Os objetivos gerais do presente estudo foram avaliar o efeito do polimorfismo genético da kappa-caseína, da raça e da estação do ano sobre as características físico-químicas (acidez, pH e crioscopia), composição (gordura, lactose, sólidos totais, contagem de células somáticas, uréia, proteína bruta, proteína verdadeira, nitrogênio não protéico e nitrogênio não caseinoso) e estabilidade do leite. Foram selecionados 11 rebanhos leiteiros comerciais, sendo cinco deles da raça Holandesa e seis da raça Girolanda, dos quais foram amostradas em média 122 vacas em lactação por rebanho, totalizando 1350 vacas amostradas em três períodos: 2 no período seco e 1 no período chuvoso. As vacas selecionadas foram analisadas quanto a composição e propriedades físico-químicas do leite, assim como para a determinação do polimorfismo de kappa-caseína. O presente trabalho foi dividido em dois estudos, no primeiro avaliou-se os efeitos da raça e estação do ano sobre características físico-químicas, composição e estabilidade do leite. Foi observado efeito de raça sobre acidez titulável, pH, lactose, uréia e estabilidade do leite. O efeito de sazonalidade mostrou-se significativo sobre pH, crioscopia, teores de lactose, uréia, proteína bruta, sólidos totais, contagem de células somáticas, proteína verdadeira, caseína, nitrogênio não protéico e estabilidade térmica do leite. Em animais da raça Girolanda, foram observados no período seco maiores teores de sólido totais. O ponto crioscópico do leite sofreu efeito do período de coleta somente em animais da raça Holandesa, onde valores mais altos foram observados durante o período seco. Os teores de lactose apresentaram maiores médias no período seco em animais da raça Holandesa. Os teores de uréia sofreram efeito de raça e período de coleta estudado. A proteína bruta do leite sofreu efeito dos fatores raça e período de coleta, sendo que vacas da raça Holandesa e Girolanda apresentam maiores teores no período seco. A concentração de caseína do leite sofreu efeito significativo do período de coleta. A estabilidade térmica do leite sofreu influência da raça, pois o leite de vacas da raça Holandesa mostraram-se mais estáveis do que os da raça Girolanda. A sazonalidade é um fator determinante para a estabilidade do leite, pois o leite mostrou-se mais estável no período chuvoso que em período seco. No segundo estudo foram avaliados o polimorfismo genético da kappa-caseína em vacas Holandesas e Girolandas e o efeito deste sobre características físico-químicas, de composição e estabilidade térmica do leite. A freqüência do alelo A foi maior do que a do alelo B no que diz respeito ao gene da kappa-caseína. Com relação às características físico-químicas do leite, não houve efeito do polimorfismo do gene da kappa-caseína sobre teores de gordura, sólidos totais, lactose, contagem de células somáticas e uréia do leite. Não foram observados efeitos do polimorfismo genético do gene para kappa-caseína sobre a composição protéica do leite, sendo que teores de proteína bruta, nitrogênio não protéico, nitrogênio não caseinoso e proteína verdadeira não sofrem influência. A estabilidade do leite frente à prova do álcool não sofreu influencia do polimorfismo genético de kappa-caseína / The objective of this study were to determine the effects of kappa-casein gene polymorphisms, breed and season on physical-chemical properties (acidity, pH and cryoscopy), composition (fat, lactose, total solids, somatic cells count, urea, crude protein, true protein, non protein nitrogen and non casein nitrogen) and stability of milk. For this aim 11 dairy herds were selected, six of them composed of Girolando cows and five from Holstein cows, in average milk samples were taken of 112 cows from each herd, collected three times: twice in dry season and once on rainy season. Each cow were analyzed for milk composition, physico-chemical properties, and to determine its kappa-casein polymorphism. This study was divided in two, the first one analyzed possible breed and season effects over milk physico-chemical characteristics, composition and stability. Breed effect was observed over acidity, pH, lactose, urea and milk stability. Season effects was significant for pH, cryoscopy, lactose, urea, CP, total solids, SCC, TP, casein, EqNPN and heat milk stability. In cows Girolando it was observed highest total solids in dry season. Milk cryoscopy had season effects only on Holstein cows, with highest results in dry season. Lactose concentration was greatest in Holstein cow in dry season. Urea concentration showed breed and season effect on this study. Crude protein was affected by breed and season, in dry season the concentration were highest for Holstein and Girolanda. Casein milk concentration demonstrated season effect. Heat milk stability showed breed stability, milk from Holstein cow were more stable that milk from Girolanda cows. Season is a determinant factor for milk stability, milk showed more stable in rainy season than during dry period. The second study analyzed: kappa-casein gene polymorphisms in Holstein and Girolando cows and its effects over milk physico-chemical characteristics, milk composition and milk heat stability. Kappa-casein allele A had a higher frequency, than allele B, in Girolando and Holstein cows in comparison with other polymorphisms. No effect of kappa-casein polymorphism was observed on milk phisico-chemical characteristics and on milk fat, total solids, lactose, SCC, and milk urea. There were no difference for milk protein composition (EqNPN, NCNC, TP, casein and EqNCN) for kappa-casein polymorphism. Milk alcohol stability did not showed effect of gene polymorphism

The study evaluated strategies for induction of ovulation for fixed-time AI (FTAI) in lactating dairy cows submitted to Ovsynch-type protocols initiated after a novel presynchronization strategy. A total of 909 lactating dairy cows from 6 dairy herds were at 36.7 ± 0.28 d in milk, with body condition score of 3.16 ± 0.02 when they underwent presynchronization. On D-15, all cows received an intravaginal progesterone (P4) implant of 1.0 g P4 (new or used) or a used device of 2.0 g P4 and 7 d later (D-8) the P4 implant was removed and cows received 1.0 mg i.m. estradiol cypionate (EC) and 0.530 mg i.m. sodium cloprostenol (PGF). On D0, a synchronization of ovulation protocol for FTAI was initiated and cows were randomly assigned to 1 of 3 experimental groups, that differed only on the strategy to induce ovulation at the end of the protocol. The protocols initiated on D0 with 16.8 μg i.m. of buserelin acetate (GnRH) concomitant with insertion of a 2.0 g (new or used) P4 device. On D6, every cow received 0.530 mg PGF followed by a second PGF on D7, concomitant with P4 device withdrawal. In Group EC, cows received 1.0 mg EC on D7 (time of P4 device withdrawal) as inducer of ovulation. In Group EC/G, cows received EC on D7 and 8.4 μg GnRH administered 16 h before FTAI (56 h after the first PGF). Finally, in Group G, cows only received 8.4 μg GnRH at 56 h after the first PGF. The FTAI was performed on D9 (48 h after P4 device withdrawal) in all experimental treatments and pregnancy diagnosis was performed 31 and 60 d after FTAI. The pregnancy per AI (P/AI) was not different between cows with or without CL on D-15 (44.7 vs. 38.7%) and on D0 (44.3 vs. 37.3), however, cows with CL on D6 had higher P/AI than cows without CL at PGF (45.9 vs. 17.7%). Estrus expression was greater in cows receiving EC compared to cows receiving only GnRH (80.0 vs. 46.1%). Moreover, cows expressing estrus had greater P/AI than cows not showing estrus on d31 (50.8 vs. 34.8) and on d60 (48.5 vs. 27.6%), however, estrus did not affect pregnancy loss. There were no differences between experimental treatments on P/AI on d30 with an overall P/AI of 40.4% (367/909). Pregnancy loss and P/AI on d60 did not differ between treatments. In conclusion, the reproductive program has potential to promote high fertility and the 3 strategies to induce the final synchronized ovulation produced similar fertility. Further research is needed to optimize the presynchronization strategy and to more definitively determine the effect of different methods of ovulation induction on P/AI and in particular on the pregnancy loss after the d30 pregnancy diagnosis. / O estudo avaliou estratégias para induzir a ovulação final em protocolos de IA em tempo fixo (IATF) em vacas leiteiras submetidas a protocolos do tipo Ovsynch iniciados após uma pré-sincronização. Um total de 909 vacas em lactação de seis diferentes fazendas estava com 36,7 ± 0,28 d em lactação e escore de condição corporal de 3,16 ± 0.02 quando iniciaram o protocolo de pré-sincronização. No D-15 todas as vacas receberam um implante de progesterona (P4) de 1,0 g (novo ou usado) ou de 2,0 g (usado), e 7 d após (D-8), o implante de P4 foi retirado e as vacas receberam 1,0 mg i.m. de cipionato de estradiol (CE) e 0,530 mg de cloprostenol sódico (PGF). No D0, iniciou-se o protocolo de sincronização da ovulação para a IATF a as vacas foram aleatoriamente distribuídas em 1 de 3 grupos experimentais, que diferiam somente na estratégia de indução da ovulação ao final do protocolo. Os protocolos se iniciaram no D0 com 16,8 μg de acetato de buserelina (GnRH) concomitante com a inserção de um dispositivo de P4 de 2,0 g (novo ou usado). No D6, todas as vacas receberam 0,530 mg de PGF seguida de uma segunda PGF no D7, concomitante com a retirada do implante de P4. No Grupo CE, as vacas receberam 1,0 mg de CE no D7 (momento da retirada do dispositivo de P4) como indutor de ovulação. No Grupo CE/G, as vacas receberam 1,0 mg de CE no D7 e 8,4 μg de GnRH 16 h antes da IATF (56 h após a primeira PGF). Por último, no Grupo G, as vacas receberam somente 8,4 μg de GnRH no mesmo momento do grupo CE/G. A IATF foi realizada no D9 (48 h após a retirada do implante de P4) em todos os grupos e o diagnóstico de gestação ocorreu 31 e 60 d após a IATF. A prenhez por IA (P/IA) não diferiu entre vacas com ou sem CL no D-15 (44.7 vs. 38.7%) e no D0 (44.3 vs. 37.3), no entanto, vacas com CL no D6 apresentaram maior P/IA do que vacas sem CL na PGF (45.9 vs. 17.7%). Expressão de cio foi maior em vacas que receberam CE do que vacas que receberam somente GnRH (80.0 vs. 46.1%). Além disso, vacas que expressaram cio tiveram maio P/IA no d31 (50.8 vs. 34.8) e no d60 (48.5 vs. 27.6%), no entanto, expressão de cio não afetou perda gestacional. Não houve diferença entre os tratamentos experimentais na P/IA no d31, e a P/IA média foi 40.4% (367/909). Perda gestacional e P/IA aos 60 d não diferiram entres os grupos. Concluímos que o programa reprodutivo tem potencial para promover alta fertilidade e que as 3 estratégias para induzir a ovulação final do programa reprodutivo promoveram fertilidade similares. No entanto, é necessário que seja melhor estudado a interação entre expressão de cio e tratamentos nos parâmetros de fertilidade, assim como, estudar mais a fundo os efeitos dos tratamentos (indutores de ovulação) na fertilidade após o d30 e na perda gestacional.

O objetivo deste trabalho foi determinar e avaliar os fatores sanitários e reprodutivos capazes de afetar a produtividade de vacas leiteiras. Pesquisou-se por meio de dois estudos correlacionais os efeitos de ocorrências sanitárias no periparto e seus respectivos fatores de risco sobre a produção de leite no pico e aos 305 dias em lactação, e os fatores de riscos para falhas na concepção ao primeiro serviço pós-parto (CPS). Para concretizar o objetivo deste trabalho, foram coletados mensalmente durante os anos de 2001 e 2002 dados de um rebanho comercial de vacas leiteiras de raça holandesa, localizado no Estado de São Paulo. Para a realização do primeiro estudo foram usadas 15.613 observações e para a análise estatística dos dados foram utilizadas a regressão logística e a análise de regressão múltipla. Os resultados obtidos nestas análises demonstraram que as doenças do periparto e seus fatores de risco afetaram a produção de leite com diferentes efeitos em função do número de lactações, exigindo desta maneira maior cuidado com adoção de medidas profiláticas para serem evitadas doenças e para maximizar a produção de leite dos animais. Foram usadas no segundo estudo 13.594 observações e os dados foram analisados estatisticamente por meio de regressão logística, calculando-se a razão das chances no isolamento dos fatores de risco e na associação entre os riscos para sucesso ou falha na CPS. Os resultados obtidos indicaram que os principais fatores de risco foram o número da lactação, a época do ano ao primeiro serviço, a ocorrência de doenças no periparto, a relação entre as porcentagens de gordura e proteína do leite (RGP) e as alterações no escore de condição corporal (ECC). Os animais de primeira lactação apresentaram maior chance de sucesso ao primeiro serviço do que os animais multíparos. As vacas cobertas no período do inverno apresentaram, aproximadamente, cinco vezes mais chances de CPS do que as vacas cobertas no verão. Os animais que apresentaram doenças no periparto tiveram menor sucesso de concepção que os animais sadios. Os animais que apresentaram melhor condição ruminal, determinada pela RGP, principalmente durante o período de verão, tiveram melhor concepção do que os animais com RGP reduzida no verão. O ECC adequado nas diferentes fases produtivas das vacas (secagem, parto e cobertura) demonstrou ser uma importante ferramenta para identificar as vacas com risco de insucesso na concepção ao primeiro serviço. / These studies evaluate health and reproductive factors affecting dairy cows’ productivity. Through correlation studies were evaluated health occurrences and risk factors during peripartum for milk production at peak, after 305 days of lactation and conception failures on first service pos-partum (CFS). Using a commercial herd of “dairy holsteins cows” located in São Paulo state – Brazil, data were collect in 2001 and 2002. On the first study were used 15,613 observations, the statistical analyses data were processed on logistic regression and multiple regression analyses. The analyses showed that peripartum diseases and risk factors directly affected milk production, with different effects based on lactations times, requesting extra care on prophylactics to avoid diseases and improve milk production. On the second study were used 13,594 observations, the statistical analyses data were processed on logistic regression calculating chances ratio on risk factors isolation and risk factors association to success or failure on first service pos-partum. Results indicated as mainly risks factors: lactation times, year period that first service occurred, peripartum diseases, body score condition (BSC), milk protein and fat ratio (PFR). First lactation animals presented more chance of success to the first service than multiparous. Cows inseminated during winter time showed 5 times more chances of CFS than ones inseminated on summer time. Animals with peripartum diseases had less conception success than healthy ones. Cows with better rumminal condition (FPR) had a much better conception than ones with lower FPR. The correct BSC on different productive steps (dry-off, calving and breeding) showed to be an important tool to identify animals with higher risks of failure on first service conception.

Neospora caninum é um protozoário parasita de grande importância em todo o mundo, sendo considerado a principal causa de abortamento bovino em algumas localidades. Enquanto a implicação deste parasita em distúrbios reprodutivos na espécie bovina seja conhecida, as informações disponíveis com a espécie bubalina são escassas. Este estudo avaliou e comparou as consequências da infecção experimental por N. caninum em búfalas e vacas, no estágio inicial da gestação, o de maior importância no que se refere à ocorrência de morte fetal. Protocolos de inseminação artificial em tempo fixo foram utilizados para maior controle da fecundação. Foram utilizados para inoculação dois isolados distintos, Nc-Bahia e Nc-1, possibilitando a comparação entre o isolado nacional e o isolado padrão. Todos os animais foram inoculados com 5 x 108 taquizoítos, pela via endovenosa, no 70º dia de gestação. Três búfalas e cinco vacas foram infectadas com o isolado Nc-Bahia, sendo detectado abortamento 42 dias pós-infecção (DPI) em somente uma das vacas inoculadas. Três búfalas e duas vacas foram inoculadas com o isolado Nc-1 e morte fetal foi detectada 35 DPI em todas as búfalas e vacas. Uma búfala e uma vaca permaneceram como controles negativos, sem infecção. A transmissão vertical foi verificada por semi-nested PCR nos animais infectados com Nc-Bahia e Nc-1. Diferentes graus de inflamação não-supurativa foram detectados em tecidos maternos, fetais e placentários. Todas as fêmeas inoculadas apresentaram resposta humoral frente à infecção. Embora a infecção estivesse mais disseminada pelo organismo das búfalas (p<0,05), a resposta humoral foi menor (p<0,05) e as lesões histológicas foram menos frequentes (p<0,05), indicando haver maior adaptação entre N. caninum e as búfalas, em comparação com os resultados obtidos nas vacas. O isolado Nc-Bahia foi menos patogênico que o Nc-1, por causar menos abortamentos (p<0,05) e menor frequência de lesões histológicas (p<0,05). A patogenicidade do agente na espécie bubalina foi confirmada, consideradas as lesões encontradas na análise histopatológica e a detecção da presença do agente por semi-nested PCR nos diversos tecidos estudados, além da positividade por imunoistoquímica em placenta e cérebro fetal bubalino. Esta é a primeira detecção de abortamento causado por N. caninum na espécie bubalina, em fêmeas infectadas experimentalmente com o protozoário, confirmando que problemas reprodutivos podem ser causados pelo N. caninum em búfalas. / Neospora caninum is a protozoan parasite with big importance all over the world, being considered the main cause of bovine abortion in some locations. While the implication of this parasite in bovine reproductive disorders is known, the available information within the buffalo species is scarce. This study evaluated and compared the consequences of experimental infection with N. caninum in buffaloes and cows on the initial stage of pregnancy, the most important regarding to the occurrence of fetal death. Protocols for fixed-time artificial insemination were used for greater control of fertilization. Two different isolates, Nc-Bahia and Nc-1, were utilized for inoculation, allowing the comparison between the national isolate and the standard isolate. All animals were inoculated with 5 x 108 tachyzoites, by endovenous route, at the 70th day of pregnancy. Three buffaloes and five cows were infected with the isolate Nc-Bahia and abortion was detected 42 days post-infection (DPI) in only one inoculated cow. Three buffaloes and two cows were inoculated with the isolate Nc-1 and fetal death was detected 35 DPI in all buffaloes and cows. A buffalo and a cow remained as negative controls, without infection. Vertical transmission was verified by semi-nested PCR in animals infected with Nc-Bahia and Nc-1. Different degrees of nonsuppurative inflamation were detected in maternal, foetal and placental tissues. All inoculated females showed humoral response against the infection. Although the infection was more disseminated withn the body of buffaloes (p <0.05), the humoral response was lower (p <0.05) and histological lesions were less frequent (p <0.05), indicating bigger adaptation between N. caninum and the buffaloes, in comparison with the results obtained in cows. Nc-Bahia isolate was less pathogenic than the Nc- 1, as it caused less abortions (p <0.05) and lower frequency of histological lesions (p<0.05). The pathogenicity of the agent in the bubaline species was confirmed, considering the lesions found on histopathology analysis and the detection of the agent´s presence by semi-nested PCR in the different studied tissues, in addition to the positivity by immunohistochemistry test in bubaline placenta and foetal brain. This is the first detection of abortion caused by N. caninum in buffalo species, in females experimentally infected with the protozoan, confirming that reproductive disorders can be caused by N. caninum in buffaloes.

Este estudo teve como objetivo a compreensão dos efeitos desencadeados pelas temperaturas elevadas na expressão gênica de proteínas de choque térmico, nomeadamente da HSPA1A e HSP90AA1, em linfócitos de fêmeas bovinas de diferentes raças e origens. Parte do projeto foi desenvolvida em Portugal, onde foram utilizadas 20 novilhas da raça Limousine e 22 da raça Mertolenga. A parte desenvolvida no Brasil decorreu com 11 novilhas da raça Holstein Frísia e 20 da raça Brahman. Os animais da raça Holstein participaram do Experimento I no qual foram coletados 4 tubos de sangue para posterior choque térmico in vitro, onde cada tudo de sangue foi submetido a diferentes temperaturas: 40 °C e 42 °C (ambos através de banhos-maria), 23 °C (mantido a temperatura ambiente) e 10 °C (na geladeira), durante duas horas. Todos os animais de todas as raças participaram no Experimento II, onde foram sujeitos ao teste de tolerância ao calor, tendo sido aferidas a temperatura retal e a frequência respiratória, e coletado sangue (após os tratamentos sombra e sol). A todas as amostras de ambos os experimentos foi realizada a lise das hemácias de modo a obter o buffy-coat. O RNA foi isolado através do método do TRIzol e a RT-PCR realizada com SuperScript III após digestão com DNAse I. A PCR em tempo real decorreu no aparelho 7500 Fast Real Time, utilizando TaqMan Gene Expression Assays para os genes alvo HSPA1A e HSP90AA1, e ACTB e PPIA como genes endógenos. Foram calculados os &Delta;Ct (Ctalvo - Ctendógeno) assim como a expressão gênica através do método 2-&Delta;&Delta;Ct. A análise estatística foi realizada através de modelos lineares mistos, recorrendo ao programa R Software Project (versão 3.0.1). No Experimento I foi atestada a qualidade da relação para ambos os endógenos nas relações que estabelecem com o mRNA-HSPA1A e o mRNA-HSP90AA1, através de uma análise de regressão pairwise. Tal como era esperado os valores de expressão gênica a uma temperatura de 23 °C foram os menores, seguidos 10 °C (estresse por frio), 40 °C e 42 °C para o gene HSPA1A. No caso da HSP90AA1, foi a 40 °C que se verificou uma maior expressão gênica. No Experimento II verificou-se uma variação intra-raça algo acentuada para valores de frequência respiratória, permitindo supor que o esforço termorregulatório dos animais de uma mesma raça possa ter sido diferente. Em relação à temperatura retal a raça Brahman apresentou valores significativamente diferentes das restantes raças para a situação sol. As diferenças observadas foram provavelmente consequência dos diferentes níveis de estresse aos quais os animais estiveram sujeitos. As diferenças observadas nos &Delta;Ct não foram muito expressivas e apenas se observaram diferenças significativas na expressão gênica relativa na raça Mertolenga entre as situações sombra e sol. Podemos concluir que o aumento planificado da temperatura de linfócitos bovinos leva a diferentes expressões gênicas relativas de HSPA1A e HSP90AA1. A expressão de mRNA-HSPA1A é tanto maior quanto maior o estresse térmico, quer por frio quer por calor. As expressões gênicas relativas de HSPA1A e HSP90AA1 exibidas por animais com diferentes capacidades termolíticas são também elas diferentes, existindo uma variabilidade individual na expressão gênica relativa de proteínas de choque térmico. / The present study aimed to understand the effects triggered by high temperatures in heat shock proteins gene expression, HSPA1A and HSP90AA1, in cow lymphocytes from different breeds and origins. Part of the project was developed in Portugal, where 20 Limousin and 22 Mertolenga breed heifers were used and the second part was developed in Brazil with 11 Holstein Friesian and 20 Brahman heifers. The Holstein animals participated in Experiment I in which four blood samples were collected for subsequent in vitro heat shock, where each one of the blood samples was submitted to different temperatures: 40 ° C and 42 ° C (through water baths), 23 ° C (kept at room temperature) and 10 ° C (in refrigerator) for two hours. All animals from all breeds participated in Experiment II, where they were subjected to the heat tolerance test, where rectal temperature and respiratory rate were measured, and blood samples were collected (after shadow and after sun treatments). In all samples of both experiments was carried out the erythrocytes lysis so as to obtain the buffycoat. The RNA was isolated by the TRIzol method and RT-PCR performed with SuperScript III after digestion with DNase I. The real-time PCR apparatus took place in 7500 Real Fast Time, using TaqMan Gene Expression Assays for HSPA1A and HSP90AA1 target genes, ACTB and PPIA as endogenous genes. The &Delta;Ct (Cttarget - Ctendogenous) were calculated as well as gene expression through the 2-&Delta;&Delta;Ct method. Statistical analysis was performed using linear mixed models, using the program R Project Software (version 3.0.1). In Experiment I it was attested the quality of the relationship for both endogenous with the mRNA-HSPA1A and mRNAHSP90AA1 through a pairwise regression analysis. As expected values, gene expression at a temperature of 23 °C were lower, followed by 10 °C (cold stress), 40 °C and 42 °C for the HSPA1A gene. In the case of HSP90AA1 the higher gene expression was found at 40 °C. In Experiment II, there was a slightly pronounced intra-race variation for respiratory rate values, allowing the assumption that the thermoregulatory effort of animals of the same breed may have been different. Regarding the rectal temperature, in Brahman breeds it was significantly different from the other breeds in the sun treatment. The differences observed were probably a result of different levels of stress to which the animals were subjected. The differences observed in &Delta;Ct were not very expressive and significant differences were only observed in relative gene expression of Mertolenga breed between shade and sun treatments. We conclude that planned increasing temperature in bovine lymphocytes leads to different relative gene expression of HSPA1A and HSP90AA1. The mRNA-HSPA1A expression is greater in higher thermal stress, either by cold or by heat. The HSPA1A and HSP90AA1 relative gene expressions exhibited by animals with different thermolytic capabilities, are also different, existing an individual variability in relative gene expression of heat shock proteins.

Muçarela de búfala é um queijo fresco, de massa filada, que apresenta características como coloração branca, sabor adocicado e alto valor nutricional e que tem grande aceitação pelos consumidores, dispostos a pagar preços diferenciados pela peculiaridade do produto. No entanto, o queijo está sujeito à violação de autenticidade, tanto pela sazonalidade da produção do leite da búfala quanto pelo alto preço do leite e do queijo, quando comparado aos similares oriundos da vaca, bem como à contaminação microbiana. Assim, este trabalho teve por objetivos avaliar a ocorrência de fraude na muçarela de búfala por adição de leite de vaca, e a influência da sazonalidade da produção do leite de búfala na frequência desta adulteração, bem como avaliar a presença de alguns patógenos no queijo comercializado no município de São Paulo. Amostras de muçarela de bolinha cujo rótulo identificava o uso exclusivo de leite de búfala foram submetidas à pesquisa de DNA bubalino e bovino, usando primers para detecção do gene citocromo b (cytb), e à análise microbiológica. A fraude foi detectada em 73% das amostras (77/106), não havendo influencia da sazonalidade; em duas amostras (2/106) apenas o DNA bovino foi detectado. Do ponto de vista microbiológico, todas as amostras apresentaram ausência de Listeria monocytogenes e de Salmonella spp. em 25 gramas, mas 7% (10/138) foram consideradas impróprias para o consumo humano por apresentar Coliformes termotolerantes e/ou Staphylococcus coagulase positiva acima dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Conclui- se que a fraude por adição de leite de vaca é muito frequente e não é motivada apenas pela redução sazonal da oferta do leite bubalino. Além disso os problemas microbiológicos detectados estão associados às inadequadas condições de higiene da matéria prima e/ou do processo de fabricação e/ou abuso de temperatura de armazenamento do queijo. / Buffalo mozzarella is a fresh cheese, filada mass, with characteristics such as white color, sweet taste and high nutritional value and has great acceptance by consumers willing to pay different prices for the uniqueness of the product. However, the cheese is subject to violation of authenticity, both the seasonality of production of milk the buffalo as by the high price of milk and cheese when compared to similar coming from the cow as well as to microbial contamination. This work aimed to evaluate the occurrence of fraud in buffalo mozzarella by adding cow\'s milk, and the influence of the seasonality of production of buffalo milk in the frequency of this tampering and evaluate the presence of some pathogens in cheese marketed in São Paulo. Mozzarella samples of marble whose label identified the exclusive use of buffalo milk were subjected to DNA research buffalo and cattle, using primer for detection of cytochrome b gene (cytb), and microbiological analysis. The fraud was detected in 73% of samples (77/106), with no influence of seasonality; in two samples (2/106) only the bovine DNA was detected. From a microbiological point of view, all samples showed no Listeria monocytogenes and Salmonella spp. 25 grams but 7% (10/138) were considered unfit for human consumption by presenting thermotolerant coliforms and / or coagulase positive Staphylococcus above the limits established by law. It is concluded that fraud by adding cow\'s milk is very common and is not motivated only by the seasonal reduction in supply of buffalo milk; microbiological problems encountered are related to inadequate hygiene conditions of raw materials and / or fabrication process and / or storage temperature abuse cheese.

A identificação do momento mais apropriado para realizar a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) utilizando sêmen sexado pode aumentar a prenhez por inseminação (P/IA) e aumentar a utilização do sêmen sexado em fazendas de corte. Este trabalho teve por objetivo avaliar o melhor intervalo entre a inseminação e a ovulação na P/IA de vacas Nelore lactantes submetidas ao protocolo de IATF utilizando sêmen sexado. Um total de 339 vacas Nelore apresentando 30 a 60 dias pós-parto da fazenda experimental da APTA, em Colina-SP foram utilizadas. No início do tratamento as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1g de progesterona (Sincrogest®,Ourofino Saúde Animal) e a aplicação i.m de 2mg de BE (Sincrodiol®, Ourofino). Após oito dias, o dispositivo foi removido e aplicados via i.m 0,25 mg de cloprostenol sódico (Sincrocio® , Ourofino) e 300UI de eCG (Folligon® , Intervet-Schering Plough). As vacas foram homogeneamente distribuídas para receberem IATF com sêmen sexado de um único touro da raça Angus (2.1milhões de espermatozóides por dose) às 36, 48 e 60 horas após a retirada dos dispositivos. O intervalo entre as inseminações e ovulações foi determinado e as análises realizadas comparando a taxa de prenhez entre os intervalos. Exames ultrassonográficos (7.5MHz, CTS-3300V, SIUI, China) foram realizados duas vezes ao dia, a partir da retirada do implante até 96 horas após e aos 30 pós IA para realização do diagnóstico de gestação. A P/IA foi definida como o número de fêmeas prenhes divididas pelo número de fêmeas inseminadas em cada intervalo. Os dados encontrados foram analisados usando o programa estatístico SAS. A taxa de ovulação após o protocolo foi de 92.0 % (312/339), o diâmetro do folículo ovulatório de 14,7 ± 2,3 mm e o intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação de 71.8 ± 7.7 horas [48 horas (6.73%; 21/312), 60 horas (0.64%; 2/312), 72 horas (80.77%; 252/312), 84 horas (11.22%; 35/312), e 96 horas (0.64%; 2/312)]. A P/IA aumentou conforme se atrasou o momento da inseminação: 36 horas (5,8%; 5/86)c, 48 horas (20.8%; 27/130)b e 60 horas (30.9%; 38/123)a. A P/IA foi maior quando as inseminações foram realizadas próximas ao momento da ovulação (0 a 12 horas antes da ovulação = 37,9 %; 35/95) do que as realizadas entre 12,1 a 24 horas (19,4%; 21/108; P = 0,05) ou com mais de 24 horas (5,8%; 5/87; P = 0,0001) antes da ovulação sincronizada. Vacas recentemente ovuladas tiveram P/IA semelhante às realizadas próximo ao momento da ovulação (36,4%; 8/22; P = 0,95). Concluiu-se que a P/IA utilizando sêmen sexado é aumentada quando as inseminações são realizadas próximas a ovulação sincronizada. No experimento 2, de ressincronização, foram avaliadas, as taxas de serviço, concepção e prenhez em vacas previamente sincronizadas e inseminadas em tempo fixo. Foram formados dois grupos: observação de estro e IATF, utilizando na IA sêmen sexado e convencional. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF foram, respectivamente: taxa de serviço [(63,5% (61/96); 100% (88/88)], taxa de concepção [(41% (25/61); 11,4% (10/88)], taxa de prenhez [(26% (25/96); 11,4% (10/88)]. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF de acordo com o tipo de sêmen utilizado foram, respectivamente: sêmen convencional taxa de concepção [(43,3% (13/30); 14,9% (7/47))]; taxa de prenhez [(27,49% (13/61); 14,9% (7/47))]; sêmen sexado taxa de concepção [(38,7% (12/31); 7,3% (3/41))]; taxa de prenhez [(24,57% (12/61); 7,3% (3/41))]. / The identification of most appropriate moment to perform the timed artificial insemination (TAI) using sex-sorted semen following synchronization protocol can be important to improve the fertility of sex-sorted semen and increase the use sexed semen technology in commercial beef farms. The aim of this study was evaluated the better interval to perform the TAI relative to synchronized ovulation in suckled cows. A total of 339 suckled multiparous Nelore cows from an experimental farm (APTA), in Colina-SP, were evaluated in this study. The protocol started between 30 and 60 days post-partum. Cows received one synchronization protocol using an intravaginal device containing 1.0g of progesterone (Sincrogest®, Ouro Fino) plus an i.m. injection of 2.0mg of EB (Sincrodiol®, Ouro Fino). Eight days later, the device was removed and 0.25mg i.m. injection of cloprostenol sodium (Sincrocio®, Ouro Fino) and 300IU of eCG (Folligon®, Intervet-Shering Plough) were administered. Cows were homogenously assigned to receive TAI using sex-sorted semen from a single sire (2.1 millions of sperm cell per straw) at 36, 48 or 60 hours after device removal. The TAI to ovulation interval of synchronized cows was determined and the analysis was performed to compare the pregnancy for TAI performed at various intervals before ovulation using 12 hours time intervals. Ovarian ultrasonographic examinations (CTS-3300V, SIUI, China) were performed twice daily from day of the device removal to 96 hours afterwards, to evaluate ovarian follicular dynamics and interval from device removal to ovulation. All females were examined for pregnancy 30 days after AI. The data were analyzed using the SAS program.Incidence of ovulation after the estrous synchronization protocol was 92.0 % (312/339). Diameter of ovulatory follicle was 14.7 ± 2.3 mm and the interval between the P4 device removal and synchronized ovulation occurrence was 71.8 ± 7.7 hours. The distribution of the synchronized ovulation relative to the device removal was: 48 hours (6.73%; 21/312), 60 hours (0.64%; 2/312), 72 hours (80.77%; 252/312), 84 hours (11.22%; 35/312), and 96 hours (0.64%; 2/312). The pregnancy per artificial insemination (P/AI) was increased (P <0.001) when the TAI was delayed 36 hours (5.8%; 5/86)c, 48 hours (20.8%; 27/130)b and 60 hours (30.9%; 38/123)a. Higher P/AI was achieved on TAI performed closer to ovulation (0 to 12 hours before ovulation = 37.9 %; 35/95) than TAI performed on 12.1 to 24 hours (19.4%; 21/108; P = 0.05) or > 24 hours (5.8%; 5/87; P = 0.0001) before the synchronized ovulation. Recently ovulated cows had P/AI similar to those performed around the time of ovulation (36,4%; 8/22). In conclusion, P/AI is increased when the TAI using sex-sorted is performed closer to synchronized ovulation in suckled Nelore cows. In experiment 2, resynchronization, were assessed the service rates, conception and pregnancy in cows previously synchronized and timed AI. Two groups were formed: estrous detection and TAI, using in AI, sexed and unsexed semen. The results for groups of estrus detection and TAI were, respectively, service rate [(63.5% (61/96) 100% (88/88)], conception rate [(41% (25/61), 11.4% (10/88))], pregnancy rate [(26% (25/96), 11.4% (10/88))]. The results for groups of estrus detection and TAI according the type of semen used were: conventional semen conception rate [(43.3% (13/30), 14.9% (7 / 47))] ; pregnancy rate [(27.49% (13/61), 14.9% (7 / 47))]; sexed semen conception rate [(38.7% (12/31) 7.3% (3 / 41))]; pregnancy rate [(24.57% (12/ 61), 7.3% (3 / 41))].

O Teste de Provocação Oral Duplo Cego Placebo Controlado (TPODCPC) é considerado um método diagnóstico de extrema importância na alergia alimentar, entretanto não existe, em nosso meio, uma padronização em relação aos materiais e métodos para a sua execução, especialmente na faixa etária pediátrica. O objetivo deste estudo foi adaptar TPODCPC para o diagnóstico de alergia às proteínas do leite de vaca (APLV) mediada por IgE, em crianças e adolescentes. O objetivo secundário foi descrever a relação entre os antecedentes de atopia associados a dados laboratoriais e os resultados dos TPODCPC. Foram incluídos 58 pacientes que se dividiram em dois grupos. O grupo 1 foi composto por 39 pacientes (mediana de idade: 5,3 anos; 1,6M:1F) com história sugestiva de APLV IgE mediada, sem relato de história de anafilaxia recente e com pesquisa positiva de IgE específica para leite de vaca (LV) e/ou frações. No grupo 2 foram incluídos 19 pacientes (mediana de idade: 8,3 anos; 1,4 M:1F) sem história sugestiva de APLV. Os itens avaliados na adaptação deste método diagnóstico incluíram: escolha do local, materiais a serem utilizados e operacionalização do teste. O hospital dia mostrou-se, por suas características, adequado à realização do exame. Em relação aos materiais escolhidos para a oferta do veículo, os recipientes opacos e vedados revelaram-se mais adaptados às necessidades do teste, os veículos de maior aceitação foram sopa de legumes e bebida à base de soja e o LV a ser oferecido de maneira mais apropriada foi na forma líquida e com baixo teor de lactose. As dificuldades observadas na realização do TPODCPC não comprometeram a sua execução, entretanto houve dificuldade na interpretação dos resultados especialmente nos pacientes com sintomas como pápulas periorais ou achados clínicos inespecíficos. Observou-se concordância entre os critérios clínico-laboratoriais adotados para a definição dos grupos 1 e 2 com os resultados do TPODCPC. Em conclusão, o teste mostrou-se exeqüível e seguro e a adaptação deste para o diagnóstico de APLV IgE mediada nesta faixa etária pediátrica foi possível, sendo necessária a avaliação da sua reprodutibilidade em outras populações. / The Double Blind Placebo Controlled Food Challenge (DBPCFC) is considered an important method for food allergy diagnosis, nevertheless it is not standardized among us. The aim of this study was to adapt DBPCFC for cows milk allergy (CMA) diagnosis in children and adolescents. A secondary aim was to describe the relation between history of atopy and laboratorial findings with DBPCFC results. It was included 58 patients that were distributed in two groups. Group 1 was composed of 39 patients (median age: 5,3 years; 1,6M:1F) with suggestive history of CMA without recent anaphylaxis, and specific IgE to cow´s milk (CM) and/or its fractions. In group 2 was included 19 patients (median age 8,3 years; 1,4 M:1F) where the CMA diagnosis was excluded based on clinical findings. The items evaluated in the adaptation of this method were: setting choice, kind of milk processing and vehicles, besides material and test performance. Day hospital was considered adequate for this test. Regarding to elected materials to offer the vehicle, opaque and sealed recipients showed more suitable to test demands. Vehicles more accepted were legumes soup and soy beverage and the most adequate CM to be offered was liquid and with low lactose concentration. The difficult observed in performance of DBPCFC do not compromise its execution, however the interpretation of the results was very difficult specially in patients with perioral wheals and unspecific clinical findings. There is an agreement Comparing adopted clinical and laboratorial criterion for definition of group 1 and 2 with DBPCFC results. In conclusion, the test proved to be feasible and safe and its adaptation is possible for IgE mediated CMA diagnosis, being necessary to evaluate its reproducibility in other populations.

O experimento conduzido na Fazenda Rancho Santa Zelina, em Júlio de Castilhos, RS, entre julho de 2014 a setembro de 2015, analisou o desempenho reprodutivo de 42 vacas mestiças Angus primíparas aos 24/25 meses de idade postas no pós-parto em pastagem cultivada de aveia (Avena strigosa Schreb) e azevém (Lolium multiflorum Lam.). Aos 80 dias pós-parto foram distribuídas conforme peso (PC) e escore de condição corporal (ECC) em dois sistemas alimentares: SS – mantidas por 23 dias na pastagem cultivada e sete dias em pastagem natural; CS – mantidas por 23 dias na pastagem cultivada e sete dias em pastagem natural com a suplementação diária de 0,8% do PC de suplemento contendo 14% proteína bruta (PB) e 70% de nutrientes digestíveis totais (NDT). O método de pastoreio foi o contínuo com massa de forragem (MF) média de 1450 kg/ha de matéria seca (MS) em pastagem cultivada e 2150 kg/ha/MS em pastagem natural. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com dois sistemas alimentares e vinte e uma vacas por sistema alimentar, sendo cada vaca considerada uma unidade experimental. Para comparar os sistemas alimentares, as variáveis que apresentaram normalidade foram avaliadas utilizando o procedimento MIXED do SAS. A variável taxa de prenhez foi avaliada pelo teste do qui-quadrado. A suplementação não influenciou o peso (PCFT) e condição corporal final (ECCFT) das vacas, porém a variação de peso diária média das vacas do CS foi superior a das em SS durante os sistemas alimentares (0,465 kg e 0,227 kg, respectivamente). Os bezerros do CS nesse período apresentaram maior ganho médio diário, 0,829 kg comparado com aqueles do SS de 0,644 kg e maior peso final (130,86 kg e 117,29 kg, respectivamente). As vacas do CS tiveram a significativa maior taxa de prenhez de 80,95%, enquanto as do SS tiveram 57,14%. Aos 42 dias de acasalamento 80,95% das vacas do CS estavam prenhes, enquanto do SS apenas 28,57% já tinham concebido. Vacas primíparas aos 24 meses de idade e que irão conceber têm maior peso e escore de condição corporal ao início do acasalamento do que as futuras falhadas. / The experiment was conducted at the Farm Rancho Santa Zelina in Julio de Castilhos, RS, from July 2014 to September 2015, examined the reproductive performance of 42 crossbred cows Angus gilts to 24/25 months old put postpartum in cultivated pasture oat (Avena strigosa Schreb) and ryegrass (Lolium multiflorum Lam.). After 80 days postpartum were distributed as weight (BW) and body condition score (BCS) in two food systems:SS – 23 days in a cultivated pasture (Avena strigosa Schreb. e Lolium multiflorum Lam.) and 7 days in a natural grassland; CS – 23 days in the same cultivated pasture and 7 days in a natural grassland receiving 0,8% BW supplement with 14% crude protein (CP) and 70% total digestible nutrients (TDN). The grazing method was continuous with herbage mass (MF) average of 1450 kg/ha of dry matter (DM) in cultivated pasture and 2150 kg/ha/DM in natural pasture. Treatments were arranged in a completely randomized design with two food systems and twenty-one cows for feeding system, where each cow was considered an experimental unit. To compare the food systems, variables with normal distribuition were assessed using the SAS MIXED procedure. The pregnancy rate was evaluated using the chi-square test. Supplementation did not affect cows‟ final body weight (FBW) and final body condition (FBC), but the daily average weight variation of cows in CS was higher than in SS (0.465 kg and 0.227 kg, respectively). The CS calves this period had higher average daily gain, 0.829 kg compared to those of the SS 0.644 kg and higher final weight (130.86 kg and 117.29 kg, respectively). The 80.95% pregnancy rate of the CS cows was higher than the 57.14 % of SS cows. After 42 days of mating, 80.95% of the CS primiparous cows had conceived, against just 28.57% from the SS. Primiparous cows at 24/25 months old and that will get pregnant have higher BW and BCS at beginning of the mating than the open ones.

Esta tese foi dividida em duas pesquisas com o intuito de avaliar o fornecimento de extratos de orégano e chá verde para novilhas e vacas leiteiras. A primeira delas teve como objetivo verificar a inclusão de doses de extrato de orégano (EO) (Origanum vulgare) fornecido a novilhas da raça Holandês sobre a aceitabilidade do alimento, consumo, medidas fisiológicas e desenvolvimento corporal. Trinta e quatro novilhas em pastejo da raça Holandês foram agrupadas aleatoriamente em quatro tratamentos: C = controle - sem adição de EO; 2,5 gramas (g); 5,0 g e 7,5 g de EO. Os tratamentos foram ofertados diariamente e individualmente durante 56 dias. O extrato de orégano adicionado em 7,5 g/dia ao concentrado exerce efeitos adversos de pequena magnitude sobre a aceitabilidade do concentrado e seu consumo e a inclusão de até 7,5 g/dia não melhora o consumo total de dieta, o desenvolvimento corporal e medidas fisiológicas. A segunda pesquisa objetivou avaliar os efeitos da inclusão de EO, chá verde (CV) (Camellia sinensis L.) e sua associação no concentrado fornecido a vacas das raças Holandês e mestiços Holandês e Gir sobre o comportamento, consumo, produção e composição do leite, perfil hematológico e enzimas de estresse oxidativo. Trinta e duas vacas das raças Holandês e mestiços Holandês e Gir foram distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: C = controle, EO = com adição de 10 g de extrato de orégano, CV = com adição de 5,0 g de extrato de chá verde e Mix = associação de ambos os tratamentos. Vacas recebendo chá verde apresentaram maior consumo e produziram mais leite em relação aos grupos controle e Mix. Animais do grupo orégano produziram leite com menor concentração de lactose enquanto do grupo Mix produziram leite com menor contagem de células somáticas que as vacas que receberam orégano. Menores valores das enzimas de oxidação da diclorofluoresceína nos eritrócitos (DCFER) e plasma (DCFPLA) e níveis mais elevados de Glutationa peroxidase reduzida (GSH) foram verificados nos animais suplementados com CV. Vacas suplementadas com extrato de chá verde apresentaram maior número de observações de ruminação total e menor número de observações deitada. Conclui-se que o fornecimento de extrato de orégano não alterou expressivamente o desenvolvimento corporal de novilhas, mas a dose mais elevada (7,5 g EO) alterou negativamente a aceitabilidade do alimento. O extrato de chá verde melhora a produção leiteira, altera a composição do leite, modifica o perfil hematológico e enzimas antioxidantes, constituindo-se como opção de aditivo para vacas em lactação. / Oregano and green tea extracts were supplied for heifers and dairy cows in two trials. The first study aimed to verify effect of the inclusion of doses of oregano extract (Origanum vulgare) fed to Holstein heifers on the acceptability of concentrate, physiological measurements and body development. Thirty-four heifers grazing of Holstein were distributed randomly into four treatments: C = control - without adding OE; OE2.5 = 2.5 grams (g); OE5.0 = 5.0 g and OE7.5 = 7.5 g of OE per day. The treatments were offered daily and individually for 56 days, after an adaptation period of 14 days, when heifers received just the basal diet. Heifers fed with 7.5 g of EO into the concentrate spent more time to eat the concentrate, reduced the latency to enter the trough and the concentrate intake. The inclusion of oregano extract did not alter the total dietary intake, body weight gain, body condition score (BCS), respiratory rate, rectal temperature and urinary pH. The second study aimed to evaluate the effects of addin OE, green tea - GT (Camellia sinensis L.) and both vegetal extracts into the concentrate fed to Holstein and Holstein and Gir crossbred cows on behavior, intake, milk yield and composition, blood profile and enzymes of oxidative stress. Thirty-two Holstein and Holstein and Gir crossbred cows were randomly distributed into four treatments: C = control, OE = with addition of 10 g of oregano extract, GT = with addition of 5.0 g of green tea extract and with Mix = combination of both treatments. Cows fed GT had higher total intake and produced more milk compared to control groups and Mix; cows receiving GT and control produced more milk, but the body weight or BCS did not differ between treatments. Animals fed with OE produced milk with lower concentration of lactose while the cows fed with the Mix produced milk with lower somatic cell count than cows fed with OE. Smaller values of dichlorofluorescein oxidation enzymes in the erythrocytes and plasma and higher levels of reduced glutathione peroxidase levels were observed in animals supplemented with GT. Cows receiving the control showed higher number of intake activities compared to the other treatments, total number of lying and lying in idleness observations, and, in contrast, fewer observations in standing position, both in idleness as ruminating. Cows supplemented with GT showed a higher number of total rumination observations and Oregano and green tea extracts change the ingestive, postural and social behavior, improves intake, milk yield, altering its composition, the hematological profile and antioxidant status and, thus, the use of oregano and green tea extracts may be use as an option of additive for dairy cows.