Submitted by GERUZA REZENDE PAIVA null (geruzapaiva@uol.com.br) on 2016-04-05T19:59:23Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO GERUZA.pdf: 5061518 bytes, checksum: af0a7d998fa5c9d0f003a2b9092c616f (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-07T12:16:07Z (GMT) / Submitted by GERUZA REZENDE PAIVA null (geruzapaiva@uol.com.br) on 2016-04-07T13:23:44Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO GERUZA.pdf: 5118938 bytes, checksum: 9f059c3ab9e7b63c89bd37813dc1cda8 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-07T16:06:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paiva_gr_dr_bot.pdf: 5118938 bytes, checksum: 9f059c3ab9e7b63c89bd37813dc1cda8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T16:06:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paiva_gr_dr_bot.pdf: 5118938 bytes, checksum: 9f059c3ab9e7b63c89bd37813dc1cda8 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O tratamento das lesões em nervos periféricos normalmente constitui um desafio. Os resultados clínicos são pobres na maioria dos casos de lesões com perda da continuidade do axônio. Viterbo (1992) propôs a neurorrafia látero-terminal sem incisão do nervo doador, uma alternativa para a neurorrafia término-terminal. Novas pesquisas devem esclarecer porque são tão controversos os resultados experimentais e os da prática clínica entre os diversos autores sobre a neurorrafia látero-terminal. Muitos estudos têm buscado alternativas para alcançar melhores resultados no tratamento das lesões nervosas periféricas. A reposição de células, introdução de fatores neurotróficos e a introdução de células-tronco têm sido algumas das alternativas exploradas na literatura atual. Quanto às células-tronco ainda há muito a ser pesquisado, seja sobre o potencial regenerativo das células-tronco e suas fontes, formas de oferecimento dessas células no local da lesão ou como acompanhar a integração e confirmar a sobrevivência dessas células no local da injúria do nervo. Este estudo objetivou avaliar a influência de células-tronco mesenquimais provenientes do tecido adiposo na neurorrafia látero-terminal quanto à regeneração e reinervação periférica, por meio de estudo experimental em ratos. Foram estudados 150 animais, 140 animais dispostos em sete grupos, 10 outros animais foram necessários para se fazer o gel de plaquetas. Em um dos grupos a neurorrafia látero-terminal foi realizada com a interposição de células-tronco removidas do tecido adiposo do animal. Foram realizados testes de avaliação da marcha, estudo eletromiográfico, avaliação da força de contração muscular e exames de morfologia e morfometria de nervos e músculos após 180 dias do experimento. O grupo no qual se usou células-tronco apresentou valores semelhantes aos observados no grupo controle de normalidade quanto aos índices funcionais dos nervos ciático (pelo “CatWalk” e “Walking Track” respectivamente) e quanto ao número de fibras nervosas no nervo fibular comum. / The treatment of peripheral nerve injuries is often a challenge. In most cases of injury with loss of continuity of the axon the clinical results are poor. Viterbo (1992) published the lateral-terminal neurorrhaphy without incision of the donor nerve, an alternative for the end-to-end neurorrhaphy. Further research should clarify why the experimental results and the clinical practice about the lateral-terminal neurorrhaphy are so controversial among the various authors. Many studies have sought for alternatives to achieve better results in the treatment of peripheral nerve injuries. The replacement of cells, the introduction of neurotrophic factors and the introduction of stem cells have been some of the alternatives explored in the literature. As for the stem cells, much remains to be searched, either on the regenerative potential of stem cells and their sources, offering forms of these cells at the injury site or on how to support the integration and confirm the survival of these cells at the site of the nerve injury. This study experimental study in rats aimed to evaluate the influence of stem cells from adipose tissue in the lateral-terminal neurorrhaphy focusing the regeneration and the peripheral reinnervation. 150 animals were studied, 140 animals arranged in seven groups, other 10 animals were needed to make the platelet gel. In one group the lateral-terminal neurorrhaphy was performed with the interposition of stem cells removed from the adipose tissue of the animal. Gait assessment tests, electromyographic study, evaluation of the muscle contraction force and histological examinations of the nerves and muscles after 180 days of the experiment were conduced and performed. The group which underwent the interposition of stem cells showed values similar to those seen in the normal control group as well as the functional indices of the common sciatic and peroneal nerves (the "Catwalk" and "Walking Track" respectively) and upon the number of nerve fibers in the common fibular nerve. / FAPESP: 2011/13112-6

Os efeitos benéficos associados à injeção intramiocárdica de células-tronco adultas, obtidos em roedores, não tem sido reproduzidos de modo consistente em modelos animais de grande porte e seres humanos. Neste trabalho testamos a hipótese que o transplante de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de porcos (pASC) aumenta a perfusão tecidual cardíaca em animais infartados e humanizados pelo tratamento com um inibidor da enzima conversora de angiotensina (iECA) e um ?-bloqueador. Os animais foram submetidos a oclusão da artéria coronária circunflexa esquerda (ACX) e 4 semanas após o IM, 4 grupos foram randomizados para receber injeção intramiocárdica de pASC nas doses de 1, 2 ou 4x10^6 pASC/Kg de massa corporal ou placebo. A análise de perfusão miocárdica foi realizada através da ecocardiografia com perfusão miocárdica em tempo real (ECMTR) utilizando contraste de microbolhas comercialmente disponível antes da injeção de pASC e 4 semanas após o tratamento com as células. Avaliações anatomopatológicas foram realizadas para medir a área de IM e o remodelamento de VE. Oito semanas após o IM, os porcos tratados com a maior dose de pASC mostraram um aumento significativo do fluxo sanguíneo do miocárdio, tanto em áreas remotas (3,9 vezes) como na área de borda do infarto (3,7 vezes) vs. os outros grupos estudados. Neste mesmo grupo, um aumento significativo no número de vasos (cerca de 54 e 56%, área remota e de borda respectivamente) foi observado (p> 0,05 vs. outros grupos). Curiosamente, a área de tecido não perfundido foi menor (em até 38%), enquanto que a razão de afinamento da parede (25%) e a percentagem de fibras de colágeno imaturas (verde/finas) foram maiores no grupo 4 que recebeu 4x10^6 pASC/Kg em comparação com os demais. Além disso, a dose mais elevada de pASCs alogênicas testadas não induziu um aumento da resposta inflamatória celular no VE. Deste modo, os resultados mostram que a injeção intramiocárdica de pASCs alogênicas pós-IM promove aumento da perfusão miocárdica e no número de vaso sanguíneos no VE na ausência de resposta inflamatória celular que podem contribuir para atenuar o remodelamento cardíaco adverso de VE 2 meses após o IM na presença de terapêutica farmacológica padrão / The beneficial effects associated with intramyocardial injection of adult stem cells in rodents have not been consistently reproduced in larger animals and humans. We evaluated the dose of porcine adipose-tissue derived mesenchymal stem cells (pASC) to increase cardiac tissue perfusion in pigs treated with ace-inhibitors and ?-blockers to mimic human management post-MI. Animals were subjected to LCx occlusion and 4 weeks after MI blinded randomized in 4 groups to receive intramyocardial injection of pASC (1, 2 and 4x10^6 pASC/Kg bw) or placebo. Real time myocardial perfusion echocardiography (RTMPE) was conducted using commercial microbubbles before injection and 4 weeks after treatment with pASC. Anatomopathological assessments were performed to evaluated MI area, LV remodeling. Eight weeks after MI, the pigs treated with the highest dose of pASC showed a significant increase of myocardial blood flow in both remote (3.9 times) and border zone (3.7 times) versus the other groups, which was also in agreement with the increase in vessel numbers (about 54 and 56%, respectively) compared to the other groups (p > 0.05). Interestingly, the non-perfused area was reduced (up to 38%) and the thinning ratio was higher (25%) in the 4x10 ^ 6 pASC/Kg.bw group compared with placebo or the other cell groups. In addition, the percentage of immature (thin/green) collagen fibers was greater in group 4 than in the placebo animals. The highest dose of allogeneic pASCs did not elicit an increased cellular inflammatory response in LV. Altogether, we provide evidence that intramyocardial injection of allogeneic pASC post-MI did not elicit cellular inflammatory response and also it increased cardiac perfusion and vessel number when in highest dose, which may have contributed to attenuate the LV adverse remodeling 2 months after the MI

As células-tronco mesenquimais derivados do tecido adiposo (ASC) apresentam potencial para uso em terapêuticas para reparação cardíaca e o modelo de suínos recapitula aspectos relevantes dos seres humanos. Nesta dissertação quisemos caracterizar ASC de porcos (pASC), após criopreservação e avaliar a responsividade destas células ao shear stress. Após descongelamento as pASC exibiram 90-95% de viabilidade, não apresentaram alterações morfológicas e nem na expressão de marcadores de superfície (CD29+ 99,74%±0,10; CD90+ 97,84%±1,32; CD44+ 99,39%±0,19, CD31- 1,75%±0,21; média±EPM, n=3). O tempo de dobramento médio foi de 63,51±16,46 horas (média±DP) e o dobramento populacional cumulativo aumentou constantemente até a passagem 10, com pequeno e gradual aumento na senescência (P5 3,25%±0,26 e P10 9,6%±0,29 SA-?-Gal). Além disso, as pASC responderam, in vitro, ao tratamento para diferenciação em adipócitos e osteócitos. Já a exposição ao SS (15 dyn/cm² por 48 hs) não induziu a expressão de marcadores endoteliais (CD31, VE-caderina e FLK-1), mas resultou no acúmulo de VEGF induzido por NO (15 dyn/cm² por 96 hs). Interessantemente, o SS induziu a fosforilação de ERK e AKT e a liberação de NO independente da magnitude do SS (1-30 dyn/cm², por 30 min). No entanto, longos períodos de estímulo (24-48 hs) e diferentes intensidades de shear stress induziram desigualmente a liberação de NO e VEGF (5 dyn/cm² maior do que 10 ou 15 dyn/cm²). Tomados em conjunto, nossos dados promovem evidências de que a viabilidade, morfologia, cinética de crescimento e resposta a estímulos químicos ou físicos de pASC não foram influenciados pela criopreservação. Além disso, a magnitude de SS aplicada a essas células afetou a liberação de NO e VEGF somente após longos períodos de exposição a esse estímulo / Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ASC) offer potential regenerative therapeutic application for cardiac repair and the porcine model recapitulates key aspects relevant to humans. In this dissertation we wanted to establish the culture characteristics of pig ASC (pASC), especially after long-term cryopreservation and the effect of shear-stress (SS)-induced phenotypes. Upon thawing, pASC displayed 90-95% viability and no changes in morphological characteristics or in the expression of surface markers (CD29+ 99.74%±0.10; CD90+ 97.84%±1.32; CD44+ 99.39%±0.19, CD31- 1.75%±0.21; mean±SEM, n=3). Mean population doubling time was 63.51±16.46 hours (mean±SD) and cumulative population doubling increased constantly until passage 10 with a small and gradual increase in senescence (P5 3.25%±0.26 and P10 9.6%±0.29 SA--Gal staining). In addition, pASC in vitro responded to adipogenic and osteogenic chemical cues, whereas SS exposure (15 dyn/cm² up to 48 hours) failed to induce endothelial cell (EC) markers (CD31, VE-cadherin and FLK-1), but resulted in nitric oxide (NO)-induced VEGF accumulation (15 dyn/cm² up to 96 hours). Interestingly, SS-induced phosphorylation of ERK and AKT and the release of NO were independent of the magnitude of the stimulus (1-30 dyn/cm², up to 30minutes). In contrast, long term (24-48 hours) SS-induced NO and VEGF release under 5 dyn/cm² were higher than 10 or 15 dyn/cm2. Altogether, we provided evidence that pASC cell viability, morphology, growth characteristics and capacity to respond to chemical or physical cues were not influenced by cryopreservation. Moreover, the magnitude of the SS affected the NO and VEGF release in pASC only during long-term exposure to SS

Todas as adaptações adquiridas através do treinamento físico são reversíveis durante a inatividade. Reduções significativas no consumo máximo de oxigênio (VO2max) são observadas dentro de duas a quatro semanas de destreinamento. Por outro lado, as consequências do destreinamento sobre o tecido adiposo são pouco estudadas. O objetivo foi investigar os efeitos de destreinamento físico sobre o metabolismo e celularidade do tecido adiposo periepididimal. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos, com idade de 6 semanas, foram divididos em 3 grupos: treinado (T) durante 12 semanas; destreinados (D), (treinados por 8 semanas e destreinados por 4 semanas), e sedentário (S) pareados por idade. O treinamento consistiu em sessões de esteira rolante (1h/dia, 5d/semk, 50 60% da capacidade máxima). A análise morfométrica do tecido PE revelou diferenças significativas entre os grupos. A área seccional dos adipócitos do grupo D foi significativamente maior que a T e S (3474 µm2 ± 68,8 µm2 vs 1945,7 µm2 ± 45,6 µm2 vs 2492,4 µm2 ± 49,08 µm2, respectivamente). Em comparação com as células dos animais do grupo T as células do D apresentaram 48% de aumento na capacidade de realizar a lipogênese, espontaneamente ou insulina estimulada. Já lipólise basal não se alterou. A redução de 15% na apoptose foi observada nos grupos T e D em relação ao S. Algumas expressões de genes foram alterados em D vs S: a adiponectina aumentou 3 vezes e PPAR-gama aumentou 2 vezes. O gene do Pref-1 foi 3 vezes maior em T vs S. Estes resultados sugerem fortemente que a adipogênese foi estimulada neste grupo. Conclusões: o destreinamento causa aumento significativo no tamanho dos adipócitos e na capacidade lipogênica. Como a apoptose celular na gordura PE foi reduzida em D e T, estes resultados sugerem que as alterações do tecido adiposo após destreinamento podem ser potencialmente obesogenicas. / All adaptations acquired through physical training are reversible during inactivity. Significant reductions in maximal oxygen uptake (VO2Max) are observed within two-four weeks of detraining. Conversely, the consequences of detraining on adipose tissue are poorly known. The objective was to investigate the physical detraining effects on metabolism and cellularity of rat periepididymal adipose tissue. Methods and Results: Male Wistar rats, ageing 6 weeks, were divided in 3 groups: trained (T) for 12 weeks; detrained (D), (trained for 8 weeks and detrained for 4 weeks), and age-matched sedentary (S). Training consisted in treadmill running sessions (1h/day, 5d/week, 50 60% of the maximal capacity). The morphometric analysis of PE tissue disclosed significant differences between the groups. The adipocyte sectional area of group D was significantly bigger than T and S (3474 µm2 ± 68,8 µm2 vs 1945,7 µm2 ± 45,6 µm2 vs 2492,4 µm2 ± 49,08 µm2, respectively). Compared to T the cells of D animals showed 48% increased ability to perform: lipogenesis, either spontaneously or insulin stimulated and isoproterenol-stimulated lipolysis. Basal lipolysis did not change. A 15% reduction in apoptosis was observed in groups T and D in relation to S. Some gene expressions were changed in D vs S: adiponectin (3-fold up) and PPAR-gamma (2-fold up). PREF-1 gene was 3-fold higher in T vs S. These results strongly suggest that adipogenesis was stimulated in this group. Conclusions: Detraining causes significant increase in adipocyte size and lipogenic capacity. As PE fat cell apoptosis was reduced in D and T, these results suggest that adipose tissue changes following detraining can potentially be obesogenic.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6292.pdf: 2287765 bytes, checksum: b3d00bafed75c8cbfaf179911ce21881 (MD5) Previous issue date: 2014-09-09 / Financiadora de Estudos e Projetos / Ovariectomy in animals (surgical removal of ovaries) is a model used to mimic the menopause in women. The ovarian hormone deficiency alters the lipid profile, increases inflammation and the risk of type 2 diabetes mellitus, sarcopenia, osteopenia, obesity and cardiovascular diseases. Resistance training (RT) has been used as a non-pharmacological tool to prevent or reverse the postmenopausal effects. However, there are few studies evaluating the ovariectomy (Ovx) and RT effects on the morphology and angiogenesis of visceral adipose tissue (VAT). Thus, the aim of this study was to investigate the Ovx and RT influence at the size and adipocytes number, gene expression and VEGF-A protein levels and microvessel density in VAT of rats. Adult Sprague-Dawley rats were divided into four groups (n=6 per group): Sham-operated sedentary (Sham-Sed), ovariectomized sedentary (Sed-Ovx), Sham-operated resistance training (Sham-Tr) and ovariectomized resistance training (Ovx- Tr). During the resistance training period, the animals climbed a 1.1m vertical ladder with weights attached to their tails, which were progressively increased; the sessions were performed three times a week, with 4-9 climbs and 8-12 dynamic movements per climb with intervals of 2 minutes between climbs. Histological analysis was performed to analyze vascular micro density and morphology of VAT; gene expression and VEGF-A protein levels were analyzed by real-time PCR and ELISA, respectively. Ovx resulted in higher body weight, adipocyte hypertrophy, decreased both VEGF-A mRNA and protein and VEGF-R2 mRNA expression, and decreased the micro vascular density in the VAT of sedentary rats. However, RT was not able to prevent any changes induced by ovariectomy. The data indicated that Ovx impaired the morphology and angiogenesis of rats VAT and that RT protocol adopted did not prevent these changes. We suggest future studies performing adaptations in this resistance training program, associated or not to hypocaloric diet and treatment with estradiol. / A ovariectomia em animais (remoção cirúrgica dos ovários) é um modelo de estudo utilizado para mimetizar a menopausa em mulheres. A deficiência dos hormônios ovarianos altera o perfil lipídico, aumenta a inflamação e o risco de diabetes tipo 2, sarcopenia, osteopenia, obesidade e doenças cardiovasculares. O treinamento resistido (TR) tem sido empregado como ferramenta não farmacológica na tentativa prevenir ou reverter os efeitos da pósmenopausa. No entanto, são escassos os estudos sobre os efeitos da Ovx e TR na morfologia e angiogênese do tecido adiposo visceral (TAV). Diante disto, o objetivo desta pesquisa foi verificar a influência da Ovx e do TR no tamanho e no número dos adipócitos, expressão gênica e concentração proteica de VEGF-A e densidade microvascular do TAV de ratas. Ratas Sprague-Dawley adultas foram dividas em quatro grupos experimentais (n=6 por grupo): Sham operado sendentário (Sham-Sed); Ovariectomizado sedentário (Ovx-Sed); Sham operado treinamento resistido (Sham-Tr) e Ovariectomizado treinamento resistido (Ovx-Tr). Durante o período de treinamento resistido, os animais escalaram uma escada vertical de 1,1 m com pesos atados em suas caudas, que foram aumentados progressivamente; as sessões foram realizadas três vezes na semana, com 4-9 escaladas por sessão de treino e 8- 12 movimentos por escalada com intervalos de 2 minutos entre as escaladas. A morfologia e densidade vascular foram avaliadas por meio de análises histológicas, a expressão gênica e proteica do VEGF-A foram analisadas por PCR em tempo real e ELISA, respectivamente. A ovariectomia aumentou a massa corporal e provocou hipertrofia dos adipócitos, diminuição da expressão de VEGF-A e seu receptor, diminuição da concentração de VEGF-A e redução da densidade microvascular no TAV das ratas. O treinamento resistido não foi eficiente em prevenir nenhuma destas alterações. Sugere-se futuros estudos realizando adaptações neste programa de treinamento resistido, associadas ou não à dieta hipocalórica e ao tratamento com o estradiol.

Orientador: Fausto Viterbo / Resumo: O tratamento das lesões em nervos periféricos normalmente constitui um desafio. Os resultados clínicos são pobres na maioria dos casos de lesões com perda da continuidade do axônio. Viterbo (1992) propôs a neurorrafia látero-terminal sem incisão do nervo doador, uma alternativa para a neurorrafia término-terminal. Novas pesquisas devem esclarecer porque são tão controversos os resultados experimentais e os da prática clínica entre os diversos autores sobre a neurorrafia látero-terminal. Muitos estudos têm buscado alternativas para alcançar melhores resultados no tratamento das lesões nervosas periféricas. A reposição de células, introdução de fatores neurotróficos e a introdução de células-tronco têm sido algumas das alternativas exploradas na literatura atual. Quanto às células-tronco ainda há muito a ser pesquisado, seja sobre o potencial regenerativo das células-tronco e suas fontes, formas de oferecimento dessas células no local da lesão ou como acompanhar a integração e confirmar a sobrevivência dessas células no local da injúria do nervo. Este estudo objetivou avaliar a influência de células-tronco mesenquimais provenientes do tecido adiposo na neurorrafia látero-terminal quanto à regeneração e reinervação periférica, por meio de estudo experimental em ratos. Foram estudados 150 animais, 140 animais dispostos em sete grupos, 10 outros animais foram necessários para se fazer o gel de plaquetas. Em um dos grupos a neurorrafia látero-terminal foi realizada com a interpos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The treatment of peripheral nerve injuries is often a challenge. In most cases of injury with loss of continuity of the axon the clinical results are poor. Viterbo (1992) published the lateral-terminal neurorrhaphy without incision of the donor nerve, an alternative for the end-to-end neurorrhaphy. Further research should clarify why the experimental results and the clinical practice about the lateral-terminal neurorrhaphy are so controversial among the various authors. Many studies have sought for alternatives to achieve better results in the treatment of peripheral nerve injuries. The replacement of cells, the introduction of neurotrophic factors and the introduction of stem cells have been some of the alternatives explored in the literature. As for the stem cells, much remains to be searched, either on the regenerative potential of stem cells and their sources, offering forms of these cells at the injury site or on how to support the integration and confirm the survival of these cells at the site of the nerve injury. This study experimental study in rats aimed to evaluate the influence of stem cells from adipose tissue in the lateral-terminal neurorrhaphy focusing the regeneration and the peripheral reinnervation. 150 animals were studied, 140 animals arranged in seven groups, other 10 animals were needed to make the platelet gel. In one group the lateral-terminal neurorrhaphy was performed with the interposition of stem cells removed from the adipose tissue of the animal.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O consumo excessivo de gorduras tem sido implicado na gênese da obesidade e de diversas comorbidades relacionadas a esta doença. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do treinamento resistido em ratos alimentados com dieta hiperlipídica nas seguintes variáveis: composição corporal, adiposidade, área de adipócitos, expressão do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e dos receptores ativados por proliferadores de peroxissomo tipo gama (PPAR-γ) no tecido adiposo retroperitoneal, níveis pressóricos e atividade da metaloproteinase-2 (MMP-2) no ventrículo esquerdo. Foram avaliados 32 ratos machos Wistar divididos em quatro grupos experimentais (n=8/cada) de acordo com o tipo de dieta e o treinamento: sedentário (SED; dieta padrão), sedentário obeso [SED-OB; dieta hiperlipídica (30% de gordura)], treinamento resistido (TR; dieta padrão) e treinamento resistido obeso (TR-OB; dieta hiperlipídica). Após o desmame (dia 21), os animais foram submetidos à dieta experimental durante 24 semanas. Doze semanas após início da dieta, os grupos TR e TR-OB iniciaram o período de 12 semanas de treinamento resistido. Este era composto por escaladas em uma escada vertical de 1.1 metros com pesos atados a cauda num total de três sessões de treinamento por semana (Segundas, Quartas e Sextas-feiras) com 4 a 9 escaladas/sessão e 8 a 12 movimentos dinâmicos a cada subida. O treinamento resistido induziu reduções significativas na massa corporal, na massa gorda, no percentual de gordura, na área de adipócitos e nos níveis pressóricos e ainda promoveu aumento de massa magra e na expressão de VEGF e PPAR-γ em ambos os grupos treinados. Além disso, foi observada uma maior atividade da MMP-2 no ventrículo esquerdo nos grupos treinados (TR e TR-OB). Nossos achados demonstram que o treinamento resistido foi capaz de promover mudanças positivas na composição corporal, na atividade da MMP-2 no ventrículo esquerdo, nos níveis pressóricos e em mediadores enzimáticos do tecido adiposo retroperitoneal sugerindo que esta modalidade de exercício pode ser uma ferramenta útil para prevenir as alterações induzidos pelo consumo de uma dieta hiperlipídica. / The purpose of the present study was to evaluate the effect of resistance training on body composition, adiposity, adipocyte area, vascular endothelium growth factor (VEGF) and peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPAR-γ) in adipose tissue, systolic and diastolic blood pressures (BP), and activity of muscle MMP-2 in left ventricle. We evaluated 32 Wistar rats divided into four experimental groups (n=8/each) according to diet and exercise status: sedentary (SED; standard diet), sedentary obese [SED-OB; hiperlipidic diet (30% of fat)], resistance training (RT; standard diet) and resistance training RT obese (RT-OB; hiperlipidic diet). After weaning (day 21), animals were subjected to the experimental diet according to their groups during 24 weeks. A 12-week resistance-training period was used, during which the animals climbed a 1.1-m vertical ladder with weights attached to their tails. The sessions were performed three times/week (Mondays, Wednesdays and Fridays), with 49 climbs/session and 812 dynamic movements/climb with two rest minutes. The RT promoted significantly reductions of body and fat masses, fat percentage, adipocytes area and systolic and diastolic BPs, associated with higher expression of VEGF and PPAR-γ in retroperitoneal adipose tissue and higher fat free mass in both trained groups. Furthermore, it was observed higher muscle MMP-2 activity of the left ventricle in trained animals. This study demonstrated that, resistance training induced positive changes in body composition, MMP-2 activity in left ventricle, systolic and diastolic BPs and adipose tissue metabolism, suggesting that it can be a useful tool to prevent the physiopathological changes induced by high-fat diet consumption.

Subclinical inflammation plays a pivotal role in the development of obesity- related complications including type 2 diabetes mellitus, hypertension and cardiovascular diseases. Macrophages are considered important players participating in the initiation and progression of subclinical inflammation within as well as outside of adipose tissue. The first part of this dissertation thesis was focused on macrophage characterization and their quantitative and qualitative changes accompanying metabolic improvements after bariatric surgery. We have demonstrated that the number of macrophages in subcutaneous adipose tissue is reduced regardless of their M1 or M2 polarization manifested as positivity of both the M1- associated CD40 antigen and the M2-associated CD163 and CD206 antigens 6 months after bariatric surgery. Thus, as suggested by previously published data, subcutaneous adipose tissue macrophages seem to have a mixed phenotype. We further confirmed a higher number of non- classical monocytes, which play a role in the control of vascular integrity, in obese subjects as well as a classical monocyte-derived origin of CD163 positive monocytes. Our data also support the previous suggestion of the soluble form of CD163 antigen being a suitable marker of metabolic complications of obesity. The second part...

O acúmulo de tecido adiposo visceral (TAV) está relacionado com a piora da sensibilidade à insulina (SI) e, por isso, tem sido hipotetizado que a retirada de parte deste depósito, lipectomia (L), poderia melhorar este quadro. No entanto, a L pode ocasionar um aumento compensatório ou uma regeneração do tecido retirado. Para investigar se a L e o exercício afetam ou não a SI e a adiposidade, 36 ratos machos Wistar foram submetidos à dieta hiperlipídica e divididos em 4 grupos: LT (treinado), LS (sedentário), FT (falso operado) e FS, sendo submetidos à L e/ou treinamento aeróbio. O peso corporal e consumo de ração foram medidos semanalmente. A glicemia de jejum e tolerância à glicose foram avaliados pré e pós-intervenções. Índice HOMA, adiposidade e expressão gênica (mRNA) PPAR, PPAR e TNF- e expressão protéica do PGC1- foram analisados pós-intervenções. O grupo L apresentou maior consumo de ração após L (p<0,05). Foi verificada pior tolerância à glicose no grupo LS (p<0,03) e diminuída insulina de jejum nos grupos LT e FT (p<0,00). O grupo LT apresentou melhor SI (p<0,04). Não houve diferença na adiposidade dos animais (p>0,1). Os grupos LT e FS apresentaram maior expressão gênica do PPAR no TAV comparados aos LS e FT, já no músculo o LT apresentou menor expressão gênica comparado ao FS (p<0,05). O grupo LS apresentou maior mRNA do TNF- comparado aos demais grupos (p<0,05) e maior expressão protéica de PGC1- que o grupos LT e FS (p<0,05). Nossos resultados demonstram que o treinamento melhorou a ação da insulina e em associação à L melhorou a SI. Além disso, a L ocasionou aumento no consumo de ração que pode ter colaborado com a recuperação da adiposidade neste grupo / Increased visceral adipose tissue (VAT) may account for the impairment in peripheral and hepatic insulin sensitivity (IS). It has been hypothesized that the partial removal of VAT known as lipectomy (L) could result in the improvement, while a re-growth of the excised tissue and/or a compensatory growth of non-excised depots seem to occur. To investigate whether or not VAT removal and exercise affect IS and adiposity 36 male Wistar rats were fed a high-fat diet and assigned to 4 experimental groups: EL (exercised), ES (sham-lipectomized), CL (control-sedentary), and CS; animals were submitted to L and/or exercise training. Body weight and food intake were recorded weekly. Fasting glucose and glucose tolerance were assessed pre and post-interventions. HOMA Index, body fat content, PPAR, PPAR e TNF- mRNA and PGC1- protein expression were assessed post-interventions. L group showed increased food intake post-L (p<0,05). CL group presented worsening on glucose tolerance (p<0,03). ET and ES showed lower fast insulin (p<0,00) and EL group showed better IS (p<0,04). There were no significant difference on body fat (p>0,1). EL and CL groups showed higher PPAR mRNA on VAT compared to CL and ES, EL showed decreased PPAR mRNA on skeletal muscle compared to CS (p<0,05). CL group showed greater TNF- mRNA (p<0,05) and greater PGC1- protein expression compared to EL and CS (p<0,05). Our results showed that short-term swimming training improved insulin action and, in association with L improve IS. Moreover, lipectomy has induced increased food intake which may be related with an increase in adiposity at this group

Células-tronco mesenquimais derivadas de medula óssea (CTMs-MO) e de tecido adiposo (CTMs-TA) são uma ferramenta atrativa para a reparação do tecido ósseo baseada na terapia celular. No presente estudo, foi investigado o potencial osteogênico e adipogênico de CTMs-MO e CTMs-TA, assim como o efeito da intercomunicação entre osteoblastos e adipócitos na expressão do fenótipo celular. CTMs-MO e CTMs-TA de ratos foram cultivadas em meios de crescimento, osteogênico e adipogênico para avaliar a diferenciação osteoblástica e adipocítica. Adicionalmente, osteoblastos e adipócitos foram cocultivados de forma indireta para investigar o efeito dos adipócitos sobre os osteoblastos e vice versa. CTMs-MO e CTMs-TA apresentaram potencial tanto osteogênico quanto adipogênico em condições não indutoras de diferenciação. No entanto, quando expostas ao meio osteogênico, as CTMs-MO exibiram maior expressão gênica de RUNX2, fosfatase alcalina e osteocalcina, expressão proteíca de RUNX2 e maior formação de matriz extracelular mineralizada comparadas às CTMs-TA. Por outro lado, em condições adipogênicas, as CTMs-TA apresentaram maior expressão gênica de PPAR&gamma;, proteína adipocítica 2 e resistina, expressão proteíca de PPAR&gamma; e maior formação de acúmulo lipídico comparadas às CTMs-MO. A presença de adipócitos em coculturas indiretas inibiu a expressão do fenótipo osteoblástico, enquanto os osteoblastos não apresentaram um efeito marcante sobre a expressão do fenótipo adipocítico. Em conclusão, o presente estudo mostrou que as CTMs-MO são mais osteogênicas enquanto as CTMs-TA são mais adipogênicas. Adicionalmente, foi observado que a intercomunicação entre osteoblastos e adipócitos pode afetar negativamente o reparo ósseo. Assim, postulamos que o maior potencial osteogênico das CTMs-MO as tornam a escolha mais adequada para a indução do reparo ósseo baseado na terapia celular. / Mesenchymal stem cells from bone marrow (BM-MSCs) and adipose tissue (AT-MSCs) are attractive tools for cell-based therapies to repair bone tissue. In the present study, we investigated the osteogenic and adipogenic potential of BM-MSCs and AT-MSCs as well as the effect of crosstalk between osteoblasts and adipocytes on cell phenotype expression. Rat BM-MSCs and AT-MSCs were cultured either in growth, osteogenic or adipogenic medium to evaluate osteoblast and adipocyte differentiation. Also, osteoblasts and adipocytes were indirectly cocultured to investigate the effect of adipocytes on osteoblast differentiation and vice versa. BM-MSCs and AT-MSCs exhibit osteogenic and adipogenic potential under non-differentiation-inducing conditions. However, when exposed to osteogenic medium, BM-MSCs exhibited higher gene expression of RUNX2, alkaline phosphatase and osteocalcin, RUNX2 protein expression and more extracellular matrix mineralization compared with AT-MSCs. Conversely, under adipogenic conditions, AT-MSCs displayed higher gene expression of PPAR&gamma;, fatty acid binding protein 4 and resistin, PPAR&gamma; protein expression and more lipid accumulation compared with BM-MSCs. The presence of adipocytes as indirect coculture repressed the expression of osteoblast phenotype while osteoblasts did not exert remarkable effect on adipocyte phenotype expression. In conclusion, the present study showed that BM-MSCs are more osteogenic while AT-MSCs are more adipogenic. Also, we observed that the crosstalk between osteoblasts and adipocytes may negatively impact bone repair. Thus, we postulate that the higher osteogenic potential of BM-MSCs makes them the first choice for inducing bone repair in cell-based therapies.