Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En la sociedad moderna, la tenencia de animales de compañía constituye una práctica cada vez más frecuente, extendiéndose a nivel mundial y a través de todas las clases socioeconómicas. Así, dentro de muchas otras áreas, la participación del médico veterinario ha aumentado en el ámbito clínico de mascotas, logrando grandes avances en técnicas diagnósticas, quirúrgicas y terapéuticas. Al igual que los humanos, las mascotas pueden sufrir diversas enfermedades, pudiendo tener algunas un componente infeccioso. Frente a las infecciosas de origen bacteriano, la principal herramienta con que cuentan los profesionales, son los antimicrobianos. Desde su descubrimiento, los antimicrobianos han constituido la primera línea de acción frente a enfermedades bacterianas, ayudando a disminuir su impacto -tanto en las personas como en distintas poblaciones animales- encontrándose disponible una variada gama de sustancias, con diferentes mecanismos de acción e indicaciones terapéuticas. Sin embargo, desde hace ya varios años se ha observado la presencia y aumento de la resistencia bacteriana a diversos antimicrobianos, constituyendo un tema de gran preocupación mundial tanto en medicina humana como veterinaria. Entre los antimicrobianos que han visto reducida su efectividad debido a la resistencia bacteriana se encuentran los betalactámicos, como meticilina y oxacilina, y las tetraciclinas, como doxiciclina y oxitetraciclina. El objetivo de este trabajo fue la detección, mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), del gen mecA involucrado en la resistencia a meticilina y de los genes tet(M) y tet(O), involucrados en la resistencia a tetraciclinas mediante la generación de proteínas de protección ribosomal, en cepas de Staphylococcus coagulasa positivas aisladas desde gatos. La aplicación de esta técnica de biología molecular permitió detectar dos de los tres genes mencionados, en cepas caracterizadas como sensibles, resistentes o de sensibilidad intermedia de acuerdo a antibiogramas por difusión en agar. Los resultados de este trabajo señalan que la detección de genes de resistencia a antimicrobianos complementaría la técnica del antibiograma de la Microbiología clásica en el estudio de la resistencia bacteriana. Finalmente, la secuenciación y posterior determinación del porcentaje de identidad nucleotídica respecto del GenBank® de uno de los genes detectados otorgó al laboratorio de Microbiología del Departamento de Medicina Preventiva Animal de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile, un control positivo para continuar con los estudios moleculares de resistencia bacteriana / Proyecto FIV Nº 12101401.9102.008

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El presente trabajo corresponde a un estudio transversal que incluyó cepas de Staphylococcus spp. coagulasa positivo de gatos con diversas patologías dermatológicas atendidos en el Hospital Clínico Veterinario de la Universidad de Chile entre marzo a diciembre del año 2010. Se ingresaron 68 muestras de 68 pacientes con afecciones dermatológicas, obteniéndose 30 cepas (44%) de Staphylococcus spp. coagulasa positiva de 30 pacientes, las cuales se identificaron mediante el kit BBL Crystal TM para Gram positivas y se les realizó el estudio de sensibilidad antimicrobiana mediante el método de difusión en placa de Kirby-Bauer, según las normas de Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2008). Los antimicrobianos en estudio fueron: oxacilina, amoxicilina con ácido clavulánico, ampicilina, clindamicina, eritromocina, cefadroxilo, doxiciclina, tetraciclina, sulfametoxazol-trimetoprim, vancomicina, ciprofloxacino y enrofloxacino. Staphylococcus intermedius fue la especie más frecuentemente aislada alcanzando el 67% (20 cepas), seguido por Staphylococcus aureus con un 33% (10 cepas). El 10% del total de cepas en estudio (3 cepas) fueron sensibles a todos los antimicrobianos utilizados, el 37% (11 cepas) fueron resistentes a un antimicrobiano y un 53% (16 cepas) fueron multirresistentes. El 13,3% del total de cepas (4 cepas) fueron resistentes a meticilina, siendo todas identificadas como S. intermedius, todas éstas fueron resistentes a fluoroquinolonas, lincosamidas, macrólidos y sulfonamidas. Ninguna cepa fue resistente a vancomicina / FIV 2009 Código: 12101401.9102.008

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La otitis externa es una patología frecuente en la clínica diaria, originada por una asociación de factores que llevan a la inflamación del conducto auditivo externo y a la infección secundaria, la que frecuentemente es ocasionada por bacterias del género Staphylococcus dentro del cual se encuentran las especies intermedius y aureus. El objetivo del presente estudio era determinar la frecuencia de aislamiento de las diferentes especies de Staphylococcus coagulasa positivas (SCP) presentes en casos clínicos de otitis externa y determinar su susceptibilidad antimicrobiana determinando la Concentración Minima Inhibitoria (CMI). De un total de 103 muestras de otitis externa canina, se aisló 53 (51,5%) cepas de SCP. De estas cepas se identificaron tres especies: S. intermedius (73,6%), S. schleiferi subsp. coagulans (22,6%) y S. aureus (3,8%). Se aisló por primera vez en el país Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans como patógeno presente en casos clínicos de otitis externa. De las cepas SCP, 58,5% fueron resistentes al menos a un antibiótico y el 30,2% fueron multiresistentes a tres o más antibióticos, no encontrándose ninguna cepa resistente a todos los fármacos en estudio. El antimicrobiano menos efectivo en este estudio fue la amoxicilina, encontrándose resistencia en el 47,2% de las cepas. Los más eficientes fueron mupirocina, con una resistencia del 2,3% y oxacilina frente a la cual no se encontraron cepas resistentes. De las 39 cepas de S. intermedius aisladas, 61,5% mostraron resistencia al menos a un antimicrobiano, siendo la amoxicilina el menos efectivo (53,9% resistencia) y la oxacilina el más eficaz (0% resistencia). Con respecto a S. schleiferi subsp. coagulans 33,3% de las cepas mostraron resistencia al menos a un antimicrobiano, siendo clindamicina el antibiótico menos efectivo (25% resistencia) y doxiciclina, tetraciclina y oxacilina los más eficaces puesto que no hubo cepas resistentes a estos antibióticos. De las dos cepas de S. aureus aisladas ambas fueron multiresistentes, pero sensibles a oxacilina. Frente a S. intermedius y S. schleiferi subsp. coagulans oxacilina aparece como el antimicrobiano más seguro, mientras que kanamicina presenta valores muy disímiles de CIM 50 y 90, evidenciando menor seguridad frente a estas especies. / Proyecto MULT-06/03-2

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / El uso de antimicrobianos en sistemas de producción avícola es una herramienta eficaz para el control de enfermedades infecciosas. Sin embargo, residuos de estos fármacos pueden permanecer en productos y subproductos destinados a consumo humano o alimentación animal. A pesar de su uso en la industria avícola, no existen actualmente estudios de depleción de florfenicol en plumas, garras o deyecciones de pollos broiler. De esta manera, en la presente memoria de título se evaluaron las concentraciones de florfenicol (FF) y su metabolito activo, florfenicol amina (FFa), en dichas matrices. Para evaluar la depleción de FF y FFa, se utilizaron tres metodologías analíticas por cromatografía líquida asociada a espectrometría de masas (LC-MS/MS), que permitieron detectar y cuantificar los analitos de interés. Las metodologías fueron previamente validadas. Las concentraciones de los analitos fueron calculadas a través de la ecuación del análisis de regresión lineal de las curvas de calibración, construidas en matriz fortificada con estándar certificado (r ≥ 0,95). El estudio de depleción del fármaco se realizó en un grupo de 80 pollos broiler criados bajo condiciones controladas, a los que se les administró un tratamiento con una formulación comercial de florfenicol al 10%, vía oral por cinco días. Para plumas, garras y deyecciones, se estableció un tiempo de depleción de 99, 45 y 28 días, respectivamente / The use of antimicrobials in poultry production systems is an effective tool for the control of infectious diseases. However, antimicrobial residues may remain in products and byproducts designated for human consumption or animal feed. Despite its use in poultry, depletion researches of florfenicol in feathers, claws and faeces of broiler chickens are lacking. Thus, in the present study, concentrations of florfenicol (FF) and its active metabolite, florfenicol amine (FFa), in feathers, claws and faeces of treated broiler chickens were evaluated. To assess depletion of FF and FFa, three previously validated analytical methodologies by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS), to detect and quantify the analytes of interest, were implemented. The analyte concentrations were calculated by the equation from the linear regression analysis of calibration curves (r ≥ 0.95), which were fortified using certified internal standard. The drug depletion study was conducted in a group of 80 broiler chickens raised under controlled conditions, which were given a treatment with an oral commercial formulation of florfenicol 10%, for five days. In feathers, claws and faeces, a depletion-time of 99, 45 and 28 days, respectively, was established / Financiamiento: Proyecto FONDECYT de Iniciación en Investigación 2014 (11140530).

O setor de produtos lácteos transforma-se constantemente, uma vez que exigências feitas tanto pelo consumidor como por órgãos fiscalizadores, requerem produtos inócuos e com elevado padrão de qualidade, provocando mudanças significativas em toda a cadeia produtiva. Para tanto, medicamentos veterinários, em especial os antimicrobianos, têm sido amplamente utilizados na pecuária, quer para tratamento e prevenção de doenças, quer para incremento da produção. No entanto, quando utilizados em desrespeito às boas práticas, colocam em risco tanto a saúde animal como a humana, predispondo a população a eventuais reações alérgicas e expressão de resistência microbiana. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo pesquisar a presença de resíduos de antimicrobianos de uso veterinário em amostras de diferentes tipos de leite comercializados na cidade de São Paulo, verificando se a freqüência de ocorrência observada para essa contaminação correspondia à estimada de 1%. Foram analisadas, através do Delvotest® SP, 1.500 amostras de leite, durante os meses de abril de 2003 a março de 2004 e obteve-se dez amostras positivas, o que significa uma freqüência de ocorrência de antimicrobiano no leite de 0,66%, com intervalo de confiança entre 0,32 a 1,22%, valor este, menor que o estimado / The dairy industry have been transformed day by day, because the consumer and the competent inspection groups that have been demanded good products without contamination and them have to be a increasing quality, so, this facts provokes significants chances in all dairy segment. About that, the antimicrobians had to been used in large scala in animals to terapy and to increase the weight quickly, so is necessary to be careful to use those products because theirs residues may be cause irritatation or allerrgy and bacteria resistense. The presense of the antimicrobian in the milk is a very important theme since the pecuary untill the public health, because that, this assignment (work) had like objetive research the presense of residues of veterinary antimicrobian in milk sample salled in the Sao Paulo city and check if the observaded frequence is similar to the stimated frequence like 1%. The results was ten positives samples of the 1.500, that means occurence of frequency 0,66% with break between 0,32 to 1,22%, this result was smaller than hope for

Foram avaliados dentifrícios experimentais à base de Ricinus communis (DR), Triclosan (DT) e Cloramina-T (DC) para higiene de próteses totais, tendo como controle dentifrício sem agente antimicrobiano (DB) e água. Para análise in vitro foram realizados ensaios físico-químicos (medida da densidade, pH, consistência e características reológicas); ensaio de abrasividade, avaliada em 30 espécimes de resina acrílica antes e após a escovação artificial e análise microbiológica com a formação de biofilme multiespécies (S. mutans, C. albicans e C. glabrata) sobre espécimes em resina acrílica. Estes, após contaminação, foram escovados por 60s com DR, DT, DC e DB e água (n=10). Foram empregados controles positivo (contaminado e não escovado) e negativo (sem contaminação). Para análise in vivo, seguiu-se o modelo \"crossover\" com \"washout\" de 7 dias. Os voluntários escovaram suas próteses superiores 3 vezes ao dia por 07 dias. A capacidade de remoção do biofilme foi avaliada empregando evidenciação, fotografia e quantificação com software Image Tool 3.0. Na avaliação antimicrobiana, o biofilme foi desprendido da prótese por escovação com solução salina e a suspensão resultante, semeada em meios de cultura específicos para Candida spp, S. mutans, S. aureus e bactérias Gram-negativas. As espécies de Candida foram identificadas pelo meio de cultura Chromagar e pela PCR (Polymerase Chain Reaction). Na avaliação dos dentifrícios pelos participantes foi aplicado questionário. Os resultados das características organolépticas e físico-químicas foram informados em tabelas autoexplicativas. Os dados de rugosidade foram analisados por ANOVA e os dados da ação antimicrobiana in vitro, pelo teste de Kruskal-Wallis. Para os dados das variáveis clínicas (in vivo), empregou-se teste de Friedman e o teste de Cochran. Os testes estatísticos foram realizados com p<0,05. Os dentifrícios não apresentaram diferença quanto à abrasividade (DB=0,264±0,098; DR=0,236±0,236; DT=0,265±0,116; DC=0,203±0,105), porém promoveram aumento da rugosidade comparando à água (0,027±0,004). Frente às espécies de Candida, in vitro, o DT foi o mais eficaz (p=0,00; m=1,30) seguido do DC (m=2,6), DB (m=3,26) e DR (m=3,59). Para o S. mutans houve diferença entre a água (m=3,86) e os dentifrícios (p=0,001), porém não entre estes (DB: m=0; DR: m=2,3 e DC: m=0). DT inibiu o crescimento de S. mutans. Quanto à capacidade de remoção do biofilme, não houve diferença entre os dentifrícios (p=0,055; DB: m=7,39; DR: m=7,94; DT: m=10,16; DC: m=8,14), porém houve redução do biofilme comparando ao Baseline (m=16,53). Os dentifrícios não apresentaram diferença antimicrobiana, in vivo, contra Candida spp. (p=0,495), S. mutans (p=0,497), S. aureus (p=0,845) e bactérias Gram-negativas (p=0,425). Na identificação das espécies de Candida pelo Chromagar não houve diferença quanto ao seu aparecimento independente do dentifrício (p=0,466). O resultado pela PCR foi semelhante à identificação convencional e as espécies de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram mais prevalentes, respectivamente. Na avaliação dos dentifrícios pelos participantes não houve diferença (p>0,05) entre eles para nenhuma questão. Os dentifrícios apresentaram resultados satisfatórios, apresentando potencial para uso clínico e controle do biofilme de próteses totais. / This study evaluated experimental dentifrices based on Ricinus communis (DR), Triclosan (DT) and Cloramina-T (DC) for complete denture cleaning. To in vitro analysis were performed physicochemical tests (measurement of density, pH, consistency and rheological characteristics); abrasiveness test evaluated in 30 acrylic resin specimens before and after artificial brushing and microbiological analysis with multi-species biofilm formation (Streptococcus mutans, C. albicans and C. glabrata) on the specimens of acrylic resin. This specimens were manually brushed for 60 seconds with DR, DT, DC and DB and water (n = 10). Positive controls were used (contaminated and not brushed) and negative (no contamination). To in vivo analysis the study followed the crossover model with washout of 7 days. The volunteers brushed their upper dentures 3 times daily for 07 days. The removal of biofilm capacity was evaluated employing evidenciation, photography and quantification with Image Tool 3.0 software. For the evaluation of antimicrobial activity, the biofilm was removed from the denture by brushing with saline solution and the suspension was seeded in culture media specific for Candida spp, S. mutans, S. aureus and Gram-negative bacteria. The Candida species were identified by culture medium Chromagar and PCR method (Polymerase Chain Reaction). One questionnaire was used for the dentifrices evaluation by the participants. The results of physicochemical characteristics were informed in self-explanatory tables. The roughness data were analyzed by ANOVA and antimicrobial activity in vitro data by the Kruskal-Wallis test. To the data of the clinical variables (in vivo) was used Friedman test and Cochran test. Statistical tests were performed with p<0.05. The dentifrices showed no difference in the abrasiveness (DB=0.264 ± 0.098, DR=0.236 ± 0.236, DT=0.265 ± 0.116, DC=0.203 ± 0.105), but promoted increased roughness when compared to water (0.027 ± 0.004). To Candida species, in vitro, the DT was the most effective (p=0.00, m=1.30) followed by DC (m=2.6), DB (m=3.26) and DR (m=3.59). To S. mutans there was difference between the water (m=3.86) and dentifrices (p=0.001), but these did not showed difference from each other (DB: m=0; DR: m=2.3 and DC: m=0). DT inhibited the growth of S. mutans. There was no difference among the dentifrices for biofilm removal (p=0.055; DB: m=7.39; DR: m=7.94; DT: m=10.16; DC: m=8.14), but the biofilm decreased when compared to Baseline (m=16.53). The dentifrices showed no difference antimicrobial, in vivo, against Candida spp. (p=0.495), S. mutans (p=0.497), S. aureus (p=0.845) and Gram-negative bacteria (p=0.425). In the identification of Candida species by Chromagar there was no difference in the appearance of their independent dentifrices (p=0.466). The result by PCR was similar conventional identification, and the species of C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata were more prevalent, respectively. In the evaluation of dentifrices by the participants there was no difference (p>0.05) among them to any question. The dentifrices showed satisfactory results with potential for its specificity.

Foram avaliados dentifrícios experimentais à base de Ricinus communis (DR), Triclosan (DT) e Cloramina-T (DC) para higiene de próteses totais, tendo como controle dentifrício sem agente antimicrobiano (DB) e água. Para análise in vitro foram realizados ensaios físico-químicos (medida da densidade, pH, consistência e características reológicas); ensaio de abrasividade, avaliada em 30 espécimes de resina acrílica antes e após a escovação artificial e análise microbiológica com a formação de biofilme multiespécies (S. mutans, C. albicans e C. glabrata) sobre espécimes em resina acrílica. Estes, após contaminação, foram escovados por 60s com DR, DT, DC e DB e água (n=10). Foram empregados controles positivo (contaminado e não escovado) e negativo (sem contaminação). Para análise in vivo, seguiu-se o modelo \"crossover\" com \"washout\" de 7 dias. Os voluntários escovaram suas próteses superiores 3 vezes ao dia por 07 dias. A capacidade de remoção do biofilme foi avaliada empregando evidenciação, fotografia e quantificação com software Image Tool 3.0. Na avaliação antimicrobiana, o biofilme foi desprendido da prótese por escovação com solução salina e a suspensão resultante, semeada em meios de cultura específicos para Candida spp, S. mutans, S. aureus e bactérias Gram-negativas. As espécies de Candida foram identificadas pelo meio de cultura Chromagar e pela PCR (Polymerase Chain Reaction). Na avaliação dos dentifrícios pelos participantes foi aplicado questionário. Os resultados das características organolépticas e físico-químicas foram informados em tabelas autoexplicativas. Os dados de rugosidade foram analisados por ANOVA e os dados da ação antimicrobiana in vitro, pelo teste de Kruskal-Wallis. Para os dados das variáveis clínicas (in vivo), empregou-se teste de Friedman e o teste de Cochran. Os testes estatísticos foram realizados com p<0,05. Os dentifrícios não apresentaram diferença quanto à abrasividade (DB=0,264±0,098; DR=0,236±0,236; DT=0,265±0,116; DC=0,203±0,105), porém promoveram aumento da rugosidade comparando à água (0,027±0,004). Frente às espécies de Candida, in vitro, o DT foi o mais eficaz (p=0,00; m=1,30) seguido do DC (m=2,6), DB (m=3,26) e DR (m=3,59). Para o S. mutans houve diferença entre a água (m=3,86) e os dentifrícios (p=0,001), porém não entre estes (DB: m=0; DR: m=2,3 e DC: m=0). DT inibiu o crescimento de S. mutans. Quanto à capacidade de remoção do biofilme, não houve diferença entre os dentifrícios (p=0,055; DB: m=7,39; DR: m=7,94; DT: m=10,16; DC: m=8,14), porém houve redução do biofilme comparando ao Baseline (m=16,53). Os dentifrícios não apresentaram diferença antimicrobiana, in vivo, contra Candida spp. (p=0,495), S. mutans (p=0,497), S. aureus (p=0,845) e bactérias Gram-negativas (p=0,425). Na identificação das espécies de Candida pelo Chromagar não houve diferença quanto ao seu aparecimento independente do dentifrício (p=0,466). O resultado pela PCR foi semelhante à identificação convencional e as espécies de C. albicans, C. tropicalis e C. glabrata foram mais prevalentes, respectivamente. Na avaliação dos dentifrícios pelos participantes não houve diferença (p>0,05) entre eles para nenhuma questão. Os dentifrícios apresentaram resultados satisfatórios, apresentando potencial para uso clínico e controle do biofilme de próteses totais. / This study evaluated experimental dentifrices based on Ricinus communis (DR), Triclosan (DT) and Cloramina-T (DC) for complete denture cleaning. To in vitro analysis were performed physicochemical tests (measurement of density, pH, consistency and rheological characteristics); abrasiveness test evaluated in 30 acrylic resin specimens before and after artificial brushing and microbiological analysis with multi-species biofilm formation (Streptococcus mutans, C. albicans and C. glabrata) on the specimens of acrylic resin. This specimens were manually brushed for 60 seconds with DR, DT, DC and DB and water (n = 10). Positive controls were used (contaminated and not brushed) and negative (no contamination). To in vivo analysis the study followed the crossover model with washout of 7 days. The volunteers brushed their upper dentures 3 times daily for 07 days. The removal of biofilm capacity was evaluated employing evidenciation, photography and quantification with Image Tool 3.0 software. For the evaluation of antimicrobial activity, the biofilm was removed from the denture by brushing with saline solution and the suspension was seeded in culture media specific for Candida spp, S. mutans, S. aureus and Gram-negative bacteria. The Candida species were identified by culture medium Chromagar and PCR method (Polymerase Chain Reaction). One questionnaire was used for the dentifrices evaluation by the participants. The results of physicochemical characteristics were informed in self-explanatory tables. The roughness data were analyzed by ANOVA and antimicrobial activity in vitro data by the Kruskal-Wallis test. To the data of the clinical variables (in vivo) was used Friedman test and Cochran test. Statistical tests were performed with p<0.05. The dentifrices showed no difference in the abrasiveness (DB=0.264 ± 0.098, DR=0.236 ± 0.236, DT=0.265 ± 0.116, DC=0.203 ± 0.105), but promoted increased roughness when compared to water (0.027 ± 0.004). To Candida species, in vitro, the DT was the most effective (p=0.00, m=1.30) followed by DC (m=2.6), DB (m=3.26) and DR (m=3.59). To S. mutans there was difference between the water (m=3.86) and dentifrices (p=0.001), but these did not showed difference from each other (DB: m=0; DR: m=2.3 and DC: m=0). DT inhibited the growth of S. mutans. There was no difference among the dentifrices for biofilm removal (p=0.055; DB: m=7.39; DR: m=7.94; DT: m=10.16; DC: m=8.14), but the biofilm decreased when compared to Baseline (m=16.53). The dentifrices showed no difference antimicrobial, in vivo, against Candida spp. (p=0.495), S. mutans (p=0.497), S. aureus (p=0.845) and Gram-negative bacteria (p=0.425). In the identification of Candida species by Chromagar there was no difference in the appearance of their independent dentifrices (p=0.466). The result by PCR was similar conventional identification, and the species of C. albicans, C. tropicalis and C. glabrata were more prevalent, respectively. In the evaluation of dentifrices by the participants there was no difference (p>0.05) among them to any question. The dentifrices showed satisfactory results with potential for its specificity.

A presença de bactérias no cultivo in vitro de plantas é normalmente relacionada à contaminação, acarretando o descarte de microplantas de alto valor comercial. No entanto, essa presença pode ser caracterizada como \"manifestações\", decorrentes de possíveis estresses físicos ou nutricionais, da microbiota endofítica, que coloniza ativamente os tecidos vegetais, e que não necessariamente, afeta o desenvolvimento da planta. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi controlar a manifestação bacteriana, preservando as microcepas de Eucalyptus cloeziana em desenvolvimento in vitro, adicionando-se ao meio de cultura, os antibióticos gentamicina, ciprofloxacina, rifampicina, timentin (isolados ou combinados entre si) e o biocida clorometil-isotiazolinona + metil-isotiazolinona. O monitoramento do trabalho foi realizado por meio de avaliações semanais, visando verificar possíveis influências dos agentes antimicrobianos na morfofisiologia do vegetal e a eficiência no controle das manifestações bacterianas. Para tanto, foram avaliados parâmetros referentes ao incremento de massa seca, número de brotações, teor de acúmulo de nutrientes, análises histológicas e histoquímicas das microcepas. Para verificar possíveis flutuações das comunidades bacterianas endofíticas nas microcepas, utilizou-se a técnica de DGGE. Todas as análises foram realizadas aos 15 e 30 dias após a adição dos agentes antimicrobianos no meio de cultura, exceto a avaliação nutricional que foi feita apenas no final do experimento (30 dias). Os resultados obtidos permitiram inferir que ao longo dos 30 dias de cultivo, o antibiótico gentamicina, ocasionou queda no desenvolvimento das microcepas e não foi eficiente no controle das manifestações bacterianas. Os antibióticos rifampicina e ciprofloxacina apesar de não serem efetivos no controle da manifestação bacteriana, não afetaram o desenvolvimento das microcepas. Conclui-se que, o biocida clorometil-isotiazolinona + metil-isotiazolinona efetivamente controlou as manifestações bacterianas, sem alterar a morfofisiologia das microcepas, bem como o timentin, que além de controlar as manifestações, proporcionou maior vigor das microcepas em função da melhor assimilação dos nutrientes. / The in vitro bacterial presence in plant cultivation, usually is related to contamination, resulting in the elimination of the microplants with high commercial value. However, this presence can be characterized as \"manifestations\" arising from possible physical or nutritional stresses, from microbial endophytic that actively colonize plant tissues, and do not necessarily affect plant development. Therefore, the purpose of this study was to control the bacterial manifestation, preserving in vitro developing of Eucalyptus cloeziana microstumps, by adding to the culture medium, the antibiotics gentamicin, ciprofloxacin, rifampicin, timentin (alone or combined) and biocide + chloromethyl isothiazolinone methyl-isothiazolinone. The monitoring work was conducted through weekly evaluations, to verify the possible influence of antimicrobial agents in the plant morphophysiology and the efficient control of bacterial manifestations. Therefore, were evaluated parameters related to the increase in dry weight, number of buds, content of nutrient accumulation, histological and histochemical the microstumps. DGGE technique was used to check possible fluctuations of endophytic bacterial communities in microstumps. All analyzes were performed at 15 and 30 days after the addition of antimicrobial agents in the culture medium, except for the nutritional assessment that was made only at the end of the experiment (30 days). The results allow to infer that over the 30 days of culture, the antibiotic gentamicin, resulted in the microstumps development decrease and was not effective in controlling bacterial manifestations. The antibiotics rifampicin and ciprofloxacin although were not effective in controlling the bacterial manifestation, affected the development of microstumps. It was concluded that the biocide chloromethyl-methyl-Isothiazolinone + Isothiazolinone effectively controlled the bacterial manifestations without modifying the morphophysiology of the microstumps, well as the timentin, which besides controlling the manifestations, provided greater vigor of microstumps due to better assimilation of nutrients.

Os processos industriais de produção de álcool existentes no Brasil reutilizam o fermento em ciclos fermentativos consecutivos. Paralelamente, o excedente produzido pela multiplicação das células de levedura durante esse processo é seco e comercializado, principalmente no mercado externo, como ingrediente para ração animal. As práticas usualmente utilizadas nas indústrias para reduzir a contaminação bacteriana são o tratamento ácido do creme de levedura e a aplicação de antibióticos. Porém, desde que foram detectados altos níveis de resíduos de antibióticos na levedura destinada à ração animal, seu uso tem sido condenado pela comunidade internacional. Desde então as indústrias brasileiras têm buscado alternativas aos antibióticos para o controle da contaminação bacteriana. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana do extrato da própolis sobre as bactérias do gênero Lactobacillus fermentum e Bacillus subtillis, que são alguns dos contaminantes da fermentação alcoólica. O maior pico de produção de compostos fenólicos totais foi com uso de etanol 76% como solvente, à 58°C por 50 minutos, apresentando 68,95 mg de CFT/g de própolis e um halo de inibição de 6 e 5mm para Bacillus e Lactobacillus, respectivamente. As faixas das variáveis que maximizaram o teor alcoólico foi o processo fermentativo conduzido a 32°C, com 41 g de células de leveduras/L, em um meio contento 18,5°Brix. Apesar do antimicrobiano comercial ter apresentado maior eficiência na redução da contaminação (94,46% e 97,40% para Lactobacillus e Bacillus, respectivamente), o extrato de própolis tem potencial para ser utilizado no controle dos contaminantes bacterianos presentes nas fermentações etanólicas, sendo responsável por redução de 54,24% e 67,02% para Lactobacillus e Bacillus, respectivamente. / The industrial processes of ethanol production in Brazil reuse yeast fermentation in consecutive cycles. In parallel, the surplus produced by the multiplication of yeast cells during this process is dried and sold, mainly in foreign markets as an ingredient for animal feed. The practices commonly used in industry to reduce bacterial contamination are the acid treatment of the yeast cream and the application of antibiotics. However, since they were detected high levels of antibiotic residues in yeast destined for animal feed, its use has been condemned by the international community. Since then Brazilian industries have sought alternatives to antibiotics to control bacterial contamination. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of the extract of propolis on bacteria of the genus Lactobacillus and Bacillus, which are some of the contaminants of fermentation. The highest peak production of phenolic compounds was using 76% ethanol as solvent at 58°C for 50 minutes, with 68,95 mg of CFT/g of propolis and a halo of inhibition of 6 and 5mm for Bacillus and Lactobacillus, respectively. The ranges of variables that maximized the alcoholic fermentation was conducted at 32°C with 41g of yeast cells/L in media containing a 18,5°Brix. Despite having larger commercial antimicrobial effectiveness in reducing contamination (94,46% and 97,40% for Lactobacillus and Bacillus, respectively), the extract of propolis has potential to be used in the control of bacterial contaminants present in the ethanolic fermentation, and responsible for reduction of 54,24% and 67,02% for Lactobacillus and Bacillus, respectively.

Listeria monocytogenes é um microrganismo patogênico psicrotrófico e consequentemente de grande importância para alimentos conservados em refrigeração. Vários estudos têm demonstrado que é possível utilizar antimicrobianos naturais, como bacteriocinas e compostos fenólicos, para retardar a multiplicação desse patógeno em produtos cárneos refrigerados. Entretanto, sabe-se que a atividade antimicrobiana desses compostos pode ser influenciada pelos componentes da matriz alimentar. Esse trabalho de mestrado pretendeu avaliar a influência dos ingredientes de lingüiça frescal de suíno na ação inibitória de óleo essencial de orégano (OEO) e nisina sobre Listeria monocytogenes. Foram realizados testes com diferentes modelos alimentares preparados com carne suína moída adicionada de cada um dos ingredientes utilizados na fabricação de lingüiça frescal (sais de cura, açúcar, antioxidante, emulsificante, condimentos e NaCl) separadamente, comparando-se os resultados com os obtidos no modelo contendo todos os ingredientes simultaneamente. Pretendeu-se também avaliar a interferência do tempo de contato da nisina e óleo essencial de orégano com os diferentes modelos alimentares na ação antimicrobiana sobre L. monocytogenes. Os resultados indicaram que os antimicrobianos foram capazes de inibir a multiplicação de L. monocytogenes em todos os modelos analisados armazenados à 5ºC por até 72h. Comparando-se todos os modelos compostos por carne adicionada de apenas um dos ingredientes, a maior atividade antilisterial foi observada no modelo composto de carne com antioxidante. Entretanto, essa atividade inibitória foi menor do que a obtida no modelo contendo todos os ingredientes em conjunto. Quanto à influência do tempo prévio de contato entre os antimicrobianos e os modelos estudados na ação antilisterial, observou-se que na formulação com todos os ingredientes a ação foi mais intensa quando o contato foi de 2h. Entretanto, neste modelo o efeito mais duradouro foi obtido com 12h de contato prévio. Nos demais modelos, o maior efeito foi obtido no tempo zero. Os resultados permitem concluir que cada um dos ingredientes da formulação da lingüiça contribui com uma parcela na ação antilisterial do OEO e nisina nesse produto, e que essa ação é influenciada pelo tempo de contato prévio entre os modelos e os agentes antimicrobianos. / Listeria monocytogenes is psychrotrophic pathogen and, consequently, very important for cold-preserved foods. Many studies have demonstrated that natural antimicrobials such as bacteriocins and phenolic compounds can be used to inhibit the growth of this pathogen in refrigerated meat products. However, it is known that the antimicrobial activity of these antimicrobials may be influenced by components of the food matrix. The aim of the present study was to evaluate the influence of the ingredients of \"lingüiça\" in the inhibitory activity of O.E.O. and nisin against L. monocytogenes. The study was carried out with different food models prepared with minced raw pork meat added separately of each ingredient used for manufacturing \"lingüiça\" (curing salts, sugar, antioxidants, emulsifiers, condiments and NaCl), and results were compared to those obtained in a model containing all ingredients simultaneously. The study also aimed to evaluate the interference of the contact time between the food models and the antimicrobials on the effect against L. monocytogenes. Results indicated that the antimicrobials added to the models were able to inhibit the growth of the pathogen at 5ºC up to 72h. Comparing the models, the highest antilisterial activity was observed in the model containing pork meat and antioxidants. However, this inhibitory activity was lower than that observed in the model with all ingredients. What concerns the influence of contact time in antilisterial activity, we observed that in the model containing all ingredients the antilisterial activity was more intense after 2h of contact, but the more lasting effect was observed after 12h of contact. In the other models, the most intense effect was noted in time zero. The conclusions of the study are that each ingredient used in manufacture of \"lingüiça\" has its share in the antilisterial activity of nisin and OEO in this product and that this activity is influenced by the contact time between the food matrix and the antimicrobials.