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京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(農学) / 甲第23235号 / 農博第2442号 / 新制||農||1086(附属図書館) / 学位論文||R3||N5325(農学部図書室) / 京都大学大学院農学研究科地域環境科学専攻 / (主査)教授 日本 典秀, 教授 田中 千尋, 准教授 刑部 正博 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Agricultural Science / Kyoto University / DFAM

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos são tóxicos e/ou genotóxicos para diversos organismos marinhos e a toxicidade de muitos deles aumenta consideravelmente quando expostos à radiação ultravioleta artificial ou natural. O presente estudo visou avaliar a fototoxicidade do antraceno sobre a mortalidade e o dano ao DNA, segundo o ensaio cometa, de juvenis de pampos da espécie Trachinotus carolinus. Os peixes foram previamente expostos ao antraceno por 24 horas no escuro nas concentrações de 8, 16 e 32µg/L. e então transferidos para a água limpa e expostos à luz de lâmpadas fluorescentes ou à radiação ultravioleta B artificial (RUVB-35µW/cm2). Grupos controle (água e solvente) foram submetidos às mesmas condições experimentais. As exposições na ausência da radiação ultravioleta foram realizadas por períodos cumulativos de 10, 20 e 30h (5h/dia). Para as exposições à RUVB foram utilizados períodos desde 2 até 10h. Na ausência de radiação ultravioleta o antraceno não revelou ser tóxico, mas sua genotoxicidade, medida como danos ao DNA, apresenta resposta dose-dependente. A RUVB é letal para pampos. A exposição ao antraceno seguida de 2h de incidência de RUVB acelera a morte dos peixes em relação à mortalidade dos animais não contaminados. Este resultado revelou a fototoxicidade do antraceno para a espécie. O ensaio cometa pode ser considerado uma ferramenta sensível e útil para avaliar o efeito genotóxico de HPAs em peixes marinhos costeiros. / Polycyclic aromatic hydrocarbons are toxic and/or genotoxic to a variety of marine organisms and under solar or artificial ultraviolet radiation acute toxicity of many of them can be substantially enhanced. The aim of the present study was to examine the effect of the phototoxicity of anthracene on the mortality and damage to the DNA, assessed by the comet assay, of juveniles of Florida pompanos, Trachinotus carolinus. The fish were pre-contaminated in the dark by three concentrations of 8, 16 and 32 µg/L of anthracene for 24 hours then transferred to clean seawater to be exposed to fluorescent light or to artificial ultraviolet B radiation (UVB - 35µW/cm2). Control groups (water and ethanol) were carried out in the same experimental conditions. The exposures to fluorescent light were carried out in cumulative periods of 10, 20 and 30 hours (5h/day). The exposures to UVB were conducted during periods of 2 to 10 hours. In the absence of ultraviolet radiation, the anthracene did not prove to be toxic, but its genotoxicity, evaluated as damage caused to the DNA, proved to be dose dependent. The UVB is lethal to Florida pompanos. The exposure of fish to the anthracene following UVB exposure for 2 hours resulted in earlier and higher mortality when compared to uncontaminated fish. These results indicated that anthracene is phototoxic to the pompanos. The comet assay can be considered a sensitive tool to evaluate the genotoxic effect of PAHs in coastal marine fish.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-27T14:35:42Z No. of bitstreams: 1 MANUELA BASTOS PIEGAS.pdf: 958703 bytes, checksum: c8f6ec5dce6bda264ca299a05edc76bf (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-27T14:35:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MANUELA BASTOS PIEGAS.pdf: 958703 bytes, checksum: c8f6ec5dce6bda264ca299a05edc76bf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T14:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MANUELA BASTOS PIEGAS.pdf: 958703 bytes, checksum: c8f6ec5dce6bda264ca299a05edc76bf (MD5) Previous issue date: 2017-07-14 / A radiação ultravioleta (UV) B no tecido epitelial estimula a síntese e liberação de mediadores pró-inflamatórios, induzindo à infiltração e ativação de neutrófilos e outras células fagocíticas. Assim, processos inflamatórios causados pela radiação UVB podem ser prejudiciais sobre diversas células do organismo, causando desde fotoenvelhecimento até imunossupressão. O triptofano (TRIP) é um aminoácido essencial, utilizado em inúmeros processos fisiológicos e metabolizado por duas vias principais, a serotoninérgica e a das quinureninas. Sendo esta última relacionada a enzima indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) que poderá ser induzida por processos inflamatórios aumentando o consumo de TRIP e formando metabólitos oxidativos, como o ácido quinolínico que está relacionado no processo de imunotolerância. Devido ao envolvimento da enzima IDO e seu possível alvo terapêutico, o objetivo desse trabalho foi avaliar a produção de metabólitos da via das quinureninas (VQs) em lesões auriculares de camundongos, provocadas pela exposição por 24 horas à radiação UVB frente ao inibidor da enzima IDO 1-metil triptofano (1-MT). Os experimentos foram realizados com 30 animais da linhagem C57B/6J. Após serem divididos em cinco grupos de seis animais cada, denominados: a) controle, sem exposição à radiação UVB; b) veículo, exposto a radiação UVB tratado com salina (10μL); c) expostos a radiação UVB e tratados com inibidor da enzima1-MT (0,5 μg/μl); d) expostos a radiação UVB e tratados com inibidor da enzima 1-MT (1,0 μg/μl) e grupo e) expostos a radiação UVB e tratados com inibidor da enzima 1-MT (2,0μg/μl). O tratamento com 1-MT e o veículo foram realizados topicamente antes da exposição à radiação UVB, e 24h depois da exposição, os camundongos foram eutanasiados e as orelhas totalmente extraídas para realização das dosagens específicas. O presente estudo demonstrou que o tratamento com 1-MT frente à radiação UVB em lesões auriculares de camundongos, foi eficaz em atenuar as seguintes alterações, a espessura e inflamação das orelhas irradiadas, o estresse oxidativo causado pela radiação UVB nas 7 orelhas dos camundongos. Diminuiu os níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina 1 beta (IL-1β), interleucina 6 (IL-6), interferon gama (INF-γ), interleucina 13 (IL-13), interleucina 17 (IL-17), interleucina 10 (IL-10) e fator nuclear kappa B (NF-κB) reduzindo os níveis das citocinas inflamatórias. Aumentou os níveis de TRIP no local, diminuindo assim seus metabólitos como quinurenina (QUI), ácido quinurênico (AQUI), 3-Hidroxiquinurenina (3-HQ), ácido 3-hidroxiantranílico (3-AA), ácido antranílico (AA) e ácido quinulínico (AQ). Aumento das atividades das enzimas envolvidas na VQs, entre elas a IDO, quinurenina 3-monoxigenase (QMO), quinurenina aminotransferase (QAT) e quinureninase (QUINU). Em conclusão, esses resultados demonstram que a inibição da enzima IDO causou atenuação da inflamação, do estresse oxidativo e dos metabólitos da VQs. Além disso, sugerem que a inibição dessa enzima, seja com produtos sintéticos ou naturais podem fornecer uma nova abordagem terapêutica para o tratamento e prevenção de lesões causadas pela radiação UVB na pele. / Ultraviolet (UV) B radiation in the epithelial tissue stimulates the synthesis and release of pro-inflammatory mediators, inducing the infiltration and activation of neutrophils and other phagocytic cells. Thus, inflammatory processes caused by UVB radiation can be harmful to various cells in the body, from photoaging to immonussuppression. Tryptophan (TRYP) is an essential amino acid, used in numerous physiological processes and metabolized by two main pathways, serotoninergic and kynurenines. The latter is related to the indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) enzyme that can be induced by inflammatory processes increasing the consumption of TRYP and forming oxidative metabolites, such as the quinolinic acid that is related in the process of immunotolerance. Due to the involvement of the IDO enzyme and its possible therapeutic target, the objective of this work was to evaluate the production of metabolites of the kinurenins pathway (KPs) in mice ear lesions caused by 24-hour UVB exposure to the IDO enzyme inhibitor 1-methyl tryptophan (1-MT). The experiments were performed with 30 animals of the C57B / 6J lineage. After being divided into five groups of six animals called: a) control, without exposure to UVB radiation; B) vehicle, exposed to UVB radiation treated with saline (10μL); C) exposed to UVB radiation and treated with 1-MT enzyme inhibitor (0,5 μg/μl); D) exposed to UVB radiation and treated with 1-MT enzyme inhibitor (1,0 μg/μl) and group e) exposed to UVB radiation and treated with 1-MT enzyme inhibitor (2,0 μg/μl). Treatment with 1-MT and the vehicle were performed topically prior to exposure to UVB radiation, and 24 hours after exposure, the mice were euthanized and the ears fully extracted for specific dosages. The present study demonstrated that 1-MT 9 treatment against UVB radiation in mouse ear lesions was effective in attenuating the following alterations, the thickness and inflammation of the irradiated ears, the oxidative stress caused by UVB radiation in the ears of the mice. It decreased levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 1 beta (IL-1β), interleukin 6 (IL-6), interferon gamma (INF-γ), interleukin 13 (IL-13), interleukin 17 (IL-17), interleukin-10 (IL-10) and nuclear factor kappa B (NF-κB), reducing levels of inflammatory cytokines. Increased TRIP levels at the site, thereby decreasing its metabolites such as kynurenine (KYN), kynurenic acid (KYNA), 3-Hydroxyquinurenine (3-HK), 3-hydroxyanthranilic acid (3-HAA), anthranilic acid (AA) e quinolinic acid (QA). Increased activities of the enzymes involved in KPs, including IDO, kynurenine 3-monoxygenase (KMO), kynurenine aminotransferase (KAT) and kynureninase (KYNU). In conclusion, these results demonstrate that inhibition of the IDO enzyme caused attenuation of inflammation, oxidative stress and metabolites of KPs. In addition, they suggest that the inhibition of this enzyme, either with synthetic or natural products may provide a new therapeutic approach for the treatment and prevention of injuries caused by UVB radiation on the skin.

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos são tóxicos e/ou genotóxicos para diversos organismos marinhos e a toxicidade de muitos deles aumenta consideravelmente quando expostos à radiação ultravioleta artificial ou natural. O presente estudo visou avaliar a fototoxicidade do antraceno sobre a mortalidade e o dano ao DNA, segundo o ensaio cometa, de juvenis de pampos da espécie Trachinotus carolinus. Os peixes foram previamente expostos ao antraceno por 24 horas no escuro nas concentrações de 8, 16 e 32µg/L. e então transferidos para a água limpa e expostos à luz de lâmpadas fluorescentes ou à radiação ultravioleta B artificial (RUVB-35µW/cm2). Grupos controle (água e solvente) foram submetidos às mesmas condições experimentais. As exposições na ausência da radiação ultravioleta foram realizadas por períodos cumulativos de 10, 20 e 30h (5h/dia). Para as exposições à RUVB foram utilizados períodos desde 2 até 10h. Na ausência de radiação ultravioleta o antraceno não revelou ser tóxico, mas sua genotoxicidade, medida como danos ao DNA, apresenta resposta dose-dependente. A RUVB é letal para pampos. A exposição ao antraceno seguida de 2h de incidência de RUVB acelera a morte dos peixes em relação à mortalidade dos animais não contaminados. Este resultado revelou a fototoxicidade do antraceno para a espécie. O ensaio cometa pode ser considerado uma ferramenta sensível e útil para avaliar o efeito genotóxico de HPAs em peixes marinhos costeiros. / Polycyclic aromatic hydrocarbons are toxic and/or genotoxic to a variety of marine organisms and under solar or artificial ultraviolet radiation acute toxicity of many of them can be substantially enhanced. The aim of the present study was to examine the effect of the phototoxicity of anthracene on the mortality and damage to the DNA, assessed by the comet assay, of juveniles of Florida pompanos, Trachinotus carolinus. The fish were pre-contaminated in the dark by three concentrations of 8, 16 and 32 µg/L of anthracene for 24 hours then transferred to clean seawater to be exposed to fluorescent light or to artificial ultraviolet B radiation (UVB - 35µW/cm2). Control groups (water and ethanol) were carried out in the same experimental conditions. The exposures to fluorescent light were carried out in cumulative periods of 10, 20 and 30 hours (5h/day). The exposures to UVB were conducted during periods of 2 to 10 hours. In the absence of ultraviolet radiation, the anthracene did not prove to be toxic, but its genotoxicity, evaluated as damage caused to the DNA, proved to be dose dependent. The UVB is lethal to Florida pompanos. The exposure of fish to the anthracene following UVB exposure for 2 hours resulted in earlier and higher mortality when compared to uncontaminated fish. These results indicated that anthracene is phototoxic to the pompanos. The comet assay can be considered a sensitive tool to evaluate the genotoxic effect of PAHs in coastal marine fish.

O fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea (Ascomycota: Hypocreales: Cordycipitaceae) é encontrado comumente nos solos e infectando diversas espécies de artrópodes. Bioprodutos à base de I. fumosorosea são utilizados principalmente na América do Norte e Europa para o controle de mosca-branca, pulgões e trips. Entretanto, no Brasil ainda não existe nenhum produto registrado à base deste patógeno. O objetivo deste trabalho foi estabelecer parâmetros para a seleção de isolados promissores para o desenvolvimento de um biopesticida à base de I. fumosorosea. Os isolados foram avaliados em três etapas sequênciais: esporulação em meio de cultura artificial, fermentação em grão de arroz e tolerância à radiação ultravioleta B e temperatura alta. A partir de uma coleção de 172 isolados de I. fumosorosea provenientes do solo e insetos de diferentes biomas do Brasil, foram escolhidos 72 isolados por apresentar visualmente maior esporulação das colônias em SDYA (Sabouraud-dextrose-extrato de levedura-ágar). Posteriomente, esses isolados foram utilizados para a fermentação sólida em garrafas de vidro contendo 50 gramas de arroz parboilizado. Destes, 14 isolados foram avaliados quanto à produção de conídios em sacos de polipropileno contendo arroz parboilizado e quanto aos efeitos da exposição à radiação ultravioleta B (UV-B) por 0, 2, 4, 6 e 8 horas e temperatura de 45°C por 0, 30, 60 e 90 minutos. Os isolados ESALQ-4556 e ESALQ-4778 apresentaram os maiores rendimentos de conídios em garrafas de vidro (4,65 e 4,40 ×109 conídios/g arroz seco) e em sacos de polipropileno (3,96 e 3,25 ×109 conídios/g arroz seco). Os isolados ESALQ-1296 e ESALQ- 3415 apresentaram maior tolerância aos efeitos da radiação ultravioleta-B e aquecimento. Para a elaboração de uma formulação do tipo dispersão oleosa foi ajustado o ponto de secagem dos conídios para incrementar o tempo de prateleira e avaliadas diferentes misturas do adjuvante KBRAdj e óleos vegetais. Foram utilizados conídios do isolado ESALQ-1296 produzidos em arroz com atividade de água (aw) de 0,527 e conídios secos com aw= 0,410; 0,248 e 0,182 adicionados ao adjuvante KBRAdj puro. A sobrevivência dos conídios mais secos foi maior do que de conídios úmidos. O adjuvante promoveu proteção aos conídios umidos, apresentando viabilidades significativamente maiores do que conídios umidos sem adjuvante em todos os períodos de armazenamento. Conídios com aw= 0,182 sem adjuvante apresentaram as maiores viabilidades (70,3%) após 60 dias de armazenamento. Para desenvolver uma formulação do tipo dispersão oleosa foram testadas misturas de 25% de óleo de soja ou canola + 75% do adjuvante KBRAdj com ou sem sílica gel, em conídios úmidos (aw=0,546 e UR= 13,18%) ou secos (aw=0,175 e UR= 4,42%). A adição de 25% de óleo vegetal ou sílica gel na formulação não contribuiu para o incremento do período de prateleira da formulação. A viabilidade dos conídios nas diferentes formulações após 90 dias de armazenamento variou de 42,3 ± 0,03% a 56,9 ± 0,01%. Estudos futuros deverão ser conduzidos para incrementar o período de prateleira e avaliar a virulência destas formulações para o controle de pragas, especialmente mosca-branca e psilídeo-dos-citros. / The entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea (Ascomycota: Hypocreales: Cordycipitaceae) is commonly found in soil and infecting several species of arthropods. I. fumosorosea based bioproducts are mainly used in North America and Europe for the control of whitefly, aphids and thrips. However, in Brazil there is still no registered product based on this pathogen. The objective of this study was to establish parameters for the selection of promising isolates for developing I. fumosorosea based biopesticides. The isolates were evaluated in three sequential steps: sporulation on artificial medium, sporulation on rice grains, tolerance to ultraviolet-B radiation and high temperature. From a collection of 172 I. fumosorosea isolates from soil and insects of different Brazilian biomes, 72 isolates were chosen based on visual observations of higher sporulation of colonies in SDYA (Sabouraud-dextrose- yeast extract-agar). Later, these isolates were used for the solid fermentation in glass bottles containing 50 g of parboiled rice. Of these, 14 strains were evaluated for conidia production in polypropylene bags containing parboiled rice and the effects of exposure to ultraviolet-B (UV-B) for 0, 2, 4, 6 and 8 hours and 45°C for 0, 30, 60 and 90 minutes. The ESALQ-4556 and ESALQ-4778 isolates showed the highest spore yields in glass bottles (4.65 and 4.40 × 109 spores/g dry rice) and in polypropylene bags (3.96 and 3.25 × 109 spores/g dry rice). The ESALQ-1296 and ESALQ-3415 isolates showed a higher tolerance to the UV-B radiation and heating. For the development of oil dispersion formulations, the drying point of the conidia was adjusted to increase the shelf-life in different mixtures of the KBRAdj adjuvant and vegetable oils. Conidia produced on rice from the isolate ESALQ-1296 without drying with water activity (aw) = 0.527 and dried conidia with aw of 0.410; 0.248 and 0.182 added to the pure adjuvant. Survival of the dryer conidia was greater than humid conidia. The adjuvant provided protection to humid conidia, with significantly higher viability than conidia without drying and without adjuvant at all storage periods. Conidia with aw = 0.182 without adjuvant showed the highest viability (70.3%) after 60 days of storage. To develop an oil dispersion type formulation it were tested mixtures with 25% of soy or canola oil + 75% of KBRAdj adjuvant with or without silica gel using humid (aw = 0.546 and RH = 13.18%) or dried conidia (aw = 0.175 and RH = 4.42%). Addition of 25% of vegetable oil or silica gel in the formulation did not contribute to the increase of the shelf-life. The conidia viability in the different formulations after 90 days of storage ranged from 42.3% ± 0.03% to 56.9 ± 0.01. Future studies must be conducted to increase the shelf- life and to assess the virulence of these formulations for pest control, particularly whitefly and the citrus psyllid.

Leaves of Rumex obtusifolius L. and R. patientia L.were exposed to combinations of mild water stress and enhanced ultraviolet-B irradiation during their ontogeny. Two UV-B treatments (enhanced UV-B and control) and three water stress treatments (-0.0 MPa, -0.2 MPa and -0.4 MPa rooting medium matric potentials) were employed. The impact of the stress interaction was assessed on the basis of changes in leaf area, average adaxial epidermal cell size, and total number of adaxial epidermal cells per leaf. Although the level of UV-B irradiation applied was insufficient to significantly alter leaf growth at any given water stress, UV-B did interact with water stress to alter the pattern o= plant response to water stress. The interaction was only apparent when the water stress was greater than -0.2 MPa root matric potential. For both species UV-B irradiation exacerbated the depression of leaf growth due to -0.4 MPa water stress. For R. obtusifolius the basis of the reduction in leaf growth was likely a reduction in the rate of cell division during the early phase of leaf growth. For R. patientia the effect of the interaction on cell division was less clear. Cell expansion was not directly affected by UV-B irradiation in either species, although the reduction in cell size with increasing water stress was apparent. In terrestrial ecosystems, mild water stress is a common occurrence and with predicted anthropogenic modifications of the atmospheric ozone layer, UV-B radiation reaching the earth's surface can be expected to increase. The effect or. higher plants of the stress interaction may thus be of considerable significance under natural conditions.

O fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea (Ascomycota: Hypocreales: Cordycipitaceae) é encontrado comumente nos solos e infectando diversas espécies de artrópodes. Bioprodutos à base de I. fumosorosea são utilizados principalmente na América do Norte e Europa para o controle de mosca-branca, pulgões e trips. Entretanto, no Brasil ainda não existe nenhum produto registrado à base deste patógeno. O objetivo deste trabalho foi estabelecer parâmetros para a seleção de isolados promissores para o desenvolvimento de um biopesticida à base de I. fumosorosea. Os isolados foram avaliados em três etapas sequênciais: esporulação em meio de cultura artificial, fermentação em grão de arroz e tolerância à radiação ultravioleta B e temperatura alta. A partir de uma coleção de 172 isolados de I. fumosorosea provenientes do solo e insetos de diferentes biomas do Brasil, foram escolhidos 72 isolados por apresentar visualmente maior esporulação das colônias em SDYA (Sabouraud-dextrose-extrato de levedura-ágar). Posteriomente, esses isolados foram utilizados para a fermentação sólida em garrafas de vidro contendo 50 gramas de arroz parboilizado. Destes, 14 isolados foram avaliados quanto à produção de conídios em sacos de polipropileno contendo arroz parboilizado e quanto aos efeitos da exposição à radiação ultravioleta B (UV-B) por 0, 2, 4, 6 e 8 horas e temperatura de 45°C por 0, 30, 60 e 90 minutos. Os isolados ESALQ-4556 e ESALQ-4778 apresentaram os maiores rendimentos de conídios em garrafas de vidro (4,65 e 4,40 ×109 conídios/g arroz seco) e em sacos de polipropileno (3,96 e 3,25 ×109 conídios/g arroz seco). Os isolados ESALQ-1296 e ESALQ- 3415 apresentaram maior tolerância aos efeitos da radiação ultravioleta-B e aquecimento. Para a elaboração de uma formulação do tipo dispersão oleosa foi ajustado o ponto de secagem dos conídios para incrementar o tempo de prateleira e avaliadas diferentes misturas do adjuvante KBRAdj e óleos vegetais. Foram utilizados conídios do isolado ESALQ-1296 produzidos em arroz com atividade de água (aw) de 0,527 e conídios secos com aw= 0,410; 0,248 e 0,182 adicionados ao adjuvante KBRAdj puro. A sobrevivência dos conídios mais secos foi maior do que de conídios úmidos. O adjuvante promoveu proteção aos conídios umidos, apresentando viabilidades significativamente maiores do que conídios umidos sem adjuvante em todos os períodos de armazenamento. Conídios com aw= 0,182 sem adjuvante apresentaram as maiores viabilidades (70,3%) após 60 dias de armazenamento. Para desenvolver uma formulação do tipo dispersão oleosa foram testadas misturas de 25% de óleo de soja ou canola + 75% do adjuvante KBRAdj com ou sem sílica gel, em conídios úmidos (aw=0,546 e UR= 13,18%) ou secos (aw=0,175 e UR= 4,42%). A adição de 25% de óleo vegetal ou sílica gel na formulação não contribuiu para o incremento do período de prateleira da formulação. A viabilidade dos conídios nas diferentes formulações após 90 dias de armazenamento variou de 42,3 ± 0,03% a 56,9 ± 0,01%. Estudos futuros deverão ser conduzidos para incrementar o período de prateleira e avaliar a virulência destas formulações para o controle de pragas, especialmente mosca-branca e psilídeo-dos-citros. / The entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea (Ascomycota: Hypocreales: Cordycipitaceae) is commonly found in soil and infecting several species of arthropods. I. fumosorosea based bioproducts are mainly used in North America and Europe for the control of whitefly, aphids and thrips. However, in Brazil there is still no registered product based on this pathogen. The objective of this study was to establish parameters for the selection of promising isolates for developing I. fumosorosea based biopesticides. The isolates were evaluated in three sequential steps: sporulation on artificial medium, sporulation on rice grains, tolerance to ultraviolet-B radiation and high temperature. From a collection of 172 I. fumosorosea isolates from soil and insects of different Brazilian biomes, 72 isolates were chosen based on visual observations of higher sporulation of colonies in SDYA (Sabouraud-dextrose- yeast extract-agar). Later, these isolates were used for the solid fermentation in glass bottles containing 50 g of parboiled rice. Of these, 14 strains were evaluated for conidia production in polypropylene bags containing parboiled rice and the effects of exposure to ultraviolet-B (UV-B) for 0, 2, 4, 6 and 8 hours and 45°C for 0, 30, 60 and 90 minutes. The ESALQ-4556 and ESALQ-4778 isolates showed the highest spore yields in glass bottles (4.65 and 4.40 × 109 spores/g dry rice) and in polypropylene bags (3.96 and 3.25 × 109 spores/g dry rice). The ESALQ-1296 and ESALQ-3415 isolates showed a higher tolerance to the UV-B radiation and heating. For the development of oil dispersion formulations, the drying point of the conidia was adjusted to increase the shelf-life in different mixtures of the KBRAdj adjuvant and vegetable oils. Conidia produced on rice from the isolate ESALQ-1296 without drying with water activity (aw) = 0.527 and dried conidia with aw of 0.410; 0.248 and 0.182 added to the pure adjuvant. Survival of the dryer conidia was greater than humid conidia. The adjuvant provided protection to humid conidia, with significantly higher viability than conidia without drying and without adjuvant at all storage periods. Conidia with aw = 0.182 without adjuvant showed the highest viability (70.3%) after 60 days of storage. To develop an oil dispersion type formulation it were tested mixtures with 25% of soy or canola oil + 75% of KBRAdj adjuvant with or without silica gel using humid (aw = 0.546 and RH = 13.18%) or dried conidia (aw = 0.175 and RH = 4.42%). Addition of 25% of vegetable oil or silica gel in the formulation did not contribute to the increase of the shelf-life. The conidia viability in the different formulations after 90 days of storage ranged from 42.3% ± 0.03% to 56.9 ± 0.01. Future studies must be conducted to increase the shelf- life and to assess the virulence of these formulations for pest control, particularly whitefly and the citrus psyllid.

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Damage to primary photosynthetic reactions caused by environmental stress can be assessed by measurement of chlorophyll fluorescence induction in intact leaves. This approach was applied in studies of ultraviolet-B photoinhibition of photosynthesis in Pisum sativum L. and Rumex patientia L. leaves. At ultraviolet-B dose rates insufficient to cause inhibition of net photosynthesis, changes in the magnitude of fluorescence transients did occur, which suggested direct effects on chloroplast pigments in Pisum and inhibition of photosynthetic electron transport between the photosystems in both species. Leaves of these two species subjected to a much higher dose rate had a significant reduction of net photosynthesis and changes in the magnitude of fluorescence transients that indicated partial loss of water-splitting capability and direct effects on chloroplast pigments. Ultraviolet radiation-induced changes of photosynthetic thylakoid membranes may be ultimately responsible for these disruptions of the primary photosynthetic reactions.