Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-07T18:59:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Felipe Roberto Borba Ferreira.pdf: 2146138 bytes, checksum: a5216409b3f582f8aa557abee059d6b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-15T20:38:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Felipe Roberto Borba Ferreira.pdf: 2146138 bytes, checksum: a5216409b3f582f8aa557abee059d6b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T20:38:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Felipe Roberto Borba Ferreira.pdf: 2146138 bytes, checksum: a5216409b3f582f8aa557abee059d6b7 (MD5) Previous issue date: 2015-04-28 / CAPES / A aranha brasileira Lasiodora (Mygalomorphae, Theraphosidae), conhecida popularmente como, é amplamente distribuída na região Nordeste do Brasil, na Zona da Mata. Os venenos de Theraphosídeos podem ser uma rica fonte de importantes ferramentas farmacológicas. O presente estudo realizou a venômica parcial, extração e atividade antimicrobiana do veneno da tarântula brasileira Lasiodora sp contra bactérias e fungos patogênicos importantes. Após o processo de extração, um veneno incolor foi obtido sem contaminação de fluidos gástricos. Este mostrou conter um concentração ~ 4,53 ± 0,38 ug / μL de proteína e um pH de 5,5. O Perfil eletroforético mostrou uma baixa massa molecular variando de 2 kDa a 10 kDa e uma variedade de faixas com massas moleculares de 30 kDa a 250 kDa. O perfil do veneno por RP-HPLC junto com SDS-PAGE não revelou uma diferença significativa entre venenos de macho e fêmea. Após separação cromatográfica, as frações do veneno, foram digeridas em gel e analisada por espectrometria de massa. Quatro peptídeos, U1-theraphotoxin-Lp1a (Lasiotoxin-1), U1-theraphotoxin-Lp1b (Lasiotoxin-2) e U3-theraphotoxin-Lsp1a (LTx5) e ω-theraphotoxin-Asp3a, foram identificados. Estes peptídeos mostraram uma elevada homologia com outros peptídeos encontrados em Lasiodora sp. e em outros Theraphosideos. Foram identificadas duas proteínas: PLA2 e hialuronidase. ω-theraphotoxin-Asp3a, PLA2 e hialuronidase estão sendo descritas pela primeira vez compondo o veneno de Lasiodora sp. O veneno inibiu o crescimento e matou todos os microrganismos testados, com inibição mínima (MIC), mínima bactericida (CBM) e mínima fungicida (MFC) em concentrações que variam de 3,9 a 500 ug / ml. O veneno de Lasiodora sp. pode ser classificado como um agente bactericida (MBC / MIC = 1) contra as bactérias Gram-positivos Bacillus subtilis e Micrococcus luteus e a bactéria Gram-negativas Aeromonas sp. Além disso, ele pode ser classificado como um agente fungicida contra Candida parapsilosis (MFC / MIC = 1) e Candida albicans (MFC / MIC = 2). O veneno agiu como um fármaco bacteriostático contra a espécie gram-positiva Staphylococcus aureus (MBC / MIC = 64), e bactérias Gram-negativas Pseudomonas aeruginosa (MBC / MIC = 8) e Klebsiella pneumoniae (MBC / MIC = 16), bem como agente fungistático sobre as leveduras Candida tropicalis (MFC / MIC = 16,02) e Candida krusei (MFC / MIC = 8). Em conclusão, o veneno de Lasiodora sp. foi parcialmente caracterizado e é fonte de agentes antimicrobianos com relevância clínica e o estudo contribui para a caracterização do gênero. / The Brazilian spider Lasiodora (Mygalomorphae, Theraphosidae), whose trivial names are “caranguejeira” or tarantula, is widely distributed in Northeastern Brazil, in the rainforest. The theraphosid venoms may be a rich source of important pharmacological tools. In the present study we conducted the partial venomic, extraction and antimicrobial activity against medically important bacteria and fungi from the venom of the Brazilian tarantula Lasiodora sp. After extraction process, a colorless venom was obtained without contamination with gastric fluids. This venom showed a contained 4.53±0.38 μg/μL of protein and a pH of 5.5. Electrophoretic profile showed a low molecular mass ranging from 2 kDa to 10 kDa and a variety of bands with molecular masses from 30 kDa to 250 kDa. RP-HPLC venom profile together SDS-PAGE did not reveal a difference among male and female venom’s. After chromatographic separation fractions of venoms were in gel digestion and analyzed by mass spectrometry. Four peptides, U₁-theraphotoxin-Lp1a (Lasiotoxin-1), U₁-theraphotoxin-Lp1b (Lasiotoxin-2) and U₃-theraphotoxin-Lsp1a (LTx5), ω-theraphotoxin-Asp3a. were identified. These peptides showed a high identity with other peptides found in Lasiodora and other Theraphosides. Two proteins were identified: PLA₂ and hyaluronidase. ω-theraphotoxin-Asp3a, PLA₂ and hyaluronidase are describe for first time composing the venom of Lasiodora sp. The venom inhibited the growth and killed all tested microorganisms, with minimal inhibitory (MIC), minimal bactericide (MBC) and minimal fungicide (MFC) concentrations ranging from 3.9 to 500 μg/mL. The Lasiodora sp. venom can be classified as a bactericide agent (MBC/MIC = 1) against the Gram-positive bacteria Bacillus subtillis and Micrococcus luteus and the Gram-negative bacterium Aeromonas sp. Also, it can be classified as a fungicide agent on Candida parapsilosis (MFC/MIC = 1) and Candida albicans (MFC/MIC = 2). The venom acted as a bacteriostatic drug against the Gram-positive species Staphylococcus aureus (MBC/MIC = 64), the Gram-negative bacteria Pseudomonas aeruginosa (MBC/MIC = 8) and Klebsiella pneumoniae (MBC/MIC = 16) as well as fungistatic agent on the yeasts Candida tropicalis (MFC/MIC = 16.02) and Candida krusei (MFC/MIC = 8). In conclusion, Lasiodora sp. venom was partial characterized and is source of antimicrobial agents with clinical relevance and the study contributes for the characterization of the genus.

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Maria Alice Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T09:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zamuner_StellaRegina_M.pdf: 4585030 bytes, checksum: 636e8bb5cd4befaa834535cbf6468b34 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar as diferenças interespecíficas sobre as atividades neurotóxica (toxicidade e estudo miográfico) e miotóxica (estudo morfológico e dosagem de CK) dos venenos de B. jararaca, B. jararacussu, B. erythramelas, B. moojeni e B. neuwiedi assim como sua neutralização, tendo o veneno de C. d. terrificus como controle positivo. Para isso foi utilizada a preparação biventer cervicis de pintainho. Nossos dados mostraram que há grande diferença quanto à toxicidade dos venenos estudados, não havendo uma relação direta entre a atividade bloqueadora neuromuscular, in vitra, e os valores da 'DL IND. 50'. O veneno de B. neuwiedi foi o único que apresentou atividade neurotóxica pré-sináptica, apesar disto acontecer somente em baixas doses (5, 10 e 20 'mu'g/ml), pois quando a dose era de 200 'mu'g/ml, seu perfil igualou-se ao dos outros venenos botrópicos estudados. A temperatura de incubação foi um importante fator para o efeito bloqueador e miotóxico deste veneno, sugerindo que uma fosfolipase 'A IND. 2' ('PLA IND. 2') estaria envolvida neste processo. O antiveneno botrópico comercial neutralizou de maneira diferenciada os efeitos neuromusculares dos venenos botrópicos analisados, todavia foi incapaz de neutralizar os efeitos neuromusculares de B. neuwiedi, enquanto que o antiveneno crotálico mostrou alguma proteção sobre o mesmo efeito para a dose utilizada, sugerindo uma reatividade antigênica cruzada. Todos os venen,os estudados induziram liberação de CK significantemente diferente do controle. Os venenos de B. neuwiedi e B. jararacussu foram os que exibiram maior nível de liberação desta enzima. O antiveneno botrópico comercial foi eficiente em neutralizar a liberação de CK, induzida pelos venenos estudados, exceto para o veneno de B. jararacussu. Todos os venenos examinados produziram alterações mionecróticas caracterizadas por: fibras musculares fragmentadas, presença de 'lesões delta', desarranjo e hipercontração das miofibrilas, fibras edematosas e (ou) hialinas e grande espaço entre as fibras, sendo que os venenos de B. jararacussu e B. neuwiedi foram os que apresentaram maior grau de destruição da fibra muscular. O antiveneno botrópico comercial foi eficiente em proteger contra a atividade miotóxica, exceto para o veneno de B. jararacussu. A utilização do antiveneno foi um importante instrumento, observarmos as diferenças interespecíficas dos venenos botrópicos / Abstract: The aim of this study was to evaluate the interspecific differences in the neurotoxic and myotoxic activities of Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, Bothrops moojení, Bothrops erythromelas and Bothrops neuwíedí venoms as well as their neutralization by anti-bothropic antivenom for both activities. Crotalus duríssus terríficus venom was used as a positive control. The chick bíventer cervícís preparation was used throughout this study. There was no direct relationship between the ín vítro neurotoxicity and the 'LD IND. 50' of the venoms. The venom of B. neuwiedi was the only bothropic venom that showed neurotoxic activity, although this effect was seen on/y at low doses (5, 10 and 20 'mu'g/ml); when a dose of 200 'mu'g/ml was used this venom behaved like the other bothropic venoms. The neuromuscular blocking and myotoxic actions of this venom may involve a neurotoxic 'PLA IND. 2'since the temperature at which the experiment was performed influenced the neurotoxic effect observed. Commercial anti-bothropic antivenom neutralized the Bothrops venoms to different degrees, and was unable to neutralize the neuromuscular effects of B. neuwíedí venom. In contrast, anti crota/ic antivenom showed some degree of protection against the acting to this venom. All of the venoms stimulated the release of CK, with those of B. jararacussu and B. neuwiedí being the most potent. Commercial anti-bothropic antivenom prevented the release of CK by the venoms, although its efficacy against B. jararacussu venom was low. All of the venoms produced myonecrosis, including fragmentation of the fibers, delta lesions, hypercontraction of the myofibrils and edema. The venoms of B. jararacussu and B. neuwiedi were the most potent in destroying fibers. Commercial anti-bothropic antivenom was efficient in neutralizing this activity, except in the case of B. jararacussu venom / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Jose Camillo Novello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_DulcineiaAparecida_M.pdf: 6490147 bytes, checksum: 1944efedfaa4d4911af346759c02f352 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Venenos de serpentes contêm uma ampla variedade de enzimas. As proteases purificadas de veneno são geralmente dassificadas por sua estrutura em: serinoproteases e metaloproteases, e apresentam potente efeito na ativação ou inibição da coagulação sangüínea, agindo na hemostasia, trombose, fibrinólise e agregação plaquetária. A presente dissertação teve por objetivo purificar e caracterizar a serinoprotease Uruprot do veneno de Bothrops altematus, uma serpente da família Viperidae. Uruprot foi purificada em dois passos cromatográficos: Sephadex G75 e DEAE 5PW, em sistema HPLC. A homogeneidade de Uruprot foi monitorada em gel SDS-PAGE e em coluna de fase reversa C18. O gel de eletroforese em condições desnaturantes evidenciou uma banda com massa molecular aparente de 32 kDa na presença de 0,1 M de DTT, sugerindo que esta é formada por uma única cadeia polipeptídica. A eletroforese de duas dimensões de Uruprot demonstrou ser seu ponto isoelétrico em torno de 4,6, confirmando massa molecular observada em SDS-PAGE. A análise da composição de aminoácidos de Uruprot apresentou alta concentração dos aminoácidos glicina, treonina, fenilalanina, isoleucina, serina e glutamina e baixos níveis de aminoácidos básicos como histidina e arginina, ratificando o resultado da 2D caracterizando um pl ácido. Uruprot teve reação positiva quando submetida à coloração para carboidrato, sugerindo a existência de carboidratos ligados covalentemente à sua estrutura. O estudo da homologia seqüencial da região N-terminal da seqüência consenso (WGGDECNINEHR-LVAI) indicou alto grau de homologia com as serinoproteinases: TVSPA (94%), KLE 11 (94%) e Ancrod (92%) entre outras. Uruprot não induziu a agregação em plaquetas lavadas, mas inibiu a indução da aglutinação de eritrócitos na presença de Ristocetina na concentração mínima de 1 O ~g/mL. O conjunto de resultados obtidos com Uruprot monstram fortes indícios de que essa pode desempenhar a função de ativadora do plasminogênio, entretanto o papel da atividade "in vivo" das serinoproteases de venenos em envenenamentos patológicos é pouco conhecido. Estudos adicionais são necessários para a obtenção de maiores informações sobre esse grupo de enzimas / Abstract: Snake venoms contain a high variety of toxic compounds and enzymes. Venom purified proteases are structurally dassified as serine proteases and metalloproteases, and showa potent effect on blood coagulation, acting on hemostasis, thrombosis, fibrinolysis and platelet aggregation. The aim of this work was the purification and characterization of a serine protease from the venom of Bothrops altematus snake, called Uruprot. Uruprot was purified in a two step chromatography: Sephadex G-75 and DEAE 5PW both in HPLC system. Its homogenity was monitored in SDS-PAGE and reversedphase C18 chromatography. In denaturing conditions, 0,1 M DTT, a band of 32 kDa apparent molecular mass was evidenced, suggesting that the protein consists in one polypeptidic chain. The two dimensional electrophoresis of Uruprot showed its isoelectric point at about 4,6, confirming the apparent molecular mass observed in SDS-PAGE. Uruprot's amino acid analysis composition showed a high concentration of glycine, threonine, phenylalanine, isoleucine, serine and glutamine and low levels of basic amino aCids, as histidine and arginine, ratifying the result obtained from bidimensional electrophoresis wich showed an acid pl. Uruprot showed a positive reaction when submitted to carbohydrate coloration indicating the presence of carbohydrate covalentely bound to its structure. The N-terminal sequence homology study showed a consensus sequence (WGGDECNINEHR-LVAI) and indicated a high homology with serine proteinase TSV-PA (94%), KLE 11 (94%), Ancrod (92%), and others. Uruprot did not induce platelet aggregation but inhibits erytrocytes agglutination in the presence of ristocetin, in a minimum concentration of 10llg/mL. Ali the results obtained indicates that Uruprot is a serine protease plasminogen activator, however, the role of "in vivo" activity of venom serine proteases in envenomation remains unclear. Additional studies are necessary to provide more information about this enzyme grou / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EricleisonCardoso_M.pdf: 4576236 bytes, checksum: f060332dfc56c8cc9398f30a084be354 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Peçonhas de vespas são capazes de produzir uma variedade de efeitos biológicos, tais como dor, edema, hipotensão, hepatotoxicidade e reações alérgicas. Com a exceção da peçonha da abelha Apis mellifera e de algumas (poucas) espécies de vespas sociais, as peçonhas de himenópteros brasileiros têm sido pouco estudadas. Neste trabalho, caracterizamos farmacologicamente as atividades nas peçonhas de três espécies de vespas sociais da família Vespidae (Polybia chrysothorax, Pseudopolybia compressa e Polybia rejecta) e duas espécies de hábitos solitários, da família Scoliidae, do gênero Pypper (pypper sp. 1 e Pypper sp. 2), todas da região nordeste do Brasil. Especificamente, avaliamos a atividade sobre músculo liso (íleo isolado de cobaia), a cardiotoxicidade em coração semi-isolado de barata, e a ação sobre neurotransmissão em nervo sensorial de crustáceo (siri azul, Callinectes danae) e em junção neuromuscular (preparação nervo frênico-diaftagmo) de camundongo. As peçonhas das três espécies sociais contraíram o íleo isolado de cobaia na faixa de 0.001-100 ~g/ml (dependendo da peçonha), com CEso de 0,25 :t 0,05 ~g/ml, 8,75 :t 1,25 ~g/ml e 7,65 :t 1,85 ~g/ml, (média:!:EPM, 1=4) para Polybia chrysothorax, Polybia rejecta e Pseudopolybia compressa, respectivamente. As peçonhas do gênero Pypper eram inativos neste tecido. A pré-incubação dos tecidos com atropina (antagonista dos receptores muscarínicos, 10 J.1M), metisergida (antagonista dos receptores 5-HT2 da serotonina, 10 JlM), e pirilamina (antagonista dos receptores HI da histamina, 10 f.lM) inibiu a atividade contrátil das três peçonhas sociais enquanto que o Hoe-140 (antagonista dos receptores B2 da bradicinina, 1 JlM) não afetou as respostas. Estes resultados indicam que as peçonhas sociais contêm aminas biogênicas (acetilcolina, histamina e serotonina) mas são destituídas de cininas. As três peçonhas (1-100 ~g) mostraram atividade cardiotóxica em coração semi-isolado de barata, sendo que as mais potentes foram P. chrysothorax e P. compressa; as peçonhas do gênero Pypper eram inativas nesta preparação. A investigação dos possíveis mecanismos responsáveis por este efeito através do uso de antagonistas/inibidores indicou que não houve envolvimento de aminas das peçonhas e que a causa mais provável era uma atuação a nível de canais iônicos, especialmente os de sódio e, em grau menor, os de potássio. A dosagem da atividade fosfolipásica das peçonhas mostrou a seguinte ordem de potência: P. chrysothorax/P. compressa> P. rejecta » Pypper spp., porém esta atividade parece contribuir pouco para os efeitos observados uma vez que a indometacina apenas retardou o início da cardiotoxicidade. Na neurotransmissão, as peçonhas de P. chrysothorax e P. compressa (100 Jlg cada) aumentaram a atividade elétrica espontânea (disparo de potenciais de ação) do nervo sensorial de crustáceo de forma semelhante ao efeito causado pela brevetoxina (10-6 M), uma toxina marinha que age no mecanismo de portão do canal de sódio. As peçonhas também inibiram o potencial de ação do nervo em experimentos de "sucrose gap", efeito este que foi abolido pela tetrodotoxina (10-6 M), bloqueador de canais de sódio voltagem-dependentes. Nestes experimentos, as peçonhas de P. rejecta e do gênero Pypper eram inativas. As peçonhas das duas espécies sociais P. chrysothorax e P. compressa (25-100 Jlg/rnl), mas não da social P. rejecta e das solitárias, inhibiram da neurotransmissão em preparações nervo fTênico-diaftagmo de camundongo (tempo para bloqueio de 50% da resposta contrátil: 40 :!: 5 min (n= 3) e 57 :!: 3 min (n= 3), respectivamente, na concentração de 100 Jlg/rnl). Esta inibição era irreversível por lavagem das preparações. As peçonhas sociais também despolarizaram a membrana da fibra muscular e da placa terminal da junção neuromuscular. Estes achados sugerem uma ação pós-sináptica com possível envolvimento pré-sináptico. As três peçonhas produziram alterações morfológicas no músculo do diaftagma compatíveis com a nuonecrose e correlacionada à sua atividade fosfolipásica. O ftacionamento das peçonhas de P. chrysothorax e P. compressa por HPLC em coluna de fase reversa CI8 resultou em vários picos. O principal destes da peçonha de P. chrysothorax foi seqüenciado. A seqüênciaobtida (ARSLLEGLGIRRGSA), indicou que o peptídeo pertence à família de peptídeos conhecidos como pompilitodotoxinas (pMTX), a qual contém duas isoformas, a-PMTX e J3-PMTX, purificados das peçonhas das vespas solitárias Anoplius samariensis e Batozonellus maculifrons, respectivamente. Esta toxina reproduziu a cardiotoxicidade em coração de barata e o bloqueio de neurotransmissão em crustáceos observados para a peçonha de P. chrysothorax. Os resultados deste estudo indicam que as peçonhas investigadas possuem várias atividades biológicas. A demonstração de que as ações cardio e neurotóxicas da peçonha de P. chrysothorax eram devidas em grande parte à presença de uma isoforma de PMTXs sugere que peçonhas de espécies de vespas sociais podem servir de fontes para moléculas com potencial utilidade como inseticidas / Abstract: Wasp venoms produce a variety of biological effects, including pain, edema, hypotension, hepatotoxicity and allergic reactions. With the exception of bee (Apis mellifera) venom and of a few wasp species, little is known of the toxinology of Brazilian hymenopterans. In this work, we examined the pharmacological activities of venom trom three species of social wasps (Polybia chrysothorax, Pseudopolybia compressa and Polybia rejecta, family Vespidae) and two species of solitary wasps of the genus Pypper (family Scoliidae) found in northeastern Brazil. Specifically, we evaluated the activity on smooth muscle (guinea pig isolated ileum), the cardiotoxicity in cockroach semi-isolated heart, and the action on neurotransmission in crustacean (Callinectes danae, blue crab) sensorial nerve and in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations. The venoms ofthe three social species (0.001-100 ~glml, depending on the venom) contracted guinea pig isolated ileum, with ECso of 0.25 ~0.05 ~glrnl, 8.75 :t 1.25 ~glrnl and 7.65 :t 1.85 Ilglrnl (mean~SEM, n=4) for P. chrysothorax, P. rejecta and P. compressa, respectively. The venoms of the two species of Pypper were inactive in this tissue. Pre incubating the tissues with atropine (antagonist of muscarinic receptors, 1 O ~, methysergide (antagonist of serotonin 5-HT 2 receptors, 1 O ~, and pyrilamine (antagonist of histamine HI receptors, 1 O ~ inhibited the contractile activity of the three social venoms, whereas Hoe-140 (antagonist of bradykinin B2 receptors, 1 ~ had no effect on the responses. These results indicate that the social wasp venoms contained amines (acetylcholine, histamine and serotonin) but not kinins. The three venoms (1-100 Jlg) showed cardiotoxicity in cockroach semi-isolated heart, with the most potent being P. chrysothorax and P. compressa; the venoms of the genus Pypper were inactive in this preparation. Investigation of the mechanisms responsible for this effect based on the use of antagonists/inhibitors indicated that there was no contribution by venom amines and that the most probab1e cause was an action involving ion channels, especially sodium channels and, to a lesser degree, potassium channels. The venoms showed the following order of potency for their phospholipase A activity: P. chrysothorax/P. compresas> P. rejecta » Pypper spp. However, this activity contributed little to the observed effects since indomethacin only delayed the cardiotoxicity but did not abolish it. The- venoms of P. chrysothorax and P. compressa (100 Jlg each) increased the spontaneous electrical activity of crustacean sensorial nerve in a manner similar to that observe.d with brevetoxin (5xtO.7 M), a marine toxin that affects thegating mechanism of voltage-dependent sodium channels. These venoms also inhibited sensory nerve action potentials in sucrose gap experiments. This effect was abolished by tetrodotoxin (10-6 M), a blocker of voltage-dependent sodium channels. The venoms of P. rejecta and of the genus Pypper-were inactive in this preparation. The venom of the three social species (25-100 Jlglml), but not the solitary species, inhibited. neurotransmission in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (the time- for 50% blockade of the contractile responses was 40 j: 5 min and 57 j: 3 min for P. chrysothorax and P. compressa, respectively, at 100 Jlglml; n=3 each). This inhibition was irreversible by washing the preparations. The social wasp venoms also depolarized the muscle fiber membrane and tOO terminal endplate of neuromuscular junctions. These observations suggested a possible postsynaptic action for the venoms, with some presynaptic involvement. The three social venoms also produced morphologica1 alterations in muscle that were compatible- with myonecrosis. The- leveI of this damage- correlated with the venom PLA2 activity. The tractionation of P. chrysothorax and P. compressa venoms by RP-HPLC on a CI8 column resulted in several peaks. The main peak of P. chrysothorax venom was sequenced. The sequence obtaine-d (ARSLLEGLGIRRGSA) indicated that the peptide belonged to the family of peptides known as pompilidotoxinas (PMTX), which contains two isoforms, a-PMTX and Jj-PMTX, purified of the venoms of the- soltary wasps Anoplius samariensis and Batozonellus maculifrons, respectively. This toxin reproduced the cardiotoxicity in cockroach heart and the blockade of neurotransmisson in crustacean nerves seen with P. chrysothorax venom. The results of this study indicate that the venoms investigate-d had several biological activities. The demonstration that the cardio- and neurotoxicity of P. chrysothorax venom were largely attributable to the presence of a novel isoform of PMTXs suggests that venom social wasp of species may serve as a source of molecules with potential usefulness as insecticides / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Dados retirados da capa / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:22:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_NeyCarterdoCarmo_M.pdf: 987938 bytes, checksum: d5cbce73e0bd89562ae0bdf5807eda06 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Esta tese descreve a atividade contrátll em músculo liso vascular de coelho do veneno da aranha arrnadeira Phoneutria nigriventer. ° endotélio dos vasos foi retirado mecanicamente e os mesmos foram montados em um sistema de cascata, superfundidos com solução de Krebs aquecida (37°C) e oxigenada (95% 02 + 5% C02)' ° Phoneutria nigriventer (0.3 - 30 µg) produziu contrações dependentes da dose em arterias (pulmonar, mesentérica e celíaca) e veias (jugular, mesentérica e cava). A atividade contrátll do veneno em tecidos venosos e na artéria pulmonar não foi alterada quando o mesmo foi submetido a diálise (20-72h) ou quando os tecidos .foram perfundidos com metisergida, indicando que tal atividade não depende da serotonina contida no veneno. A atividade contrátll nas artérias mesentérica e celíaca foi abolida com a diálise do veneno ou com o uso da metisergida, indicando a serotonina corno principal agente espasmogênico nestes tecidos. A tetrodotoxina e a fenoxibenzarnina não afetaram significativamente a. contração induzida pelo Phoneutria nigriventer, sugerindo que o efeito contrátll independe da ativação de canais de sódio e da liberação de catecolarninas das terminações nervosas da parede do vaso. A atividade contrátll do Phoneutria nigriventer apresentou urna redução significativa quando incubado com tripsina, indicando que o veneno contém polipeptídeos responsáveis pela atividade espasmogênica. Após o fracionamento parcial do veneno através de filtração em gel de Sephadex G-1O e cromatografia de troca iônica, obtivemos 8 frações as quais revelaram atividade contrátll em tecido liso vascular. A eletroforese em gel de SDS-poliacrilarnida-tricina mostrou que o massa molecular destas frações está situado entre 8-50 kDa. / Abstract: The effects produced by Phoneutria nigriventer("armed spider") venom (PNV) in rabbit vascular smooth musc1e have been investigated. De endothelialized vascular strips were superfused in a cascade system with oxygenated (95% O2 /5% C02) and warmed (37°C) Krebs' solution at 5 rnl/min. PNV (0.3-30 µg) produced dose-dependent contractions in both 'venous and arterial tissues (cava, mesenteric and jugular veins and puImonazy, mesenteric and coeliac arteries, respectively). Methysergide did not s1gniflcantly a:ffect PNV-induced contractions in venous tissues or Í'Il puImonazy artery ind1cating that serotonin 1s not involved. Furthermore, d1alysis of the venom for up to 48 h d1d not alter th1s contractile activity. Ne1ther tetrodotoxin nor phenoxybenzamine s1gnificantly affected PNV induced contractlons suggesting that voltage-dependent sodium channel actlvatlon and endogenous catecholamine release from vessel wall autonomic nerve endings are also Í10t involved in the PNV response. The incubatlon with trypsin reduced significantly PNV-induced contractions. suggesting that the venom contains polypeptides Following gel-filtration, 10n-exchange chromatography and trtcine SDS- PAGE electrophoresis of the PNV, 8 fractlons (mw 8-50 kDa) with contractile activity were isolated. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T20:11:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_VanessaAlves_M.pdf: 4146158 bytes, checksum: f0e713e7eea1481aed7e0751064dba89 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: No presente trabalho investigou-se a capacidade do veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) em induzir a migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de camundongos. A injeção intraperitoneal do veneno causou um aumento na migração de neutrófilos tempo-dependente, com pico máximo 4 horas após a injeção, na dose de 750 ng/cavidade. A capacidade do veneno em induzir a migração de neutrófilos foi reduzida significativamente, quando os animais foram pré-tratados com dexametasona (inibidor indireto da fosfolipase A2; 0,5 mg/kg, s.c.,) ou AA 861 (inibidor da 5-lipoxigenase; 0.1 mg/kg, s.c.). O tratamento dos animais com indometacina (inibidor não seletivo da cic1ooxigenase; 5 mg/kg, s.c.), meloxicam (inibidor da COX-2; 5 rng/kg, s.c.) ou WEB 2086 (antagonista do PAF; 40 rng/kg, s.c.) não reduziu a migração de neutrófilos. Dexametasona e AA 861 também inibiram a migração de neutrófilos, quando administradas imediatamente após a injeção do veneno. A possibilidade da migração de neutrófilos ser causada pela contaminação com endotoxina bacteriana foi eliminada uma vez que o tratamento do veneno com polimixina B não reduziu a migração. O aquecimento do veneno (97°C, 2 min) reduziu a atividade fosfolipásica e esta foi acompanhada por uma redução na migração de neutrófilos O agente quelante EDT A reduziu parcialmente a migração de neutrófilos e a atividade fosfolipásica do veneno. Entretanto, outros componentes do veneno podem estar envolvidos na migração, visto que houve redução de apenas 30% na migração de neutrófilos com a atividade fosfolipásica do veneno totalmente abolida. Os resultados sugerem que metabólitos da lipoxigenase estão envolvidos no processo quimiotático observado, e que macrófagos residentes peritoneais são células importantes no processo, uma vez que a migração de neutrófilos foi potencializada em animais pré-tratados com tioglicolato, mas reduziu-se quando a cavidade peritoneal foi lavada com salina estéril / Abstract: The ability of Bothrops lanceolatus venom (BLV) to induce neutrophil migration into the peritoneal cavity of mice was investigated. Intraperitoneal injection of venom caused time-dependent neutrophil migration, which peaked with 750 ng of BLV/cavity 4 h after venom injection. The venom-induced neutrophil migration was significantly reduced by pretreatment with dexamethasone (0.5 mg/kg, s.c), an indirect inhibitor of phospholipase A2 (PLA2), and AA861 (0.1 mg/kg, s.c), a 5-lipoxygenase inhibitor. In contrast, the neutrophil migration was not modified by pretreatment with indomethacin (2 mg/kg, s.c), an inhibitor of the cyclooxygenase pathway, meloxicam (5 mg/kg, s.c), an inhibitor of the cyclooxygenase-2 pathway, or the PAF inhibitor WEB2086 (40 mg/kg, s.c). Dexamethasone and AA861 also inhibited the neutrophil migration by 60% and 70%, respectively when administered immediately after venom injection. BLV induced neutrophil migration was not due to contamination by endotoxin since polymyxin B-treated BLV retained its activity. Heating the venom (97°C, 2 min) reduced the PLA2 activity and this was accompanied by a corresponding reduction in neutrophil migration. The chelating agent EDTA partially reduced the neutrophil migration and the venom phospholipase activity. Thus, other components in BLV must contribute to the observed effect, since the neutrophil migration was reduced by 30% when the PLA2 activity was abolished. These results suggest that arachidonate-derived lipoxygenase metabolities are involved in the chemotaxis observed. Macrophages may be an important cell, since the migratory response to BLV was potentiated in mice pretreated with thioglycollate, but reduced when the peritoneal cavity was washed with sterile saline / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Maria Alice da Cruz-Hofling, Jose Antonio Rochas Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boer-Lima_PatriciaAline_M.pdf: 51420859 bytes, checksum: 90f852d5f8463bd425d40008c184db30 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Acidentes ofídicos em países tropicais são freqüentes e constituem um importante problema de Saúde Pública no Brasil. Dentre as manifestações sistêmicas após o envenenamento botrópico e crotálico destaca-se a insuficiência renal aguda, sendo esta a principal causa de morte. Interposto ao meio interno e externo e responsável pela homeostase, o rim, de uma forma geral, bem como os epitélios que constituem os vários segmentos do nefron, respondem à diversas situações sistêmicas de agressão incluindo o envenenamento ofídico. O objetivo deste estudo foi investigar as lesões morfológicas e funcionais renais provocadas pelo veneno bruto de Bothrops moojeni. Após 5, 16 e 48 horas da inoculação endovenosa de O,4Jlg e 5 hs após a inoculação de O,2Jlg/g do veneno, foram realizados estudos funcionais estimando a filtração glomerular e a manipulação tubular de sódio através do clearance de creatinina e clearance de lítio, e morfológicos através de microscopia de luz e eletrônica de transmissão e varredura. Os resultados fisiológicos e morfológicos demonstraram que o veneno de Bothrops moojeni causa uma série de alterações tubulares renais precoces, incluindo necrose tubular aguda (NTA). Estas alterações foram acompanhadas por modificações significativas na filtração glomerular, e importantes alterações morfológicas dos corpúsculos renais. Não foram encontradas modificações significativas da pressão arterial sistêmica, nem tampouco microcoágulos de fibrina nos capilares glomerulares e peritubulares. Nossos resultados sugerem importante papel à ação nefrotóxica direta do veneno como fator patogênico / Abstract: Accidents by snakebites are a common event in tropical countries and it is an important public health problem in Brazil. After envenoming by bothropic and crotalic accidents may include acute renal failure, being it considered the main cause of death. Interposed between the interna I and external milieu and responsible for the organism haemostasy, the kidneys and the epithelia constituting the several nephrons constituents, respond to a number of systemic injuries including ophidic envenoming. This study was designed to investigate morphological and functional renal disturbances induced by Bothrops moojeni snake crude venom. After 5, 16 and 48h of endovenous administration of O.4_gIg and 5h after O.2_gIg of the venom, the renal function was assessed by the creatinine and lithium clearance and morphological studies by light microscopy and transmission and scanning electron microscopyes. The physiological and morphological findings after B. moojeni venom in the present study showed an early renal tubule disturbance including acute renal proximal and post-proximal tubular impairment to sodium handling. Additionally, there was a significant impairment in the glomerular filtration rate (GFR) associated with severe morphological disturbances of the renal glomerulus. The functional and morphological findings were observed despite of unchanged mean arterial blood pressure. The decrease of GFR was not related to presence of fibrin deposits into the glomerular capillary loops. In conclusion our results suggest a precocious nephrotoxic action of B. moojeni venom, inducing morphological and functional significative changes in the rat kidney / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:08:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_AnaOliviade_M.pdf: 3133175 bytes, checksum: 172111dae3c3965d6a48fe7907c481cf (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A capacidade que os venenos de serpentes possuem de aumentarem a permeabilidade vascular e induzirem edema, através da liberação de substâncias farmacologicamente ativas, é bem conhecida. Investigamos a resposta inflamatória (edema e permeabilidade vascular) induzida pelo veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) em camundongos Swiss machos. O edema de pata foi induzido pela injeção subplantar do VBL (125 a 1000 ng/pata) e quantificado pelo aumento do peso da pata. A permeabifidade vascular foi determinada pela quantidade de azul de Evans extravasado. O edema e o aumento de permeabilidade foram máximos dentro de duas horas e estatisticamente insignificantes a partir de 24 horas. A administração de iloprost (20 ng/pata) após a do VBL potencializou o edema e o aumento de permeabilidade vascular aproximadamente em 400%. O tratamento dos camundongos com indometacina (5 mg/kg), dexametasona (1 mg/kg), NDGA (100 mg/kg) ou BW A4C (50 mg/kg) inibiu o edema induzido pelo VBL (43%, 59%, 28% e 43%, respectivamente) e o a(Jmento da permeabilidade vascular (0%, 66%, 48% e 44%, respectivamente). Ao contrário, os antagonistas de histamina, serotonina, e PAF [mepiramina (6 mg/kg), ciproheptadina (5 mg/kg), e WEB 2086 (50 mg/kg), respectivamente não foram efetivos. Estes resultados indicam que os dois fenômenos anteriormente citados são mediados principalmente por produtos da ação de ciclooxigenase e lipoxigenase. A nível histológico, as patas que sofreram injeção de 250 e 500 ng do VBL apresentaram um aumento na região dérmica com espaços intercelulares que são indícios de edema. Houve a presença de infiltrado celular, principalmente neutrófilos, entre as fibras musculares, as quais, morfologicamente não foram afetadas, pelo menos durante as três primeiras horas de observação. Com a dose de 500 ng ocorreu intensa hemorragia registrando grande número de hemácias extravasculares / Abstract: The ability of snake venoms to increase vascular permeability and to induce oedema through the release of pharmacologically active substances is well known. This thesis investigates the inflammatory response (oedema and , vascular permeability) induced by the venom of Bothrops lanceolatus (BL V) in male Swiss white mice (20-30g). Paw oedema was induced by the subplantar injection of BLV (125-1000 ng/paw) and was quantified as the increase in paw weighí. Changes in vascular permeability were assessed by measuring the amount of Evans blue dye extravasation. Oedema and the increase in vascular permeability were maximal within two hours and had resolved afier 24h. The administration of iloprost (20 ng/paw) immediately afier BLV potentiated the oedema and increased the vascular permeability by approximately 400%. Pre¬treating the mice with indomethacin (5 mg/kg), dexamethasone (1 mg/kg), NDGA (100 mg/kg), or BW A4C (50 mg/kg) inhibited the BLV-induced oedema (by 43%, 59%, 28% and 43%, respectively) and the increase in vascular permeability (by 0%, 66%, 48%, and 44%, respectively). In contrast, histamine, serotonin, and PAF-acether antagonists [mepyramine (6 mglkg) , cyproheptadine (5 mg/kg), and WEB 2086 (50 mg/kg), respectively)] were not effective. In histological sections,the venom (250 and 500 ng) was observed to cause thickening of the innerdermal layers which was accompanied by the presence of large intercellular spaces indicative of oedema. In addition, there was a marked infiltration of inflammatory cells, particularly neutrophils, into the underlying muscle layer. The latter, however, remained morphologically unaffected during the three hours of observation. Venom doses of 500 ng or more produced intense hemorrhage in the paw. These results indicate that BL V-induces oedema and increases vascular permeability in the mouse paw as confirmed by histological examination of the injected paws. The principal mediators of this inflammation response are cyclooxygenase and lipoxygenase products / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores : Julia Prado Franceschi, Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:56:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cogo_JoseCarlos_M.pdf: 5956920 bytes, checksum: a9419c9c9c555fbca0bd2d0f8cedeeae (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A peçonha da Bothrops insularis (jararaca-ilhôa) foi estudada em aves in vitro (toxicidade e estudo morfológico) e in vitro (estudo miográfico, eletrofisiológico e morfológico acompanhado de dosagem de CK), comparando seus efeitos com aqueles da peçonha Bothrops jararaca. Os resultados obtidos levam às seguintes conclusões: 1) A toxicidade da peçonha Bothrops insularis é superior à da peçonha de Bothrops jararaca cerca de 5 vezes, mostrando-se as aves muito mais sensíveis à peçonha de Bothrops insularis do que os mamíferos. 2) A peçonha da Bothrops insularis age na junção neuromuscular possuindo ações tanto pré (ação facilitadora da transmissão neuromuscular) como pós juncionais (Contratura e bloqueio da transmissão neuromuscular). 3) A peçonha de Bothrops insularis mostrou-se mais potente també, nas preparações musculares in vitro de aves quando comparada com as preparações musculares in vitro de mamíferos, sendo esta atividade dose-dependente. O mesmo pode-se dizer quando comparada com a peçonha de Bothrops jararaca nas preparações in vitro. 4) Existe também uma ação direta da peçonha na fibra muscular detectada através da degeneração muscular observada tanto nos músculos de pintainhos que foram injetados com a peçonha como nos músculos de pintainhos incubados com a mesma. 5) Devido à degeneração muscular, verifica-se nos músculos tratados in vitro, um aumento nos níveis de liberação de CK o qual é dose-dependente. A liberação de CK in vitro é também verificada com a peçonha de Bothrops jararaca sendo entretanto essa liberação de menor intensidade do que aquela causada pela Bothrops insularis...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstracts: The effects of Bothrops insularis (jararaca-ilhôa) venom were examined , in vitro in birds (toxicity and morphological studies) and in vitro (myographical electrophysiological ans morphological studies together with the measurement of CK levels). Tese effects were compared to those of Bothrops jararaca. The results obtained allow the followings conclusions to be drawn. 1) The toxicity of Bothrops insularis venom is about fice times greater than that of Bothrops jararaca. Birds are much more sensitive to Bothrops insularis venom than are mammals. 2) Bothrops insularis venom acts on the neuromuscular junction both presynaptically, to cacilitate neuromuscular transmission, and postnaptically, to induce contracture and blockage of neuromuscular transmission. 3) Bothrops insularis venom is more potent in in vitro muscle preparations of birds than of mammals. Theis venom is also more potent in ptese preparations than that of Bothrops jararaca.4) The venom of Bothrops insularis has a direct action on muscle fibers as demonstrated by the muscle degeneration observed in vitro in chicks injectd with the venom and in vitro in muscle incubated with venom. 5) The muscle degeneration observed in vitro resuloted in a dose-dependent release of CK. Bothrops jararaca. Venom also caused the release of CK in vitro, although this effect was less marked than that observed with Bothrops insularis venom¿. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores : Julia Prado Franceschi, François Radvanyi / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_AlbetizaLobode_D.pdf: 9308594 bytes, checksum: 5d373ae25e509c651bc76131bf282c5e (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: No presente trabalho procuramos inicialmente obter informações gerais sobre o veneno total de Bothrops lanceolatust comparando suas atividades enzimaticas com aquelas das Bothrops brasileiras, encontrando valores medios entre B. jararaca e B. jararacussu para atividade litica sobre caseina e TAME, como tambem em relação a atividade hemorragica. Apesar de não exibir efeito coagulante sobre o plasma, o veneno total coagula o fibrinogênio, apresenta atividade hemolitica indireta e prolonga o tempo de tromboplastina parcial ativada. Como esses dois ultimos efeitos foram mais evidentes com a fração F32 podemos caracteriza-la como uma fosfolipase A2 acida e anticoagulante. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In the presente work we initially obtained some information on the crude venom of Bothrops lanceolatus comparing its enzymatic activities with those of Brazilian Bothrops species. Caseinolytic, TAMEesterase and "hemorrhagic activities were intermediate to those of B. jararaca and B. jararacussu. Despite having no coagulant effect on plasma, crude venom clotted fibrinogen, possessed indirect hemolytic activity and prolonged the partial thromboplastin time. Since these last two activities were most marked with fraction F32, this fraction may be characterized anticoagulant acidic phospholipase A2'. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas