. Métodos: foi realizado um estudo transversal com dados de pacientes atendidos em hospital de referência, no período de 1996-2011, sendo que as análises estatísticas utilizadas para cada objetivo específico do trabalho foram: regressão linear simples (determinar o comportamento da prevalência ao longo dos anos); Qui-quadrado (comparar a prevalência dos fungos entre o gênero masculino e feminino); Mann-Whitney U (comparar a idade dos pacientes entre os gêneros); Kruskal-Wallis (comparar a idade dos pacientes entre as espécies de dermatófitos); Qui-quadrado corrigido por Bonferroni (comparar a proporção étnica dos casos acometidos por cada espécie com a proporção amostral) e teste exato de Fisher/análise de resíduos (determinar as diferenças entre os locais anatômicos afetados pelos fungos). Em todas as análises, foi considerado =0,05. Resultados: foram obtidos 14.214 casos positivos no exame micológico cultural, sendo que 9.048 foram positivos para dermatófitos, o que torna este o maior estudo epidemiológico sobre dermatofitoses do país. Trichophyton rubrum ocorreu em 59,6% dos casos, seguido de T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2,6%), Epidermophyton floccosum (1,5%), M. gypseum (1,3%), T. tonsurans (0,9%) e T. violaceum (1 caso). Para T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum e M. canis, os coeficientes angulares das regressões lineares foram +1,119, +0,211, -0,826 e -0,324% ao ano, respectivamente. No gênero masculino verificou-se maior prevalência de infecção (79,3% versus 54,9%), porém as mulheres acometidas apresentaram idade superior aos homens. T. interdigitale e M. canis foram mais frequentes em pacientes caucasianos, enquanto T. rubrum acometeu menos pacientes pardos do que o esperado. Tinea unguium foi a dermatofitose mais prevalente (48,5%), sendo as unhas dos pés mais acometidas do que as unhas das mãos (94,4% versus 4,1%), seguida de tinea pedis (33,1%), corporis (6,8%), cruris (5,9%), manuum (2,4%), capitis e facie (1,5% cada) e barbae (0,07%). T. rubrum foi o fungo predominante em todas as regiões do corpo, exceto no couro cabeludo, em que M. canis foi responsável por 75% dos casos. As maiores associações positivas para cada espécie foram: T. rubrum (região inguinal); T. interdigitale e E. floccosum (pele dos pés); M. canis e T. tonsurans (couro cabeludo); M. gypseum (face). Conclusão: este estudo corrobora os demais estudos da região quanto à distribuição dos dermatófitos, sendo T. rubrum a espécie mais comum. T. tonsurans apresenta baixíssima prevalência, diferentemente de outros estados brasileiros, onde esse fungo está entre os primeiros do ranking. Porém, este estudo mostrou diferença entre homens e mulheres quanto à idade e à prevalência na infecção por dermatófitos. Além disso, observamos uma diminuição na prevalência de T. rubrum e M. canis, acompanhada de um aumento de T. interdigilate e E. floccosum. Nesse sentido, é preciso haver mais estudos epidemiológicos na região para o devido acompanhamento e controle da evolução das dermatofitoses. / Background: dermatophytes affect 40% of the world population. In Brazil, largest number of patients with HIV/inhabitant occurs in the south, requiring epidemiological control of these fungi. Objective: to determine the prevalence of dermatophytes in the metropolitan area of Porto Alegre, Brazil, and to compare species based on patient data. Methods: we conducted a cross-sectional study with data of patients from a highly respected hospital 1996-2011. The statistical analyses performed for each specific objective were: Simple linear regression (to determine the prevalence of behavior over the years), Chi-square (to compare prevalence of fungi between the genders), Mann-Whitney U (to compare patients' age between the genders), Kruskal-Wallis (to compare the ages of pacients among species of dermatophytes); Chi-square corrected by Bonferroni (to compare ethnic proportion of cases affected by each species with the sample proportion), Fisher's Exact Test / Analysis waste (to determine differences between anatomical sites affected by fungi). In all analyses, = 0.05 was considered. Results: were obtained 14,214 cases mycological culture-positive, being 9,048 cases positive for dermatophytes, making this work the largest epidemiological study of dermatophytosis in the country. Trichophyton rubrum occurred in 59.6% of cases, followed by T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2.6%), Epidermophyton floccosum (1.5%), M. gypseum (1.3%), T. tonsurans (0.9%) and T. violaceum (1 case). The slopes of the linear regressions, for T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum and M. canis, were +1.119, +0.211, -0.826 and -0.324% per year, respectively. Males presented higher prevalence of infection (79.3% versus 54.9%), but women were older than men. T. interdigitale and M. canis were most prevalent in Caucasians and T. rubrum was less prevalent in brown people than expected. Tinea unguium was more prevalent of the dermatophytosis (48.5%) being toenails more affected than fingernails (94.4% vs. 4.1%), followed by tinea pedis (33.1%), corporis (6.8%), cruris (5.9%) manuum (2.4%), facie and capitis (1.5% each one) and barbae (0.07%). T. rubrum was the predominant fungus in all regions of the body except in the scalp where M. canis was the responsible for 75% of the cases. The species with the highest positive associations were: T. rubrum (groin); T. interdigitale and E. floccosum (skin of the feet); M. canis and T. tonsurans (scalp); M. gypseum (face). Conclusion: this study corroborates other similar studies in the region related to the distribution of dermatophytes, being T. rubrum the most common species followed by T. interdigitale, and being T. tonsurans the one that presents a very low prevalence, unlike other States. However, this study showed gender differences in relation to age and prevalence of the infection by dermatophytes. Moreover, we observed a decrease in the prevalence of T. rubrum and M. canis and an increase of T. interdigilate and E. floccosum. In this sense, the continuation of epidemiological studies in the region is necessary for monitoring and controlling the evolution of dermatophytosis.