Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Trypanosomiasis is a disease of worldwide distribution which in Brazil is called "mal das cadeiras", owing the clinical signs shown by horses, which are the major species affected. The disease is caused by the protozoan Trypanosoma evansi, characterized by clinical signs such as weight loss, pale mucous membranes, swelling of the eyelid and vulva. Rabbits have been reported as a resistant species to T. evansi, however, is not yet known how immune aspects, such as innate immune and cholinergic system, behave in this species, not even as this inflammations pathways influence in rabbits's trypanotolerance. Thus, the aim of this study was to investigate the inflammatory response and cholinergic anti-inflammatory pathway and its relation to trypanotolerance in rabbits infected with T. evansi. For this, twelve female adult New Zealand rabbits, weighing 3.6 4.5 kg were used in this study. The animals were divided into two groups, a control group and an infected group, both with six animals. The rabbits belonging to the infected group received, intraperitoneally, 0.5 ml of rat blood containing 108 parasites per animal, while the control group received physiological solution by the same route. The experimental period reached 118 days. Blood was collected on days 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, and 118, for to determine the cholinesterases, and days 0, 5, 20, 35, 65, 95 and 118, for to evaluate blood count, total protein, serum proteinogram, immunoglobulins and acute phase proteins. There was an increase in the activity of butyrylcholinesterase (BChE), at 7th day PI, and in the activity of acetylcholinesterase (AChE), in 27th day PI. Furthermore, the infected group showed an increase in total protein and the fractions alpha, beta and gamma globulins along of experimental period. The reduction in albumin and hematocrit were observed in precise periods of experimental infection, as well as the increase in immunoglobulin G. Infection with T. evansi stimulated the production of acute phase proteins, such as C-reactive protein, haptoglobin, α-2 macroglobulin, being observed increase in immunoglobulin M (IgM) throughout the experimental period (118 days post-infection). From these results, it is concluded that the cholinergic pathway had influence the inflammatory response, through the action of AChE and BChE in the regulation of concentrations of acetylcholine, resulting in increased concentrations of cytokines and, consequently, in the production phase protein acute. The increase in IgM, associated with increased C-reactive protein and haptoglobin, suggests the involvement of these proteins in host defense against flagellated, with possible participation in trypanotolerance of rabbits infected with T. evansi. / A tripanossomose é uma enfermidade de distribuição mundial que, no Brasil, é denominada mal das cadeiras , em função dos sinais clínicos apresentados pelos equinos, principal espécie afetada. A doença é causada pelo protozoário Trypanosoma evansi, sendo caracterizada por sinais clínicos como perda de peso, mucosas pálidas, edema de pálpebra e vulva. Coelhos têm sido relatados como uma espécie resistente ao T. evansi, contudo, ainda não se sabe de que modo aspectos imunitários, como a imunidade inata e o sistema colinérgico, comportam-se nessa espécie, nem mesmo como essas vias da inflamação influenciam a tripanotolerância de coelhos. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a resposta inflamatória e a via anti-inflamatória colinérgica e sua relação na tripanotolerância em coelhos infectados experimentalmente pelo T. evansi. Para tanto, foram utilizados 12 coelhos adultos, fêmeas, da raça Nova Zelândia, com peso corporal entre 3,6 a 4,5 Kg, divididos em dois grupos, um grupo controle e um grupo infectado, ambos com seis animais. Os coelhos pertencentes ao grupo infectado receberam, pela via intraperitoneal, 0,5 mL de sangue de rato contendo 108 tripanossomas por animal, enquanto que o grupo controle recebeu, pela mesma via, solução fisiológica. O período experimental foi de 118 dias, sendo o sangue coletado nos dias 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, e 118, para determinar as colinesterases, e nos dias 0, 5, 20, 35, 65, 95 e 118, para avaliar hemograma, proteínas totais, proteinograma sérico, imunoglobulinas e proteínas de fase aguda. Foi observado aumento na atividade da butirilcolinesterase (BChE) no 7° dia PI e da atividade da acetilcolinesterase (AChE) no 27° dia PI. Além disso, o grupo infectado apresentou aumento nas proteínas totais, bem como nas frações alfa, beta e gama globulinas ao longo do período experimental. A redução na albumina e no hematócrito foram observados em períodos pontuais da infecção experimental, bem como o aumento na imunoglobulina G. A infecção pelo T. evansi estimulou a produção de proteínas de fase aguda como a proteína C-reativa, haptoglobina, α-2 macroglobulina, sendo observado um aumento na imunoglobulina M (IgM) em todo o período experimental (118 dias pós-infecção). A partir desses resultados, conclui-se que a via colinérgica pode ter influência na resposta inflamatória, através da ação da BChE e AChE na regulação das concentrações de acetilcolina, acarretando em aumento nas concentrações de citocinas e, consequentemente, na produção de proteínas de fase aguda. A elevação na IgM, relacionada ao aumento da proteína C-reativa e haptoglobina, sugere o envolvimento dessas proteínas na defesa do hospedeiro contra o flagelado, e, possivelmente, na tripanotolerância de coelhos infectados com T. evansi.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-21Bitstream added on 2014-06-13T19:36:20Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_wa_me_jabo.pdf: 654248 bytes, checksum: 619fb98a9565e57850118d52b19f5a0b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No hospedeiro bovino o nível de resistência ao carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus varia de acordo com a raça sendo os fenótipos contrastantes herdáveis. O presente trabalho explora esses fenótipos a fim de estabelecer os perfis das respostas imunes, humoral e inflamatória, correlacionados com resistência em raça zebuína (Nelore) e susceptibilidade em raça taurina (HPB). Os animais foram expostos a infestação natural pelo R.(B.) microplus e amostras de soros foram coletadas em pontos estratégicos da cinética das infestações. Os níveis de imunoglobulinas totais (IgG1 e IgG2), bem como os de anticorpos IgG1, IgG2 e IgE anti-extrato de ovo, anti-extrato de larva não alimentada e anti-saliva foram determinados. Elementos da resposta inflamatória, como as principais proteínas de fase aguda e óxido nítrico, também foram dosados. Os resultados obtidos mostram que as infestações muito intensas, em hospedeiros suscetíveis, são capazes de modular os níveis séricos de IgG1 e IgG2 total, diminuindo-os significativamente em relação aos níveis observados durantes infestações menores. Também modulam negativamente a produção de todos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2 avaliados a nível sistêmico. Bovinos susceptíveis ao carrapato produzem níveis mais altos de anticorpos IgE para todos os antígenos. O fenótipo susceptivel de infestação se diferencia pela maior freqüência do alótipo de IgG?2a, herdado por herança Mendeliana co-dominante. Animais suscetíveis, quando infestados, produzem níveis mais altos da proteína de fase aguda a1- glicoproteína ácida, de padrão anti-inflamatório, enquanto que animais resistentes produziram relativamente mais proteínas de fase aguda pró-inflamatórias, haptoglobina e amilóide sérica A. Em ambas as raças não houve diferença nos níveis de transferrina e óxido nítrico sistêmico, porém a produção de ambos é influenciada pelos níveis de infestação. / In bovine hosts resistance to the cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, varies according to the breed, being the phenotypes of infestations inherited. The present work exploits these contrasting phenotypes in order to determine the profile of the humoral, inflammatory and acute phase responses that are correlated with resistance seen in a zebuine breed (Nelore) and susceptibility seen in a taurine breed (Holstein). Bovines were exposed to natural infestations with R.(B.) microplus and they presented, as expected, different levels of infestation that also varied in intensity according to the season of the year. Samples of sera were collected at strategic points during the kinetics of different cycles of infestations. The levels of total serum IgG1 and IgG2 immunoglobulins, as well as those of IgG1, IgG2 and IgE anti-egg extracts, anti-unfed larvae extracts and anti-saliva antibodies were measured. Components of the inflammatory response, nitric oxide, as well as acute phase proteins, were also measured. The results show that very intense infestations in ticksusceptible bovines modulate the serum levels of IgG1 and IgG2, which are significantly diminished relative to those observed during less intense infestations. Intense infestations also modulate the production of all specific IgG1 and IgG2 antibodies. Susceptible animals produced more specific IgE, suggesting that this isotype does not participate in resistance against ticks. The susceptible cattle also have a higher frequency of IgG?2a , which are encoded by Mendelian co-dominant alleles. When infested susceptible animals produced higher levels of the anti-inflammatory acute phase protein, a1-acid glycoprotein, whereas resistant animals produced relatively higher levels of the pro-inflammatory proteins, haptoglobin and serum amyloide A.

Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a anatomopatologia, o hemograma e o perfil bioquímico sérico de aves de postura inoculadas por Salmonella Gallinarum (SG) contendo os genes cobS e cbiA inoperantes (SGcobScbiA) que mostrou ser avirulenta em trabalhos anteriores, comparando-a com cepas virulentas SGNalr e SGcobS, para mostrar se SGcobScbiA pode ser componente de vacina contra cepas selvagens de SG e S.Enteritidis. 280 pintainhas foram distribuídas em 4 grupos (G); G1 (SGcobS), G2 (SGNalr), G3 (SGcobScbiA) e G4 (controle). Com exceção do G4, os grupos receberam 0,2 mL de suas respectivas cepas contendo aproximadamente 108 UFC/mL de inóculo, aos 5 dias de idade. A eutanásia foi realizada 24h antes (1DAI) e após a inoculação (1DPI), e 3 (3DPI), 5 (5DPI), 7 (7DPI), 10 (10DPI) e 15 (15DPI) dias após a administração do inóculo, sacrificando-se, em cada momento, dez aves de cada grupo. As aves foram sacrificadas, obtendo-se amostras de sangue utilizadas para os exames hematológicos e bioquímicos. Fragmentos de fígado, baço, timo, bursa de Fabricius, rins e coração foram destinados aos exames histológicos. As aves inoculadas com a cepa SGcobS tiveram comportamento semelhante às aves inoculadas por SGNalr, porém com algumas respostas diferentes nos exames hematológicos e bioquímicos. As aves inoculadas com a cepa SGcobScbiA tiveram comportamento semelhante ao grupo controle, entretanto foi verificado alterações brandas em alguns parâmetros, mostrando que estudos futuros devem ser feitos, verificando se as alterações constatadas não irão interferir no desempenho de aves vacinadas com a cepa SGcobScbiA. / Abstract: The aim of the present study was to evaluate anatomopathology, hemogram and blood serum components of commercial layers experimentally inoculated with SGcobScbiA, which is a Salmonella Gallinarum (SG) strain it shows attenuation of the virulence in previous research and it was compared with high virulence SGNalr and SGcobS strains in order to show if SGcobScbiA has potential to be use as a vaccine against SG and S. Enteritidis wild strains. 280 commercial layers were divided into 4 groups (G); G1 (SGcobS), G2 (SGNalr), G3 (SGcobScbiA) and G4 (control group). With exception of G4, all the other groups received 0,2 mL of their respective strain containing about 108 CFU/mL of the inoculum with five days of age. Birds were sacrificed 24 hours before (1DBI) and 24 hours after the inoculation (1DAI), and three (3DAI), five (5DAI), seven (7DAI) ten (10DAI), and fifteen (15DAI) days after the administration of the inoculum, slaughtering ten birds at a time in each group. Birds were submitted to euthanasia and blood samples were collected in order to make the hematological and blood serum components test. Samples of liver, spleen, thymus, bursa of Fabricius, kidneys and heart were collected for the histological test. The birds inoculated with SGcobS strain had similar behavior when compared with that ones who received SGNalr strain, however some different responses in the hematological and blood serum components were found. On the other hand, the birds inoculated with SGcobScbiA strain had similar behavior when compared with the control group, however, lower alterations in some parameters were found. Further studies must be done to verify if these alterations will not interfere in the performance of the vaccinate birds with SGcobScbiA strain. / Orientador: Ângelo Berchieri Júnior / Coorientador: José Jurandir Fagliari / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Neste trabalho, estudos comportamentais, farmacolÃgicos e neuroquÃmicos em Ãreas cerebrais foram realizados em animais adultos (2 meses de idade) que apresentaram convulsÃo e estado epilÃptico (EP), atravÃs da administraÃÃo de pilocarpina 400mg/kg, s.c., P400, com a finalidade de investigar os mecanismos envolvidos durante a fase aguda (1 e 24h) do processo convulsivo. Os estudos comportamentais em animais mostraram que a administraÃÃo de P400 produziu sinais colinÃrgicos perifÃricos (SCP) e movimentos estereotipados (ME) em todos os animais em ambos os perÃodos de observaÃÃo. Os animais observados por 1h apresentaram parÃmetros comportamentais semelhantes ao grupo de 24h, somente o Ãndice de desenvolvimento de convulsÃes, EP, foi um pouco menor, e nÃo houve nenhuma morte. Os estudos farmacolÃgicos com antagonista colinÃrgico bloqueou todos os parÃmetros comportamentais observados. Das drogas gabaÃrgicas, os antagonistas dopaminÃrgico e glutamatÃrgico apresentaram melhor resultado, aumentado a latÃncia da primeira convulsÃo (LC), a latÃncia do EP (LEP) e reduzindo o nÃmero de mortes. Os antagonistas dopaminÃrgico D2, o opÃide, os antidepressivos e o agonista dopaminÃrgico reduziram a LC, LEP e aumentou o nÃmero de mortes, enquanto o antipsicÃtico testado aumentou a LC, a LEP e reduziu as mortes. O lÃtio potencializou os efietos da pilocarpina aumentado o nÃmero de mortes e reduzindo a LC e a LEP. Os estudos neuroquÃmicos revelaram que a atividade da acetilcolinesterase no hipocampo, cÃrtex frontal (CF) e corpo estriado dos animais sofreu uma reduÃÃo significativa apenas na primeira hora da fase aguda, enquanto que no perÃodo de 24h de observaÃÃo a atividade enzimÃtica praticamente se normalizou. O nÃvel de lipÃdio peroxidaÃÃo e o conteÃdo de nitrito e nitrato aumentaram, enquanto que, a concentraÃÃo de GSH diminui nos dois perÃodos do estudo nas Ãreas investigadas. A atividade da SOD aumentou durante 1h em todas a Ãreas. Por sua vez, no perÃodo de 24h aumentou apenas no CF. Na atividade da catalase em ambos os perÃodos e nas Ãreas estudadas verificou-se um aumento significativo. Estudos sobre a densidade mÃxima (Bmax) dos receptores colinÃrgicos muscarÃnicos (M1 e M2) e dopaminÃrgicos (D1 e D2) nas Ãreas analisadas durante 1 e 24h de observaÃÃo foram diminuÃdos e nÃo alterados, respectivamente. Em relaÃÃo aos receptores serotonÃrgicos (5-HT2) nÃo foi verificado alteraÃÃo no Bmax apÃs 1 e 24h de observaÃÃo, nas trÃs Ãreas estudadas. Nas trÃs Ãreas estudadas observou-se um aumento e uma diminuiÃÃo no Bmax dos receptores glutamatÃrgicos e GABAÃrgicos, respectivamente. O P400 alterou de forma diversificada a constante de dissociaÃÃo (Kd) dos receptores M1, M2, D1, D2, 5-HT2, GABAÃrgicos e glutamatÃrgicos nos animais que apresentaram convulsÃo, EP e que foram sacrificados 1 e 24 h depois do tratamento. Na determinaÃÃo de monoaminas e seus metabÃlitos com HPLC, o P400 alterou a concentraÃÃo de DA, DOPAC e HVA, bem como da NA e da 5-HT e seu metabÃlito o 5-HIAA nas diferentes regiÃes do cÃrebro apÃs 1 e 24 h de observaÃÃo. Nos experimentos de determinaÃÃo do conteÃdo dos aminoÃcidos com HPLC, o P400 alterou a concentraÃÃo de (glutamato) GLU estriatal, (glutamina) GLN hipocampal, (aspartato) ASP cortical e nÃo modificou o conteÃdo de tirosina com 1h nas trÃs Ãreas estudadas. JÃ com 24 horas de observaÃÃo nÃo houve alteraÃÃo em nenhuma das Ãreas nos aminoÃcidos GLU, GLN e ASP, mas o conteÃdo de tirosina aumentou de forma significativa nas Ãreas investigadas. / The present study was aimed at investigating behavioural and neurochemical alterations in brain areas of adults rat (2-month-old) which presented seizures and status epilepticus (SE) after treatment with a single dose of pilocarpine (400mg/kg, s.c., P400) in order to clarify the mechanisms of the acute phase in the convulsive process (1 and 24h). Behavioural studies have demonstrated that the P400 administration produced peripheral cholinergic signs and stereotyped movements in all of the animals in both periods of observation. The behavioural parameters assessed between 1 and 24 h were similar, but the seizure and SE development index was slightly lower in the 1h group and in the same group no case of fatality was observed. The pharmacological studies with antagonist cholinergic did not present any of the behavioural alterations. The drugs gabaergic, the antagonist dopaminergic D1, antipsychotic used and glutamatergic antagonist presented increased in the latency to first seizure (LS), latency of the SE (LSE) and decreasing the number of the death. The antagonists dopaminergic D2, the opioide, the antidepressants, and the dopaminergic agonist decreased the LS and a LSE and increased the number of the death. The lithium increased the effects of the pilocapine as well as the number of the death and decreased the LS and LSE. Neurochemical assessments revealed that acetylcholinesterase activity in hippocampus, frontal cortex and striatum decreased significantly only the first hour of the acute phase, meanwhile after 24h, the enzymatic activity remained unaltered. Lipid peroxidation level and nitrite e nitrate content were augmented whereas the GSH concentration was decreased in the areas investigated in both periods of observation. The SOD activity was increased during the first hour in the three areas. In turn, in the 24h period it was augmented in the frontal cortex alone. The catalase activity was significantly increased in both periods and in all areas. Works concerning maximum density (Bmax) of muscarinc cholinergic (M1 e M2) and dopaminergic (D1 e D2) receptors in the areas studied during 1h and 24h of observation were decreased and unaltered, respectively. Regarding the serotonergic receptors (5-HT2) was not verified alteration in the Bmax after 1 and 24h of observation in the three areas studied. In the areas studied the Bmax from glutamatergic and GABAergic receptors were increased and decreased, respectively. P400 altered the M1, M2, D1, D2, 5-HT2, GABAergic e glutamatergic receptors dissociation constant values (Kd) in distinct ways after 1 e 24h from the treatment. In the monoamine and their metabolites with HPLC determination P400 changes the DA, DOPAC and HVA as well as NA and 5-HT and its metabolite 5-HIIAA concentrations in the different cerebral areas after 1 and 24h of observation. In the experimental determinations of the amino acids contents, the P400 altered the content of (glutamate) GLU striatal, (glutamine) GLN hippocampal and the (aspartate) ASP cortical and no modified the concentration od tyrosine in the areas observed. However the TYR contents after 24 h of observation increas in striatum, hippocampus and frontal cortex, but GLU, GLN e ASP reamained unaltered in this period of the observation .

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-09-22T19:23:19Z No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-09-27T13:42:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T13:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / A modulação da resposta imune inata seria uma ferramenta capaz de elhorar a capacidade do sistema imune de combater a infecção por patógenos e outros estímulos externos. A utilização de vias sinalizadoras com a participação de alguns receptores específicos, como o peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) surgiria como importante hipótese para modular a produção de proteínas de fase aguda e do complemento em hepatócitos bovinos, órgão principal envolvido nessa síntese. Nesse sentido, o presente trabalho se utilizou de técnicas de cultivo primário de hepatócitos bovinos, provenientes de 5 animais diferentes, que foram isolados, cultivados e estimulados com um ligante desse receptor nuclear, o fenofibrato. Após 48 horas de cultivo as células tiveram seu ácido ribonucleico (RNA) extraído e quantificado, seguindo-se à síntese de ácido desoxirribonucleico complementar (cDNA) e execução das reações em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR), a fim de se verificar a expressão e produção de proteínas de fase aguda e do sistema complemento por meio de de reações de qPCR. Os sobrenadantes de cultura também foram avaliados após esse período de tempo, onde foram dosadas as mesmas proteínas, por meio da técnica de Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Os resultados demonstraram que o cultivo se provou ineficiente no que diz respeito à viabilidade celular e à quantificação de RNA extraído, indicando que mais estudos devem ser feitos para padronização dessa técnica. Além disso, os resultados demonstraram que o PPARα, ativado frente ao seu ligante específico, o fenofibrato, não foi capaz de modular a expressão e tampouco a produção dos fatores de complemento e das proteínas de fase aguda analisadas, podendo indicar que em hepatócitos bovinos a modulação por esse receptor não ocorre da mesma maneira como em humanos e em murinos. No entanto, devido à grande variabilidade racial dos animais cujos fígados foram coletados e ao pequeno número amostral utilizado, análises mais refinadas são necessárias. Dessa maneira, estudos devem ser realizados visando novas moléculas capazes de modular proteínas relacionadas ao sistema imune em bovinos. / The innate immune modulation is a tool capable of improve the immune system capacity to fight infections by pathogens and other external stimuli. The use of signaling paths with participation of some specific receptors, such as peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) arises as an important hypothesis to modulate the acute phase proteins (APP) and complement proteins in bovine liver cells, where most of these molecules are produced in a systemic level. In this way, this work aimed to establish a protocol of primary culture of bovine hepatocytes suitable to analyze intracellular signaling paths and genetic expression and synthesis of proteins related to innate immune system. For that, bovine hepatocytes from five different animals were isolated, cultivated and activated by a receptor ligand - fenofibrate, both alone and associated with proinflammatory stimuli, in different concentrations. After 48 hours of culture, ribonucleic acid (RNA) was extracted and quantified, complementary deoxyribonucleic acid was synthetized and real-time polymerase chain reactions were setup to verify the acute phase and complement proteins expression and synthesis. The culture supernatant was used to analyze the protein dosage by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed that the hepatocytes isolation and culture were not very effective, since the extracted RNA showed low concentration and bad integrity, indicating that more studies must be performed to standardize this technique. Considering the low quantification and bad quality of RNA, it was not possible to access the role of the receptor PPARα in complement factors and acute phase proteins genetic expression and production, when activated by its specific ligand (fenofibrate). Thus, the development of isolation and culture techniques for bovine hepatocytes must continue to be developed in order to better evaluate the intracellular signaling pathways and the search for new molecules capable to modulate proteins related to the immune system in bovines.

京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第24800号 / 医博第4992号 / 新制||医||1067(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 伊藤 貴浩, 教授 波多野 悦朗, 教授 妹尾 浩 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

C-reactive protein (CRP) is an acute phase protein produced by hepatocytes whose serum concentration increases in inflammatory conditions including cardiovascular complications. Statins that are used in the treatment of cardiovascular diseases to reduce cholesterol also lower serum CRP levels. In human hepatoma Hep3B cells, CRP is induced in response to cytokines IL-6 and IL-1β. The objective of the study was to determine the mechanism of regulation of CRP gene expression in Hep3B cells in response to cytokines and to determine the effect of statins on CRP expression. Key findings of our research were: 1. IL-1β-activated NF-κB p50/p65 acted synergistically with IL-6-activated C/EBPβ in inducing CRP transactivation through the proximal CRP promoter. 2. A NF-κB site was localized in the proximal CRP promoter centered at position -69 overlapping the known OCT-1/HNF-1/HNF-3 sites. 3. The synergy between IL-6 and IL-1β in inducing CRP gene expression was partially mediated through the NF-κB site. 4. In the absence of C/EBPβ, a complex containing C/EBPζ and RBP-Jκ was formed at the C/EBP-p50-site. 5. Overexpressed C/EBPζ repressed both (IL-6+IL-1β)-induced and C/EBPβ-induced CRP expression. 6. OCT-1 repressed (IL-6+IL-1β)-induced CRP transactivation through the proximal CRP promoter. 7. Statins reduce cytokine-induced CRP gene expression at the transcriptional level. These findings led us to conclude that: 1. CRP transcription is determined by the relative levels of various transcription factors such as C/EBPβ, C/EBPζ, NF-κB and OCT-1 and their interaction with the proximal CRP promoter. 2. Inhibition of CRP transcription by statins is not due to an anti-inflammatory effect but due to the direct effect on CRP gene expression.

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O objetivo do presente estudo, prospectivo e randomizado, é avaliar comparativamente as respostas hemodinâmicas, laboratoriais, imunomoleculares e clínicas, em dois grupos de pacientes submetidos a cirurgia de revascularização miocárdica com extracorpórea utilizando-se, em um deles infusão de azul de metileno durante o período intraoperatório. As variáveis hemodinâmicas estudadas foram: FC, PAE, PVC, DC, RVS, RVP, PAPM, PASS, PASD e PASM. Os dados laboratoriais avaliados foram: gasometria arterial, creatinina, leucócitos, bastões, neutrófilos, eosinífilos, basófilos, linfócitos, Ht, Hb, paquetas, Na+ e K+. Os marcadores imunomoleculares estudados foram: IL - 1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p40, TNF alfa e NO. Os dados clínicos avaliados foram: idade, sexo, raça, tabagismo, hipertensão, diabetes, angina estável, angina instável, infarto prévio, tempo de CEC, tempo de pinçamento aórtico, número de pontes realizadas, urina azulada, fezes azuladas, diarréia, náuseas, cefaléia, tontura, disúria, astenia e dispnéia. As variáveis citadas foram obtidas em todos ou em parte dos períodos seguintes: antes da indução, terceira hora, sexta hora, 24ª hora e 48ª hora após o término da CEC. Ocorreram diferenças estatisticamente significativas na resistência vascular sistêmica, na pressão arterial sistêmica diastólica, em parte das citocinas estudadas e no óxido nítrico. A análise dos resultados mostra que no grupo que utilizou azul de metileno houve resistência vascular sistêmica mais alta no período da sexta hora de pós-operátório, menor concentração de TNF alfa no período da terceira e 48ª hora e menores níveis de óxido nítrico no período da sexta hora. As medidas laboratoriais foram semelhantes em ambos os grupos exceto maior número de leucócitos e neutrófilos na 48ª hora após CEC no grupo contrôle. Verifica-se que o azul de metileno levou a melhores condições hemodinâmicas e menores valores e alguns marcadores de reposta inflamatória sistêmica após cirurgia de revascularização miocárdica com circulação extra-corpórea e não apresentou efeitos adversos importantes. / The objective of the present study, prospective and randomized, is to evaluate the hemodynamic, gasometric, immunomolecular and clinical response in two groups of patients submited to coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass with the use, in one of them, of methylene blue infusion during the intraoperative period. The hemodynamic variable data evaluated were: heart rate, left atrial pressure, central venous pressure, cardiac output, systemic vascular resistance, pulmonary vascular resistance, mean pulmonary artery pressure, systolic systemic arterial pressure, dyastolic systemic arterial pressure and mean systemic arterial pressure. Laboratoryal data were: arterial gasimetry, urea, creatinine, leucocytes, neutrophils, eosinophils, basophils, lymphocytes, hematocrit, hemoglobin, platelets, sodium and potassium. The immunomolecular data were: IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p40, TNF alfa and NO. The clinical data evaluated were: age, gender, race, smoking, hypertension, diabetes, stable angina, unstable angina, previous infarction, cardiopulmonary bypass duration, aortic cross-clamp time, graft number, bluish urine, bluish feces, diarrhea, nausea, headache, dizziness, dysuria, tiredness and dyspnea. All the data were obtained, in all or part of the following periods: before the anesthesia and at the third, sixth, 24th and 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. Statistically significant differences occurred in the systemic vascular resistance, diastolic systemic arterial pressure and in part of the evaluated cytokines, as well as with the nitric oxide. The analysis of the results show that, in the methylene blue patients group, the systemic vascular resistance was higher at the sixth hour, lower concentrations of TNF alfa at the third and at the 48th hour and lower levels of NO at the 6th hour. The laboratorial data were similar in the two groups, except for the number of leucocytes and neutrophils were higher in the control group at the 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. The gasometric data showed no difference between the groups. It was verified that the methylene blue has induced better hemodynamic conditions and lower levels of part of markers of SIRS after coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass and no siginifcant deleterious side effects.

As células TREGULADORAS tem como função central o controle da resposta imune ao próprio. Além disso, é descrito que essas células exercerem um papel moderador da resposta imune frente a micro-organismos patogênicos. No presente projeto, utilizamos o tratamento com toxina diftérica nos dias 1 e 2 pós-infecção (p.i.) em animais C57BL/6 FoxP3+DTReGFP+(DEREG) como abordagem alternativa para eliminar esta população de células reguladoras. Este tratamento mostrou-se altamente eficaz, embora temporário, uma vez que as TREG retornam aos valores normais no baço por volta do dia 8 p.i. Contudo, a ausência de TREG nesta janela temporal determina uma breve, mas significativa, redução na parasitemia e um aumento de IFN-γ, assim como uma redução da carga parasitária no coração em uma data posterior. Nosso estudo indica que as células TREGULADORAS desempenham um papel no controle da resposta imune frente aos parasitas no início da infecção pelo Trypanosoma cruzi, papel esse que podemos ver refletido na carga parasitária no coração na fase crônica da infecção. / The central function of TREGULATORY cells is the control of the immune response to their own. In addition, it is described that these cells exert a moderating role of the immune response against pathogenic microorganisms. In the present project, treatment with diphtheria toxin on days 1 and 2 post-infection (p.i.) in C57BL/6FoxP3+DTReGFP+ (DEREG) animals was used as an alternative approach to eliminate this population of regulatory cells. This treatment proved to be highly effective, although temporary, since the TREG return to normal values in the spleen by about 8 p.i. However, the absence of TREG in this time window results in a brief but significant reduction in parasitemia and an increase in IFN-γ as well as a reduction in parasitic load on the heart at a later date. Our study indicates that TREGULATORY cells play a role in controlling the immune response to parasites at the beginning of Trypanosoma cruzi infection, a role that can be seen reflected in parasite load in the heart in the chronic phase of infection.