Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-09-22T14:51:20Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ruberlei Godinho de Oliveira.pdf: 1976037 bytes, checksum: 1bc4af52537ae6c49276a4a8287308cc (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-09-26T14:23:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ruberlei Godinho de Oliveira.pdf: 1976037 bytes, checksum: 1bc4af52537ae6c49276a4a8287308cc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T14:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Ruberlei Godinho de Oliveira.pdf: 1976037 bytes, checksum: 1bc4af52537ae6c49276a4a8287308cc (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / CAPES / Dilodendron bipinnatum Radlk. (Sapindaceae), conhecida popularmente como “mulher-pobre”, é uma árvore nativa do Pantanal de Mato Grosso, Brasil. A entrecasca do caule de Dilodendron bipinnatum é utilizada pela população, nas formas de decocto e macerado, para o tratamento de inflamações. Não há estudos na literatura que comprovem a atividade anti-inflamatória desta planta e o seu respectivo mecanismo de ação. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a atividade e o mecanismo de ação anti-inflamatório do extrato hidroetanólico da entrecasca de Dilodendron bipinnatum (EHDb) em modelos experimentais in vivo e in vitro. A entrecasca foi macerada em solução hidroetanólica 70% (1:3, p/v) durante 7 dias, filtrada, concentrada em evaporador rotativo e o solvente residual eliminado em estufa a 40ºC, obtendo-se assim o EHDb. Os taninos condensados e hidrolisáveis foram identificados e quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A citotoxicidade do EHDb em macrófagos murinos (células RAW 264.7) foi avaliada pelo método de azul de Alamar. A atividade anti-inflamatória in vivo do EHDb (20, 100 e 500 mg/kg v.o.) foi avaliada no modelo de peritonite induzida por lipopolissacarídeo (LPS), em camundongos Swiss cujo lavado peritoneal foi recolhido para determinações de TNF-α, IL-1β e IL-10, usando-se kits comerciais para ELISA. A atividade anti-inflamatória in vitro (1, 5 e 20 μg/mL) foi avaliada em células RAW 264.7 estimuladas com LPS e/ou INF-γ, coletando-se o sobrenadante para determinações das mesmas citocinas observadas in vivo, assim como de óxido nítrico pelo método de Griess. O efeito do EHDb sobre a expressão gênica de MAPK p38, ERK 1/2 e COX-2 foi avaliado em ensaio de western blotting em células RAW 264.7 estimuladas com LPS. O EHDb não alterou a viabilidade em células RAW 264.7, apresentando uma concentração inibitória mínima (CI50%) > 200 ± 0,38 μg/mL. No modelo de peritonite induzida por LPS, o EHDb reduziu a migração de leucócitos totais e neutrófilos, em todas as doses, atingindo o maior efeito (45% e 64%, p<0,001, respectivamente) com 20 mg/kg, em ambos os casos. A ação anti-inflamatória foi devida, pelo menos em parte, pela inibição da migração, citocinas do tipo Th1, expressão de MAPK p38 e COX-2, e estimulação de citocinas do tipo Th2, sem afetar a via do NO. Pode-se sugerir que os taninos respondem, pelo menos em parte, pela atividade anti-inflamatória do EHDb. / Dilodendron bipinnatum Radlk. (Sapindaceae), popularly known as “mulher-pobre”, is a native tree of the Pantanal of Mato Grosso, Brazil. The inner stem bark of Dilodendron bipinnatum is used by the population, in the forms of decoction and maceration in the treatment of inflammatory conditions. There is no information in the literature demonstrating the anti-inflammatory activity of Dilodendron bipinnatum and its respective mechanism of action. This study aimed to evaluate the anti-inflammatory activity and mechanism of action of the hydroethanolic extract of the stem bark of Dilodendron bipinnatum (HEDb) using in vivo and in vitro experimental models. The stem bark of Dilodendron bipinnatum was macerated in 70% hydroethanolic solution (1:3, w/v) for 7 days, filtered, concentrated on a rotary evaporator and the residual solvent removed in oven at 40 ° C, thus obtaining HEDb. The effect of HEDb on cell viability in murine macrophages (RAW 264.7 cells) was assessed by the Alamar blue assay. The in vivo anti-inflammatory activity and mechanism of action of HEDb (20, 100 and 500 mg/kg) was evaluated in lipopolysaccharide (LPS) -induced peritonitis model in Swiss mice. The peritoneal lavage was collected for the determination of TNF-α, IL-1β and IL-10, using commercial ELISA kits. The in vitro anti-inflammatory studies activity of HEDb (1, 5 and 20 μg/ml) was determined in RAW 264.7 cells stimulated with LPS and/or INF-γ. The supernatant of the stimulated cells was used for the determination of the aforementioned cytokines as well as oxide nitric (NO) by the Griess method. The effect of HEDb on the gene expression of p38 and ERK 1/2 MAPKs and COX-2 was assessed using Western blot assay in RAW 264.7 cells stimulated with LPS. Preliminary phytochemical analysis of HEDb was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). HEDb showed very low cytotoxicity with IC50>200 ± 0.38 μg/mL. In LPS-induced peritonitis model, HEDb reduced total leukocytes and neutrophils migration, at all doses, reaching maximum effect (45% and 64%, p<0.001 respectively) at 20 mg/kg in both cases. HEDb also attenuated increase in the concentrations of the pro-inflammatory cytokines (IL-1β and TNF-α) and increased level of anti-inflammatory cytokine IL-10 in peritonitis. HEDb had no demonstrable effect on the increased concentrations of TNF-α, IL-10 and NO in activated RAW 264.7 cells. HEDb caused in vitro inhibition of gene expression of MAPK p38 and COX-2. HPLC analyses identified some condensed and hydrolysable tannins, with epigallocatechin gallate being the major compound. HEDb presented a novel multitargeted anti-inflammatory action and mechanism, and low in vitro cytotoxicity. Its anti-inflammatory action was due, at least in part, to the inhibition of cell migration, Th1 type cytokines, expressions of p38 MAPK and COX-2, and to the stimulation of Th2 type cytokine, without affecting NO pathway. It can be suggested that tannins account at least in part to the anti-inflammatory activity of HEDb.

Embora a terapia com uso de laser de baixa potência (TLBP) seja uma modalidade terapêutica amplamente estudada no meio científico, sua aplicação na clínica médica ainda gera controvérsias, já que a literatura reporta que a TLBP é capaz de promover a proliferação e diferenciação de células tumorais. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da TLBP no crescimento celular usando como modelo a linhagem B16F10 de melanoma murino em estado de homeostase e estado redox, além de verificar o comportamento quimiotáxico da linhagem B16F10 por meio do ensaio de migração transwell em resposta à TLBP em diferentes densidades de energia. Foram montados cinco grupos experimentais utilizando um laser de emissão vermelha em &lambda; = 660 nm: Grupo controle (GC) onde nenhuma irradiação foi realizada; G30 (30J/cm2); G60 (60J/cm2); G90 (90J/cm2); G120 (120J/cm2); G150 (150J/cm2), com as respectivas doses utilizadas. Todos os experimentos foram realizados em triplicata e os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística. Sob as condições experimentais deste estudo, nossos resultados mostram que a TLBP neste comprimento de onda não promoveu mudanças no metabolismo celular nos tempos de 48 h e 72 h, independente do estado nutricional. Foi possível observar mudança no padrão de comportamento quimiotáxico da linhagem celular B16F10 irradiadas com laser de emissão vermelha. / The low power lasers (TLBP) is a therapeutic modality widely studied in scientific field, its application in clinical medicine still generates many conflicts since literature reports proliferation in cancer cells. The objective of this study was to evaluate the effects of TLBP on cell growth using as model the line B16F10 in state of homeostasis and redox state and investigate the chemotactic behavior of B16F10 lineage through transwell migration assay in response to TLBP in different energy densities. For this purpose five experimental groups were assembled using a laser emission at &lambda; = 660 nm: control group (G0) where no irradiation was performed; G30 (30J/cm2), G60 (60J/cm2), G90 (90J/cm2); G120 (120J/cm2); G150 (150J/cm2) with the respective doses used. All experiments were performed in triplicate and the results were statistically analyzed. Under the experimental conditions of this study, our results show that TLBP did not induced changes in cellular metabolism that influence proliferation at 48 h and 72 h, independent nutritional status. It was possible to observe changes in behavior pattern chemotactic of cell line B16F10 with TLBP at red emission.

Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2017-01-03T13:03:15Z No. of bitstreams: 1 DissPRS.pdf: 2244710 bytes, checksum: d11e0b755d5503e93a47a8a6dc113814 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T16:23:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissPRS.pdf: 2244710 bytes, checksum: d11e0b755d5503e93a47a8a6dc113814 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2017-01-16T16:23:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissPRS.pdf: 2244710 bytes, checksum: d11e0b755d5503e93a47a8a6dc113814 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissPRS.pdf: 2244710 bytes, checksum: d11e0b755d5503e93a47a8a6dc113814 (MD5) Previous issue date: 2016-10-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Titanium dioxide nanoparticles (TiO2-NP) are commonly used in many industrial activities. Consequently, the daily consumption by humans is estimated in 5.4 mg day, with an input in the environment of 4.2 mg day per person, receiving or not appropriated treatment before disposure. The cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity of TiO2-NP were investigated using the established fish cell line derived from zebrafish (Danio rerio) liver (i. e. ZF-L cells). Prior to the evaluation of nanoparticle’s toxic potential, a careful characterization was realized in culture medium in the presence or not of fetal bovine serum (FBS). Regarding to the characterization in terms of size was accessed using a transmission electron microscope (TEM), the agglomeration potential and surface charge were accessed by diameter light scattering (DLS) and zeta potential measurements, respectively, using a spectrophotometer. TiO2-NP in environmentally relevant concentrations were tested for cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity. Cell viability was accessed by four different tests, the trypan blue assay (membrane integrity), MTT reduction assay (mitochondria), neutral red retention assay (lysosomes) and finally, induction of apoptosis and necrosis. Genotoxicity was determined by observing the fragmentation of DNA by the comet assay, while mutagenicity was determined by Cytokinesis-block micronucleus technique. The characterization showed that the FBS was effective in dispersing the nanoparticles and prevent the formation of large agglomerates allowing robust responses on the real toxicity of NP. After 24 hours of treatment, there was cell membranes rupture, decreasing cell viability to 35.33%, at the highest concentration (1.0 μg mL-1). Mitochondrial metabolic activity remained unchanged, but it was possible to detect the proliferation of lysosomes, which was mainly attributed to the NP endocytosis. The induction of apoptosis was 50.4%, and necrosis was 13.9%, both in the concentration 1.0 μg mL-1 TiO2-NP. In the case of necrosis, a result 10 times greater than that presented by the negative control. Added necrosis and apoptosis indicated a decrease in cell viability to 35.7%. The comet test showed the fragmentation of the DNA, it was also possible to observe the formation of micronuclei, bridges and shoots demonstrated by the micronucleus assay. In general, this study demonstrated that TiO2-NP, after 24 hours of exposure, significantly affect cell viability and cause DNA damage, which may become irreversible. In conclusion, this study showed the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potential of TiO2-NP for ZF-L cells. Mitochondrial and lysosome responses require further studies on the effect of TiO2-NP on these organelles. / Nanopartículas de dióxido de titânio (NP-TiO2) são comumente usadas em muitos produtos industriais. Por conseguinte, seu consumo diário por seres humanos é estimado em 5,4 mg dia-1, o que acarreta em um aporte no ambiente de 4,2 mg dia-1 por pessoa, podendo ou não receber um tratamento apropriado antes do seu despejo. Foram avaliadas a citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de NPTiO2 para a linhagem permanente derivada de fígado de peixe-zebra (Danio rerio) (células ZF-L). Antes da avaliação do potencial tóxico das nanopartículas, foi realizada uma caracterização cuidadosa em meio de cultura com e sem a adição de soro fetal de bovino (SFB). A caracterização em termos do tamanho físico da nanopartícula (NP) foi realizada utilizando um microscópio eletrônico de transmissão (TEM); os tamanhos hidrodinâmicos dos aglomerados e as cargas de superfície foram acessados por medidas de DLS (diameter light scattering) e potencial zeta, respectivamente utilizando um espectrofotômetro. A viabilidade celular foi avaliada por três ensaios diferentes, o ensaio de exclusão do corante azul de tripano (integridade de membrana), ensaio de redução do sal MTT (atividade metabólica mitocondrial) e ensaio de retenção do corante vermelho neutro (viabilidade dos lisossomos). A indução de apoptose e necrose foi avaliada por citometria de fluxo. A genotoxicidade foi determinada pela observação da fragmentação do DNA por meio do ensaio do cometa, enquanto a mutagenicidade foi determinada pelo ensaio de micronúcleos com bloqueio da citocinese. A análise DLS mostrou que o SFB foi eficaz quanto à dispersão das nanopartículas e preveniu a formação de grandes aglomerados, o que permitiu a obtenção de respostas mais robustas relativas à toxicidade real das nanopartículas. Após 24 horas de tratamento, houve ruptura das membranas celulares diminuindo a viabilidade celular a 35,33%, na concentração mais elevada (1,0 μg mL-1). A atividade metabólica mitocondrial manteve-se inalterada, mas foi possível detectar a proliferação dos lisossomos, que foi atribuída principalmente à endocitose das NP. A indução de apoptose foi de 50,4%, e de necrose de 13,9%, ambos na concentração 1,0 μg mL-1 NP-TiO2. No caso da necrose, um resultado 10 vezes maior do que o apresentado pelo controle negativo. Necrose e apoptose somadas indicaram a diminuição da viabilidade celular a 35,7%. O teste do cometa mostrou a fragmentação do DNA, também foi possível observar a formação de micronúcleos, pontes e brotos demonstrados pelo ensaio do micronúcleo. Em geral, este estudo demonstrou que as NP-TiO2, após 24 horas de exposição, afetam significativamente a viabilidade celular e causam danos ao DNA, que podem se tornar irreversíveis. Em conclusão, este estudo mostrou o potencial citotóxico, genotóxicos e mutagênico das NP-TiO2 para células ZF-L. Respostas mitocondriais e dos lisossomos requerem novos estudos quanto ao efeito das NP-TiO2 sobre essas organelas.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA160.pdf: 837445 bytes, checksum: f1dbe7c23f22405d7f87344ec22703cc (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / The mesenchymal stem cells are a great promise for the treatment of many both congenital as acquired diseases. However, when they are subject to continuous cultivation in the laboratory, the risks of contamination and genetic mutations increase, being necessary to keep them at cryogenic temperatures. For this, the use of cryoprotectant substances is indispensable. The DMSO is the preferred cryoprotector, but some studies claim that it can induce the differentiation of stem cells into neuronal cells, as well as having high toxicity at room temperature. Therefore, the aim of this study was to test alternative cryoprotectants to DMSO for cryopreservation of mesenchymal stem cells and compare their efficiency. For this, these cells were isolated from bovine adipose tissue by enzymatic digestion with collagenase 0.075% and placed in DMEM + 10% FBS culture medium at 37ºC with 5% of CO2. Then, the cells were frozen at a concentration of 106 cells/mL in DMEM + 10% FBS with three different treatments: (1) 10% ethylene glycol (EG), (2) 10% propylene glycol (PG) and (3) 10% dimethyl sulfoxide (DMSO). A part of mesenchymal stem cells were maintained in culture for use as controls in the tests performed. After stay for, at least, 48 hours in a liquid nitrogen cylinder, they were thawed in a water bath at 37ºC, determined the immediate cell survival by the exclusion of dead cells by the staining with Trypan blue 0.4% method and performed the cell growth curve and the population doubling time test (PDT). Was also done the cell viability test using the WST-1 reagent and determined the differentiation capacity of these cells in cells of bone and adipose tissues. The results were analyzed using the SAS statistical package, by GLM procedure, adopting a 5% significance level. There was no statistical difference between treatments with EG (72.9%) and PG (71.7%) about the immediate cell survival, however DMSO (86.4%) had a significantly higher result than the others. The three cryoprotectants showed no statistical difference among them in the formation of the cell growth curve, however, all were lower than the not cryopreserved control. As the PDT test, there was no significant difference among the three treatments (EG: 28 h; PG: 26.7 h; DMSO: 27.2 h), but all of them had a doubling time of their populations statistically higher than the control (21.3 h). The cell viability, through the WST-1 reagent, of the cells cryopreserved with EG, PG and DMSO were respectively 66.65%, 71.42% and 83.62%. PG did not differ statistically from the other cryoprotectants, but the DMSO showed a significant difference from the EG. And both cells subjected to three treatments as those used as controls were able to differentiate into cells of bone and adipose tissues. It follows therefore that cryopreservation influences in the cell survival, cell multiplication rate and cell viability, but still can be used to store the mesenchymal stem cells, because the damage caused don t make them unviable. And both EG and PG may be used as an alternative to DMSO for the cryopreservation of these cells, since they presented technically viable results / As células tronco mesenquimais representam uma grande promessa para o tratamento de inúmeras doenças tanto congênitas quanto adquiridas. Porém, quando submetidas ao cultivo contínuo em laboratório, os riscos de contaminações e de mutações genéticas aumentam, sendo necessário então mantê-las em temperaturas criogênicas. Para isso, é imprescindível o uso de substâncias crioprotetoras. O DMSO é o crioprotetor de eleição, porém alguns trabalhos afirmam que este pode induzir a diferenciação das células tronco em células neuronais, além de apresentar alta toxicidade em temperatura ambiente. Portanto, o objetivo deste estudo foi testar crioprotetores alternativos ao DMSO para a criopreservação das células tronco mesenquimais e comparar a eficiência dos mesmos. Para tanto, estas células foram isoladas, a partir de tecido adiposo bovino, através da digestão enzimática com colagenase a 0,075% e colocadas em meio de cultivo DMEM + 10% SFB a 37ºC com 5% de CO2. Em seguida, as células foram congeladas na concentração de 106 células/mL em DMEM + 10% SFB com três tratamentos diferentes: (1) 10% Etilenoglicol (EG), (2) 10% Propilenoglicol (PG) e (3) 10% Dimetilsulfóxido (DMSO). Uma parte das células tronco mesenquimais foi mantida em cultivo para ser utilizada como controle nos testes realizados. Após permaneceram por, pelo menos, 48 horas em botijão de nitrogênio líquido, foram descongeladas em banho-maria a 37ºC, determinada a sobrevivência celular imediata através do método de exclusão de células mortas por coloração com azul de Tripan a 0,4% e realizados a curva de crescimento celular e o teste de Population Doubling Time (PDT). Também foi feito o teste de viabilidade celular através do reagente WST-1 e determinada a capacidade de diferenciação destas células em células dos tecidos ósseo e adiposo. Os resultados foram analisados pelo pacote estatístico SAS, por meio do procedimento GLM, adotando-se um nível de significância de 5%. Não houve diferença estatística entre os tratamentos com EG (72.9%) e PG (71,7%) quanto a sobrevivência celular imediata, entretanto o DMSO (86,4%) apresentou um resultado significativamente superior em relação aos demais. Os três crioprotetores não demonstraram diferença estatística entre si na formação da curva de crescimento celular, porém, todos foram inferiores ao controle não criopreservado. Quanto ao PDT, também não houve diferença significante entre os três tratamentos (EG: 28 h; PG: 26,7 h; DMSO: 27,2 h), mas todos apresentaram um tempo de duplicação de suas populações estatisticamente maior do que o controle (21,3 h). A viabilidade celular, através do reagente WST-1, das células criopreservadas com EG, PG e DMSO foram, respectivamente, 66,65%, 71,42% e 83,62%. O PG não diferiu estatisticamente dos demais crioprotetores, mas o DMSO apresentou diferença significativa em relação ao EG. E tanto as células submetidas aos três tratamentos como as utilizadas como controle conseguiram se diferenciar em células dos tecidos ósseo e adiposo. Conclui-se, portanto, que a criopreservação influencia na sobrevivência, na taxa de multiplicação e na viabilidade celular, mas mesmo assim pode ser utilizada para armazenar as células tronco mesenquimais, já que os danos causados não inviabilizam as mesmas. E tanto o EG como o PG podem ser utilizados como uma alternativa ao DMSO na criopreservação destas células, pois durante os experimentos realizados apresentaram resultados tecnicamente viáveis

Submitted by TATIANE SAMPAIO BITTENCOURT (dratatisampaio@gmail.com) on 2018-04-11T16:45:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final - Tatiane Sampaio Bittencourt - UNESP.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-16T15:54:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bittencourt_ts_me_sjc.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T15:54:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bittencourt_ts_me_sjc.pdf: 2306748 bytes, checksum: 2c8b1dc80443dde5641b966081d8e34f (MD5) Previous issue date: 2018-02-16 / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o comportamento biológico celular da N-Acetilcisteína (NAC), diante da estimulação ou não pelo LPS bacteriano. Foram utilizados fibroblastos do ligamento periodontal, que ficaram em contato por 48 horas com as substâncias testadas: NAC, Hidróxido de cálcio p.a. (HC), Lipopolissacarídeo de Escheria Coli (LPS), NAC + LPS e HC + LPS. Para os grupos NAC + LPS, HC + LPS e LPS, as células foram estimuladas com 2µg/mL de LPS por 24 horas, previamente aos tratamentos descritos. Foram realizados os testes biológicos de viabilidade celular (XTT), Espécies Reativas de Oxigênio (ROS), Elisa (para as citocinas IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β e TNF-α) e Micronúcleo (MNT). Os dados foram analisados estatisticamente pela análise descritiva e pelos testes ANOVA e Kruskall Wallis, seguido do teste Dunn (p˂0.05) para os testes de XTT, ROS e MNT, e para o teste Elisa foi realizado cálculo das médias e desvio padrão. Os resultados obtidos mostraram que NAC teve um bom comportamento, frente à agressão provocada pelo LPS, quanto à produção de ROS. HC apresentou maior viabilidade celular que NAC, embora NAC não tenha apresentado citotoxicidade. Em relação à expressão das citocinas, NAC foi capaz de reduzir o potencial inflamatório do LPS quando da análise do TNF- α e IL-1β. NAC foi capaz de reduzir a genotoxicidade do LPS, como mostrado pelo teste MNT. Concluiu-se que NAC apresentou um comportamento biológico satisfatório, pela viabilidade celular dos fibroblastos, pela redução da geração de ROS e do potencial inflamatório provocado pelo LPS, e por reduzir a sua genotoxicidade. / The purpose of this study was to evaluate in vitro the action of N-Acetylcysteine (NAC) and calcium hydroxide (CH) on biological activity, either without or with LPS stimulation in periodontal ligament fibroblasts (PDLF) cells. PDLF were placed in contact with NAC, CH, NAC + LPS, LPS and CH + LPS for 48 hours. PDLF were stimulated by bacterial LPS for 24 hours in NAC + LPS, LPS and CH + LPS groups, before the substances described above are applied. The LPS and NAC effect on cell viability was measured using a XTT test. Reactive oxygen species (ROS) production was evaluated using ROS/superoxide detection kit. Inflammatory cytokines (IL-6, IL-8, IL-10, IL-1β and TNF-α) were evaluated by enzyme-linked immunosorbent (ELISA) assay. Genotoxicity was measured using micronucleus test (MNT). The means and standard deviation for all tests were calculated. Data were analyzed statistically by descriptive analysis, ANOVA and Kruskall Wallis tests, followed by Dunn test (p˂.05). CH was superior to NAC on cellular viability, although NAC was not cytotoxic. The results showed that NAC was able to reduce ROS production of LPS. NAC was able to reduce the inflammatory potential of LPS by decreasing the TNF-α and IL-1β release. NAC was able to reduce the genotoxicity of LPS. It was concluded that NAC showed a satisfactory biological activity, presenting a minimal effect on cell viability of PDLF cells and reducing ROS production and inflammatory potential provoked by LPS, and to decrease its genotoxicity.

Made available in DSpace on 2015-03-03T13:58:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CybelleTM.pdf: 889951 bytes, checksum: bcf6eb5adb7011fa19c2ab4cd178326c (MD5) Previous issue date: 2007-09-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / ?Fucans, sulfated polysaccharides extracted from brown algae and some echinoderms, have been extensively studied for its diverse biological activities and because of its interference with molecular mechanisms of cell to cell recognition, including leukocyte trafficking from blood vessels into sites of inflammation mediated by selectin, a family of adhesion molecules. In the present study, we examined structural features of a heterofucan extracted from brown algae Padina gymnospora and its effect on the leukocyte migration to the peritoneum. The sulfated polysaccharides were extracted from the brown seaweed by proteolysis with the proteolytic enzyme maxatase. The presence of protein and uronic acid contamination was detected in the crude polysaccharide extract. Fractionation of the crude extract with growing concentrations of acetone produced five fractions with different concentrations of fucose, xylose, uronic acid, galactose, glucose and sulfate. The fraction precipitated with 1.5 volumes of acetone was characterized by infrared and nuclear magnetic resonance, through which can be observed the presence of sulfate groups in the C4 of -L-fucose. The anti-inflammatory action of this composite was assessed by a sodium thioglycollate-induced peritonitis assay and through nitric oxide production by the peritoneal macrophages using Griess reagent. Fraction F1.5 was efficient in reducing leukocyte influx into the peritoneal cavity when 10 mg/kg and 25mg/kg were used, resulting in a decrease of 56 and 39%, respectively. A decrease of nitric oxide production occurred when high concentrations of fucana were used. The cytotoxicity of the composite was also assessed using the reduction of 3-(4,5 dimethylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). Fraction F1.5 had no cytotoxicity when 500 ?g/mL of the fraction was used. This study suggests the use of fraction F1.5 (heterofucan) as an anti-inflammatory / Fucanas, polissacar?deos sulfatados extra?dos de alga marrom e alguns equinodermos, t?m sido extensivamente estudadas devido as suas diversas atividades biol?gicas e pela sua interfer?ncia com mecanismos moleculares de reconhecimento celular, incluindo o tr?fego de leuc?citos dos vasos sangu?neos para o interior de s?tios inflamat?rios mediado pela fam?lia das mol?culas de ades?o denominada selectinas. Neste presente estudo, n?s examinamos a estrutura de uma heterofucana extra?da da alga marrom Padina gymnospora e seu efeito sobre a migra??o de leuc?citos para o perit?nio. Os polissacar?deos sulfatados foram extra?dos da alga marrom por prote?lise com a enzima proteol?tica maxatase. A presen?a de contamina??o por prote?nas e ?cido ur?nico foi detectada no extrato bruto dos polissacar?deos. Fracionamento do extrato bruto com concentra??es crescentes de acetona produziu cinco fra??es com diferentes concentra??es de fucose, xilose, ?cido ur?nico, galactose, glicose e sulfato. A fra??o precipitada com 1,5 volume de acetona foi caracterizada por infravermelho e resson?ncia magn?tica nuclear, atrav?s das quais se p?de constatar a presen?a de grupos sulfato no C4 da -L-fucose. A a??o antiinflamat?ria deste composto foi avaliada atrav?s do ensaio de peritonite induzida por tioglicolato de s?dio e atrav?s da produ??o de ?xido n?trico por macr?fagos peritoneais utilizando-se o reagente de Griess. A fra??o F1,5 mostrou-se eficiente na redu??o do influxo leucocit?rio para a cavidade peritoneal quando utilizados 10 mg/Kg e 25 mg/Kg resultando em uma diminui??o na ordem de 56 e 39 %, respectivamente. Uma diminui??o na produ??o de ?xido n?trico ocorreu quando altas concentra??es de fucana foram usadas. A citotoxicidade do composto tamb?m foi avaliada utilizando-se como par?metro a redu??o do 3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). A fra??o F1,5 n?o apresentou citotoxicidade quando utilizados 500 ?g/ml da fra??o. Este estudo sugere o uso da fra??o F1,5 (heterofucana) como um antiinflamat?rio

Durante a fase de obturação dos canais radiculares, pode ocorrer o contato direto do material obturador com os tecidos periapicais, por tempo indeterminado, o que pode retardar, dificultar ou impedir a ocorrência do processo de reparo, por isso, para o êxito do tratamento endodôntico, a seleção de um material de obturação do canal radicular adequado é tão essencial como a técnica operatória. Esse contato pode ocorrer por extravasamento na forma de puff ou mesmo sem extravasamento, pois componentes derivados desses materiais podem entrar em contato direto com os tecidos, através de numerosas conexões, como, por exemplo, os túbulos dentinários, canais acessórios, canais laterais e o forame apical, causando irritação e possível desconforto pós-operatório. Outra forma pela qual os materiais obturadores de canais radiculares podem entrar em contato com os tecidos periapicais é através do processo realização de tratamento endodôntico em dentes decíduos, devido ao processo de rizólise ou tratamento endodôntico em dentes imaturos (ápice aberto). Por esses motivos, a biocompatibilidade dos materiais obturadores de canais radiculares é de extrema importância, diante disso objetivo deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade, por meio do Ensaio do MTT, de seis materiais endodônticos usados em dentes decíduos e permanentes (AH Plus, GuttaFlow 2, Endomethasone N, Vitapex®, Calen® espessada e MTA ProRoot) recém espatulados, em cultura primária de linfócitos do sangue periférico de humanos, por 24 horas. Os resultados foram submetidos a análise estatística pelo teste one-way ANOVA e pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Observou-se que o Endomethasone N foi o mais citotóxico sobre linfócitos, O AH Plus, e a Calen® espessada foram citotóxicas a partir de 25 mg/mL, enquanto o MTA ProRoot, GuttaFlow 2 e o Vitapex® foram os menos citotóxicos sobre linfócitos humanos, podendo-se concluir que o Vitapex® (usados em dentes decíduos) e o GuttaFlow 2 e MTA ProRoot (usados em dentes permanentes) foram os materiais obturadores menos citotóxicos sobre linfócitos humanos. / During the filling phase of root canals, there may be direct contact of the filling material with the periapical tissues, for an (indefinite) unknown period, which may delay, hinder or prevent the occurrence of the repair process. The objective of this study is to evaluate the cytotoxicity by MTT assay of six endodontic materials used in primary and permanent teeth (AH Plus , GuttaFlow 2, Endomethasone N, Vitapex®, Calen® thickened and MTA ProRoot) newly spatulate in primary cultures of peripheral human blood lymphocytes for 24 hours. The results were statistically analyzed by one-way ANOVA and Tukey\'s test at 5% significance level. It was observed that the Endomethasone N was the most cytotoxic material for the lymphocytes, the AH Plus, and Calen® thickened were cytotoxic from 25 mg/mL, while the MTA ProRoot, GuttaFlow 2 and Vitapex® were less cytotoxic for human lymphocytes, allowing to conclude that the Vitapex® (used in deciduous teeth) and GuttaFlow 2 and MTA ProRoot (used in permanent teeth) were less cytotoxic sealers on human lymphocytes.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-12-21T10:59:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karla Márcia da Silva Braga - 2016.pdf: 1581456 bytes, checksum: cbaf9c07e17608723ba37f6ee325896f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-27T12:57:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karla Márcia da Silva Braga - 2016.pdf: 1581456 bytes, checksum: cbaf9c07e17608723ba37f6ee325896f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-27T12:57:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karla Márcia da Silva Braga - 2016.pdf: 1581456 bytes, checksum: cbaf9c07e17608723ba37f6ee325896f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Osteosarcoma is a mesenchymal high mortality tumor of dogs and men. Cytotoxicity assays employing tropical plants have been performed in order to identify possible active compounds able to inhibit neoplastic cells proliferation. The fruits from the Cerrado, Center-west Brazil’s diversity-rich, predominant vegetation, are well-known by the general public but very little is known about their pharmacological properties. Thus, the aim of this study was to verify the cytotoxic activity of the ethanoic extract / O osteossarcoma é uma neoplasia de origem mesenquimal de elevada mortalidade em cães e no homem. Ensaios de citotoxicidade com plantas tropicais têm sido realizados para identificar possíveis princípios ativos medicinais capazes de inibir a proliferação de células tumorais. O cerrado é a vegetação predominante da região Centro-Oeste do Brasil, rico em biodiversidade, no qual frutos, como o pequi (Caryocar brasilense) são amplamente conhecidos, porém pouco explorados quanto a suas propriedades farmacológicas. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi verificar a atividade citotóxica do extrato etanólico da casca de pequi em células de osteossarcoma canino em cultura estabelecida, obtidas do banco de linhagens celulares, subcultivadas e submetidas ao tratamento com o EECP em três diferentes concentrações e três diferentes tempos de exposição. O tratamento que inibiu de forma mais eficiente o crescimento celular foi o grupo no qual foram adicionados 10µl do EECP por 72 horas, resultando em crescimento de 28,20% em relação ao controle, ou seja, uma inibição de 71,80%. A menor média do IC50 foi de 155,2 µg/mL, no tratamento que recebeu 10µl do EECP por 72 horas. Com o cálculo das frações de sobrevivência presumiu-se que o crescimento celular, após o tratamento, foi menor (3,33 %) no grupo tratado por 72 horas com a concentração de 10 µl. Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que o extrato etanólico da casca de pequi (Caryocar brasiliense) possui efeito citotóxico sobre as células de osteossarcoma canino, promovendo redução da viabilidade celular de forma dependente do tempo de exposição e da concentração do extrato utilizada

Solos ácidos cobrem cerca de 30% das áreas agricultáveis do mundo. Nestes solos, geralmente ocorrem baixas concentrações de cátions como cálcio e magnésio, enquanto a acidez (pH <5,5) promove a solubilização de Al3+. A exposição de raízes a pH ácido e/ou ao Al3+ inibe o crescimento radicular, reduz a viabilidade de células do ápice, promove estresse oxidativo, e pode causar desarranjos na parede celular. Na parede, é provável que tanto o H+ como o Al3+ atuem sobre a pectina, comprometendo a sua estrutura e funcionalidade. Por outro lado, peroxidases classe III (GPOX) parecem desempenhar um papel central nas modificações da parede celular, são induzidas por H+ e Al3+ e algumas isoformas são associadas à pectina. O objetivo deste trabalho foi caracterizar as respostas radiculares da cultivar Micro-Tom de tomateiro (Solanum lycopersicum L.) à toxidez por H+ e Al3+ e avaliar a capacidade do cálcio e do boro em aliviar esta toxidez com relação à inibição do crescimento radicular, queda na viabilidade celular e alterações na atividade de GPOX. Em raízes expostas a pH 4,0, após 30 min já foi possível observar a redução na viabilidade de células do ápice, avaliada através da absorção de azul de Evans. Observou-se elevação significativa na atividade de GPOX após 2 h de tratamento a pH 4,0. Apesar da defasagem na sua indução em relação à queda na viabilidade celular, a atividade de GPOX parece ser um melhor indicador da ação de H+. O uso do inibidor da GPOX (SHAM; ácido salicilhidroxâmico) indicou que estas enzimas desempenham um papel no sentido de impedir maiores danos às células por pH baixo. O cálcio (10 mM) aliviou totalmente a toxidez por H+ (pH 4,0 e 4,5) e Al3+ (10 ?M) em relação a crescimento radicular e viabilidade celular. O boro (30 ?M) aliviou totalmente a toxidez por H+ e Al3+ em relação a viabilidade celular, mas aliviou apenas parcialmente ou em nada a inibição do crescimento radicular por H+ ou Al3+, respectivamente. Tanto o cálcio quanto o boro suprimiram totalmente a indução da atividade de GPOX. O cálcio e o boro apresentaram interação positiva sobre o crescimento radicular a pH 5,8 e 4,5, mas não na presença de Al3+ e nem em relação à viabilidade celular ou atividade de GPOX. De modo geral, encontrou-se boa correlação entre viabilidade celular e atividade de GPOX. Tomado no seu conjunto, os dados evidenciam um papel importante de GPOX na toxidez por H+ e Al3+ e sugerem que, apesar de distintos, a toxidez por estes íons possivelmente apresentam alguns aspectos e mecanismos em comum. Também corroboram outros trabalhos que evidenciam a ação destes íons sobre a parede celular, em particular a matriz péctica. Estudos futuros deverão examinar se a GPOX que é induzida por H+ e Al3+ está associada à pectina da parede. / Acid soils cover about 30% of the arable land in the world. These soils usually have low concentrations of cations, such as calcium and magnesium, whereas the low pH (pH <5.5) increases the solubility of Al3+. Exposure of roots to low pH and/or Al3+ inhibits root growth, reduces cell viability of the root apex, promotes oxidative stress, and can cause derrangements in the cell wall. It is likely that both H+ and Al3+ act on pectin of the cell wall, affecting its structure and functionality. On the other hand, class III peroxidases (GPOX) appear to play a role in modifications of the cell wall, are induced by H+ and Al3+ and some isoforms are associated with pectin. The aim of this study was to characterize the responses of roots of the Micro-Tom cultivar of tomato (Solanum lycopersicum L.) to the toxicity of H+ and Al3+ and evaluate the ability of calcium and boron to alleviate this toxicity with respect to inhibition of root growth, decrease in cell viability and changes in the activity of GPOX. In roots exposed to pH 4.0, after 30 min it was already possible to observe a decrease in cell viability at the apex, as assessed by the uptake of Evans blue. We observed a significant increase in GPOX activity after 2 h of treatment at pH 4.0. Despite the lag in their induction in relation to the decrease in cell viability, GPOX activity seems to be a better indicator of the action of H+. The use of inhibitors of GPOX activity indicates that these enzymes play a role in preventing further damage to cells by low pH. Calcium (10 mM) completely alleviated H+ (pH 4.0 or 4.5) and Al3+ (10 mM) toxicity with respect to root growth and cell viability. Boron (30 mM) completely alleviated H+ and Al3+ toxicity with respect to cell viability, but only partly alleviated or had no effect on the inhibition of root growth by H+ or Al3+, respectively. Both calcium and boron completely suppressed the induction of GPOX activity. Calcium and boron displayed a positive interactive effect on root growth at pH 5.8 and 4.5, but not in the presence of Al3+ and not in relation to cell viability or GPOX activity. In general, good correlations were found between cell viability and GPOX activity. Taken together, the data indicate a significant role of GPOX activity in the toxicity of H+ and Al3+ and suggest that although different, the toxicity of these ions possibly share some common aspects and mechanisms. The data also corroborates other studies that indicate the cell wall as a target of toxicity, particularly the pectic matrix. Further studies should examine whether GPOX activity, which is induced by H+ and Al3+ is associated with pectin in the wall.

A aroeira (Myracrodruon urundeuva) é uma árvore cujas folhas vem sendo estudadas com fins terapêuticos na medicina e odontologia por apresentar potencial antiinflamatório e antimicrobiano, além de favorecer o processo de reparo e cicatrização. O objetivo do trabalho foi caracterizar quimicamente o extrato de aroeira e avaliar seu efeito sobre fibroblastos gengivais humanos. Foi realizado a caracterização química da aroeira por meio do processo de triagem cromatográfica que consistiu na coleta das folhas sadias, maceração em metanol (MeOH) 80%, partição entre os solventes hexano, acetato de etila (AcOEt) e n-butanol (n-(BuOH)) Em seguida, realizaram-se análises dos compostos químicos em cromatografia liquida de alta eficiência acoplado a detector de arranjo de fotodiodo HPLC-PAD, análises por espectrometria de massas MS e cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS). Posteriormente foi realizada a análise de citotoxicidade do extrato hidroalcoólico de aroeira em fibroblastos gengivais humanos (linhagem FGH). Para a realização dos experimentos foram plaqueadas 2x103 células/poço em placas de 96 poços. O meio de cultivo foi substituído por meio de cultura de Eagle modificado por Dullbecco complementado por 10% soro fetal bovino (SFB) em diferentes concentrações do extrato hidroalcoólico de aroeira (extrato bruto; 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000 e controle). As análises de viabilidade foram feitas nos tempos experimentais de 24, 48, 72 e 96 horas, por meio dos testes de redução do MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio), captação do vermelho neutro e coloração pelo cristal violeta. A estatística foi realizada em análise de variância de 2 critérios seguido de uma análise de teste Tukey (p<0,05). Os compostos encontrados no extrato foram os derivados de ácido gálico, galotaninos, além de flavonoides. Para a redução do MTT os resultados mostraram uma ligeira oscilação da absorbância em todos os grupos nos períodos experimentais. Destaque para as diluições de 1:100, 1:1000 e 1:10000 que apresentaram, em geral para todos os períodos, os maiores valores; enquanto os grupos de extrato bruto e diluição 1:10 apresentaram valores inferiores aos outros grupos (p<0,05). Na análise da captação do vermelho neutro também houve uma leve oscilação dos valores de absorbância, no entanto os valores obtidos para o grupo do extrato bruto foram os menores em todos os períodos estudados (p<0,05). Enquanto os grupos controle e de diluições de 1:100, 1:1000 e 1:10000 apresentaram valores semelhantes sem diferença significante (p>0,05). Para o teste do cristal violeta, os resultados encontrados seguiram o mesmo padrão do vermelho neutro: valores de absorbância menores nos grupos do extrato bruto e 1:10, ao contrário dos outros grupos que apresentaram valores maiores (p<0,05). Em vista dos resultados, podemos concluir que o extrato metanólico de aroeira apresenta em sua composição taninos, flavonóides e derivados de ácido gálico e de galotaninos. Além disso, o extrato de aroeira é capaz de modular a viabilidade de fibroblastos gengivais humanos de maneira dose-dependente. / Aroeira (M. urundeuva) is a tree whose leaves have been studied with therapeutic purpose in dentistry and medicine, due it antimicrobial and antinflamatory potencial protect, besides the repair and cicatrization processes. The aim of the study was characterize the aroeiras extract and evaluate effect over human gingival fibroblast. The aroeiras characterization was realized by means of chromatography screenuy, process that consists in healthy leaves maceration in 80% MeOH, partition in the BuOH, AcOEt and hexanes solvents. Next, the chemicals compounds were analysed in High Performance Liquide Chromatography-Photo Diode Array (HPLC-PAD), Liquide Chromatography Mass Spectrometry (LCMS) and Mass Spectrometry (MSs). Subsequently was realized the citotoxicitys analysis from the aroeira hidroalcooholic extract in human gingival fibroblast (FGH lineage). For the experiments realization was platted 2x103 cels/well in 96 wells plate. The cultives mean was substituted for Eagles means culture changed for complemented Dullbeco for 10% bovine fetal serum in aroeiras hidroalcooholic extracts concentrations different (brute extract, 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000). The viability analysis was carried out in experimental times 24, 48, 72 and 96 hours, by means of MTT reductions test (brometo3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolio), neutral red captation and violet crystal). The statistics were performed for analysis of variance in 2 criteria continue with a Tukey test analysis (p<0.05). The founded compounds in the extract was the galic acid, gallotanine linked to glucose, besides flavonoids. For the MTTs reduction the results display an absorbance oscillation lightness in all the groups in experimental periods. Distinction for the control group and 1:100, 1:1000 and 1:10000 dilution, that present, by and large, for all the periods, the biggest valuable, while the brute extract group and 1:10 dilution present valuable lower to the others groups (p<0.05). In neutral red is caption analysis there was an absorbants values light oscillation too, despite this, the gotten values for the brute extracts group was smaller in all the studied periods (p<0.05). While the control group and the 1:100, 1:1000 and 1:10000 dilution presented similar values without significant difference (p>0.05). In view of the results, conclude the aroeiras methanolic extract present in your composition flavonoids and gallotanine, and galic acid derivates. Then, the aroeiras extracts is able to human gingival fibroblasts viable modulate dependent dose way.