Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-12-02T11:21:23Z : No. of bitstreams: 1 000799483.pdf: 5907887 bytes, checksum: 10be7c238cdd808e25bb62408e42fe13 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Papilomavirus humano (HPV) é um dos vírus mais prevalentes entre as infecções sexualmente transmissíveis e está associado com doenças malignas. Os HPVs de alto risco possuem proteínas, denominadas de E6 e E7, caracterizadas como oncoproteínas devido aos seus papéis na transformação celular e na inativação de supressores de tumor. Um dos mecanismos usados na transformação celular pela proteína E6 do HPV de alto risco é a interação do seu domínio carboxi-terminal, PDZ, com domínios PDZs presentes em algumas proteínas celulares, destinando-as à degradação. Uma proteína que está associada com várias condições patológicas e tem domínio PDZ é a protease HtrA1. Esta proteína é pouco expressa em alguns cânceres, sugerindo um papel supressor de tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da superexpressão de HTRA1 em linhagem celular HPV16 positiva (HF698) e HPV negativa (C33). As linhagens celulares foram transfectadas com vetor contendo a ORF de HTRA1 ou vetor vazio. A superexpressão do mRNA e proteína foi confirmada por qPCR e imuno-histoquímica, respectivamente. As linhagens celulares transfectadas foram submetidas a ensaio de formação de colônia, de viabilidade celular, de apoptose e ciclo celular. As células C33 superexpressando HtrA1 formaram significantemente menos colônias e apresentaram redução de viabilidade celular comparadas as células sem expressão de HtrA1. Diferentemente, na linhagem HPV positiva ocorreu aumento no número de colônias nas células superexpressando HtrA1 e não houve diferença no ensaio de viabilidade celular. Esses resultados sugerem que os diferentes padrões observados nas duas linhagens celulares são decorrentes da presença do HPV na HF698 e da ausência na C33. A fim de confirmar se o aumento do número de colônias nas células HF698 superexpressando HtrA1 é decorrente da interação dessa proteína com E6, foi produzida linhagem estável de C33 com ... / The Human Papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent virus among sexually transmitted infections and it is associated with some malignancies. High risk HPVs contain proteins, E6 and E7, characterized by oncoproteins due to their roles in cellular transformation and suppressor tumor inactivation. One of the mechanisms used in cell transformation by E6 protein from high-risk HPVs is the interaction of its carboxy-terminal domain, known as PDZ, with PDZs domains present in some cellular proteins, triggering them to degradation. A protein that is associated with various pathological conditions and has PDZ domain is the protease HtrA1. This protein is poorly expressed in some cancers, suggesting its tumor suppressor role. The aim of this study was to evaluate the effect of the HtrA1 overexpression in HPV 16 positive (HF698) and HPV negative (C33) cell lines. The cell lines were transfected with vector containing the HTRA1 ORF or empty vector. The mRNA and protein overexpression were confirmed by qPCR and immunohistochemical, respectively. The cell lines transfected were subjected to cell proliferation, viability, apoptosis and cell cycle assays. C33 cells expressing HtrA1 presented significantly fewer colonies and showed reduced viability than cells without HtrA1 expression. On the other hand, in HPV-positive cell line there was an increase in the number of colonies in cells expressing HtrA1 and there was no difference in the cell viability assay. These results suggest that the different patterns observed between the two cell lines studied may be due to the HPV presence in HF698 and its absence in C33 cells. To confirm if the increase in the number of colonies in HPV positive cells (HF698) overexpressing HtrA1 arises from the interaction of this protein with E6, stable lines of C33 containing gene E6 were produced and subsequently performed cell proliferation assay. C33 cells overexpressing E6 and HTRA1 showed an increased number of ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-06-13T19:35:17Z : No. of bitstreams: 1 matos_rpa_me_sjrp_parcial.pdf: 383851 bytes, checksum: 3c576084c4efddd486e9b74decec3dfd (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-01T12:51:13Z: matos_rpa_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-01T12:51:47Z : No. of bitstreams: 1 000714307.pdf: 713319 bytes, checksum: f56b3217968c59297b03b085e207b381 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Papilomatose Respiratória Recorrente (PRR) é uma doença caracterizada pela presença de tumores benignos no trato respiratório superior, sendo a laringe o sítio de lesão mais comum. Esta doença tem uma distribuição de idade bimodal, permitindo sua classificação em papilomatose juvenil ou adulta. O principal agente etiológico da PRR é o Papilomavírus Humano (HPV), um grupo de vírus de DNA, dos quais mais de 150 tipos já foram identificados. HPV-6 e HPV-11 são os tipos mais encontrados em PRR. Há poucos estudos sobre a distribuição das variantes moleculares de HPV de baixo risco. Desta maneira, o objetivo deste estudo foi avaliar a variabilidade genética do gene E6 entre isolados de HPV-6 e HPV-11 detectados em amostras de papilomatose respiratória recorrente (PRR) obtidas em uma coorte de pacientes brasileiros. A fim de comparar as sequências de nucleotídeos identificados em nosso estudo com isolados previamente reportados provenientes de outras partes do mundo, e de diferentes sítios anatômicos (papilomatose de laringe, verrugas genitais, câncer cervical e esfregaço anal), foi realizada a análise filogenética para determinar as relações filogenéticas das variantes detectadas no Brasil com as variantes isoladas em outras regiões do mundo. A região codificante completa do gene E6 de 25 amostras foi clonada e sequenciada. Em 18 isolados foi detectado o DNA do HPV-6 (72%), e em 7 isolados o DNA do HPV-11 (28%). Um total de quatro variantes genômicas diferentes de HPV-6 e duas variantes genômicas de HPV-11 foram identificadas e nenhuma variante pode ser associada com o quadro clínico do paciente. Para a reconstrução filogenética foram utilizadas as sequências de E6 detectadas neste estudo adicionalmente às sequências anteriormente publicadas originárias da Eslovênia e da África do Sul. Devido ao pequeno... / Recurrent respiratory papillomatosis (RRP) is a disease characterized by benign neoplasms and can occur anywhere within the upper respiratory tract, but the most common lesion site is the larynx. This disease has a bimodal age distribution which forms the basis of its classification as juvenile or adult. The main etiological agent of RRP is Human Papillomavirus virus (HPV), a group of DNA virus with more than 150 identified types. HPV-6 and 11 are the most common types identified in RRP. There are few studies about the distribution of natural molecular variants of low-risk HPVs. So, the aim of this study was to evaluate the E6 early gene variability among HPV-6 and HPV-11 isolates detected in recurrent respiratory papillomatosis (RRP) samples obtained in a cohort of Brazilian patients. In order to compare nucleotide sequences identified in our study with previously reported sequences isolates from different anatomic sites (laryngeal papillomas, genital warts, cervical cancer and anal swabs) obtained from other parts of the world was performed phylogenetic analysis to determine the phylogenetic relationships of variants detected in Brazil with variants isolated in others regions of world. The complete coding region of the E6 gene of 25 samples were cloned and sequenced. HPV-6 DNA was detect in 18 isolates (72%) and HPV-11 DNA in 7 isolates (28%). A total of four different HPV-6 genomic variants and two HPV-11 genomic variants were identified and any variant could not be associated with the clinical outcome. Phylogenetic trees for both HPV types were reconstructed enclosing E6 sequences detected in our study in addition to formerly published sequences from Slovenia and South Africa. The small number of samples analyzed prevents the evaluation of the association between specific molecular variants and the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:53:57Z : No. of bitstreams: 1 rosa_lar_me_botib.pdf: 11902043 bytes, checksum: 7d277e227cad445bcadea5a4d8bee914 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os relatos em literatura que relacionam preditores biológicos de resposta à radioterapia e ou quimioterapia em carcinomas de orofaringe (CEO) são limitados e a maioria se baseia em grupos de tumores de diferentes sítios anatômicos. Os objetivos deste estudo foram investigar marcadores biológicos que poderiam atuar como potenciais preditores de resposta à quimioterapia de indução seguido de radioterapia, e associá-los com o padrão de infecção pelo HPV e dados clínico-patológicos. Trinta e sete casos de CEO foram avaliados quanto à infecção pelo HPV, 32 casos para alterações no número de cópias (CNAs) por CGH-array e 22 casos tiveram seu perfil de expressão gênica avaliado em relação ao tecido normal e adjacente da orofaringe. O subtipo HPV16 foi o mais prevalente entre eles (8/37), seguido do HPV18 (2/37) e HPV26 (2/37) e HPV16/18 (1/37). As análises de CGH-array foram realizadas na plataforma 4x180k (Agilent). A análise dos dados foi realizada usando o programa Nexus Copy Number v5.0 (Biodiscovery) e seguido de comparação com o Database of Genomic Variants. Foram identificadas 3222 alterações no número de cópias genômicas (CNAs) com prevalência de perdas heterozigotas (46,6%), seguida de ganhos (40,7%), alto nível de ganhos (7,9%) e perdas homozigotas (4,8%). As alterações mais frequentes envolveram ganhos em 3q, 5p, 8q, 9q e 11q e perdas em 3p, 5q, 8p, 9p e 18q. Os casos HPV negativos (20) apresentaram um maior número de CNAs (média 117 CNAs/caso) comparadas aos pacientes HPV positivos (12), os quais apresentaram um perfil genômico menos complexo (média 73 CNAs/caso). Foram identificadas regiões genômicas capazes de diferenciar os tumores HPV positivos e negativos (P<0,05), entre elas as perdas em 7q22.1 e 14q12 presentes exclusivamente nos tumores HPV... / There are few reports relating biological predictors of response to radiotherapy and or chemotherapy in oropharyngeal squamous cell carcinomas (OSCC), and most of them are based on different head and neck anatomical sites. The aims of this study were to investigate biological markers that could act as potential predictors of response to chemotherapy of induction followed by radiotherapy, and its association with HPV infection and clinicopathological data. Thirty-seven OSCC were evaluated for HPV genotyping, 32 cases for copy number alterations (CNAs) by array CGH and 22 cases were investigated by large scale transcription analysis. The subtype HPV16 was the most prevalent among them (8/37), followed by HPV18 (2/37) and HPV26 (2/37), and HPV16/18 (1/37). The array CGH analysis were performed using the 4x180k platform (Agilent). Data analysis were done by Nexus Copy Number v5.0 (Biodiscovery) software and compared with Database of Genomic Variants. A total of 3222 copy number alterations (CNAs) were identified with a prevalence of heterozygous loss (46.6%), followed by gains (40.7%), high level of gains (7.9%) and homozygous loss (4.8%). The most frequent gains involved 3q, 5p, 8q, 9q and 11q and losses on 3p, 5q, 8p, 9p and 18q. The HPV-negative cases (20) showed a higher number of CNAs (average 117 CNAs/case) compared to HPV-positive cases (12), which showed a less complex genomic profile (in average 73 CNAs/case). Genomic regions were able to differentiate between HPV positive and negative cases (P<0.05), including losses on 7q22.1 and 14q12, which were detected exclusively in HPVpositive tumors (P=0.044). A comparative analysis between the cases treated with carboplatin associated with RT (22 cases) was done aiming to identify chromosomal regions that could... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-28Bitstream added on 2014-06-13T18:42:58Z : No. of bitstreams: 1 demathe_a_dr_araca.pdf: 333527 bytes, checksum: 481be7a0ed0bfcb0e04dcdc9c8824129 (MD5) / O papilomavirus humano (HPV) tem sido relacionado com a etiologia dos carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço, em análise de tecidos cerca de 60% destes carcinomas podem ser HPV positivos. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do HPV em material genético obtidos de tecidos, secreção salivar e sangue de pacientes portadores de carcinoma epidermóide (CEC) de orofaringe e controles e a correlação da presença viral com as váriáveis sexo, idade, tabagismo, etilismo e perfil anatomopatologico do tumor. Foi realizada uma análise do material genético de 46 pacientes com diagnóstico de CEC de orofaringe e 40 pacientes sem carcinoma. A extração do DNA dos espécimes foi realizada utilizando o kit de extração de DNA QuiAMP. O DNA isolado foi submetido a PCR para beta-globina para confirmar a presença e integridade do DNA, em seguida, foram realizadas novas reações para detecção do DNA do HPV. Para análise estatística foram empregados o teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. A idade média de idade foi de 60 anos para os casos e 58,2 anos para os controles e a mediana foi de 59 e 56 anos, respectivamente. Os resultados obtidos com a metodologia descrita permitiram concluir que não houve diferenças estatisticamente significativas na análise das variáveis em relação à presença do papilomavírus humano nas amostras de tecidos biológicos dos pacientes estudados / Human papillomavirus (HPV) it has been related with head and neck SCC etiology, about 60% of these carcinomas tissues can be HPV positive. The aim of this study was to analyze the HPV presence in genetic material obtained from tissues, salivary secretion and blood of oropharyngeal SCC patients and controls and correlate the virus presence with variables: sex, age, smoking, alcoholism and pathological profile of the tumours.It was made molecular and statistical analysis of genetic material of 46 oral and oropharyngeal SCC patients and 40 controls patients without carcinoma. The DNA extraction of all specimens was accomplished using the DNA extraction kit QuiAMP. The isolated DNA was submitted PCR for beta-globin to confirm the DNA presence and integrity, after new reactions it was accomplished for HPV DNA detection. Chi-square test and Fisher exact test were used for statistical analysis. The average age was 60 years for cases and 58.2 years for controls and the median age was 59 and 56 years respectively. The results obtained with the described methodology shows there was no statistically significant differences between HPV presence in samples of biological tissues and the analyzed variables

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:45Z : No. of bitstreams: 1 000838217.pdf: 2068210 bytes, checksum: 7cc196b4afd9c4a009cb398bc82c6339 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de colo uterino (ou câncer cervical) é uma neoplasia maligna que tem a infecção pelo HPV como o principal fator de risco para o seu surgimento. As terapias atuais para o tratamento do câncer cervical têm como maior desvantagem a excisão substancial do estroma cervical e muitos efeitos adversos associados aos quimioterápicos, principalmente a cisplatina. Nesse cenário, a terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando uma alternativa promissora, especialmente se combinada a tratamentos convencionais. A técnica é baseada na administração de um agente fotossensibilizador não tóxico ao paciente com posterior exposição a uma fonte de luz de comprimento de onda específico, resultando em resposta citotóxica via dano oxidativo. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, a citotoxicidade, o tipo de morte induzido e os efeitos genotóxicos e mutagênicos da TFD em monoterapia e associada à cisplatina sobre as linhagens SiHa, C-33 A e HaCaT, utilizando os fotossensibilizadores Photogem e azul de metileno. Observou-se que tanto a terapia fotodinâmica mediada por azul de metileno (AMTFD) quanto a terapia mediada pelo Photogem (PGTFD) foram eficazes em reduzir o número de células viáveis, com a citotoxicidade sendo dependente da dose de luz. A cisplatina teve menor eficácia sobre as três linhagens quando comparada à TFD. Porém, a combinação cisplatina + TFD apresentou efeito sinérgico intenso e provocou maior morte celular em todas as condições testadas. A sequência de aplicação dos tratamentos (cisplatina + TFD ou TFD + cisplatina) demonstrou-se importante e dependente do fotossensibilizador. Com relação ao tipo de morte celular provocado, tanto a AMTFD quanto a PGTFD induziram morte independente de caspases, mas a AMTFD induziu morfologia típica de necrose, enquanto a PGTFD induziu morfologia mais similar à apoptose. A cisplatina induziu predominantemente apoptose e as terapias... / Cervical cancer is a malignant tumor that has HPV infection as the main risk factor for its emergence. Current therapies for the treatment of cervical cancer have as major disadvantage substantial excision of cervical stroma and many adverse effects associated with chemotherapy, especially cisplatin. In this scenario, photodynamic therapy (PDT) has proven to be a promising alternative, specially if combined with conventional treatments. The technique is based on the administration of a non-toxic photosensitizing agent to the patient with subsequent exposure to a light source of a specific wavelength, resulting in cytotoxic response by oxidative damage. Thus, the present study intended to evaluate in vitro cytotoxicity, the type of induced death and the genotoxic and mutagenic effects of PDT alone and associated with cisplatin on the cell lines SiHa, C-33 A and HaCaT, using the photosensitizers Photogem and methylene blue. It was observed that both the photodynamic therapy mediated by methylene blue (MBPDT) and Photogem mediated therapy (PGPDT) were effective in reducing cell viability with cytotoxicity being dependent on the light dose. Cisplatin was less effective over the three lines compared to PDT. However, the combination cisplatin + PDT had a greater synergistic effect and caused greater cell death in all conditions tested. The sequence of treatment application (PDT + cisplatin or cisplatin + PDT) was important and depended on the photosensitizer. Regarding the type of induced cell death, both AMPDT and PGPDT induced caspase-independent death, but AMPDT induced the typical morphology of necrosis, while PGPDT induced morphology was most similar to apoptosis. Cisplatin predominantly induced apoptosis; and combination therapy induced greater apoptosis- or necrosis-like rate according to the cell line, but always with a higher percentage of dead cells than monotherapies. MBPDT, either as monotherapy or in combination with cisplatin was ... / FAPESP: 12/25414-5

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:56:59Z : No. of bitstreams: 1 000748693.pdf: 2194323 bytes, checksum: 02886527a75b634177bba3e9ae53c91b (MD5) / A incidência do adenocarcinoma do colo do útero (AC) está aumentando em muitos países. A associação entre a infecção pelo Papillomavirus Humano (HPV) e o AC ainda permanece incerta. A imunoistoquímica pode auxiliar no diagnóstico nos casos duvidosos, pois algumas condições benignas reativas podem mimetizar processos neoplásicos. Marcadores como bcl-2, Ki-67 e proteína p16INK4A (p16) já foram descritos para ajudar nas dúvidas relacionadas ao epitélio glandular cervical. Trabalhos recentes demonstraram a importância da adição da marcação da proteína Ciclina D1 ao painel imunoistoquímico. A Ciclina D1 é uma proteína sensor chave e integrador dos sinais extracelulares nas células em início até meados da fase G1 do ciclo celular, sendo importante na regulação da proliferação e diferenciação celular. Foram estudados 74 casos de biópsias com diagnóstico de adenocarcinoma de colo do útero, sendo 24 de adenocarcinoma cervical in situ e 50 de adenocarcinoma cervical invasor. No grupo controle, foram incluídas 79 biópsias de colo do útero que continham endocérvice normal ou em condições benignas reativas. A pesquisa de HPV nas biópsias foi realizada pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os primers específicos (MY09/11 e GP5+/GP6+) e a genotipagem foi realizada empregando-se a técnica de PCR Multiplex utilizando primers específicos para os genótipos 6, 16, 18 e 33. A imunoistoquímica foi realizada nos 74 casos com diagnóstico de adenocarcinoma cervical (tipo in situ e invasor) para os marcadores Ciclina D1, proteína p16, Ki-67 e bcl-2 e em 79 casos controle para a Ciclina D1. O DNAHPV foi observado em 100% dos casos de adenocarcinoma cervical. O genótipo mais frequente foi o HPV18. A Ciclina D1 se apresentou negativa nos casos da doença e positiva nos casos benignos e reativos. O painel imunoistoquímico associando Ciclina D1, p16 e Ki-67 pode ser ferramenta útil na... / The incidence of cervical adenocarcinoma (AC) is increasing in many countries. The association between Human Papillomavirus (HPV) infection and the AC remains uncertain. Immunohistochemistry may help in the diagnosis in doubtful cases, because some benign reactive conditions can mimic neoplastic processes. Markers such as bcl-2, Ki-67 and protein p16INK4A (p16) have been described to assist with questions related to cervical glandular epithelium. Recent studies have shown the importance of adding protein labeling Cyclin D1 into immunohistochemical panel. The Cyclin D1 protein is a key sensor and integrator of extracellular signals into cells in early to mid G1 phase of the cell cycle, which is important in the regulation of cell proliferation and differentiation. We studied 74 patients with biopsy diagnosis of adenocarcinoma of the cervix, 24 of cervical adenocarcinoma in situ and 50 invasive cervical adenocarcinoma, The control group included 79 cervical biopsies containing endocervix normal or benign reactive conditions. The research of HPV in biopsies was performed by the polymerase chain reaction (PCR) using specific primers (MY9/11 and GP5 + / GP6 +) and genotyping was carried out using the Multiplex PCR using primers specific for genotypes 6, 16, 18 and 33. Immunohistochemistry was performed in 74 cases diagnosed with cervical adenocarcinoma (type in situ and invasive) for markers Cyclin D1, p16, Ki-67 and bcl-2, and 79 cases control for Cyclin D1. The HPV DNA was observed in 100% of cases of cervical adenocarcinoma. The most common genotype was HPV18. The Cyclin D1 was found negative in cases of illness and positive in benign and reactive samples. The immunohistochemical panel associating Cyclin D1, p16 and Ki-67 may be useful tool in the characterization and diagnosis of cervical adenocarcinoma

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-25Bitstream added on 2014-06-13T19:50:52Z : No. of bitstreams: 1 bozeto_jms_me_arafcf.pdf: 1574959 bytes, checksum: a5cd125f8746a8789bce9eca1cc045e6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Atualmente, o câncer cervical é considerado a segunda causa mais comum entre as mulheres e encontra-se associado ao Papilomavírus Humano (HPV), que infecta células epiteliais escamosas, dando origem a grandes lesões. A nitensidina A é um alcalóide guanidínico isolado de Pterogyne nitens Tul. (Fabaceae), que possui atividade anti-inflamatória e anti-oxidante, além de um amplo aspecto de atividades biológicas que está sendo estudado. Foi testada nas concentrações de 20,0 a 0,25 µg/mL (diluição seriada 1:3) e nos tempos de 24 h e 48 h nas linhagens imortalizadas com HPV-16 (SiHa) e não imortalizadas (C33A). Para avaliar a citotoxicidade da nitensidina A o teste MTT foi realizado sendo possível observar um efeito concentração-resposta em duas linhagens testadas (SiHa e C33A, CI50 = 10,31 µg/mL e 11,91 µg/mL, respectivamente) por 24 h. Com o intuito de avaliar o potencial efeito indutor de apoptose, foi realizado o ensaio de anexina V por citometria de fluxo. Em ambas as linhagens e tempos de tratamento notaram-se uma morte mais relevante por apoptose precoce, sendo que há diferença apenas na maior concentração (20,0 g/mL) na linhagem SiHa, que também induz morte por apoptose tardia/necrose. Para completar esse ensaio foi realizado o teste do Hoechst-iodeto de Propídeo, diferenciando assim apoptose precoce, tardia e necrose. Na linhagem SiHa tratada por 24 h nas menores concentrações houve morte celular por apoptose precoce, e na maior concentração por apoptose tardia (81,4±1,4 %). Por 48 h, em todas as concentrações a morte celular foi por apoptose tardia. Na linhagem C33A em 24 h não foi observado morte celular significativa. Em 48 h, a maior concentração induziu apoptose tardia (57,7±20,6 %). O modelo de estudo de implante tumoral xenográfico de células SiHa... / Currently, cervical cancer has been considered the second most common among women and is associated with human papillomavirus (HPV) which infects squamous epithelial cells, resulting in major injuries. Nitensidine A is a guanidine alkaloid isolated from Pterogyne nitens Tul. (Fabaceae), which has anti-inflammatory and antioxidant, as well as a broad spectrum of biological activities being studied. It was tested at concentrations from 20.0 to 0.25 mg/mL (serial dilution 1:3) and for 24 h and 48 h in immortalized with HPV-16 (SiHa) and non-immortalized (C33A) cell lines. To evaluate the cytotoxicity of nitensidine A MTT test was performed and it was possible to observe a concentration-response effect in two tested lines (SiHa and C33A, IC50 = 10.31 mg/mL and 11.91 mg/mL, respectively) for 24 h. In order to assess the potential effect of inducing apoptosis, we performed the annexin V assay by flow cytometry. In both strains and treatment times were noted a death most significant by early apoptosis, and a difference only at highest concentration (20.0 mg/mL) in SiHa, which also induces death by late apoptosis / necrosis. To complete this test, it was performed the Hoechst-propidium iodide assay, thereby differentiating early, late apoptosis and necrosis. In SiHa treated for 24 h at lower concentrations there was cell death by early apoptosis, and late apoptosis at highest concentration (81.4 ± 1.4%). For 48 h at all concentrations cell death was by late apoptosis. In C33A at 24 h was not observed significant cell death. At 48 h, the highest concentration induced late apoptosis (57.7 ± 20.6 %). The study model of xenographic tumor implant of SiHa cells in nude mice BALB/c treated with nitensidine... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Paulo Cesar Giraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T02:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jacyntho_ClaudiaMarciadeAzevedo_D.pdf: 1490520 bytes, checksum: b7e0bab3cdc415c99c264ee227a0a4e9 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A lesão escamosa intra-epitelial anal (ASIL) vem aumentando significativamente sua incidência nos últimos anos em pacientes masculinos com infecção pelo vírus da imunodeficiência adquirida humana (HIV), e mais recentemente em mulheres também HIV-positivas. Não se sabe, entretanto, se ASIL está em processo concomitante de crescimento em mulheres portadoras de lesões escamosas intra-epiteliais genitais (GSIL), independentemente da positividade para o HIV ou outros estados imunossupressivos. O objetivo desta pesquisa foi verificar a prevalência de ASIL em mulheres com GSIL, utilizando anuscopia e histopatologia. Trata-se de estudo de corte transversal, observacional, que comparou 211 mulheres com GSIL, cujo diagnóstico foi firmado por citopatologia, colposcopia e histopatologia, com outras 80 mulheres com exames citocolposcópicos normais, que foram assistidas no Ambulatório de Colposcopia do Hospital dos Servidores do Estado do Rio do Janeiro - Ministério da Saúde, no Ambulatório de Infecções Genitais do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher do Departamento de Tocoginecologia da Unicamp e no Ambulatório de Colposcopia do Hospital Nossa Senhora da Saúde - Universidade Souza Marques - Rio de Janeiro. _Após anamnese dirigida foram realizados exames clínico geral, ginecológico e colposcópico. Foram também colhidas células esfoliadas do ânus para estudo citopatológico e realizadas anuscopias de alta resolução usando-se soluções contrastantes de ácido acético a 2% e de lugoL Biópsias com estudo histopatológico foram realizadas quando existiram lesões. Para a análise estatística foram empregados testes qui-quadrado ou exato de Fisher, a fim de estabelecer possíveis diferenças entre os grupos estudados. Empregaram-se análises bi e multivariada com regressão logística passo a passo para identificar fatores associados. O estudo teve a duração de 14 meses. Observou-se 19,5% de ASIL no grupo de mulheres com GSIL, ao passo que no grupo-comparativo, a prevalência de ASIL foi 2,5%. As ASIL de alto grau foram somente observadas no grupo-estudo, com 4,3% de prevalência. A persistência das GSIL mostrou-se um fator de associação com a presença de ASIL, RP=14,8 [IC(95%) 3,2; 68,2]. A multicentricidade de GSIL também se mostrou um fator relacionado à presença de ASIL, RP= 13,1[IC(95%) 2.7; 63.3]. Concluiu-se que o grupo de mulheres com GSIL persistente e/ou multicêntrica apresentou significativa associação com AS I L / Absrtact: Anal squamous intra-epitheliallesion (ASIL) has been significantly increased in the last decades, mainly among HIV-positive population. It is important to define other risk groups for ASIL, like genital squamous intra-epithelial lesion GSIL positive women. The goal of this study was to verify ASIL prevalence in women with GSIL, by anoscopy and histopathology. In this descriptive cross-sectional study, 291 women were evaluated. They answered a questionary and were submitted to a clinical exam, including anoscopy and biopsies if anal lesions were seen. It was a comparative study among 211 GSIL-positive women, confirmed by cytology, colposcopy and histopatology and 80 GSIL-negative women, confirmed by two consecutives normal Pap smears and normal colposcopy. This study was performed at Servidores do Estado do Rio de Janeiro Hospital Department of Colposcopy; Women's Health Center of the State University of Campinas- UNICAMP-Department of Genital Infectious Diseases and Nossa Senhora da Saúde Hospital - Souza Marques University/Rio de Janeiro Department of Colposcopy. The ASIL prevalence in the two groups was compared Lusing prevalence ratio, calculated with 95% confidence interval, p-value and stepwise logistic regression analysis. Comparing ASIL prevalence in the two groups, 19.5% ASIL in the GSIL-positive group and 2.5% in the other were found. Ali of high grade ASIL were only observed in the GSIL-positive group (4.3%). The persistence of GSIL was associated with ASIL, PR=14,8 [IC (95%) 3,2; 68,2]. The multicentric GSIL was also related to ASIL, PR=13.1 [IC (95%) (2.7; 63.3)]. In conclusion, persistent and multicentric GSI L showed significative association with ASIL / Doutorado / Tocoginecologia / Doutor em Tocoginecologia

Orientadores: Luiz Carlos Zeferino, Sophie Françoise Mauricette Derchain / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:31:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_SilviaHelenaRabelodos_D.pdf: 2847930 bytes, checksum: ef79106a00058e70bc6551562ff48111 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivo: Analisar a associação do tipo de HPV e das variantes dos HPV 16 e 18 com lesão neoplásica do colo uterino em mulheres cujo exame citológico apresenta anormalidades em células glandulares endocervicais. Métodos: Este estudo de corte transversal analítico incluiu 160 mulheres com citologia cervical de rastreamento, sendo 93 mulheres com células glandulares atípicas sem outras especificações (AGC-SOE), 18 com células glandulares atípicas provavelmente neoplásicas (AGC-NEO), 35 com por AGC associado a lesões intra-epitelias escamosas de alto grau (HSIL) e 14 com adenocarcinoma in situ (AIS). No primeiro atendimento foi colhido material cervicovaginal para pesquisa de DNA de HPV, segundo esfregaço cervical, e foi realizada colposcopia em todas as mulheres. Biópsias e/ou conizações foram realizadas em 129 pacientes. Trinta e uma mulheres encaminhadas por diagnóstico citológico de AGC-SOE com colposcopia normal e segunda citologia com resultado negativo foram seguidas a cada quatro meses com exames citológicos e colposcópicos. Todas as mulheres incluídas foram submetidas a ecografia pélvica. A pesquisa de DNA-HPV foi feita por PCR, utilizando os primers PGMY09 e PGMY11, e a genotipagem foi realizada através de hibridização reversa em pontos. A determinação das variantes de HPV 16 e HPV 18 foi realizada através de sequenciamento. Resultados: Dos 129 casos com avaliação histológica, 75 (58%%) mostraram diagnósticos neoplásicos (intra-epiteliais e invasivos). A maioria dos diagnósticos neoplásicos foi categorizada como de origem escamosa (77%). A prevalência total de HPV foi de 43%. O HPV 16 foi o mais prevalente e esteve significantemente associado a neoplasias escamosas (NIC 2 ou lesão mais grave) e neoplasias glandulares (AIS ou lesão mais grave). O HPV 18 foi o segundo tipo mais prevalente e esteve significativamente associado a neoplasias glandulares. Maior diversidade na distribuição dos tipos foi observada nos diagnósticos histológicos de NIC 2 e NIC 3. As neoplasias glandulares foram exclusivamente relacionadas aos tipos 16 e 18. O estudo de variantes incluiu 24 casos HPV 16 positivos e 6 casos HPV 18 positivos. Variantes Européias e Não Européias (Ásia-Americanas) foram detectadas, respectivamente, em 62% e 38% dos casos HPV 16 positivos. Variantes Européias de HPV 18 também foram mais prevalentes (3/6). Neoplasias glandulares foram mais prevalentes e significativamente associadas a Variantes Ásia-Americas de HPV 16. Variantes Européias de HPV 16 foram mais prevalentes em neoplasias escamosas. Neoplasias glandulares também foram associadas aos HPV 18, mas a análise de suas variantes não foi conclusiva, devido ao pequeno número de casos. Conclusão: Os HPV estão associados ao tipo histológico de neoplasia cervical detectada em mulheres com anormalidades em células glandulares endocervicais, contudo a identificação dos tipos não é suficiente para explicar o padrão histológico, uma vez que o HPV 16 pode estar associado com neoplasias escamosas e glandulares. A associação do HPV 16 com neoplasias escamosas e glandulares é explicada por suas variantes. Variantes Ásia-Americanas associam-se às neoplasias glandulares, enquanto variantes européias associam-se às neoplasias escamosas / Abstract: Objective: To analyze the association between the different genotypes of oncogenic human papillomavirus (HPV) and HPV 16 and HPV 18 variants with histological diagnosis in women referred for glandular endocervical abnormalities in their cervical smear. Methods: This cross sectional study included a series of 160 women. Atypical Glandular Cells (AGC) not otherwise specification (NOS), AGC favor neoplastic (FN) were the only diagnosis in 93 and 18 women respectively. Thirty five patients had both AGC and high grade squamous intraepithelial lesion (HSIL). Fourteen women were diagnosed as adenocarcinoma in situ (AIS). All women were subjected a collection of sample for HPV-DNA testing and second cervical smear and underwent a colposcopic examination. Biopsies or conizations were done in 129 due to colposcopically abnormal area or second abnormal cervical smear result. In 31 women, referred due to AGC-NOS at screening cervical smear with adequate and normal colposcopy and second cervical smear results, follow up each 4 months with new cytology and colposcopy were done and the final diagnosis was considered as non-neoplastic. All women had pelvic ultrasound examination. The HPV-DNA testing was done by PCR using the set of PGMY09 e PGMY11 with genotyping by linear array hybridization. The molecular variants of HPV 16 and 18 were tested using PCR sequencing. Results: Among 129 women with histologic evaluation, 75 (58%) revealed neoplastic diagnoses (intraepithelial and invasive); of them the majority (77%) were of squamous cell origin. The overall prevalence of HPV was 43%. HPV 16 was the most prevalent genotype and was significantly associated with squamous neoplasias (CIN 2 or worse) and glandular neoplasias (AIS or worse). HPV 18 was the second most prevalent and was significantly associated with glandular neoplasias. Major diversity on HPV distribution was observed in Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) 2 and CIN 3 histologic diagnosis. The variants study included 24 cases HPV 16 positives and 6 cases HPV 18 positives. European Variants and Asian-American Variants were detected in 62% and 38% of HPV positives cases. European variants of HPV 18 also were more prevalent (3/6). Asian-American HPV 16 variants were significantly associated with glandular neoplasia and European variants were more prevalent in squamous neoplasias. Glandular neoplasias also were associated with HPV18 but in this study the analysis of its variants was not conclusive. Conclusion: The HPV genotypes are associated with histological type of the cervical neoplasia, but HPV genotypes is not enough to explain at whole, since the HPV 16 were associated with squamous and glandular neoplasia. The association of HPV 16 with squamous or glandular neoplasia is explained by its variants. Squamous neoplasias were nearly related to HPV 16 European variants and glandular neoplasias were related to HPV 16 Asian-American / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Orientadores: Miriam A. S. Trevisan, Jose Vassallo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T03:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_ChristianePiennaSoares_D.pdf: 4700219 bytes, checksum: cf712946f0d1470edb7a32bedbead0d8 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O papiloma vírus humano (HPV) tem sido descrito como um fator de risco para o desenvolvimento de lesões benignas e malignas no esôfago, sendo os tipos mais frequentes os HPVs 6, 11, 16, 18, 31, 33 e 35. No presente trabalho, selecionamos 49 casos de biópsias endoscópicas de esôfago coradas por hematoxilina-eosina. que continham graus variados de atipia coilocitótica (coilocitose, discariose, bi ou multinucleação). Esses casos foram submetidos às reações de imuno-histoquímica e hibridização " in situ " com sondas biotiniladas 6/11, 16/18, 31/33/35 (Kit Viratype-DIGENE). Os resultados para os casos estudados foram negativos, com controles positivos de forte sinal, por ambos os métodos. Assim, é possível que as alterações morfológicas do epitélio escamoso do esôfago possam não ser de origem viral e outros fatores devem ser considerados como potencialmente responsáveis por essas alterações / Abstract: Human Papillomavirus has been describe as a risk factor to benign and malign esophageallesions. The HPV s eommons in esophageal epithelium are 6, 11, 16, 18, 31, 33 and 35. We had select fourty nine endoscopie biopsies which histologic analysis had show koilocytotic atypia in different grades. We has use immunohistochemical and in situ hibridization reactions with commercially biotynilated probes 6/11, 16/18 and 31/33/35 (Viratype probe set.- DIGENE). We couldn't find HPV's antigen or DNA in any fourty nine samples. Then, our studies suggest other factors to development of esophageal tissues alterations / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas