El virus Phlebotomus fever es un arbovirus cuya transmisión al hombre ocurre por la picadura de moscas hematófagas de vuelo limitado, pertenecientes a los géneros Phlebotomus, Sergentomyia y Lutzomyia. La infección en humanos ocurre principalmente en personas que trabajan o viven en la selva. En el presente trabajo se estandarizó una prueba inmunoenzimática indirecta (ELISA) para detectar anticuerpos IgG contra el virus en sueros humanos. También se aplicó esta prueba en la determinación de la seroprevalencia de anticuerpos contra dicho virus en personas procedentes de Iquitos. La confirmación de los casos positivos se realizó mediante la Prueba de Neutralización por Reducción de Placa (PRNT). El ELISA se realizó en cuatro pasos: fijación del antígeno, reacción con el suero, adición del conjugado y reacción con el sustrato. En la producción del antígeno se utilizó la línea celular Vero E-6, siendo la dilución de trabajo 1:1500. El conjugado utilizado es un Anti IgG humano de cabra purificado y marcado con peroxidasa, siendo su dilución de trabajo 1:8 000. Se analizó con la prueba de ELISA 400 sueros procedentes de Iquitos, encontrándose una seroprevalencia de 16.25%. Al confirmar los resultados con la prueba de PRNT, el ELISA obtuvo una especificidad de 83.02% y una sensibilidad de 98.24%. ELISA desarrollado para el virus Phlebotomus fever es aplicable para realizar estudios de prevalencia. / -- The Phlebotomus fever virus is an arbovirus transmitted to humans by the bits of hematofagous flies with limited flight range, which belong to the genus Phlebotomus, Sergentomyia and Lutzomyia. The human infection mainly occurs among people who work and live in the jungle. An inmunoenzimatic indirect assay (ELISA) was standardized in this thesis to detect antibodies IgG against the virus in human serum. This test was applied to determine the antibody seroprevalence against this virus in people coming from Iquitos. The positive case confirmation was performed using the Plaque Reduction for Neutralization Test (PRNT). The ELISA test was performed in four stages: the antigen fixation, reaction to the serum, addition to the conjugate and reaction to the substrate. During the antigen production, the cell line Vero E-6 was used, obtaining a work dilution of 1:1500. The conjugated used is a purified antibody peroxidase labeled goat antihuman IgG, obtaining a work dilution of 1:8000. Using the ELISA test, 400 sera from Iquitos were tested, resulting with a seroprevalence of 16.25%. When confirming the results with the PRNT trial, the ELISA test showed a specificity of 83.02% and a sensitivity of 98.24%. I concluded that the ELISA test developed for the Phlebotomus fever virus is applicable to perform prevalence studies.

El virus Phlebotomus fever es un arbovirus cuya transmisión al hombre ocurre por la picadura de moscas hematófagas de vuelo limitado, pertenecientes a los géneros Phlebotomus, Sergentomyia y Lutzomyia. La infección en humanos ocurre principalmente en personas que trabajan o viven en la selva. En el presente trabajo se estandarizó una prueba inmunoenzimática indirecta (ELISA) para detectar anticuerpos IgG contra el virus en sueros humanos. También se aplicó esta prueba en la determinación de la seroprevalencia de anticuerpos contra dicho virus en personas procedentes de Iquitos. La confirmación de los casos positivos se realizó mediante la Prueba de Neutralización por Reducción de Placa (PRNT). El ELISA se realizó en cuatro pasos: fijación del antígeno, reacción con el suero, adición del conjugado y reacción con el sustrato. En la producción del antígeno se utilizó la línea celular Vero E-6, siendo la dilución de trabajo 1:1500. El conjugado utilizado es un Anti IgG humano de cabra purificado y marcado con peroxidasa, siendo su dilución de trabajo 1:8 000. Se analizó con la prueba de ELISA 400 sueros procedentes de Iquitos, encontrándose una seroprevalencia de 16.25%. Al confirmar los resultados con la prueba de PRNT, el ELISA obtuvo una especificidad de 83.02% y una sensibilidad de 98.24%. ELISA desarrollado para el virus Phlebotomus fever es aplicable para realizar estudios de prevalencia. / The Phlebotomus fever virus is an arbovirus transmitted to humans by the bits of hematofagous flies with limited flight range, which belong to the genus Phlebotomus, Sergentomyia and Lutzomyia. The human infection mainly occurs among people who work and live in the jungle. An inmunoenzimatic indirect assay (ELISA) was standardized in this thesis to detect antibodies IgG against the virus in human serum. This test was applied to determine the antibody seroprevalence against this virus in people coming from Iquitos. The positive case confirmation was performed using the Plaque Reduction for Neutralization Test (PRNT). The ELISA test was performed in four stages: the antigen fixation, reaction to the serum, addition to the conjugate and reaction to the substrate. During the antigen production, the cell line Vero E-6 was used, obtaining a work dilution of 1:1500. The conjugated used is a purified antibody peroxidase labeled goat antihuman IgG, obtaining a work dilution of 1:8000. Using the ELISA test, 400 sera from Iquitos were tested, resulting with a seroprevalence of 16.25%. When confirming the results with the PRNT trial, the ELISA test showed a specificity of 83.02% and a sensitivity of 98.24%. I concluded that the ELISA test developed for the Phlebotomus fever virus is applicable to perform prevalence studies.

El documento digital no refiere un asesor / Establece la tendencia histórica de los factores en la dinámica del dengue en la ciudad de Guayaquil, durante el período 2008 - 2013. Utilizando un estudio observacional, de tipo descriptivo ecológico. En sus resultados, coincide que en la época de invierno se encuentra el mayor número de casos, pero con presencia durante todo el año; y al paso de los años 2010 y 2012 fueron de mayor incidencia, con una variabilidad en su comportamiento. Las variables ambientales mostraron hallazgos, en el que a más temperatura, con humedad por encima del 70% y escasos vientos, estos provocan condiciones para que pueda existir un incremento en la transmisión de la enfermedad. Además, los picos epidémicos de dengue presentados en los dos primeros períodos de cada año se relacionan en los mismos períodos con los índices de Breteau elevados considerados de alto riesgo, pudiendo influir en la transmisión de la enfermedad. Se comprueba la presencia de los 4 serotipos de virus circulante de dengue en Guayaquil, considerándose la existencia de circulación simultánea de DEN1, DEN2, y DEN4 durante los últimos 3 años. Por la historicidad de lo acontecido anteriormente en Guayaquil sobre la existencia del virus y personas susceptibles con infecciones previas, se ha creado una situación que pone en riesgo de dengue grave en un futuro próximo. / Tesis

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Se analizaron por Fijación de Complemento (FC) contra virus Junín, 1279 sueros bovinos del Partido de Tandil. La positividad fue de 1.79 con títulos que oscilaron entre 1/4 a 1/32. Los porcentajes de acuerdo a los 5 lugares que resultaron positivos sobre los 13 muestrados, oscilaron entre 1,40 y 13,33. Respecto a las edades de los animales con serología positiva, contaban entare un mes y 5 años. Setenta y cinco sueros incluyendo los positivos por FC no fueron capaces de neutralizar 100 DL50 de virus Junín inoculadas en ratones lactantes por vía intracerebral. Se discuten las posibles causas de estos resultados. / One thousand two hundred seventy nine bovine sera from Tandil country were tested by Complement-Fixation against Junín virus. Positive results with titers between 1/4 to 1/32 were found in 1,79 of them. Five of thirteen places investigated were found positive by CF with positivity ranging from 1,40 to 13,33. Positive sera by CF were found in bovines from 1 month to 5 years old. None of the 65 sera tested including the ones positive by CF could neutralized 100 DL50 of Junin virus inoculated to suckling mice by intracerebral route. The causes of these results are discused.

Grado de magíster en microbiología / Los virus respiratorios son la principal causa de infección respiratoria aguda en pediatría. Dentro de los agentes virales aislados en los cuadros respiratorios se encuentran los enterovirus, de los cuales se conoce poco sobre su prevalencia y rol en las infecciones respiratorias. El enterovirus D68 (EV-D68), virus RNA de la familia Picornaviridae, es un virus re-emergente que causa infección respiratoria aguda y se ha asociado con casos de bronquiolitis y neumonía principalmente en niños, y actualmente también se asocia a complicaciones neurológicas como Parálisis Flácida Aguda (PFA) (Ayscue, 2014) En otoño de 2014 ocurrió el mayor brote por EV-D68 con 2287 casos repartidos prácticamente por todo el mundo. En nuestro país, no se han publicado estudios de detección sistemática de este virus en muestras respiratorias. El objetivo de este estudio transversal fue identificar y caracterizar la circulación de EV-D68 en Chile. Se incorporaron al estudio 1966 muestras respiratorias obtenidas entre los años 2014-2016 ingresadas bajo el programa nacional de vigilancia de infecciones respiratoria aguda grave (IRAG) en el Instituto de Salud Pública de Chile, todas negativas para virus Influenza. En todas las muestras se analizaron: virus respiratorio sincicial, metapneumovirus, parainfluenza (1, 2 y 3), adenovirus, rinovirus, bocavirus, coronavirus (OC43 y NL63) y EV-D68, mediante PCR en tiempo real con transcripción reversa en los casos de virus RNA, utilizando sondas TaqMan y protocolos establecidos por el Centro para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC). Se identificaron 15 muestras positivas (0,76%) para EVD68: 13 eran muestras obtenidas el 2014, una era del 2015 y la última del 2016. Los genotipos circulantes se determinaron mediante la secuenciación del gen VP1, que codifica para una proteína estructural de la cápside viral y le otorga sitios de antigenicidad a la partícula viral. Filogenéticamente se estableció que 14 muestras pertenecían al subclado B1, mientras que la muestra positiva del año 2016, pertenecía al subclado B3. Estos resultados se condicen con los clados que circularon entre el 2014 y 2015 pertenecientes al subclado B1. El subclado B3 se detectó solo en 4 países además del nuestro (EE.UU, Holanda, Dinamarca y Suecia). Es importante dar a conocer en detalle la distribución en el tiempo y epidemiología de este nuevo virus emergente por las complicaciones secundarias durante el desarrollo del cuadro clínico, ya sea a nivel neurológico como respiratorio, y ver el impacto en salud pública en nuestro país. En conclusión, Enterovirus D-68 circula en niños y adultos con cuadros respiratorios agudos graves en nuestro país, en forma esporádica y en brote, y en frecuente coinfección con otros virus respiratorios. La baja detección (0.76%) no justifica una vigilancia activa de este virus respiratorio. / Respiratory viruses are the main cause of acute respiratory infection in pediatrics. Among the viral agents isolated in the respiratory tract are the Enteroviruses, of which little is known about their prevalence and role in infections. Enterovirus D68 (EV-D68) is a re-emerging virus that may cause acute respiratory infections and has been associated with cases of bronchiolitis and pneumonia mainly in children, and is also being currently associated with neurological complications such as acute flaccid paralysis (AFP). In the autumn of 2014, the largest outbreak of EVD68 was recorded with about 2287 cases that spread around the world. In our country, there have been no studies published on the systematic detection of this virus in respiratory samples. The aim of this cross-sectional study was to identify and characterize the circulation of EV-D68 in Chile. For that 1966 respiratory samples collected between 2014-2016 of patients admitted under the national surveillance program of severe acute respiratory infections (SARI) at the Institute of Public Health of Chile, were studied. All of them were negative for Influenza virus by RT-PCR. The samples were analyzed for respiratory syncytial virus, Metapneumovirus, Parainfluenza (1, 2 and 3), Adenovirus, Rhinovirus, Bocavirus, Coronavirus (OC43 and NL63) and EV-D68 by real-time PC,R with reverse transcription in the cases of RNA viruses, using TaqMan probes and protocols established by the Center for Disease Control and Prevention (CDC). A total of 15 positive samples (0.76%) for EV-D68 were identified, 13 samples from 2014, one from 2015 and one from 2016. To determine the circulating genotypes, the VP1 gene was sequenced. This gene codes for a structural protein of the viral capsid, which provides antigenicity sites to the viral particle. Through phylogenetic analysis, it was established that 14 samples belonged to subclade B1, while the positive sample from year 2016 belonged to subclade B3. These results are consistent with the clades that circulated between 2014 and 2015, subclade B1. Subclade B3 was detected in 4 countries besides ours in 2016 (USA, Holland, Denmark and Sweden). It is important to present in detail the distribution over time and the epidemiology of this emerging virus, due to the secondary complications during the development of the disease, either at the neurological or respiratory level and see its impact on public health in our country.

Los virus del grupo C (GRCV) son un complejo que pertenecen al género Orthobunyavirus, de la familia Peribunyaviridae (anteriormente denominado Bunyaviridae). Estos virus están asociados con enfermedades febriles en humanos que generalmente habitan en áreas tropicales y subtropicales de América del Sur y América Central. A pesar de que muchos GRCV han sido aislados de mosquitos, animales y seres humanos, los análisis genéticos de estos virus aún son limitados. En el Perú, el centro de investigaciones de enfermedades tropicales de la marina de los Estados Unidos (NAMRU-6) viene conduciendo desde los años noventa una vigilancia pasiva de las enfermedades febriles. Durante este tiempo, se lograron recuperar e identificar mediante la prueba de inmunofluorescencia 65 aislamientos de GRCV de pacientes febriles habitantes del norte y sur de la Amazonía peruana. Para caracterizar estos aislamientos, se secuenciaron una región de 500 pb del segmento S y una región de 750 pb de los segmentos M y L. El análisis de la secuencia de los aislamientos clínicos mostró identidades de nucleótidos que oscilaban entre el 68% y el 100% y las identidades de secuencia de aminoácidos deducidas que oscilaban entre 72% y 100%. Las secuencias se compararon con las siguientes cepas referenciales: virus Caraparu (CARV), virus Murutucu (MURV), virus Oriboca (ORIV), virus Marituba (MTBV), virus Apeu (APEUV) y virus Madrid (MADV). La comparación de secuencias de los segmentos L y S de las cepas clínicas con cepas referenciales mostró dos clados; clado I formado por aislamientos con alta correlación con CARV-MADV y clado II conformado por aislamientos con alta correlación con MURV, ORIV, APEUV y MTBV. Las secuencias del segmento M contiene algunos aislamientos de GRCV diferentes filogeneticamente a los de segmento L y S y su distribución filogenética está altamente relacionada con la microneutralización serológica. Estos resultados demuestran las relaciones genéticas y serológicas de los GRCV que circula en la Amazonía peruana y la divergencia genética de los GRCV en el norte de la Amazonía. / Tesis

El documento digital no refiere un asesor / Caracteriza molecularmente y filogenéticamente las cepas emergentes del PEDV (Virus de la Diarrea Epidémica Porcina) en nuestro país obtenidas de lechones de 1 a 3 semanas de edad en los años 2013 y 2014, mediante el secuenciamiento del dominio S1 del gen S, teniendo como hipótesis que los brotes ocurridos tienen como origen a las cepas norteamericanas debido a la estrecha relación comercial porcina existente entre Perú y Estados Unidos. / Tesis

Tesi realitzada al Centre de Recerca en Agrigenòmica (CRAG) / Consorci CSIC-IRTA-UB-UAB / En esta tesis se aborda la identificación de factores del pulgón Myzus persicae que podrían participar en el proceso de transmisión del potyvirus del grabado del tabaco, Tobacco etch virus (TEV), y se explora la posibilidad de alterar la expresión de genes particulares en el insecto vector como una manera de dificultar o impedir la diseminación de este virus. Se conoce la intervención de un factor auxiliar de origen viral, la proteína HCPro, en la transmisión de potyvirus, actuando como un puente molecular reversible para retener las partículas de virus en el aparato bucal del pulgón. La proteína HCPro interacciona con la proteína de la cápside viral, CP, y previsiblemente con receptores específicos en el pulgón. Después de analizar un conjunto de productos capaces de interaccionar con la proteína HCPro de TEV (interactoma), se han considerado dos proteínas candidatas. La primera, MpRPS2, presenta homología con proteínas ribosomales, y la segunda MpRR1Cp2 es una proteína cuticular. La interacción entre HCPro y MpRPS2 se ha verificado en ensayos Far Western Blot y en el sistema de doble híbrido de levaduras. Los intentos para confirmar la localización de esta proteína en estiletes diseccionados de pulgón no fueron concluyentes, aunque con un antisuero específico sí se ha podido detectar la presencia de MpRPS2 en la cutícula de mudas de pulgón aisladas. Para validar la participación de estos hipotéticos receptores en el proceso de transmisión viral, se han explorado estrategias de interferencia con la expresión génica de MpRPS2 y MpRR1Cp2 en pulgones. Tras analizar sus niveles de expresión durante a lo largo del desarrollo, se consideraron dos sistemas para inducir respuestas de silenciamiento (RNAi) basados en la alimentación. El uso de dietas artificiales suplementadas con dobles cadenas de RNA específicas sintetizadas in vitro no produjo en general reducciones de la acumulación de RNA mensajeros, mientras que la alimentación de pulgones sobre plantas infectadas con un vector viral basado en el virus del cascabeleo del tabaco, Tobacco rattle virus (TRV), que contiene un fragmento de la secuencia del gen, tuvo un efecto más pronunciado. Las reducciones de expresión observadas fueron variables entre los dos genes, con el efecto más fuerte en el caso del gen MpRR1Cp2, en pulgones alimentados en plantas de tabaco infectadas con una variante de TRV que incorporaba un fragmento de este gen. Este sistema de RNAi nos ha permitido ensayar el efecto de la reducción de la expresión de los dos candidatos seleccionados en experimentos de transmisión de TEV. Estos resultados podrían ayudar a mejorar la comprensión de las interacciones moleculares necesarias durante la transmisión, a identificar factores en el vector que participan en el proceso, y eventualmente podrían usarse para el diseño de estrategias innovadoras de bloqueo de la diseminación viral basadas en la interferencia de la expresión de dichos factores. / This thesis addresses the identification of Myzus persicae aphid factors that could be involved in the transmission process of Tobacco etch virus (TEV), a potyvirus, and explores the possibility of altering the expression of specific genes in the insect vector as a way to prevent virus spread. An auxiliary factor of viral origin, the HCPro protein is known to participate in potyvirus transmission. HCPro acts as a reversible molecular bridge retaining virus particles in aphid mouthparts. HCPro interacts with the viral coat protein, CP, and predictably with specific receptors in aphid mouthparts. After analyzing a set of products able to interact with the TEV HCPro (interactome), we have considered two candidate proteins. The first one MpRPS2, shows homology with ribosomal proteins, and the second one, MpRR1Cp2 is a cuticular protein. The interaction between HCPro and MpRPS2 has been verified in Far Western Blot assays and in yeast two-hybrids. Attempts to confirm the localization of this protein in dissected aphid stylets were not conclusive, although using an specific antiserum it has been possible to detect the presence of the MpRPS2 in the cuticle of isolated aphid moults. To confirm the involvement of these hypothetical receptors in the viral transmission process, strategies of interference with expression of MpRR1Cp2 and MpRPS2 have been explored in aphids. After analyzing their expression levels along development, two systems based on feeding were considered to induce silencing responses (RNAi). The use of artificial diets supplemented with specific in vitro synthesized dsRNA did not produced reductions in mRNA accumulation, while aphids fed on plants infected with a viral vector based on Tobacco rattle virus (TRV), which contains a fragment of the targeted genes, showed more clear effects. The observed reductions in expression were rather variable between the two genes considered, with a stronger effect in the case of MpRR1Cp2 in aphids fed on tobacco plants infected with a TRV variant that incorporates a fragment of this gene. This RNAi system allowed us to test the effect of knocking down the expression of the two selected candidates in TEV transmission experiments. Our results might help to improve our understanding of the molecular interactions during transmission, to identify factors in the vector that participate in the process, and eventually could serve to design new strategies to interfere with viral dissemination based on specifically interfering with their expression.

Determina la presencia de anticuerpos contra virus de distemper canino (VDC) en jaguares (Panthera onca) y pumas (Puma concolor) de vida libre de dos áreas: Concesión de Conservación Rio Los Amigos (n=2) y la Reserva Nacional Tambopata/Parque Nacional Bahuaja Sonene (n=17) en el departamento de Madre de Dios. La detección de anticuerpos contra el VDC es realizada mediante la prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en las 19 muestras de felinos silvestres de vida libre, obtenidas como parte del trabajo realizado por la World Wildlife Fund (WWF) durante los años 2006 - 2008. Todos los felinos silvestres de vida libre resultan negativos a anticuerpos contra VDC mediante la prueba de IFI. Se concluye que los felinos silvestres trabajados en este estudio durante los años 2006 - 2008 no están expuestos al VDC. / Tesis