Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / La practica prolongada fue realizada en Departamento de Microbiología de Alimentos del Instituto se Salud Pública de Chile, durante los meses de Junio a Diciembre del año 2005. Mi labor en la práctica constó de tres etapas simultáneas: La primera consistió en recibir capacitación durante todo el período de mi práctica, en detección y cuantificación de los patógenos bacterianos más frecuentes encontrados en alimentos. La segunda etapa fue implementar el último método de detección de Vibrios (principalmente Vibrio vulnificus en mi caso) según el Manual Analítico Bacteriológico (BAM) año 2004 impuesto por la Food and Drugs Administration (FDA) (1), para la cual se utilizaron cepas de diversos Vibrios tales como Vibrio vulnificus, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae, etc. Dicha labor será necesaria para actualizar los métodos de detección en los laboratorios de la red de vigilancia epidemiológica de Chile. En la otra etapa, se evaluó según el método que se estaba desarrollando la población de Vibrio vulnificus existente en Puerto Montt, ésta etapa se comenzó a trabajar a partir aproximadamente en julio ya que primero debía estar desarrollada en alguna medida la técnica de detección, además de que estuvieran los materiales necesarios para el trabajo. Las muestras analizadas son ensayos de rutina que llegan al SEREMI de Salud de la región Metropolitana para evaluar durante todo el año la población de Vibrio parahaemolyticus y Vibrio cholerae en Puerto Montt, las cuales se reciben todos los martes y consta de 5 muestras de los cuales se analizan 12 especimenes de cada una, para luego cuantificarlas por el método de tubos múltiples según la tabla de número más probable (anexo, Tabla 1). Es importante que el ISP, como centro de referencia posea información sobre todo patógeno que pueda ser encontrado en alimentos, es por eso que esta etapa culminará con la entrega del procedimiento de detección de Vibrio vulnificus al Departamento de Microbiología de Alimentos

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os probiÃticos surgiram como alternativa ao uso de antibiÃticos no controle de bactÃrias patogÃnicas. Buscando alternativas para reduzir as vibrioses surgiu a utilizaÃÃo das bactÃrias do gÃnero Bacillus como prevenÃÃo para o aparecimento de enfermidades. O objetivo principal desta pesquisa foi testar a viabilidade e eficiÃncia de bactÃrias isoladas do trato intestinal de crustÃceos saudÃveis como agentes probiÃticos no cultivo do camarÃo Litopenaeus vannamei. Foram testadas 17 cepas do gÃnero Bacillus e uma cepa do gÃnero Paenibacillus, pertencentes Ãs seguintes espÃcies: B. circulans (n=1), B. megaterium (n=1), B. subtilis (n=2), B. cereus (n=2), B. thuringiensis (n=2), Bacillus sp. (n=9) e P. agaridevorans (n=1). Foram realizados testes de atividade da tolerÃncia à temperatura, viabilidade sob diferentes concentraÃÃes de pH e tolerÃncia ao NaCl. Foi realizado o teste de susceptibilidade a antimicrobianos e da anÃlise da presenÃa ou ausÃncia de alguns fatores de virulÃncia. O teste de inibiÃÃo de patÃgenos foi feito de duas formas: atravÃs de plugs de Ãgar e por intermÃdio de estrias cruzadas (cross streak). A capacidade de agregaÃÃo foi verificada por meio do teste de aderÃncia ao vidro. O experimento in vivo foi realizado utilizando camarÃes Litopenaeus vannamei com peso mÃdio de 10 g. O delineamento experimental foi totalmente ao acaso e foram suplementados da seguinte forma: Tratamento A: controle (sem suplementaÃÃo); Tratamento B: uma cepa por aspersÃo; Tratamento C: mix bacteriano por aspersÃo; Tratamento D: uma cepa bioencapsulada em alginato de sÃdio; Tratamento E: mix bacteriano bioencapsulado em alginato de sÃdio. A alimentaÃÃo foi ofertada ad libitum trÃs vezes ao dia por 30 dias. A biometria dos animais foi feita a cada 10 dias. Passados os 30 dias de alimentaÃÃo, os camarÃes foram desafiados frente ao patÃgeno Vibrio harveyi. Foi realizada a Contagem PadrÃo em Placas (CPP) de Vibrio e Bacillus do intestino e do conteÃdo intestinal, antes e apÃs a infecÃÃo do sistema. A maioria das cepas testadas apresentaram potencial para uso como probiÃticos em carcinicultura. O peso final foi estatisticamente superior ao peso inicial para os tratamentos A, B, D e E (p<0,05). Os tratamentos que utilizaram as bactÃrias do gÃnero Bacillus apresentaram crescimento reduzido das bactÃrias do gÃnero Vibrio apÃs a infecÃÃo. Com os resultados encontrados neste trabalho à sugerida a realizaÃÃo de estudos complementares da potencialidade probiÃtica das cepas de Bacillus no controle de Vibrio, minimizando os efeitos deste patÃgeno na carcinicultura. / Probiotics have emerged as an alternative to antibiotics in the control of pathogenic bacteria. Seeking alternatives to reduce Vibrio infections comes the use of bacteria of the genus Bacillus as prevention for the onset of diseases. The main objective of the research was to test the feasibility and efficiency of bacteria isolated from the intestinal tract of healthy shellfish such as probiotic agents in the cultivation of Litopenaeus vannamei. Were tested 17 strains of the genus Bacillus and a strain of genus Paenibacillus, of the following species: B. circulans (n = 1), B. megaterium (n = 1), B. subtilis (n = 2), B. cereus ( n = 2), Bacillus thuringiensis (n = 2), Bacillus sp. (n = 9) and P. agaridevorans (n = 1). The temperature tolerance activity tests were conducted under different concentrations viability pH and tolerance to NaCl. The susceptibility testing to antibiotics and analysis of the presence or absence of some virulence factors was performed. The inhibition test was done to pathogens in two ways: using agar plugs and through cross-striations (cross streak). The aggregation ability was observed through the glass adhesion test. In vivo experiment was performed using Litopenaeus vannamei shrimp with average weight of 10 g. The experimental design was completely at random and were supplemented as follows: Treatment A: control (no supplementation); Treatment B: a strain sprinkler; Treatment C: Bacterial mix spray; Treatment D: A Strain bioencapsulated sodium alginate; Treatment E: Bacterial mix bioencapsulated sodium alginate. The feed was offered ad libitum three times a day for 30 days. Biometrics animal was taken every 10 days. After 30 days of feeding, the shrimp were challenged against the pathogen Vibrio harveyi. Standard plate count (SPC) was performed to Vibrio and Bacillus from gut and intestinal contents before and after the infection of the system. Most of the strains showed potential for use as probiotics in shrimp farming. The final weight was statistically superior to the initial weight for treatments A, B, D and E (p <0.05). The treatments of bacteria of the genus Bacillus reduced growth of bacteria of the genus Vibrio after infection. Thus, it suggested to carry out further studies of potential probiotic strains of Bacillus sp. in the control of Vibrio, minimizing the effects of this pathogen in shrimp farming.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A maioria das infecÃÃes bacterianas em camarÃes à causada por bactÃrias do gÃnero Vibrio. Essas infecÃÃes quando instaladas chegam a provocar altos Ãndices de mortalidade com perdas econÃmicas significativas nos paÃses produtores. A ocorrÃncia de bactÃrias na hemolinfa à um indicador de bacteriose generalizada. O presente estudo teve como objetivo relacionar o tempo de coagulaÃÃo com a presenÃa de Vibrio em amostras de hemolinfas de camarÃes Litopenaeus vannamei cultivados em trÃs fazendas localizadas no Estado do CearÃ, entre o perÃodo de outubro de 2005 (seco) e outubro de 2006 (chuva). Foram realizadas 18 coletas, compreendendo uma estaÃÃo chuvosa e outra de estio. Em cada coleta, foram analisados 10 exemplares de camarÃo com o tempo de cultivo variando de 60 a 120 dias. O intervalo do tempo de coagulaÃÃo da hemolinfa nas trÃs fazendas e nos dois perÃodos variou de cinco a 55 segundos, nos 51 camarÃes que portavam Vibrio e para os 129 que nÃo exibiram essa bactÃria, o intervalo foi de quatro a 57 segundos. A Contagem PadrÃo em Placas (CPP) de Vibrio das hemolinfa de 51 indÃviduos, das trÃs fazendas de cultivo e nos dois perÃodos, variou de 10 a 28.000 Unidades Formadoras de ColÃnias (UFC)/mL. Para as fazendas A, B e C os intervalos das CPPs de Vibrio, tanto no perÃodo seco, quanto no chuvoso, foram, respectivamente, 1.000 e 10 a 140; 1.000 a 28.000 e 10 a 2.000; e 110 a 1.000 e 10 a 1.605 UFC/mL na hemolinfa. Das 132 cepas isoladas das hemolinfas dos camarÃes portadores de Vibrio, foram identificadas 13 espÃcies deste gÃnero. A maior diversidade de vÃbrios nas trÃs fazendas foi detectada por ordem decrescente, B, C e A. O perÃodo chuvoso favoreceu a contaminaÃÃo das hemolinfas infectadas com Vibrio. A presenÃa da bactÃria na hemolinfa nÃo teve relaÃÃo com o seu tempo de coagulaÃÃo. / Most of the time, shrimp infection by bacteria is mainly caused by Vibrio. These kinds of infections can bring about high level of mortality with significant economic damages in shrimp-producing countries. When bacteria are located in haemolymph, it indicates a general bacterial infection The purpose of the present study is to relate coagulation time with Vibrio presence in the haemolymph of shrimps reared in three farms located in Cearà State, from October, 2005 (dry period) to October, 2006 (rainy period). In all, 18 samples were withdrawn, in each of which 10 shrimps were analyzed. The cultivation time of the experiment varied from 60 to 120 days. The intervening time of haemolymph coagulation in the farms and in both periods varied in the range of 5 - 55 seconds, in the 51 shrimps infected with Vibrio and, for the remaining ones (129) not infected, the intermission time ranged from 4 to 57 seconds. The Plate Standard Counting (PSC) of Vibrio in haemolymph referring to 51 individuals varied from 10 to 28.000 Colony-Forming Units (CUF/mL). For the farms A, B and C the intervening times of Vibrio PSC in haemolymph in the dry period were, respectively, 1,000, from 10 to 140, and from 1.000 to 28.000; for the rainy period, they varied from 10 to 2,000, from 110 to 1,000 and from 10 to 1,605 CFU/mL. Out of 132 isolated strains of the shrimp haemolymph which contained Vibrio, 13 species were identified. The highest diversity of Vibrio was observed in the following decreasing order of the farms, namely B, C and A, and also that haemolymph contamination was mostly favoured by rainfall. No relationship was found to exist between bacterian presence in the haemolymph and coagulation time.

Por ser uma atividade econÃmicamente viÃvel, o cultivo de camarÃo marinho vem crescendo em todo o mundo. O Brasil, e em particular a regiÃo Nordeste, vem sendo responsÃvel por grande parte da produÃÃo nacional do crustÃceo. Os ambientes estuarinos e de Ãgua doce sÃo reservatÃrios crÃticos para espÃcies do gÃnero Vibrio, agentes causais de bacterioses.Encontrados na microbiota dominante nos estÃgios de desenvolvimento larval dos camarÃes, essas bactÃrias podem ser isoladas tanto de animais saudÃveis como do prÃprio ambiente. Esta pesquisa teve como objetivo estudar a diversidade de espÃcies do gÃnero Vibrio em quatro estuÃrios do Estado do CearÃ. TrÃs deles apresentam atividade de carcinicultura e o quarto nÃo apresenta essa atividade, sendo usado como controle do experimento. Os pontos estudados estavam localizados nos rios: ChorÃ, Pirangi, Jaguaribe e Pacoti. Foram analisadas amostras de Ãgua e sedimento dos rios escolhidos e tambÃm do canal de captaÃÃo, do viveiro e do canal de descarga de uma fazenda de cultivo de camarÃo marinho, L. vannamei. Como resultado, foram isoladas e identificadas 138 cepas de amostras oriundas do ambiente (Ãgua e sedimento dos rios) e 25 provenientes das amostras coletadas na fazenda. As espÃcies mais freqÃentes de Vibrio identificadas nas amostras de ambiente foram: Vibrio logei, V. parahaemo/yticus, V. fIuvia/is e V. cholerae. Enquanto que, na fazenda foram: V. logei e V. cholerae. Tendo em vista que: (a) a diversidade das espÃcies do gÃnero Vibrio à muito maior nos estuÃrios do que na fazenda de carcinicultura; e (b) esta diversidade à semelhante nos estuÃrios com (Rios Pirangi, Chorà e Jaguaribe) e sem (Rio Pacoti) fazendas de cultivo, conclui-se que, aparentemente, a carcinicultura nÃo causa impacto ambiental na diversidade do gÃnero Vibrio. / As an economically viable activity, the cultivation of marine shrimp is growing worldwide. Brazil, particularly the Northeast region, has been responsible for much of the domestic production of the crustacean. The estuarine environments and freshwater tanks are critical to species of the genus Vibrio, bacterioses.Encontrados causative agents of the dominant microbiota in the development stages of larval shrimp, these bacteria can be isolated both from healthy animals and the environment itself. This research aimed to study the diversity of species of the genus Vibrio in four estuaries of the State of CearÃ. Three of them have activity of shrimp and the fourth shows no such activity and is used as the control experiment. The points studied were located in rivers: Chora, Pirangi, Jaguaribe and Package. We analyzed samples of water and sediment of rivers and also selected the channel to capture, the nursery and the channel of discharge of a farm for cultivation of marine shrimp, L. vannamei. As a result, were isolated and identified 138 strains of samples from the environment (water and sediment of rivers) and 25 samples collected from the farm. The most frequent species of Vibrio identified in the environmental samples were: Vibrio logei, V. parahaemo / yticus, V. fIuvia / s and V. cholerae. While, on the farm were: V. logei and V. cholerae. Considering that: (a) the diversity of species of the genus Vibrio is much greater in estuaries than in the shrimp farm, and (b) the diversity is similar in estuaries with (Pirangi Rios, crying and Jaguaribe) and without (Rio package) of crop farms, it is concluded that, apparently, the shrimp does not cause environmental impact in the diversity of the genus Vibrio.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / As infecÃÃes bacterianas em camarÃes sÃo causadas, freqÃentemente, por bactÃrias do gÃnero Vibrio O presente estudo teve por objetivo quantificar e identificar Vibrio na hemolinfa do camarÃo marinho Litopenaeus vannamei cultivado em fazendas no Estado do CearÃ, Brasil. Relacionou-se tambÃm o tempo de coagulaÃÃo das hemolinfas com as contagens de Vibrio. Foram realizadas 16 coletas em quatro fazendas (A, B, C e D), sendo oito para camarÃes com 4 g, e oito para camarÃes com oito gramas. As coletas foram realizadas nos perÃodos sazonais: chuvoso e estiagem. Perfazendo um total de 480 amostras, sendo 240 para camarÃes com 4 g e 8 g cada, respectivamente. Os valores da Contagem PadrÃo em Placas (CPP) de vÃbrios totais, de vÃbrios Sac+ e Sac-, nas amostras de hemolinfa dos camarÃes com 4g, no perÃodo chuvoso, variaram de: 2,74 x 104 a 28,70 x 106 UFC/mL (est.); de < 6,0 a 14,64 x 106UFC/mL e de < 6,0 a 12,72 x 106 UFC/mL, respectivamente. Para a hemolinfa dos camarÃes com 8 g os valores obtidos foram: 1,68 x 104 a 15,18 x 106 UFC/mL (est.), de < 6,0 a 1,8 x 105 UFC/mL e de < 6,0 a 15,18 x 106UFC/mL (est.), respectivamente. No perÃodo de estiagem esses valores para a hemolinfa dos camarÃes de quatro gramas, foram: 9,0 x 102 (est.) a 5,40 x 104 UFC/mL vÃbrio total; < 6,0 a 1,71 x 10&#8308;UFC/mL (Sacâ) e de < 6,0 a 5,40 x 104 UFC/mL (Sac+). Para os camarÃes com 8 g a contagem de VÃbrio total foi de 9,0 x 102 (est.) a 2,0 x 107, de < 6,0 a 4,02 x 106 UFC/mL (Sac-) e de < 6,0 a 2,0 x 10&#8311; UFC/mL (est.) (Sac +). Os resultados mostram que os Ãndices de colÃnias de Vibrio Sac- e Sac+ foram maiores no perÃodo chuvoso do que no de estiagem. NÃo houve relaÃÃo entre o tempo de coagulaÃÃo e as contagens de Vibrio na hemolinfa dos camarÃes. As espÃcies que predominaram nos perÃodos estudados foram: V. coralliilyticus, V. parahaemolyticus, Vibrio pelagius II, Vibrio alginolyticus, Vibrio mediterranei, Vibrio mimicus, Vibrio vulnificus B1. / Most of shrimp bacterial infections are caused by Vibrio bacteria genus. This study aims to quantify identify Vibrio in the hemolymph of the marine shrimp Litopenaeus vannamei cultivated in farms in State of Cear, Brazil. Related is also the time of coagulation of hemolymph with counts of Vibrio. Sixteen samples were performed on four farms (A, B, C and D), eight shrimps with 4 g, and eight with eight grams shrimps. The collections were made in seasonal periods: rainy and drought. A total of 480 samples, and 240 to shrimps with 4 g and 8 g each, respectively. The values in the Standard Plate Count (SPC) of total vibrio, Vibrio Suc+ and Suc- in the hemolymph of shrimp samples with 4 g, in the rainy season ranged from: 2. 74 x 10&#8308; to 28.70 x 10&#8310; CFU/mL (est.), <6.0 to 14.64 x 106CFU/mL and <6.0 to 12.72 x 106 CFU/mL, respectively. For hemolymph of shrimp with 8 g of the SPC and the total Vibrio Suc+ and Sucranged from 1.68 x 10&#8308; to 15.18 x 10&#8310; CFU/mL (est.), <6.0 to 1.8 x 105 CFU/mL and <6.0 to 15.18 x 106CFU/mL (est). During the period of drought for these values of shrimp haemolymph of four grams, were: 9.0 x 10Â (est.) to 5.40 x 104 CFU mL total Vibrio, <6.0 to 1.71 x 10&#8308;CFU/mL (Suc-) and <6.0 to 5.40 x 104 CFU/mL (Suc+). For shrimp with 8 g a total Vibrio count was 9.0 x 10Â (est.) CFU/mL to 2.0 x 10&#8311;, <6.0 to 4.02 x 106 CFU/mL (Suc-) and <6.0 to 2.0 x 10&#8311;CFU/mL (est.) (Suc+). The results show that the rates of colonies of Vibrio Suc- and Suc+ were higher in the rainy season than in the drought. There was no relationship between the time of coagulation and the counts of Vibrio in the hemolymph of shrimps. The species that predominated in the period were: V. coralliilyticus, V. parahaemolyticus, Vibrio pelagius II, Vibrio alginolyticus, Vibrio mediterranei, Vibrio mimicus, Vibrio vulnificus B1

Ambientes dulcícolas ocupam uma pequena parcela da superfície do planeta comparada aos ambientes marinhos e terrestres, porém são de suma importância para diversas atividades humanas e essenciais à manutenção da vida. Por estarem localizadas próximas a áreas urbanizadas passam a servir como corpos receptores de efluentes domésticos e até industriais. A cidade de Cubatão, SP, abriga um importante pólo industrial do país, sendo o rio Cubatão o corpo receptor principal de efluentes domésticos e industriais. O rio Cubatão é o principal da região e abastece quase toda a Baixada Santista juntamente com o rio Pilões. A intenção deste presente trabalho é evidenciar as fontes de contaminação do Rio Cubatão, por meio da literatura e de resultados de efeitos ecotoxicológicos (crônico e agudo) determinados em águas superficiais, utilizando os organismos Ceriodaphnia dubia e Vibro fischeri, respectivamente. Forte esforço foi aplicado a fim de quantificar os surfactantes (princípio ativo de detergentes) e outros contaminantes de interesse que permitam estabelecer a relação causa-efeito da toxicidade. Para as análises químicas e biológicas foram coletadas águas superficiais em cinco pontos do rio Cubatão, 2 pontos nos canais de Fuga da Usina Henry Borden e um ponto nos rios Pilões e Perequê. Os ensaios realizados com V. fischeri possibilitaram identificar toxicidade em todos os pontos amostrais, entre as cinco campanhas, cujos valores variaram entre CE(I)50 25,98% e 61%. Os resultados obtidos com C. dubia, tratados pelo Teste t por bioequivalência, mostraram toxicidade nos pontos P0; P1; P3; P4; P5 e P6 na terceira campanha. Na segunda e terceira campanha, os valores médios para a reprodução de C.dubia variaram entre 2,9 a 12,6 neonatas, possível efeito observado para a espécie, já que estes valores estiveram abaixo de 15 organismos, número mínimo recomendado pela ABNT NBR 13373:2004 para C.dubia. Com relação à condutividade das águas, o valor médio de 774,18 &mu;S/cm-1 foi determinado para o P5, sendo esta média significativamente maior em relação aos demais pontos, possivelmente associado a proximidade das salinas da Carbocloro S.A. Indústrias Químicas. O P5 apresentou valor médio de 74,68 mg/L para cloretos.Os valores de compostos fenólicos, na segunda e terceira campanha, variaram entre 0,05 e 3,62 mg/L, concentrações essas acima do estabelecido pelo CONAMA 357:2005, para rios de classe 1 e 2 (0,003 mg/L). Os valores médios de surfactantes aniônicos estiveram entre 0,01 e 0,04 mg/L. Embora duas substâncias tenham sido empregadas na calibração do método (LAS) e (DSS), os resultados mostraram que não há diferença significativa na quantificação de surfactantes, pelo método (MBAS methylene blue active substance - APHA, 2005) (p &le; 0,01). Em análise qualitativa foram identificados compostos aromáticos como tolueno, xileno, benzeno, etilbenzeno e diclorobenzeno, nos pontos amostrados em fevereiro de 2011. / Freshwater environments occupy a small portion of the surface compared to marine and terrestrial environments, but are critical for many activities essential to maintaining human life. By being located close to urban areas they serve as receptors bodies and even industrial effluents. The city of Cubatão, SP, houses an important industrial center in the country. Cubatão river is an important receptor of sewage and industrial effluents. It is the principal river of the region and supplies almost all of Baixada Santista with the Pilões river. The intention of this paper is to highlight the sources of contamination for Cubatão, through literature and results of ecotoxicological effects (chronic and acute) to be determined in surface water bodies using Ceriodaphnia dubia and Vibro fischeri, respectively. Strong effort was applied to quantify surfactant (active ingredient of detergents) and other contaminants of interest for determining the cause-effect relationship of toxicity. For chemical and biological analysis surface waters of the Cubatão river were collected in five points, two points in the channels of Henry Borden Plant, one on the Pilões and Perequê river. Through tests using V. fischeri toxicity was identified in all nine sampling sites, whose values ranged from EC(I)50 25.98% up to 60%. The results obtained from C. dubia , using \"t for bioequivalence\" showed toxic effects at P0, P1, P3, P4, P5 and P6 , third campaign. Dring the second and third campaign, it was obtained 2.9 to 12.6 neonates of C.dubia , numbers interpreted as chronic effects once they were quite below 15 neonates, number recommended by Brazilian environmental agencies (ABNT NBR 13373:2004). Water conductivity was much higher at P5, 774.18 &mu;S/cm-1, mean value, probably related to the salt source from Carbocloro SA Chemical Industries. Chlorides at P5 was 74.68 mg/L, confirming the last statemente. Phenolic compounds varied from 0.05 to 3.62 mg/L, which is above the recommended by CONAMA 357:2005 (0,003 mg/L). Anionic surfactants varied from 0,01 to 0,04 mg/L. Although using two substances for internal method calibration (LAS) e (DSS), no statistically diference was obtained (p &le; 0,01) (MBAS methylene blue active substance - APHA, 2005). Quantitative analysis reveled the following aromatic substances: toluene, xilene, benzene, ethylbenzene and dichlorobenzene, during February 2011 samplings.

Com o objetivo de avaliar a presença de Vibrio parahaemolyticus em atum, foram coletadas 112 amostras, sendo 56 durante o inverno de 2003 (junho a julho) e 56, durante o verão de 2003-2004 (dezembro a janeiro), vendidos em diversos pontos comerciais da zona sul da cidade de São Paulo. Foi determinado o Número Mais Provável (NMP) de Vibrio parahaemolyticus, comparando a contaminação observada durante os dois períodos. As cepas foram estudadas quanto à produção de urease, ao fenômeno de Kanagawa e à sensibilidade a antibióticos. Apenas 2,68% das amostras foram positivas (3/112). Dessas, duas amostras foram coletadas no verão e uma, no inverno. A amostra positiva obtida no inverno apresentou 3 NMP/g, as outras duas, coletadas durante o verão, apresentaram respectivamente, 3 e 4 NMP/g. Todas as cepas isoladas de Vibrio parahaemolyticus foram negativas ao teste de Kanagawa e não produtoras de Urease, não apresentando nenhuma característica patogênica. Todas as cepas foram resistentes a ampicilina, eritromicina, estreptomicina penicilina G, polimixina B e vancomicina. Apresentaram susceptibilidade intermediária a ciprofloxacina, kanamicina e gentamicina, e sensibilidade a ácido nalixídico, cloranfenicol e tetraciclina. Conclui-se que, nas condições desse estudo, o sashimi de atum revelou-se um alimento de baixo risco ao consumidor, no que se refere a infecção (toxigênica) por Vibrio parahaemolyticus / In order to evaluate the presence of Vibrio parahaemolyticus in tuna traded in retail stores in the south region of the city of São Paulo, 112 samples were collected, 56 during the winter of 2003 (June and July) and 56, during the summer of 2003-2004 (December to January). Most probable number (MPN) of Vibrio parahaemolyticus was determined, comparing the contamination level observed in the two periods. Strains were analyzed in relation to urease production, Kanagawa phenomenon and sensitivity to antibiotics. Only 2.68% of the samples were positive (3/112), two of them collected in the summer, and one of them, in the winter. The positive sample obtained in the winter presented 3 NMP/g, and the other two samples, collected in the summer, presented 3 and 4 NMP/g, respectively. All Vibrio parahaemolyticus samples isolated were Kanagawa, urease negative. Therefore, they did not present any pathogenic characteristic. All strains were resistant to ampicillin, erythromycin, streptomycin, penicillin G, polymyxin B and vancomycin. They presented intermediate susceptibility to ciprofloxacin, kanamycin and gentamicin, and sensitivity to nalidixic acid, chloramphenicol and tetracycline. It may be concluded that, in the conditions of this study, tuna sashimi is considered low risk food in relation to toxigenic infection by Vibrio parahaemolyticus

Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus son microorganismos patógenos pertenecientes a la familia Vibrionaceae y al género Vibrio. Son microorganismos con morfología ligeramente curvada, gram negativos y oxidasa positivos. En cuanto a sus aspectos ecológicos son halófilos, por tanto suelen estar presentes en aguas marinas costeras y en el interior de moluscos, crustáceos y peces, y tienden a encontrarse en aguas cálidas. La patología que producen está asociada al consumo de mariscos, moluscos y pescado crudo o poco cocinado y a la exposición a aguas contaminadas. Ambas especies son consideradas patógenos emergentes debido al aumento en su incidencia y a la mayor distribución geográfica de los casos de intoxicación alimentaria, sobre todo en países asiáticos. La detección e identificación de ambas especies en alimentos de origen marino y agua, presenta gran dificultad, ya que los procedimientos convencionales son largos y tediosos, y pueden proporcionar falsos negativos. Los métodos de detección molecular pueden suponer una alternativa más rápida, sensible y fiable. Objetivos: Debido a esto, en este trabajo se han desarrollado métodos de detección y cuantificación de Vibrio spp., Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus mediante PCR tradicional, PCR a tiempo real e hibridación in situ con sondas fluorescentes (FISH) para su aplicación en matrices alimentarias y en agua. En este estudio se han aplicado los distintos métodos a matrices ambientales (agua de playa y agua residual) y a alimentos de origen marino. Resultados: Los resultados muestran que la PCR a tiempo real es el método más rápido y sensible para la detección de las diferentes especies estudiadas, además de permitir la cuantificación del microorganismo en las muestras de forma fiable. En este trabajo hemos demostrado la presencia de bacterias del género Vibrio en ambos tipos de matrices y el potencial de aguas y alimentos de origen marino para actuar como vehículos de transmisión de V. parahaemolyticus y V. vulnificus / Cañigral Cárcel, I. (2011). Desarrollo de métodos moleculares para la detección y caracterización de bacterias patógenas emergentes del género Vibrio en aguas y alimentos [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/11799 / Palancia

Les petits ARN régulateurs bactériens, généralement de 50 à 300 nt de long, agissent en appariant les bases avec des cibles d'ARNm spécifiques, affectant ainsi leur traduction et/ou leur stabilité, sont des éléments importants qui régulent divers processus. V. tasmaniensis LGP32 est un pathogène de l'huître facultatif. Un ARNs Vsr217 s'est révélé être conservé dans les vibrions et fortement régulé à la hausse lors de l'infection des huîtres. J'ai trouvé que vsr217 et le gène en aval malK (codant pour une sous-unité du transporteur principal de maltose) sont tous deux exprimés à partir d'un promoteur en amont régulé par l'activateur de maltose MalT, Vsr217 étant généré à partir de la longue 5' UTR de l'ARNm de malK. Outre un effet cis sur l’expression du malK, qui diminue chez le mutant Δvsr217, nous avons constaté que l’absence de cet ARNs entraînait, lors de la croissance de cellules dans du maltose, l’augmentation de deux enzymes importantes impliquées dans la voie de la glycolyse/néoglucogenèse, Fbp et PpsA et cet ARNm de fbp étaient une cible directe de Vsr217. J'ai également exploré la régulation de la biosynthèse des acides aminés à chaîne ramifiée (BCAA: Leucine, Valine et Isoleucine) chez V. alginolyticus, un agent pathogène des poissons et mollusques et des poissons de mer et un agent pathogène humain émergent opportuniste. Nous avons constaté que l'opéron ilvGMEDA (codant la voie principale pour la biosynthèse des BCAAs) est régulé par un peptide leader traduit. Ainsi, la traduction d'un peptide riche en BCAA codé en amont des gènes de structure fournit une réponse adaptative par un mécanisme similaire au modèle canonique de E. coli. Cette étude portant sur un organisme non modèle à Gram-négatif met en évidence la conservation mécanistique de l'atténuation de la transcription malgré l'absence de conservation de la séquence primaire. / Bacterial regulatory small RNAs, usually 50-300 nt long, act by base-pairing with specific mRNA targets, affecting their translation and/or stability, are important elements which regulate a variety of processes. V. tasmaniensis LGP32 is a facultative oyster pathogen. A sRNA Vsr217 was found to be conserved within vibrios and highly upregulated during oyster infection. I found that vsr217 and the downstream gene malK (encoding a subunit of the major maltose transporter) are both expressed from an upstream promoter regulated by the maltose activator MalT with Vsr217 being generated from the long 5' UTR of the malK mRNA. Beside a cis-effect on malK expression, which decreases in the Δvsr217 mutant, we found that the absence of this sRNA resulted, when cells grown in maltose, in the increase of two important enzymes involved in the glycolysis/neoglucogenesis pathway, Fbp and PpsA and that fbp mRNA was a direct target of Vsr217. I also explored the regulation of the biosynthesis of branched-chain amino acids (BCAAs: Leucine, Valine and Isoleucine) in V. alginolyticus, a marine fish and shellfish pathogen and an emerging opportunistic human pathogen. We found that the ilvGMEDA operon (encoding the main pathway for biosynthesis of BCAAs) is regulated by a translated leader peptide. Thus, the translation of a BCAA rich peptide encoded upstream of the structural genes provides an adaptive response by a mechanism similar to the E. coli canonical model. This study with a non-model Gram-negative organism highlights the mechanistic conservation of transcription attenuation despite the absence of primary sequence conservation.

The objective of this project was to examine the effects of various storage temperatures and times on the microbiological quality, safety, and viability of hard shelled quahog clams. Samples were stored at four different incubation temperatures (3.3, 7.2, 10.0, and 12.S0C) for a period of three weeks, following their harvest from growing waters during the summer when the water temperatures were ~ SO°F, and during the winter when water temperatures were ~ 40°F. With regards to safety, clams were analyzed for two naturally-occurring pathogens, Vihrio parahaemolyticus and Vihrio vulnificus. Aerobic plate counts (APCs), coliforms, and fecal coliforms were determined to define the level of quality. During the summer, mesophilic APCs containing 2% NaCI ranged from 104 to 108 CFU/g, and during the winter, mesophilic APCs with salt ranged from < 100 ESPC to 104 CFU/g. Comparatively, during the summer, mesophilic APCs containing no added NaCI ranged from < 100 ESPC to 105 CFU/g, and during the winter, APCs without salt ranged from < 100 ESPC to 102 CFU/g. Coliform and fecal coliform counts ranged from < 0.3 to 61.1 MPN/g and < 0.3 to 24.4 MPN/g, respectively. During the summer, V. parahaemolyticus was isolated from 56% of the samples, with the highest concentration, 24,000 MPN/g, occurring on day 12 at 12.8°C. / Master of Science