Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 107.pdf: 2520157 bytes, checksum: 93334c0f181c08b7be000b7a1441e401 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 107.pdf: 2520157 bytes, checksum: 93334c0f181c08b7be000b7a1441e401 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A quantidade de bacilos viáveis presentes na vacina BCG é um importante requisito de qualidade deste produto, pois permite avaliar a consistência de produção. A contagem de colônias em meio sólido é o método oficial recomendado pela Organização Mundial da Saúde e pela Farmacopéia Brasileira para a determinação da viabilidade do BCG. A difícil dispersão do BCG e seu crescimento lento conferem limitações ao método oficial, como a variabilidade dos resultados, a baixa reprodutibilidade e o prolongado tempo de análise. Este trabalho avaliou a aplicabilidade da técnica de redução do sal de tetrazol XTT como método alternativo para a determinação do número de viáveis em vacinas produzidas com o BCG Moreau-RJ. Foi demonstrada a linearidade das técnicas de redução do XTT realizadas com base em Kairo et al. (1999) e em Argüelles et al (2005) em 3, 24 e 48 horas de incubação. Os ajustes lineares foram obtidos pela técnica de redução do XTT a 1 mg/mL baseada em Kairo et al. (1999), com coeficiente de determinação (RP2P=0,99), em conformidade com a Resolução N. 899/2003 da ANVISA referente à validação de métodos bioanalíticos. O melhor ajuste abrangeu as concentrações de vacina de 2,0 a 16,0 x 10P6 PUFC/mL após 24 e 48 horas de incubação a 37C. Nestas condições de ensaio os números de viáveis obtidos preliminarmente para cinco lotes de vacina BCG intradérmica empregados na rotina de imunização do país e para três amostras da vacina de referência BRABCG003 foram fortemente correlacionados (r=0,96) àqueles fornecidos pelo método tradicional de cultivo em meio de Lowenstein-Jensen. Com base nos valores de referência preconizados pela Farmacopéia Brasileira, observou-se 100 por cento de concordância na interpretação final dos resultados fornecidos pelos dois métodos para os cinco lotes de vacina avaliados. / The number of culturable particles in the BCG vaccine is an important requirement of quality control, therefore it allows to evaluate the production consistency. The colony counting on solid medium is the official method recommended by the World Health Organization and by the Brazilian Pharmacopeia to determine the viability of the BCG on final lots. The nature of the organism (difficult dispersion and slow growth) confers inter-laboratory variation of results and time consuming characteristics to the current test. The present work evaluated the applicability of the reduction of the salt of tetrazol XTT as an alternative method to determine the number of viable units in vaccines produced with the BCG Moreau-RJ. The method was linear by the techniques of reduction of the XTT based on Kairo et. (1999) and on Argüelles (2005) after 3, 24 and 48 hours of incubation. The linear adjustment was obtained by assays of reduction of XTT at 1 mg/mL based on Kairo et al. (1999), with coefficient of determination (RP2P=0,99) required by the Resolution N° 899/2003 / ANVISA concernem to the validation of bioanalitical assays. Optimal calibration curves enclosed vaccine concentrations from 2,0 x 10P6 Pto 16,0 x 10P6 PCFU/mL after 24 and 48 hours of incubation at 37 °C. With these conditions the numbers of viable units obtained from five lots of intradermal vaccines used in the brazilian routine of immunization and from three samples of the reference vaccine BRABCG003 had been strongly correlated (r=0,96) to those provided by the current method of culture in Lowenstein-Jensen. Thus, we observed 100% of agreement between the final interpretations of the two methods of analysis considering the range of values referred by the Brazilian Pharmacopeia to BCG vaccine. Therefore, beyond the strong correlation with the official method, the reduction length of assay from 4 weeks to 48 hours, the relative low cost and the easiness of execution represent strong incentives to the validation of the reduction of XTT as an alternative method to replace the counting of colonies in Lowenstein-Jensen.

Made available in DSpace on 2016-04-15T12:59:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 melissa_pereira_ioc_dout_2009.pdf: 8311387 bytes, checksum: fc500887f8ee4dfdef6441b8f9d7d150 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A tuberculose (TB) ocupa o segundo lugar em causa de morte por doença infecciosa de notificação compulsória. Uma das estratégias para seu controle é a vacinação, e a única vacina disponível é o BCG (Bacilo de Calmette-Guèrin). Embora utilizada mundialmente, a vacina BCG apresenta diversas limitações. O Brasil utiliza a cepa Moreau para produção da vacina, sendo o único país do mundo autilizar, desde os anos 1930, esta cepa para vacinação. Como observado para outros patógenos intracelulares, a imunidade celular desempenha papel importante na proteção do hospedeiro contra a TB. O IFNy, secretado por células T, é descrito como uma citocina particularmente importante participando na resposta imune protetora, e é empregado como correlato de proteção, embora sua utilidade seja ainda questionável, sobretudo em populações adultas. Isto evidencia a necessidade de buscar biomarcadores adicionais que permitam uma correlação de proteção mais confiável. As proteínas extracelulares micobacterianas estão entre as primeiras moléculas a interagirem com o sistema imune do hospedeiro, e uma melhor compreensão de seu papel imunomodulatório poderá contribuir para o desenvolvimento de novos alvos para o controle e erradicação da TB. Uma estratégia para a identificação de proteínas imunologicamente relevantes é a análise do imunoproteoma, que combina a abordagem proteômica com uma apresentação imunológica dos dados. A caracterização de soros, provenientes de indivíduos vacinados, muitas vezes revela diferentes padrões de reconhecimento que podem ser indicativos dos diferentes graus de proteção conferidos pela vacina em uma população heterogênea Empregamos assim esta tecnologia, combinando a separação por eletroforese bi-dimensional (2DE) de antígenos protéicos extracelulares da cepa vacinal brasileira seguida de western-blot, para avaliar o perfil imunoproteômico da resposta humoral de indivíduos saudáveis, PPD negativos, revacinados com BVG Moreau e classificados como alto e baixo produtores de IFNy. Nossos resultados revelam um padrão de reconhecimento claramente distinto entre os grupos avaliados, correlacionado com o perfil de produção de IFNy. Dentre as proteínas imunoreativas identificadas, um grupo (antígenos do complexo 85) foi reconhecido por todos os soros incluídos no estudo, inclusive controles. Alguns antígenos foram reconhecidos exclusivamente pelos indivíduos classificados como alto produtores de IFNy e outros somente pelos indivíduos enquadrados no grupo de baixo produtores. Algumas proteínas foram selecionadas e produzidas sob a forma recombinante em Escherichia coli possibilitando sua avaliação mais detalhada frente aos soros individualizados. Entre os antígenos diferencialmente reconhecidos, as proteínas Mpb70 e Mpb83 se destacaram como potenciais correlatos da proteção oferecida pela vacinação com BCG Moreau, tendo sido reconhecidos somente pelos indivíduos produtores de elevados níveis de IFNy. Estudos adicionais são necessários para determinar a aplicabilidade efetiva de tais antígenos como potenciais correlatos da proteção conferida pela vacinação com BCG Moreau. Este é o primeiro relato que detalha o perfil de reconhecimento sorológico por indivíduos revacinados com BCG Moreau frente a antígenos extracelulares da cepa homóloga, e contribui para uma melhor compreensão da cepa vacinal brasileira contra a TB / Tuberculosis (TB) holds the second place as cause o f death by an infectious disease of obligatory notification. One of the stra tegies for its control is vaccination, and the only vaccine available is BCG (Bacillus Cal mette-Guerin). Although used worldwide, BCG shows various limitations. Brazil us es the Moreau strain for vaccine production, being the only country in the world to use, since the 1930s, this strain for vaccination. As observed for other intracellular pa thogens, cellular immunity plays an important role in host protection against TB. IFN γ secreted by T cells is described as a particularly important cytokine participating in protective immune responses, being used as a correlate of protection, although its uti lity remains questionable, especially in adult populations. This highlights the need to s eek additional biomarkers yielding better surrogates of protection. Mycobacterial extr acellular proteins are among the first molecules to interact with the host immune sy stem and a better understanding of their immunomodulatory role may contribute to the d evelopment of new targets for the control and eradication of TB. A strategy for t he identification of immunologically relevant proteins is the analysis of the immunoprot eome, combining a proteomic approach with an immunological presentation of the data. The characterization of sera from vaccinated individuals often reveals diff erent patterns of recognition that may be indicative of the different degrees of prote ction conferred by the vaccine in a heterogeneous population. We have thus employed thi s technology, combining the separation by two-dimensional electrophoresis (2DE) of extracellular proteins from the Brazilian vaccine strain, followed by Western b lot to assess the immunoproteomic profile of the humoral response in healthy, PPD negative subjects, re-vaccinated with BCG Moreau and classified as hig h or low producers of IFN γ . Our results reveal a clearly distinct recognition patte rn between the evaluated groups, correlating with the profile of IFN γ production. Among the immunoreactive proteins identified, one group (85 complex antigens) was rec ognized by all sera included in the study, including controls. Some antigens were r ecognized only by individuals classified as high producers of IFN γ and others only by the individuals included in the group of low producers. Some proteins were selected and produced in recombinant form in Escherichia coli allowing for their further evaluation against the individual sera. Among the antigens differentially recognized, Mpb70 and Mpb83 proteins stood out as potential correlates of protection offered b y vaccination with BCG Moreau, and vi were only recognized by individuals producing high levels of IFN γ . Additional studies are needed to determine the effective applicability of these antigens as potential correlates of protection provided by vaccination wi th BCG Moreau. This is the first report detailing the serologic recognition profile of individuals re-vaccinated with BCG Moreau against extracellular antigens of the homolo gous strain, and contributes to a better understanding of the Brazilian vaccine strai n against TB.

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 natalia_roque_ioc_dout_2015.pdf: 13428594 bytes, checksum: 3b9534ef5ab8b753d140d8d49bb0c9a0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os corpúsculos lipídicos (CL), também chamados de gotas lipídicas, são organelas ricas em lipídios que tem sido frequentemente associadas às condições inflamatórias e infecciosas. O aumento no número e tamanho dessas organelas é um fenômeno bem regulado que tem sido associado com a persistência bacteriana. Nesse trabalho, nós investigamos os mecanismos pelos quais os CL induzidos pela micobactéria podem atuar em favor da infecção. Por microscopia eletrônica de transmissão (MET), nós mostramos que os CLs marcados com ADRP interagem com fagossomas durante a infecção por M. bovis bacillus Calmette-Guérin, (BCG) in vivo. Por microscopia de fluorescência, nós observamos que a interação entre os CL e os fagossomas não é dependente da viabilidade bacteriana. Nós mostramos uma maior frequência de CLs em proximidade com os fagossomas contendo partículas de látex revestidas com Lipoarabinomanana (LAM) ou Fosfatidilinositol manosídeo (PIM) de M. tuberculosis (M.tb), mas não com as partículas de látex não revestidas, sugerindo um mecanismo de recrutamento de CL para próximo dos fagossomas. Partículas de látex revestidas com LAM interagem com os CL, 102,60% mais do que as partículas de látex não revestidas em macrófagos carregados com ácido oleico. Além disso, nós observamos que a Rab7, uma importante GTPase endocítica e, marcador de endossoma tardio, assim como seu efetor RILP, mas não a Rab5 co-localizou com os CL marcados por Bodipy® induzidos pela infecção com BCG em 24 h. Por MET, nós observamos a imunolocalização da Rab7 co-localizada com os CL no local de interação com um fagossoma infectado durante a infecção experimental por BCG in vivo. De maneira interessante, nós observamos uma diminuição na aproximação das partículas revestidas com LAM e os CL após os macrófagos terem sidos tratados com CID1067700, um inibidor competitivo da Rab7 Nós observamos que o BCG e o LAM, mas não, a micobactéria não patogênica M. smegmatis, ou partículas de látex não revestidas, foram capazes de induzir a formação de CL em macrófagos in vitro. O papel dos CL na modulação da infecção micobacterianas foi avaliado pelo tratamento com C75 (inibidor de ácido graxo sintase) que modulou negativamente a formação dos CL e a síntese de PGE2 induzidos por BCG. Além disso, esse tratamento foi capaz de aumentar o TNF-\03B1 enquanto inibiu a produção de IL-10 e a sobrevivência micobacteriana, determinado por contagens de UFC. Esses resultados sugerem que a interação dos CLfagossomas é um fenômeno bem regulado e modulado pelo componente da parede micobacterina, LAM e dependente de Rab7. O sequestro da Rab7 ativa para os CL pode permitir a interação com o fagossomas e favorecer a troca de lipídios atuando como nutrientes para sobrevivência micobacteriana. Além disso, nossos resultados indicam que os CL modulam mediadores pro- e anti- inflamatórios em favor da replicação e sobrevivência do BCG. Assim, sugerindo que a inibição da formação e/ou função dos corpúsculos lipídicos como um alvo promissor para intervenções terapêuticas na infecção micobacteriana / Lipid bodies (LB) also named lipid droplets, are lipid rich organelles that have been often associated with inflammatory and infectious conditions. The increase in number and size of these organelles is a well-regulated phenomenon that have been involved with bacterial persistence. In this work, we investigated the mechanisms by which mycobacteria induced -lipid bodies may act in favor of infection. By Transmission electron microscopy (TEM), we showed ADRP-marked LB interacting with phagosomes during M. bovis bacillus Calmette- Guérin, (BCG) infection in vivo. By fluorescence microscopy we observed that the interaction between LB and phagosomes is not dependent of bacterial viability. We showed an increase in the frequency of LB proximity with phagosomes containing beads coated with Lipoarabinomannan (LAM) or Phosphatidylinositol mannoside (PIM) from M. tb, but not with non-coated beads suggesting a recruitment mechanism for LB-phagosome proximity. LAM coated beads interacts with LB 102,60% more than non- coated beads in macrophages loaded with oleic acid. Moreover, we observed that Rab7, an important endocytic GTPase and late endosome marker, as well as its effector RILP but not Rab5 was co-localized with LB stained with Bodipy® induced by BCG infection at 24 h. By MET, we observed an immunolocalization of Rab7 co-localized with LB in the site of interaction with an infected phagosome during the experimental BCG infection in vivo. Interestingly, we observed a decrease of LAM coated bead and LB apposition after macrophages were treated with CID1067700, a competitive inhibitor of Rab7. We observed that BCG and LAM, but not nonpathogenic mycobacteria M. smegmatis or non-coated latex beads, was able to induce LB formation in macrophages in vitro. Next, we evaluated the role of LB modulation on mycobacterial infection Treatment with C75 (fatty acid synthase inhibitor) down-regulated LB formation and PGE2 synthesis induced by BCG. Also, these treatment were able to enhance TNF-\03B1 while inhibit the IL-10 production and down-modulation of mycobacterial survival and growth assessed by CFU count. These results suggest that LBphagosome interaction are well-regulated phenomena modulated by mycobacteria cell wall component, LAM and dependent on Rab7. The hijack of active Rab7 to LB may enable the interaction with phagosome, and may favour the exchange of lipids acting as nutrients to mycobacterial survival. In addition, our results indicate that LB modulate proand anti- inflammatory mediators in favor of BCG survival and replication. Thus suggesting that inhibition of LB formation and/or function as a promising target for therapeutic interventions in mycobacterial infection

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-14T11:53:05Z No. of bitstreams: 1 danilo-parmera.pdf: 3155055 bytes, checksum: ac63cd2b7c2719955b83925c310aabbc (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-14T11:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danilo-parmera.pdf: 3155055 bytes, checksum: ac63cd2b7c2719955b83925c310aabbc (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As culturas de células vêm sendo utilizadas extensivamente no desenvolvimento e na produção de uma variedade de produtos terapêuticos e profiláticos, tornando-se uma ferramenta indispensável para geneticistas, imunologistas, vacinologistas e a indústria farmacêutica. A adoção de sistemas de ensaios celulares in vitrotem sido aplicada como um método alternativo para a substituição ou diminuição do uso de animais nas fases de desenvolvimento, produção e testes de vacinas, demonstrando resultados promissores. Da mesma forma, sistemas computacionais podem ampliar a utilização desta ferramenta para etapas do desenvolvimento de vacinas candidatas na fase pré-clínica. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de umprotocolo in vitroutilizando culturas de células humanas - a linhagem de monócitos THP-1, para a seleção de um protótipo vacinal - a cepa Pasteur de Mycobacterium bovisBCG expressando o antígeno Sm14 de Schistossoma mansoni(BCG/sm14). Para isso foram empregadas duas metodologias – citometria de fluxo e imunocitoquímica, para a identificação do perfil da expressão das citocinas IL-10, IL-12 e TNF-α. Foram utilizados como controles a cepa Pasteur do M. bovisBCG e a construção da cepa Pasteur do M. bovisBCG contendo o vetor de expressão pAU5 (BCG/pAU5).Após padronização, a multiplicidade de infecção utilizada para os experimentos foi de 10 bacilos para 1 célula THP-1 (10MOI). A expressão daproteína Sm14 foi detectada em todos os protótipos vacinais. Para assegurar queo protótipo BCG/sm14 era capaz de diferenciar a linhagem de monócitos THP-1 em macrófagos, avaliamos a taxa de crescimento celular e foi possível observarque após a infecção estas células apresentavam o índice de proliferação diminuído em 2 logs em relação à célula não infectada. O protótipo vacinal BCG/sm14não mostrou diferenças quanto a capacidade de infecção, a taxa de persistência intracelular e a estabilidade da construção plasmidial. As duas metodologias empregadas mostraram resultados discrepantes em relação ao percentual de citocinas expressas após a infecção com o protótipo vacinal ou os BCG controles, mostrando um maior percentual de células positivas quando avaliados por citometria de fluxo.Contudo, mesmo com esta diferença observamos que o protótipo vacinal BCG/sm14 não alterou o perfil de expressão de IL-10, IL-12 e TNF-α. O fato do plasmídeo pAU5 ser um vetor de expressão citoplasmática, sugere que a proteína Sm14 não foi capaz de estimular a mudança de citocinas em monócitos humanos. Experimentos futuros devem investigar o papel do BCG/sm14em macrófagos maduros, quanto a indução de citocinas pró e anti-inflamatórias, TLR, bem como na indução da resposta imune adaptativa, como a apresentação antigênica, na tentativa de melhor entender a resposta imune a esta vacina candidata. / Cell cultures has been used extensively in the development of a broad range of therapeutic and prophylactic products, and are an important tool for geneticists, immunologists, vaccinologists and the pharmaceuticsindustry. In vitrocell assay has been applied as an alternative method to replace ordiminish the use of animal model in the developmental, production in vaccine test phases, with promising results. Otherwise, computational methods should amplify theuse of cell cultures tools to test candidate vaccines. The mean goal of this work was to develop an in vitro protocol using human cell line – monocytic cell THP-1, to select a vaccine prototype – strain Pasteur Mycobacterium bovisBCG expressing Schistosoma mansoniSm14-antigen (BCG/sm14). Two methodologies were employed – a flow cytometry and immunocytochemistry, to quantify the expression of IL-10, IL-12 e TNF-α. Pasteur M. bovisBCG and the strain Pasteur do M. bovisBCG containing the expression vector pAU5 (BCG/pAU5) were used as controls. Multiplicityof infection (MOI) was determined and showed a better 10 bacilli to 1 cells ratios, regarding the expression of intracellular cytokines. Sm14 protein expressionwas detected in all vaccine prototype before use. To assure that BCG/sm14was able to differentiate monocytic THP1 cell line in mature macrophage, we evaluated the proliferative ration after BCGs infection and all strain showed the ability toinduce monocytic THP1 cells maturation, diminishing in 2.0 logs the cell proliferation. No differences were seen in the uptake, intracellular persistence and plasmidial stability. Interestingly, we observe discrepant results regarding the amount of positivecells expressing cytokines detected by the two methods used, independent of which BCG was tested. The overall results obtained by the cytometric method was high than immunocytochemistry. However, beside these ambiguous results, no alteration in the IL-10, IL-12 and TNF-alfa profile was observed whenBCG/sm14was compared with BCG. These results point to the plamidial BCG construction pAU5 and its intracellular expression, suggesting no modification in the cytokine profile in human monocytic cell lines. Further experiments should be addressedto identify the role of BCG/sm14 in modulate mature macrophage and, the induction ofadaptive immune response, as antigen presentation, pro- and anti-inflammatory cytokines, TLR expression and activation, to better understating the vaccine prototype immune response.

A eficácia da associação quádrupla (DPT + BCG) foi estudada através da proteção e comparação da soro conversão das vacinas, usando como adjuvante o hidróxido de alumínio e ou BCG. A potência da vacina pertussis foi avaliada pelo teste de proteção em camundongos e o BCG pelo teste de consumo de oxigênio e de vitalidade, sendo considerada satisfatória. Sendo os toxóides diftérico e tetânico considerados proteínas inertes e estáveis, suas potências não foram determinadas depois de associadas. Os níveis de anticorpos foram determinados para difteria e tétano pela reação imunoenzimática, para vacina pertussis pela reação de imunofluorescência e para o BCG pela conversão tuberculínica. Os níveis de conversão foram satisfatórios, revelando ser possível a associação sem prejuízo para nenhum dos antígenos. A associação DPT + BCG não causou reação local ou geral significante, possibilitando uma simplificação operacional. / The efficacy of the quadruple association (DPT + BCG) was studied though protection and comparison ot the conversion serum in vaccines using aluminium hydroxide or BCG as adjuvant. Both the protection power of the Pertussis vaccine evaluated by the protection test in mice and BCG by the oxygen uptake and counts of viable particles were considered satisfactory. Being difteria and tetanus toxoids considered inert and stable proteins, their protection wasn\'t determined after their combination. The antibody levels produced by the antigens were determined by the enzyme-linked immunosorbent assay to the difteria and tetanus toxoids, by the fluorescent antibody technique to the Pertussis vaccine and by the tuberculin conversion to the BCG. The conversion levels were satisfatory and there was no damage in their association. There was no meaningful local or general reaction in this association making an operational simplification possible.

Tendo em vista os vários problemas envolvendo a metodologia correntemente utilizada para a determinação da viabilidade no controle de qualidade da vacina BCG liofilizada, foi levado a efeito um estudo a respeito do assunto. Foi procedido um estudo de métodos alternativos a serem empregados em procedimentos de controle de qualidade da vacina BCG liofilizada. Com esse objetivo foi desenhado e construído um polarógrafo de eletrodo de oxigênio constituído de eletrodo de platina e o de referência de Ag-AgCl embutido em peça única e ainda dotado de sensor de temperatura, com circuito eletrônico permitindo a medida de consumo de oxigênio. Levou-se a efeito, então, estudo comparativo de viabilidade de vacina BCG liofilizada pela medida polarográfica de consumo de oxigênio em comparação à manométrica pelo clássico método de Warburg e o método de contagem de colônias (UFC). A análise de 66 diferentes lotes de vacina BCG liofilizada produzidas pelo Instituto Butantan, São Paulo, e pela Fundação Ataulpho de Paiva, Rio de Janeiro, demonstrou que a técnica polarográfica revelou ser altamente reprodutível e muito mais conveniente que os métodos manométrico e de contagem de colônias. Verificou-se que entre o método polarográfico e o manométrico e UFC os resultados da regressão linear mostraram correlação positiva de alta intensidade e significante ao nível de a= 0,05, permitindo indicar o método polarográfico descrito, como procedimento de escolha para operações de controle de qualidade em laboratórios de produção de vacina BCG bem como em Unidades de Saúde, para determinações adequadas de viabilidade de lotes de vacinas, a serem utilizadas para fins de imunização. / Considering the several problems regarding the procedures currently employed in the assays o f the control of quality, and the viability of the freeze-dried BCG vaccines, a study on various methods used for this purpose was carried out. Aiming to introduce a much more suitable, sensitive and less time consuming method than the classic Warburg technique and the colony count test (CFU) bacteriological procedure, currently used, a new oxygen electrode polarograph was designed with the aim of employing it for the study of the viability of the freeze-dried BCG vaccine. This polarograph electrode was built in a single piece containing the platinun and theAgAgCl reference electrode besides a temperature sensor. By using this assembly a comparative study was carried on the viability of the freeze-dried BCG vaccine assayed by the polarographic method in comparison with the manometric and the CFU methods. The analysis of the viability of 66 different batches of freeze-dried BCG vaccines produced at the Butantan Institute, São Paulo, and at the Ataulpho de Paiva Foundation, Rio de Janeiro, demonstrated that the polarograpbic technique revealed to be highly reliable and much more convenient than both the manometric and the CFU methods: it has been found out that between the polarographic and the manometric and the CFU, the linear regression sbowed a high intensity positive correlation and significant at the level of a = 0,05. In this way, the polarographic method could be considered as a choice method for the control of quality procedure as well as for the establishment of the viability of the batches of vaccines to be used for human immunization in Units of the Health Department.

Submitted by Rosina Valeria Lanzellotti Mattiussi Teixeira (rosina.teixeira@unisantos.br) on 2015-05-06T18:11:47Z No. of bitstreams: 1 Luciana Trindade.pdf: 3487418 bytes, checksum: 8534f7bbe6d652914e76771ea1fd0451 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-06T18:11:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Trindade.pdf: 3487418 bytes, checksum: 8534f7bbe6d652914e76771ea1fd0451 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Leprosy remains a public health problem in Brazil. Despite the improvement in epidemiological indicators, case detection rate remains high in the country. Studies show that household contacts of leprosy patients are the group with the highest risk of developing the disease and the monitoring of contacts is among the priority actions for early diagnosis and control of disease in the country. General Objective: To evaluate the occurrence of leprosy among household contacts of patients diagnosed in 2012 in João Pessoa / PB. Method and sample: Observational study, crosssectional, whose population were household contacts of new leprosy cases diagnosed in 2012 in João Pessoa / PB. Research assistants conducted household interviews - using a pre-tested form containing the variables of interest - and they did physical examination of contacts, to search for lesions suggestive of leprosy and BCG scar. A descriptive analysis of all variables was made; the association between two qualitative variables was verified by the chi-square test; logistic regression models were applied to investigate possible risk factors; we adopted the 0.05 significance level. All ethical aspects were respected. Results: One hundred and ninety contacts related to 72 index cases were interviewed. The prevalence rate of leprosy cases among contacts was 9/191 people (4.7%). In the socioeconomic and demographic data, there was a female predominance (61.1%); the median age was 33 years; most were single (59.5%); nearly 85% had some degree of education; the most common race was white (52.6%); family income was between one and five minimum wages in almost 95% of households; the most common occupation was student (33.7%). In assessing contacts diagnosed with leprosy, leprosy borderline predominated (62.5%), multibacillary (87.5%) and the disability grade one (50.0%) were most common. On four occasions, the operational form was equal to the case and the contact. In the other, the contact showed a multibacillary, while the index case was paucibacillary. Sixty-three percent of the contacts mentioned were invited to attend the health unit, 52.1% attended and 52.4% were instructed to receive the BCG. The majority had some vaccination scar, and 73.1% had only one. Half of contacts who developed the disease had a BCG scar and the other half did not have any. Together, the factors associated with the risk of developing leprosy were the absence of vaccination with BCG and the chronic use of medications. Discussion and Conclusions: The incidence of leprosy among contacts was high and it was similar to that found by other authors. Failures were noted in the surveillance activities by health facilities. The control measures of contacts established by the Ministry of Health and the compatible strategies with local endemic variations and education of the population may bring an adequate coverage of contacts, improving detection and preventing disability and reducing the stigma related to diagnosis lateonset disease. / A hanseníase permanece como um problema de saúde pública no Brasil e, apesar da melhoria nos indicadores epidemiológicos, a detecção mantém-se alta no país. Estudos comprovam que os contatos intradomiciliares dos doentes constituem o grupo de maior risco de desenvolver a doença e a vigilância dos contatos está entre as ações prioritárias para o diagnóstico precoce e o controle da endemia no país. Objetivo geral: Avaliar a ocorrência de casos de hanseníase entre os contatos intradomiciliares dos pacientes diagnosticados em 2012, em João Pessoa/PB. Método e casuística: Estudo observacional, transversal, cuja população foram os contatos intradomiciliares dos casos novos de hanseníase diagnosticados no ano de 2012, em João Pessoa/PB. Assistentes de pesquisa realizaram entrevistas domiciliares - utilizando um formulário pré-testado, contendo as variáveis de interesse - e o exame físico dos contatos, buscando lesões sugestivas de hanseníase e cicatriz de BCG. Foi feita a análise descritiva de todas as variáveis; verificou-se a associação entre duas variáveis qualitativas pelo teste do quiquadrado; aplicaram-se modelos de regressão logística para averiguar possíveis fatores de risco; foi adotado o nível de significância de 0,05. Todos os aspectos éticos foram respeitados. Resultados: Entrevistaram-se 190 contatos relacionados a 72 casos índices. A prevalência de casos de hanseníase entre os contatos foi de 9/191 pessoas (4,7%). No perfil socioeconômico e demográfico, houve predomínio do sexo feminino (61,1%); a idade mediana foi de 33 anos; a maioria era solteira (59,5%); quase 85% apresentava algum grau de escolaridade; a raça mais comum foi a branca (52,6%); a renda familiar foi de um a cinco salários-mínimos em quase 95% das famílias; a profissão mais comum foi a de estudante (33,7%). Na avaliação dos contatos diagnosticados com hanseníase, predominou a forma clínica dimorfa (62,5%), a operacional multibacilar (87,5%) e o grau um de incapacidade física (50,0%). Em quatro situações, a forma operacional foi igual para o caso e o contato. Nas demais, o contato apresentou uma forma multibacilar, enquanto o caso índice era paucibacilar. Sessenta e três por cento dos contatos referiram que foram convidados a comparecer à unidade de saúde, 52,1% compareceram e 52,4% foram orientados a receber a BCG. A maioria apresentava alguma cicatriz vacinal, sendo que 73,1% apresentavam apenas uma. Metade dos contatos que desenvolveu a doença tinha uma cicatriz vacinal e a outra metade não apresentava nenhuma. Os fatores que, em conjunto, associaram-se ao risco de desenvolver a hanseníase foram a ausência da vacinação BCG e o uso crônico de medicações. Discussão e Conclusões: A ocorrência de hanseníase entre os contatos do estudo foi elevada e semelhante à encontrada por outros autores. Foram percebidas falhas nas ações de vigilância desenvolvidas nas unidades de saúde. As medidas de controle dos contatos estabelecidas pelo Ministério da Saúde, além de estratégias compatíveis com as variações locais de endemicidade e de escolaridade da população, poderão trazer uma cobertura adequada dos contatos, melhorando a detecção e prevenindo incapacidades e diminuindo o estigma relacionado ao diagnóstico tardio da doença.

Tendo em vista os vários problemas envolvendo a metodologia correntemente utilizada para a determinação da viabilidade no controle de qualidade da vacina BCG liofilizada, foi levado a efeito um estudo a respeito do assunto. Foi procedido um estudo de métodos alternativos a serem empregados em procedimentos de controle de qualidade da vacina BCG liofilizada. Com esse objetivo foi desenhado e construído um polarógrafo de eletrodo de oxigênio constituído de eletrodo de platina e o de referência de Ag-AgCl embutido em peça única e ainda dotado de sensor de temperatura, com circuito eletrônico permitindo a medida de consumo de oxigênio. Levou-se a efeito, então, estudo comparativo de viabilidade de vacina BCG liofilizada pela medida polarográfica de consumo de oxigênio em comparação à manométrica pelo clássico método de Warburg e o método de contagem de colônias (UFC). A análise de 66 diferentes lotes de vacina BCG liofilizada produzidas pelo Instituto Butantan, São Paulo, e pela Fundação Ataulpho de Paiva, Rio de Janeiro, demonstrou que a técnica polarográfica revelou ser altamente reprodutível e muito mais conveniente que os métodos manométrico e de contagem de colônias. Verificou-se que entre o método polarográfico e o manométrico e UFC os resultados da regressão linear mostraram correlação positiva de alta intensidade e significante ao nível de a= 0,05, permitindo indicar o método polarográfico descrito, como procedimento de escolha para operações de controle de qualidade em laboratórios de produção de vacina BCG bem como em Unidades de Saúde, para determinações adequadas de viabilidade de lotes de vacinas, a serem utilizadas para fins de imunização. / Considering the several problems regarding the procedures currently employed in the assays o f the control of quality, and the viability of the freeze-dried BCG vaccines, a study on various methods used for this purpose was carried out. Aiming to introduce a much more suitable, sensitive and less time consuming method than the classic Warburg technique and the colony count test (CFU) bacteriological procedure, currently used, a new oxygen electrode polarograph was designed with the aim of employing it for the study of the viability of the freeze-dried BCG vaccine. This polarograph electrode was built in a single piece containing the platinun and theAgAgCl reference electrode besides a temperature sensor. By using this assembly a comparative study was carried on the viability of the freeze-dried BCG vaccine assayed by the polarographic method in comparison with the manometric and the CFU methods. The analysis of the viability of 66 different batches of freeze-dried BCG vaccines produced at the Butantan Institute, São Paulo, and at the Ataulpho de Paiva Foundation, Rio de Janeiro, demonstrated that the polarograpbic technique revealed to be highly reliable and much more convenient than both the manometric and the CFU methods: it has been found out that between the polarographic and the manometric and the CFU, the linear regression sbowed a high intensity positive correlation and significant at the level of a = 0,05. In this way, the polarographic method could be considered as a choice method for the control of quality procedure as well as for the establishment of the viability of the batches of vaccines to be used for human immunization in Units of the Health Department.

A eficácia da associação quádrupla (DPT + BCG) foi estudada através da proteção e comparação da soro conversão das vacinas, usando como adjuvante o hidróxido de alumínio e ou BCG. A potência da vacina pertussis foi avaliada pelo teste de proteção em camundongos e o BCG pelo teste de consumo de oxigênio e de vitalidade, sendo considerada satisfatória. Sendo os toxóides diftérico e tetânico considerados proteínas inertes e estáveis, suas potências não foram determinadas depois de associadas. Os níveis de anticorpos foram determinados para difteria e tétano pela reação imunoenzimática, para vacina pertussis pela reação de imunofluorescência e para o BCG pela conversão tuberculínica. Os níveis de conversão foram satisfatórios, revelando ser possível a associação sem prejuízo para nenhum dos antígenos. A associação DPT + BCG não causou reação local ou geral significante, possibilitando uma simplificação operacional. / The efficacy of the quadruple association (DPT + BCG) was studied though protection and comparison ot the conversion serum in vaccines using aluminium hydroxide or BCG as adjuvant. Both the protection power of the Pertussis vaccine evaluated by the protection test in mice and BCG by the oxygen uptake and counts of viable particles were considered satisfactory. Being difteria and tetanus toxoids considered inert and stable proteins, their protection wasn\'t determined after their combination. The antibody levels produced by the antigens were determined by the enzyme-linked immunosorbent assay to the difteria and tetanus toxoids, by the fluorescent antibody technique to the Pertussis vaccine and by the tuberculin conversion to the BCG. The conversion levels were satisfatory and there was no damage in their association. There was no meaningful local or general reaction in this association making an operational simplification possible.

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