Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rachel Melo Ribeiro.pdf: 542816 bytes, checksum: 97d23f29c7aaa773c7cec34818b5ed2f (MD5) Previous issue date: 2007-04-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work was carried out to evaluate the effect of sheets of Syzygium jambolanum DC (jambolan) in blood pressure (BP) and reactivity of vascular smooth muscle and non-vascular of normotensive rats. The extract hidroalcóolico (EH; ethanol 70%) was obtained by maceration from the dried leaves of Syzygium jambolanum DC to evaluate blood pressure in conscious rats and preparations isolated from deferent duct or thoracic aorta of rats. The EH was submitted the division with solvent using chloroform / water (2:1 v / v) to obtain the fractions chloroform (FC) and water (FMD) and assessment of vascular reactivity-ring mesenteric artery. The oral administration of EH (0.1 g / kg / day or 0.2 g / kg / day) induced a significant reduction of the PA in rats with normal conscious. In preparations of duct deferentes isolated from rats, EH 0.05, 0.1 and 0.25 mg / ml reduced the effect maximum (Emax) induced by norepinephrine (NE) at 22.2, 45.4 and 81.5%, respectively. In ducts deferentes previously contracted with the CE75% noradrenaline (3x10-4 M) the EH (0.2 to 14 mg / ml) induced relaxation, dependent on concentration, which reached 69%, with the largest concentration. In arteries aorta thoracic isolated from rats, EH 0025, 0.05 and 0.1 mg / ml moved to the right, the cumulative concentration-response curves of calcium (Ca + +) at 7.7, 2.8 and 5.2 times, respectively. This effect of EH was accompanied by a reduction in the Emax 30.5; 56.4 and 78.4% respectively. The FA (0.1, 0.25 and 0.5 mg / ml) reduced the effect maximum (Emax) of 6.5 in NE, 15.7 and 51.9% visited the curve to the right in 2.0, 2.8 and 3.5 times respectively. The FC 0.5 mg / ml reduced the Emax of 25.8% in NE. The FC (0.1 and 0.25 mg / ml) reduced the Emax of concentration-response curve cumulative calcium (Ca + +) at 21.1 and 47.1% and moved to right on 3 and 4 times, respectively. In addition, the FC (0.01 to 1.0 mg / ml) induced relaxation, dependent on concentration, mesenteric artery pre-contracted with calcium (≅ EC75), the maximum concentration (1mg/ml), in the absence or presence of the blocker of potassium channels (Tetraetilamônio-TEA), 97.4 and 99.6% respectively. Together, these results suggest that the effect of lowering the EH Syzygium DC can jambolanum be related to activity relaxing blood presented by the FC in rings of artery mesenteric pre-contracted with calcium. Thus this work contributes to hypotensive confirmation of the activity of the leaves of Syzygium jambolanum DC Maranhão employed by the population. / O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar o efeito das folhas de Syzygium jambolanum D.C. (jambolão) na pressão arterial (PA) e na reatividade da musculatura lisa vascular e não-vascular de ratos normotensos. O extrato hidroalcóolico (EH; etanol 70%) foi obtido por maceração a partir das folhas secas de Syzygium jambolanum D.C. para avaliação da pressão arterial de ratos conscientes e em preparações isoladas de ducto deferente ou aorta torácica de ratos. O EH foi submetido a fracionamento com solvente usando clorofórmio/água (2:1 v/v) para obtenção das frações clorofórmica (FC) e aquosa (FA) e avaliação da reatividade vascular de anéis de artéria mesentérica. A administração oral de EH (0,1 g/kg/dia ou 0,2 g/kg/dia) induziu uma significante redução da PA em ratos conscientes normotensos. Em preparações de ducto deferentes isolados de ratos, o EH 0,05; 0,1 e 0,25 mg/ml reduziu o efeito máximo (Emax) induzido pela noradrenalina (NE) em 22,2; 45,4 e 81,5%, respectivamente. Em ductos deferentes previamente contraídos com a CE75% de noradrenalina (3x10-4 M) o EH (0,2 a 14 mg/ml) induziu relaxamento, dependente de concentração, que atingiu 69%, com a maior concentração utilizada. Em artérias aorta torácica isoladas de ratos, o EH 0,025; 0,05 e 0,1 mg/ml deslocaram, para a direita, as curvas concentração-resposta cumulativas de cálcio (Ca++) em 7,7; 2,8 e 5,2 vezes, respectivamente. Este efeito do EH foi acompanhado pela redução do Emax em 30,5; 56,4 e 78,4%, respectivamente. A FA (0,1; 0,25 and 0,5 mg/ml) reduziu o efeito máximo (Emax) da NE in 6,5; 15,7 e 51,9% deslocaram a curva para a direita em 2,0; 2,8 e 3,5 vezes, respectivamente. A FC 0,5 mg/ml reduziu o Emax da NE em 25,8%. A FC (0,1 e 0,25 mg/ml) reduziu o Emax da curva concentração-resposta cumulativa de cálcio (Ca++) em 21,1 e 47,1% e deslocou para a direita em 3 e 4 vezes, respectivamente. Em adição, a FC (0,01 a 1,0 mg/ml) induziu relaxamento, dependente de concentração, em artéria mesentérica pré-contraída com cálcio (≅EC75), na máxima concentração (1mg/ml), na ausência ou presença do bloqueador dos canais de potássio (Tetraetilamônio -TEA), de 97,4 e 99,6%, respectivamente. Em conjunto, estes resultados sugerem que o efeito hipotensor do EH de Syzygium jambolanum D.C. pode estar relacionado à atividade vasorrelaxante apresentada pela FC em anéis de artéria mesentérica pré-contraídas com cálcio. Desta forma o presente trabalho contribui para a confirmação da atividade hipotensora das folhas de Syzygium jambolanum D.C. empregada pela população maranhense.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3977582 bytes, checksum: 6a5b8750e2be83e492617d4f9954fa26 (MD5) Previous issue date: 2011-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: The Transient Receptor Potential (TRP) superfamily of cation channels is remarkable since it displays greater diversity in activation mechanisms, and are targets for plant-derived compounds. Aim: To investigate the role of TRP channels in the vasorelaxant response of rotundifolone in the superior mesenteric artery from Lyon Normotensive (LN) rats. Methods and Results: Endothelium-denuded artery rings were suspended by platinum hooks for isometric tension recordings. In nominally free-Ca2+ medium, the rings were submitted to successive phenylephrine (Phe) contractions to deplete Ca2+- stores and contracted to CaCl2 (10-2 M). The maximum response (MR) of CaCl2-contractions in presence of nifedipine (10-6 M) (MR = 31.66 ± 2.27 %) were significantly attenuated in the presence of nifedipine plus rotundifolone (3 x 10-4 and 3 x 10-3 M) (MR = 9.30 ± 2.38 and 1.12 ± 0.31 %) or nifedipine plus menthol (10-4 and 10-3 M) (MR = 10.96 ± 1.34 and 1.52 ± 0.82 %). Rotundifolone caused relaxation of vessels pre-contracted with Phe (MR = 100.32 ± 3.88 %; pD2 = 3.59 ± 0.04, n = 6). The vasorelaxant effect induced by rotundifolone was significantly atenuated in the presence of Gd3+ (10-4 M) (MR = 83.74 ± 5.71 %; pD2 = 3.15 ± 0.06); Gd3+ (2.25 x 10-5 or 2 x 10- 6 M) (pD2 = 3.18 ± 0.06 and 3.32 ± 0.03 %) or BCTC (MR = 76.30 ± 2.15 %; pD2 = 3.46 ± 0.04), but no in the presence of ruthenium red, La3+ or Mg2+, nor after TRPV1 desensitization with capsaicin. Menthol caused relaxation of vessels pre-contracted with Phe (MR = 105.07 ± 3.07 %; pD2 = 3.72 ± 0.02). The vasorelaxant effect induced by menthol was significantly potentiated in the presence of ruthenium red (10-5 M), a non-selective TRP channels blocker (pD2 = 4.12 ± 0,04, n = 6). Also, the vasorelaxant response of menthol was significantly attenuated in the presence of La3+ (8 x 10-5 M), non-selective TRP channels blocker (MR = 89.05 ± 1.61 %); Mg2+ (2.25 x 10-3 M), TRPM3, 6 and 7 selective blocker (MR = 90.76 ± 2.94 %); Gd3+ (10-4 M), TRPV4, TRPC1, 3 and 6, TRPM3 and 4 channels blocker (MR = 73.82 ± 5.44 %); Gd3+ (2.25 x 10-5 M), TRPC3 and 6, TRPV4 channels blocker (MR = 88.04 ± 2.33 %); Gd3+ (2 x 10- 6 M), TRPC6 selective blocker (MR = 89,30 ± 3,61 %) or BCTC (2 x 10-6 M), TRPM8 and TRPV1 channels blocker (MR = 66.77 ± 6.05 %), and after TRPV1 desensitization with capsaicin (10-5 M) (RM = 88.96 ± 4.50). The basal tension was reduced by change in the thermostat temperature from 37 ºC to 25ºC and 18ºC (MR = 21.15 ± 0.78 and 28.84 ± 1.03 %). This response was significantly potentiated by rotundifolone (3 x 10-3 M) (MR = 28.01 ± 1.81 and 38.45 ± 1.98 %) or menthol (10-3 M) (MR = 29.87 ± 1.25 and 43.03 ± 2.22 %). In the way similar to menthol, the effects induced by rotundifolone were attenuated in free-Ca2+ medium plus EGTA (MR = 20.42 ± 1.97 and 30.90 ± 2.58 %) or in the presence of BCTC (MR = 17.05 ± 1.94 and 26.48 ± 3.39 %), but not when the vessels were pre-treated with ruthenium red or capsaicin. The RNAm and the protein of the TRPM8 channel are expressed in the superior mesenteric artery from LN rats. Conclusions: These data suggest that rotundifolone induces concentration-dependent relaxation in the mesenteric artery due to inhibition of ROC and SOC channels (probably TRPC1 and TRPC6) and activation of TRPM8 channels. / Introdução: A superfamília Potencial Receptor Transiente (TRP) de canais catiônicos se destaca por exibir uma grande diversidade de mecanismos de ativação, e são alvos de compostos derivados de plantas. Objetivo: Investigar o papel de canais TRP na resposta vasorrelaxante de rotundifolona em artéria mesentérica superior de ratos Normotenso de Lyon (LN). Métodos e Resultados: Anéis de artéria sem endotélio foram suspensos em hastes metálicas para registro de tensão isométrica. Em meio nominalmente sem Ca2+, os anéis foram submetidos a contrações sucessivas com FEN para depleção dos estoques de Ca2+ e contraídos com CaCl2 (10-2 M). O efeito máximo (Emáx) das contrações com CaCl2 na presença de nifedipino (10-6 M) (Emáx = 31,66 ± 2,27 %) foi significativamente atenuado na presença de nifedipino mais rotundifolona (3 x 10-4 e 3 x 10-3 M) (Emáx = 9,30 ± 2,38 e 1,12 ± 0,31 %) e nifedipino mais mentol (10-4 e 10-3 M) (Emáx = 10,96 ± 1,34 and 1,52 ± 0,82 %). Rotundifolona causou relaxamento de vasos pré-contraídos com FEN (Emáx = 100,32 ± 3,88 %; pD2 = 3,59 ± 0,04, n = 6). O efeito vasorrelaxante induzido por rotundifolona foi signigficativamente atenuado na presença de Gd3+ (10-4M) (Emáx = 83,74 ± 5,71 %; pD2 = 3,15 ± 0,06); Gd3+ (2,25 x 10-5 ou 2 x 10-6 M) (pD2 = 3,18 ± 0,06 e 3,32 ± 0,03 %) ou BCTC (Emáx = 76,30 ± 2,15 %; pD2 = 3,46 ± 0,04), mas não na presença de vermeho de rutênio, La3+ or Mg2+, nem após dessensibilização do TRPV1 com capsaicina. Mentol também causou o relaxamento de vasos pré-contraídos com FEN (Emáx = 105,07 ± 3,07 %; pD2 = 3,72 ± 0,02). O efeito vasorrelaxante induzido por mentol foi significativamente potencializado na presença de vermelho de rutênio (10-5 M), um bloqueador não seletivo de canais TRP (pD2 = 4,12 ± 0,04, n = 6) e significativamente atenuada na presença de La3+ (8 x 10-5 M), bloqueador não seletivo de canais TRP (Emáx = 89,05 ± 1,61 %); Mg2+ (2,25 x 10-3 M), bloqueador seletivo dos canais TRPM3, 6 e 7 (Emáx = 90,76 ± 2,94 %); Gd3+ (10-4 M), bloqueador de canais TRPV4, TRPC1, 3 and 6, TRPM3 and 4 (Emáx = 73,82 ± 5,44 %); Gd3+ (2,25 x 10-5 M), bloqueador de canais TRPC3 and 6, TRPV4 (Emáx = 88,04 ± 2,33 %); Gd3+ (2 x 10-6 M), bloqueador seletivo do TRPC6 (Emáx = 89,30 ± 3,61 %) ou BCTC (2 x 10-6 M), bloqueador dos TRPM8 e TRPV1 (Emáx = 66,77 ± 6,05 %), e após a dessensibilização do TRPV1 com capsaicina (10-5 M) (Emáx = 88,96 ± 4,50). A tensão basal foi reduzida por mudança na temperature do banho de 37 ºC para 25ºC e 18ºC (Emáx = 21,15 ± 0,78 e 28,84 ± 1,03 %). Essa resposta foi significativamente potencializada por rotundifolona (3 x 10-3 M) (Emáx = 28,01 ± 1,81 e 38,45 ± 1,98 %) ou mentol (10-3 M) (Emáx = 29,87 ± 1,25 e 43,03 ± 2,22 %). Semelhante ao mentol, os efeitos induzidos por rotundifolona foram atenuados em meio sem Ca2+ mais EGTA (Emáx = 20,42 ± 1,97 e 30,90 ± 2,58 %) ou na presença de BCTC (Emáx = 17,05 ± 1,94 e 26,48 ± 3,39 %), mas não quando os vasos foram pré-tratados com vermelho de rutênio ou capsaicina. O RNAm e a proteína do canal TRPM8 são expressos em artéria mesentérica de ratos LN. Conclusões: Esses dados sugerem que rotundifolona induz relaxamento dependente de concentração em artéria mesentérica devido à inibição de canais ROC e SOC (provavelmente TRPC1 e TRPC6) e ativação de canais TRPM8.

LEITÃO, Cíntia Camurça Fernandes. Caracterização estrutural parcial e biológica de duas lectinas do gênero Canavalia. 2015. 80 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Vitor Campos (vitband@gmail.com) on 2016-09-01T23:25:08Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_ccfleitao.pdf: 6460190 bytes, checksum: 6ff95b685ea2f9836771bc15fb9edf9f (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-09-02T21:25:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_ccfleitao.pdf: 6460190 bytes, checksum: 6ff95b685ea2f9836771bc15fb9edf9f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T21:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_ccfleitao.pdf: 6460190 bytes, checksum: 6ff95b685ea2f9836771bc15fb9edf9f (MD5) Previous issue date: 2015 / Lectins are proteins that bind carbohydrates specifically and reversibly. The legume lectins represent the best studied and established group, from the point of view of physical-chemical and biological and structural, where a well-studied group of these proteins involves lectin obtained from members of the subtribe Diocleinae. Lectins Diocleinae have a high degree of structural similarity, but the same was not true regarding biological activities. This variability, as a rule, is in the detail that can be analyzed in structures based studies. In this context, multiple cardiovascular disease and inflammatory processes, particularly chronic and recurrent nature, arouse the interest of the scientific community because they require a wider range of drugs for therapeutic alternatives. In this sense, they become important research seeking new compounds with vasorelaxant and anti-inflammatory action. The present paper describes the partial structural and biological characterization of two lectins present in Canavalia virosa and Canavalia oxyphylla seeds, belonging to the family Leguminosae, subfamily Papilionoideae, Phaseoleae tribe, subtribe Diocleinae. The lectin from Canavalia virosa seeds (ConV) was purified in a single step by affinity chromatography on mannose-Sepharose 4B column. ConV strongly agglutinated rabbit erythrocytes and was inhibited by monosaccharide (D-mannose, D-glucose and α-methyl-D-manosídeo) and glycoproteins (fetuin and ovalbumin). SDS-PAGE revealed three bands, corresponding to three chains (α, β, γ and) confirmed by ESI mass spectrometry with masses of 25.480 ± 2 Da, 12.864 ± 1 Da and 12,633 ± 1 Da, respectively. The hemagglutination activity of ConV is great in pH 7.0 to 9.0, stable at a temperature of 80° C, and is not affected by EDTA. ConV showed no toxicity against Artemia sp. and relaxed the endothelized rat aorta, with the participation of the lectin domain. In our tests, the lectin immobilized on CNBr-Sepharose was able to bind 0.8 mg of ovalbumin by chromatography, allowing the use of ConV as a tool to capture and purification of glycoproteins. Moreover, the lectin from Canavalia oxyphylla (CoxyL) was purified in a single step by affinity chromatography on Sephadex G-50 column. SDS-PAGE showed that pure lectin consists of a major band of 30 kDa (α chain) and two minor components (β and γ chains) of 16 and 13 kDa, respectively. These data were further confirmed by mass spectrometry via electrospray ionization. Compared to the average molecular weight of the α chains, the partial amino acid sequence obtained corresponds to about 45% of the total sequence CoxyL. CoxyL showed hemagglutinating activity was specifically inhibited by monosaccharide (D-glucose, D-mannose and methyl-α-D-manosídeo) and glycoproteins (fetuin and ovalbumin). Furthermore, CoxyL proved to be heat stable at 60° C, and its activity is optimal at pH 7.0. CoxyL caused toxicity in Artemia sp. and induced paw edema in rats. / Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos de forma específica e reversível. As lectinas de leguminosas representam o grupo mais bem estudado e estabelecido, tanto do ponto de vista de caracterização físico-química e biológica como estrutural, onde um grupo bem estudado destas proteínas envolve lectinas obtidas de membros da subtribo Diocleinae. As lectinas de Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade estrutural, porém o mesmo não se observa quanto às atividades biológicas. Esta variabilidade, via de regra, está em detalhes que podem ser analisados em estudos baseados em estruturas. Neste contexto, múltiplos processos patológicos cardiovasculares e inflamatórios, principalmente de natureza crônica e recorrente, despertam o interesse da comunidade científica por requererem uma maior variedade de fármacos para alternativas terapêuticas. Neste sentido, tornam-se importantes pesquisas que busquem novos compostos, com ação vasorrelaxante e anti-inflamatória. Assim, o presente trabalho descreve a caracterização estrutural parcial e biológica de duas lectinas presentes em sementes de Canavalia virosa e Canavalia oxyphylla, pertencentes à família Leguminosae, subfamília Papilionoideae, tribo Phaseoleae, subtribo Diocleinae. A lectina de sementes de Canavalia virosa (ConV) foi purificada em uma única etapa através de cromatografia de afinidade em coluna Sepharose-mannose 4B. ConV aglutinou fortemente eritrócitos de coelho e foi inibida por monossacarídeos (D-manose, D-glicose e α-metil-D-manosídeo) e glicoproteínas (ovalbumina e fetuína). SDS-PAGE revelou três bandas, correspondentes a três cadeias (α, β, e γ) confirmadas por espectrometria de massas ESI com massas de 25,480±2 Da, 12,864±1 Da e 12,633±1 Da, respectivamente. A atividade hemaglutinante da ConV é ótima nos pH 7.0 a 9.0, estável a uma temperatura de 80 ºC, e não é afetada pelo EDTA. ConV não demonstrou toxicidade contra náuplios de Artemia sp. e relaxou a aorta endotelizada de ratos, com a participação do domínio da lectina. Em nossos testes, a lectina imobilizada em CNBr-Sepharose foi capaz de se ligar a 0,8 mg de ovalbumina por cromatografia, permitindo o uso de ConV como uma ferramenta para a captura e purificação de glicoproteínas. Por outro lado, a lectina de Canavalia oxyphylla (CoxyL) foi purificada em um único passo através de cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G-50.SDS-PAGE mostrou que a lectina pura consiste de uma principal banda de 30 kDa (cadeia α) e dois componentes menores (cadeias β e γ) de 16 e 13 kDa, respectivamente. Estes dados foram adicionalmente confirmados por espectrometria de massas por ionização por eletropulverização. Em comparação com a massa molecular média das cadeias α, a sequência parcial de aminoácidos obtida corresponde a aproximadamente 45% da sequência total de CoxyL. CoxyL apresentou atividade hemaglutinante que foi especificamente inibida por monossacarídeos (D-glicose, D-manose, e α-metil-D-manosídeo) e glicoproteínas (ovalbumina e fetuína). Além disso, CoxyL mostrou ser termoestável a 60° C, e sua atividade é ótima no pH 7,0. CoxyL causou toxicidade em náuplios de Artemia sp. e induziu edema de pata em ratos.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4258055 bytes, checksum: ee74f99507084e08e3e09b960fa1630d (MD5) Previous issue date: 2014-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Previous studies have show that the organic nitrate tetrahydrofurfuryl (NTHF) induces vasorelaxation in mesenteric artery rings with involvement of the NO-sGC-PKG pathway. This study evaluated the action of NTHF on cardiovascular parameters in spontaneously hypertensive (SHR) and Wistar Kyoto (WKY) rats, investigating: the nitric oxide (NO) release, acute toxicity, the NTHF effect on blood pressure and heart rate, its vasorelaxant effect and its ability to induce tolerance. NTHF increased NO levels in rat aortic smooth muscle cells (SMC) and cardiomyocites. In acute toxicity studies, a high single dose from NTHF showed low toxicity. In normotensive animals, NTHF induced hypotension after oral administration of NTHF, and bradycardic and hypotensive effects following administration of this nitrate. These results were similar that found using nitroglycerine (NTG). In addition, these effects were not altered by pretreatment with hexamethonium, a ganglionic blocker. However the treatment with methylene blue, a sGC inhibitor, promoted attenuation of both hypotensive and bradycardic effects, suggesting the involvement of the sGC pathway in these effects. In mesenteric artery rings from SHR and WKY rats precontracted with phenylephrine, NTHF induced concentration dependent vasodilatation in both intact and removed endothelium. This result suggests that the vasorelaxant effect is an endothelium derived relaxation factors (EDRFs) independent mechanism. Furthermore, in the presence of NO° scavenging (PTIO) or ODQ, a sGC inhibitor, the vasorelaxation induced by NTHF was decreased, indicating the involvement of NO-sGC pathway in this response in both SHR and WKY. In the presence of cyanamide, an aldehyde dehydrogenase (mtALDH) inhibitor, the vasorelaxant effect was diminished, suggesting that NTHF is metabolized by this enzyme. After exposure to depolarizing agent KCl, the nitrate effect was significantly attenuated, a characteristic of substances which acts by K+ channels activation. This effect was confirmed after using tetraetylamonium (TEA), a K+ channels inhibitor. In normotensive rats treated with NTHF, the acute administration of NTHF promoted bradycardia and hypotension were are not changed in relation to which those observed in vehicle-treated animals, suggesting that organic nitrate did not induce in vivo tolerance. In vitro tolerance was evaluated in both mesenteric artery rings from animals pretreated with NTHF as well as rings previously exposed to isolated concentrations of NTHF. The vasorelaxant effect was not modified by pretreatment or exposure to NTHF, unlike that observed with NTG. In rings treated with NTG, the effect induced by NTHF was not modified, indicating that NTHF did not promote in vitro tolerance. The results demonstrated that NTHF promoted hypotensive and bradycardic effects in both SHR and WKY rats, with involvement of sGC enzyme; NTHF induced a vasorelaxant effect with participation of NO-sGC-PKG pathway and K+ channels. These effects seem to be mediated by NO release from cardiomyocites and SMC. Finally this study will help to advance the field towards clinical trials, since NTHF caused low toxicity and this nitrate was devoid of in vivo and in vitro tolerance. / Estudos anteriores demonstraram que o nitrato orgânico tetra-hidrofurfurílico (NTHF), promoveu efeito vasorrelaxante em artéria mesentérica de ratos normotensos, com envolvimento da via NO-sGC-PKG. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos cardiovasculares induzidos pelo NTHF em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e normotensos Wistar Kyoto (WKY), investigando: a liberação de óxido nítrico (NO), a toxicidade aguda, o efeito do NTHF sobre pressão arterial (PA) e frequência cardíaca (FC), o efeito vasodilatador desse composto, além de sua capacidade em induzir tolerância. Em células musculares lisas vasculares (CMLV) de aorta de rato e cardiomiócitos, NTHF promoveu aumento dos níveis de NO. Na avaliação da toxicidade aguda, NTHF foi administrado por via oral numa dose elevada, e nestas condições o nitrato orgânico apresentou baixa toxicidade. Em animais normotensos, NTHF promoveu hipotensão quando administrado por via oral e efeito hipotensor e bradicárdico após a administração intravenosa, semelhante ao observado pelo gliceril trinitrato (GTN). Este efeito não foi alterado pelo prétratamento com hexametônio, um bloqueador nicotínico ganglionar. Porém, o tratamento com azul de metileno, inibidor da enzima ciclase de guanilil solúvel (sGC), promoveu diminuição da resposta, indicando a participação da sGC nos efeitos hipotensor e bradicárdico. Em animais WKY e SHR NTHF promoveu efeito hipotensor e bradicárdico. Em anéis de artéria mesentérica de ratos SHR e WKY, pré-contraídos com fenilefrina, NTHF promoveu vasodilatação concentraçãodependente, com endotélio vascular intacto ou removido, sugerindo um efeito independente da liberação dos fatores relaxantes derivados do endotélio (EDRFs). Na presença do sequestrador de NO radicalar (PTIO) ou do inibidor seletivo da sGC (ODQ), o efeito vasorrelaxante do NTHF foi atenuado, indicando a participação da via NO-sGC tanto em SHR quanto WKY. Na presença de cianamida, um inibidor da enzima aldeído desidrogenase mitocondrial (mtALDH), o efeito vasorrelaxante foi atenuado, indicando que o nitrato é metabolizado por esta enzima. Após a exposição ao agente despolarizante KCl e após adição de tetraetilamônio (TEA), inibidor de canais para K+, o efeito do NTHF foi diminuído. Em animais normotensos prétratados com NTHF, a administração aguda de NTHF hipotensão e bradicardia, comparáveis às observadas no grupo controle, sugerindo que o NTHF não induz tolerância in vivo. A tolerância in vitro foi avaliada em artéria mesentérica de animais tratados previamente com NTHF, quando previamente expostos a concentrações isoladas do nitrato. O efeito vasorrelaxante não foi modificado pelo tratamento ou exposição prévia ao NTHF. Efeito contrário ao obtido com GTN. Em anéis prétratados com GTN, o efeito induzido pelo NTHF não foi modificado, sugerindo que o nitrato em estudo não promove tolerância in vitro. Os resultados demonstram que o NTHF promoveu efeito hipotensor e bradicárdico em animais normotensos e hipertensos, com envolvimento da enzima sGC; apresentou efeito vasorrelaxante, com participação da via NO-sGC-PKG e também de canais para K+. Esses efeitos parecem ser mediados por meio da liberação de NO tanto em CMLV quanto em cardiomiócitos. Por fim, NTHF evidencia um potencial clínico por apresentar baixa toxicidade e não induzir tolerância in vivo e in vitro

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-11T20:45:46Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lanussy Porfiro de Oliveira - 2014.pdf: 1478536 bytes, checksum: 2646f221282c9b288ef2da403ef374d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-12T09:40:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lanussy Porfiro de Oliveira - 2014.pdf: 1478536 bytes, checksum: 2646f221282c9b288ef2da403ef374d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-12T09:40:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lanussy Porfiro de Oliveira - 2014.pdf: 1478536 bytes, checksum: 2646f221282c9b288ef2da403ef374d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Inflammation is a complex process that aims to protect the body eliminating the harmful agent and to promote tissue repair is characterized by classic signs: pain, heat, redness and swelling as a result of failure to resolve the inflammatory process may occur loss of function. Control of pain and inflammation leads to the search for new drugs both analgesic and antiinflammatory drugs with good efficacy to aid in the treatment of these deseases. The aim of this study was to evaluate the pharmacological effects of two pyrazole derivatives. In acute nociception tests LQFM 020 (9, 17.5 and 35 mg/kg) and LQFM 039 (17.5, 35 and 70 mg/kg) reduced the number of writhing dose dependent manner to 53, 48 and 35; and 57, 52, 42, respectively, while the control group the number of writhes was 88. In the formalin test this antinociceptive effect was confirmed by the reduction in time reactivity to pain in both test phases, the time in the control group was 78 and 72s in the first phase and 150 and 128s in the second phase, with LQFM for 020 and 039 LQFM in the first phase was to reduce 50 and 47s and the second phase to 97 and 74s respectively. In bending the tail the groups of mice treated with LQFM 020 and LQFM 039 test were not able to increase the latency to thermal stimulus demonstrated that the analgesic effect does not involve central mechanisms. Furthermore, the results of the enzymatic activity of cyclooxygenase (COX) and phospholipase (PLA2) in vitro tests indicated no part of the mechanism of action involved in the activity of these compounds. In vascular reactivity tests LQFM 020 promoted vasorelaxant effect presenting maximum effect (Emax) of 93% in aortic preparations with endothelium and maximum effect (Emax) of 91% without endothelium . LQFM 039 also promoted vasorelaxant effect with maximum effect (Emax) of 80% when tested in preparations with endothelium and maximum effect (Emax) of 76% without endothelium, given this result, we investigated the mechanism of action of these compounds. Our results showed that LQFM 020 and LQFM 039 demonstrated the involvement of NO/cGMP pathway and suggest also the involvement of sensitive Ca2+ channels in the plasma membrane voltage. / A inflamação é um processo complexo que tem como objetivo proteger o organismo, eliminando o agente lesivo, e promover a reparação tecidual sendo caracterizada por: dor, calor, rubor, edema e como consequência da não resolução do processo inflamatório pode ocorrer a perda da função. O controle da dor e inflamação leva a busca por novos fármacos tanto analgésicos quanto anti-inflamatórios com boa eficácia para auxiliar no tratamento destas doenças. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos farmacológicos de dois derivados pirazólicos. Nos testes de nocicepção aguda, LQFM 020 (9, 17,5 e 35 mg/kg) e LQFM 039 (17,5, 35 e 70 mg/kg), reduziram o número de contorções abdominais de maneira dose dependente para 53, 48 e 35 e para 57, 52 e 42, respectivamente, enquanto que no grupo controle o número de contorções foi de 88. No teste da formalina este efeito antinociceptivo foi confirmado com a redução no tempo de reatividade à dor nas duas fases do teste, o tempo no grupo controle foi de 78 e 72s na primeira fase e de 150 e 128s na segunda fase sendo que para LQFM 020 e LQFM 039 na primeira fase a redução foi para 50 e 47s e na segunda fase para 97 e 74s respectivamente. No teste de flexão de cauda os grupos de camundongos tratados com LQFM 020 e LQFM 039 não aumentaram a latência ao estímulo térmico demonstrando que o efeito analgésico não envolve mecanismos centrais. Os resultados dos testes de atividade enzimática de cicloxigenase (COX) e fosfolipase (PLA2) in vitro sugere que a inibição destas enzimas não faz parte do mecanismo de ação envolvido na atividade desses compostos. Nos testes de reatividade vascular LQFM 020 promoveu efeito vasorrelaxante apresentando efeito máximo (Emax) de 93% em preparações de aorta com endotélio e efeito máximo (Emax) de 91% sem o endotélio. LQFM 039 também promoveu efeito vasorrelaxante com efeito máximo (Emax) de 80% quando testadas em preparações com endotélio e efeito máximo (Emax) de 76% sem o endotélio, dado este resultado, foi investigado o mecanismo de ação desses compostos. Os resultados mostraram que LQFM 020 e 039 LQFM demonstram o envolvimento da via NO / GMPc e também sugerem o envolvimento de canais de Ca2+ sensíveis à voltagem na membrana plasmática.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-16T15:45:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-17T10:26:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-17T10:26:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniela Medeiros Lobo de Andrade - 2014.pdf: 1412697 bytes, checksum: 19e6d4fab16722ee831616d29065c6dc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The research and the use of medicinal plants as therapeutic agents has been increasing in recent years and the jabuticaba (Myrciaria cauliflora) has occupied a favorable place in this segment by presenting biological properties due to their high antioxidant activity due to the presence of phenolic compounds. The aim of this study was to investigate the phytochemical characterization of EHAJ, evaluate the antioxidant potential of HAEJ and evaluate the influence of HAEJ on hemodynamic parameters in rat (in vivo) and the mechanisms involved in variation in vascular tone caused by HAEJ in aortas isolated of rat (in vitro). The quantification of the phenolic compounds in HAEJ was performed by a method that is based on the complexation of phenolic compounds present in the solution of ferric chloride (FeCl3) as measured by a spectrophotometer and ellagic acid quantitation was performed by analysis high performance liquid chromatography (HPLC). The phytochemical characterization of HAEJ was evaluated considering only one methodologie (mass spectrometry - ESI-MS) and antioxidant activity of HAEJ was evaluated considering two different methodologies (DPPH and differential pulse voltammetry - DPV). To achieve the experimental protocols in vivo, were inserted with the animals anesthetized, catheters in the right femoral vein and artery, and flow probes around the aorta for infusion of EHAJ, check blood pressure, heart rate and aortic blood flow, respectively. Besides the pressure was checked the vasorelaxant effect of HEAJ in preparations of isolated rat aorta pre-contracted with vasopressor agents. The concentration of nitric oxide produced by the endothelial cells in the presence of HEAJ was also evaluated by flow cytometry. Intravenous infusion of HEAJ (0.12 to 0.96 mg / kg) produced dose-dependent increase in aortic blood flow hypotension. In isolated arteries pre-contracted with contractile agonist, HEAJ induced concentration-dependent relaxation which was potentiated in preparations with intact endothelium (E+) (120μg/ml) as compared with preparations devoid of endothelium (E-) (1.92 mg / mL). And preparations pretreated with L-NAME, ODQ and MDL-12,330A reduced the relaxation caused by HEAJ, whereas pretreatment with diclofenado, atropine and propranolol did not alter the activity of HEAJ. In E- preparations pretreated with TEA, 4-AP, glibenclamide and ODQ, relaxation caused by HEAJ was reduced, while the clotrimazole pretreatment with CPA and does not alter the activity of HEAJ. Furthermore, HEAJ was able to decrease phenylephrine and KCl induced contractions. These findings suggest that the hypotension associated with HEAJ induces vascular relaxation; also suggests the involvement of such pathways cGMP / sGC and cAMP / AC and finally the involvement of potassium channels and calcium channels, this relaxation. / A pesquisa e a utilização de plantas medicinais como agentes terapêuticos tem sido crescente nos últimos anos e a jabuticaba (Myrciaria cauliflora) tem ocupado um lugar favorável neste segmento por apresentar propriedades biológicas, devido a sua alta atividade antioxidante decorrente da presença de compostos fenólicos. O objetivo do presente estudo foi verificar a caracterização fitoquímica do extrato hidroalcoólico de jabuticaba (EHAJ), o potencial antioxidante, avaliar a influência do EHAJ sobre os parâmetros hemodinâmicos em ratos (in vivo) e os mecanismos envolvidos na variação do tônus vascular provocada pelo EHAJ, em aorta isolada de ratos (in vitro). A quantificação dos compostos fenólicos no EHAJ foi realizada através de um método que se baseia na complexação dos compostos fenólicos presentes na amostra, com a solução de cloreto férrico (FeCl3), medida por espectrofotômetro e a quantificação do ácido elágico foi realizada através da análise por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE ou HPLC). A caracterização fitoquímica do EHAJ foi avaliada considerando apenas uma metodologia (espectrometria de massa - ESI-EM) e a atividade antioxidante do EHAJ foi avaliada considerando duas metodologias diferentes (DPPH e voltametria de pulso diferencial - VPD). Para realização dos protocolos experimentais in vivo foram inseridos, com os animais anestesiados, cateteres na veia e artéria femural direita, além de sondas de fluxo em torno da aorta, para infusão do EHAJ, verificação da pressão arterial, frequência cardíaca e fluxo sanguíneo aórtico, respectivamente. Além da pressão foi verificado o efeito vasorrelaxante do EHAJ em preparações de aortas isoladas de ratos, pré-contraídas com agentes vasoconstritores. Foi avaliado também, por citometria de fluxo, o aumento da concentração de óxido nítrico produzido pelas células endoteliais, na presença do EHAJ. A infusão intravenosa do EHAJ (0,12 a 0,96mg/kg) produziu hipotensão dose-dependente e aumento do fluxo sanguíneo aórtico. Em artérias isoladas, pré contraídas com agonista contrátil, o EHAJ induziu relaxamento concentração-dependente, que foi potencializado em preparações com endotélio íntegro (E+) (120μg/ml) quando comparado com preparações desprovidas de endotélio (E-) (1,92mg/ml). Preparações E+ pré-tratados com L-NAME, ODQ e MDL-12,330A reduziram o relaxamento provocado pelo EHAJ, enquanto que o pré-tratamento com diclofenaco, atropina e propranolol, não alterou a atividade do EHAJ. Em preparações E- pré-tratados com TEA, 4-AP, glibenclamida e ODQ, o relaxamento provocado pelo EHAJ foi reduzido, enquanto que o pré-tratamento com clotrimazol e CPA, não alterou a atividade do EHAJ. Além disso, o EHAJ foi capaz de diminuir contrações induzidas por fenilefrina e KCl. Estes achados sugerem que o EHAJ induz hipotensão associada ao relaxamento vascular; sugere também a participação de vias como cGMP/sGC e cAMP/AC e por último o envolvimento de canais de potássio e canais de cálcio, neste relaxamento.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8494_1.pdf: 11553961 bytes, checksum: e948365d416d27f263d11adf962b5add (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e Tecnológico / Este estudo investigou os possíveis mecanismos dos efeitos cardiovasculares do óleo essencial da Aniba canelilla (OEAC) e seu principal constituinte o 1-nitro-2- feniletano (NF) em ratos espontaneamente hipertensos (SHRs). Para tal, foram realizados experimentos in vitro e in vivo. Ratos machos SHRs foram submetidos a cirurgia para implantação dos cateteres na artéria aorta e veia cava inferior. Para os estudos de reatividade vascular os animais foram sacrificados e a artéria mesentérica superior foi isolada. Os anéis foram mantidos em cubas com solução Krebs-Henseleit, (37ºC) e gaseificada com carbogênio. Em ratos anestesiados, injeções intravenosas (i.v.) em bolus do OEAC (1-20 mg/kg) ou NF (1-10 mg/kg) induziram efeitos hipotensor e bradicardizante, dose-dependentes, que foram caracterizados em dois períodos (fase 1 e 2). O componente rápido (fase 1) da resposta hipotensora e bradicardizante induzido pelo OEAC e NF, ambos na dose de 10 mg/kg, foi ausente após a administração direta no ventrículo esquerdo. A fase 1 foi também abolida após a bivagotomia ou pelo tratamento perineural dos nervos vagos com capsaicina (250 μg/mL). No entanto, a fase 1 permaneceu inalterada pelo pré-tratamento i.v. com capsazepina (1 mg/kg) ou ondasetron (30 μg/kg). Em ratos acordados, o NF (5 e 10 mg/kg) induziu efeitos hipotensor e bradicardizante rápidos (fase 1) que foram completamente abolidos pelo pré-tratamento com metilatropina (1 mg/kg, i.v.). Nas concentrações de 0,1-1000 μg/mL, o OEAC e o NF induziram um relaxamento reversível e concentração-dependente nas preparações isoladas de artéria mesentérica pré-contraídas com KCl (75 mM) com a IC50 [média geométrica (95% de intervalo de confiança)] de 294,19 [158,20-94,64] e 501,27 [378,60-624,00] μg/mL, respectivamente, ou com fenilefrina (FEN; 1 μM) [IC50 = 11,07 [6,40-15,68] e 7,91 [4,08-11,74) μg/mL, respectivamente]. O efeito vasorrelaxante do OEAC nas preparações pré-contraídas pela FEN não foi dependente da integridade do endotélio. OEAC e NF também inibiram a curva de concentração-resposta para a FEN (10-10- 3 x10-4 M) ou KCl (25-125 mM). Em meio isento de Ca2+, o OEAC (100 μg/mL) reduziu significativamente a contração induzida pela FEN (1 mM) sem alterar aquela induzida pela cafeína (20 mM). Em meio isento de Ca2+ contendo alta concentração de potássio (75 mM) , as contrações induzidas por CaCl2 e BaCl2 foram reduzidas ou até completamente abolidas pelo OEAC nas concentrações de 100 e 600 μg/mL, respectivamente. Um efeito similar nas contrações induzidas por CaCl2 foi também observado com o NF. O OEAC reduziu de maneira concentraçãodependente (IC50 = 52,66 [10,82-94,64]) a contração induzida pelo dibutirato de forbol (1 μM), um ativador da proteína kinase C. Em conclusão, o OEAC e o NF induzem um reflexo vago-vagal bradicardizante e hipotensor (fase 1) que aparentemente resultou da estimulação das fibras C aferentes vagais pulmonares mas não cardíacas. Este reflexo não parece envolver a ativação dos receptores vanilóides TPRV1 nem dos receptores 5-HT3 localizados nestas fibras sensoriais vagais. O componente tardio (fase 2) da resposta hipotensora do OEAC parece ser decorrente, pelo menos em parte, de um efeito vasorrelaxante principalmente através de um mecanismo miogênico independente da integridade do endotélio do que através de um mecanismo dependente de eventos na membrana celular, envolvendo canais de cálcio dependentes de voltagem ou de receptor. Este efeito vasorrelaxante do OEAC, preferencialmente dependente do acoplamento farmacomecânico, foi principalmente atribuído à ação de seu maior constituinte, o NF

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Lectins are proteins that bind carbohydrates specifically and reversibly. The legume lectins represent the best studied and established group, from the point of view of physical-chemical and biological and structural, where a well-studied group of these proteins involves lectin obtained from members of the subtribe Diocleinae. Lectins Diocleinae have a high degree of structural similarity, but the same was not true regarding biological activities. This variability, as a rule, is in the detail that can be analyzed in structures based studies. In this context, multiple cardiovascular disease and inflammatory processes, particularly chronic and recurrent nature, arouse the interest of the scientific community because they require a wider range of drugs for therapeutic alternatives. In this sense, they become important research seeking new compounds with vasorelaxant and anti-inflammatory action. The present paper describes the partial structural and biological characterization of two lectins present in Canavalia virosa and Canavalia oxyphylla seeds, belonging to the family Leguminosae, subfamily Papilionoideae, Phaseoleae tribe, subtribe Diocleinae. The lectin from Canavalia virosa seeds (ConV) was purified in a single step by affinity chromatography on mannose-Sepharose 4B column. ConV strongly agglutinated rabbit erythrocytes and was inhibited by monosaccharide (D-mannose, D-glucose and α-methyl-D-manosÃdeo) and glycoproteins (fetuin and ovalbumin). SDS-PAGE revealed three bands, corresponding to three chains (α, β, γ and) confirmed by ESI mass spectrometry with masses of 25.480  2 Da, 12.864  1 Da and 12,633  1 Da, respectively. The hemagglutination activity of ConV is great in pH 7.0 to 9.0, stable at a temperature of 80 C, and is not affected by EDTA. ConV showed no toxicity against Artemia sp. and relaxed the endothelized rat aorta, with the participation of the lectin domain. In our tests, the lectin immobilized on CNBr-Sepharose was able to bind 0.8 mg of ovalbumin by chromatography, allowing the use of ConV as a tool to capture and purification of glycoproteins. Moreover, the lectin from Canavalia oxyphylla (CoxyL) was purified in a single step by affinity chromatography on Sephadex G-50 column. SDS-PAGE showed that pure lectin consists of a major band of 30 kDa (α chain) and two minor components (β and γ chains) of 16 and 13 kDa, respectively. These data were further confirmed by mass spectrometry via electrospray ionization. Compared to the average molecular weight of the α chains, the partial amino acid sequence obtained corresponds to about 45% of the total sequence CoxyL. CoxyL showed hemagglutinating activity was specifically inhibited by monosaccharide (D-glucose, D-mannose and methyl-α-D-manosÃdeo) and glycoproteins (fetuin and ovalbumin). Furthermore, CoxyL proved to be heat stable at 60 C, and its activity is optimal at pH 7.0. CoxyL caused toxicity in Artemia sp. and induced paw edema in rats. / Lectinas sÃo proteÃnas que se ligam a carboidratos de forma especÃfica e reversÃvel. As lectinas de leguminosas representam o grupo mais bem estudado e estabelecido, tanto do ponto de vista de caracterizaÃÃo fÃsico-quÃmica e biolÃgica como estrutural, onde um grupo bem estudado destas proteÃnas envolve lectinas obtidas de membros da subtribo Diocleinae. As lectinas de Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade estrutural, porÃm o mesmo nÃo se observa quanto Ãs atividades biolÃgicas. Esta variabilidade, via de regra, està em detalhes que podem ser analisados em estudos baseados em estruturas. Neste contexto, mÃltiplos processos patolÃgicos cardiovasculares e inflamatÃrios, principalmente de natureza crÃnica e recorrente, despertam o interesse da comunidade cientÃfica por requererem uma maior variedade de fÃrmacos para alternativas terapÃuticas. Neste sentido, tornam-se importantes pesquisas que busquem novos compostos, com aÃÃo vasorrelaxante e anti-inflamatÃria. Assim, o presente trabalho descreve a caracterizaÃÃo estrutural parcial e biolÃgica de duas lectinas presentes em sementes de Canavalia virosa e Canavalia oxyphylla, pertencentes à famÃlia Leguminosae, subfamÃlia Papilionoideae, tribo Phaseoleae, subtribo Diocleinae. A lectina de sementes de Canavalia virosa (ConV) foi purificada em uma Ãnica etapa atravÃs de cromatografia de afinidade em coluna Sepharose-mannose 4B. ConV aglutinou fortemente eritrÃcitos de coelho e foi inibida por monossacarÃdeos (D-manose, D-glicose e α-metil-D-manosÃdeo) e glicoproteÃnas (ovalbumina e fetuÃna). SDS-PAGE revelou trÃs bandas, correspondentes a trÃs cadeias (α, β, e γ) confirmadas por espectrometria de massas ESI com massas de 25,480Â2 Da, 12,864Â1 Da e 12,633Â1 Da, respectivamente. A atividade hemaglutinante da ConV à Ãtima nos pH 7.0 a 9.0, estÃvel a uma temperatura de 80 ÂC, e nÃo à afetada pelo EDTA. ConV nÃo demonstrou toxicidade contra nÃuplios de Artemia sp. e relaxou a aorta endotelizada de ratos, com a participaÃÃo do domÃnio da lectina. Em nossos testes, a lectina imobilizada em CNBr-Sepharose foi capaz de se ligar a 0,8 mg de ovalbumina por cromatografia, permitindo o uso de ConV como uma ferramenta para a captura e purificaÃÃo de glicoproteÃnas. Por outro lado, a lectina de Canavalia oxyphylla (CoxyL) foi purificada em um Ãnico passo atravÃs de cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G-50.SDS-PAGE mostrou que a lectina pura consiste de uma principal banda de 30 kDa (cadeia α) e dois componentes menores (cadeias β e γ) de 16 e 13 kDa, respectivamente. Estes dados foram adicionalmente confirmados por espectrometria de massas por ionizaÃÃo por eletropulverizaÃÃo. Em comparaÃÃo com a massa molecular mÃdia das cadeias α, a sequÃncia parcial de aminoÃcidos obtida corresponde a aproximadamente 45% da sequÃncia total de CoxyL. CoxyL apresentou atividade hemaglutinante que foi especificamente inibida por monossacarÃdeos (D-glicose, D-manose, e α-metil-D-manosÃdeo) e glicoproteÃnas (ovalbumina e fetuÃna). AlÃm disso, CoxyL mostrou ser termoestÃvel a 60 C, e sua atividade à Ãtima no pH 7,0. CoxyL causou toxicidade em nÃuplios de Artemia sp. e induziu edema de pata em ratos.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2410324 bytes, checksum: 683a4ac95271e3c06063aa05abced89b (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The genus Lippia (Verbenaceae) has yielded a great number of medicinal and economically important species that are frequently used in folk medicine for treatment of several diseases, such as: coughs, bronchitis, liver disorders and hypertension. L. microphylla Cham. is a plant of the genus Lippia found in the Northeast of Brazil, and there is no information in the literature concerning its cardiovascular effects. Therefore, this study aimed to evaluate the cardiovascular effects of the essential oil of L. microphylla Cham. (EOLM) and of its main constituent, thymol. In normotensive non-anaesthetized rats, EOLM injections produced hypotension (ED50=5.5 (4.1-7.3) mg/Kg, n=5) and bradycardia (ED50=5.2 (4.3-6.2) mg/Kg, n=5). Isometric tension recordings revealed that EOLM (1 300 μg/mL) caused concentration-dependent relaxation in isolated mesenteric rings, with functional endothelium, pre-contracted with phenylephrine (10 μM) (EC50=28.2 (25.3-31.4) μg/mL, n=5) and this effect was not attenuated by removal of the vascular endothelia layer. In preparations without endothelium, pre-incubated with KCl 20 mM, the relaxantion was not changed. Furthermore, EOLM caused relaxation in mesenteric rings pre-contracted with KCl 60 mM and inhibited Ca2+ -induced vasoconstriction in a concentration-dependent manner. In addition, EOLM relaxed the contractions elicited by the L-type Ca2+ channel activator, S(-)-Bay K 8644, indicating that the vasodilatation is related to the inhibition of Ca2+ influx through L-type Ca2+ channels. To confirm this hypothesis, whole-cell L-type Ca2+ currents were recorded in freshly dispersed rat mesenteric artery myocytes. EOLM (1-100 μg/mL) significantly inhibited Ba2+ currents in a concentration-dependent manner (EC50=11.9 (9.4-15.0) μg/mL, n=4).These results suggest that OELM induce vasorelaxant effect in rat mesenteric artery due to the inhibition of the Ca2+ influx via voltage-dependent L-type Ca2+ channels. Interestingly, the relaxantion induced by thymol (EC50=9.3 (8.3-10.4) μg/mL, n=5, p<0.01) was more potent than that observed to EOLM (EC50=23.9 (22.0-26.0) μg/mL, n=5), indicating that the vascular actions of EOLM could be attributed to its main constituent, thymol. The cardiovascular responses evoked by thymol were investigated in SHR and WKY rats. In SHR and WKY non-anaesthetized rats, intravenous administration of thymol (0.1; 0.3; 1; 3; 6; 12 and 15 mg/Kg, i.v.) produced hypotension and bradycardia in a dose-dependent manner. Isometric tension recordings, the pharmacological profile of arterial relaxant effects of thymol was compared in rings of mesenteric arteries and aorta from SHR and WKY. In preparations without endothelium, thymol (1 μM 1 mM) produced relaxation in mesenteric arteries from SHR (pD2=4.40.04, n=5) and WKY (pD2=4.30.02, n=5) and aorta from SHR (pD2 = 4.40.03, n=5) and WKY (pD2=4.30.03, n=5) and this effect was not altered in preparations with functional endothelium. Furthermore, thymol relaxed the vasoconstriction induced by high K+ solution, U46619 and S(-)-Bay K 8644 in mesenteric arteries and aorta from SHR and WKY. The addition of thymol also inhibited Ca2+ -induced vasoconstriction in a concentration-dependent manner in mesenteric and aorta segments from SHR and WKY. In electrophysiological recordings, L-type Ca2+ current (ICa,L) was decreased by thymol in a concentration-dependent manner in cardiomyocytes isolated from SHR (pD2=3.40.06, n=4, p<0.05) and WKY (pD2=4.70.05, n=4). In addition, thymol lowed-down both the fast and slow time constants for L-type Ca2+ current inactivation. In conclusion, these results suggest that the vascular effects induced by EOLM and thymol are probably due to the inhibition of the Ca2+ influx via voltage-dependent L-type Ca2+ channels. / O gênero Lippia (Verbenaceae) contém um grande número de espécies medicinais e economicamente importantes, que são frequentemente utilizadas na medicina popular para o tratamento de várias doenças, tais como: tosse, bronquite, disordens hepáticas e hipertensão. L. microphylla Cham. é uma espécie do gênero Lippia encontrada no Nordeste brasileiro e não há informações na literatura a respeito de suas ações cardiovasculares. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos cardiovasculares do óleo essencial de L. microphylla Cham (OELM) e seu constituinte principal, o timol. Em ratos normotensos não-anestesiados, OELM produziu hipotensão (DE50=5,5 (4,1-7,3) mg/Kg, n=5) e bradicardia (DE50=5,2 (4,3-6,2) mg/Kg, n=5). Experimentos de tensão isométrica revelaram que o OELM (1 300 μg/mL) promove relaxamento dependente de concentração em anéis mesentéricos, com endotélio funcional, pré-contraídos com fenilefrina (10 μM) (EC50=28,2 (25,3-31,4) μg/mL, n=5), e este efeito não foi atenuado pela remoção do endotélio vascular. Em preparações pré-incubadas com KCl 20 mM, o relaxamento do OELM não foi alterada. Além disso, o OELM promoveu relaxamento em anéis mesentéricos pré-contraídos com KCl 60 mM e inibiu a vasoconstrição indizuda pelo Ca2+ de maneira dependente de concentração. O OELM relaxou as contrações induzidas pelo ativador de canais para Ca2+ tipo-L, o S(-)-Bay K 8644, indicando que a vasodilatação induzida pelo OELM está relacionada com a inibição do influxo de Ca2+ via canais para Ca2+ tipo-L. Para confirmar esta hipótese, correntes macroscópicas de Ca2+ foram registradas em miócitos de artéria mesentérica recém dispersas. O OELM (1 100 μg/mL) inibiu significantemente as correntes de Ba2+ de maneira dependente de concentração (CE50=11,9 (9,4-15,0) μg/mL, n=4). Estes resultados surgerem que o OELM induz efeito relaxante em artéria mesentérica de rato devido à inibição do influxo de Ca2+ via canais para Ca2+ dependente de voltage tipo-L. Interessantemente, o efeito relaxante induzido pelo timol (CE50=9,3 (8,3-10,4) μg/mL, n=5, p<0,01) foi mais potente do que o induzido pelo OELM (CE50=23,9 (22,0-26,0) μg/mL, n=5), indicando que os efeitos vasculares do OELM são provavelmente atribuídos ao seu principal constituinte, o timol. A partir dessas premissas, os efeitos cardiovasculares induzidos pelo timol foram investigados em ratos SHR e WKY. Em ratos SHR e WKY não-anestesiados, a administração intravenosa de timol (0,1; 0,3; 1; 3; 6; 12 e 15 mg/kg, i.v.) produziu hipotensão e bradicardia de maneira depedente de dose. Em experimentos de tensão isométrica, o perfil do efeito relaxante induzido pelo timol foi comparado entre artéria mesentérica e aorta isoladas de ratos SHR e WKY. Em preparações sem endotélio vascular, o timol (1 μM 1 mM) induziu relaxamento de maneira concentração dependente em artéria mesentérica isolada de SHR (pD2=4,40,04, n=5) e WKY (pD2=4,30,02, n=5) e aorta de SHR (pD2=4,40,04, n=5) e WKY (pD2=4,30,03, n=5) e este efeito não foi alterado em preparações com o endotélio. Além disso, o timol relaxou as contrações induzidas por KCl, U46619 e S(-)-Bay K 8644 em artéria mesentérica e aorta de ratos SHR e WKY. A adição do timol inibiu a vasoconstrição induzida por Ca2+ em anéis de artéria mesentérica e aorta de ratos SHR e WKY. O timol diminuiu as correntes de Ca2+ tipo-L de maneira concentração dependente em cardiomiócitos de SHR (pD2=3,40,06, n=4, p<0,05) e WKY (pD2=4,70,05, n=4). Além disso, o timol diminuiu a constante de tempo rápida e lenta para inativação das correntes de Ca2+. Em conclusão, estes resultados surgerem que os efeitos cardiovasculares induzidos pelo o OELM e timol são provavelmete devido a inibição do influxo de Ca2+ via canais para Ca2+ dependentes de voltage tipo-L.