INTRODUÇÃO: A endomiocardiofibrose (EMF) é uma doença típica de países tropicais, na qual ocorre a deposição de uma capa fibrosa na região endomiocárdica com graves consequências clínicas. A patogenia da EMF ainda não foi elucidada, mas uma das principais hipóteses etiológicas sugere que a EMF seja consequência de um processo inflamatório crônico com envolvimento de respostas imunes Th2 pós-infestação helmíntica, mediada por eosinófilos nas fases iniciais da doença. Neste estudo avaliamos o perfil da resposta imune e inflamatória, assim como o perfil de proteínas expressas no endomiocárdio afetado, para compreender melhor os mecanismos envolvidos na patogênese da EMF. MÉTODOS: Foram coletadas amostras de plasma e soro de pacientes com diagnóstico de EMF e de indivíduos saudáveis, para dosagens de 6 citocinas plasmáticas do perfil Th1/Th2, Proteína C Reativa ultrassensível (PCRus), IgE total e IgE específico contra aero-alérgenos prevalentes e alérgenos de helmintos. A análise proteômica do endomiocárdio afetado de quatro pacientes com EMF submetidos à ressecção cirúrgica da fibrose, levou à identificação por espectrometria de massas, de proteínas separadas previamente por gel 1D e 2D. Análises in silico de vias funcionais e redes ligando as proteínas identificadas também foram realizadas. Eosinofilia em sangue periférico, assim como dados clínicos e ecocardiográficos, foram avaliados retrospectivamente. RESULTADOS: Foram selecionados 27 pacientes em estágio avançado da EMF, portadores de disfunção diastólica e/ou valvar. Todas as amostras de plasma analisadas apresentaram níveis detectáveis de pelo menos uma das citocinas avaliadas. As citocinas IL-6, TNF-?, IL-10 e IL-4 foram detectadas em pelo menos 74% das amostras, sendo que os níveis de IL-6, TNF-? e IL-10 se apresentaram significantemente elevados em comparação com os detectados nos indivíduos saudáveis. Foi observada correlação positiva entre os níveis de todas as citocinas avaliadas. Apenas 33% dos pacientes apresentaram algum episódio isolado de eosinofilia periférica ao longo do tempo, sendo que 11% apresentaram hipereosinofilia. Os níveis de IgE total foram semelhantes aos observados na população controle. A análise proteômica permitiu identificar 140 proteínas distintas no tecido endomiocárdico, das quais 18 eram provenientes da matriz extracelular. As análises in silico indicaram IL-6 e TNF-? como dois dos principais indutores da expressão das proteínas identificadas e a principal via canônica envolvida nas proteínas identificadas foi a: \"Resposta de Fase Aguda\". Coincidentemente, os níveis de PCRus encontraram-se significativamente aumentados nos portadores de EMF. CONCLUSÕES: Elevados níveis de citocinas pró e anti-inflamatórias e de PCRus sugerem a presença de perfil inflamatório misto (Th1/Th2) nas fases avançadas da patogênese da EMF. A pouca expressão da eosinofilia descarta sua participação ativa na patogênese da fase avançada da doença, mas não é possível excluir sua participação nas fases iniciais. Nossos dados permitem levantar a hipótese que os níveis elevados de citocinas inflamatórias modulem a expressão de proteínas- incluindo as de fase aguda- no tecido endomiocárdico de pacientes portadores de EMF / INTRODUCTION: Endomyocardial fibrosis (EMF) is a typical disease in tropical countries, characterized by the fibrous deposition in the endomyocardium, with severe clinical manifestations. EMF pathogenesis is still unclear, but one of the major hypothesis suggests that EMF could be a consequence of a chronic inflammatory process with possible involvement of a Th2 immune responses after helminthiasis, mediated by eosinophils, which could contribute to pathogenesis in the early stages of the disease. In this study, we evaluated the inflammatory response profile and the protein expression profile of the affected endomyocardium, to understand the mechanisms involved in this pathogenesis. METHODS: Plasma and serum samples were collected from the 27 patients diagnosed with advanced stage EMFand from healthy controls, to mensured plasma levels of 6 cytokines belonging to the Th1/Th2 cytokine profiles, ultrasensitive C Reactive Protein (CRP), total and allergen-specific serum IgE against prevalent and helminthic allergens. Proteomic analysis of tissue samples obtained from 4 EMF patients submitted to surgical resection of affected endomyocardial tissue allowed the identification of proteins by mass spectrometry, after separation by 1D and 2D electroforesis. In silico analysis of functional pathways and networks connecting the proteins identified in the EMF cardiac tissue was also performed. Blood peripheral eosinophilia, clinical and echocardiography data were evaluated retrospectively. RESULTS: All EMF patients displayed detectable plasma levels of at least one of the cytokines tested. We found that TNF-?, IL-6, IL-4 and IL-10 were each detected in at least 74% of tested sera, and plasma levels of IL10, IL6 and TNF-? were significantly higher than controls. Plasma levels of such cytokines positively correlated with each other. Only 33% of the patients presented any episode of blood eosinophilia along time, and 11% of these patients presented hypereosinophilia. Total IgE levels were similar to those from healthy subjects. Proteomic analysis allowed the identification of 140 distinct proteins from the resected endomiocardium of the EMF patients, 18 of which belonging to the extracellular matrix. In silico analysis indicated IL-6 and TNF-? as two of the major gene expression inducers of the identified proteins in our analysis, and the Acute Phase Response was identified as the major canonical pathway involved with the identified set of proteins. Similarly, CRP levels were significantly increased in the EMF patients. CONCLUSIONS: Increased levels of an inflammatory/anti-inflammatory circulating cytokines (Th1/Th2), along with increased CRP levels, suggested the presence of a mixed inflammatory profile in EMF advanced stage. The number of EMF patients with blood eosinophilia does not support the active participation of eosinophils in pathogenesis of advanced EMF. However, it is not possible to exclude the participation in the pathogenesis early stages. Our data support the hypothesis that the increased levels of inflammatory cytokines modulate protein expression -including proteins of the acute phase response - in the endomyocardial tissue of EMF patients

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE SAULO FERNANDES MANO DE CARVALHO.pdf: 5897981 bytes, checksum: 9ded1ddc23ddf1eb697350aee8c49480 (MD5) Previous issue date: 2009-12-22 / Adrenalectomy is a highly complex surgical procedure. In order to perform it, surgeons must have a profound knowledge of the anatomophysiologic aspects of the adrenal glands, especially their vascular diversity, as well as full understanding of diagnostic means so as to properly identify their diseases. Open adrenalectomy is the most widely used method in veterinary medicine, while laparoscopic adrenalectomy usually is the method of choice in human medicine. Hyperadrenocorticism, whether hypophysis-dependent or not, is the most the most common adrenal disease. Treatment involves stopping the growth of tumors either surgically or chemically. Treatment of choice will depend on tumor functionality, type and size, as well as on its image. The swine model has proven adequate for surgical procedures, since it possesses standardized experimentation protocols and physiological parameters. Among the main benefits of laparoscopic adrenalectomy versus open adrenalectomy is rapid recovery and diminished hospitalization time. Laparoscopic adrenalectomy is the procedure of choice in human medicine, and it is nowadays considered to be the gold standard. In veterinary medicine more research is needed so as to better establish its advantages over open adrenalectomy. In this study open adrenalectomy was compared to laparoscopic adrenalectomy. 32 swines, divided into four groups of eight animals each, underwent surgery; being it that one group underwent open and the other laparoscopic adrenalectomy, with their respective control groups (sham). Parameters such as surgical time, body temperature, haematocrit, surgical intercurrences and XXXXX, as well as physiological, hormonal and metabolic responses were evaluated in young swines, both in open and laparoscopic adrenalectomy. There were no significant differences in surgical times. Most frequent intercurrences were accidents with intestinal loops, lesions to adrenal vessels and renal haematoma. Blood losses were not significant and, even though there was hypothermia it did not lead to any unfavorable clinical outcome. Deambulation time was longer for the open adrenalectomy group, although the difference was not significant. Significant differences were found in leucometry values of the laparoscopic sham group, which were higher when compared to laparoscopic groups; SpO2 of the G3 group was lower than that of the other groups, and PCR of the laparoscopic groups were lower postoperatively. There were no significant differences in mean blood pressure in all of four groups. Laparoscopy is a reliable technique for experimental adrenalectomy in swines and can be used as a reference for surgical treatment of adrenal diseases in other animal species. Metabolic parameters did not show significant differences. These results indicated that the laparoscopic technique is beneficial over open surgery, and that it can be considered a safe procedure for other species. Adrenalectomy is a highly complex surgical procedure. In order to perform it, surgeons must have a profound knowledge of the anatomophysiologic aspects of the adrenal glands, especially their vascular diversity, as well as full understanding of diagnostic means so as to properly identify their diseases. Open adrenalectomy is the most widely used method in veterinary medicine, while laparoscopic adrenalectomy usually is the method of choice in human medicine. Hyperadrenocorticism, whether hypophysis-dependent or not, is the most the most common adrenal disease. Treatment involves stopping the growth of tumors either surgically or chemically. Treatment of choice will depend on tumor functionality, type and size, as well as on its image. The swine model has proven adequate for surgical procedures, since it possesses standardized experimentation protocols and physiological parameters. Among the main benefits of laparoscopic adrenalectomy versus open adrenalectomy is rapid recovery and diminished hospitalization time. Laparoscopic adrenalectomy is the procedure of choice in human medicine, and it is nowadays considered to be the gold standard. In veterinary medicine more research is needed so as to better establish its advantages over open adrenalectomy. In this study open adrenalectomy was compared to laparoscopic adrenalectomy. 32 swines, divided into four groups of eight animals each, underwent surgery; being it that one group underwent open and the other laparoscopic adrenalectomy, with their respective control groups (sham). Parameters such as surgical time, body temperature, haematocrit, surgical intercurrences and XXXXX, as well as physiological, hormonal and metabolic responses were evaluated in young swines, both in open and laparoscopic adrenalectomy. There were no significant differences in surgical times. Most frequent intercurrences were accidents with intestinal loops, lesions to adrenal vessels and renal haematoma. Blood losses were not significant and, even though there was hypothermia it did not lead to any unfavorable clinical outcome. Deambulation time was longer for the open adrenalectomy group, although the difference was not significant. Significant differences were found in leucometry values of the laparoscopic sham group, which were higher when compared to laparoscopic groups; SpO2 of the G3 group was lower than that of the other groups, and PCR of the laparoscopic groups were lower postoperatively. There were no significant differences in mean blood pressure in all of four groups. Laparoscopy is a reliable technique for experimental adrenalectomy in swines and can be used as a reference for surgical treatment of adrenal diseases in other animal species. Metabolic parameters did not show significant differences. These results indicated that the laparoscopic technique is beneficial over open surgery, and that it can be considered a safe procedure for other species. / Adrenalectomia é um procedimento operatório de alto grau de complexidade. Para sua execução o cirurgião deve ter conhecimento dos aspectos anatomofisiológicos das glândulas adrenais, especialmente sua diversidade vascular, deve ainda ter pleno entendimento sobre os recursos diagnósticos necessários para identificação das suas enfermidades. Adrenalectomia aberta é o método mais utilizado em medicina veterinária, enquanto na medicina humana a abordagem laparoscópica é a de eleição. O hiperadrenocorticismo, que pode ser hipófise dependente ou não, é enfermidade adrenal de maior frequência. Seu tratamento consiste na contenção da evolução dos tumores por meio de fármacos ou cirúrgico. A escolha do tratamento depende da funcionalidade, tipo e tamanho do tumor e da caracterização dos estudos de imagem. O modelo suíno mostrou-se adequado para a execução dos procedimentos operatórios, visto possuir protocolo de experimentação e parâmetros fisiológicos padronizados. Dentre os principais benefícios da adrenalectomia laparoscópica (AL) frente à adrenalectomia aberta (AA) destaca-se a rápida recuperação dos pacientes com diminuição do tempo de internação. A adrenalectomia laparoscópica é o procedimento de escolha em medicina humana, sendo caracterizada atualmente como padrão ouro. Em medicina veterinária, ainda há necessidade de melhor caracterização dos seus resultados afim de que seus benefícios em relação à adrenalectomia aberta possam ser conhecidos. Neste estudo foi comparada a AA com a AL. Foram operados 32 suínos, divididos em quatro grupos de oito animais, sendo um grupo submetido à AA e outro grupo à AL, com seus respectivos grupos controle (sham). Foram avaliados parâmetros referentes a tempo operatório, temperatura corporal, hematócrito, intercorrências operatórias e tempo de deambulação. Bem com as respostas fisiológicas, hormonais e metabólicas oriundas da adrenalectomia laparoscópica e aberta em suínos jovens. Não houve diferença significativa entre os tempos operatórios. As intercorrências mais frequentes foram acidentes em alças intestinais, lesões em vasos adrenais e hematoma renal. As perdas sanguíneas não foram significativas e apesar de ter ocorrido hipotermia esta não teve repercussão clínica. O tempo de deambulação foi maior para o grupo AA, mas sem diferença significativa em relação ao AL. As diferenças significativas encontradas se relacionaram aos valores de leucometria, os quais apresentaram elevação no grupo sham laparotômico em relação aos grupos laparoscópicos; a SpO2 do grupo G3 foi inferior aos demais grupos; os valores de PCR dos grupos laparoscópicos foram menores no pós operatório. Não houve diferença significativa na pressão arterial média dos quatro grupos. A laparoscopia para adrenalectomia experimental em suínos é uma técnica confiável podendo servir como referência para o tratamento cirúrgico nas outras espécies animais. Os parâmetros metabólicos analisados não apresentaram diferenças significativas. Estes resultados indicaram benefícios da abordagem laparoscópica em relação à aberta, podendo ser considerado um procedimento seguro para utilização em outras espécies.