Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 73.pdf: 645663 bytes, checksum: 1fdb98e2621023f13d0c6a16004b1cbd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A segurança e a eficácia da imunoterapia antienvenenamento ofídico estão intimamente relacionadas à pureza e a uma cuidadosa determinação da potência do soro (atividade biológica). A metodologia atualmente utilizada apresenta importantes limitações, as quais este trabalho objetiva contribuir. A mesma é adotada como oficial pela Farmacopéia Brasileira, tendo sido preconizada em 1996 pela Portaria nº 174/MS. Observações preliminares deste estudo identificaram, principalmente, um alto índice de invalidação de ensaios e uma baixa repetibilidade e reprodutibilidade, representado por diferenças significativas no ensaio de potência nos resultados obtidos pelo INCQS e pelos laboratórios produtores, enfatizando a necessidade de aperfeiçoar a metodologia analítica para a determinação da potência do soro antibotrópico. De acordo com as recomendações do Workshop on the Standardization and Control of Antivenoms , coordenado pela Quality Assurance and Safety of Biologicals Unit da OMS em 2001, o estabelecimento de venenos e antivenenos de referência é essencial para a padronização destes ensaios e para permitir a comparação lote a lote, assim como a comparação entre laboratórios. Neste trabalho, apresentamos os resultados de um estudo interlaboratorial para o estabelecimento de veneno e antiveneno botrópico de referência, visando o aperfeiçoamento do controle da qualidade dos soros antibotrópicos, com ênfase na metodologia analítica para a determinação da potência, com a participação de todos os laboratórios brasileiros produtores de soro antibotrópico. Este estudo foi realizado em duas etapas. A primeira compreendeu a reavaliação da potência do lote nº 05 do Veneno Botrópico de Referência BRA/BOT/05, a avaliação da potência do candidato a Soro Antibotrópico de Referência Nacional BRA/ANTIBOT/01, e a avaliação da aplicabilidade de um controle da dose desafio de veneno referente a cinco vezes o valor de dose letal média (5 DL50). / A segurança e a eficácia da imunoterapia antienvenenamento ofídico estão intimamente relacionadas à pureza e a uma cuidadosa determinação da potência do soro (atividade biológica). A metodologia atualmente utilizada apresenta importantes limitações, as quais este trabalho objetiva contribuir. A mesma é adotada como oficial pela Farmacopéia Brasileira, tendo sido preconizada em 1996 pela Portaria nº 174/MS. Observações preliminares deste estudo identificaram, principalmente, um alto índice de invalidação de ensaios e uma baixa repetibilidade e reprodutibilidade, representado por diferenças significativas no ensaio de potência nos resultados obtidos pelo INCQS e pelos laboratórios produtores, enfatizando a necessidade de aperfeiçoar a metodologia analítica para a determinação da potência do soro antibotrópico. De acordo com as recomendações do “Workshop on the Standardization and Control of Antivenoms”, coordenado pela “Quality Assurance and Safety of Biologicals Unit” da OMS em 2001, o estabelecimento de venenos e antivenenos de referência é essencial para a padronização destes ensaios e para permitir a comparação lote a lote, assim como a comparação entre laboratórios. Neste trabalho, apresentamos os resultados de um estudo interlaboratorial para o estabelecimento de veneno e antiveneno botrópico de referência, visando o aperfeiçoamento do controle da qualidade dos soros antibotrópicos, com ênfase na metodologia analítica para a determinação da potência, com a participação de todos os laboratórios brasileiros produtores de soro antibotrópico. Este estudo foi realizado em duas etapas. A primeira compreendeu a reavaliação da potência do lote nº 05 do Veneno Botrópico de Referência BRA/BOT/05, a avaliação da potência do candidato a Soro Antibotrópico de Referência Nacional BRA/ANTIBOT/01, e a avaliação da aplicabilidade de um controle da dose desafio de veneno referente a cinco vezes o valor de dose letal média (5 DL50). A segunda etapa compreenderá a comparação da metodologia de determinação da potência do Soro Antibotrópico pela determinação da Dose Efetiva Média – DE50 (Potência Absoluta) com a metodologia da Potência Relativa frente ao Soro Antibotrópico de Referência, através da determinação da potência de amostras codificadas. Esta monografia, entretanto irá tratar apenas do estabelecimento do veneno e antiveneno de referência. Os resultados obtidos permitiram a avaliação das precisões intraensaios, interensaios e interlaboratorial, a freqüência de ensaios inválidos assim como as diferentes interpretações dos laboratórios, INCQS e produtores nacionais à monografia do Soro Antibotrópico da Farmacopéia Brasileira.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 94.pdf: 738482 bytes, checksum: 667de0856e030e189a750c7b2df0e974 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O gênero Enterococcus inclui aproximadamente 30 espécies, algumas das quais muito freqüentemente envolvidas com alimentos e ambientes relacionados, e cuja diferenciação com identificação precisa torna-se muitas vezes problemático, quando estas questões baseiam-se apenas em características fenotípicas que, mesmo assim, permitem separar estes microrganismos em cinco grupos fisiologicamente diferentes. A dificuldade para categorizar inequivocamente as espécies dos enterococos com base somente nas características bioquímicas pode estar relacionado com uma heterogeneidade bastante alta dos aspectos fenotípicos, independentemente da origem dos isolados, devendo ainda ser considerado o fato de haver bastante similaridade das exigências nutricionais entre os enterococos e outras bactérias ácido lácticas. Por estas razões as técnicas moleculares tornaram-se um importante instrumento para caracterização destes microrganismos. Dentre estas, aquelas que se baseiam no uso do 16S rRNA como molécula alvo têm sido consideradas como excelentes opções com propósitos de identificação. A técnica PCR/RFLP fundamenta-se em uma metodologia baseada na amplificação por PCR e nos perfis de restrição obtidos após o uso de enzimas selecionadas com base na sua habilidade de revelar polimorfismo nos fragmentos de DNA ou RNA analisados. Este trabalho tem como objetivo implantar a técnica da PCR/RFLP com as enzimas DdeI, HaeIII e HinfI associada a alguns testes bioquímicos para uma identificação de Enterococcus spp. isolados de amostras de queijo Minas tipo frescal. / O gênero Enterococcus inclui aproximadamente 30 espécies, algumas das quais muito freqüentemente envolvidas com alimentos e ambientes relacionados, e cuja diferenciação com identificação precisa torna-se muitas vezes problemático, quando estas questões baseiam-se apenas em características fenotípicas que, mesmo assim, permitem separar estes microrganismos em cinco grupos fisiologicamente diferentes. A dificuldade para categorizar inequivocamente as espécies dos enterococos com base somente nas características bioquímicas pode estar relacionado com uma heterogeneidade bastante alta dos aspectos fenotípicos, independentemente da origem dos isolados, devendo ainda ser considerado o fato de haver bastante similaridade das exigências nutricionais entre os enterococos e outras bactérias ácido lácticas. Por estas razões as técnicas moleculares tornaram-se um importante instrumento para caracterização destes microrganismos. Dentre estas, aquelas que se baseiam no uso do 16S rRNA como molécula alvo têm sido consideradas como excelentes opções com propósitos de identificação. A técnica PCR/RFLP fundamenta-se em uma metodologia baseada na amplificação por PCR e nos perfis de restrição obtidos após o uso de enzimas selecionadas com base na sua habilidade de revelar polimorfismo nos fragmentos de DNA ou RNA analisados. Este trabalho tem como objetivo implantar a técnica da PCR/RFLP com as enzimas DdeI, HaeIII e HinfI associada a alguns testes bioquímicos para uma identificação de Enterococcus spp. isolados de amostras de queijo Minas tipo frescal. Vinte e uma espécies de referência do gênero Enterococcus foram utilizadas para o estabelecimento dos perfis de restrição. Cinquenta e quatro isolados de leite e frango que apresentaram perfis fenotípicos típicos, atípicos e alguns sem identificação quanto à espécie estocados em nosso laboratório foram utilizados para testar a técnica desenvolvida e 21 isolados provenientes do queijo Minas tipo frescal foram utilizados para confirmar a utilidade da técnica. Ao utilizarmos a técnica PCR/RFLP obtivemos 5 perfis de restrição diferentes e, quando associados alguns testes bioquímicos, foi possível obter uma identificação rápida e precisa da maioria das espécies de Enterococcus.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 83.pdf: 256885 bytes, checksum: 4b5cf6cf47570e788eabf552e485d5ef (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Uma das medidas adotadas para prevenção da disseminação dos microorganismos em hospitais é a utilização de saneantes para a desinfecção de artigos médicos, mobiliário, pisos, paredes de ambientes hospitalares. Este trabalho teve como objetivos a identificação e o estudo dos Relatórios Técnicos dos saneantes com ação antimicrobiana, de uso hospitalar, que obtiveram registros nos anos de 2004 e 2005. Verificou-se o atendimento às exigências legais e a qualidade das informações para o cumprimento das ações analíticas sanitárias pelos laboratórios que compõe o Sistema Nacional de Vigilância Sanitária. Para realização deste estudo foi elaborada uma ficha de coleta de dados, composta de itens contemplados nas legislações e outros necessários para realização de análises físico-químicas na avaliação do risco sanitário. O estudo dos relatórios desta categoria de produtos permitiu conhecer as formulações mais recentemente registradas, identificando, principalmente, os princípios ativos utilizados, a existência ou não de dados importantes para a realização das análises, além da identificação das substâncias cujas metodologias analíticas precisarão ser desenvolvidas pelo Setor de Saneantes do Departamento de Química. Os dados obtidos poderão ser empregados para a melhoria na elaboração dos relatórios técnicos apresentados pelo fabricante quando do registro dos produtos. / Uma das medidas adotadas para prevenção da disseminação dos microorganismos em hospitais é a utilização de saneantes para a desinfecção de artigos médicos, mobiliário, pisos, paredes de ambientes hospitalares. Este trabalho teve como objetivos a identificação e o estudo dos Relatórios Técnicos dos saneantes com ação antimicrobiana, de uso hospitalar, que obtiveram registros nos anos de 2004 e 2005. Verificou-se o atendimento às exigências legais e a qualidade das informações para o cumprimento das ações analíticas sanitárias pelos laboratórios que compõe o Sistema Nacional de Vigilância Sanitária. Para realização deste estudo foi elaborada uma ficha de coleta de dados, composta de itens contemplados nas legislações e outros necessários para realização de análises físico-químicas na avaliação do risco sanitário. O estudo dos relatórios desta categoria de produtos permitiu conhecer as formulações mais recentemente registradas, identificando, principalmente, os princípios ativos utilizados, a existência ou não de dados importantes para a realização das análises, além da identificação das substâncias cujas metodologias analíticas precisarão ser desenvolvidas pelo Setor de Saneantes do Departamento de Química. Os dados obtidos poderão ser empregados para a melhoria na elaboração dos relatórios técnicos apresentados pelo fabricante quando do registro dos produtos.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 45.pdf: 1382627 bytes, checksum: 825bdcaf635b617488f01f38eaba1085 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes... / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes. Além disso, o número absoluto das subpopulações de células CD4+, CD8+ e B B220+ foi maior para os grupos tratados com os sensibilizantes. Um aumento nas subpopulações CD4+CD25+ e CD4+CD69+ foi observado principalmente para substâncias sensibilizantes. Uma quantidade de TNF-α 4 vezes maior foi encontrada no soro dos animais tratados com os sensibilizantes, quando comparados aos grupos tratados com o controle. Nenhuma diferença foi vista nos estudos histopatológicos das orelhas dos animais. Com os resultados obtidos foi possível concluir que: a padronização do LLNA foi possível; o CD25 foi o mais promissor dentre os estudados na tentativa de avaliar uma alternativa ao desfecho de proliferação; a subpopulação de células CD8+ parece ter uma função prioritária na DCA; a citocina TNF-α poderia ser uma forte candidata para identificação de substâncias sensibilizantes e a histopatologia de animais não parecer uma boa alternativa.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 55.pdf: 1161666 bytes, checksum: 3ce55ce3ee2bf0d0668d0a96bd60e27c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A família dos interferons (IFNs) compreende um grupo de citocinas secretadas por todas as células nucleadas presentes em mamíferos, conhecidas pelas suas atividades antivirais, antiproliferativas e imunomoduladoras. Com o advento da tecnologia de DNA recombinante, tornou-se possível a produção e o isolamento de grandes quantidades de IFNs, os quais vêm sendo utilizados clinicamente no tratamento de diversas enfermidades, como a hepatite C. Ao mesmo tempo, tem ocorrido uma crescente demanda no controle da qualidade destes biofármacos. Neste trabalho, estudamos a atividade biológica do IFN alfa-2b em linhagem de células Hep-2C para aplicação em ensaios de potência. Foi padronizado um ensaio antiviral para determinação de potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo, no entanto vimos que a atividade antiproliferativa causada pelo IFN alfa-2b em células Hep-2C impacta negativamente na análise final dos dados. Ao considerar a via de transdução intracelular estimulada pelos IFNs, vimos mediante citometria de fluxo, que em células Hep-2C existe dose-dependência entre a ocorrência de intermediários fosforilados (pSTAT1) e a dose de IFN alfa-2b (entre 35,25 e 1000 UI/ml) empregada na estimulação destas células. Em seu conjunto, mostramos nesta tese que o ensaio de redução do efeito citopático viral para determinação da potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo é informativo, porém vários aspectos devem ser considerados para minimizar prejuízos na análise final de dados. Ainda, sugerimos que a aplicação da citometria de fluxo na determinação de intermediários fosforilados em células Hep-2C seja bastante promissor no desenvolvimento de novos ensaios biológicos para a determinação de potência relativa do IFN alfa-2b. / A família dos interferons (IFNs) compreende um grupo de citocinas secretadas por todas as células nucleadas presentes em mamíferos, conhecidas pelas suas atividades antivirais, antiproliferativas e imunomoduladoras. Com o advento da tecnologia de DNA recombinante, tornou-se possível a produção e o isolamento de grandes quantidades de IFNs, os quais vêm sendo utilizados clinicamente no tratamento de diversas enfermidades, como a hepatite C. Ao mesmo tempo, tem ocorrido uma crescente demanda no controle da qualidade destes biofármacos. Neste trabalho, estudamos a atividade biológica do IFN alfa-2b em linhagem de células Hep-2C para aplicação em ensaios de potência. Foi padronizado um ensaio antiviral para determinação de potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo, no entanto vimos que a atividade antiproliferativa causada pelo IFN alfa-2b em células Hep-2C impacta negativamente na análise final dos dados. Ao considerar a via de transdução intracelular estimulada pelos IFNs, vimos mediante citometria de fluxo, que em células Hep-2C existe dose-dependência entre a ocorrência de intermediários fosforilados (pSTAT1) e a dose de IFN alfa-2b (entre 35,25 e 1000 UI/ml) empregada na estimulação destas células. Em seu conjunto, mostramos nesta tese que o ensaio de redução do efeito citopático viral para determinação da potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo é informativo, porém vários aspectos devem ser considerados para minimizar prejuízos na análise final de dados. Ainda, sugerimos que a aplicação da citometria de fluxo na determinação de intermediários fosforilados em células Hep-2C seja bastante promissor no desenvolvimento de novos ensaios biológicos para a determinação de potência relativa do IFN alfa-2b.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 1389389 bytes, checksum: 79ab5a32cd4a782ac19d9bd08bfa4066 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. As amostras em solução foram submetidas à digestão com tripsina, levadas ao espectrômetro de massa MALDI-TOF, onde seus fragmentos trípticos foram identificados segundo a correlação entre os resultados encontrados a partir das amostras e do padrão de INF-α2 da Farmacopéia Européia submetido aos mesmos procedimentos. As coberturas de seqüência atingida no padrão foram de 72,7 % e para as amostras de 45,5 %. No produto comercial foi identificada uma ponte disulfeto. Esse trabalho fornece dados importantes que subsidiam o estabelecimento de um protocolo para a análise de INF-α2b em produto final, que poderia substituir o mapa de peptídeos tradicional por cromatografia líquida, com a vantagem de resultar em um maior número de informações sobre a estrutura molecular do biofármaco, importante para a ação farmacológica. Portanto, implementar o controle de qualidade e caracterização estrutural com a introdução de metodologias analíticas sensíveis de maneira que tenhamos informação acerca da segurança, qualidade e eficácia do biofármaco para o devido suporte para as ações de Vigilância Sanitária.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 46.pdf: 1731488 bytes, checksum: e102af3d41575936ba17db558854d0cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Uma pesquisa foi realizada para testar a aplicação de ferramentas de garantia da qualidade em ensaios de potência da vacina oral contra poliomielite (OPV) e testar novas abordagens para validação de métodos analíticos, levando em conta a maior variabilidade de ensaios biológicos, com a finalidade de traçar o perfil deste ensaio. Foram adotadas duas abordagens para a validação do ensaio: a abordagem Clássica da "International Conference on Harmonization" aplicada aos ensaios biológicos de acordo com as recomendações descritas pela comissão da "Societé Française des Sciences et Techniques Pharmaceutiques" (SFSTP) e a abordagem do Conceito do Erro Total seguindo as recomendações da para esta abordagem também da SFSTP. As principais características avaliadas no estudo de validação, por se tratar de um ensaio quantitativo, foram a Exatidão e a Precisão. O Cpk, um índice gerencial de capacidade de processos, foi calculado para avaliar a capacidade do ensaio de potência e a adequação à regra 4-6-20 foi avaliada. Para cada componente viral da OPV, gráficos de controle da diferença entre os resultados dos dois laboratórios foram utilizados para detectar tendências não aleatórias nos resultados e a média das variâncias entre os resultados obtidos em cada laboratório, por amostra, foram utilizada para calcular o coeficiente de variação geométrico % geral em uma abordagem prática para determinar a reprodutibilidade do ensaio. O ensaio foi considerado Exato e Preciso nas duas abordagens de validação. / Uma pesquisa foi realizada para testar a aplicação de ferramentas de garantia da qualidade em ensaios de potência da vacina oral contra poliomielite (OPV) e testar novas abordagens para validação de métodos analíticos, levando em conta a maior variabilidade de ensaios biológicos, com a finalidade de traçar o perfil deste ensaio. Foram adotadas duas abordagens para a validação do ensaio: a abordagem Clássica da "International Conference on Harmonization" aplicada aos ensaios biológicos de acordo com as recomendações descritas pela comissão da "Societé Française des Sciences et Techniques Pharmaceutiques" (SFSTP) e a abordagem do Conceito do Erro Total seguindo as recomendações da para esta abordagem também da SFSTP. As principais características avaliadas no estudo de validação, por se tratar de um ensaio quantitativo, foram a Exatidão e a Precisão. O Cpk, um índice gerencial de capacidade de processos, foi calculado para avaliar a capacidade do ensaio de potência e a adequação à regra 4-6-20 foi avaliada. Para cada componente viral da OPV, gráficos de controle da diferença entre os resultados dos dois laboratórios foram utilizados para detectar tendências não aleatórias nos resultados e a média das variâncias entre os resultados obtidos em cada laboratório, por amostra, foram utilizada para calcular o coeficiente de variação geométrico % geral em uma abordagem prática para determinar a reprodutibilidade do ensaio. O ensaio foi considerado Exato e Preciso nas duas abordagens de validação.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 81.pdf: 872019 bytes, checksum: b8e894b7b58911018e4a590c0266cbe1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A bactéria Haemophilus da espécie influenzae, pode causar no homem diversas infecções, invasivas ou não. O H. influenzae do tipo b (Hib), antes da introdução da vacina conjugada contra Hib, associava-se a infecções como epiglotite, artrite séptica, bacteriemia, pneumonia septicemia e meningite, principalmente em crianças. As outras espécies tipáveis (a,c,d,e,f) e não tipáveis estavam associadas a infecções do trato respiratório adquiridas na comunidade. Após a introdução dessa vacina, houve redução expressiva das doenças causadas pelo Hib em diversas partes do mundo, inclusive no Brasil. Atualmente, outros tipos da espécie H. influenzae (Hi) que não o Hib estão sendo isoladas não somente em crianças, causando infecções graves. O ressurgimento de casos por Hib, em crianças vacinadas, tem sido reportado como possível falha vacinal. Esses fatos preocupam a Saúde Pública no mundo, demonstrando que mudanças epidemiológicas podem estar ocorrendo devido à seleção de cepas após a introdução da vacina. Neste estudo, mudanças genéticas na região capsular do Hi foram encontradas em cepas isoladas nos períodos pré e pós-vacinal de três estados brasileiros. Através do estudo de susceptibilidade foram encontradas cepas produtoras de β-lactamase (BLA+) e não produtoras resistentes a ampicilina (BLNAR). A análise de redução da susceptibilidade às quinolonas foi avaliada utilizando-se o ácido nalidíxico como marcador, confrontando-se a resistência deste antibiótico com os marcadores moleculares das regiões determinantes de resistência a quinolonas (QRDRs) através do sequenciamento dos genes gyrA e parC que codificam a síntese das proteínas GyrA e ParC. Os resultados obtidos demonstraram que o ácido nalidíxico é o antibiótico mais indicado desse grupo para detectar a redução da sensibilidade. / A bactéria Haemophilus da espécie influenzae, pode causar no homem diversas infecções, invasivas ou não. O H. influenzae do tipo b (Hib), antes da introdução da vacina conjugada contra Hib, associava-se a infecções como epiglotite, artrite séptica, bacteriemia, pneumonia septicemia e meningite, principalmente em crianças. As outras espécies tipáveis (a,c,d,e,f) e não tipáveis estavam associadas a infecções do trato respiratório adquiridas na comunidade. Após a introdução dessa vacina, houve redução expressiva das doenças causadas pelo Hib em diversas partes do mundo, inclusive no Brasil. Atualmente, outros tipos da espécie H. influenzae (Hi) que não o Hib estão sendo isoladas não somente em crianças, causando infecções graves. O ressurgimento de casos por Hib, em crianças vacinadas, tem sido reportado como possível falha vacinal. Esses fatos preocupam a Saúde Pública no mundo, demonstrando que mudanças epidemiológicas podem estar ocorrendo devido à seleção de cepas após a introdução da vacina. Neste estudo, mudanças genéticas na região capsular do Hi foram encontradas em cepas isoladas nos períodos pré e pós-vacinal de três estados brasileiros. Através do estudo de susceptibilidade foram encontradas cepas produtoras de β-lactamase (BLA+) e não produtoras resistentes a ampicilina (BLNAR). A análise de redução da susceptibilidade às quinolonas foi avaliada utilizando-se o ácido nalidíxico como marcador, confrontando-se a resistência deste antibiótico com os marcadores moleculares das regiões determinantes de resistência a quinolonas (QRDRs) através do sequenciamento dos genes gyrA e parC que codificam a síntese das proteínas GyrA e ParC. Os resultados obtidos demonstraram que o ácido nalidíxico é o antibiótico mais indicado desse grupo para detectar a redução da sensibilidade. O presente estudo mostra a necessidade de que os laboratórios de rotina e de pesquisa avaliem e desenvolvam métodos simples e rápidos, capazes de indicar as possíveis mudanças capsulares e o surgimento de cepas resistentes auxiliando a Vigilância Epidemiológica e a Vigilância Sanitária.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 76.pdf: 1337746 bytes, checksum: c97b92460d1afa99fa7e64e58c7a94a9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A disponibilidade de água potável e segura é um direito e uma condição indispensável para vida, garantidos pela Constituição Federal e pelo Sistema Único de Saúde (SUS). Em sua tabela 3, a Portaria 518/2004 - MS apresenta o padrão de potabilidade para substâncias químicas que representam risco à saúde e estabelece os valores máximos permitidos (VMP) em água para consumo humano para uma série de agrotóxicos, em sua maioria substâncias organocloradas. No entanto, somente a água distribuída pela rede geral de abastecimento tem a sua qualidade avaliada através do monitoramento realizado pelas companhias distribuidoras em seus laboratórios. O monitoramento da água das soluções alternativas apresenta uma dificuldade peculiar, pois muitas vezes não há um responsável ao qual possa ser formalmente imputado o controle da qualidade da água fornecida. No sentido de atender a necessidade de monitoramento da água das soluções alternativas, o objetivo principal deste trabalho foi a validação e a implementação de um método para análise de agrotóxicos organoclorados em água potável no Laboratório Central Noel Nutels/Rio de Janeiro visando o menor custo, menor tempo de execução, e menor geração de resíduos. O método escolhido foi a microextração líquido-líquido dispersiva (MELLD), onde uma mistura de solvente de extração, mais denso e imiscível no meio aquoso, com um solvente de dispersão miscível em ambos, é rapidamente injetada na amostra aquosa por meio de uma seringa. A análise instrumental foi efetuada por cromatografia à gás com detecção por captura de elétrons. O método foi validado para 12 agrotóxicos sendo: 4,4 -DDT, 2,4 -DDT, alfa-endossulfam, beta-endossulfam, alfa-HCH, beta-HCH, gama-HCH, delta-HCH, endrin, hexaclorobenzeno, metoxicloro e trifuralina. Os parâmetros de validação verificados encontraram-se todos dentro das faixas exigidas pelas normas em vigor. / A disponibilidade de água potável e segura é um direito e uma condição indispensável para vida, garantidos pela Constituição Federal e pelo Sistema Único de Saúde (SUS). Em sua tabela 3, a Portaria 518/2004 - MS apresenta o padrão de potabilidade para substâncias químicas que representam risco à saúde e estabelece os valores máximos permitidos (VMP) em água para consumo humano para uma série de agrotóxicos, em sua maioria substâncias organocloradas. No entanto, somente a água distribuída pela rede geral de abastecimento tem a sua qualidade avaliada através do monitoramento realizado pelas companhias distribuidoras em seus laboratórios. O monitoramento da água das soluções alternativas apresenta uma dificuldade peculiar, pois muitas vezes não há um responsável ao qual possa ser formalmente imputado o controle da qualidade da água fornecida. No sentido de atender a necessidade de monitoramento da água das soluções alternativas, o objetivo principal deste trabalho foi a validação e a implementação de um método para análise de agrotóxicos organoclorados em água potável no Laboratório Central Noel Nutels/Rio de Janeiro visando o menor custo, menor tempo de execução, e menor geração de resíduos. O método escolhido foi a microextração líquido-líquido dispersiva (MELLD), onde uma mistura de solvente de extração, mais denso e imiscível no meio aquoso, com um solvente de dispersão miscível em ambos, é rapidamente injetada na amostra aquosa por meio de uma seringa. A análise instrumental foi efetuada por cromatografia à gás com detecção por captura de elétrons. O método foi validado para 12 agrotóxicos sendo: 4,4’-DDT, 2,4’-DDT, alfa-endossulfam, beta-endossulfam, alfa-HCH, beta-HCH, gama-HCH, delta-HCH, endrin, hexaclorobenzeno, metoxicloro e trifuralina. Os parâmetros de validação verificados encontraram-se todos dentro das faixas exigidas pelas normas em vigor. O teste com duas misturas de solvente de extração revelou que a mistura tetracloroetileno/acetona apresentou os melhores resultados em comparação com a de clorobenzeno/acetona. A análise de 10 amostras de água provenientes de soluções alternativas de abastecimento espalhadas pelo município de São José do Vale do Rio Preto/RJ mostrou que não há contaminação pelos agrotóxicos estudados, sendo todos os valores obtidos abaixo do limite de quantificação.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71.pdf: 672416 bytes, checksum: 70cf8a1b19f9e6bc3f794ea9716e54d9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A heparina é um polissacarídeo sulfatado usado como droga anticoagulante com diferentes preparações comerciais disponíveis no mercado brasileiro. Em fevereiro de 2008, seu uso foi relacionado a uma centena de mortes nos Estados Unidos onde foi detectada a contaminação de alguns lotes por sulfato de condroitina. Este fato fez crescer mundialmente a busca por ensaios laboratoriais que garantam sua segurança e eficácia. Neste trabalho foram avaliados comparativamente, cinco lotes procedentes de diferentes produtores de heparinas não-fracionadas, de origem suína ou bovina. Estas amostras foram testadas contra o 5o Padrão Internacional de Heparina de Mucosa Intestinal Suína, provenientes de coletas efetuadas pelas autoridades sanitárias para análise quanto à pureza e potência anticoagulante, pelos dois métodos farmacopéicos: a Inibição da Coagulação do Plasma Ovino (ICPO) e o Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA), no Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), laboratório nacional de controle. Os resultados obtidos (potências médias de 104,71por cento e 106,17por cento, respectivamente) apontaram boa concordância entre os métodos, além de comprovar que o TTPA apresenta metodologia mais simples e rápida devido à utilização do coagulômetro para a medição do tempo de formação de coágulos, em detrimento da leitura subjetiva com observação visual dos graus de coagulação adotado pelo ICPO. A implantação e a execução do TTPA, em paralelo à utilização do ICPO, permitirá uma melhoria na avaliação da segurança e eficácia de heparinas não-fracionadas. / A heparina é um polissacarídeo sulfatado usado como droga anticoagulante com diferentes preparações comerciais disponíveis no mercado brasileiro. Em fevereiro de 2008, seu uso foi relacionado a uma centena de mortes nos Estados Unidos onde foi detectada a contaminação de alguns lotes por sulfato de condroitina. Este fato fez crescer mundialmente a busca por ensaios laboratoriais que garantam sua segurança e eficácia. Neste trabalho foram avaliados comparativamente, cinco lotes procedentes de diferentes produtores de heparinas não-fracionadas, de origem suína ou bovina. Estas amostras foram testadas contra o 5o Padrão Internacional de Heparina de Mucosa Intestinal Suína, provenientes de coletas efetuadas pelas autoridades sanitárias para análise quanto à pureza e potência anticoagulante, pelos dois métodos farmacopéicos: a Inibição da Coagulação do Plasma Ovino (ICPO) e o Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA), no Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS), laboratório nacional de controle. Os resultados obtidos (potências médias de 104,71% e 106,17%, respectivamente) apontaram boa concordância entre os métodos, além de comprovar que o TTPA apresenta metodologia mais simples e rápida devido à utilização do coagulômetro para a medição do tempo de formação de coágulos, em detrimento da leitura subjetiva com observação visual dos graus de coagulação adotado pelo ICPO. A implantação e a execução do TTPA, em paralelo à utilização do ICPO, permitirá uma melhoria na avaliação da segurança e eficácia de heparinas não-fracionadas.