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Clonagem, análise estrutural e imunológica do alérgeno antígeno 5 do veneno da vespa Polybia paulista (Hymenoptera : Vespidae)Giratto, Danielli Thieza [UNESP] 02 March 2011 (has links) (PDF)
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giratto_dt_me_rcla.pdf: 1764427 bytes, checksum: 1b64e9443f58235f6ad350ec38383d9a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Polybia paulista ou popularmente “paulistinha” é uma vespa social da família Vespidae. Possui hábitos urbanos e grande ocorrência no Sudeste do Brasil, especialmente no Estado de São Paulo, onde tem causado muitos acidentes de importância médica. Na composição de seu veneno encontra-se um potente alérgeno, a proteína Antígeno 5 (Ag5) e embora sua função biológica ainda seja desconhecida, este alérgeno é responsável por importantes reações imunológicas cruzadas com o Ag5 do veneno de outros insetos sociais e com outras proteínas de eucariotos. A importância da reatividade cruzada em pacientes alérgicos ao veneno de vespas sociais é inquestionável, pois estas interações têm impacto direto sobre o diagnóstico e a seleção da melhor conduta terapêutica. Os diagnósticos de alergia são baseados na detecção de anticorpos do tipo IgE específico ao veneno por testes cutâneos ou de sangue. No entanto, respostas falso-positivas decorrentes da reatividade cruzada e respostas falso-negativas provenientes da baixa quantidade de IgE detectada, dificultam a interpretação dos resultados. A sequência completa de cDNA (621 pb) do alérgeno Ag5 do veneno da vespa P. paulista, foi clonada e a análise dos nucleotídeos revelou uma similaridade de 99% com a vespa Polybia scutellaris. Anticorpos policlonais foram produzidos contra a fração eletroforética protéica do Ag5 (25 kDA) de P. paulista e analisados imunologicamente por Western blotting. Os resultados demonstraram que os anticorpos reconheceram especificamente o alérgeno Ag5 no veneno bruto de P. paulista bem como, desenvolveram maior reação imunológica cruzada com os alérgenos Ag5 do veneno das vespas do gênero Polybia, embora não se descarte a possibilidade de ocorrência de reação cruzada com venenos de outros insetos sociais... / Polybia paulista, commonly known as paulistinha, is a social wasp of the family Vespidae. This species occurs in urban areas and is frequent in the Southeastern Brazil, especially in the State of São Paulo, where it has been responsible for many accidents of medical significance. A potent allergen, the protein antigen 5 (Ag5), is an important compound of the wasp venom. Although its biological function remains unknown, this component is responsible for substantial cross-immunological reactions with the Ag5 of venoms of other social insects and with eukaryotic proteins. The importance of cross-reactivity in allergic patients to the wasp venoms is unquestionable, because these interactions present a direct impact on the diagnosis and on the selection of the therapeutic treatment. Allergenic diagnoses are based on the detection of IgE specific to the venom via cutaneous or blood tests. However, sometimes they are hampered by false-positive responses as a result of cross-reactivity and false-negative responses that can occur due to the low amount of IgE detected as consequence of the low sensitivity of the test. The fulllength cDNA (621 bp) from the venom allergen Ag5 wasp P. paulista was cloned and nucleotide analysis revealed 99% of similarity with the wasp Polybia scutellaris. Polyclonal antibodies were produced against the electrophoretic protein fraction of Ag5 (25 kDa) of P. paulista and immunologically analyzed by Western blotting. The results showed that the antibodies strongly recognized the allergen Ag5 in the venom of P. paulista and developed higher cross-immune reaction with the same allergen in wasp venoms of the genus Polybia, although the possibility of cross reaction with other insect venoms not tested in this study cannot be excluded. The model carried out for the Ag5 P. paulista revealed the... (Complete abstract click electronic access below)
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Aspectos clínico, laboratorial e histopatológico da intoxicação experimental pelos venenos das serpentes Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar tratados com antiveneno e Mikania glomerataMotta, Yudney Pereira da [UNESP] 27 June 2008 (has links) (PDF)
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motta_yp_me_botfmvz.pdf: 1081354 bytes, checksum: b0200a48d1eec7085df0054b7dd38175 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho avaliou os aspectos clínicos, laboratoriais e histopatológicos da intoxicação experimental por Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar e comparou o tratamento entre soro antiofídico isolado e o soro antiofídico associado ao extrato de Mikania glomerata. Os ratos foram distribuídos em 2 grupos: VB – veneno botrópico e VC- veneno crotálico. Os grupos foram divididos em 3 subgrupos G1 (controle), G2 (veneno + soro antiofídico), G3 (veneno + soro antiofídico + extrato de Mikania glomerata). O veneno das serpentes (10mg/kg) foi inoculado, via intramuscular, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo. O soro antiofídico foi administrado via intraperitonial e o extrato de Mikania glomerata foi administrado por gavage. Os animais foram submetidos a avaliações clínicas, hematológicas e bioquímica sérica em 3 momentos: (M1) 30 minutos após inoculação, (M2) 6 horas após inoculação e (M3) 24 horas após inoculação. A histopatologia foi realizada somente no momento M3. Nos grupos VB e VC, foram observados hipotermia, edema de membro esquerdo, e no grupo VB, foram observadas incoagulabilidade sangüínea e diminuição nos valores de número de hemácias, hemoglobina, proteína plasmática total e volume globular. Nos dois grupos, houve aumento de leucócitos, neutrófilos e diminuição de linfócitos. Também foi observada elevação nos valores de uréia, creatinina e creatina quinase. Os achados histopatológicos incluem: degeneração, edema, congestão e hemorragias renais e musculares, necrose de coagulação, degeneração hidrópica renal e necrose tubular aguda. A principal ação da Mikania glomerata foi a redução ou prevenção de lesões musculares no veneno botrópico e a redução ou prevenção de lesões musculares e renais como observadas à histopatologia, nos animais do grupo crotálico. / This study has evaluated clinical, laboratorial and histopathologic aspects of experimental poisoning by Bothrops jararaca and Crotalus durissus terrificus in Wistar rats and has compared the treatment between antiophidian serum and antiophidian serum plus the extract of Mikania glomerata. The rats were distributed in two groups: BV – Bothrops venom and CV - Crotalus venom. The groups were splited in 3 subgroups: G1 (control), G2 (venom + antivenon), G3 (venom + antivenin + extract of Mikania glomerata). The snake venoms (10mg/kg) were inoculated for via intramuscular, on a lateral face of the left posterior limb. The antivenin was applied intraperitoneal and the extract of Mikania glomerata was given by gavage. The animals were submitted to clinical and laboratory evaluations in 3 moments: (M1) 30 minutes after inoculation, (M2) 6 hours after inoculation and (M3) 24 hours after inoculation. Histopathology examination was performed only at M3. Rats from both groups (BV and CV) presented hypothermia, noticeable left limb edema. Also in the group BV, blood incoagulability and decrease in red blood cell counts, hemoglobin, total plasma protein and packed cell volume were detected. Both groups showed leukocytosis, neutrophilia and lymphopenia. It was also verified increases in urea, creatinine and creatine kinase. Degeneration, edema, congestion, kidney and muscle hemorrhages, coagulation necrosis, kidney hydropic degeneration and acute tubular necrosis were found on histopathologic results. The main effect of the extract of Mikania glomerata was to reduce or prevent muscle lesions for the Bothrops venom and to reduce or prevent muscle and kidney lesions as showed by histophalologic examination in animals from Crotalus group.
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Intoxicação experimental por veneno de sapo em cães anestesiados: estudo clínico e laboratorialSimão, Natália Maria Braga [UNESP] 12 February 2007 (has links) (PDF)
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simao_nmb_me_botfmvz.pdf: 552288 bytes, checksum: 67bfc1bb6405ffa899ad044c0aa56c56 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente trabalho teve como objetivo avaliar os aspectos clínico e laboratorial de cães intoxicados com veneno de sapo. Foram utilizados 20 cães, adultos, sem raça definida, machos e fêmeas, sadios, divididos em dois grupos: controle (n=5) e intoxicados com veneno de sapo (n=15). Os cães foram submetidos à indução anestésica com tiopental sódico IV e mantidos em anestesia volátil com isofluorano a 3% durante o período de avaliação e registro de dados, que foi de duas horas e meia. Neste período, os animais do grupo controle receberam apenas placebo (solução fisiológica) e os animais do grupo intoxicado receberam uma alíquota do veneno de sapo por sonda orogástrica. Durante a avaliação, foi observada a presença dos sinais clínicos, tais como: sialorréia, irritação da mucosa oral, evacuação, micção, coloração das mucosas e temperatura corpórea. Também foi colhido material para avaliação hematológica, urinálise, bioquímica sérica e hemogasometria. Os resultados mostraram que a intoxicação por bufotoxina causa gastroenterite evidente e alterações neurológicas com sinais variáveis. O veneno de sapo não causa lesão renal, podendo ser considerado não nefrotóxico nas condições do presente experimento. Os animais intoxicados apresentaram uma leve alteração hepática medida pelos valores de ALT e FA. E a hemogasometria mostrou que podem ocorrer várias alterações do equilíbrio ácido-básico. / The purpose of this study was to evaluate the clinical and laboratorial of the dogs intoxicated with toad venom. For this we used 20 dogs without definitive breed, males and females, healthy, divided in two groups: Control (n=5) and Intoxicated (n=15). These dogs were submitted to anesthesic induction with sodic thiopental IV and maintained in volatile anaesthesia with isofluorane 3% during the period of evaluation and value records (two and half hours). In this period, the Intoxicated group received a fraction of the toad venom through oro-gastric catheter. During the evaluation, was observed the present or not of these clinical signs: profuse salivation, oral mucoses irritation, evacuation, urine, color mucous and body temperature. The animals were submitted to hematological evaluation, urinalysis, biochemical and blood gas analysis. The results showed that the intoxication by bufotoxin causes evident digestive tract alterations and neurologics alterations with variables signs. The toad venom doesn’t causes kidney injury, could consider not toxic for kidney in conditions of this experiment. The intoxicated animals showed a hepatic moderate alteration measured for ALT and FA values. Blood gas analysis showed that can present several acid-basic balance alterations, in bufoxin envenenation.
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Atividade coagulante e da toxidade da giroxina nativa e irradiada com Cobalto-60 isolada do veneno de Crotalus durissus terrificusBarros, Luciana Curtolo de [UNESP] 29 June 2010 (has links) (PDF)
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barros_lc_me_botfm.pdf: 1332337 bytes, checksum: 59f455ce412e913486df8681ce6b0e01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A giroxina isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus apresenta atividades coagulante e neurotóxica, caracterizada pelo “rolamento em barril”. É uma serinoprotease do tipo trombina-símile que tem a capacidade de converter o fibrinogênio em fibrina. Visando a atenuação destas atividades, a irradiação com 60Co aparece como uma importante ferramenta. O presente estudo teve por objetivo isolar e purificar a giroxina e avaliar o efeito da irradiação com 60Co sobre suas atividades coagulante e tóxica. O isolamento da giroxina envolveu duas etapas cromatográficas: gel filtração em coluna Sephadex G-75 e afinidade em coluna Benzamidina-Sepharose 6B. O alto grau de pureza foi confirmado por RP-HPLC C2/C18 e pela análise eletroforética, que revelou uma massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A giroxina nativa catalisou a hidrólise dos substratos cromogênicos S-2238 e S-2288, demonstrando tratar-se de uma serinoprotease pertencente à subclasse das enzimas trombina-símile, estável em diferentes pHs (5,5 a 8,5), sensível aos metais Mn2+ e Cu2+ e aos inibidores de serinoprotease PMSF e benzamidina. Apresentou melhor atividade coagulante sobre o plasma humano entre os pHs 6,0 e 7,4. A irradiação da giroxina nas doses de 0,5; 1,0 e 2,0 kGy anulou completamente suas atividades coagulante e tóxica. Os ensaios de toxicidade in vivo mostraram apenas alterações comportamentais sem demonstrar o rolamento em barril. Este fato sugere que as toxinas purificadas são mais sensíveis à irradiação, pois não há proteção mútua entre as proteínas presentes no veneno total. A giroxina nativa também não causou o bloqueio da contração neuromuscular in vitro sugerindo que a sua ação não tem efeito sobre o sistema nervoso periférico nas concentrações utilizadas / Gyroxin isolated from Crotalus durissus terrificus venom presents coagulant and neurotoxic activities. It belongs to the thrombin-like enzyme group capable of converting fibrinogen into fibrin. To reduce these toxic activities, the irradiation with Cobalt-60 appears to be an important tool. The present study was carried out in order to isolate and purify the gyroxin and evaluate the effects of irradiation with Cobalt-60 on coagulant and toxic activities. The gyroxin isolation consisted of two chromatographic steps: gel filtration (Sephadex G-75) and affinity (Benzamidine-Sepharose 6B). The high purity level of gyroxin was confirmed by RP-HPLC C2/C18 and electrophoretic analysis that showed a molecular weight of 30 kDa. The native gyroxin hydrolyzed the chromogenic substrates S-2238 and S-2288, indicating that this enzyme is a serine proteinase that belongs to the group of thrombin-like enzymes, stable when submitted to pHs from 5.5 to 8.5 and inhibited by Mn2+, Cu2+, PMSF and benzamidine. It was capable of coagulating human plasma at pH 6.0 and 7.4. The gyroxin irradiated at 0.5, 1.0 and 2.0 kGy doses neutralized the coagulant and toxic activities. The in vivo toxic study showed only behavioral alterations with no barrel rotation. This fact suggests that purified toxins are more sensitive to the irradiation because they e mutual protection with the other proteins present in the total venom. The native gyroxin was not able to block in vitro neuromuscular contraction, suggesting that the action of gyroxin, in the concentration used in this study, has no effect on the peripheral nervous system
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Avaliação da atividade de fosfolipase-D recombinante do veneno da aranha marrom(Loxosceles intermedia) sobre a proliferação, influxo de cálcio e metabolismo de fosfolipídios em células tumoraisWille, Ana Carolina Martins January 2014 (has links)
Resumo: As fosfolipases são uma família de enzimas encontradas em várias fontes biológicas incluindo os organismos procarióticos e eucarióticos. As aranhas do gênero Loxosceles, conhecidas popularmente como aranhas marrons, são eficazes em produzir em seus venenos uma grande proporção de fosfolipases-D. No veneno destas aranhas, estas enzimas estão relacionadas à dermonecrose, desregulação da resposta inflamatória, hemólise, nefrotoxicidade e agregação plaquetária. As fosfolipases-D catalizam a hidrólise de diferentes fosfolipídios gerando ácido fosfatídico, ou ácido lisofosfatídico, ou ceramida-1-fosfato, importantes mediadores nos eventos de sinalizações celulares. Alterações no padrão de expressão, atividade destas moléculas ou receptores para seus produtos tem sido relacionados com o desenvolvimento de muitos tumores. Desta forma, neste trabalho foi observado o efeito de uma fosfolipase-D exógena recombinante da glândula de veneno da aranha marrom Loxosceles intermedia (LiRecDT1) sobre as células das linhagens de melanoma murino B16-F10 e B16-F1. Por meio de experimentos de imunoblotting em duas dimensões com anticorpo contra a fosfolipase-D recombinante LiRecDT1 foi observada reatividade imunológica cruzada para pelo menos 25 spots no veneno bruto de L. intermedia, indicando alto nível de expressão para diferentes isoformas de fosfolipase-D. Experimentos de cinética de degradação de lipídios mostraram que esta toxina degrada de maneira tempo dependente tanto esfingomileina, gerando ceramida-1-fosfato e colina, quanto lisofosfatidilcolina, gerando ácido lisofosfatídico e colina e mostram menor atividade contra fosfatidilcolina. Através de experimentos de imunofluorescência com anticorpos contra LiRecDT1 e usando a toxina recombinante de fusão LiRecDT1-GFP foi observado a ligação direta de LiRecDT1 na membrana de células B16-F10. Também foi observado que a toxina recombinante LiRecDT1 tem acesso e degrada fosfolipídios das membranas das células B16-F10, observado em experimentos com extratos de membranas obtidos com detergente ou Ghosts de membrana pela geração de colina. Usando o Fluo-4 AM, um fluoróforo permeante sensível ao cálcio, foi possível observar que o tratamento das células B16-F10 e B16-F1 com a toxina LiRecDT1 induziu um aumento da concentração de cálcio no citoplasma. Em células B16-F10 também foram avaliadas a viabilidade e a morfologia após o tratamento com a fosfolipase-D recombinante e os resultados mostraram que não houve alterações sugerindo que a entrada de cálcio não foi decorrente a danos causados à membrana das células. Baseado no que é conhecido sobre a atividade de fosfolipases-D endógenas como indutores da proliferação celular e no fato de que LiRecDT1 se liga a superfície de células B16-F10 hidrolisando fosfolipídios e gerando lipídios bioativos, foi utilizada a toxina LiRecDT1 como uma fonte exógena de fosfolipase-D em células B16-F10. O tratamento destas células com a fosfolipase-D recombinante de aranha marrom foi efetivo no aumento da sua proliferação e de maneira tempo e concentração dependentes, especialmente na presença de esfingomielina sintética no meio. Estes resultados sugerem que a fosfolipase-D de aranha marrom pode ser usada como uma ferramenta bioativa para protocolos experimentais em biologia celular.
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Aspectos termodinâmicos da interação entre fosfolipases A2 de venenos ofídicos e inibidores: estudo por calorimetria de titulação isotérmica / Thermodynamic aspects of the interaction between phospholipases A2 from ophidian venoms and its inhibitors: a isothermal titration calorimetry studyDreyer, Thiago Revers [UNESP] 21 February 2017 (has links)
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Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese.
Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto.
Agradecemos a compreensão.
on 2017-04-12T16:35:48Z (GMT) / Submitted by Thiago Revers Dreyer null (thiagodreyer@ibb.unesp.br) on 2017-04-12T17:09:46Z
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Previous issue date: 2017-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Envenenamento por serpentes é um importante problema de saúde pública em vários países tropicais e subtropicais, pois além da mortalidade, pode resultar em sequelas permanentes como consequência de danos locais, representando assim um grande desafio à terapia utilizando antivenenos. As proteínas fosfolipases A2 (PLA2s) e fosfolipases A2 homólogas de venenos têm um papel fundamental na complexa patogênese da necrose do músculo esquelético e seus mecanismos de ação são apenas parcialmente entendidos. Por isso, a busca por inibidores e da completa descrição do mecanismo de ação das PLA2s e PLA2s homólogas representam assuntos amplamente abordados no campo acadêmico-científico. Para o melhor entendimento desses mecanismos e a busca por novas moléculas inibidoras, o entendimento dos processos de reconhecimento molecular de pequenos ligantes e macromoléculas biológicas é fundamental e requer a completa caracterização da energética de ligação desses agentes e da correlação entre os dados termodinâmicos e cinéticos com as estruturas moleculares envolvidas na ligação. Para tanto, a calorimetria de titulação isotérmica (ITC) é a metodologia mais utilizada com este fim. Nesse trabalho, nossos objetivos foram: i) determinar os parâmetros termodinâmicos de moléculas candidatas a inibidores da atividade miotóxica de PLA2s homólogas: bothropstoxina-I (BthTX-I) e moojenitoxina I (MjTX-I) e II (MjTX-II), purificadas do veneno de serpentes do gênero Bothrops e (ii) caracterizar a interação entre as componentes ácida (CA) e básica (CB) da crotoxina, obtida do veneno da serpente Crotallus durissus terrificus. As serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus são as principais responsáveis por acidentes ofídicos na América Latina e estas proteínas apresentam alta proporção do volume nestes venenos. Foi verificado por ITC que o ácido chicórico, composto vegetal atualmente extraído de várias plantas, que bloqueou a atividade miotóxica in vitro, se liga ao dímero de BthTX-I na proporção estequiométrica de 1:1 com média afinidade de ligação ( = 8.47±1.26 μM). Foi verificado ainda que o processo de ligação é entálpica e entropicamente favoráveis ( 3,97±0,14 kcal/mol, 2,83 kcal/mol). Entretanto para apresentar energia livre semelhante à já apresentadas para outros inibidores virais ainda seria necessário diminuir a energia de ligação na ordem de -10 kcal/mol. Em relação às interações dos íons Zn2+ com a BthTX-I, a titulação se apresentou predominantemente exotérmica e a isoterma de ligação foi melhor ajustada considerando-se 3 eventos de ligação (F-test, p<0.05), sendo que os íons Zn2+ tem baixa afinidade pela proteína ( = 83,3±25,4, 62,1±25,1 e 300,0±104,3 μM). Em função da baixa afinidade, o íon não se apresenta como um bom inibidor, mas tem sua importância na explicação dos mecanismos estruturais da BthTX-I. A suramina, quando titulada à MjTX-I e MjTX-II, apresentou afinidade de ligação moderada-alta ( =0,56±0,23 e 0,6±0,1 μM, respectivamente) e complexos termogramas, em ambos casos, com grandes variações entálpicas, com processos endo e exotérmico ocorrendo durante a titulação. Em ambos os casos foi sugerido que esse comportamento demonstra processos de oligomerização com formação de dímeros e tetrâmeros, nos casos da MjTX-I e MjTX-II respectivamente. Nos experimentos calorimétricos realizados com os componentes da crotoxina, CA e CB, foi sugerido pelo termograma e isotermas obtidos que a CA é capaz de dissociar o tetrâmero formado por CB para formar a crotoxina. Ambos os eventos apresentaram afinidades de dissociação do tetrâmero e complexação da CA/CB da ordem de submicrmolar enquanto o primeiro evento é entropicamente guiado enquanto o segundo é entalpicamente guiado. / Envenomation by snakebites is an important public health problem in many tropical and subtropical countries that, in addition to mortality, can result in permanent sequelae as a consequence of local damage, which represents a major challenge to antivenom therapy. Venom phospholipases A2 (PLA2s) and PLA2s-like proteins play an important role in the complex pathogeneis of skeletal muscle necrosis and their precise mechanism of action is only partially understood. Therefore, the search for inhibitors and the complete description of the mechanism of action of the PLA2s and PLA2s-like represent a wide covered issues in the academic and scientific fields. For a better understanding of these mechanisms and the search for new inhibitory molecules, the understanding of the molecular recognition processes of small ligands and biological macromolecules is fundamental and requires the complete characterization of the binding energy of these agents and of the correlation between thermodynamic and molecular structures involved in the binding. For this purpose, isothermal titration calorimetry (ITC) is the most used methodology. In this work, our objectives were: (i) to determine the thermodynamic parameters of molecules candidates for inhibitors of myotoxic activity of PLA2s-like proteins: bothropstoxin-I (BthTX-I) and moojenitoxin-I (MjTX-I) and II (MjTX-II), purified from snake venoms of the bothropic genus and (ii) characterize the thermodynamics of the interaction between the acidic (CA) and basic (CB) components of the crotoxin, purified from the venom of Crotallus durissus terrificus. Snakes of the genera Bothrops and Crotalus are the main responsible for ophidian accidents in Latin America and these proteins have a high proportion of the volume of these venoms. It was verified by ITC that chicoric acid, a vegetal compound extracted from several plants that blocks myotoxic acitivity of BthTX-I in vitro, binds to BthTX-I dimer at the stoichiometric ratio of 1:1 with medium binding affinity ( =8.47±1.26 μM). It was also verified that the binding process is enthalpic and entropically driven ( 3.97±0.14 kcal/mol, 2.83 kcal/mol). However, for the chicoric acid to have free energy similar to that already shown by other viral inhibitors, it would still be necessary to decrease its binding energy in the order of -10 kcal/mol. In relation to the interactions of the Zn2+ ions with BthTX-I, the titration was predominantly exothermic and the binding isotherm was better adjusted considering 3 binding events (F-test, p<0.05), with Zn2+ ions having low affinity for the protein ( = 83.3±25.4, 62.1±25.1 and 300.0±104.3 μM). Due to the low affinity, the ion does not present itself as a good inhibitor, but was important to explain the structural myotoxic mechanisms of Lys49-PLA2s. Suramine, when titrated to MjTX-I and MjTX-II, had moderate to high binding affinity ( = 0.56±0.23 and 0.6±0.1 μM, respectively) and complex thermograms in both cases, with large enthalpic variations with endo and exothermic processes occurring during the titration. In both cases, it was suggested that their behavior demonstrates oligomerization processes with formation of dimers or tetramers, in the cases of MjTX-I and MjTX-II, respectively. In the calorimetric experiments performed with the components of crotoxin, CA and CB, it was suggested by the thermogram and isotherms obtained that CA is able to dissociate the tetramer formed by CB to form the crotoxin. Both events showed dissociation affinities of the tetramer and complexation of the CA/CB in the submicromolar range, being the first event entropically driven while the second is entalpically driven. / FAPESP: 2013/24705-3 / FAPESP: 2015/17286-0
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Intoxicação experimental por veneno de sapo em cães anestesiados : estudo clínico e laboratorial /Simão, Natália Maria Braga. January 2007 (has links)
Orientador: Michiko Sakate / Banca: Raimundo de Souza Lopes / Banca: Mario Roberto Hatayde / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar os aspectos clínico e laboratorial de cães intoxicados com veneno de sapo. Foram utilizados 20 cães, adultos, sem raça definida, machos e fêmeas, sadios, divididos em dois grupos: controle (n=5) e intoxicados com veneno de sapo (n=15). Os cães foram submetidos à indução anestésica com tiopental sódico IV e mantidos em anestesia volátil com isofluorano a 3% durante o período de avaliação e registro de dados, que foi de duas horas e meia. Neste período, os animais do grupo controle receberam apenas placebo (solução fisiológica) e os animais do grupo intoxicado receberam uma alíquota do veneno de sapo por sonda orogástrica. Durante a avaliação, foi observada a presença dos sinais clínicos, tais como: sialorréia, irritação da mucosa oral, evacuação, micção, coloração das mucosas e temperatura corpórea. Também foi colhido material para avaliação hematológica, urinálise, bioquímica sérica e hemogasometria. Os resultados mostraram que a intoxicação por bufotoxina causa gastroenterite evidente e alterações neurológicas com sinais variáveis. O veneno de sapo não causa lesão renal, podendo ser considerado não nefrotóxico nas condições do presente experimento. Os animais intoxicados apresentaram uma leve alteração hepática medida pelos valores de ALT e FA. E a hemogasometria mostrou que podem ocorrer várias alterações do equilíbrio ácido-básico. / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the clinical and laboratorial of the dogs intoxicated with toad venom. For this we used 20 dogs without definitive breed, males and females, healthy, divided in two groups: Control (n=5) and Intoxicated (n=15). These dogs were submitted to anesthesic induction with sodic thiopental IV and maintained in volatile anaesthesia with isofluorane 3% during the period of evaluation and value records (two and half hours). In this period, the Intoxicated group received a fraction of the toad venom through oro-gastric catheter. During the evaluation, was observed the present or not of these clinical signs: profuse salivation, oral mucoses irritation, evacuation, urine, color mucous and body temperature. The animals were submitted to hematological evaluation, urinalysis, biochemical and blood gas analysis. The results showed that the intoxication by bufotoxin causes evident digestive tract alterations and neurologics alterations with variables signs. The toad venom doesn't causes kidney injury, could consider not toxic for kidney in conditions of this experiment. The intoxicated animals showed a hepatic moderate alteration measured for ALT and FA values. Blood gas analysis showed that can present several acid-basic balance alterations, in bufoxin envenenation. / Mestre
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Aspectos clínico, laboratorial e histopatológico da intoxicação experimental pelos venenos das serpentes Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar tratados com antiveneno e Mikania glomerata /Motta, Yudney Pereira da. January 2008 (has links)
Orientador: Michiko Sakate / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Rosa Maria Barilli Nogueira / Resumo: O presente trabalho avaliou os aspectos clínicos, laboratoriais e histopatológicos da intoxicação experimental por Bothrops jararaca e Crotalus durissus terrificus em ratos Wistar e comparou o tratamento entre soro antiofídico isolado e o soro antiofídico associado ao extrato de Mikania glomerata. Os ratos foram distribuídos em 2 grupos: VB - veneno botrópico e VC- veneno crotálico. Os grupos foram divididos em 3 subgrupos G1 (controle), G2 (veneno + soro antiofídico), G3 (veneno + soro antiofídico + extrato de Mikania glomerata). O veneno das serpentes (10mg/kg) foi inoculado, via intramuscular, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo. O soro antiofídico foi administrado via intraperitonial e o extrato de Mikania glomerata foi administrado por gavage. Os animais foram submetidos a avaliações clínicas, hematológicas e bioquímica sérica em 3 momentos: (M1) 30 minutos após inoculação, (M2) 6 horas após inoculação e (M3) 24 horas após inoculação. A histopatologia foi realizada somente no momento M3. Nos grupos VB e VC, foram observados hipotermia, edema de membro esquerdo, e no grupo VB, foram observadas incoagulabilidade sangüínea e diminuição nos valores de número de hemácias, hemoglobina, proteína plasmática total e volume globular. Nos dois grupos, houve aumento de leucócitos, neutrófilos e diminuição de linfócitos. Também foi observada elevação nos valores de uréia, creatinina e creatina quinase. Os achados histopatológicos incluem: degeneração, edema, congestão e hemorragias renais e musculares, necrose de coagulação, degeneração hidrópica renal e necrose tubular aguda. A principal ação da Mikania glomerata foi a redução ou prevenção de lesões musculares no veneno botrópico e a redução ou prevenção de lesões musculares e renais como observadas à histopatologia, nos animais do grupo crotálico. / Abstract: This study has evaluated clinical, laboratorial and histopathologic aspects of experimental poisoning by Bothrops jararaca and Crotalus durissus terrificus in Wistar rats and has compared the treatment between antiophidian serum and antiophidian serum plus the extract of Mikania glomerata. The rats were distributed in two groups: BV - Bothrops venom and CV - Crotalus venom. The groups were splited in 3 subgroups: G1 (control), G2 (venom + antivenon), G3 (venom + antivenin + extract of Mikania glomerata). The snake venoms (10mg/kg) were inoculated for via intramuscular, on a lateral face of the left posterior limb. The antivenin was applied intraperitoneal and the extract of Mikania glomerata was given by gavage. The animals were submitted to clinical and laboratory evaluations in 3 moments: (M1) 30 minutes after inoculation, (M2) 6 hours after inoculation and (M3) 24 hours after inoculation. Histopathology examination was performed only at M3. Rats from both groups (BV and CV) presented hypothermia, noticeable left limb edema. Also in the group BV, blood incoagulability and decrease in red blood cell counts, hemoglobin, total plasma protein and packed cell volume were detected. Both groups showed leukocytosis, neutrophilia and lymphopenia. It was also verified increases in urea, creatinine and creatine kinase. Degeneration, edema, congestion, kidney and muscle hemorrhages, coagulation necrosis, kidney hydropic degeneration and acute tubular necrosis were found on histopathologic results. The main effect of the extract of Mikania glomerata was to reduce or prevent muscle lesions for the Bothrops venom and to reduce or prevent muscle and kidney lesions as showed by histophalologic examination in animals from Crotalus group. / Mestre
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Caracterização das atividades de PLA2s Lys49, isoladas de venenos de serpentes do gênero Bothrops, em preparação neuromuscular de camundongos e influência de agentes neutralizadores /Cavalcante, Walter Luís Garrido. January 2009 (has links)
Orientador: Márcia Gallacci / Banca: Roberto de Lucia / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Vidal Haddad Junior / Banca: Maeli Dal Pai-Silva / Resumo: As fosfolipases A2 (PLA2s) que apresentam substituição do resíduo de aspartato pelo de lisina na posição 49, PLA2s Lys49 homólogas, são importantes componentes miotóxicos dos venenos de serpentes da família Viperidae. Estas proteínas induzem severa mionecrose através de um mecanismo cálcio-independente. Tradicionalmente, as PLA2s Lys49 são classificadas como miotoxinas não-neurotóxicas, visto que não causam paralisia quando injetadas in vivo, mesmo em doses elevadas. No entanto, vários estudos in vitro demonstram que as PLA2s Lys49 dos venenos de serpentes do gênero Bothrops induzem bloqueio neuromuscular em preparações isoladas. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avançar no conhecimento do mecanismo da ação paralisante in vitro destas toxinas. Para tanto, foram caracterizadas as atividades da MjTX-II, isolada do veneno da Bothrops moojeni, em preparações frênico-diafragma de camundongos, através de estudos miográfico, eletrofisiológico e morfológico. Os efeitos desta toxina foram comparados com os da PrTX-I e da BthTX-I, isoladas do veneno da Bothrops pirajai e da Bothrops jararacussu, respectivamente. Além disto, foi avaliada a capacidade da suramina e do extrato aquoso de Casearia sylvestris em neutralizarem as ações destas toxinas. Os resultados obtidos mostraram que a MjTX-II, da mesma forma que a BthTX-I e a PrTX-I, induziu efeitos miotóxico e bloqueador neuromuscular na preparação frênico-diafragma de camundongos. O estudo eletrofisiológico revelou a atividade despolarizante das três toxinas na membrana da fibra muscular, bem como a habilidade da MjTX-II em induzir aumento na freqüência dos potenciais de placa motora terminal em miniatura. A pré-incubação com e extrato aquoso de Casearia sylvestris neutralizou as atividades miotóxica e bloqueadora neuromuscular das três toxinas. De forma similar, a pré-incubação com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Phospholipases A2 (PLA2s) with a lysine substituting for the highly conserved aspartate 49, Lys49 PLA2 homologues, are important myotoxic components in venoms from snakes of Viperidae family. These proteins induce conspicuous myonecrosis by a catalytically-independent mechanism. Traditionally, the Lys49 PLA2 homologues are classified as non-neurotoxic myotoxins given their inability to cause paralytic effect when injected in vivo, even at relatively high doses. However, a series of in vitro studies has shown that several Lys49 PLA2 homologues from Bothrops snake venoms induce neuromuscular blocking activity on nerve-muscle preparations in vitro. Therefore, the aim of this work was to advance in the understanding of the mechanisms underlying the in vitro paralyzing action of these proteins. Thus, we characterized the activities of MjTX-II, from Bothrops moojeni venom, in mice phrenic-diaphragm preparation by means of myographical, electrophysiological and morphological approaches. The effects of this toxin were compared with those of PrTX-I and BthTX-I, from Bothrops pirajai and Bothrops jararacussu venoms, respectively. Besides this, we evaluated the ability of suramin and the aqueous extract of Casearia sylvestris in neutralizing the actions of these toxins. The results showed that the MjTX-II, as well as BthTX-I and PrTX-I, induced myotoxic and neuromuscular blocking activities in phrenic-diaphragm preparation of mice. The electrophysiological study revealed the depolarizing activity of these toxins in the muscle fiber membrane and the ability of MjTX-II to increase the frequency of miniature endplate potentials. The pre-incubation with the aqueous extract of Casearia sylvestris neutralized both myotoxic and neuromuscular blocking activities of all toxins. Similarly, the pre-incubation with suramin neutralized the activities of MjTX-II. Taken together, these findings suggest that the ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estudo peptídico e determinação do perfil de metabólitos de venenos de escorpiões da família Buthidae : Tityus serrulatus, Tityus bahiensis e Tityus obscurus /Dias, Nathalia Baptista. January 2016 (has links)
Orientador: Mario Sergio Palma / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Ivo Lebrun / Banca: Ian Castro Gamboa / Banca: Osvaldo Augusto Brazil Esteves Sant'Anna / Resumo: Numerosos estudos produzidos nos últimos 30 anos, vêm elucidando estruturas e atividades biológicas de vários componentes de venenos animais, demonstrando suas complexas composições. Os venenos de escorpiões são misturas complexas de compostos biologicamente ativos, tais como: compostos de baixa massa molar, peptídeos e proteínas, sendo estas últimas as mais amplamente estudadas. Até então, pouco se conhece sobre os pequenos peptídeos e metabolitos dos venenos de escorpiões, sendo necessárias pesquisas para ampliar esse conhecimento. Este estudo visou a obtenção de um perfil peptídico detalhado dos venenos das espécies T. serrulatus, T. bahienis e T. obscurus, com foco principal nos pequenos peptídeos lineares, antes negligenciados em venenos de escorpiões. A extração em acetonitrila 50 % (v/v) foi uma das diferenças estratégicas para esse objetivo, e a separação e sequenciamento destes peptídeos foram realizados utilizando-se um sistema LCESI- IT-TOF. Os componentes peptídicos dos venenos dos escorpiões estudados estão distribuídos na faixa de massa molar de 400-4000 Da, sendo possível detectar a presença de 521 peptídeos distintos no veneno de T. serrulatus, 460 peptídeos no veneno de T. bahiensis e 517 peptídeos no veneno de T. obscurus. Também foi possível estabelecer os perfis peptídicos dos venenos das três espécies estudadas, assim como obter a sequencia de 66 peptídeos, dos quais alguns apresentaram semelhanças com toxinas já conhecidas de escorpiões. Treze dos novos peptídeos detectados, contendo entre 6 e 19 aminoácidos, foram sintetizados e caracterizados com relação às suas atividades biológicas em ensaios de antibiose, hemólise, desgranulação de mastócitos, LDH, ensaio de campo aberto, dor e inflamação em mamíferos, demonstrando algumas atividades principalmente com relação à hemólise, (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Numerous studies produced in the last 30 years, come elucidating structures and biological activities of various components of animal venoms, showing their complex compositions. The scorpion venoms are complex mixtures of biologically active compounds, such as low molecular weight compounds, peptides and proteins, the latter being the most widely studied. To the present time not much is known about the small peptides and metabolites of scorpion venoms, requiring research to expand this knowledge. This study aimed to obtain a detailed peptide profile of the venoms of T. serrulatus, T. bahienis and T. obscurus species, focusing primarily on small linear neglected peptides in scorpion venom. The extraction in 50% acetonitrile was one of the strategic differences for this purpose and the separation and sequencing of these peptides were performed "on-line" using an LC-ESI-ITTOF system. The peptide components of the scorpion venoms are distributed along the molar mass range of 400-4000 Da, and in this study we could detect the presence of 521 different peptides in T. serrulatus venom, 460 peptides in T. bahiensis and 517 in T. obscurus. It was also possible to establish the peptide profiles of the venoms of the three species studied, as well as to obtain the sequence of 66 peptides, some of which had similarities to known already toxins of scorpions. Thirteen of the newly detected peptides, containing between 6 and 19 amino acids, were synthesized and characterized with proposal to obtain their biological activities, such antibiosis, hemolysis, mast cell degranulation, LDH, open field test, pain and inflammation in mammals, showing some particularly activities in hemolysis, pain and mammals locomotion. This work also revealed the metabolites profile in these venoms with a LCMS-Q-TOF-MS system for qualitative and quantitative analysis. For this purpose, we (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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