Introdução: A cicatrização subconjuntival excessiva é a maior causa de falha cirúrgica no glaucoma. Uma vez que o ácido rosmarínico apresenta ação antifibrótica, é interessante avaliar seu uso como adjuvante na cirurgia filtrante do glaucoma. Objetivos: Comparar os achados clínicos e histopatológicos e a expressão gênica de fatores relacionados à cicatrização tecidual entre coelhos submetidos à cirurgia antiglaucomatosa experimental (CAGE) e tratados com injeções subconjuntivais de ácido rosmarínico ou com injeções de solução salina 0,9%. Material e Métodos: Estudo experimental intervencionista, do tipo ensaio clínico randomizado, no qual 41 coelhos New Zealand foram submetidos à CAGE no olho direito e divididos em dois grupos de tratamento: grupo A (n=21), tratados com injeções subconjuntivais de 0,1 ml de solução salina 0,9% e grupo B (n=20), tratados com injeções subconjuntivais de 0,1 ml de ácido rosmarínico 15 mg/ml (3 dias antes da cirurgia, ao final desta e a cada 3 dias até a eutanásia). Os efeitos do tratamento foram avaliados com cinco dias (grupos A1 e B1) e com 15 dias (grupos A2 e B2) por meio da avaliação da pressão intraocular (PIO) com Tonopen, de aspectos da ampola filtrante com base no Moorfields Bleb Grading System, do estudo histopatológico (contagem de neutrófilos/campo, vasos/campo, densidade de colágeno corado com Sirius Red, imuno-histoquímica anti--actina e anti-VEGF) e do RT-PCR (colágeno tipo 1 alfa-1 COL1A1 e TGF-2). As fotomicrografias foram avaliadas quantitativamente com o software ImageJ® 1.36 (Sirius Red, -actina e VEGF) e os dados comparados por testes não paramétricos, sendo p<0,05 considerado estatisticamente significativo. Resultados: Não houve diferença significativa nas comparações da PIO entre os grupos. Nas avaliações da ampola filtrante, apenas o grupo B2 apresentou maiores escores de área central (p=0,0004), área máxima (p=0,0007) e altura (p=0,0239). Os grupos B1 (p<0,0001) e B2 (p=0,0011) apresentaram escores significativamente menores no parâmetro vascularização que os seus respectivos controles. Houve diminuição significativa de neutrófilos/campo somente no grupo B2 (p=0,0159). O número de vasos/campo também foi significativamente menor nos grupos B1 e B2, em comparação aos seus respectivos controles (p=0,0079 e p=0,0345, respectivamente). Não foram observadas diferenças significativas na coloração com Sirius Red e na imuno-histoquímica para anti--actina entre os grupos, porém o grupo B1 apresentou menor marcação anti-VEGF (p=0,0190). As análises por RT-PCR para TGF-2 e COL1A1 não demonstraram diferenças entre os grupos, com exceção do grupo B2, que apresentou maior expressão de COL1A1 quando comparado ao seu controle (p=0,0159). Conclusões: Os resultados apontaram para os potenciais efeitos anti-inflamatórios e moduladores da neovascularização do ácido rosmarínico em cirurgias antiglaucomatosas. Apesar do grupo B demonstrar melhor aspecto clínico (exceto a PIO, que não demonstrou diferença entre os grupos), a ação antifibrótica do ácido rosmarínico não pôde ser comprovada. / Introduction: Excessive subconjunctival scarring is a major cause of surgical failure in glaucoma. Since rosmarinic acid has antifibrotic action, we evaluate its usage as an adjunctive treatment to glaucoma filtration surgery. Objectives: To compare clinical, histopathological and expression of factors related to the healing process between rabbit underwent experimental glaucoma surgery (EGS) and treated with subconjunctival injections of rosmarinic acid or with saline solution 0.9%. Methods: Interventional experimental study (randomized clinical trial) in which 41 New Zealand rabbits were submitted to EGS in the right eye and divided into two treatment groups: group A (n=21) - eyes treated with subconjunctival injections of 0.1 ml of saline solution 0.9% and B (n=20) - eyes treated with subconjunctival injections of 0.1 ml of rosmarinic acid 15mg/ml (three days prior to surgery, at the end of surgery and every three days until euthanasia). Treatment effects were assessed after five days (groups A1 and B1) and 15 days (groups A2 and B2) by evaluation of intraocular pressure (IOP) with Tonopen and bleb characteristics based on the Moorfields Bleb Grading System, as well as histopathology analysis (neutrophil/field count; vessels/field count; collagen density after stained with Sirius Red; and anti--actin and anti-VEGF immunohistochemistry) and by RT-PCR (for collagen type 1 alpha 1 - COL1A1 and TGF-2). The photomicrographs were evaluated quantitatively with ImageJ® 1.36 software (Sirius Red, -actin and VEGF) and data were compared through non-parametric tests, considering p<0.05 as statistically significant. Results: No significant difference was observed in IOP measurements between groups. Group B2 displayed significant higher scores of bleb central area (p=0.0004), maximum area (p=0.0007) and height (p=0.0239). Both B1 (p<0.0001) and B2 (p=0.0011) groups presented significantly lower vascularization scores than their respective controls. A significant decrease in neutrophils/field counting was observed only in group B2 (p=0.0159), however vessels/field counting was significantly lower in groups B1 and B2, compared to their controls (p=0.0079 and p=0.0345, respectively). No significant differences were observed in the collagen staining with Sirius Red and in the anti--actin immunohistochemistry between the all groups comparison, but group B1 displayed lower anti-VEGF measurement (p=0.0190) than group A1. RT-PCR analysis for TGF-2 and COL1A1 showed no difference between groups, except by group B2, which presented higher expression of COL1A1, compared to its control (p=0.0159). Conclusions: The findings point to the potential anti-inflammatory and anti-neovascular effects of rosmarinic acid in glaucoma surgery. Although group B show better clinical aspect (except IOP, which showed no difference between groups), the antifibrotic action of rosmarinic acid could not be proved.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LARA CANDIDA DE SOUSA MACHADO.pdf: 3187014 bytes, checksum: c478f4284cb57a232b5b7079c413a8db (MD5) Previous issue date: 2012-12-19 / INTRODUCTION: The herbal and other natural products are widely used therapeutic resources to aid the healing of skin wounds of early civilization to the present. Among the plants used for treatment of infected wounds, the Croton urucurana stands out for being a healing plant that accelerates the healing process. OBJECTIVE: To evaluate the healing activity of extracts of the stem bark of Croton urucurana skin wounds in mice, induced by Bothrops moojeni. METHODOLOGY: The ethanolic extract from the stem bark of Croton urucurana (EECC) obtained through a maceration dynamic process, was diluted in saline to obtain concentrations of 10%, 20% and 40%. It was stablished a pilot experiment to determine the minimum dose necrotizing using mice (n = 5) of Swiss lineage, males with body mass index ranging from 18 to 25g. To evaluate the healing activity, it was performed in mice (n = 60) of the same type and with the same characteristics were randomly divided into five groups of twelve animals each (n = 12): GC - Control Group, GS - Group Soro, GT1 - Group Treatment with 10% EECC, GT2 - Group Treatment EECC to 20% and GT3 - Group Treatment EECC to 40%. For induction of the wound, the animals were anesthetized intramuscularly with sodium thiopental at the dose of 40mg/kg. After shaving the dorsum of the mice,it was inoculated intradermally 120&#956;g/50µL of saline in order to obtain a necrose. RESULTS: The minimum necrotic dose of venom from Bothrops moojeni in mice is 120 mg of venom diluted into 50 uL intradermally saline in the dorsal region. There was a significant decrease of skin wounds of the GT1 group in 7th and 12th days compared to the GC. There was a significant decrease of skin wounds of the group GT2 and GT3 on the 12th day compared to the GC.The Histological analysis of the groups GT1, GT2 and GT3 allows to conclude that the skin wounds show a process of evident scarring at 12 days of treatment compared to the GC, by stimulating angiogenesis, neoformation of hair follicles and fibrous repair. CONCLUSION: The skin wounds in mice induced by the venom of Bothrops moojeni when treated with EECC (10%, 20% and 40%), have a more rapid healing process in the control group. / INTRODUÇÃO: As plantas medicinais e outros produtos naturais são recursos terapêuticos amplamente utilizados no auxílio da cicatrização de feridas cutâneas dos primórdios da civilização até a atualidade. Dentre as plantas utilizadas para tratamento de feridas infectadas, a Croton urucurana se destaca, por ser uma planta com poderes curativos e que aceleram o processo de cicatrização. OBJETIVO: Avaliar a atividade cicatrizante de extratos das cascas do caule de Croton urucurana nas feridas cutâneas de camundongos, induzidas pelo veneno de Bothrops moojeni. METODOLOGIA: O extrato etanólico das cascas do caule da Croton urucurana (EECC) obtido através de um processo de maceração dinâmica, foi diluído em solução salina para obtenção das concentrações de 10%, 20% e 40%. Foi realizado um experimento piloto para determinação da dose mínima necrosante, utilizando camundongos (n=5) da linhagem Swiss, machos, com massa corpórea variando de 18 a 25g. Para avaliação da atividade cicatrizante foram utilizados camundongos (n=60) da mesma espécie e com as mesmas características, distribuídos aleatoriamente em cinco grupos de doze animais cada (n=12): GC Grupo Controle, GS Grupo Soro, GT1 Grupo Tratamento com EECC a 10%, GT2 Grupo Tratamento com EECC a 20% e GT3 Grupo Tratamento com EECC a 40%. Para indução da ferida, os animais foram anestesiados via intramuscular com tiopental sódico na dose de 40 mg/Kg. Após a tricotomia no dorso do camundongo, foi inoculado intradermicamente 120 µg/50 µL de salina, afim de se obter uma necrose.RESULTADOS: A dose mínima necrosante do veneno de serpente Bothrops moojeni em camundongo é de 120 µg de peçonha diluída em 50 µL salina intradermicamente da região dorsal. Houve retração significativa das feridas cutâneas do grupo GT1 nos dias 7º e 12º em relação ao grupo GC. Houve retração significativa das feridas cutâneas do grupo GT2 e GT3 no 12º dia em relação ao grupo GC. A análise histológica dos grupos GT1, GT2 e GT3 permitem concluir que as feridas cutâneas apresentam processo de cicatrizações evidentes em 12 dias de tratamento em relação ao grupo GC, por estimular a angiogênese, neoformação dos folículos pilosos e reparação fibrosa. CONCLUSÃO: As feridas cutâneas em camundongos induzidos pela peçonha de Bothrops moojeni quando tratadas com EECC (10%, 20% e 40%), apresentam um processo de cicatrização mais acelerado em relação ao grupo controle.

Uma caracterização bioquímica eficiente da cicatrização das feridas por queimadura pode melhorar a rotina clínica para a ajustar os tratamento dos pacientes. Considerando a dificuldade de monitoramento de cicatrização, a espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier acoplado com o acessório de Reflexão Total Atenuada (ATR-FTIR) é uma técnica analítica a qual tem demonstrado capacidade de prover biomarcadores espectrais no materiais biológicos. Esse estudo avaliou a capacidade de usar ATR-FTIR para classificar a pele queimada com o intuito de monitorar o reparo tecidual em pacientes. Ratos Wistar com pele queimada foram avaliados pela espectroscopia ATR-FTIR nos dias 3, 7, 14 e 21 após a queimadura e comparados com amostras de grupos sadios. Os espectros obtidos foram separados nas regiões entre 900 a 1800 cm-1 e entre 2800 a 3000 cm-1 para posterior adequação quimiométrica. Avaliou-se as amplitudes das derivadas de segunda ordem dos espectros como parâmetro de discriminação, nos quais demonstraram diferenças significativas para os grupos não queimados com controle e entre grupos de queimadura usando Glicogênio (1030 cm-1), Amida I (1628 cm-1), Amida II (1514 cm-1), Colágeno em 1281 cm-1 e Colágeno em 1336 cm-1. Esses resultados indicam que ATR-FTIR é sensível para detectar os estágios de reparo tecidual e pode futuramente ser um instrumento auxiliar para a rotina clínica. / Efficient biochemical characterization of burn wound healing stages can improve clinical routine to adjust the patient treatment. Considering the difficulty to monitoring wound healing, the Fourier Transform Infrared spectroscopy coupled with Attenuated Total Reflectance (ATR-FTIR) is an analytical technique that has capability to provide spectral biomarkers in biological materials. This study aims to evaluate the classification feasibility of ATR-FTIR in burned skin to follow the regenerative process in patients. Wistar rat burn tissues were evaluated by ATR-FTIR spectroscopy at 3, 7, 14, 21 days after burn and compared with the healthy group samples. The spectra was separated in the region 900 to 1800 cm-1 and the region 2800 to 3000 cm-1 for further chemometric adequation. The second derivative of amplitude was applied for discrimination which results demonstrated differences to control with non-wounded groups and between non-wounded using Glycogen (1030 cm-1), Amide I (1628 cm-1), Amide II (1514 cm-1), Colllagen in 1281 cm-1 and Collagen in 1336 cm-1. These findings indicate that ATR-FTIR is suitable to detect the burn wound healing stages and in the future can be auxiliary instrument for clinical routine.

Introdução: Feridas de difícil cicatrização em diabéticos são associadas ao estresse oxidativo. O mel de abelhas tem sido descrito como potencial tratamento pela atividade antioxidante. Objetivo: Avaliar a atividade biológica na cicatrização, do mel de Apis Mellífera de Eucalipto (RS-Brasil) (ME) em comparação com o de Manuka (Nova Zelândia) (MK) como padrão internacional e caracterizar sua físico-química e capacidade antioxidante. Métodos: Estudo experimental com camundongos Swiss induzidos ao diabetes com Aloxana, que receberam tratamento tópico com mel (ME e MK) previamente caracterizada, durante 15 dias e foram avaliados na cinética da cicatrização e morfologia tecidual. Resultados: ME e MK aceleraram a cicatrização dos animais diabéticos de 18 dias para 15. A morfologia da ferida no dia 3 teve um melhor aspecto nos animais tratados. MK teve maior teor de ácidos fenólicos; porém a atividade antioxidante de ambos meis foi alta. Conclusão: ME e MK promovem a cicatrização de maneira similar provavelmente pelo efeito antioxidante e o conteúdo de ácidos fenólicos. / Background: A difficult-to-heal wound in diabetic patients has been associated with the oxidative stress on tissue. Bee honey has been described as a potential treatment by the antioxidant activity. Aim: To evaluate the biological activity in wound healing of Apis Mellífera honey from Eucalyptus (RS-Brazil) (ME) in comparison with Manukas honey (New Zealand) (MK) as an international standard, and characterize its physical-chemistry properties and antioxidant capacity. Methods: Experimental study using Swiss mice induced to diabetes with Aloxana, who received topical treatment with previously characterized honey (ME e MK), during 15 days. Were evaluated the wound healing kinetics and tissue morphology. Results: ME and MK accelerated the diabetic animals wound healing from 18 days to 15. The morphology of wound at 3rd day had a better aspect in treated animals. MK had higher level of phenolic acids; however the antioxidant activity of both honeys were high. Conclusion: ME and MK improve wound healing on a similar way, probably because of the antioxidant effect and phenolic acids content.

Extensas lesões na pele expõem o organismo a uma série de agentes agressores, dificultando a reparação espontânea da pele e muitas vezes levando o paciente a óbito. Nesse caso, se não houver áreas doadoras de autoenxertos, pode se utilizar aloenxertos. Neste tipo de enxerto, os tecidos são processados em Bancos de Tecidos, onde se pode empregar a radiação ionizante como método de esterilização. De acordo com estudos in vitro, a radiação gama, em doses acima de 25 kGy, provoca desestruturação das fibrilas de colágeno I da derme conservada em glicerol na concentração de 85%, reduzindo significativamente a resistência à tração dos tecidos irradiados. Observações clínicas sugerem, ainda, integração mais rápida da derme humana, conservada em glicerol e submetida à radiação ionizante, com os tecidos do receptor, quando comparada à derme somente conservada em glicerol. Para verificar se essas alterações relatadas in vitro, comprometeriam o emprego in vivo, de amostras de pele humana, submetidas à radiação gama, foram realizados transplantes de peles humanas, irradiadas ou não, em camundongos Nude. A pele dos camundongos foi submetida à análise macroscópica, imagens de tomografia de coerência óptica, histologia e ensaios biomecânicos. Foi possível concluir que os enxertos irradiados a 25 kGy promoveram uma contração inicial maior, mas essa alteração não interferiu na dimensão da área final de reparação, ainda, os animais que receberam esses enxertos apresentaram mais rápido fechamento da ferida em comparação com os demais, além disso o emprego de enxertos irradiados (25 e 50 kGy) promoveu a formação de um processo de reparação mais organizado e sem efeitos significantes nas propriedades biomecânicas. / Extensive skin lesions expose the body to damaging agents, which makes spontaneous regeneration difficult and, in many cases, leads patient to death. In such cases, if there are no donating areas for autograft, allografts can be used. In this type of graft, tissue is processed in tissue banks, where it can be subjected to radiosterilization. According to in vitro studies, gamma radiation, in doses higher than 25 kGy, induces alterations in skin preserved in glycerol at 85%, reducing the tensile strength of irradiated tissue. Clinical observation also suggests faster integration of such graft with the receptors tissue. In order to assess if the alterations observed in vitro, would compromise in vivo use, transplants of human tissue, irradiated or not, were performed in Nude mice. The skin of the mice was subjected to macroscopic analysis, optical coherence tomography imaging, histological and biomechanical assays. It was possible to conclude that grafts irradiated with 25 kGy promoted greater initial contraction, without alteration of the final dimensions of the repair area, also displaying a faster closing of the wound. Moreover, the use of irradiated grafts (25 and 50 kGy) enabled the formation of a more organized healing process without significant effects on biomechanical properties.

A reconstrução de defeitos ósseos críticos é alvo de inúmeras pesquisas em cirurgia bucomaxilofacial. Tais pesquisas visam, de maneira geral, a optimização da neoformação óssea e a eliminação dos procedimentos de remoção de osso autógeno para reconstrução. Os modelos animais têm sido a metodologia mais utilizada para avaliar a eficácia de novas substâncias e biomateriais na reparação óssea. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência de um flavonóide, o icariin, na reparação óssea de defeitos críticos confeccionados na calvária de ratos Wistar. Um defeito ósseo crítico circular foi confeccionado em 40 calvarias de ratos por meio de uma broca trefina de 8 mm de diâmetro sob irrigação salina constante. Ao final dos procedimentos cirúrgicos, os animais foram divididos, aleatoriamente, em grupo teste (n=20), que recebeu o icariin, na dose de 125 mg/kg de peso e grupo controle (n=20), que recebeu soro fisiológico. Ambas as substâncias foram administradas por meio de gavagem até o dia da eutanásia. Ao final de cada período observacional de 7, 14, 21 e 42 dias, 5 animais de cada grupo foram eutanasiados e as amostras da calvária foram removidas e mantidas em formol 10% por 48 horas. As calvárias foram radiografadas e, após descalcificação, foram submetidas à avaliação histológica com coloração hematoxilina-eosina sob microscópio de luz. Os defeitos foram analisados considerando a diminuição da área do defeito na imagem radiográfica, as características de reparo ósseo e a osteogênese na região da ferida. Os resultados da análise radiográfica mostraram que a área do defeito ósseo no grupo teste foi significativamente menor que no grupo controle em todos os períodos observacionais. A avaliação histológica mostrou um aumento na neoformação óssea do grupo teste (p=0,02). A histomorfometria demonstrou osteogênese significante no grupo teste com 7 dias (p=0,021), 14 dias (p=0,014), 21 dias (p=0,021) e 42 dias (p=0,009). Foi possível concluir que o icariin sistêmico induziu uma maior neoformação óssea em defeitos críticos. / Bone critical defect reconstruction is an important target in current oral surgery research. Contemporary research has been searching for osteogenesis optimization to minimize the necessity of using autogenous bone grafts procedures. Animal models have been the widespread methodology to evaluate the effect of different new substances and biomaterials in bone healing. The aim of this study was to assess the influence of systemic daily flavonoid, icariin, in the repair of calvaria critical size defects induced in Wistar rats. A round critical size defect was performed centrally in 40 rats calvaria using an 8mm trephine under sterile saline solution irrigation. After surgery, half the animals, randomly, received by gavage daily doses of 125mg/Kg-icariin (Test Group) till the euthanasia. The other half (Control Group) received the same volume of saline solution. Five animals of each group were euthanized after 7, 14, 21 and 42 days postoperatively. The rats calvaria were removed, fixed in 10% formalin for 48 hours. Calvarias were X-rayed and after decalcification they underwent histological examination with hematoxylin eosin stain under a light microscope. Defects were analyzed considering area diminishing in X-ray image, bone healing characteristics and osteogenesis in the defect region. Results showed that bone defect area in Test Group was significant smaller in all observational periods. Histological evaluation showed an increased expression in bone trabeculae neoformation in Test Group (p=0,02). Histomorphometry demonstrated significant osteogenesis in Test Group at 7 days (p=0,021), 14 days (p=0,014), 21 days (p=0,021) and 42 days (p=0,009). It was concluded that systemic icariin induced a more expressive bone healing in critical size defects in rats.

Os fatores bioquímicos de cronicidade de úlceras venosas ainda não estão totalmente esclarecidos, porém, sabe-se que há desequilíbrio entre produção de metaloproteinases de matriz (MMPs) e fatores de inibição tissular de metaloproteinases (TIMPs), metabolismo anormal de colágeno, senescência de fibroblastos e alterações na ação de fatores de crescimentos, tais como fator transformador de crescimento beta (TGF-?). Diante das falhas no processo de reparo tecidual, várias terapias têm sido desenvolvidas com destaque para celulose oxidada regenerada (oxidized regenerated cellulose - ORC)/colágeno e ORC/colágeno/prata cuja função é alterar o microambiente diminuindo MMPs/TIMPs presente no leito da ferida. Nesse estudo, objetivamos avaliar o comportamento in vitro de fibroblastos oriundos de leito de úlcera venosa (VUF) na presença de ORC/colágeno, associada ou não à prata, quanto aspectos morfofuncionais celulares e síntese de MMPs, TIMPs, TGF beta, colágeno tipo I e colágeno tipo III. Após padronização do tempo de exposição e concentração de ORC/colágeno e ORC/colágeno/prata, foi realizada avaliação dos sinalizadores de interação celular utilizando-se imunoensaio Multiplex bead-based nos sobrenadantes da cultura de VUFs e imunofluorescência indireta nas células cultivadas. Como resultado, os estímulos ORC2 (correspondente à 2.8 mg/mL) e 4.2 mg/mL (ORC3+Ag) foram os que apresentaram maior homogeneidade proliferativa. A ORC/colágeno interferiu positivamente na síntese de MMP1, já a presença de prata interferiu negativamente na síntese de MMP2, MMP10, MMP13, TIMP1, TIMP 2 e TIMP3 e positivamente no colágeno tipo III, as sínteses de TGFbeta e colágeno tipo I não sofreram interferência dos estímulos. Tais achados sugerem que a presença de celulose oxidada regenerada pode modular a formação de fibrose no leito da ferida. Quando há presença de prata, nota-se tendência anti-inflamatória sobre a célula com maior síntese de colágeno tipo III / The biochemical factors of chronicity of venous ulcers are not yet fully understood, however, it is known that there is imbalance between producing matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibition factors of metalloproteinases (TIMPs), abnormal collagen metabolism, fibroblastic senescence and changes in growth factors action, such as transforming growth factor beta (TGF-?). In the face of failures in the tissue repair process, many therapies have been developed. The use of oxidized regenerated cellulose (ORC)/collagen and ORC/collagen/silver, to modify the microenvironment by decreasing MMPs/TIMPs present in the wound bed, has been emphasized. In the present study, we aimed to evaluate the in vitro behavior of fibroblasts derived from venous ulcer (venous ulcer fibroblasts - VUF) in the presence of ORC/collagen associated or not to silver with regard to cellular morph functional aspects and synthesis of MMPs, TIMPs, TGFbeta, type I and type III collagen. After standardization of the exposure time and concentration of ORC/collagen and ORC/collagen/silver stimulation, an evaluation of cell interaction signaling was performed by using a bead-based multiplex immunoassay in cells supernatants and indirect immunofluorescence in cultured cells. We demonstrated that the ORC2 (corresponding to 2.8 mg/mL) and 4.2 mg/mL (ORC3+Ag) stimuli had the highest proliferative homogeneity. The ORC/collagen interfered positively in the synthesis of MMP1, since the presence of silver interfered negatively in the synthesis of MMP2, MMP10, MMP13, TIMP1, TIMP2 and TIMP3 and positively in type III collagen, the synthesis of TGFbeta and type I collagen did not suffer interference. Such findings suggest that the presence of regenerated oxidized cellulose may modulate the formation of fibrosis in the wound bed. When silver is associated antiinflammatory tendency is observed on fibroblasts with increased type III collagen synthesis

Uma caracterização bioquímica eficiente da cicatrização das feridas por queimadura pode melhorar a rotina clínica para a ajustar os tratamento dos pacientes. Considerando a dificuldade de monitoramento de cicatrização, a espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier acoplado com o acessório de Reflexão Total Atenuada (ATR-FTIR) é uma técnica analítica a qual tem demonstrado capacidade de prover biomarcadores espectrais no materiais biológicos. Esse estudo avaliou a capacidade de usar ATR-FTIR para classificar a pele queimada com o intuito de monitorar o reparo tecidual em pacientes. Ratos Wistar com pele queimada foram avaliados pela espectroscopia ATR-FTIR nos dias 3, 7, 14 e 21 após a queimadura e comparados com amostras de grupos sadios. Os espectros obtidos foram separados nas regiões entre 900 a 1800 cm-1 e entre 2800 a 3000 cm-1 para posterior adequação quimiométrica. Avaliou-se as amplitudes das derivadas de segunda ordem dos espectros como parâmetro de discriminação, nos quais demonstraram diferenças significativas para os grupos não queimados com controle e entre grupos de queimadura usando Glicogênio (1030 cm-1), Amida I (1628 cm-1), Amida II (1514 cm-1), Colágeno em 1281 cm-1 e Colágeno em 1336 cm-1. Esses resultados indicam que ATR-FTIR é sensível para detectar os estágios de reparo tecidual e pode futuramente ser um instrumento auxiliar para a rotina clínica. / Efficient biochemical characterization of burn wound healing stages can improve clinical routine to adjust the patient treatment. Considering the difficulty to monitoring wound healing, the Fourier Transform Infrared spectroscopy coupled with Attenuated Total Reflectance (ATR-FTIR) is an analytical technique that has capability to provide spectral biomarkers in biological materials. This study aims to evaluate the classification feasibility of ATR-FTIR in burned skin to follow the regenerative process in patients. Wistar rat burn tissues were evaluated by ATR-FTIR spectroscopy at 3, 7, 14, 21 days after burn and compared with the healthy group samples. The spectra was separated in the region 900 to 1800 cm-1 and the region 2800 to 3000 cm-1 for further chemometric adequation. The second derivative of amplitude was applied for discrimination which results demonstrated differences to control with non-wounded groups and between non-wounded using Glycogen (1030 cm-1), Amide I (1628 cm-1), Amide II (1514 cm-1), Colllagen in 1281 cm-1 and Collagen in 1336 cm-1. These findings indicate that ATR-FTIR is suitable to detect the burn wound healing stages and in the future can be auxiliary instrument for clinical routine.

Introdução: A cicatrização subconjuntival excessiva é a maior causa de falha cirúrgica no glaucoma. Uma vez que o ácido rosmarínico apresenta ação antifibrótica, é interessante avaliar seu uso como adjuvante na cirurgia filtrante do glaucoma. Objetivos: Comparar os achados clínicos e histopatológicos e a expressão gênica de fatores relacionados à cicatrização tecidual entre coelhos submetidos à cirurgia antiglaucomatosa experimental (CAGE) e tratados com injeções subconjuntivais de ácido rosmarínico ou com injeções de solução salina 0,9%. Material e Métodos: Estudo experimental intervencionista, do tipo ensaio clínico randomizado, no qual 41 coelhos New Zealand foram submetidos à CAGE no olho direito e divididos em dois grupos de tratamento: grupo A (n=21), tratados com injeções subconjuntivais de 0,1 ml de solução salina 0,9% e grupo B (n=20), tratados com injeções subconjuntivais de 0,1 ml de ácido rosmarínico 15 mg/ml (3 dias antes da cirurgia, ao final desta e a cada 3 dias até a eutanásia). Os efeitos do tratamento foram avaliados com cinco dias (grupos A1 e B1) e com 15 dias (grupos A2 e B2) por meio da avaliação da pressão intraocular (PIO) com Tonopen, de aspectos da ampola filtrante com base no Moorfields Bleb Grading System, do estudo histopatológico (contagem de neutrófilos/campo, vasos/campo, densidade de colágeno corado com Sirius Red, imuno-histoquímica anti--actina e anti-VEGF) e do RT-PCR (colágeno tipo 1 alfa-1 COL1A1 e TGF-2). As fotomicrografias foram avaliadas quantitativamente com o software ImageJ® 1.36 (Sirius Red, -actina e VEGF) e os dados comparados por testes não paramétricos, sendo p<0,05 considerado estatisticamente significativo. Resultados: Não houve diferença significativa nas comparações da PIO entre os grupos. Nas avaliações da ampola filtrante, apenas o grupo B2 apresentou maiores escores de área central (p=0,0004), área máxima (p=0,0007) e altura (p=0,0239). Os grupos B1 (p<0,0001) e B2 (p=0,0011) apresentaram escores significativamente menores no parâmetro vascularização que os seus respectivos controles. Houve diminuição significativa de neutrófilos/campo somente no grupo B2 (p=0,0159). O número de vasos/campo também foi significativamente menor nos grupos B1 e B2, em comparação aos seus respectivos controles (p=0,0079 e p=0,0345, respectivamente). Não foram observadas diferenças significativas na coloração com Sirius Red e na imuno-histoquímica para anti--actina entre os grupos, porém o grupo B1 apresentou menor marcação anti-VEGF (p=0,0190). As análises por RT-PCR para TGF-2 e COL1A1 não demonstraram diferenças entre os grupos, com exceção do grupo B2, que apresentou maior expressão de COL1A1 quando comparado ao seu controle (p=0,0159). Conclusões: Os resultados apontaram para os potenciais efeitos anti-inflamatórios e moduladores da neovascularização do ácido rosmarínico em cirurgias antiglaucomatosas. Apesar do grupo B demonstrar melhor aspecto clínico (exceto a PIO, que não demonstrou diferença entre os grupos), a ação antifibrótica do ácido rosmarínico não pôde ser comprovada. / Introduction: Excessive subconjunctival scarring is a major cause of surgical failure in glaucoma. Since rosmarinic acid has antifibrotic action, we evaluate its usage as an adjunctive treatment to glaucoma filtration surgery. Objectives: To compare clinical, histopathological and expression of factors related to the healing process between rabbit underwent experimental glaucoma surgery (EGS) and treated with subconjunctival injections of rosmarinic acid or with saline solution 0.9%. Methods: Interventional experimental study (randomized clinical trial) in which 41 New Zealand rabbits were submitted to EGS in the right eye and divided into two treatment groups: group A (n=21) - eyes treated with subconjunctival injections of 0.1 ml of saline solution 0.9% and B (n=20) - eyes treated with subconjunctival injections of 0.1 ml of rosmarinic acid 15mg/ml (three days prior to surgery, at the end of surgery and every three days until euthanasia). Treatment effects were assessed after five days (groups A1 and B1) and 15 days (groups A2 and B2) by evaluation of intraocular pressure (IOP) with Tonopen and bleb characteristics based on the Moorfields Bleb Grading System, as well as histopathology analysis (neutrophil/field count; vessels/field count; collagen density after stained with Sirius Red; and anti--actin and anti-VEGF immunohistochemistry) and by RT-PCR (for collagen type 1 alpha 1 - COL1A1 and TGF-2). The photomicrographs were evaluated quantitatively with ImageJ® 1.36 software (Sirius Red, -actin and VEGF) and data were compared through non-parametric tests, considering p<0.05 as statistically significant. Results: No significant difference was observed in IOP measurements between groups. Group B2 displayed significant higher scores of bleb central area (p=0.0004), maximum area (p=0.0007) and height (p=0.0239). Both B1 (p<0.0001) and B2 (p=0.0011) groups presented significantly lower vascularization scores than their respective controls. A significant decrease in neutrophils/field counting was observed only in group B2 (p=0.0159), however vessels/field counting was significantly lower in groups B1 and B2, compared to their controls (p=0.0079 and p=0.0345, respectively). No significant differences were observed in the collagen staining with Sirius Red and in the anti--actin immunohistochemistry between the all groups comparison, but group B1 displayed lower anti-VEGF measurement (p=0.0190) than group A1. RT-PCR analysis for TGF-2 and COL1A1 showed no difference between groups, except by group B2, which presented higher expression of COL1A1, compared to its control (p=0.0159). Conclusions: The findings point to the potential anti-inflammatory and anti-neovascular effects of rosmarinic acid in glaucoma surgery. Although group B show better clinical aspect (except IOP, which showed no difference between groups), the antifibrotic action of rosmarinic acid could not be proved.

Este sumário apresenta o resumo e os resultados deste estudo experimental do Fechamento do Coto Duodenal, em um e dois planos de sutura, realizado em 48 cães submetidos a uma gastrectomia Billroth II, com a finalidade de estudar comparativamente, o processo de cicatrização, macro e microscópico da sutura deste Coto. Os aspectos mais relevantes deste estudo de cicatrização de feridas macroscópicas e microscópicas no coto duodenal foram os seguintes: A) Estudo macroscópico: Com o objetivo de realizar um estudo macroscópico de fechamento do coto duodenal, foi realizada uma gastrectomia BII, em 48 cães, divididos em dois grupos: Grupo 1 - composto por 24 cães em que a sutura do coto duodenal foi realizada em um plano extra-mucoso. Estes animais foram divididos em dois subgrupos de 12 animais cada: i1 - cães sacrificados no período pós-operatório imediato, ou seja, no primeiro, quarto e sétimo dia após a operação; e M1 - cães sacrificados em um período pós-operatório mais tardio, ou seja, no décimo quarto, vigésimo primeiro e vigésimo oitavo dia, após a operação. Grupo 2 - Composto por 24 animais, em que a sutura do coto duodenal foi realizada em 2 planos (total e seromuscular). Também estes animais foram distribuídos em subgrupos, i2 e M2, de forma idêntica como no Grupo 1. Um estudo comparativo foi feito quanto aos resultados de fechamento do coto duodenal em 1 e 2 planos, levando em consideração seus aspectos macroscópicos, obtendo-se as seguintes conclusões: o Em nenhum dos cães, em ambos os grupos, ocorreu deiscência do coto duodenal ou quaisquer outras complicações pós-operatórias; o O diâmetro externo do coto duodenal ao nível da sutura foi significativamente maior no grupo com 2 planos de sutura. No entanto, a 5 e 10 cm distalmente à sutura do coto, esta medida foi semelhante em ambos os grupos. o Aderências ao coto duodenal foram semelhantes em ambos os métodos de sutura, exceto por uma incidência significativamente maior de aderências de epíplon no grupo com um plano de sutura, durante os primeiros 7 dias. o A inflamação da mucosa foi significativamente maior no grupo com 2 planos de sutura, durante os primeiros 7 dias; o O esporão formado no fechamento do coto em 2 planos de sutura foi significativamente maior que o formado em um plano de sutura. o A distância entre a superfície mucosa do coto duodenal e a papila maior e papila menor do duodeno, foi significativamente maior nos cotos fechados com 1 plano de sutura. B) O estudo histológico: Um estudo histológico de fechamento do coto duodenal foi feito, após gastrectomia Billroth II em 48 cães, divididos em dois grupos iguais. No Grupo 1, o fechamento foi realizada em um plano, enquanto no Grupo 2 foi feito em dois planos (total e seromuscular). Em cada grupo, os animais foram divididos em dois subgrupos; i1 - cães sacrificados no início do período pós-operatório, ou seja, no primeiro, quarto e sétimo dias; e M1 - cães sacrificados no pós-operatório tardio, ou seja, no décimo quarto, vigésimo primeiro e vigésimo oitavo dia. Não houve um único caso de deiscência em qualquer animal. As conclusões relativas aos aspectos histológicos mostraram os seguintes aspectos: o Houve um esporão invertido para o lúmen do intestino, em todos os animais do grupo 2, enquanto que um pseudoesporão foi observado em apenas 37% nos animais do Grupo 1 ; o Sinais inflamatórios agudos foram mais intensos no grupo 2, na primeira semana de pós-operatório; o A formação de neofibrose do tecido conjuntivo e a regeneração da \"muscularis mucosae\" foi semelhante nos dois grupos. No entanto, a regeneração da mucosa ocorreu mais precocemente no grupo 1 , ao passo que a regeneração das fibras musculares ocorreu mais precocemente no grupo 2 / An experimental study of duodenal stump closure in one and two suture layers was performed in 48 dogs submitted to a Billroth II Gastrectomy, in order to study comparatively Macroscopic and Histological wound healing aspects. The most relevant aspects of this Macroscopic and Histological wound healing study in the duodenal stump, were the following ones: A) Macroscopic study: A comparative study was made as to the results of duodenal stump closure in 1 and 2 layers, taking in consideration its macroscopic aspects. Billroth II gastrectomy was performed in 48 dogs divided in two groups: a. Group 1 - consisted of 24 dogs in which the duodenal stump suture was performed in one extra-mucous layer. These animals were distributed into 2 subgroups of 12 animals each: i1 - dogs sacrificed in the early postoperative period, that is, on the first, fourth and seventh day after the operation; and M1 - dogs sacrificed at a later postoperative period, that is, on the fourteenth, twenty-first and twenty-eighth day after the operation. b. Group 2 - consisted of 24 dogs, in which the suture of the duodenal stump was performed in 2 layers (total and seromuscular ones). Also these animals were distributed in i2 and M2 sub-groups, identically as in group 1. The following conclusions were obtained, concerning the macroscopic aspects: o Dehiscence of the duodenal stump or any other postoperative complications occurred in none of the dogs in both groups; o The external diameter of the duodenal stump at the level of the suture was significantly larger in the group with 2 suture layers. However, at 5 and 10 cm distally from the suture, this measure was similar in both groups. o Adherences to the duodenal stump were similar in both suturing methods, except for a significantly higher incidence of epiplon adherence in the 1 layer group during the first 7 days. o Mucosal inflammation was significantly greater in the 2 suture layers group during the first 7 days; o The spurs formed in the 2 layers stump closure was significantly larger than that formed in 1 layer suture. o The distance from the mucosal surface of the stump suture to the Major and Minor papilla of the duodenum was significantly greater in the stumps closed with 1 layer sutures. B) Histological study: A histological study of duodenal stump closure was made, following a Billroth II gastrectomy in 48 dogs, divided in two equal groups (1 and 2) and its subgroups (i1 and M1; i2 and M2), as mentioned above. The conclusions concerning to histological aspects showed the following characteristics: o There was an inverted spur toward the lumen of the bowel, in all group 2 animals, whereas a pseudo- spur was also observed in only 37% in group 1 animals; o Acute inflammatory signs were more intense in group 2 in the first week of recovery; o The formation of young connective tissue fibrosis and muscularis mucosae fibers regeneration was similar in both groups. However, mucosal regeneration occurred earlier in group 1, while regeneration of muscle fibers occurred more precociously in group 2