Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Gabriela Ribeiro (gaby_ribeiro87@hotmail.com) on 2011-09-19T14:42:10Z No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / Approved for entry into archive by LUCIANA SETUBAL MARQUES DA SILVA(lucianasetubal@bce.unb.br) on 2011-09-20T15:00:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-20T15:00:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_KatiaReginaPenaSchesquiniRoriz.pdf: 1493089 bytes, checksum: 3f93522a67b82e0aeb4a6b63353ebc30 (MD5) / O Brasil tem o maior número de casos de acidentes por serpentes da América do Sul, os quais na grande maioria se concentram nas regiões Centro-Oeste e Norte. Este trabalho foi o primeiro levantamento realizado na macrorregião de Porto Velho, através do estudo observacional descritivo dos aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais, dos casos de acidentes ofídicos encaminhados ao Centro de Medicina Tropical do Estado de Rondônia (CEMETRON), no período de setembro de 2008 a setembro de 2010. Os dados foram coletados conforme protocolo específico, sendo incluídos pacientes entre 18 e 59 anos e excluídos grupos vulneráveis (indígenas, idosos, gestantes e crianças). Foram estudados 92 casos de envenenamentos por serpentes, sendo 81 homens (88,04%) e 11 mulheres (11,96%), com idade média de 37 anos, oriundos principalmente da zona rural (91,3%). Os acidentes ocorreram durante o desempenho das atividades de trabalho (63%) e na estação do ano correspondente ao inverno amazônico (78,3%). A grande maioria dos casos era procedente da macrorregião de Porto Velho (84,7%). O principal acidente foi do tipo botrópico com 88 casos (95,6%) seguido de 2 casos laquéticos e 2 casos elapídicos. Em 48,9%, o acidente foi classificado como grave e quando correlacionado com o tempo decorrido até a chegada ao hospital (< ou > 6hs), não houve associação entre o tempo decorrido e a gravidade do caso (p=0,565). Foi necessário procedimento cirúrgico em 10 casos (fasciotomia em 9 casos e amputação de membro inferior direito em 1 caso). Não houve óbito nesta casuística, porém 4 casos (4,3%) evoluíram com seqüelas em membros inferiores. Os exames laboratoriais analisados, pré e pós-soroterapia, foram: hematimetria, leucometria, CK, creatinina, TC, ALT, AST e uréia. Ocorreu diminuição significativa nos valores de uréia e creatinina, sendo mais sensível a redução dos níveis de uréia (p=0,000473). Houve aumento dos níveis de ALT no pós-soro (p=0,043903) e os demais parâmetros não apresentaram significância estatística nos seus valores pré e pós-soroterapia. Assim, houve predomínio do acidente do tipo botrópico e grave. A chegada ao hospital em tempo superior a 6 horas e o uso de medicamentos alternativos não influenciou na classificação de gravidade dos acidentes. A função renal apresentou reversão das alterações 48h após soroterapia, porém a ALT aumentou após soroterapia. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil has the largest number of cases of bites by snakes of South America, which in the vast majority are concentrated in the Midwest and North. This research was the first survey in macro-region of Porto Velho - Rondonia, through of a descriptive observational, clinical, epidemiological and laboratorial study of cases of snakebites forwarded to the center of Tropical Medicine of Rondônia (CEMETRON) from September 2008 to September 2010. The data were collected according to a specific protocol that included patients between 18 and 59 years old excluding vulnerable groups (indians, elderly, pregnant women and children). We studied 92 cases of envenenomation by snakes, 81 men (88.04%) and 11 women (11.96%), mean age 37 years, coming mainly from rural areas (91.3%). The accidents occurred during the performance of work activities (63%) and the season corresponds to Amazon winter (78.3%). The majority of cases came from the macro-region of Porto Velho (84.7%). Among 92 accidents, 88 (95.6%) were caused by Bothrops, 2 were caused by Lachesis and two were caused by Micrurus. In 48.9% of the cases, the accident was classified as serious, but when correlated with the time elapsed until the arrival at the hospital (prior or after 6 hrs), there was no significant difference between time elapsed and the severity of the case (p = 0.565). Surgery was necessary in 10 cases (9 cases of fasciotomy and 1 case of amputation of right lower limb). There were no deaths in this series, but in 4 cases (4.3%) there were sequelae on lower limbs. Laboratory tests performed before and after serum therapy, were: red and white blood cells count, CK, creatinine, TC, ALT, AST and urea. There was a significant decrease in levels of urea and creatinine in the blood of patients, more expressive in terms of urea (p = 0.000473). There was a significant increased only in ALT serum levels before and after treatment in patients post serum therapy (p=0.0439), other parameters were not significantly different in their values before and after serum therapy. Thus, there was a predominance of snakebites by Bothrops and classified as serious. The arrival to the hospital longer than six hours and the use of alternative drugs did not affect the classification of severity of accidents.Renal function changes reverted to 48h after serum therapy, but ALT increased after serum therapy.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva, 2013. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-09-16T13:37:43Z No. of bitstreams: 1 2013_ GuilhermeCarneiroReckziegel_Parcial.pdf: 3618867 bytes, checksum: c2a191e9ba8c2942fdeeab19bc307931 (MD5) / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: Tânia, Por favor, trocar o arquivo parcial. Obrigada! Jacqueline on 2013-09-20T13:25:50Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-09-20T14:50:37Z No. of bitstreams: 1 2013_ GuilhermeCarneiroReckziegel_Parcial.pdf: 3620146 bytes, checksum: a27317ee369d88ed43ccb5965de8cb94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-09-20T15:29:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ GuilhermeCarneiroReckziegel_Parcial.pdf: 3620146 bytes, checksum: a27317ee369d88ed43ccb5965de8cb94 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-20T15:29:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ GuilhermeCarneiroReckziegel_Parcial.pdf: 3620146 bytes, checksum: a27317ee369d88ed43ccb5965de8cb94 (MD5) / Introdução: Escorpiões são artrópodes da classe Arachinida capazes de causar envenenamentos em humanos com importante gravidade. No Brasil, encontram-se distribuídos em todas as macrorregiões e nos diversos ecossistemas. Apresentam-se mais ativos nos períodos quentes e chuvosos do ano. São reconhecidos como escorpiões de importância médica no Brasil os pertencentes ao gênero Tityus, em especial quatro espécies: T. serrulatus, T. stigmurus, T. bahiensis e T. obscurus. O escorpionismo no Brasil apresenta-se como problema de saúde frente ao crescente número de acidentes e óbitos. Objetivo: Descrever as características clínico-epidemiológicas dos acidentes escorpiônicos no Brasil. Método: Foi realizado estudo clínico-epidemiológico descritivo e analítico dos acidentes escorpiônicos notificados no Sistema de Informação de Agravos de Notificação, no período de 2000 a 2010. Utilizou-se para tabulação dos dados e análises os softwares TabWin32 3.6b, EpiInfo 3.5.3 e Microsoft Excel 2010. Resultados: As taxas médias de incidência e mortalidade, para cada 100.000 habitantes, foram de 17,7 e 0,028, respectivamente; sendo de 0,16% a taxa média de letalidade. As Regiões Nordeste e Sudeste apresentaram as maiores taxas de incidência e mortalidade, sendo a taxa de letalidade maior nas Regiões Centro-Oeste e Norte. Os acidentes foram mais frequentes em homens, em idade economicamente ativa e em zona urbana. Óbitos foram mais frequentes em crianças de até 9 anos de idade. Obteve-se como fatores de risco para o óbito os acidentes em zona rural, em crianças de até 9 anos de idade, os casos graves, e o atendimento soroterápico tardio (acima de 3 horas). Conclusão: Nos últimos anos observou-se aumento das taxas de incidência e mortalidade, devendo ser estimulada a intensificação dos programas de prevenção e controle. O perfil epidemiológico descrito reforça a necessidade de capacitação contínua dos profissionais de saúde envolvidos no diagnóstico e tratamento dos acidentados, visando, em tempo oportuno, a identificação do gênero do escorpião agressor e a classificação clínica do caso para instituição do tratamento adequado. O reforço da área assistencial é essencial para que se diminua a letalidade do agravo, principalmente nos grupos mais vulneráveis. / Introduction: Scorpions are arthropods members of the class Arachnida capable of causing poisoning with serious nature in humans. In Brazil, they are distributed all over the macro-regions, in different ecosystems and become more active in the warmer and wetter periods of the year. Scorpions belonging to the genus Tityus are recognized for their medical importance in Brazil, especially four species: T. serrulatus, T. stigmurus, T. bahiensis and T. obscurus. Scorpionism presents itself as a health problem in Brazil, mainly due to the growing number of accidents and deaths. Objective: Describe the clinical and epidemiological features of accidents caused by scorpions in Brazil. Method: It was conducted a clinical and epidemiological descriptive and analytical study of the accidents with scorpions reported in the Notifiable Diseases Information System (Sistema de Informação de Agravos de Notificação) in the period of 2000 to 2010. The softwares TabWin32 3.6b, EpiInfo 3.5.3 and Microsoft Excel 2010 were used for data tabulation and analysis. Results: The average incidence and mortality rates per 100,000 inhabitants were 17.7 and 0.028, respectively. The average lethality rate was 0.16%. Northeast and Southeast regions presented the highest incidence and mortality rates, lethality rate was higher in the Midwest and Northeast. Accidents were more frequent in working-age men and in urban areas. Deaths were more frequent in children up to 9 years old. Death risk factors were accidents in rural areas, in children up to 9 years old, severe cases, and delayed serotherapy (over 3 hours). Conclusion: The incidence and mortality rates have been increased in the last ten years, and intensification of prevention and control programs should be encouraged. The epidemiological profile described reinforces the need for continuous training of health professionals involved in the diagnosis and treatment of accident victims, seeking, in proper time, the identification of the genus of the aggressor and clinical classification of the cases to the right treatment. The strengthening of the attendance area is essential to decrease the lethality of these accidents, especially the most vulnerable groups.

Orientador: Sergio Marangoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calgarotto_AndranaKarla_M.pdf: 1035943 bytes, checksum: f942243a78f40f0df6fd6b1150c07714 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Bothrops moojeni é uma espécie de serpente de grande importância devido a sua ampla distribuição na América do Sul e Central além dos quadros clínicos que o veneno causa. Dentre as espécies peçonhentas brasileiras o gênero Bothrops é o mais numeroso e é o que apresenta os maiores índices de notificações relacionados a acidentes ofídicos. Os venenos de serpentes possuem uma mistura de substâncias biologicamente ativas sendo a maior parte composta por proteínas. Fosfolipases A2 (PLA2), proteínas presentes no veneno de serpentes, agem hidrolisando fosfolipídios de membrana na posição sn2 liberando lisofosfolipídios e ácidos graxos, além de exibir uma ampla variedade de efeitos farmacológicos. A isoforma de fosfolipase A2 (PLA2), denominada BmTX-I foi isolada através de um sistema de cromatografia em HPLC utilizando uma coluna de fase reversa µ-Bondapak C18. O alto grau de pureza foi confirmado através de eletroforese em SDS-PAGE Tricina (16,5%) e também através da determinação da massa molecular (14,238.71 Da) por espectrometria de massas (MALDI Tof). A caracterização cinética da BmTX-I PLA2 (Asp49) mostrou que tal isoforma é altamente estável e apresenta um pH ótimo de 8,0 e temperatura de 37º C. Frente a diferentes concentrações do substrato ácido 4-nitro-3-(octanoyloxy) benzóico a BmTX-I mostrou um comportamento com tendência alostérica. Na ausência de Ca2+ e na presença de alguns íons divalentes tais como Mg2+, Mn2+ e Cd2+ (na concentração de 10mM) a atividade BmTX-I foi significativamente diminuída, já na presença de Ca2+ (1mM) e com os mesmos íons divalentes citados apresentou uma discreta atividade. Também foi demonstrado o efeito inibitório de crotapotinas crotálicas sobre a atividade PLA2 da BmTX-I. A análise de composição de aminoácidos mostra que se trata de uma proteína de caráter básico pela alta presença de Lys, His e Arg. A presença de 14 resíduos de cisteína sugere a formação de 7 pontes dissulfeto. O estudo de homologia seqüencial da região N-terminal entre BmTX-I com outras PLA2 (Asp49) revelou um alto grau de homologia. O efeito neurotóxico in vitro do veneno total e da BmTX-I foi analisado na preparação biventer cervicis de pintainho. Nossos resultados mostraram que a ação do veneno de Bothrops moojeni na junção neuromuscular é menos potente quando comparado com venenos crotálicos, já que estes últimos levam a um bloqueio muito mais rápido e usando-se baixas concentrações. No entanto, não se pode negar que houve uma ação neurotóxica in vitro. O completo bloqueio tanto do veneno total quanto da BmTX-I não foi acompanhado pela inibição das respostas ao potássio (KCl) e a acetilcolina (ACh), exceto em altas concentrações de veneno (50 e 100 µg/ml) o que demonstra uma ação pré-sináptica primordial. Os testes in vivo do veneno total e da fração BmTX-I demonstraram o efeito miotóxico através da liberação de creatina quinase (CK) e o efeito inflamatório através de edema de pata e liberação de interleucina-6 (IL-6). O comportamento de liberação de CK foi semelhante tanto para o veneno total como para a PLA2 BmTX-I, os quais tiveram o maior liberação de CK uma hora após a injeção i.m. Oito horas após a injeção os níveis de CK estavam similares aos do controle. Ocorreu liberação de IL-6 bem como ação edematizante tanto do veneno total como da BmTX-I. A reprodutibilidade dos efeitos farmacológicos, só é possível com a utilização de frações quimicamente homogêneas que mantenham a integridade da função biológica. Essas frações são obtidas com metodologias de alta eficiência como HPLC, através do qual podemos isolar a BmTX-I em um único passo cromatográfico e o grau de pureza confirmado por espectrometria de massa. Estes resultados podem ser associados com a sua atividade biológica, eliminando a subjetividade causada por veneno total ou frações impuras. Essa abordagem pode ser aplicada nos estudos bioquímicos, estrutura-função, fisiológicos e farmacológicos, podendo revelar mecanismos ainda desconhecidos na relação estrutura-função das PLA2 procedentes de veneno de serpentes / Abstract: Bothrops moojeni is a very important snake species due to its great distribution in the South and Central America besides the clinic alterations caused by the venom. Among the Brazilian species the Bothrops genus is the most numerous and shows the highest registrations related to ophidian accidents. The snake venoms are source of biologically active substances which main components are proteins. Phospholipases A2 (PLA2), proteins present in the snake venom, hydrolyze the sn-2 acyl groups of phospholipids liberating fatty acids and lysophospholipds, besides exhibiting many pharmacological effects. The fosfolipase A2 (PLA2) isoform, named BmTX-I was isolated through RP-HPLC performed on a C18 column. The high degree of purity was confirmed by SDS-PAGE and also by determining the molecular mass (14238.71 Da) in a MALDI TOF mass spectrometry. The kinetic characterization of BmTX-I PLA2 (Asp49) showed that the isoform was highly stable and presented an optimum pH of 8.0 and temperature of 37° C. At different substrate acid 4-nitro-3-(octanoyloxy) benzoic concentrations the BmTX-I showed allosteric behavior. In the absence of Ca2+ and in the presence of some divalent ions such as Mg+2, Mn+2, Cd2+ (at the concentration of 10 mM) the BmTX-I activity significantly decreased. But in the presence of 1mM Ca+2, under the same divalent ions conditions, the isoforms showed a discreet activity. An inhibitory effect of crotalic crotapotins on the activity PLA2 was also demonstrated. The analysis of amino acids composition showed a high content of basic amino acids such as Lys, His and Arg indicating a basic character for the BmTX-I. The presence of 14 cysteine residues suggests the formation of 7 disulfide bridges. N-terminal amino acid sequence revealed a high level of homology between BmTX-I and other Asp49 PLA2s. The neurotoxic effect of the whole venom and of BmTX-I was analyzed at chick biventer cervicis muscle preparation. Our results showed that the blockage of the muscle contraction was lesser when compared with crotalic venoms, which blockage at lower concentrations. Nevertheless it is sure that there was an in vitro neurotoxic action. The complete blockage, as much the whole venom as the BmTX-I, was not accompanied by any significant inhibition of the responses to KCl and to Ach, excepting at higher concentrations of the venom (50 e 100 µg/ml) suggesting the primordial presynaptic action. The tests in vivo with the whole venom and BmTX-I fraction showed the miotoxic effect through the creatine kinase (CK) releases and the inflammatory effect through edema-forming activity and interleukin-6 release. The CK release was similar for both whole venom and BmTX-I, which showed higher liberation one hour after the i.m injection. After eight hours of injection the CK levels were similar to the controls. There was the IL-6 release as well as edema-forming activity both in to the whole venom and BmTX-I. The reprodubility of pharmacological effects, is just possible with the utilization of chemically homogenous fractions that maintain the integrity of biological function. These fractions were obtained with high efficient methodologies as HPLC, through which this we the BmTX-I could be isolated in only one chromatography step, with purity direct by mass spectrometry. These results may be associated with the biological activities, eliminating the subjectivity caused by total venom or impure fractions. This approximation may be applied to the biochemical, structure-function, physiological and pharmacological studies, and it may reveal still unknown mechanisms in the structure-function relationship of PLA2 from the serpents venom / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2779_1.pdf: 2511678 bytes, checksum: fe173ac68123ac729ff2ada7fc331988 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune cuja ligação reversível e específica a carboidratos resulta em aglutinação celular. Bothrops leucurus, serpente da Família Viperidae, representa um sério problema médico para a região Nordeste do Brasil. Uma lectina ligante de galactosídeo (BlL) foi purificada do veneno da serpente Bothrops leucurus através da combinação de cromatografia de afinidade e gel filtração. BlL aglutinou eritrócitos de coelho e humano, com preferência para eritrócitos de coelho, sendo especificamente inibida por galactose, rafinose e lactose, bem como por glicoproteinas. BlL é uma proteína ácida, com massa molecular de 30 kDa e composta de duas subunidades de 15 kDa, exibiu dependência de cátions divalentes, foi principalmente ativa em pH 4.0 a 7.0 e termoestável até 70°C. O espectro de emissão de fluorescência mostrou resíduos de triptófano completamente encobertos na sua estrutura. Dicroísmo Circular de BlL foi típico de uma proteína toda estrutural. BlL mostrou ser efetivo contra bactérias gram-positivas (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis e Bacillus subtilis). A atividade antitumoral de BlL foi avaliada em relação ao seu potencial citotóxico em linhagem tumoral (K562, Hep-2 e NCI-H292) e quanto à sua capacidade hemolítica. BlL apresentou uma significante atividade citotóxica em todas as linhagens tumorais testadas e não exibiu atividade hemolítica na máxima concentração testada (2000 &#956;g/mL). Além disso, foi realizada em células K562, a análise da externalização da fosfatidilserina e potencial de membrana mitocondrial, utilizando microscópio de fluorescência. Tratamento com BlL induziu externalização da fosfatidilserina e despolarização mitocondrial, indicando morte celular por apoptose. Após irradiação gamma, BlL apresentou mudanças estruturais e teve sua atividade hemaglutinante significante alterada. SDS-PAGE indicou que a irradiação causou fragmentação e com posterior agregação da lectina. A análise em cromatografia de fase reversa revelou fragmentação estrutural. A atividade citotóxica de BlL em linhagens tumorais (K562, Hep-2 e NCI-H292) foi abolida após irradiação, indicando que a irradiação de BlL se mostrou uma eficiente estratégia para inativar sua atividade citotóxica. Esses achados demonstram que o veneno de B.leucurus contem uma lectina ligante de galactosídeo com potencial promissor para aplicação terapêutica e biotecnológica

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:35:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_LucimaraJulio_M.pdf: 11295607 bytes, checksum: 8492693ea03dda6f72a75c0c23ee0d9c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O veneno de Bothrops lanceolalus exerce várias atividades biológicas, dentre elas a atividade hemolítica indireta. Neste trabalho verificamos algumas das características desta atividade in vitro. O veneno induziu hemólise indireta em eritrócitos de cavalo, boi, rato e carneiro, sendo que, dentre essas espécies, a primeira foi mais sensível; não houve atividade hemolítica direta. A hemólise foi concentração-dependente e atenuada em temperaturas >40°C. O tratamento do veneno com brometo de p-bromofenacil aboliu a atividade da fosfolipase A2 (PLA2) do veneno e impediu a hemólise. Corroborando estes achados, uma PLA2 ácida purificada deste veneno também induziu hemólise. Esta PLA2 reagiu contra o anti-soro do veneno de B. lanceolatus. Estes resultados indicam que atividade hemolítica do veneno de B. lanceolatus é mediada pela PLA2. A reação cruzada da PLA2 com o anti-soro sugere que a atividade desta enzima pode eficazmente ser neutralizada durante a terapia sorológica / Abstract: Bothrops lanceolatus venom exerts a variety of biological activities, including indirect hemolysis. In this work, we examined some of the characteristics of this activity in vitro. The venom caused indirect hemolysis in horse, ox, rat and sheep erythrocytes, with the first of these species being the most sensitive; there was no direct hemolysis. The hemolysis was concentration-dependent and was markedly attenuated at >40°C. Treatment of the venom with />-bromophenacyl bromide abolished the phospholipase A2 (PLA2) activity of the venom and prevented the hemolysis. In agreement with this finding, an acidic PLA2 purified from this venom also caused hemolysis. This PLA2 reacted with antivenom against B. lanceolatus venom. These results indicate that the hemolytic activity of B. lanceolatus venom is mediated by PLA2. The cross-reactivity of the PLA2 with antivenom suggests that the activity of this enzyme may be effectively neutralized during antivenom therapy / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T15:07:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_Luizde_M.pdf: 4179090 bytes, checksum: 98eeb71706df15ef7df0c8cbc6aa8696 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A capacidade de venenos ofídicos induzirem efeitos locais é bem conhecida. Neste trabalho, investigamos o edema e a hemorragia, induzidos pelo veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) "in natura" e/ou aquecido, em ratos. O edema foi induzido por injeção subplantar (12,5-100 µg/pata) e quantificado por hidropletismógrafo. A hemorragia foi induzida por injeção intramuscular (0,25-64 µg), no músculo gastrocnêmio esquerdo, e expressada como a quantidade de hemoglobina(hb) acumulada no músculo, determinada pelo método de cianometemoglobina. Com todas as doses do veneno testadas, o edema apresentou resposta máxima 15 minutos após a administração. A resposta máxima foi observada com o VBL na dose de 75 µg/pata (salina controle = 0,09 ± 0,001 ml e veneno = 1,09 ± 0,05 ml, n=7), e desapareceu dentro de 24 horas. O efeito máximo hemorrágico foi observado com 32 /µg do VBL (salina controle =1,23 ± 0,06 mghb/g de tecido e veneno = 6,77 ± 0,69 mghb/g de tecido, n=6), e desapareceu dentro de 72 horas. O VBL aquecido (97°C, 30 segundos) reduziu o edema em 70% e aboliu completamente a atividade hemorrágica. A administração concomitante do VBL (75 /µg) aquecido, com o iloprost (0,1 µg), potencializou o edema em duas vezes. Pré-tratando-se os ratos com mepiramina (6mg/kg), ciproheptadina (6mg/kg), mepiramina e ciproheptadina (6 mg/kg), 15 minutos antes; dexametasona (1 mg/kg), 2 horas antes; BW A4C (10 mg/kg) e Hoe 140 (0,6 mg/kg), 30 minutos antes; inibiram o edema induzido pelo VBL aquecido (75g), associado ao iloprost (0,1 µg), em 28%, 55%, 77%, 63%, 35% e 30%; respectivamente. A co-administração do VBL aquecido (75 µg), com o captopril (300 µg), potencializou o edema em 44%, mesmo na ausência do iloprost. A indometacina (10mg/kg) não foi efetiva. A incubação do soro antiBothrops lanceo/atus (antiVBL) com o VBL "in natura", neutralizou completamente o efeito hemorrágico mas aboliu somente parcialmente (45%) o edema. A administração intravenosa do antiVBl imediatamente após a injeção subplantar ou intramuscular do VBl, neutralizou 30% do edema e 38% da hemorragia. Quando o antiVBl foi incubado com o VBl aquecido associado ao iloprost, e administrado na pata dos ratos, a neutralização foi discreta (em torno de 30%), e foi observada somente com a menor proporção (0,125 ml antiVBLlmg VBl). Quando administrado por via intravenosa imediatamente após a injeção do veneno aquecido, foi completamente ineficaz. Estes resultados, indicam que o VBl induz edema na pata e hemorragia no músculo de ratos. O VBl aquecido induz edema livre de hemorragia. O antiVBL neutralizou completamente o efeito hemorrágico e inibiu somente parcialmente o edema, quando foi pré-incubado com o VBL. O antisoro foi pouco efetivo em neutralizar ambas as atividades quando foi administrado por via intravenosa. Estas observações indicam que histamina, serotonina, bradicinina e produtos da lipoxigenase estão envolvidos no edema causado pelo veneno de Bothrops lanceolatus / Abstract: The ability of snake venoms to induce local effects is well known. In this thesis, the oedema and hemorrhage induced in rats by heated and non-heated Bothrops lanceolatus venom (BL V) was investigated. Oedema was induced by the subplantar injection of venom (12.5-100 µg/paw) and was quantified by hydroplethysmography at various times thereafter. Hemorrhage was induced by injecting venom (0.25 - 64 µg) into the left gastrocnemius muscle and was expressed as accumulation of extravascular hemoglobin(hb) as determined by the cyanomethemoglobin method. With ali of the venom doses tested, the oedematogenic response peaked within 15 mino The maximal response was observed at a venom dose of 75 µg/paw (saline control = 0.09 ± 0.001 ml and venom = 1.09 ± 0.05 mi, n=7) and disappeared within 24h. The maximum hemorrhagic effect was observed with 32 µg of BLV (saline control = 1.23 ± 0.06 mghb/g of tissal and venom = 6.77 ± 0.69 mghb/g of tissal, n=6) and disappeared within 72h. Heating BLV (97°C, 30 sec) reduced the oedema by 70% and completely abolished the hemorrhagic activity. The combined administration of heated BL V (75 µg) With iloprost (0.1 µg) potentiated the oedema two-fold. Pre-treating the rats with mepyramine (6 mg/kg), cyproheptadine (6 mg/kg), mepyramine and cyproheptadine (6 mg/kg each, 15 min before), dexamethasone (1 mg/kg 2 h before), BW A4C (10 mg/kg) and Hoe 140 (0.6 mg/kg each 30 min before), inhibited the oedema induced by heated BL V (75 µg) plus iloprost (0.1 µg) by 28%, 55%, 77%, 63%, 35% and 30%; respectively. The co-administration of heated BL V (75 µg) with captopril (300 µg) potentiated the oedema by 44%, even in the absence of iloprost. Indomethacin (10 mg/kg) had no effect on the oedematogenic response. Pre-incubating native (non-heated) BL V with antiBL Vantiserum completely neutralized the hemorrhagic effect but only partially. abolished (45%) the oedema. The intravenous administration of antiBL V antiserum immediately after the subplantarar intramuscular injection of venom neutralized 30% of the oedema and 38% of the hemorrhage. When antiBLV antiserum was incubated with heated BLV plus iloprost and injected into rat paws, the neutralization was discrete (abaut 30%) and was observed only with the lowest proportion (0.125 ml antiBLV/mg BLV) tested. When administered intravenously immediately after the injection of heated venom, there was no neutralization whatsoever. These results indicate that non-heated BL V induces oedema in the paw and hemorrhage in the muscle of rats while heated BLV induces oedema without hemorrhage. AntiBLV antiserum completely neutralized the hemorrhagic effect and only partially inhibited the oedema when it was preincubated with BtV. The antiserum was less effective in neutralizing both activities when administered intravenously. These observations indicate that bradykinin, histamine, serotonin and lipoxygenase products are involved in the oedema caused by Bothrops lanceolatus venom / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientadores: Lea Rodrigues-Simioni, Maria Alice Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T10:01:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_YokoOshima_M.pdf: 11411260 bytes, checksum: 5403f0689ceac02dc46c3ee98511f0c5 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades neurotóxica e miotóxica das peçonhas de Crotalus duhssus tenificus (Cdt,10 ng/ml), Bothrops jararacussu (Bjssu, 50 ng/ml) e de suas principais toxinas, crotoxina (CrTX, 10 ng/ml) e bothropstoxina (BthTX, 20 ng/mi), respectivamente. Utilizamos antivenenos (AV) comerciais e específicos para avaliar a capacidade de neutralização dessas atividades, em preparações biológicas (camundongo), nervo frênico-diafragma (NFD) e extensor digitorum longus (EDL). O AV eqüino comercial empregado foi produzido pelo Instituto Vital Brazii. O AV específico foi produzido por inoculação sucessiva, em coelhos, com veneno totat de Cdt, Bjssu e da toxina CrTX. O acompanhamento da produção de anticorpos foi realizado por imunodifusão e, posteriormente, confirmado pela técnica de ELISA. A atividade neurotóxica foi avaliada por intermédio de técnica miográfica e a miotóxica, através de determinação de creatinoquinase (CK), in vitro, e de análise histológica. Os dois venenos e suas respectivas toxinas produziram bloqueio neuromuscular dose-dependente e mionecrose, em diferentes graus. O estudo do bloqueio neuromuscular evidenciou diferenças entre as preparações utilizadas (NFD e EDL), quanto à sensibilidade aos venenos e toxinas, provavelmente pela constituição predominante de fibras de contração rápida (EDL) e lenta (NFD). A neutralização do bloqueio neuromuscular mostrou ser dose-dependente na preparação NFD e, a partir de determinada dose de AV, foi registrada uma facilitação importante para os AV comerciais. A neutralização cruzada também foi investigada para Bjssu e BthTX, em ambas as preparações, e novamente a resposta foi diferente entre elas. Os elevados níveis obtidos da enzima CK, liberada após 120 minutos de exposição aos AV, sozinhos, o que pretendia ser um simples controle, revefou que, possivelmente a quantidade de proteínas interfira no mecanismo liberador de CK Isto sugere que a determinação enzimática, em associação à análise histológica, pode constituir um parâmetro quantitativo de mionecrose, mas deve ser interpretada com cuidado na avaliação de lesão celular se estudada individualmente. A análise histológica revelou que a capacidade do veneno botrópico de destruir a musculatura esquelética é maior do que a do crotálico, nas condições experimentais empregadas. Os AV específicos foram eficientes na neutralização da miotoxicidade. Pode-se concluir que, o estudo da neutralização com AV produzido de frações purificadas, associada aos parâmetros miográficos e miotóxicos, pode constituir um modelo útil na dissociação entre as atividades neurotóxica e miotóxica das toxinas / Abstract: This thesis evaluates the neurotoxic and myotoxic activities of Crotalus durissus terrificus (Cdt, 10 \xg/m\) and Bothrops jararacussu (Bjssu, 50 ng/ml) venoms and their major toxins, crotoxin (CrTX, 10 ng/ml) and bothropstoxin-l (BthTX-l, 20 ng/ml), respectively, and the ability of commercial and specific antivenoms to neutralize these activities. Neurotoxic activity was studied in vitro using the phrenic nerve-diaphragm (PND) and extensor digitorum longus (EDL) preparations. Myotoxic activity was determined by measuring the release of CK in vitro from the EDL preparation as well as by histological analysis. The commercial equine antivenom employed was produced by the Instituto Vital Brazil. The specific antiCdt, antiBjssu and antiCrTX antivenoms were raised in rabbits by successive inoculations over a two month period. The antibody production was determined by both immunodiffusion and by an enzyme-linked immunosorbent assay (EUSA). Both of the venoms and their respective toxins produced a dose-dependent neuromuscular blockade as well as differing degrees of necrosis. The variation in sensitivity between the two preparations may reflect the presence of predominantly fast fibers in the EDL and slow fibers in the PND. Neutralization of the neuromuscular blockade was dose-dependent in the PND and, at elevated concentrations, the antisera produced facilitation of the preparation. Bjssu venom was more potent than Cdt venom in producing skeletal muscle damage under the conditions employed here. The specific antivenoms had a greater neutralization capacity than the commercial antivenoms. Concomitant studies on the neutralization of both neurotoxic and myotoxic activities may provide a useful model for dissociating these two activities / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Marcos Dias Fontana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T03:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gregio_AnaMariaTrindade_D.pdf: 2249313 bytes, checksum: 6fac809aa95af8768f99c3cb5d8801a4 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O presente trabalho relata uma comparação entre as duas principais espécies de escorpião de importância médica: T. serrulatus e T. bahiensis. O estudo dos acidentes escorpiônico é muito importante devida sua gravidade e freqüência que ocorrem. O estudo comparativo dos venenos de escorpião T. bahiensis e T. se"ulatus foi dividido em duas partes. Primeiramente o estudo farmacológico em preparações isoladas (preparação nervo frênico-diafragma de rato, aurícula isolada, biventer cervicis de pintainho), além de pressão arterial de rato e dose mediana letal em camundongos. Nestes experimentos utilizou-se o veneno de T. serrulatus e T. bahiensis nas mesmas doses para estabelecer uma comparação de seus efeitos. A segunda parte do trabalho: estudos bioquímicos com estes venenos. Foi realizado estudos sobre atividades enzimáticas destes venenos (atividade proteolítica e hialuronidásica) e o fracionamento destes venenos através de cromatografia por gel filtração. Os principais picos destes fracionamentos foram testados em preparação nervo frênico-diafragma de rato, para verificação da atividade neuromuscular destas frações. Em preparações isoladas nervo frênico-diafragma de rato e preparação de biventer cervicis de pintainho os venenos comportaram-se de maneira semelhante, na preparação de aurícula isolada de cobaia e pressão arterial de rato pode-se constatar uma discreta diferença para o veneno de T.bahiensis, este promovia uma bradicardia e hipotensão mais acentuadas do que o veneno de T. se"ulatus. Além disso, em preparações nervo frênico diafragma de rato onde foi analisado a atividade dos venenos sobre os "twitches " o veneno de T. bahiensis demonstrou ser mais ativo nas preparações que haviam sido previamente Icurarizadas (d-Tc 14,6 11M), pois induziu o aparecimento de contraçoes espontâneas e aumento no tempo de relaxamento. Em termos de letal idade o veneno de T. se"ulatus mostrou-se mais potente que o veneno de T.bahiensis, também revelou ser mais potente no antagonismo do bloqueio neuromuscular em preparações curarizadas pela d-Tc (1 ,46 11M). A atividade hialuronidásica demonstrou níveis parecidos para ambos venenos, o que leva a crer que os venenos em estudo tenham um bom fator de difusão nas membranas. Quanto à atividade proteolítica, não foi encontrada nos dois venenos. O perfil do fracionamento foi diferente para ambos venenos, porém suas frações reproduziram os mesmos efeitos: aumento na amplitude das contrações, contrações espontânes, contraturas e bloqueio neuromuscular. Todos estes efeitos também foram visualizados com o veneno total. Nossos resultados sugerem que, as duas espécies de escorpião possuem uma taxonomia relativa, porém contém toxinas diferentes que exercem efeitos farmacológicos similares sobre preparações neuromusculares / Abstract: T. bahiensis and T.serrulatus are the main scorpion species involved in envenomations in the Brazil, the latter being the more widely distributed. Clinically, envenomations by T. serrulatus is more serious than that by T. bahiensis. In this thesis, the lethal and neurotoxic activities of venoms from these two species were compared. Male Swiss withe mice (18-20 g) were used to determine the Lv. LDso of the venoms and the rat phrenic nerve-diaphragm preparations was used to examine the neuroxic activity. The LDso for T. bahiensis and T. serrulatus venom was 0,72 (95% CI: 0,68 -0,75) mg/Kg and 0,54 (95% CI: 0,45-0,64) mg/Kg, respectively. In phrenic nerve-diaphragm preparations, both venoms (2,5 _g/ml) produced similar responses, namely, na increase in contraction amplitude and in the number of fasciculations, as well as mucle contracture followed by neuromuscular blockade. Similar effects were observed for the two venoms in the chik biventer cervicis neuromuscular preparation. T.serrulatus venom completely reverted the neuromuscular blockade produced by d-tubocurarine (d-Tc 1,46 M) in 35,0.:!: 1,8 min and 18,0.:!: 1,2 min at the concentrations of 2,5 _g/ml and 5 _glml, respectively. At these same concentrations, T. bahiensis venom produced only partial reversal after 60 mino Both venoms (100-600_g/Kg) produced marked alterations in the blood pressure of anesthesized rats, including hypo- and hypertensive responses as well as bradycardia. The latter effect was also observed in guinea-pig isolated atria. In both of these preparations, T. bahiensis venom was moe potent than T.serrulatus venom. The fractionation of T. bahiensis and T.serrulatus venoms by gel filtration on Superdex 75 resulted in 13 na 12 peaks, respectively. Ali peaks were tested neuromuscular activity in the isolated phrenic nerve-diaphragm preparation. Several peaks increased the amplitude of the contractions in indirectly stimulated preparations and produced neuromuscular blockade and fasciculations, as well as spontaneous muscle contractions. In general, the venoms of T. bahiensis and T. serrulatus produced similar pharmacological effects but differed in potency. Since Tityus scorpions venoms contain a variety of alfa and beta neurotoxins with marked neuromuscular activity, the differences seen between these two venoms may reflect variation in their content of these toxind or may indicate the presence of novel toxins with similar pharmacological effects on the mammalian neuromuscular junction / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:48:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevizan_Giovanna_M.pdf: 992041 bytes, checksum: 788bad7f2b885488c459d8cc22f66468 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As reações alérgicas à ferroada de inseto resultam de resposta exacerbada do sistema imune, com produção de elevados níveis de anticorpos IgE alérgeno-específicos e padrão de citocinas Th2. A diferenciação de linfócitos Th2 e a secreção de citocinas por estas células são reguladas pelo fator de transcrição GATA-3. A ligação da IgE ao seu receptor de alta afinidade (Fc?RI) em mastócitos e basófilos, promove a liberação de mediadores inflamatórios. Muitos estudos demonstram a eficácia da imunoterapia específica na dessensibilização e no desenvolvimento de tolerância em indivíduos com quadros graves de hipersensibilidade à ferroada de insetos, sobretudo da classe Hymenoptera. A histamina é o principal mediador liberado durante a resposta alérgica; através da ativação de diferentes receptores (HR1, HR2, HR3 ou HR4) as células do sistema imune podem ser tanto inibidas como estimuladas. Via HR1, a histamina estimula principalmente linfócitos Th1, enquanto inibe linfócitos Th2 via HR2. O receptor 4 desempenha papel central na diferenciação de linfócitos Th2 e também é capaz de modular a produção de citocinas. A liberação de histamina é regulada por fatores de liberação de histamina (HRF), sendo que os HRF dependentes de IgE induzem a liberação de histamina na fase tardia das reações alérgicas. Considerando-se todas essas informações, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos modulatórios da imunoterapia na expressão gênica dos receptores de histamina (HR1, HR2 e HR4), fatores de liberação de histamina (HRF) e cadeia ? do receptor de alta afinidade de IgE, além da expressão protéica do fator de transcrição GATA-3, em células linfomononucleares de pacientes alérgicos ao veneno de abelha. As células foram isoladas de pacientes submetidos à imunoterapia, em diferentes períodos do tratamento (Pré, 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses), após injeção subcutânea, e submetidas à cultura por 72 horas, com estimulo de veneno de abelha a 1 ng/ml. Indivíduos não alérgicos foram estudados como grupo controle. Com objetivo de avaliar a expressão gênica foram realizadas extração de RNA, seguida de síntese de cDNA e PCR, para avaliação da expressão protéica, utilizou-se a técnica de imunofluorescência. A expressão gênica de HR1 e HR4, assim como de HRF e da cadeia gama do Fc?RI foi significativamente reduzida ao final do período analisado. O receptor 2 de histamina não apresentou alterações bem definidas após 24 meses de imunoterapia. O fator de transcrição GATA-3 apresentou diminuição significativa na expressão a nível protéico. Nossos resultados demonstram que a imunoterapia específica ao veneno de abelha foi capaz de modular elementos envolvidos na resposta imune / Abstract: Allergic disease is an abnormal response from the immune system, with high levels of allergen specific IgE antibodies and Th2 pattern of cytokines. Development of Th2 cells and the production of cytokines are regulated by transcription factor GATA-3. Binding of IgE to its high affinity receptor (Fc?RI) in mast cells and basophils induces inflammatory mediators' release. Many studies have shown the efficacy of specific immunotherapy. Histamine is an important mediator in allergy, through activation of distinct histamine receptors (HR1, HR2, HR3 or HR4) in the immune system; cells can be either stimulated or inhibited. Histamine can stimulate, by HR1 receptor, especially Th1 response, and inhibit particularly Th2 cells through HR2 activation. HR4 plays a central role in Th2 polarization and also modulates cytokine profile production. IgE-dependent histamine releasing factors (IgE-HRF) induce histamine release in late phase reaction. In regard of this information, the aim of this study was to evaluate the modulating effects of specific immunotherapy in gene expression of histamine receptors (HR1, HR2 and HR4), histamine releasing factor (HRF), in patients with allergy and the gama chain of Fc?RI, and also GATA-3 protein levels. Bee venom allergic subjects underwent specific bee venom immunotherapy (VIT) in different stages of treatment (Pre, 3, 6, 12, 18 and 24 months) were studied. Peripheral blood mononuclear cells were isolated after subcutaneous venom injection and submitted to culture for 24, 48 and 72 hours stimulated with 1ng/ml of bee venom. In parallel healthy subjects were studied as well. Total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and PCR were used to evaluate gene expression; GATA-3 protein expression was analyzed by immunofluorescence assay. Data from all time of cell culture - 24, 48 and 72 hours - were grouped and analyzed. Gene expression from HR1 and HR4 and also HRF and ? chain of Fc?RI were significantly reduced at the end of 24 months of immunotherapy. Histamine receptor 2 didn't show well established alterations. For transcription factor GATA-3 significant decrease at protein level was observed. Together, our results indicate that bee venom specific immunotherapy was able to modulate some of the elements involved in the immune response / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T07:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferro_KarlaPriscilaVieira_D.pdf: 2593573 bytes, checksum: dbc61c553ff3b0a43d9d67bfd357abee (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As reações alérgicas à ferroada de inseto resultam de resposta exacerbada do sistema imune, com produção de elevados níveis de anticorpos IgE alérgeno-específicos e padrão de citocinas Th2, envolvidas na diferenciação de linfócitos B específicos para aquele antígeno em células produtoras de IgE e recrutamento de células efetoras da resposta alérgica. Neste contexto, granulocitos são células efetoras importantes na fase tardia da resposta alérgica e estão envolvidos na patogênese de diferentes doenças. Eosinófilos e neutrófilos, especificamente, modulam a resposta imune por meio de diferentes mecanismos, como a secreçao de citocinas, quimiocinas e mediadores lipídicos. A IgE desempenha papel central na patogênese das doenças alérgicas, interagindo com dois receptores de membranas: alta afinidade FcsRI e baixa afinidade FcsRII (CD23). A ligação da IgE ao seu receptor em mastocitos e basófilos promove a liberação de mediadores inflamatórios, dentre eles, a histamina. A histamina além de induzir os sintomas agudos da reação alérgica, sustenta a reação inflamatória até a fase crônica, sendo estes efeitos mediados através da ativação de diferentes receptores (H1, H2, H3 e H4). Os fatores liberadores de histamina (HRF), particularmente, HRF-dependentes de IgE, induzem a liberação de histamina na fase tardia da resposta alérgica, permitindo a perpetuação dos eventos inflamatórios crônicos. Muitos estudos demonstram a eficácia da imunoterapia específica na dessensibilização e no desenvolvimento de tolerância em indivíduos com quadros graves de hipersensibilidade à ferroada de insetos, sobretudo da classe Hymenoptera. Com base nestas informações, foram objetivos do presente trabalho avaliar os efeitos modulatórios da imunoterapia sobre a expressão gênica dos receptores de histamina (H1, H2 e H4), HRF- IgE dependente e de fatores apoptóticos (Bcl-2 e BID) por RT-PCR, além da expressão gênica, através da técnica de PCR em tempo real de fatores de transcrição envolvidos na diferenciação de granulocitos como PU.1, C/EBPa, C/EBPpe GATA-1, receptores de alta (FcsRla e FcsRly) e baixa afinidade de IgE (CD23), cuja detecção protéica foi realizada por imunofluorescência e citometria de fluxo, respectivamente. Além disso, foram avaliados os níveis séricos de IgE específica, secreçao de RANTES e IL-8 nos sobrenadantes das culturas celulares e quantificação de granulocitos apoptóticos através da técnica de TÚNEL. Os granulocitos foram isolados de pacientes submetidos à imunoterapia específica ao veneno de abelha, em diferentes períodos do tratamento (Pré, 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses), após injeção subcutânea, e submetidas à cultura por 72 horas, com estimulo de 1 ng/mL veneno de abelha. Indivíduos não alérgicos foram estudados como grupo controle. De maneira geral, a imunoterapia específica ao veneno de abelha foi capaz de modular os elementos analisados, reduzindo significativamente a expressão dos mesmos ao final de 24 meses de tratamento. Não verificamos, apenas, modulação no número de granulocitos apoptóticos ao longo da imunoterapia. Nossos resultados inéditos fornecem informações adicionais sobre os efeitos da imunoterapia sobre granulocitos, reforçando as propriedades supressoras e tolerogênicas desta forma de tratamento / Abstract: Allergic reactions to insect stings results from a exacerbated response of the immune system, resulting in the production of high levels of allergen-specific IgE antibodies and Th2 cytokine pattern, which are involved in the differentiation process of B lymphocytes, specific for that antigen, into IgE producing cells and the recruitment of effector cells of allergic response. Eosinophils and neutrophils, specifically, modulate the immune response through different mechanisms, such as the secretion of cytokines, chemokines and lipid mediators. IgE plays a central role on allergic diseases pathogenesis, interacting with two membrane receptors: high affinity FcsRI and low affinity FcsRII (CD23). Biding of IgE with receptors on mast cells and eosinophils promotes the release of inflammatory mediators, among them, histamine. Histamine, besides inducing acute symptoms of allergic reaction, supports inflammatory response until its chronic stage; these effects are mediated through the activation of distinct receptors (H1, H2, H3 and H4). Histamine releasing factors (HRF), particularly, IgE dependent HRF, induce histamine release during the late phase of allergic response, allowing the perpetuation of chronic inflammatory events. In this context, many studies have demonstrated the efficacy of specific immunotherapy on desensitization and tolerance development in subjects with severe hypersensivity to insect stings, especially Hymenoptera. Based on all these information, the aim of the present study were to evaluate the modulating effects of immunotherapy on gene expression of histamine receptors (H1, H2 and H4), IgE dependent HRF and apoptotic factors (Bcl-2 and BID), through RT-PCR; in addition to gene expression, through real time PCR, transcriptional factors involved at granulocytes differentiation as of PU.1, C/EBPa, C/EBPp and GATA-1, and protein expression of high (FcsRIa e FcsRly)and low affinity (CD23) IgE receptors, assessed by immunofluorescence and flow cytometry, respectively. Serum levels of specific IgE were also assessed, along with RANTES and IL-8 secretion in cell culture supernatant and quantification of apoptotic granulocytes through TUNEL technique. Granulocytes were isolated from patients undergoing bee venom specific immunotherapy in different periods of treatment (Pre, 1, 3, 6, 12, 18 and 24 months), after subcutaneous injection, and cultured for 72 hours, with bee venom 1ng/ml_. Non allergic subjects were studied as control group. Overall, bee venom specific immunotherapy was able to modulate the analyzed elements, significantly reducing their expression at the end of 24 months of treatment. Modulation on the number of apoptotic granulocytes were not observed during immunotherapy. Our results provide additional information about the effects of immunotherapy over granulocytes, reinforcing the suppressor and tolerogenic properties of this treatment / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica