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Analyse interactomiques et fonctionnelles de la protéine NS2 du virus de l'hépatite C et d'hepacivirus non-humains / Interactomic and functional analyses of NS2 protein from hepatitis C virus and non-human hepacivirusesFritz, Matthieu 20 December 2017 (has links)
L’émergence récente de nouvelles thérapies antivirales efficaces est une avancée considérable pour lutter contre l'infection chronique par le virus de l'hépatite C (VHC). Cependant, un pic de carcinomes hépatocellulaires, représentant l'atteinte hépatique ultime liée à l'infection, est attendu dans la prochaine décennie. Approfondir les connaissances des différentes étapes du cycle viral et de l’interférence du VHC avec l'hépatocyte hôte permet de mieux comprendre la pathogénèse associée à ce virus. Les travaux présentés dans cette thèse ont eu pour objectif d'identifier le réseau de partenaires cellulaires et viraux de la protéine non-structurale NS2 du VHC et de mieux comprendre les mécanismes d'action et de régulation de cette protéine transmembranaire multi-fonctionnelle, qui est un acteur clé du clivage protéolytique de la polyprotéine virale et de la morphogénèse des virions. Dans une première partie, nous avons analysé comparativement les mécanismes moléculaires de l’activité enzymatique des protéines NS2 du VHC et de plusieurs hepacivirus non-humains, qui infectent des primates du Nouveau Monde (GBV-B) ou qui ont été récemment identifiés chez plusieurs autres espèces animales (NPHV, RHV, BHV et GHV). Des analyses phylogénétiques, des modèles structuraux tridimensionnels et des Études dans un contexte d'expression transitoire de précurseurs polypeptidiques viraux ou dans des modèles d'infection ont montré que l’activité des protéases NS2 de divers hepacivirus (1) s'exerce à la jonction NS2/NS3 sous la forme d'homodimères formant deux triades catalytiques composites ; (2) est régulée dans le contexte de la polyprotéine virale par quelques résidus de surface du domaine N-terminal de NS3 (NS3N) nécessaires à son activation ; (3) est efficace en l'absence complète de NS3N, suggérant un rôle négatif ou régulateur, plutôt qu'activateur de NS3N, contrairement au dogme en vigueur actuellement. Ces travaux soulignent l'importance fonctionnelle des mécanismes protéolytiques de NS2 conservés parmi les différents hepacivirus. Dans une deuxième partie, nous avons identifié un réseau de facteurs cellulaires et viraux interagissant avec NS2 au cours du cycle infectieux par un crible interactomique reposant sur la purification par affinité et l'analyse par spectrométrie de masse des complexes protéiques isolés de cellules hépatocytaires infectées, ainsi que par un test de complémentation enzymatique fonctionnelle. Par une approche d'ARN interférence, nous avons ensuite montré qu'un nombre limité de facteurs cellulaires interagissant avec NS2 sont impliqués dans la production et la sécrétion de particules virales infectieuses, incluant des protéines du complexe de la peptidase signal (SPCS) au sein du réticulum endoplasmique, des protéines chaperonnes (DNAJB11, HSPA5) et une protéine impliquée dans le transport intracellulaire (SURF4). Notamment, nos Études suggèrent que plusieurs membres du SPCS forment un complexe multi-protéique avec NS2, impliquant Également la glycoprotéine virale E2, qui jouerait un rôle dans une Étape précoce de l'assemblage ou lors de l’enveloppement de la particule virale. En conclusion, mes travaux de thèse ont permis d'identifier pour la première fois une série limitée de facteurs hépatocytaires interagissant spécifiquement avec la protéine NS2 du VHC au cours de l'infection et de déterminer parmi ceux-ci les facteurs essentiels la morphogenèse virale. Par ailleurs, nos résultats ont permis d’enrichir les connaissances naissantes des hepacivirus non-humains récemment identifiés et de montrer que ceux-ci partageaient avec le VHC des mécanismes clés mis en jeu au cours du cycle viral, ce qui contribue consolider leur intérêt comme modèles animaux de substitution. / The recent emergence of a panel of direct acting antivirals will certainly help combat chronic hepatitis C in the future. However, in the current context worldwide, a peak of hepatitis C virus (HCV)-induced hepatocellular carcinoma is expected in the next decade. Deepening our understanding of HCV life cycle and HCV interference with host cells may help monitor HCV-associated pathogenesis. The aim of my PhD work was to identify the network of host and viral interactors of HCV nonstructural protein 2 and to unravel the mechanisms of action and regulation of this multifunctional, transmembrane protein, which is key both for the viral polyprotein cleavage and virion morphogenesis.In the first part of the work, we comparatively characterized molecular mechanisms underlying the enzymatic activity of NS2 proteins from HCV and from various non-human hepaciviruses that infect small New World primates (GBV-B) or that were recently identified in the wild in several mammalian species (NPHV, RHV, BHV, GHV). A combination of phylogenetic analyses, tridimensional structural models, and studies relying on the transient expression of viral polypeptide precursors or on infection models showed that NS2 proteases of the various hepaciviruses (1) act as dimers with two composite active sites to ensure NS2/NS3 junction cleavage, (2) are regulated in the polyprotein backbone via a hydrophobic patch at the surface of NS3 N-terminal domain (NS3N) that is essential to activate NS2 protease, and (3) are efficient in the complete absence of NS3N, which is unprecedented and suggests that NS3N has rather a negative or regulating role on NS2 activity. These data underline the functional importance of NS2 proteolytic mechanisms that are conserved across hepaciviruses.In the second part, we identified a network of cellular factors and viral proteins that interact with NS2 in the course of HCV infection using an interactomic screen based on affinity purification and mass spectrometry analysis of protein complexes retrieved form HCV infected hepatoma cells, as well as a split-luciferase complementation assay. Next, using a gene silencing approach, we found that a limited set of NS2 interactors among these host factors were involved in HCV particle assembly and/or secretion. This includes members of the endoplasmic reticulum signal peptidase complex (SPCS), chaperone proteins (DNAJB11, HSPA5) and a factor involved in intracellular transport (SURF4). Notably, our data are in favor of the existence of a multiprotein complex involving NS2, several members of the SPCS, and the viral E2 glycoprotein, which likely plays a role in an early step of HCV particle assembly or during particle envelopment. Altogether, my PhD work allowed us to identify a limited set of hepatocyte factors interacting with HCV NS2 during infection and to pinpoint those that are essential for HCV morphogenesis. Additionally, our results contributed to the molecular characterization of the recently identified non-human hepaciviruses and revealed that these hepaciviruses share with HCV key mechanisms in the course of their infectious life cycles. This highlights the value of non-human hepaciviruses as surrogate animal models of HCV infection.
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Le rôle de CD81 et de ses protéines associées dans le mécanisme d'entrée du virus de l'hépatite CRocha Perugini, Vera 26 September 2008 (has links) (PDF)
Le virus de l'hépatite C (VHC) touche 2 à 3% de la population mondiale et la plupart des individus infectés développe une hépatite chronique qui est fortement associée au développement d'un cancer du foie. Bien que les mécanismes de régulation de l'entrée du VHC dans ses cellules cibles, les hépatocytes, soient encore très mal connus, plusieurs protéines de surface cellulaire ont été identifiées comme des facteurs nécessaires à l'entrée virale. Parmi ces protéines, la tétraspanine CD81 est essentielle à l'entrée du VHC. Les membres de la famille des tétraspanines ont la particularité de s'associer entre eux et avec d'autres protéines, appelées partenaires, pour former des complexes multimoléculaires dans des microdomaines appelés microdomaines enrichis en tétraspanines (TEM). Dans notre étude, nous avons analysé le rôle de CD81 et de ses protéines associées dans le mécanisme d'entrée du VHC. En effet, nous avons identifié un nouveau partenaire de CD81, EWI-2wint, qui inhibe l'infection par le VHC, et nous avons analysé le rôle de la fraction de CD81 associée aux TEM dans l'infection par le VHC.<br />Dans un premier temps, nous avons donc montré qu'EWI-2wint, un nouveau partenaire de CD81, est exprimé dans différentes lignées cellulaires mais pas dans les hépatocytes. L'expression ectopique d'EWI-2wint dans des Huh-7, une lignée de cellules hépatiques susceptibles à l'infection par le VHC, bloque l'entrée virale. Nous avons pu montrer que ce blocage se fait par une inhibition de l'interaction entre CD81 et les glycoprotéines d'enveloppe présentes à la surface des particules virales. Notre travail suggère ainsi que l'hépatotropisme du VHC ne serait pas lié uniquement à la présence de facteurs d'entrée spécifiques, mais également à l'absence du facteur inhibiteur EWI-2wint. Ce type de mécanisme de contrôle de l'entrée virale par un inhibiteur cellulaire n'avait jamais été décrit auparavant.<br />En parallèle, nous avons montré que l'entrée du VHC est directement corrélée au niveau d'expression de CD81 dans les cellules hépatocytaires. En utilisant des particules du VHC hautement infectieuses produites en culture cellulaire, nous avons isolé des clones cellulaires indépendants présentant des niveaux d'infection variables. Parmi ces clones, un clone résistant à l'infection avait perdu l'expression de CD81 (cellules Huh-7w7) et l'expression ectopique de la CD81 humaine (hCD81) permet de restaurer la permissivité de ces cellules. De manière intéressante, l'expression ectopique de la CD81 d'origine murine (mCD81) dans les cellules Huh-7w7 restaure également la permissivité au virus, suggérant que la mCD81 dans un contexte cellulaire humain est capable de mimer la hCD81 dans le mécanisme d'entrée du VHC et probablement dans les interactions avec les facteurs cellulaires. Nous avons donc utilisé ces cellules exprimant la mCD81 et des anticorps monoclonaux décrits précédemment, MT81/MT81w, pour analyser le rôle de CD81 associée aux TEM dans l'infection par le VHC. L'anticorps MT81w, qui reconnaît uniquement CD81 associée aux TEM, n'inhibait pas l'infection et la déplétion des cellules en cholestérol, qui inhibe l'infection, n'affectait pas les niveaux de CD81 associée aux TEM. De manière similaire, le traitement des cellules avec la sphingomiélinase, qui réduit l'infection, augmentait les niveaux de CD81 associée aux TEM. En résumé, nous avons montré que l'entrée du VHC dans ses cellules cibles est directement liée au niveau d'expression de CD81 et la sous-population de CD81 associée aux TEM ne participe pas aux étapes initiales du cycle viral du VHC.
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Des puces à protéines/peptides pour des applications en recherche fondamentale et cliniqueCherif, Boutheina 27 April 2006 (has links) (PDF)
Les biopuces sont des systèmes miniaturisés qui permettent des analyses en parallèle et à haut débit. Ainsi, les puces à protéines/peptides sont très utiles dans l'étude des interactions entre diverses molécules biologiques. Nous avons réalisé des puces à protéines et peptides en se basant sur la technologie des polymères conducteurs : la méthode consiste à immobiliser les molécules sondes (protéines ou peptides) sur des supports par électrocopolymérisation à partir d'un mélange de pyrrole et de pyrrole lié à la molécule sonde. Le support consiste en un prisme recouvert d'un film d'or permettant l'analyse des interactions protéine-protéine ou antigène-anticorps par imagerie de la résonance plasmonique de surface. Cette méthode optique, compatible avec des mesures en parallèle, permet une analyse directe, en temps réel et donne accès aux paramètres cinétiques des interactions. Ces puces, de réalisation facile, présentent une très bonne spécificité et une bonne sensibilité. Elles peuvent être régénérées un grand nombre de fois et sont compatibles avec l'analyse d'échantillons biologiques complexes tels que du sérum non dilué. Ces caractéristiques permettent un champ d'application très large, en recherche fondamentale ou clinique mais aussi en diagnostic.
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Evaluation phénotypique et fonctionnelle des populations de lymphocytes intrahépatiques au cours carcinome hépatocellulaireMuhammad, Ramzan 22 January 2009 (has links) (PDF)
Les cellules immunitaires infiltrant le foie (CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD56+, TCRγδ+, FoxP3+ et CD123+) sont plus nombreuses (p<0.05) dans les zones cirrhotiques comparés aux zones tumorales dans les 2 cas d'hépatocarcinomes (induits par l'hépatite C (HCC-HCV) ou par l'alcool (HCC-OH)). Les niveaux d'expressions tumoraux de CD8β dans le groupe HCC-HCV et CD8α et IFN-γ dans le groupe HCC-OH sont plus élevés (p<0.05) que ceux des zones cirrhotiques. Les comparaisons des cirrhoses cancéreuses montrent que les cellules CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, FoxP3+, CD123+ et TCRγδ+ (p=0.089) ainsi que les ratios CD3/CD20, FoxP3/CD4 sont plus élevés (p<0.05) dans la cirrhose HCV que dans celle OH. Les niveaux d'expression de l'IFN-γ, CD8α et de la perforine sont plus faibles (p<0.05) dans la cirrhose HCV que dans la cirrhose OH. De plus, le nombre de cellules CD8+ est corrélée avec celui de cellules FoxP3+ dans les nodules parenchymateux pour la cirrhose HCV alors qu'il l'est avec le niveau d'expression de l'IFN-γ et de la perforine pour la cirrhose OH. Les résultats concernant les HCC-HCV et les cirrhoses C sans cancer montrent que les cellules CD3+, CD4+, CD20+ et CD8+ sont plus nombreuses dans la cirrhose cancéreuse (p<0.05) mais que le nombre de cellules CD56+ (p=0.067) et le rapport CD3/CD20 (p<0.05) est plus bas dans la cirrhose cancéreuse. Le TGF-β et l'IFN-γ sont corrélés dans la cirrhose C. Aucune différence n'a été observée à l'intérieur des tumeurs dans les 2 groupes au niveau cellulaire et transcriptionnel, à l'exception du niveau de CD8α, plus bas dans le groupe HCC-HCV (p<0.05). Le nombre intra-tumoral de cellules FoxP3+ est corrélé positivement avec celui des cellules CD4 et CD8+ et négativement avec l'expression tumorale de la perforine. Dans les tumeurs, des corrélations positives entre le nombre de cellules CD4+ et CD8+, CD56+ et TCRγδ+, perforine avec IFN-γ et RANTES ont aussi été observées. Il est important de noter que les cellules CD3+ sont presque toujours corrélées avec les CD20+ dans toutes les zones et les groupes. Concernant la relation immunité-agressivité tumorale, les niveaux d'ALAT, d'AFP et le score METAVIR sont corrélés avec les cellules CD3+, CD4+ et TCRγδ+ dans le groupe HCC-HCV. La taille des tumeurs est corrélée avec l'age dans les 2 groupes et avec l'expression de FoxP3 dans le groupe HCC-HCV. La nécrose tumorale est plus importante (p<0.05) dans le groupe HCC-OH et inversement corrélée avec l'age et l'expression de RANTES dans les 2 groupes. Le marquage Ki67 est corrélé positivement avec les ALAT, AFP, PT et la virémie et inversement avec le niveau de perforine intra-tumoral. Dans les 2 groupes, le nombre de cellules FoxP3+ est inversement corrélé avec le taux de bilirubine. La rechute est plus fréquente (p<0.05) dans le groupe HCC-HCV. Pour les patients rechuteurs, le nombre de cellules CD3+, CD4+, CD8+, CD20+ et FoxP3+ est plus élevé (p<0.05) dans les zones cirrhotiques alors que le nombre de cellules CD123+ et le rapport FoxP3+/CD4+ sont plus élevés (p<0.05) dans la tumeur. De plus, une réduction significative de la fréquence des cellules NK et du rapport CD56bright/dim est observée pour l'hépatite C comparé à la B. La proportion intra-hépatique de cellules NK CD158a,h+ et CD158b,j+ est plus basse que dans le sang périphérique chez les patients HCV+ et que dans le foie des patients HBV+. La fréquence des NK NKG2A+ est plus basse dans le sang et le foie des patients HBV+ comparativement aux HCV+. Pour les patients HCV+, i) les cellules CD56+ intra-hépatiques se localisent préférentiellement hors des nécroses lorsque l'activité nécro-inflammatoire augmente et ii) les cellules circulantes CD3-CD56brightNKG2A+ corrèlent positivement avec l'extension de la nécro-inflammation et de la fibroses. De plus, chez les patients HCV+ chroniques, les cellules FoxP3+ situées dans les zones nécro-inflammatoires sont majoritairement associées aux cellules T CD8+ et positivement corrélées avec les cellules CD8+ et le score METAVIR de fibrose. Globalement, beaucoup de cellules infiltrant les tumeurs semblent être moins actives et associées avec la rechute et un mauvais pronostic. Les cellules NK et régulatrices dans l'hépatite C chronique pourraient donc être d'un grand intérêt dans le suivi de la maladie.
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PARTICULARITES DE L'INFECTION VHC ET DE LA THERAPEUTIQUE ANTI-VHC CHEZ LES PATIENTS CO-INFECTES VIH/VHCBani Sadr, Firouzé 03 September 2007 (has links) (PDF)
En 1998, le traitement de la co-infection VHC rarement discuté avant l'ère des HAART, compte tenu d'une réponse médiocre à la monothérapie par IFNα et d'un pronostic de vie lié au VIH estimé en moyenne à 10 ans, fût reconsidéré. C'est ainsi que débuta en 2000, l'essai RIBAVIC HC02, essai randomisé et multicentrique comparant l'association de la ribavirine 800 mg/j à l'Interféron 3 MUI x3/semaine ou au PEG-α-2b Interféron 1,5 μg/kg/semaine pendant 48 semaines. Une cohorte des patients inclus dans l'essai RIBAVIC (cohorte RIBAVIC EP10) débuta en 2001 pour évaluer le devenir à long terme de ces patients. L'essai RIBAVIC et la cohorte RIBAVIC ont apporté les enseignements suivants : - la cinétique de la charge virale VHC peut différer selon la nature du traitement antirétroviral. - la prévalence et les facteurs de risque de la stéatose sont similaires à ceux observés dans la population mono-infectée VHC - le taux de réponse virologique soutenue est inférieur chez les patients co-infectés (27%) comparé aux patients mono-infectés VHC (50%) - le taux de non réponse virologique (diminution de la charge virale VHC inférieure à 2 log à S12) sous traitement par pegIFN plus ribavirine est plus élevé (33%) comparé aux patients monoinfectés VHC (14%). L'interaction entre la ribavirine et l'abacavir pourrait être un facteur de risque. - l'indétectabilité de l'ARN VHC dès S4 est prédictive de la réponse à long terme (valeur prédictive positive 97%) et la décroissance de la charge virale VHC est significativement plus lente chez les patients rechuteurs comparée aux patients répondeurs long terme à S2 et à S4 - Au cours du traitement anti-VHC :1- le risque d'anémie est élevé et majoré par la coprescription de zidovudine et de ribavirine ; 2- l'amaigrissement est fréquent et sévère et peut être révélateur d'une toxicité mitochondriale ; 3- le risque bactérien n'est pas lié au taux des polynucléaires neutrophiles mais à la fibrose hépatique ; 4- le risque de toxicité mitochondriale, d'aggravation de la fibrose et de décompensation hépatique est majoré par l'interaction entre la didanosine et la ribavirine - une réponse virologique soutenue est associée à un bénéfice histologique et clinique.
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Perturbation de la voie de signalisation du TGF-β par les protéines du virus de l'hépatite C , impact sur la carcinogenèseVerga-Gerard, Amandine 12 December 2012 (has links) (PDF)
L'infection chronique par le virus de l'hépatite C (VHC) conduit au développement de pathologies hépatiques, telles que la fibrose dont le terme évolutif est la cirrhose sur laquelle peut se développer un carcinome hépatocellulaire. Les observations cliniques indiquent que le VHC interfère avec la voie de signalisation du Transforming Growth Factor β (TGFβ). Entre autres fonctions, cette cytokine induit la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT), ce qui favorise la migration cellulaire et l'invasion tumorale. Le but de cette thèse est d'analyser l'impact des protéines non structurales du VHC sur la voie de signalisation du TGFβ.Nous avons montré que le réplicon subgénomique du VHC induit une augmentation de la signalisation du TGFβ résultant en une plus forte expression de gènes associés à l'EMT et induisant un phénotype d'EMT. L'expression de la protéase virale NS3-4A seule, augmente et prolonge la phosphorylation de Smad2/3 en aval du récepteur du TGFβ et renforce l'expression de certains gènes cibles du TGFβ. L'analyse des interactions entre les protéines du VHC et les protéines de la voie du TGFβ a permis d'identifier l'interaction entre NS3-4A et la protéine Smurf2. Le réplicon subgénomique ou la protéase NS3-4A ont des rôles antagonistes à la protéine Smurf2 sur la voie de signalisation du TGFβ. L'analyse globale des gènes régulés par le TGFβ dans les cellules exprimant le réplicon subgénomique a permis d'identifier, que dans ces cellules, le TGFβ induit une réponse pro-tumorale.Ces résultats montrent que NS3-4A induit une plus forte réponse des cellules au TGFβ, en inhibant la fonction de Smurf2 dans le rétrocontrôle négatif de la voie du TGFβ. Ce nouveau mécanisme d'interférence du VHC avec la voie du TGFβ pourrait contribuer à l'EMT des cellules hépatocytaires infectées favorisant ainsi la cancérisation. Ce travail apporte de nouvelles pistes dans la compréhension des mécanismes associés à la cancérisation chez les patients chroniquement infectés par le VHC.
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Utilisation de désoxyribozymes contre l'infection par le virus de l'hépatite CTrépanier, Janie January 2007 (has links)
Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal
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Impact de la consommation de cannabis chez les utilisateurs de drogues intraveineusesJutras-Aswad, Didier January 2007 (has links)
Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal
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Míra vyšetření uživatelů drog / Rate of investigation users of drugsVÁVROVÁ, Marie January 2015 (has links)
This diploma thesis is focused on testing drug users. Specifically, this thesis is concerned with testing drug users in low-threshold centres.These low-threshold centres for drug users operate in the area of secondary and tertiary prevention. Furthermore, it describes individual diseases such as HIV, HBV, HCV and syphilis, their mode of transmission, clinical course, diagnosis, treatment and possible prevention, drug policy of the Czech Republic, the conditions for testing the abovementioned diseases in low-threshold centres and the legal framework for testing at these facilities.The practical part is divided into several research studies.The qualitative research is aimed at low-threshold centres. In this part, I am trying to determine the number of HIV, HBV and HCV tests performed in 2014. Next, the purpose of this section is also to define where the testing takes place and who is tested. The research data were obtained using a questionnaire distributed to the low-threshold centres in the CR. According to the Annual Report on Drug Epidemiology from 2014, there are 76 low-threshold centres in the Czech Rep. A total of 32 questionnaires were collected. The questionnaire consisted of 32 questions. Close-ended questions were used to detect the type of facility, whether the facility carries out tests for the chosen types of diseases, what type of test is used, who performs the testing and where the testing is carried out. Open-ended questions were used to determine the number of people tested. The qualitative research consists of 18 interviews with drug users from the Contact Centre Český Krumlov. Thanks to its field program, this centre operates in Český Krumlov, Větřní, Kaplice, Horní Planá, Loučovice, Frymburk, Vyšší Brod and in border regions such as Horní and Dolní Dvořiště or Studánky where the drug abuse is very problematic. The data were collected using a semistructured anonymous interview. The interview consisted of 4 areas:Data for identification purposes. Drug history.Testing.Awareness.30 questionnaires received from the respondents at the Prevent Contact Centre in České Budějovice can be found in the Appendix. The data were collected using an anonymous questionnaire which consisted of three basic areas. The collected data included drug history and identification information, information about testing for infectious diseases and knowledge of health risks. The thesis states 6 goals. The first 3 goals deal with mapping of HBV, HCV and HIV testing among drug users at low-threshold centres in 2014. The purpose of the fourth goal is to determine how the testing is carried out in low-threshold centres. The fifth goal attempts to establish whether drug users are interested in HBV, HCV and HIV testing. Finally, the sixth goal determines whether drug users were tested in 2014.After processing the results I established the following hypotheses which resulted from the research.H1: Drug users are interested in their health.H2:Drug users are aware of risks that result from these diseases.H3: The possibility of testing at low-threshold centres is not chosen very often by drug users.The research showed that drug users have adequate information about the risks that are associated with drug injection and injecting equipment sharing, but the average amount of performed tests is relatively low.To sum up, drug users need to be constantly informed about the importance of regular testing. In order to increase the number of tested people, it would be advisable to adapt the testing to the users' needs and also to perform more tests within field programs. It would also be helpful to link health facilities to contact centres locally.
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Prevalência de infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) em pacientes com anemia falciforme (AF) e associação entre a hepatite viral e as manifestações clínicas da doença de base / Prevalência de infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) em pacientes com anemia falciforme (AF) e associação entre a hepatite viral e as manifestações clínicas da doença de basePacheco, Sidelcina Rugieri January 2010 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-29T20:58:12Z
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Sidelcina Rugieri Pacheco Prevalencia de enfecção pelo virus da hepatite c....pdf: 867639 bytes, checksum: 379cd008d8b47ad5e4f6b594cffcdace (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-29T20:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Sidelcina Rugieri Pacheco Prevalencia de enfecção pelo virus da hepatite c....pdf: 867639 bytes, checksum: 379cd008d8b47ad5e4f6b594cffcdace (MD5)
Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Os indivíduos com anemia falciforme são considerados como pertencentes aos
grupos de risco para infecção pelo vírus da hepatite C (VHC) pós-transfusional,
sobretudo, antes da implantação da triagem sorológica nos bancos de sangue, que
no Brasil ocorreu em 1993. O objetivo do presente estudo foi determinar a
prevalência de infecção e os genótipos do VHC circulantes nos pacientes com
anemia falciforme, bem como avaliar a contribuição de outros fatores de risco para a
aquisição do VHC e a possível associação do VHC com as manifestações clínicas
da doença de base. Os pacientes com anemia falciforme atendidos no ambulatório
multidisciplinar da HEMOBA foram convidados a participar do estudo, mediante
assinatura do TCLE e resposta a um questionário clínico-epidemiológico individual.
O diagnóstico laboratorial do VHC foi realizado através de ELISA de 4. geração para
o anticorpo anti-VHC pela HEMOBA e a confirmação da infecção e genotipagem do
RNA do VHC (VHC-RNA) nas amostras soropositivos para o anti-VHC através de
técnicas de biologia molecular no LACEN-BA. Dados adicionais, tais como, histórico
clínico e resultado de exames sorológicos e bioquímicos foram obtidos através da
revisão de prontuários. Entre janeiro de 2009 e setembro de 2010, 585 pacientes
com anemia falciforme foram incluídos no estudo. A média de idade foi de 21,1 ± DP
13,1 anos (1 - 65 anos). Trinta e sete pacientes com anemia falciforme
apresentaram soropositividade para anti-VHC, que representa uma soroprevalência
global de 6,4% (IC 95% 4,4 – 8,3 %). A soroprevalência foi associada com
residência na Região Metropolitana de Salvador (RMS), período da primeira
transfusão, número de transfusões e utilização de seringa não descartável (p<0,05),
mas não foi encontrada associação com sexo, compartilhamento de utensílios
domésticos ou uso de drogas. Entre os menores de 17 anos a soroprevalência foi de
1,5 % semelhante à prevalência na população em geral. A prevalência de infecção
confirmada pela detecção do VHC RNA foi de 3,3 % (21/583) (IC 95% 2,1 – 5,1%).
O genótipo 1 do VHC foi predominante, presente em 76,2%, seguido do genótipo 3,
presente em 23,8% dos pacientes com anemia falciforme. O HTLV I/II foi encontrado
em 2,6 % e a co-infecção com VHC chegou a 53,3%. Não foram encontrados casos
de HIV. A infecção pelo VHC demonstrou associação significativa com
manifestações clinicas da anemia falciforme como dactilite e osteonecrose. A
anemia falciforme determina alterações em vários marcadores de avaliação do perfil
hepático, entretanto, apenas elevações de TGP foram associadas com a infecção
pelo VHC. Foi observado nesse estudo que o risco de infecção pelo VHC em
pacientes com anemia falciforme foi reduzido desde a implantação da triagem
sorológica, porém um risco residual ainda existe. / People affected by sickle cell anemia are considered at risk for post-transfusional
hepatitis C virus (HCV) infection, especially prior to the implementation of serological
screening tests in blood banks such as those that occurred in Brazil in 1993. The
impact of this control measure and the possible interaction between hepatitis C and
severity of sickle cell disease are unknown. We aim to determine the prevalence of
infection and HCV genotypes circulating among patients with sickle cell anemia, to
assess the contribution of other risk factors to the occurrence of new infections and
to investigate the possible effect of HCV on the underlying disease severity. Sickle
cell anemia outpatients who attended the multidisciplinary clinic from HEMOBA were
invited to participate in the study, required to sign the informed consent waiver and
answer an individual clinical-epidemiological questionnaire. HCV laboratory diagnosis
was performed in HEMOBA using ELISA 4.generation to detect the anti-HCV
antibody. Infections were confirmed and genotyped for the anti-HCV positive samples
in LACEN-BA with molecular biology techniques. Additional data such as clinical
history and examination results were obtained by reviewing patient’s charts. Between
January 2009 and September 2010, 585 sickle cell anemia were included. The mean
age was 21.1 ± 13.1 years (1-65 years). Thirty-seven sickle cell anemia showed
seropositivity for anti-HCV, which represents an overall seroprevalence of 6.4% (95%
CI 4.4 to 8.3%). The seroprevalence was associated with residence in the
Metropolitan Region of Salvador (RMS), the time of first transfusion, number of
transfusions and use of disposable syringe (p <0.05) but was not associated with
sex, sharing domestic utensils or drug use. Among those younger than 17 years the
prevalence was 1.5% similar to the prevalence in the general population. Blood
transfusion was the only risk factor identified in this group. The prevalence of HCV
infection confirmed by detection of HCV-RNA was 3.3% (21/583) (95% CI 2.1 to
5.1%). The HCV genotype 1 was predominant, it was present in 76.2%, followed by
genotype 3, 23.8%. HTLV I / II was sickle cell anemia and HCV co-infection reached
53.3%. HIV infections were not reported in this study group. HCV infection showed a
significant association with clinical manifestations of sickle cell disease and dactylitis
and osteonecrosis. Sickle cell anemia causes alterations in several markers for
assessing the hepatic profile, however only ALT was associated with HCV infection.
Risk of HCV infection in sickle cell anemia was reduced after the implementation of
serological screening, but residual risk remains.
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