Orientador: Marcos Hikari Toyama / Mestre

Resumo: No Brasil, existem vários animais de importância médica, as aranhas do gênero Loxosceles e as lagartas do gênero Lonomia em especial apresentam índices alarmantes de acidentes com humanos. Esses animais peçonhentos e traumatizantes podem provocar morbidez importante e algumas vezes mortalidade em humanos. Após a picada da aranha marrom (Loxosceles intermedia), as vítimas apresentam lesões cutâneas necróticas ao redor da picada e, em menor freqüência, sinais sistêmicos tais como insuficiência renal, coagulação intravascular disseminada e hemólise. Enquanto, o contato acidental com as cerdas pontiagudas contendo o veneno da lagarta (Lonomia obliqua) leva a dor em queimação, edema, eritema e em alguns casos hemorragias, hemólise e insuficiência renal. Neste presente trabalho, nós caracterizamos bioquímica e biologicamente seis isoformas recombinantes e uma isoforma mutada de fosfolipase-D presentes no veneno de Loxosceles intermedia. O tratamento de eritrócitos provenientes de sangue humano com as toxinas induziu experimentalmente hemólise direta de modo concentração- e tempo-dependentes. Os eritrócitos expostos à toxina fosfolipase-D recombinante apresentaram alterações morfológicas no tamanho e na forma, agregação dos lipid rafts e externalização de fosfatidilserina. A lise direta dos eritrócitos induzida pela fosfolipase-D recombinante depende da espécie do animal testado, já que eritrócitos obtidos a partir de humanos, de coelhos e de carneiros sofreram hemólise em uma porcentagem muito superior do que a observada com eritrócitos de cavalo. Em ensaios de microscopia confocal e imunofluorescência indireta, bem como em citometria de fluxo, utilizando uma toxina fluorescente recombinante GFPfosfolipase- D mostraram a ligação direta da toxina à membrana dos eritrócitos humanos. Além disso, observou-se que está enzima promove a hidrólise de fosfolipídios como a esfingomielina e lisofosfatidilcolina da membrana dos eritrócitos, formando ácido lisofosfatídico e ceramida-1-fosfato respectivamente, que são capazes de ativar uma série de enzimas intracelulares que culminam na morte e ruptura dos eritrócitos. Além disso, o tratamento com a fosfolipase-D recombinante estimula o influxo de cálcio detectado através de uma sonda fluorescente sensível ao cálcio (Fluo-4). Este influxo de cálcio mostrou ser mediado por canais de cálcio do tipo-L. Fazendo o uso de alguns inibidores sugere-se duas possíveis vias que explicam a hemólise induzida pela fosfolipase-D. A primeira através da formação de ácido lisofosfatídico e ativação dos receptores LPA1/LPA3 acoplados a proteína G e a segunda pela formação de eramida-1-fosfato e da sua interconversão em ceramida, esfingosina e esfingosina-1-fosfato. Desse modo, os resultados aqui descritos fornecem evidências de que as fosfolipases-D do veneno de L. intermedia desencadeiam a hemólise direta sobre de eritrócitos humanos de maneira dependente da atividade catalítica e que a ruptura das células ocorre com a formação de metabolitos bioativos que ativam cascatas de sinalização. Por fim, foi clonada uma nova fosfolipase A2 presente nas cerdas de Lonomia obliqua. Esta nova toxina foi parcialmente caracterizada, porém futuramente será feita uma avaliação mais aprofundada das suas características bioquímicas, estruturais e biológicas. Logo, esse estudo sobre as fosfolipases presente nos venenos de Loxosceles intermedia e de Lonomia obliqua pode auxiliar o melhor entendimento dos efeitos fisiopatológicos desenvolvidos nos acidentes com esses animais, assim como para o esenvolvimento de novas manobras terapêuticas e aplicações biotecnológicas e industriais.

Orientador : Michiko Sakate / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo avaliar os aspectos clínico, laboratorial, histopatológico e tratamento na intoxicação experimental com o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus em cães. Foram utilizados 21 cães, adultos, sem raça definida, divididos em três grupos com sete animais: grupo I - somente veneno; grupo II - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia; grupo III - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia + alcalinização da urina. O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus liofolizado e reconstituído em solução salina foi inoculado pela via subcutânea, na dose de 1mg/kg de peso vivo, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo dos cães dos grupos I, II e III. Os animais foram submetidos às avaliações clínica, hematológica, hemostática, urinálise, bioquímica sérica, hemogasometria, pressão arterial sistólica, eletrocardiograma e mielograma. Três animais de cada grupo foram eutanasiados e foram colhidas amostras do tecido muscular para avaliação histopatológica. Os resultados mostraram a eficácia da soroterapia na neutralização do veneno e mostrou que o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus provoca alterações clínica, hematológica, hemostática, de urinálise, hemogasométrica, da pressão arterial sistólica, do mielograma e histopatológica nos cães. Não houve evidências de alterações eletrocardiográficas e bioquímica. / Abstract: This work evaluated the clinical, laboratorial, histological and treatment in the experimental intoxication with the venom of the Crotalus durissus terrificus snake in dogs. Twenty-one adults (mixed breed) dogs divided in three groups with seven animals were used: group I - only venom; group II - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy; group III - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy + alkalization of the urine. The lyophilized venom of the Crotalus durissus terrificus snake was reconstituted in saline solution and inoculated subcutaneous, in the dose of 1mg/kg B.W., in the lateral face of the left thigh of the dogs of the groups I, II and III. The animals were submitted to clinical, hematological evaluation, hemostatic, urinalysis, biochemical, blood gas analysis, systolic arterial pressure, electrocardiogram and mielograma. Three animals of each group were eutanasied and samples from the muscular tissue and popliteal lymphonode were collected for hitopatological evaluation. The results showed the effectiveness of the serum therapy in the neutralization of the venom and it showed that the venom of the Crotalus durissus terrificus snake causes clinical, hematological, hemostatic, of urinary, hemogasometric changes, of the systolic arterial pressure, of the mielograma and histopathological in the dogs. There were no evidences of alterations eletrocardiografic and biochemical alterations. / Doutor

Orientador: Michiko Sakate / Resumo: O escorpionismo é um problema comum que acomete países tropicais e subtropicais e que assume grande importância médico-sanitária devido à sua fatalidade sobre aqueles indivíduos mais sensíveis, podendo levar crianças e idosos à morte. O potencial letal do envenenamento reside nas graves alterações cardiopulmonares que a toxina escorpiônica é capaz de gerar em suas vítimas. A presente pesquisa avaliou os efeitos do veneno do escorpião Tityus serrulatus em cães com duas diferentes doses: uma dose que simularia o envenenamento natural (0,4 mg/dose total) e outra dose experimental (0,25 mg/kg). Foram observados sinais clínicos gerais em diferentes momentos pós-envenenamento, bem como dados específicos relacionados ao sistema cardio-pulmonar por meio de mensuração da pressão arterial sistêmica, dosagem da atividade enzimática de CK-MB e de exames radiográficos, eletrocardiográficos e ecocardiográficos. Os resultados obtidos demonstraram que o veneno escorpiônico foi capaz de gerar lesão cardíaca aguda e reversível em poucos dias sob dose experimental e produziu quadro de envenenamento leve na dose que simulara o acidente natural. / Abstract: Scorpionism is a common problem that occurs in tropical and subtropical countries and has great medical and sanitary significance because of its fatality in sensitive individuals, leading children and old people to death. The lethal potential of poisoning is due severe pulmonary and cardiac effects that scorpion toxin can cause in it's victims. The present research evaluated the effects of the Tityus serrulatus toxin in dogs using two different dosages: one dose that simulates the natural envenoming (0,4 mg/total dose) and another experimental dose (0,25 mg/kg). General clinical signs were observed at different moments after the poisoning, as well as specific signs related to cardiac and pulmonary systems by using arterial blood pressure measurement, CK-MB enzymatic activity as well as radiographic, electrocardiographic and echocardiographic evaluations. The results showed that scorpion toxin can cause acute and reversible cardiac lesions under experimental dosage and produced mild poisoning at the dosage that simulated natural envenoming. / Mestre

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T01:45:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_SoraiaKatiaPereira_M.pdf: 8130661 bytes, checksum: ab30b86629cbc4ddaaad83dddc5d7e5b (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Esta tese descreve os efeitos do veneno da aranha Phoneutria nigriventer sobre a pressão arterial média (PAM) e em corações isolados de ratos. Para avaliação dos parâmetros in vivo, o método utilizado consistiu basicamente de monitorização da PAM de ratos anestesiados através de transdutor de pressão. Os parâmetros in vitro foram avaliados em função da pressão desenvolvida no ventrículo esquerdo (PDVE), freqüência cardíaca (medidos através de um balão inserido na cavidade ventricular) e fluxo coronariano (coleta do efluente coronariano) em intervalos de tempo préestabelecidos. A administração endovenosa do veneno de Phoneutria nigriventer (0,1 mg/kg) produziu hipotensão rápida e reversível. Na dose de 0.3 mg/kg, o veneno evocou alterações bifásicas caracterizadas por hipotensão transitória seguida por hipertensão prolongada e discreto aumento da freqüência cardíaca. Tais alterações foram acompanhadas por fasciculações generalizadas, diurese, defecação, sialorréia, cianose e dispnéia. Doses de veneno mais elevadas (0.6 mg/kg) produziram alterações mais intensas, dessincronizadas e determinou a morte de 75 % (n=20) dos animais. O tratamento prévio dos animais com atropina, propranolol ou fenoxibenzamina não aboliu as alterações induzidas pelo veneno in vivo, excluindo o possível envolvimento do sistema nervoso autônomo nessa resposta. Posteriormente, investigamos o envolvimento de componentes como cininas, PAF, neurocininas e NO na resposta hipotensora induzida pelo veneno in vivo. O tratamento prévio dos animais com Hoe 140 (antagonista de receptores 82), WE8 2086 (antagonista de PAF), SR 140333 (antagonista de receptores NK1) ou L-NAME (inibidor da síntese de óxido nítrico) não alterou de modo significativo a hipotensão induzida pelo veneno sugerindo que tais mediadores não estão envolvidos nessa resposta hipotensora. A ausência de efeito da indometacina sobre a resposta bifásica induzida pelo veneno sugere que a hipotensão e hipertensão não são decorrentes da formação de PGb e TXA2, respectivamente. Finalmente, a queda na PAM induzida pelo veneno foi parcialmente inibida pelo bloqueador dos canais de potássio dependentes de ATP (glibenclamida) indicando que a hipotensão induzida pelo veneno é mediada, pelo menos em parte, da ativação de canais de potássio. A resposta hipertensora induzida pelo veneno não foi alterada nos animais tratados com antagonista de receptores AT1 de angiotensina II (Losartan) ou com antagonista de receptores de endotelina do tipo ETA(FR 139317) indicando que o veneno não estimula o sistema renina angiotensina e nem promove a liberação de ET-1 no organismo. Contudo, esse aumento de PAM induzido pelo veneno de Phoneutria nigriventer foi marcadamente reduzido de modo dose-dependente com antagonistas de canais de Ca2+ do tipo L (verapamil, diltiazem e nifedipina) sugerindo que essa hipertensão arterial é dependente da ativação de canais de cálcio do tipo L. A administração inta-aórtica do veneno (50 µg) em corações isolados produziu inotropismo positivo (aumento da PDVE) acompanhado por discreto cronotropismo positivo (aumento da FC). Na dose de 100 µg o veneno produziu inotropismo positivo imediato seguido por bloqueio átrio-ventricular transitório, bradicardia, aumento da pressão diastólica e queda do fluxo coronariano. Em corações isolados, a infusão contínua de propranolol foi capaz de proteger os corações das alterações induzidas pelo veneno em ambas as doses. Entretanto, o tratamento dos corações com atropina não modificou signifrcativamente tais alterações, exceto, uma discreta proteção sobre a bradicardia observada com altas doses do veneno. Isto sugere que nesta preparação in vitro, o veneno promove liberação de noradrenalina e acetildblina das terminações nervosas simpáticas e parassimpáticas do músculo cardraco. Todavia, embora o veneno produza a liberação desses neurotransmissores in vitro, concluimos que estes não são os responsáveis pela hipotensão e hipertensão observados in vivo em virtude dos resultados negativos obtidos com atropina, fenoxibenzamina e propranolol / Abstract: The changes induced in the mean arterial blood pressure (MABP) of anaesthetised rats following the administration of armed spider (Phoneutria nigriventer) venom have been investigated. The intravenous injection of Phoneutria nigriventer venom (PNV; 0.1 mg/kg) evoked a brief and reversible decrease in the MABP whereas a higher dose of venom (0.3 mg/kg) caused a biphasic response characterized by a short lasting hypotension followed by a sustained and prolonged hypertension (40-50 min). These changes were accompanied by tachycardia, salivation, fasciculations, defecation and respiratory disturbances. Pretreatment of the animais with atropine (10 mg/kg), propranolol (100 mg/kg), phenoxybenzamine (100 mg/kg) and indomethacin (4 mg/kg) did not significantly affect the MABP changes induced by PNV. Similarly, the bradykinin B2 receptor antagonist Hoe 140 (0.6 mg/kg), the PAF antagonist WEB 2086 (20 mg/kg), the NK1 receptor antagonist SR 140333 (0.5 mg/kg) and the nitric oxide synthase inhibitor Nro-nitro-L-arginine methyl ester (10 mg/kg) had no significant effect on the PNV-induced MABP changes. The increase in the MABP induced by PNV was also not significantly affected by either angiotensin 11 receptor antagonist losartan (10 mg/kg) or the endothelin ET A receptor antagonist FR 139317 (30 mg/kg). The A TP-dependent potassium channel antagonist glibenclamide (50 mg/kg) reduced by 40% the hypotension induced by Pf'JV without affecting the hypertensive response. Pretreatment of the animais with Ltype Ca2+ channel antagonists such as verapamil (10-100 µ/kg/min), diltiazem (40-120 /-l9/kg/min) and nifedipine (0.3-10 mg/kg) markedly attenuated the PNVinduced hypertension. Verapamil (30 µ/kg/min) and diltiazem (120µ/kg/min) also promptly reversed the established hypertension induced by PNV when infused 8 min after venom injection. Our results indicate that the brief decrease of blood pressure induced by PNV is partially due to A TP-dependent or calcium activated channels activation. The prolonged hypertension seems to result from direct calcium entry in vascular and/or cardiac muscles. Phoneutria nigriventer venom (PNV; 50 and 100 µg) was also investigated in isolated rat hearts by the Langendorff method. Doses of 50 µg evoked a significant positive inotropism (increase of left ventricule developed pressure; LVDP) associated with discreete positive cronotropism. Higher doses of PNV (100µg caused an immediate increase of L VDP followed by bradicardy and temporary atrium-ventricule blockad (AVB). This was accompained by significant reduction of coronary blood flow. These changes were prevented by the P-blocker propranolol indicating that such effects are caused by activation of sympathetic nerve endings and hence noradrenaline release. Since atropine potentiated the increase of L VDP and attenuated the bradicardia induced by PNV, it is likely that PNV also induces the release of acetylcholine from parassympathetic nerve endings. However, the release of both noradrenaline and acetylcholine from the rat hearts does not probably account for the cardiovascular changes observed in vivo. The in vivo effect is likely to be of peripheral or CNS, rather than cardiac, origin / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Julia Prado Franceschi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RejaneMariaLirada_D.pdf: 35252135 bytes, checksum: d8fa4a7fb76a10643309ff440ecc76fc (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Este trabalho trata do estudo farmacológico do veneno de Bothrops leucurus, conhecida como jararaca-do-rabo-branco. Objetivou-se caracterizar suas atividades bioquúnicas e imunobiológicas, como forma de avaliar o grau de soroproteção conferido pelos anti-venenos produzidos no Brasil e anti-B. leucurus, produzido na Argentina. Utilizou-se venenos de duas regiões geográficas da Bahia (Região Metropolitana do Salvador - RMS e Sul/Sudeste baiano - SB) e de machos e remeas, a fim de se estabelecer possíveis variações geográficas e sexuais. Procedeu-se a determinação da dosagem protéica, perfil cromatográfico e eletroforético, das atividades tóxica, proteolítica, edemaciante, hemorrágica, necrosante, defibrinante, pró-coagulante, miotóxica e sobre a junção neuromuscular, caracterização imunoquúnica e neutralização das atividades biológicas da peçonha, frente aos soros antibotrópico-crotálico (SABC) do Instituto Butantan (IB), Instituto Vital Brazil (IVB), Fundação Ezequiel Dias (FUNED) e Soro anti- B. leucurus do Instituto Carlos Malbrán. O perfil eletroforético do veneno caracterizou-se pela presença de 4 bandas e o perfil cromatográfico por 7 picos, sendo semelhantes nos diferentes pools. Houve variação regional e sexual, nas atividades biológicas, já que o veneno das serpentes do SB apresentou atividades tóxica, hemorrágica, necrosante e miotóxica maior que da RMS, no entanto, a atividade coagulante desta última foi maior que o da primeira. O veneno das remeas foi mais coagulante que o dos machos. Todas as amostras induziram mionecrose, caracterizada por "balonização", vacuolização, lesões "delta", hipercontração, condensação das miofibrilas e áreas de degeneração muscular. As amostras, em concentrações a partir de 50 J.!glrnl,inibirama transmissão neuromuscular, de maneira dose-dependente e irreversível(com exceção do veneno dos machos), devido às suas ações pós-juncionais. Na dose de 10 µg/ml,veneno de machos e remeas induziu aumento na amplitude das respostas musculares, demonstrando ação pré-sináptica. A peçonha de espécimens da RMS foi mais potente em provocar 50% do bloqueio da resposta contrátil que os da SB, assim como o veneno das remeas foi mais potente que dos machos. Observou-se inibição da resposta acetilcolínica nas preparações tratadas com 50 e 100 µg/mldas diferentes amostras e da amplitude da resposta muscular, de maneira dose-dependente e irreversível, com variação geográfica e sexual. O ELISA demonstrou que todos os pools apresentaram títulos de anticorpos frente a todos os anti-soros testados, sendo maiores frente ao soro específico, com exceção do pool da RMS, cuja titulação do soro específico foi equivalente a do SABC do IB. Dentre os soros inespecíficos,o do IB foi o que apresentou maior titulação, seguido do SABC da FUNED e do IVB. Houve variação na capacidade neutralizante dos soros frente às amostras, e o SABC/IB apresentou maior reatividade cruzada frente ao veneno de machos e da RMS. Os SABCIFUNED e IVB foram melhor reconhecidos pelo veneno de machos, da RMS e SB. O Westemblot demonstrou que o veneno desta espécie apresentou reação cruzada tanto frente ao soro anti-B. leucurus quanto ao SABC do IB e que a reação foi mais intensa quando utilizou-se o soro específico. Todos os anti-venenos foram capazes de neutralizar as atividades hemorrágica, necrosante e hemolítica das duas amostras de veneno, apesar da variação regional observada nesta soroneutralização / Abstract: The present work was a phannacological study of the action Bothrops leucurus venoro, popular known as "white-tailed lancehead". Venom effects (males and females from 1v1RSand South/Southeast region - SSR, Bahia, Brazil) were examined to establish geographical and sexual variability. The venom was characterized based on biochemical (total protein content, chromatographic and electrophoretic pattern), biological (lethal - LDso, proteolytic, venom-induced oedema - ED3o, haemorrhagic - MHD, necrotizing - MND, procoagulant - MCD, defibrinogenating- MDD, myotoxic and neurotoxic activities), imunochemical (ELISA, Westemblot) properties and neutralization of the toxic activities (haemorrhage, necrosis and coagulation). The antibothropic antivenom was provided Instituto Butantan, Instituto Vital Brazil and Fundação Ezequiel Dias (Brazil) and anti-Bothrops leucurus antivenom provided Instituto Malbrán (Argentina). The electrophoretic pattem showed 4 bands and chromatographic pattem 7 peaks without sexual and geographical variability. Lethal, haemorrhagic, necrotizing and myotoxic activities are more intense in snakes proceeding of the SSR than MRS. The coagulant activity of the female's venom is more coagulant than male. All samples induced myonecrosis characterized by swollen, vacuolization, "delta" lesions, myofilament hypercontraction and areas of the muscular damage. Results indicated that by indirect stimulation, B. leucurus venom induced neuromuscular blockade dose-dependent and is irreversible under concentration upper of 50 µg/ml, with exception of the male's venom (upper 100 µg/ml). This occurred probably due to postsynaptic action (depolarizing the cellular membrane, characterized for the severe contracture in 100 µg/ml e 200µg/ml concentrations) of the venom proceeding of the 1v1RSand SSR regions and moderated contracture in 200 µg/ml concentration of the males and females venoro. A males and females venom-induced effect on presynaptic activity was suggested by the marked increase in the twitch tension in 10 µg/ml concentration. The female's B. leucurus venom and proceeding of the 1v1RS region were more potent than male's venom of the SSR region in provocked 50% of the neuromuscular blockade (P<0.05) / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:02:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Panunto_PatriciaCosta_M.pdf: 4217443 bytes, checksum: db024bfe05cc36116e7a4504728fe778 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O contato com lagartas de mariposas do gênero Lonomia pode resultar em envenenamento grave, com distúrbios da coagulação e hemorragia. Em casos fatais, têm sido associado à falência renal e hemorragia intracerebral. Atualmente a soroterapia com o anti-soro eqüino produzido contra o extrato de cerdas da Lonomia oblíqua é o tratamento mais eficaz para o envenenamento por esta espécie. Neste trabalho, foram produzidos anti-soros em coelhos contra o extrato de cerdas e a hemolinfa e examinou-se sua imunorreatividade usando as técnicas de ELISA ("enzyme-linked immunosorbent assay"), immunoblot e imunoeletroforese. No ELISA, ambos os anti-soros reagiram igualmente com o extrato de cerdas e com a hemolinfa. Esta imunorreatividade era igual a do antisoro comercial. Os três anti-soros também mostraram reatividade semelhante no imunoblot. O fracionamento, por gel filtração, do extrato de cerdas e da hemolinfa, demonstrou que possuem perfis de eluição qualitativa muito semelhantes e que as imunorreatividades das frações com os três anti-soros eram muito parececidas. Todos os anti-soros neutralizaram a atividade coagulante do extrato de cerdas em plasma humano citratado. Estes resultados indicam que o extrato de cerdas da L. oblíqua e hemolinfa compartilham antígenos comuns e que o anti-soro produzido em coelhos e em cavalos reagem igualmente com as amostras biológicas. Os resultados também sugerem que a hemolinfa poderá servir como fonte de antígenos na produção de anti-soro comercial / Abstract: Caterpillars of saturnid moths belonging to the genus Lonomia can cause severe and sometimes fatal envenoming, the main symptoms of which are coagulation disturbances, hemorrhaging, renal failure and intracranial hemorrhaging. The administration of antiserum raised against a spicule extract from Lonomia oblíqua is the only effective treatment for systemic envenomations. In this work, we raised antisera in rabbits against a spicule extract and hemolymph and examined their cross-reactivity by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunoblotting and immunoelectrophoresis. In ELISA, the rabbit antisera and the commercial antiserum showed similar dilution curves and cross-reactivities with the spicule extract and hemolymph. Considerable similarity was also seen in the immunoblot patterns with ali three antisera. The immunoelectrophoretic profiles were also alike. Fractionation of the spicule extract and hemolymph by gel filtration yielded qualitatively similar elution profiles which cross-reacted extensively with the three antisera. Ali antisera neutralized the coagulant activity of the spicule extract in human citrated plasma. These results indicate that L. oblíqua spicule extracts and hemolymph share many antigens and that antisera raised in rabbits and horses show similar cross-reactivities with these biological samples / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:09:09Z : No. of bitstreams: 1 ferreirajunior_rs_me_botfm.pdf: 1446696 bytes, checksum: dbfee5e5aa68ebc4a664a665cf902076 (MD5) / O ensaio imunoenzimático de ELISA foi utilizado para avaliar, acompanhar e comparar a resposta imune humoral de camundongos SWISS durante o processo de hiperimunização com veneno nativo e irradiado com Cobalto-60 (60Co) obtido das serpentes Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu e Bothrops moojeni. A potência e a capacidade de neutralização foram avaliadas por meio de desafios “in vitro”. A imunidade obtida ao final do processo de hiperimunização foi verificada mediante desafio “in vivo” e os efeitos colaterais foram avaliados. A imunização dos animais, com uma DL50 de cada veneno, ocorreu nos dias um, 15, 21, 30 e 45, quando foram colhidas amostras de sangue. No 60º dia ocorreram os desafios. Os resultados demonstraram que o teste de ELISA mostrou-se eficiente na avaliação, acompanhamento e comparação da resposta imune dos camundongos durante o processo de hiperimunização. Os títulos do soro produzido com veneno nativo foram semelhantes aos títulos do soro obtido com veneno irradiado. A capacidade imunogênica foi mantida após a irradiação com 60Co. O soro produzido a partir do veneno irradiado de Crotalus durissus terrificus apresentou potência e capacidade de neutralização maiores, quando comparado ao soro obtido a partir do veneno nativo.Os anticorpos antiveneno nativo e irradiado, mediante os desafios “in vitro”, mostraram-se igualmente eficazes na neutralização dos venenos de Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu e Bothrops. Todos anticorpos foram capazes de neutralizar cinco DL50 dos respectivos venenos. As alterações clínicas foram mínimas durante o processo de hiperimunização com veneno irradiado e evidentes com veneno bruto. / ELISA was used to evaluate, follow, and compare the humoral immune response of Swiss mice during hyperimmunization with natural and Cobalt-60- irradiated (60Co) Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, and Bothrops moojeni venoms. Potency and neutralization were evaluated by in vitro challenges. After hyperimmunization, immunity was observed by in vivo challenge and the side effects were assessed. The animals’ immunization with one LD50 of each venom was on days one, 15, 21, 30, and 45, when blood samples were collected; the challenges occurred on the 60th day. Results showed that ELISA was efficient in evaluating, following, and comparing mouse immune response during hyperimmunization. Serum titers produced with natural venom were similar to those with irradiated venom. Immunogenic capacity was maintained after 60Co irradiation. Serum produced from Crotalus durissus terrificus irradiated venom showed higher potency and neutralization capacity than that from natural venom. Antibodies from natural and irradiated venom by in vitro challenges were also efficient in neutralizing Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, and Bothrops moojeni venoms. All antibodies were capable of neutralizing five LD50 from these venoms. Clinical alterations were minimum during hyperimmunization with irradiated venom and evident with natural venom.

Del veneno del escorpión Brachistosternus ehrenbergii, se ha aislado una toxina específica para ratones. La toxina denominada Be1 fue purificada mediante cromatografía de intercambio catiónico, en CM-Sephadex C-25 (16 x 1,1 cm) con buffer acetato de amonio 0,05 M a pH 7, y se caracteriza por ser una proteína básica que constituye el 8,1 % de la proteína total del veneno. La pureza de la toxina fue evaluada por electroforesis en condiciones nativas, de acuerdo al método de Reisfeld, y en condiciones denaturantes por el método de Schägger y von Jagow, determinándose que la toxina es de una sola cadena polipeptídica de 6,3 kDa. La toxina al ser inoculada en ratones albinos adultos; vía intraperitoneal (62 µg) produce la aparición de algunos signos locales como hipersecreción salival seguido por cuadros de afección respiratoria, arrastre de las patas posteriores, hasta causar la muerte. Vía intramuscular (7,6 µg), Be1 produce parálisis temporal de la extremidad inoculada. La toxina no tiene actividad de fosfolipasa, proteasa, acetilcolinesterasa ni actividad inhibidora de acetilcolinesterasa. / --- From Brachistosternus ehrenbergii scorpion venom a specific toxin to mice has been isolated. The toxin denominated Be1 was purificated by means of cationic exchange chromatography on CM-Sephadex C-25 column (16 x 1,1 cm) with ammonium acetate buffer 0,05 M at pH 7, and it characterizes to be a basic protein that constitute 8,1 % of venom total protein. Toxin purity was evaluated by electrophoresis in natives conditions, according to Reisfeld-method, and denaturants conditions by the Schägger-and-von Jagow-method, the toxin is a single chain polypeptide of 6,3 kDa has been determined. The toxin to be inoculated on albino mice; intraperitoneal way (62 mg of Be1) produces some local signals as salival hipersecretion followed by respiratory affection, drags hind feet until death. Intramuscular way (7,6 mg) produces temporal paralysis of the inoculated limb. The toxin has neither phospholipase, nor protease, nor acetylcholinesterase nor acetylcholinesterase inhibitor activity.

Se ha estudiado el veneno del escorpión Tityus sp. (aff. T. silvestris Pocock, 1897) habiéndose determinado que contiene 47,6% de proteína. Las proteínas del veneno fueron separadas a partir de 12,9 mg de veneno, mediante cromatografía de intercambio catiónico en CM Sephadex C-25, con buffer acetato de amonio 0,05 M pH 7,0 a temperatura ambiente y a un flujo de 11 mL/h. El perfil cromatográfico mostró la presencia de siete picos proteicos y por PAGE-SDS se diferenciaron por lo menos cinco bandas proteicas en el veneno crudo. Los ensayos de toxicidad han permitido identificar tres toxinas que afectan a Mus musculus y que se encuentran asociadas a los picos IV, V y VII; y asimismo se ha detectado toxicidad sobre Gryllus sp., la cual está asociada a los picos IV, V, VI y VII. Entre las actividades enzimáticas se ha determinado la presencia de actividad proteolítica sobre azocoll y caseína relacionada al pico I. También se ha encontrado actividad de hialuronidasa en el pico IV con una actividad específica de 205,6 μg/min/mg. Finalmente tanto en el veneno crudo como en las fracciones colectadas no se ha encontrado actividad de fosfolipasa, anticoagulante ni hemolítica. / This research has shown that 47,6% of Tityus sp. (aff. T. silvestris Pocock, 1897) venom consists of protein. The venom proteins were separated from 12,9 mg of venom using cationic exchange chromatography in CM Sephadex C-25 with a 0,05 M ammonium acetate buffer pH 7,0 at room temperature and 11 mL/h flow. The chromatography profiles show seven peaks of proteins and by PAGE-SDS, five protein bands were distinguished in the crude venom. The toxicity assays allowed the identification of three toxins that affect Mus musculus which were associated to peaks IV, V and VII. Toxic proteins to Gryllus sp. were also found associated to peaks IV, V, VI and VII. Through the enzymatic activity, the presence of proteolytic activity was found related to the first peak, which has activity over azocoll and casein. Hyaluronidase activity has also been found in the peak IV with a specific activity 205,6 μg/min/mg. However, the crude venom and collected fractions did not show any phospholipase, anticoagulant, nor hemolytic activity.