O saco vitelino desempenha um importante papel no desenvolvimento embrionário de todos os mamíferos. Sua função está sendo estudada, demonstrando ser um dos lugares iniciais da hematopoiese. No período em que a placenta verdadeira ainda não esta formada, durante o desenvolvimento embrionário, o saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião, constituindo um sitio de transferência e síntese de proteínas. As proteínas são moléculas que governam praticamente todas as funções celulares e são do ponto de vista químico as moléculas biológicas estruturalmente mais complexas. A proteômica é o estudo em grande escala de proteínas de uma amostra biológica complexa. O objetivo deste trabalho foi realizar a analise estrutural e bioquímica inicial das proteínas presentes no saco vitelino de embriões bovinos por eletroforese bidimensional 2D-PAGE. A partir dos géis obtidos em 2D-PAGE as amostras de proteínas contidas no saco vitelino de 37 dias de gestação apresentaram cerca de 1230 proteínas, e os géis das amostras de 23 dias de gestação apresentaram cerca de 970 proteínas. O saco vitelino de 23 dias apresentou proteínas essenciais diferencialmente expressas nos estágios de desenvolvimento, como Hemogen, proteína expressa neste estagio, responsável pelo controle da proliferação e diferenciação de células hematopoiéticas; a proteína Glicoproteína-N-acetilgalactosamina 3-beta-galactosiltransferase-1, envolvida nos processos de angiogênese, trombopoiese e no desenvolvimento da homeostase nos rins; a proteína fator de transcrição Corion-especifico (GCMa) fator de transcrição necessário para o desenvolvimento da placenta. Enqueanto que o saco vitelino de 37 dias apresentou proteinas essenciais deste estágio como a apolipoproteína E (APOE) que medeia à ligação, inter-sinalização e catabolismo das partículas de lipoproteína, podendo servir como uma ligação para o receptor de LDL (apo B/E) e para receptores específicos de apo-E dos tecidos hepáticos durante a embriogênese. Estas proteinas serão de vital importância para o desenvolvimento do embrião até a formação da placenta. / The yolk sac plays an important role in embryonic development of all mammals. Its function is being studied, proving to be one of the initials of haematopoiesis. In the period when the placenta is not real yet formed during embryonic development, the yolk sac is the main source of nutrition of the embryo, providing a place for the transfer and synthesis of proteins. Proteins are molecules that govern all cellular functions and are from a chemical structurally the most complex biological molecules. The proteomics is the large-scale study of proteins in a complex biological sample. The aim of this work was make the analisys of present proteins in the yolk sac of bovine embryos by 2D-PAGE two-dimensional electrophoresis. The gels obtained from 2D-PAGE of protein samples contained in the yolk sac of 37 days of pregnancy had about 1230 proteins, and gels of samples from 23 days of pregnancy had about 970 proteins. The yolk sac of 23 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development, as Hemogen, protein expressed in stage, responsible for controlling the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, the protein acetylgalactosamine glycoprotein-N-3-beta-galactosyltransferase-1, involved in the process of angiogenesis, trombopoiese homeostasis and development of the kidney, the protein factor chorion-specific transcription (GCMa) transcription factor necessary for the development of the placenta. The yolk sac of 37 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development , as apolipoprotein E (APOE), which mediates the binding, intersignaling and catabolism of lipoprotein particles, and can serve as a link to the receptor to LDL (apo B/E) and specific receptors for apo E in the liver tissue embryogenesisThese proteins are of vital importance to the development of the embryo until the formation of the placenta.

JUCÁ, Thiago Lustosa. Estudo proteômico de sementes em desenvolvimento e maduras de pinhão manso (Jatropha curcas L.). 2010. 102 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2010. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-13T12:51:05Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) Previous issue date: 2010 / Although the potential of the seed Jatropha as a source of raw material for the production of biodiesel is widely recognized, little is known about the deposition patterns of oil and protein during seed development. The availability of this knowledge will be crucial for the creation of new genotypes to meet the demand from the biodiesel industry. In this study, we performed an initial proteomic analysis of the endosperm in developing and mature in order to identify proteins involved in fatty acid metabolism as well as proteins with allergenic properties / toxic / antinutritional that are responsible for marking the residue of oil extraction unsuitable for consumption animal. Through two-dimensional electrophoresis (2DE) were established reference maps of protein fractions from the endosperm of the seed development (ESD) and mature (ESM), which were obtained by exploring the properties of differential solubility of proteins in the endosperm. These reference maps, 1480 spots in total were selected (712 "ESD" and 768 "ESM"), removed from the 2DE gel and digested with trypsin for subsequent analysis by mass spectrometry. Were used for searching the databases NCBInr and a local database of ESTs from developing seeds and during germination of Jatropha. A total of 525 spots were identified and classified functionally. Although most of the proteins identified were related reservation function, proteins involved in biosynthetic pathways of fatty acids were identified and diterpenes, as well as various metabolic-related proteins, protease inhibitors and curcina toxic protein. The relatively low rate of identification obtained in this study may in part be attributed to the fact that there is extensive databases for this species. The results presented here represent the first in-depth analysis of the deposition pattern and identification of proteins from seeds of Jatropha and lay the foundations on which the complete proteome of seeds of Jatropha can be established. / Embora o potencial das sementes de pinhão manso como fonte de matéria prima para a produção de biodiesel seja amplamente reconhecido, pouco se sabe sobre os padrões de deposição de óleo e proteína durante o desenvolvimento da semente. A disponibilidade deste conhecimento será de fundamental importância para a criação de novos genótipos que atendam a demanda das indústrias do biodiesel. Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica inicial do endosperma em desenvolvimento e maduro, objetivando identificar proteínas envolvidas no metabolismo de ácidos graxos assim como proteínas com propriedades alergênicas/tóxicas/antinutricionais que são responsáveis por tornar o resíduo da extração do óleo inadequado para o consumo animal. Através de eletroforese bidimensional (2DE) foram estabelecidos mapas de referência das frações protéicas do endosperma de sementes em desenvolvimento (ESD) e maduras (ESM), que foram obtidas explorando as propriedades de solubilidade diferencial das proteínas do endosperma. Desses mapas de referência, um total 1480 spots foram selecionados (712 “ESD” e 768 “ESM”), retirados dos géis 2DE e digeridos com tripsina para posterior análise por espectrometria de massa. Foram utilizados para as buscas, os bancos de dados do NCBInr e um banco de dados local de ESTs de sementes em desenvolvimento e durante a germinação de sementes de pinhão manso. Um total de 525 spots foram identificados e classificados funcionalmente. Embora a maioria das proteínas identificadas fosse relacionadas com função de reserva, proteínas envolvidas em vias biossintéticas dos ácidos graxos e dos diterpenos foram identificadas, assim como várias proteínas relacionadas com metabolismo, inibidores de protease e a proteína tóxica curcina. A taxa de identificação relativamente baixa obtida neste estudo pode em parte ser atribuída ao fato de não existir bancos de dados extensos para esta espécie. Os resultados aqui apresentados representam a primeira análise em profundidade do padrão de deposição e identificação das proteínas de sementes de pinhão manso e fixam as bases sobre as quais o proteoma completo de sementes de pinhão manso poderá ser estabelecido.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T18:31:46Z : No. of bitstreams: 1 lima_pm_me_botfmvz.pdf: 842879 bytes, checksum: 6d83f475b744d68583fa0fe06786a4aa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / No presente trabalho foi feito uma análise qualitativa de cálcio, ferro e zinco em spots de proteínas de amostras de tecido hepático de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) por Fluorescência de Raios-X de Radiação Síncroton, após a separação das proteínas por Eletroforese Bidimensional em Gel de Poliacrilamida (2D-PAGE). Os espectros de fluorescência obtidos indicaram a presença de cálcio, ferro e zinco em doze, seis e oito spots protéicos das amostras de fígado, respectivamente. Os íons metálicos detectados nas amostras estão distribuídas principalmente em proteínas de massa molar menor que 45 kDa e com pI na faixa de 4,5 a 9,0. Além do cálcio, ferro e zinco foram detectados a presença de enxofre e fósforo, elementos não metálicos, que podem ser constituintes da estrutura das proteínas. As concentrações de cálcio, ferro e zinco ligados às proteínas foram determinadas por FAAS após a mineralização ácida dos spots protéicos, encontrando-se concentrações na faixa de 1,08 a 5,80 mg g-1, 2,02 a 8,03 mm g-1 e 1,60 a 8,55 mg g-1, respectivamente / An investigation was made into calcium, iron and zinc in protein spots in samples of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) liver tissue obtained after protein separation by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and subsequent qualitative and quantitative evaluation by synchrotron radiation X-ray fluorescence (SRXRF) and graphite furnace atomic absorption spectrometry (FAAS). An analysis of the fluorescence spectra indicated the presence of calcium, iron and zinc in twelve, six and eight liver protein spots, respectively. The metal ions found were distributed mainly in proteins with a molar mass of less than 40.00 kDa and more than 12.00 kDa, with pI in the range of 4.70 to 9.40. The only exception was a spot presenting protein with a molar mass of 10.10 kDa. In addition to calcium, iron and zinc, sulfur and phosphorus – which are non-metals that may be part of the protein structure, were also detected. After microwave-assisted acid mineralization of the proteins spots, a FAAS estimation of the concentration of calcium, iron and zinc bound to these proteins indicated a range of 1.08 to 5.80 mg g-1, 2.02 to 8.03 mg g-1 e 1.60 to 8.55 mg g-1, respectively

Orientador: Pedro de Magalhães Padilha / Resumo: Diabetes mellitus tipo 1 é caracterizado pelo aumento significativo de glicose circulante no sangue, resultado da deficiência na secreção e/ou ação de insulina. O quadro hiperglicêmico, quando cronicamente instalado, leva a anormalidades no metabolismo de lipídios, proteínas e carboidratos, além de alterar o balanço entre pró-oxidantes e antioxidantes. É um importante problema de saúde pública, pois compromete a qualidade de vida e sobrevida dos indivíduos, além de envolver elevados custos no seu tratamento. Quando se consegue identificar os fatores determinantes para o desenvolvimento do diabetes, novas estratégias de prevenção e tratamento são necessárias. Nesse contexto, as proteínas e os minerais apresentam fundamental importância como componentes estruturais e funcionais dos seres vivos. Estudos proteômicos e metaloproteômicos, auxiliam na compreensão da variabilidade do diabetes, contribuindo assim na elucidação dos aspectos fisiológicos e funcionais das biomoléculas presentes em amostras biológicas, como plasma e tecido animal, além disso, a possível identificação de biomarcadores relacionados ao desenvolvimento de doenças crônicas degenerativas, como o diabetes. O objetivo geral do trabalho foi utilizar ferramentas proteômicas e metaloproteômicas na identificação de possíveis biomarcadores presentes no plasma e fígado de ratos diabéticos tipo 1 induzido experimentalmente com estreptozotocina. Foram utilizados 24 ratos Wistar, distribuídos em 3 grupos experimentais (n=... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Type 1 diabetes mellitus is characterized by the significant increase in circulating glucose in the blood as a result of deficiency in the secretion and/or insulin action. The hyperglycemic state, when chronically installed, leads to abnormalities in the metabolism of lipids, proteins and carbohydrates, in addition to changing the balance between pro-oxidants and antioxidants. This is an important public health problem because it affects the quality of life and the survival of individuals, often necessitating high-cost treatment. When one can identify the determining factors for the development of diabetes, new strategies for prevention and treatment are needed. In this context, our results reflect the fundamental importance of protein and minerals such as structural and functional components of living things, proteomic and metalloproteomic studies that can assist in the understanding of diabetes variability, thus helping to elucidate the physiological and functional aspects of biomolecules in biological samples such as plasma and animal tissue. In addition, the possible identification of biomarkers related to the development of chronic degenerative diseases like diabetes. The overall objective of the study was to use proteomics and metalloproteomic in identifying potential biomarkers present in the plasma and liver of diabetic rats type 1 experimentally induced with streptozotocin. The total of 24 rats, Wistar, were divided into 3 groups (n = 8): C (control); DM1 (type 1 dia... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Metodologia proteômica baseada em eletroforese bi-dimensional (2D-PAGE) foi usada para auxiliar no entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na injúria renal induzida pelo flúor (F) e definir biomarcadores potenciais para fluorose. Três grupos de ratos Wistar machos recém-desmamados (21 dias de vida) foram tratados com água de beber contendo 0 (controle), 5 ou 50 ppm F, por 60 dias (n=6/grupo). Durante o período experimental, os animais foram mantidos individualmente me gaiolas metabólicas, a fim de que o consumo de água e ração fosse avaliado, bem como as excreções urinária e fecal de F. Os animais foram mortos e o rim esquerdo e o soro foram coletados para análises histopatológica e de F, respectivamente. Para análise proteômica foram coletados o rim direito e a urina (no dia anterior ao sacrifício, num coquetel contendo inibidores de protease em gelo). Após o isolamento das proteínas, os perfis proteômicos renal e urinário foram examinados usando 2D-PAGE e coloração com azul de Coomassie brilhante. Foi possível detectar uma doseresposta em relação à ingestão e excreção de F, bem como em relação aos níveis de F presentes no soro e nos rins dos animais. As análises histológicas não revelaram danos aos rins induzidos pelo F, com exceção de uma congestão vascular no grupo de 50 ppm F. Para os rins, a análise quantitativa de intensidade (software Image Máster Platinum, alterações de 2 vezes) revelou 30 e 17 proteínas diferencialmente expressas, respectivamente, entre os grupos controle X 50 ppm F e controle X 5 ppm F. Para a urina, 9, 10 e 13 proteínas aumentaram ou diminuíram nos grupos controle X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F e controle X 50 ppm F, respectivamente. Nove proteínas foram identificadas satisfatoriamente por MALDI-TOF TOF MS. As proteínas identificadas estão relacionadas principalmente ao metabolismo, desintoxicação e housekeeping. Esses dados indicam que a análise proteômica de rim e urina de animais tratados com F é capaz de identificar proteínas diferencialmente expressas, mesmo em casos de baixas doses de F. Assim, essa ferramenta pode contribuir para o entendimento dos mecanismos envolvidos na fluorose, apontando proteínas-chave que deveriam ser melhor investigadas, bem como potenciais biomarcadores de toxicidade. / Two-dimensional gel electrophoresis (2D-PAGE) based proteomics approach was used to better understand the molecular mechanisms of renal injury induced by fluoride (F) and define potentials biomarkers of fluorosis. Three groups of weanling male Wistar rats (21 days old) were treated with drinking water containing 0 (control), 5, or 50 ppm F for 60 days (n=6/group). During the experimental period, the animals were kept individually in metabolic cages, in order to analyze the water and food consumption, as well as fecal and urinary F excretion. Animals were killed and left kidney and serum were collected for histopathological examination and F analysis, respectively. For proteomic analysis, right kidney and urine (one day before sacrifice, in protease-inhibitors cocktail for 8 hours in ice box) were collected. After protein isolation, renal and urinary proteome profiles were examined using 2D-PAGE and coomassie brilliant blue staining. It was possible to detect a dose-response regarding F intake and F excretion, as well as F levels in serum and kidneys. The histological analysis revealed no damage in kidneys induced by F, except for a vascular congestion in the 50 ppm F group. For kidney, quantitative intensity analysis (Image Master Platinum software, 2-fold changes) revealed 30 and 17 differentially expressed proteins between control X 50 ppm F, and control X 5 ppm F groups, respectively. As for urine, 9, 10 and 13 proteins increased or decreased in control X 5 ppm F, 5 ppm F X 50 ppm F and control X 50 ppm F groups, respectively. Nine proteins were successfully identified by MALDI-TOF TOF MS. The identified proteins are mainly related with metabolism, detoxification and housekeeping. These data indicate that proteomic analysis in kidney and urine of F-treated animals is able to identify differentially expressed proteins, even in cases of low F doses. Thus, this approach can contribute for the understanding of the mechanisms underlying fluorosis, by indicating key-proteins that should be better addressed, as well as potential toxicity biomarkers.

Orientador: Denise Vaz de Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:10:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gandra_PauloGuimaraes_D.pdf: 3901290 bytes, checksum: ee5d5ae8b4367d8ada3a77f8e845aec2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A presente tese apresenta os resultados de dois estudos utilizando análise proteômica, sobre os efeitos agudos e crônicos do exercício de endurance no músculo de ratos. No primeiro estudo foram coletadas amostras de gastrocnemio de animais controle não exercitados, e exercitados em teste incremental de media duração em esteira ate a exaustão. Os ratos foram sacrificados 3h e 24h após o exercício. Utilizamos a abordagem clássica da análise proteômica quantitativa, que utiliza a eletroforese bidimensional (2DE) para separação das proteínas, e a espectrometria de massas para identificação destas proteínas. Seis spots apresentaram alterações significativas no volume relativo. Os spots identificados como gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase, triose fosfato isomerase 1, subunidade beta da piruvato desidrogenase E1, carnitina palmitoil transferase 2 e HSC70 mostraram-se mais abundantes apos o exercício. Já o spot identificado como ?-actina mostrou-se menos abundante apos o exercício. Estes resultados sugerem que um único estímulo de endurance em animais destreinados não estimula a síntese de proteínas miofibrilares, mas sim de proteínas sarcoplasmáticas e mitocondriais. Essas alterações no músculo destreinado serviriam para precondicionar o músculo para realização de um exercício subsequente. No segundo estudo apresentamos a análise proteômica da porção vermelha (GV) e branca (GB) do gastrocnemio de ratos controle não treinados (C), de ratos bem adaptados ao exercício de endurance (T1), e de ratos treinados e submetidos a um período de overtraining (T2). Os ratos do grupo T2 foram subdivididos ainda em grupo overreaching funcional (FOR), que exibiram aumento ou manutenção do desempenho após o overtraining, e grupo overreaching não funcional (NFOR), cujo nível de desempenho estava diminuído apos o overtraining. Na comparação entre C, T1 e T2, 32 spots demonstraram alterações no GV e 22 no GB. No GV as maiores alterações ocorreram no grupo T2. As proteínas com aumento na abundancia indicam aumento da biogênese mitocondrial, da capacidade de captar lipídeos, maior capacidade antioxidante, maiores abundancia de chaperonas e transformação das fibras no sentido de rápidas para lentas, sugerindo que um período de overtraining e eficiente em adaptar o músculo esquelético. Já no GB as adaptações esperadas com o treinamento de endurance não foram aparentes. A diminuição da abundância de spots da aconitase sugere um maior ataque oxidativo no GB do que no GV. Após o estímulo crônico proteínas do miofilamento e de interação com o miofilamento e citoesqueleto demonstraram abundância alterada. No seu conjunto, nossos resultados sugerem que a resposta inicial do músculo a um único estimulo de endurance envolve um aumento inespecífico da capacidade de produção de ATP, enquanto a estimulação crônica aumenta somente a capacidade oxidativa, com uma concomitante diminuição da abundancia de proteínas glicoliticas. Além disso, chamam a atenção para um papel chave das mitocôndrias e proteínas dos miofilamentos e citoesqueleto no processo adaptativo e maldaptativo ao exercício. / Abstract: In the present work the acute and chronic changes in rat skeletal muscle in response to endurance exercise were investigated by proteomic analysis. The results are presented in two separated studies. In the first study gastrocnemius muscle were sampled from control non exercised animals and from animals exercised to exhaustion in an incremental manner in a treadmill. Exercised rats were sacrificed 3 and 24h after exercise cessation. We used the classic proteomic approach which utilizes two dimensional electrophoresis (2DE) to separate the proteins and mass spectrometry to identify these proteins. Six spots presented significant alterations in their relative volume. Spots identified as GAPDH, triose phosphate isomerase 1, beta subunit of pyruvate dehydrogenase E1, carnitine palmitoil transferase 2 and HSC70 were up-regulated after exercise. The spot identified as ?-actin was down-regulated after exercise. This results suggests that one bout of endurance exercise in untrained muscle may stimulate sarcoplasmic and mitochondrial proteins synthesis but not myofibril proteins. Proteins presenting increased abundance after one single bout of endurance exercise may be important for the preconditioning of skeletal muscle for a subsequent exercise bout. In the second study we present the proteomic analysis of the red (RG) and white portion (WG) of gastrocnemius muscle sampled from rats well adapted to endurance exercise (T1), well trained and submitted to an overtraining period (T2) and from control non exercised rats (C). Rats from group T2 were also subdivided in a functional overreaching group (FOR) which is composed by rats demonstrating an enhanced or unchanged performance after the overtraining period or a non functional overreaching group (NFOR) which is composed by rats demonstrating decreased performance levels after the overtraining period. When comparing C, T1 and T2, 32 spots demonstrated altered abundance in RG and 22 in the WG. The main alterations in RG were observed in the T2 group and indicated increased mitochondrial biogenesis, increased capacity of lipid uptake, antioxidant capacity, chaperone function, and a shift of fiber type from a fast-glycolytic to a slow-oxidative pattern. All these changes demonstrated the efficiency of an intensified training period to adapt skeletal muscle. The expected adaptations to endurance training were not evident in WG and the results such as decreased aconitase spots volume suggest higher oxidative stress levels in WG than in RG during overtraining. Myofilament and myofilament interacting proteins abundance were altered after chronic endurance stimuli. The results presented here suggests that the initial response of skeletal muscle to one single bout of endurance exercise encompasses an nonspecific increase of ATP production capacity while chronic stimulation increases only the oxidative capacity with a concomitant decrease in glycolytic proteins abundance. Also the results draw attention to the roles of mitochondria and myofilament proteins in adaptation and maladaptation to endurance exercise. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Hydric deficit is one of the main limiting factors for the sugarcane productivity increase in the Brazilian northeast. The process can be worsened due to the global climatic changes and it is estimated the episodes of hydric restrictions will be much more frequent, including in other cultivation areas in Brazil. When plants are submitted to the hydric stress, there is an induction of a series of genes and specific proteins as an adaptation mechanism to this condition. Therefore, proteome studies can be a powerful tool to identify proteins and find out their mechanisms of response and adaptation to the hydric stress. The present study aimed to evaluate changes in the proteome of the RB72910 (tolerant of the hydric stress) and RB72454 (sensitive) genotypes of sugarcane as well to identify the proteins involved when submitted to hydric stress. To carry out these goals, plants were cultivated in a greenhouse, and after two months of cultivation (control), the irrigation was suspended for 2 days (stress), which was monitored by the hydric potential determination (Ψw). After this period, the irrigation was restarted for two more days (recovery). For the proteome analysis, three extraction methods to prepare protein samples for two-dimensional electrophoresis were tested. The method that presented the best results on the number of spots, quality and reproducibility of the gels was the adapted method of phenol extraction. Results showed the presence of several exclusive spots with differences in the expression between sensitive and tolerant genotypes. It was detected 480 spots for the sensitive genotype and 352 spots for the tolerant genotype, and a total of 80 spots were identified by mass spectrometry (MS-MALDITOF) after the proteome analysis for the control, stress and recovery treatments. It was possible to see between both genotypes that 24% of the proteins identified and related to the stress were present in the tolerant genotype, while just 3% of the proteins associated to the hydric stress were observed in the sensitive genotype. The MS analysis of the identified spots showed the presence of proteins such as chaperona, ascorbato peroxidase, superoxide dismutase, heat shock, 14,3-3-like and isoflavone reductase, which have been described to participate in the plant defense mechanisms against biotic and abiotic stresses. / O deficit hídrico é um dos principais fatores limitantes para o aumento da produtividade da cana-de-açúcar no nordeste brasileiro. Essa situação pode ser agravada, pois, devido às preditas mudanças climáticas globais, estima-se que os episódios de restrição hídrica sejam ainda mais freqüentes, inclusive em outras áreas de cultivo no Brasil. As plantas, quando submetidas ao estresse hídrico, expressam uma série de genes e proteínas específicas como um mecanismo de adaptação a essa condição. Portanto, o estudo da proteômica pode ser uma poderosa ferramenta para a identificação de proteínas e determinação dos mecanismos de resposta e adaptação ao estresse hídrico. O presente estudo teve como objetivo verificar a alteração no proteoma e identificar as proteínas envolvidas, dos genótipos: RB72910 (tolerante ao estresse hídrico) e RB72454 (sensível) de cana-de-açúcar quando submetidos ao estresse hídrico. As plantas foram cultivadas em casa de vegetação, e após dois meses de cultivo (controle), suspendeu-se a rega por 2 dias (estresse) que foi monitorado pela determinação do potencial hídrico (Ψw). Após esse período, retomou-se a irrigação na capacidade de campo por mais dois dias (Recuperação). Três métodos de extração para preparação de amostras protéicas para eletroforese bidimensional foram testados. O método que apresentou os melhores resultados no número de spots, qualidade e reprodutibilidade dos géis foi o método modificado de extração fenólica. Após a análise do proteoma dos tratamentos (controle, estresse e recuperação) para os dois genótipos, constatou-se a presença de vários spots exclusivos e com diferenças de expressão entre os genótipos sensível e tolerante. Foram detectados 480 spots para o genótipo sensível e 352 spots para o genótipo tolerante e um total de 80 spots foram identificados por espectrometria de assas. Foi possível observar que dentre as proteínas possivelmente envolvidas com o estresse hídrico 24% estavam presentes no genótipo tolerante, enquanto apenas 3% foram observadas no genótipo sensível. A análise dos spots identificados via espectrometria de massas demonstrou para a cana-de-açúcar, a presença de proteínas como Chaperonas, Ascorbato peroxidase, Superóxido dismutase, choque térmico, 14,3-3-like e Isoflavona reductase, proteínas que têm sido descritas por participar de mecanismos de defesa das plantas contra estresses bióticos e abióticos.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-01-29T12:18:30Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-03-22T10:23:30Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2018-03-22T10:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2017-07-11 / Lippia alba é uma planta vastamente utilizada pela medicina popular devido as suas características antimicrobianas, antiespasmódicas, anti-inflamatórias, analgésicas, digestivas, entre outras. Conhecida popularmente como “cidreira”, “erva cidreira” entre outros nomes populares, L. alba é amplamente utilizada no Brasil e na América do Sul. Possuindo grande variação genética, foram encontrados cinco citótipos de L. alba com 2n=30, 38, 45, 60 e 90 cromossomos. O estudo dessas variações cromossômicas levou a uma proposta de formação de um complexo autopoliploide a partir de cruzamentos unilaterais e bilaterais de citótipos por meio de gametas reduzidos e/ou não reduzidos. Avanços foram obtidos no que diz respeito ao conhecimento de L. alba e diversas abordagens, tais como, análise de dados cariotípicos, citogenéticos, citométricos e moleculares foram empregadas. Para contribuir no estudo da variação biológica da espécie, o presente trabalho teve como objetivo avaliar, de forma comparativa, o perfil proteômico dos níveis de ploidia descritos para a espécie (diploide, aneuploide, triploide, tetraploide, hexaploide). Para isso, foi realizada a extração de proteínas de folhas de representantes das ploidias citadas, com posterior separação por eletroforese bidimensional, análise de spots e identificação de proteínas por espectrometria de massas. Ao comparar o perfil proteômico do acesso diploide ao perfil dos demais níveis de ploidia, foi possível identificar diferenças de expressão entre os spots analisados. Essas diferenças mostraram-se tanto qualitativas, devido a variações de ausência e presença na expressão dos spots, quanto quantitativas, de acordo com a porcentagem de volume de cada spot. Além disso, foram identificadas 44 proteínas, sendo 27 relacionadas à fotossíntese, 12 relacionadas à energia e metabolismo, 3 chaperonas e 2 proteínas tubulinas de função estrutural. Para cada uma dessas proteínas identificadas, foi possível observar as semelhanças e divergências de expressão entre os níveis de ploidia estudados. As proteínas identificadas possuem papéis relevantes no metabolismo primário de Lippia alba. Os dados sugerem, de modo geral, que a alteração no tamanho do genoma não provocou alterações representativas no perfil proteômico observado, à exceção do acesso triploide que apresentou um perfil particular. / Lippia alba is a plant vastly utilized in popular medicine due to its antimicrobial, antispasmodic, anti-inflammatory, analgesic and pro-digestive features. It is commonly known in Brazilian Portuguese as “cidreira”, “erva cidreira” along with other popular names and “bushy matgrass” in English. It is widely used in Brazil and South America. The species display large genetic variation, five cytotypes have been described with 2n=30, 38, 45, 60 and 90. The study of these chromosomal variations has led to proposing the formation of an autopolyploid complex derived from unilateral and bilateral crossings of cytotypes by reduced and/or non-reduced gametes. There have been advances concerning the knowledge on L. alba and on the formation of the polyploid complex. Various approaches have been employed, such as analysis of data generated from karyotyping, cytogenetics, cytometry and molecular genetics. The present work aims at contributing to elucidate the possibility of biological variations by assessing, comparatively, the proteomic profile of the ploidy levels described for the species (diploid, aneuploid, triploid, tetraploid and hexaploid). Protein extraction from leaves has been carried out with posterior dimensional electrophoretic separation. Later, we performed spot analysis and protein identification by mass spectrometry. When comparing the proteomic profile from the diploid sample to the remaining ploidy levels, expression differences were observed between the spots analyzed. The differences showed to be either qualitative, due to the variation in presence of spots, and quantitative, as observed in the volume percentage of each spot. In addition, we identified 44 proteins, being 27 related to photosynthesis, 12 to metabolism and energy, 3 chaperones, and 2 tubulins with structural function. For each of the identified proteins, it was possible to observe similarities and divergences concerning expression amidst the ploidy levels studied. The proteins identified possess relevant roles in primary metabolism of L. alba. Our data suggest that alterations in genome size do not provoke representative alterations on the proteomic profile, with the exception of the triploid sample, which displayed a particular profile.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / InformaÃÃes sobre aspectos fisiolÃgicos reprodutivos da raÃa Morada Nova, especialmente para os machos, ainda sÃo escassas e a falta destes conhecimentos torna-se um empecilho para aplicaÃÃo de melhores estratÃgias de manejo e biotÃcnicas reprodutivas. Baseado nisto, este estudo teve como objetivos descrever as caracterÃsticas biomÃtricas do aparelho reprodutivo em ovinos Morada Nova e os aspectos quanti-qualitativos da espermatogÃnese e correlacionÃ-los, bem como caracterizar os mapas eletroforÃticos das proteÃnas do plasma seminal destes animais. Foi realizada coleta de sÃmen, por meio de eletroejaculaÃÃo em 15 ovinos da raÃa Morada Nova, dos quais apenas 12 responderam. As amostras de sÃmen foram centrifugadas para separaÃÃo do plasma seminal, onde este foi utilizado na determinaÃÃo da concentraÃÃo protÃica total e do perfil protÃico atravÃs de eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Os dados biomÃtricos foram obtidos a partir dos testÃculos, epidÃdimos e das glÃndulas sexuais acessÃrias do grupo de 15 animais que foram abatidos com idade mÃdia de 42 semanas e peso vivo mÃdio de 28 kg. Imediatamente antes do abate, foi tomada a medida de circunferÃncia escrotal (CE) de cada animal. Em seguida, os testÃculos, epidÃdimos e glÃndulas sexuais acessÃrias foram pesados e mensurados individualmente (direito e esquerdo). Amostras dos testÃculos foram fixadas em fluido de Bouin para avaliaÃÃo dos tÃbulos seminÃferos. O parÃnquima testicular foi avaliado quanto ao diÃmetro (DT), volume (VT) e comprimento dos tÃbulos seminÃferos, altura do epitÃlio germinativo (AE) e populaÃÃo de cÃlulas de Sertoli e germinativas. A proporÃÃo do parÃnquima testicular ocupado por tÃbulos seminÃferos foi o equivalente a 84,8  0,1%. O rendimento geral da espermatogÃnese foi de 59,8  3,73 cÃlulas. Cada cÃlula de Sertoli (CS) foi capaz de sustentar 7,7  0,51 espermÃtides arredondadas. Foram realizadas anÃlises de correlaÃÃo de Pearson (p < 0.05) entre as caracterÃsticas estudadas e as variÃveis foram descritas na forma de mÃdias e respectivos erros-padrÃo atravÃs do programa estatÃstico StatView, 5.0 (SAS, 2003). Nenhuma diferenÃa foi detectada entre os valores direito e esquerdo para nenhum dos parÃmetros testiculares, epididimÃrios ou das glÃndulas sexuais acessÃrias. CorrelaÃÃes significativas foram verificadas entre peso e as demais medidas testiculares: comprimento (CT), diÃmetro (DT) e volume do parÃnquima (VPar) e outras medidas do aparelho reprodutor como peso (PEp) e comprimento total (CEp) do epidÃdimo e comprimento do corpo do epidÃdimo (CCorpEp). O peso e diÃmetro testicular, mostraram-se indicadores da funÃÃo reprodutiva do carneiro estando correlacionado com todas as variÃveis histolÃgicas descritas. Com relaÃÃo à anÃlise eletroforÃtica bidimensional, um total de 103 spots foram identificados, estando 45 destes presentes em todos os gÃis, os spots presente indicam a presenÃa de proteÃnas importantes do plasma seminal. De acordo com os resultados obtidos, as medidas das gÃnadas apresentaram correlaÃÃes com as demais estruturas do trato reprodutivo e atividade espermatogÃnica, e os mapas eletroforÃticos do fluido seminal mostraram-se semelhantes aos de ovinos Santa InÃs adultos. / Information on the reproductive physiological aspects about Morada Nova breed, especially for males, are still few and the lack of knowledge about that becomes a hindrance to implementation best management strategies and reproductive biotechnologies, based on this, this study aimed to describe the biometric characteristics of the reproductive tract in Morada Nova sheep as well as quantitative and qualitative aspects of spermato genesis and correlate them, and to characterize the electrophoretic maps of the seminal plasma of these animals. Semen was collected by electroejaculation in 15 male sheep of the Morada Nova breed, of which only 12 responded. The samples were centrifuged, for separation of seminal plasma , where it was used to determine of total protein concentration and protein profile by denaturing electrophoresis in polyacrylamide gel (SDS - PAGE). Biometric data were obtained from the testicles, epididymis and accessory s ex glands of the group of 15 animals that were slaughtered with an average age of 42 weeks and average weight of 28 kg. Immediately before slaughter, was taken to measure scrotal circumference (SC) of each animal . Then , the testicles, epididymis and access ory sex glands were weighed and measured individually (left and right). Testicles samples were fixed in Bouin's fluid for evaluation of seminiferous tubules. The testicular parenchyma was evaluated for diameter (TD), volume (VT) and length of seminiferous tubules, germinal epithelium height (EA) and a population of Sertoli cells and germinal cells. The proportion of testicular parenchyma occupied by seminiferous tubules was equivalent to 84.8  0.1%. The overall yield of spermatogenesis was 59.8  3.73 cell s. Each Sertoli cell (SC) was able to sustain 7.7  0.51 round spermatids. Were realized analyses using Pearson correlation (p <0.05) between the studied characteristics and the variables were described as means and their respective standard errors using t he statistical program Statview, 5.0 (SAS, 2003). No difference was detected between the left and right values for any of the testicular parameters, epididymal and accessory sex glands. Significant correlations were found between weight and other measures testicle: length (TL), diameter (TD) and volume of parenchyma (VPAR) and other measures of reproductive tract as weight (PEP) and total length of the epididymis (TLE) and of body of the epididymis (LBEp). The testicular weight and diameter, were indicators of the reproductive function of the ram was correlated with all histologic described. For electrophoresis analysis, a total of 103 spots were identified, 45 these being present in all gels, and these spots presents in gel indicate the presence of importan t proteins in the seminal plasma. According to the results, measures of gonads showed correlations with the other structures of the reproductive tract and spermatogenic activity, and electrophoretic maps of seminal fluid were similar to Santa InÃs sheep ad ults.

O saco vitelino desempenha um importante papel no desenvolvimento embrionário de todos os mamíferos. Sua função está sendo estudada, demonstrando ser um dos lugares iniciais da hematopoiese. No período em que a placenta verdadeira ainda não esta formada, durante o desenvolvimento embrionário, o saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião, constituindo um sitio de transferência e síntese de proteínas. As proteínas são moléculas que governam praticamente todas as funções celulares e são do ponto de vista químico as moléculas biológicas estruturalmente mais complexas. A proteômica é o estudo em grande escala de proteínas de uma amostra biológica complexa. O objetivo deste trabalho foi realizar a analise estrutural e bioquímica inicial das proteínas presentes no saco vitelino de embriões bovinos por eletroforese bidimensional 2D-PAGE. A partir dos géis obtidos em 2D-PAGE as amostras de proteínas contidas no saco vitelino de 37 dias de gestação apresentaram cerca de 1230 proteínas, e os géis das amostras de 23 dias de gestação apresentaram cerca de 970 proteínas. O saco vitelino de 23 dias apresentou proteínas essenciais diferencialmente expressas nos estágios de desenvolvimento, como Hemogen, proteína expressa neste estagio, responsável pelo controle da proliferação e diferenciação de células hematopoiéticas; a proteína Glicoproteína-N-acetilgalactosamina 3-beta-galactosiltransferase-1, envolvida nos processos de angiogênese, trombopoiese e no desenvolvimento da homeostase nos rins; a proteína fator de transcrição Corion-especifico (GCMa) fator de transcrição necessário para o desenvolvimento da placenta. Enqueanto que o saco vitelino de 37 dias apresentou proteinas essenciais deste estágio como a apolipoproteína E (APOE) que medeia à ligação, inter-sinalização e catabolismo das partículas de lipoproteína, podendo servir como uma ligação para o receptor de LDL (apo B/E) e para receptores específicos de apo-E dos tecidos hepáticos durante a embriogênese. Estas proteinas serão de vital importância para o desenvolvimento do embrião até a formação da placenta. / The yolk sac plays an important role in embryonic development of all mammals. Its function is being studied, proving to be one of the initials of haematopoiesis. In the period when the placenta is not real yet formed during embryonic development, the yolk sac is the main source of nutrition of the embryo, providing a place for the transfer and synthesis of proteins. Proteins are molecules that govern all cellular functions and are from a chemical structurally the most complex biological molecules. The proteomics is the large-scale study of proteins in a complex biological sample. The aim of this work was make the analisys of present proteins in the yolk sac of bovine embryos by 2D-PAGE two-dimensional electrophoresis. The gels obtained from 2D-PAGE of protein samples contained in the yolk sac of 37 days of pregnancy had about 1230 proteins, and gels of samples from 23 days of pregnancy had about 970 proteins. The yolk sac of 23 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development, as Hemogen, protein expressed in stage, responsible for controlling the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, the protein acetylgalactosamine glycoprotein-N-3-beta-galactosyltransferase-1, involved in the process of angiogenesis, trombopoiese homeostasis and development of the kidney, the protein factor chorion-specific transcription (GCMa) transcription factor necessary for the development of the placenta. The yolk sac of 37 days showed essential proteins differentially expressed in stages of development , as apolipoprotein E (APOE), which mediates the binding, intersignaling and catabolism of lipoprotein particles, and can serve as a link to the receptor to LDL (apo B/E) and specific receptors for apo E in the liver tissue embryogenesisThese proteins are of vital importance to the development of the embryo until the formation of the placenta.