As diarréias, em animais neonatos, constituem numa enfermidade mórbida de distribuição mundial e os rotavirus têm sido apontados como uma das principias causas de gastroenterites de origem viral, especialmente nos países onde a suinocultura é explorada de forma intensiva. Este estudo teve por objetivo ampliar os conhecimentos da incidência e de rotavírus em suínos através das técnicas de aglutinação em látex (LATEX) e eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Foram anlisadas 329 amostras de fezes diarréicas de leitões entre os meses de março de 2007 a março de 2008, provenientes de uma granja localizada no município da serra gaúcha. O resultado da identificação de rotavírus por LATEX usando o kit Rotavírus Latex® , foi de 11.6% (38/329) e de 7.9% para EGPA (26/329). A metodologia para determinação de rotavírus por LATEX, mostrou ser mais eficiente que a de eletroforese em gel de poliacrilamida na detecção rotavirus, com uma sensibilidade de 88.4%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 60.5% e um valor preditivo negativo de 99% e uma correlação de 94.5%. A caracterização molecular das amostras positivas identificou apenas o genótipo G5 e o padrão eletroforético longo em EGPA como vírus circulante no rebanho suíno. Não foram identificadas amostras com misturas de genótipos ou infecções múltiplas e a distribuição sazonal do rotavírus, nesta fazenda, teve picos de incidência entre os meses mais frios do ano. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-22T17:35:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caciano Elonir Rosa.pdf: 917757 bytes, checksum: 3d6c3e0c128584db735e113a4410032e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T17:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caciano Elonir Rosa.pdf: 917757 bytes, checksum: 3d6c3e0c128584db735e113a4410032e (MD5) / Diarrhea, in newborn animals, is a morbid disease that exists worldwide; rotaviruses have been considered one of the main causes of gastroenteritis of viral origin, especially in countries where pig farming is intensively explored. The objective of this study was to extend the knowledge about the incidence of rotavirus in pigs, using the latex agglutination test (LAT) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). This work analyzed 329 samples of diarrheic piglets between March 2007 and March 2008, from a farm in a municipality in Serra Gaúcha. Using LAT, for identification the Rotavirus Latex® kit, 11.6% (38/329) of the samples were considered positive, and, using PAGE, 7.9% (26/329) were positive. LAT was considered more sensitive than PAGE in the detection of rotaviruses, showing a sensitivity of 88.4% and a specificity of 95%, positive predictive value of 60.5%, negative predictive value of 99% and a correlation of 94.5%. The molecular characterization of the positive samples identified only the G5 genotype and a long electrophoretic profile in EGPA as the only type of rotavirus circulating in the pig herd. Neither samples with mixed genotype nor multiple infections were identified, and the seasonal distribution of the virus on this farm had higher incidence during the coldest month.

Orientador: Fátima Pereira de Souza / Banca: José Luiz Proença Módena / Banca: Karina Alves de Toledo / Resumo: O virus sincicial respiratório humano (hRSV) é o principal agente causador de infecções respiratórias agudas (IRA) em crianças menores que 5 anos de idade. Estudos de variabilidade genética tem identificado 2 grupos antigênicos de hRSV (A e B). A proteína G tem sido alvo destes estudos e tem fornecido informações importantes sobre as características clínicas e epidemiológicas do vírus. Os objetivos deste estudo foram determinar o genótipo, identificar o padrão de circulação das variantes de hRSV e comparar o diagnóstico apresentado por crianças provenientes de grupos clinicamente distintos. Foram colhidas amostras de aspirado nasofaringe de crianças menores que 6 anos de idade com IRA que freqüentaram uma creche municipal no período de julho de 2003 a setembro de 2005 e que foram internadas no Hospital de Base entre maio de 2004 e setembro de 2005 em São José do Rio Preto-SP. O diagnóstico viral foi realizado por RT-PCR e a genotipagem por sequenciamento da região variável (G2) do gene da proteína G. As árvores filogenéticas foram construídas a partir de alinhamentos das seqüências com outras disponíveis no GenBank para hRSV A e B. Foram identificadas 142 amostras positivas para hRSV (29% - 79/272 nas crianças hospitalizadas; e 7,7% -63/817 nas crianças da creche), das quais 61 foram genotipadas (29 da creche e 32 do hospital). Destas, 92% (56/61) pertencem a hRSV A e 8% (5/61) ao hRSV B. As análise filogenéticas hRSVA mostraram a existência de três agrupamentos, GA1, GA2 e GA5, que co-circularam durante o período analisado. Nos isolados de crianças de creche, houve apenas detecção de hRSV GA1 (isolados muito similares a cepa protótipo A2). Os isolados do subgrupo B pertencem ao genótipo BA - GB3 e foram identificados apenas nas crianças hospitalizadas. Nossos isolados foram similares aos identificados nas cidades de Ribeirão Preto, São Paulo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Fátima Pereira de Souza / Banca: Karina Alves de Toledo / Banca: Tereza Cristina Cardoso / Resumo: As infecções respiratórias agudas (IRAs) constituem a principal causa de mortalidade infantil no mundo, e o Vírus Respiratório Sincicial Humano (hRSV - Human Respiratory Syncytial Virus) é um dos principais agentes etiológicos das IRAs. Este vírus pertencente à família Paramyxoviridae, é envelopado, de simetria helicoidal, cujo genoma é RNA de fita simples não segmentada. A infectividade do vírus está relacionada com suas proteínas de membrana e dentre elas a glicoproteína G, que é responsável pela ligação do vírus à célula hospedeira e conseqüente instalação da infecção. Esta glicoproteína exerce um importante papel como antígeno de reconhecimento, sendo alvo para identificação do RSV através de anticorpos. Existem evidências de que esta proteína se liga a receptores glicosilados na célula hospedeira, porém ainda não foi descrito um receptor para a proteína G na célula. Para elucidar estes mecanismos de interação, foram realizados estudos experimentais e teóricos desta proteína. Os domínios solúveis da região N-terminal (1 a 38 aa) e C-terminal (67 a 298 aa), com 231 aminoácidos da glicoproteína G do hRSV foram clonados e a região N-terminal foi expressa em bactéria BL21 pLysS. Em paralelo, foi realizada a caracterização teórica desta proteína, e foram avaliados os possíveis sítios de interação da mesma com glicosaminoglicanos (heparina). Foram obtidos dois modelos teóricos para a proteína G do hRSV, bem como dois modelos de interação com heparina, determinando portanto, um possível sítio de ocorrência de interação. O conhecimento da estrutura da proteína G é de grande importância para elucidar a composição da estrutura e os mecanismos de interação com potenciais ligantes e deste modo, em um passo posterior, propor mecanismos de reconhecimento celular pelo hRSV, através de glicosaminoglicanos / Abstract: Acute Respiratory Infections (ARI) are the leading cause of infant mortality in the world, and the Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) is one of the main agents of ARI. This virus belongs to Paramyxoviridae family, has a lipidic envelope, helical symmetry and its genome is a single-stranded RNA. The viral infectivity is related to its membrane proteins and among them the G glycoprotein, which is responsible for binding the virus to the host cell and consequent infection. This glycoprotein plays an important role as antigen recognition, being the target for hRSV identification through antibodies. There are evidences that this protein binds to host cell glycosylated receptors, but it has not been described a receptor for G protein in the cell yet. To elucidate these interaction mechanisms and understand the process of viral infectivity, we performed experimental and theoretical studies of this protein. The soluble domains of the N-terminal (1-38 aa) and C-terminal regions (67-298 aa), with 231 amino acids of the hRSV G glycoprotein have been cloned and the N-terminal region was expressed in BL21 pLysS bacteria. In a later trial these peptides will be purified and biophysical tests will be done. It was also performed a theoretical characterization of this protein, to assess the possible interaction sites with glycosaminoglycan (heparin). It were obtained two theoretical models for the hRSV G protein as well as two interaction models with heparin, in order to determine a possible site of occurrence of interaction. Knowledge of G protein structure is of great importance to elucidate the mechanism of viral infectivity and interaction mechanisms with potential ligants, and the results obtained in this work will allow us, in a later step, to propose mechanisms of cellular recognition by hRSV through glycosaminoglycans / Mestre

Doenças infecciosas veiculadas pela água são causa comum de enfermidades em seres humanos no mundo inteiro. Dentre os patógenos causadores destas doenças, os vírus merecem destaque, pois possuem a capacidade de sobreviver em ambientes aquáticos e de permanecer infectantes por meses. A avaliação da balneabilidade das águas brasileiras é monitorada através da densidade de coliformes termotolerantes (CT), classificando as águas de recreação em próprias ou impróprias. Este trabalho tem como objetivo detectar e quantificar genomas de Adenovirus (AdV) e Enterovirus (EV) em amostras de água das praias de Ipanema e do Lami em Porto Alegre – RS e avaliar as condições de balneabilidade através da quantificação de CT. A metodologia utilizada foi reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para os vírus e o método de tubos múltiplos para quantificação de CT. Entre os meses de novembro de 2011 e abril de 2012, foram coletadas 36 amostras de água: 18 amostras de Ipanema e 18 da praia do Lami. Em 30 (83,3%) das 36 amostras coletadas foi detectada a presença de genomas virais. Genoma de AdV foi detectado em 28 (77,8%) amostras, enquanto de EV foi detectado apenas em 8 amostras (22,2%). Em contraste com as baixas concentrações de CT, a pesquisa de AdV e EV demonstrou alta positividade (83,3%), o que demonstra a baixa correlação entre os micro-organismos utilizados como marcadores fecais e a presença de genomas virais em amostras de água. / Waterborne diseases are a common cause of illness in humans worldwide. Among the pathogens causing these diseases, the viruses are noteworthy because they have the ability to survive in aquatic environments and remain infective for months. In Brazil the evaluation of recreational waters is made by monitoring the density of fecal coliform (FC), classifying recreational waters in appropriate or inappropriate. This work aims to detect and quantify genomes of Adenovirus (AdV) and Enterovirus (EV) in water samples from Ipanema and Lami beaches in Porto Alegre - RS and assess the conditions of bathing by quantifying FC. The methodology used was real time polymerase chain reaction (qPCR) for virus and multiple tube technique for FC. Between the months of November 2011 and April 2012 were collected 36 water samples: 18 samples in Ipanema and 18 in Lami. In 30 (83.3%) of the 36 samples the presence of viral genomes was detected. AdV genome was detected in 28 (77.8%) samples, while the EV was only detected in 8 samples (22.2%). In contrast to the low concentrations of FC, research of EV and AdV showed a high positivity (83.3%), which demonstrates the low correlation between micro-organisms used as fecal markers and the presence of viral genomes in water samples.

As doenças respiratórias são bastante comuns na avicultura industrial, entre as quais a bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença de importância econômica. A doença é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI) e gera grandes perdas em todas as etapas do processo de produção de aves, seja em frangos de corte, reprodutores e/ou poedeiras. Além do quadro respiratório, o VBI pode se apresentar de outras formas clínicas. As diferentes cepas do vírus possuem tropismo diferenciado pelos sistemas digestório, reprodutivo e urinário. Diversos dados recentes de caracterização genética do vírus no país demonstram a ocorrência de um único genótipo variante no Brasil (BR-I), além do genótipo vacinal Massachusetts (Mass). No entanto, pouco se sabe sobre a frequência e distribuição tecidual destas variantes nos plantéis brasileiros. A presente dissertação é composta por dois artigos científicos sobre este tema. O objetivo do primeiro trabalho foi avaliar os genótipos de ocorrência em lotes de comercialização industrial no país. Para isso, foram obtidas amostras de lotes da Região Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do país. A caracterização foi realizada a partir do sequenciamento parcial do gene S de 49 amostras que foram comparadas com sequências de referência do GenBank e de isolados de campo do país. Onze amostras (22,4%) foram filogeneticamente similares ao genótipo vacinal Mass e 34 amostras (69,4%) agruparam com o genótipo brasileiro, previamente descrito, denominado BR-I. No entanto, quatro amostras (8,2%) formaram um novo grupo, denominado BR-II. Estes resultados demonstram a maior ocorrência do genótipo variante de campo tipicamente brasileiro. O segundo trabalho teve por objetivo determinar a frequência do VBI em diferentes regiões do país, além de determinar a frequência dos genótipos brasileiros em duas categorias de aves (frangos de corte e matrizes), de diferentes idades e nos diferentes sistemas fisiológicos infectados pelo VBI. Para isso, foram obtidos pools de órgãos de 198 lotes de frangos e 234 lotes de matrizes com sinais clínicos de BIG, das regiões Sul, Centro-Oeste e Nordeste do país. A detecção do VBI foi realizada por real time RT-PCR (qRT-PCR) da região 5’ UTR e a determinação dos genótipos por sequenciamento parcial do gene S1. Os resultados demonstraram frequência similar do VBI nas granjas das diferentes regiões do país, com índice maior em frangos de corte (média de 54%) do que em matrizes (média de 30,8%). O VBI foi detectado em aves de todas as idades, no entanto, o genótipo Mass foi mais frequentemente encontrado em frangos de até quatro semanas de idade, em frangos com idade próxima ao abate (> 4semanas) e matrizes houve o predomínio do genótipo BR. O sistema com maior frequência de detecção do VBI, em matrizes, foi o digestório (40%), com diferença significativa. Em frangos, a frequência de detecção nos sistemas digestório (43,5%) e respiratório (37,7%) não apresentou diferença significativa. Estes resultados demonstram a alta frequência dos genótipos brasileiros nos plantéis, sendo encontrados principalmente nos órgãos do sistema digestivo. / Infectious bronchitis (IB) is one of the most important respiratory diseases in the poultry industry. The agent, infectious bronchitis virus (IBV), generates losses in all stages of the poultry production (broilers, breeders and/or layers). Besides respiratory signs, IBV may present other different clinical forms: digestive, reproductive and urinary. IBV presents also a high genetic diversity among strains in different poultry-producing regions of the world. Recent studies demonstrate a large dissemination of local variant strains in Brazil (genotype BR-I), but the vaccine genotype Massachusetts (Mass) is also frequently found in poultry flocks. The present Masters Dissertation has two scientific articles on this topic. The aim of the first study was to evaluate the genotypes occurring in industrial poultry production flocks in Brazil. Samples of poultry flocks were obtained from different regions (South, Southeast, Midwest and Northeast). Molecular characterization was performed by partial sequencing of the S gene and comparison with reference (obtained in Genbank database) and field isolates sequences. Eleven samples (22.4%) were phylogenetically similar to Mass vaccine genotype and 34 samples (69.4%) grouped with the BR-I genotype. However, four samples (8.2%) originated a new group, denominated BR-II. These results demonstrate a high prevalence of the variant genotype BR-I in Brazil and the emergence of the novel BR-II genotype in the Midwest region. The second study aimed to determine the occurrence of IBV in different regions of the country and to evaluate the viral frequency in two poultry production types of birds (broilers and breeders), in different ages and in different physiological systems. Organs pools were collected from 198 broilers and 234 breeder flocks with IB clinical signs and from the three different Brazilian geographic regions: South, Midwest and Northeast. IBV detection was carried out by real time RT-PCR (qRT-PCR) of the 5' untranslated region and genotyping by partial sequencing of the S1 gene. The results showed similar IBV frequency on farms of different regions of the country with a higher rate in broilers (average 54%) than in breeders (mean 30.8%). IBV was detected in birds of all ages. Mass genotype was more often found in chickens up to four weeks of age, while BR genotypes were more frequent in broilers next to slaughter age and in all ages of breeders. The system with highest frequency of IBV was the digestive (40%) in breeders. In broilers, the frequency of detection in the digestive (43.5%) and respiratory (37.7%) systems showed no significant difference. These results demonstrate the high frequency of the Brazilian genotypes in the flocks, being found mainly in the organs of the digestive system.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-11-10T10:48:48Z No. of bitstreams: 6 Dulcyane Neiva Mendes_parte6.pdf: 2216961 bytes, checksum: d73b059744afaa9ab6ba4add16a9bea3 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte5.pdf: 8933066 bytes, checksum: 8fdc7f1b5afebc6b5b9e8ac64925df9a (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte4.pdf: 9356524 bytes, checksum: dc2eb26962ce971ba570126ab82baf5b (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte3.pdf: 3258196 bytes, checksum: 806ee54d9db41724cdede7f8c24a3b32 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte2.pdf: 346419 bytes, checksum: 40831fbebfcfe3bb3719d6ed192a1d6e (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte1.pdf: 1453437 bytes, checksum: 986969a01d929c7b2f1053edf8aa230d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-12-11T15:23:47Z (GMT) No. of bitstreams: 6 Dulcyane Neiva Mendes_parte6.pdf: 2216961 bytes, checksum: d73b059744afaa9ab6ba4add16a9bea3 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte5.pdf: 8933066 bytes, checksum: 8fdc7f1b5afebc6b5b9e8ac64925df9a (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte4.pdf: 9356524 bytes, checksum: dc2eb26962ce971ba570126ab82baf5b (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte3.pdf: 3258196 bytes, checksum: 806ee54d9db41724cdede7f8c24a3b32 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte2.pdf: 346419 bytes, checksum: 40831fbebfcfe3bb3719d6ed192a1d6e (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte1.pdf: 1453437 bytes, checksum: 986969a01d929c7b2f1053edf8aa230d (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-11T15:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 6 Dulcyane Neiva Mendes_parte6.pdf: 2216961 bytes, checksum: d73b059744afaa9ab6ba4add16a9bea3 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte5.pdf: 8933066 bytes, checksum: 8fdc7f1b5afebc6b5b9e8ac64925df9a (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte4.pdf: 9356524 bytes, checksum: dc2eb26962ce971ba570126ab82baf5b (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte3.pdf: 3258196 bytes, checksum: 806ee54d9db41724cdede7f8c24a3b32 (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte2.pdf: 346419 bytes, checksum: 40831fbebfcfe3bb3719d6ed192a1d6e (MD5) Dulcyane Neiva Mendes_parte1.pdf: 1453437 bytes, checksum: 986969a01d929c7b2f1053edf8aa230d (MD5) Previous issue date: 2006-12-21 / Baculovírus são vírus de insetos que têm sido utilizados como bioinseticidas para controle de pragas agrícolas, bem como importante ferramenta em Biotecnologia como vetor de expressão gênica. O sistema de expressão utilizando baculovírus em células de insetos fornece um ambiente apropriado para a síntese de proteínas eucarióticas. A renina humana, uma proteína produzida principalmente pelos rins e responsável pelo controle da pressão sangüínea e do balanço salino, é a chave principal para o desencadeamento do sistema renina-angiotensina-aldosterona que culmina no aumento da pressão sangüínea. Neste trabalho é proposta a produção da renina, com base na construção de baculovírus recombinantes, visando o estudo mais aprofundado tanto de suas propriedades quanto de inibidores que possam ser empregados na indústria farmacêutica. Inicialmente dois baculovírus recombinantes contendo o gene da pré-pró-renina humana foram construídos. No sistema vSyn VI-gal o fragmento da pré-pró-renina (~1,4 Kb) foi inserido no vetor de expressão pSynXIV VI+X3 e por recombinação homóloga com DNA viral levou a formação de vírus recombinante ocluso positivo. No sistema Bac-to-Bac (Invitrogen) o fragmento da pré-pró-renina foi inserido em bacmídeo, por transposição, e levou a formação de vírus recombinante ocluso negativo. A presença do gene da pré-pró-renina nos vírus recombinantes foi confirmada após amplificação do gene por reação em cadeia da polimerase (PCR) com os primers específicos da pró-renina. Para identificação das proteínas virais produzidas durante a infecção foi feita cinética da síntese de proteínas por marcação radioativa (35S-metionina), em células de inseto High five e Sf21, em diferentes tempos pós-infecção (0, 24, 48 e 72 h). Na fase muito tardia da infecção foi observada a síntese de duas proteínas de cerca de 40 kDa e 47 kDa, que correspondem ao peso molecular esperado para a pró-renina e a renina, ou formas glicosiladas da mesma. Como esperado, a análise das proteínas por ensaio imunológico, utilizando anticorpo policlonal contra a renina, mostrou sinal de hibridização nas amostras das células infectadas com os vírus recombinantes contendo o gene da pré-pró-renina (Sf21 e High five). Embora nas células High five não infectadas (mock infected) não tenha havido marcação com o anticorpo, foi, entretanto, detectado sinal de hibridização não esperado em células Sf21 não infectadas (mock infected), o que deve ser devido à hibridização inespecífica. A análise ultraestrutural das células infectadas com vírus recombinante revelou que houve indução de efeitos citopáticos típicos por infecção com baculovírus. Entretanto, no vírus recombinante ocluso positivo parece não ter havido a correta inclusão dos vírions na matriz protéica resultando na formação de poliedros com pouco ou nenhum vírion em seu interior. Finalmente, larvas de Anticarsia gemmatalis e de Spodoptera frugiperda foram infectadas para investigar as alterações morfológicas causadas pelos vírus. Sinais claros de que houve mudanças na fisiologia larval foram observados quando, além dos sintomas da doença, a lagarta infectada apresentou mudança de coloração do tegumento para cor rosa. Essa coloração não é observada na lagarta infectada com o vírus selvagem AcMNPV. As alterações ultraestruturais apresentadas pelas células e as mudanças na coloração da cutícula das larvas infectadas mostram que está havendo diferença na expressão protéica entre o vírus selvagem e os vírus recombinantes. Os resultados obtidos até o momento indicam ter havido a expressão de uma proteína com peso molecular esperado para a renina e que estaria interferindo, de alguma forma, no processo de oclusão da partícula viral bem como na fisiologia do inseto. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculovirus are insect viruses being used as bioinsecticides for agricultural pest control as well as an important tool in Biotechnology as gene expression vector. The baculovirus expression system in insect cells gives an appropriate environment for eukaryotic proteins synthesis. The human renin is a protein produced mainly in the kidney and responsible for blood pressure and salt balance controls and is the principal key to the role of reninangiotensin- aldosteron system that culminates in the blood pressure rise. In this work the renin production is proposed, based on the construction of recombinant baculoviruses, aiming the studies development of the protein properties as well as the inhibitors that may be used in the pharmaceutical industry. Initially, two recombinant baculoviruses containing the preprorenin gene were constructed. In the vSyn VI-gal system the preprorenin fragment (~1.4 Kb) was inserted in the pSynXIV VI+X3 vector, homologous recombined with the viral DNA, leading to an occluded virus assembly. In the Bac-to-Bac system (Invitrogen) the preprorenin fragment was inserted in the bacmid, by transposition, leading to a negative occluded virus assembly. The presence of the preprorenin gene in the recombinant viruses was confirmed by its amplification by Polymerase Chain Reaction (PCR) technique with specific primers for prorenin. For identification of the viral proteins produced during infection, the kinetics of protein synthesis was done by radioactive labeling (35S-metionin), in High five and Sf21 insect cells, at different times post infection (0, 24, 48 and 72h). In the very late phase of infection the synthesis of two proteins about 40 kDa and 47 kDa was observed. These polypeptides correspond to the molecular weight expected for prorenin and renin, or any of their corresponding glycosilated forms. Protein analysis by immunological assay, using polyclonal antibodies against renin, showed a hybridization signal in infected cells samples with the recombinant viruses containing the preprorenin gene (Sf21 and High five). Although there was no hybridization signal in mock infected High five cells, there was an unexpected signal detected in mock infected Sf21 cells, which could be somehow due to unspecific labeling of the antibody. Ultrastructural analyses of infected cells showed that there was induction of typical cytophatic effects with baculovirus infection. However, with the occluded recombinant virus it seemed that there was no correct virion inclusion in the protein matrix resulting in polyhedra formation with few or none virions inside. Finally, Anticarsia gemmatalis and Spodoptera frugiperda larva were infected to further investigate the morphological alterations caused by the viruses. Clear signs of larval physiology change were observed when in addition to the common symptoms of the disease the infected larvae presented a tegument change to a pinkish color. This color is not observed in larvae infected with the wild type AcMNPV. The ultrastructural alterations in infected cells and the change in the color cuticle of infected larvae show that there is a protein expression difference between the wild type and the preprorenin recombinant viruses. The data obtained until now indicate that there is a protein being expressed with the expected molecular weight for renin and that it is somehow interfering with the occlusion process of the viral particle as well as with the insect physiology.

Levando-se em conta que a eficiência reprodutiva é sumamente importante para uma maior produtividade em rebanhos de cria, foram pesquisados alguns tópicos correlacionados com o assunto em quatro artigos. Neles, estudou-se as variações de cortisol sérico frente a diferentes situações de manejo, a soroprevalência e dinâmica do BHV-1 em diferentes categorias animais em gado de corte e taxas de prenhez e abortos em rebanhos comerciais de gado de corte. O artigo 1 avaliou os níveis de cortisol sérico de bovinos de corte, em diferentes idades, frente a situações de manejo em um sistema de produção no Rio Grande do Sul. As concentrações de cortisol sérico foram determinadas por radioimunoensaio. Os níveis de cortisol sérico nas terneiras de 80 dias de idade (0,22±0,25 ug/dl) diferiram significativamente de todas as categorias (P<0,001), com exceção das terneiras de 180 dias (P=0,81). As terneiras com 180 dias (0,91±0,43 ug/dl) não diferiram das novilhas de um ano e dois anos (1,97±1,40 ug/dl e 2,15±1,41 ug/dl, respectivamente), mas diferiram das vacas. As novilhas nas duas idades não diferiram das vacas de três até oito anos de idade (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivamente). Os touros de um ano (1,00±0,73 ug/dl), de dois anos (0,89±0,43 ug/dl) e três anos (1,44±0,60 ug/dl) diferiram estatisticamente das terneiras de 80 dias de idade e das vacas. Ao aplicar para as fêmeas, o coeficiente de correlação de Pearson, determinou-se um valor entre as diferentes idades de r=0,48 ug/dl, indicando que o cortisol sérico eleva-se, nelas cerca de 0,48 ug/dl para cada acréscimo de um ano na idade. Frente a uma situação evidente de estresse (castração), o cortisol sérico variou cinco vezes, indo de 0,66 ug/dl para 3,36 ug/dl.Estes resultados indicam que há uma variação de cortisol sérico com a idade em bovinos de corte, e que este hormônio pode elevar-se diante de uma situação de estresse. O artigo 2 determinou as taxas fisiológicas do cortisol sérico em terneiras aberdeen angus e examinou as variações que ocorreram em função de dois diferentes tipos de desmame. Utilizou-se dois grupos de terneiras, um deles (n=24) submetido ao desmame com 90 dias pós-parto (desmame precoce) e o outro (n=24) submetido ao desmame com 210 dias (tradicional). Para avaliar as variações do cortisol sérico pós-desmame, foram feitas coletas 24, 48, 72 e 168 horas pós-desmame. As determinações foram feitas por radioimunoensaio. Os animais foram pesados aos 90, 210, 365 e 730 dias para avaliar o ganho de peso nos dois grupos. O desempenho reprodutivo dos animais foi acompanhado pela análise das taxas de prenhez e de perdas de conceptos até o primeiro parto previsto. Os resultados mostraram que os valores de cortisol sérico no grupo precoce, elevaram-se de 0,22±0,25 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 0,71±0,64 ug/dl nas 24 horas pós-desmame, baixando para 0,26±0,30 ug/dl em uma semana. No grupo tradicional elevaram-se de 0,91±0,43 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 1,94±0,89 ug/dl nas 24 horas, baixando para 0,99±0,46 ug/dl em uma semana. O trabalho mostrou que: houve elevação nos níveis séricos de cortisol nas primeiras 24 horas pós-desmame, os quais retornaram aos níveis fisiológicos após uma semana em ambos os grupos; o grupo desmamado tradicionalmente teve um ganho de peso significativamente superior (P<0,001) ao grupo desmamado precocemente; no desempenho reprodutivo não houve diferenças significativas nas taxas de prenhez e de perdas. O artigo 3 estimou a soroprevalência de anticorpos contra o BHV-1 em animais não vacinados e determinou a chance de apresentarem a infecção, em diversas categorias, de um rebanho de cria em uma propriedade de criação extensiva no Rio Grande do Sul. Amostras sorológicas de 1.516 animais, de um total de 2.600, foram coletadas. A pesquisa de anticorpos foi realizada através de soroneutralização. Os dados dos animais foram registrados e analisados com o auxílio do programa SPSS 12.0. Em todas as categorias ocorreram animais soropositivos e a soroprevalência nesta propriedade foi de 29,22%. Nos bovinos com mais de três anos chegou a 62,38%. Cabe salientar que, após o primeiro serviço, nas novilhas de dois anos, a soroprevalência para o BHV-1 aumentou dez vezes indo de 3,85% para 38,5%. A soroprevalência aumenta conforme a idade de forma significativa (P<0,001) após os dois anos, e o período reprodutivo aumenta as chances que os bovinos têm de apresentarem a infecção.No artigo 4 foram avaliadas as taxas de prenhez e de perdas, até o parto, em propriedades rurais que utilizam ou não, uma vacina que protege para doenças reprodutivas no Rio Grande do Sul. Foram selecionadas onze propriedades em seis municípios do litoral norte. Foi utilizada vacina em quatro propriedades. Acompanhou-se 27.774 vacas (13.477 vacinadas e 14.297 não vacinadas) por quatro temporadas reprodutivas (2001-2004). Na reprodução, utilizou-se inseminação artificial e repasse com touros. Os dados foram coletados nas propriedades e analisados com o auxílio do programa SPSS, versão 12.0. O índice geral de prenhez das vacas vacinadas foi de 72,7% e das vacas não vacinadas foi de 70,4%. Esta diferença considerando as 27.774 foi estatisticamente significativa (P<0,001). A taxa de perdas (abortos) das vacas vacinadas foi de 2,38% e das vacas não vacinadas, de 2,98%. Esta diferença, considerando um total de 19.865 vacas prenhas foi estatisticamente significativa (P=0,004). / Once reproductive efficiency is extremely important to a higher productivity in breedings herds, some issues related to this subjet were discussed in four articles. Variation on serum cortisol levels under stressful situations, seroprevalence and dynamics of BHV-1 in different animal categories of beef cattle, pregnancy and abortion rates in commercial herds were the topics studied in the articles. The first study evaluated levels of serum cortisol in animals of different ages, submitted to stressful conditions. Serum cortisol levels were evaluated in 80 and 180 days calves, 1 and two year old heifers, cows ranging from 3 to 8 years , and in bulls of 1, 2 and 3 years, as well as in 3 year males submitted to castration. Blood samples were collected always in the mornings, because hormones like cortisol have cicardian variation. Cortisol levels were determinated by radioimmunoassay. Calves with 80 days of age (22μg/dl±0,25μ/dl) had serum levels statistic different (p<0,001) from all the other categories, except for 180 days calves (P=0,81); 180 days calves( 0,91±0,43 ug/dl)did not differ from the one and two year heifers ( 1,97±1,40 ug/dl and 2,15±1,41 ug/dl, respectively), but had levels statistically different from all the other cows .Heifers in both ages did not differ from cows from 3 to 8 years (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivelly). The bulls at one ( 1,00±0,73 ug/dl), two ( 0,89±0,43 ug/d), and three years old (1,44μg/dl±0,60 ug/dl) had levels statistically different from the 80 days calves and cows. Using Pearson correlation for the females, the value for different ages was r=0,48μg/dl, indicating that serum cortisol enhances 0,48μg/dl for each year of age. In a stressful situation, serum cortisol enhanced five times, ranging from 0,66 μg/dl to 3,36 μg/dl. These results suggest that serum cortisol changes with age, and that this hormone may be useful to demonstrate an stressful situation in beef cattle. The second study aimed to determine physiologic values for serum cortisol in Aberdeen angus calves and to examine whether different weaning schedules would have any effect on such values. Two groups of calves were studied: the first group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 90 days of age (early weaning); the second group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 210 days of age (traditional weaning).Serum samples were colleted before weaning on day 80 (calves on early weaning) and on day 180 (calves on traditional weaning) to determine basal cortisol levels. To evaluate serum cortisol levels after weaning, blood samples were collected at 24, 48, 72 and 168 hours after weaning, always in the mornings, because of cicardian rhythm. Serum cortisol concentration was measured by radioimmunoassay method. Average daily gain at 90, 210, 365 and 730 days was measures in both groups.Pregnancy rate and losses until parturition were the parameters used to evaluate reproductive performance. Data showed that basal serum cortisol (0,22±0,25 ug/dl) in the early weaning group enhanced to 0,71±0,64 ug/dl in the first 24 hours after weaning, reducing to 0,26±0,30 ug/dl after a week. In the traditional weaning group, basal leves (0,91±0,43 ug/dl) enhanced to1,94±0,89 ug/dl in the first 24 hours, and reduced to 0,99±0,46 ug/dl in a week. This study showed that serum cortisol levels enhanced in the first 24 hours after weaning for both groups, returning to basal levels in a week The traditional weaning group had higher average daily gain (P<0,001).No significant differences were observed for pregnancy rates and losses until parturition. The third study had the objective of estimating antibody presence against BHV- 1 in non vaccinated animals, and evaluate the chance of animal developing infection in several categories in beef cattle herd in Rio Grande do Sul. Sorologic samples of 1516 animals, from a total of 2600, were collected between March 2003 and October 2005. Antibody presence was determinated by seroneutralization. Data was registered and analysed with SPSS 12.0. For comparative analysis, Fisher test was used and odds ratio was determinated with 95% confidence. Antibody presence in the herd was 29,22%, with seropositive animals in all categories. Serum prevalence was of 62,38% in three year old cows. Antibody prevalence inhanced 10 times after first service in the 2 yr heifers, turning from 3,85 % to 38,5%. Antibody presence enhances with age (P<0,001), specially after two years old, and chances of developing infection is higher after breeding season. The fourth study was conducted to evaluate pregnancy rates and losses until parturition (abortion) in farms, that either use a reproductive vaccine or not. In the vaccinated herds, a commercial vaccine was used. Eleven herds were selected, and vaccination was done in four of these herds. A total of 27774 cows were analysed, with 13477 cows routinely vaccinated and the other 14297 cows not vaccinated, for four breeding seasons (2001-2004). The cows were bred AI and exposed to a fertile bull. Data was collected in the farms, and analysed with SPSS 12.0. Total pregnancy rate was 72,7% in the group of vaccinated cows and 70,4% in the non vaccinated. This diference, considering the total 27774 cows was statiscally significant (p<0,001). Abortion rate was 2,38% in the vaccinated vs 2,98% in the non vaccinated group, and was statistically different (p=0,004). These results indicate that vaccinated herds had higher pregnancy rates and less losses by abortion.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

As diarréias, em animais neonatos, constituem numa enfermidade mórbida de distribuição mundial e os rotavirus têm sido apontados como uma das principias causas de gastroenterites de origem viral, especialmente nos países onde a suinocultura é explorada de forma intensiva. Este estudo teve por objetivo ampliar os conhecimentos da incidência e de rotavírus em suínos através das técnicas de aglutinação em látex (LATEX) e eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA). Foram anlisadas 329 amostras de fezes diarréicas de leitões entre os meses de março de 2007 a março de 2008, provenientes de uma granja localizada no município da serra gaúcha. O resultado da identificação de rotavírus por LATEX usando o kit Rotavírus Latex® , foi de 11.6% (38/329) e de 7.9% para EGPA (26/329). A metodologia para determinação de rotavírus por LATEX, mostrou ser mais eficiente que a de eletroforese em gel de poliacrilamida na detecção rotavirus, com uma sensibilidade de 88.4%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 60.5% e um valor preditivo negativo de 99% e uma correlação de 94.5%. A caracterização molecular das amostras positivas identificou apenas o genótipo G5 e o padrão eletroforético longo em EGPA como vírus circulante no rebanho suíno. Não foram identificadas amostras com misturas de genótipos ou infecções múltiplas e a distribuição sazonal do rotavírus, nesta fazenda, teve picos de incidência entre os meses mais frios do ano. / Diarrhea, in newborn animals, is a morbid disease that exists worldwide; rotaviruses have been considered one of the main causes of gastroenteritis of viral origin, especially in countries where pig farming is intensively explored. The objective of this study was to extend the knowledge about the incidence of rotavirus in pigs, using the latex agglutination test (LAT) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). This work analyzed 329 samples of diarrheic piglets between March 2007 and March 2008, from a farm in a municipality in Serra Gaúcha. Using LAT, for identification the Rotavirus Latex® kit, 11.6% (38/329) of the samples were considered positive, and, using PAGE, 7.9% (26/329) were positive. LAT was considered more sensitive than PAGE in the detection of rotaviruses, showing a sensitivity of 88.4% and a specificity of 95%, positive predictive value of 60.5%, negative predictive value of 99% and a correlation of 94.5%. The molecular characterization of the positive samples identified only the G5 genotype and a long electrophoretic profile in EGPA as the only type of rotavirus circulating in the pig herd. Neither samples with mixed genotype nor multiple infections were identified, and the seasonal distribution of the virus on this farm had higher incidence during the coldest month.