Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à etiologia da periodontite agressiva localizada. A colonização de tecidos do hospedeiro é necessária para patogênese e a adesão é fundamental. A proteína autotransportada Aae faz a adesão da bactéria a células epiteliais gengivais. Proteínas autotransportadas de diferentes espécies apresentam múltiplas funções e podem ser antígenos vacinais na prevenção de infecções. Para entender o papel de Aae na ligação ao hospedeiro e efeito de anticorpos contra Aae, o polimorfismo de aae na região que codifica o domínio de ligação a células epiteliais foi determinado e relacionado à adesão a células epiteliais KB . Aae recombinante foi obtida, e a capacidade de ligação a proteínas da matriz extracelular e soro foi determinada em ensaios com a recombinante e com uma amostra deficiente na expressão de Aae obtida (ensaios comparativos com amostra selvagem). Títulos de IgG contra Aae em pacientes com periodontite agressiva e saudáveis foram determinados e relacionados à resposta humoral contra sorotipos de A. actinomycetemcomitans. Por fim, o efeito de anticorpos contra Aae e/ou seu domínio efetor, produzidos em modelo animal, foi determinado na inibição da adesão mediada por Aae e opsonização por fagócitos. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is related with etiology of localized aggressive periodontitis. Colonization of host tissues is necessary to pathogenesis and adhesion is essential. The autotransporter protein Aae mediates the adhesion of bacteria to gingival epithelial cells. Autotransporter proteins from different species have multiple functions and could be vaccine antigens to prevent infections. To understand the role of Aae in host interaction and the effect of antibodies against Aae, polymorphism of aae in codifying effector domain region of ligation to epithelial cells was determined and related with adhesion to these cells. Recombinant Aae was obtained and the ability of interaction with Extracellular matrix and serum proteins was determined through assays using the recombinant and an obtained defective sample in Aae expression (comparative assays with wild type). IgG titters against Aae were determined in patients with aggressive periodontitis and healthy and related to humoral response against A. actinomycetemcomitans serotypes. At last, the effect of antibodies against Aae and/or its effector domain, obtained in animal model, was determined in inhibition of adhesion to epithelial cells and macrophages oopsonization.

Dentro do contexto do novo paradigma da doença periodontal, alguns estudos têm sugerido que a doença periodontal poderia influenciar o desenvolvimento de doenças sistêmicas, incluindo os acidentes vasculares cerebrais. O objetivo deste estudo foi avaliar as condições periodontais de pacientes com acidente vascular cerebral (AVC), comparativamente à amostra populacional sem AVC, bem como identificar e quantificar o nível de bactérias periodontopatogênicas presentes nas áreas de bolsa periodontal com a finalidade de investigar a correlação da doença periodontal com acidente vascular cerebral. Para tanto, foram selecionados 80 pacientes de ambos os sexos, com idade entre 30-80 anos. O grupo experimental foi constituído por 20 pacientes internados em ambiente hospitalar devido à ocorrência de AVC. O grupo controle foi constituído de 60 pacientes provenientes da amostra populacional da cidade de Bauru que não apresentavam sinais e sintomas clínicos ou história familiar de AVC. Um questionário de saúde investigando as possíveis causas do AVC e outras condições sistêmicas foi aplicado a todos os pacientes. Os dois grupos foram avaliados periodontalmente quanto às medidas de profundidade de sondagem, nível de inserção, sangramento à sondagem e índice de placa. Para identificar e quantificar as bactérias periodontopatogênicas, Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, em ambos os grupos, foi coletada amostra de placa dentomicrobiana subgengival dos dois sítios com maior profundidade de sondagem de todos os pacientes, por meio da introdução de tira de papel esterilizada (PerioPaper) no sulco gengival. A análise qualitativa e quantitativa dessas bactérias foi realizada por meio de PCR convencional e em tempo real. Os dados obtidos foram analisados por meio de análise de variância (ANOVA) complementado pelo método de Tukey, teste de correlação de Spearman, teste \"t\" de Student, Mann-Whitney, Qui-Quadrado e \"Odds Ratio\" para avaliar a correlação entre os diferentes parâmetros clínicos periodontais com o AVC e os resultados obtidos pelo PCR convencional e PCR em tempo-real, com nível de confiança de 95%. Os resultados obtidos mostraram maior prevalência da doença periodontal no grupo teste (95%) do que no controle (28,3%). O nível de inserção à sondagem, índice de placa e índice gengival estavam significativamente aumentados nos pacientes com AVC (p<0,001). Entretanto, as medidas de profundidade de sondagem não mostraram diferenças significantes entre os grupos (p=0,051), embora estivessem aumentadas para o grupo teste. A presença e quantidade da P.gingivalis foi estatisticamente maior no grupo teste do que no controle (p<0,05). Não foi encontrado A.actinomycetemcomitans em nenhum dos grupos estudados. Do total de pacientes com AVC, 65% desenvolveram AVC-I e 35% AVC-H. Pacientes com AVC-H abrigavam maiores níveis de P.gingivalis do que pacientes com AVC-I. Entretanto, nesse grupo, houve correlação positiva entre bolsas mais profundas e contagem de bactérias (p<0,05), o que não foi observado para AVC-H. A análise de risco por \"odds ratio\" identificou que pacientes com doença periodontal apresentam risco elevado de desenvolvimento de AVC (OR=48,06, IC=95%). Esses achados indicam que a doença periodontal é mais prevalente e severa em pacientes com AVC-I ou AVC-H, com grande quantidade de bactérias, especialmente P. gingivalis, presente em bolsas periodontais mais profundas, sugerindo que a doença periodontal poderia atuar como fator de risco ao desenvolvimento de acidentes vasculares cerebrais. / Inside of the context of the new paradigm of the periodontal disease, some studies have suggested that the periodontal disease could influence the development of systemics diseases, including vascular cerebral accident. The aim of this study was to evaluate the periodontal conditions of patients with vascular cerebral accidents (VCAs), comparatively to the population sample without VCA, as well as identifying and quantifying the level of periodontopathic bacteria presents in the areas of periodontal pocket in order to investigate the correlation of the periodontal disease with vascular cerebral accident. For this study, it had been selected 80 patients of both genders, with age between 30-80 years. The experimental group consisted of 20 hospitalized patients presenting VCA. The control group was consisted of 60 patients proceeding from the population sample of Bauru who did not present clinical signs and symptoms or family history of VCA. A health questionnaire investigating the possible causes of the VCA and others systemics conditions was applied to all patients. The both groups were periodontally evaluated according to probing depth measures; bleed on probing and plaque index. In other to identify and quantify the periodontopathic bacteria Porphyromonas gingivalis and Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, in both groups, a sample of subgengival plaque was collected from the two deepest sites of all patients by the introduction of sterilized paper strip (PerioPaper). The qualitative and quantitative analysis of these bacteria was performed by conventional PCR and Real Time PCR. Data were analyzed by variance analysis test (ANOVA) complemented by the Tukey test, Pearson correlation test, Student \"t\" test, Mann-Whitney test, Qui-Square test and Odds Ratio to evaluate the different correlations between the different periodontal clinical parameters VCA, and the results obtained from the Real Time PCR, with a 95% confidence level. The analysis of the results showed significantly bigger prevalence of the periodontal disease in the test group (95%) than the control group (28,3%). The level of insertion, plaque index and bleeding on probing were significantly increased in the patients with VCA (p<0,001). However, the probing depth measures had not shown significant differences between the groups (p=0,051), even so were increased for the test group. The presence and amount of the P.gingivalis were statistically bigger in the test group than the control group (p<0,05). A.actinomycetemcomitans was not found in any of the studied groups. Considering all patients with VCA, 65% developed VCA-I and 35% VCA-H. Patients with VCA-H showed greater levels of P.gingivalis than patient with VCA-I. However, in this group, it had positive correlation between deeper pockets and number of bacteria (p<0,05), what it was not observed for VCA-H. The analysis of risk for \"odds ratio\" identified that patient with periodontal disease present high risk of VCA development (OR=48,06, IC=95%). These findings show that the periodontal disease is more prevalent and severe in patients with VCA-I or VCA-H, with great amount of bacteria, especially P. gingivalis, present in deeper periodontal pockets, suggesting that the periodontal disease could play as risk factor on the development of vascular cerebral accident.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans produz fatores de virulência que induzem destruição periodontal, porém a sua regulação é pouco conhecida. O sistema de dois componentes ArcAB é um regulador da transcrição gênica que percebe concentrações de oxigênio no ambiente. Este estudo tem como objetivo construir uma amostra de A. actinomycetemcomitans arcB deficiente e comparar características fenotípicas e de transcrição gênica em relação à amostra selvagem. As curvas de crescimento em condições de microaerofilia e anaerobiose foram similares. Foram observadas diferenças nas capacidades de adesão e invasão às células epiteliais, de formação de biofilme, de adesão à hidroxiapatita recoberta por saliva e na hidrofobicidade entre as amostras. A análise de transcrição gênica por RT-PCR em tempo real mostrou expressão diferenciada de apaH, vppA, vapA e omp29. Os dados indicam que em A. actinomycetemcomitans, ArcB é capaz de detectar condições redox, sendo associado a expressão de fatores de colonização da cavidade oral, regulando a transcrição de genes associados à virulência. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans produces several virulence factors which induce periodontal destruction, but little is known about their regulation. The two components system ArcAB is a genetic transcription regulator that senses oxygen concentrations in the environment. This study aimed to construct an A. actinomycetemcomitans arcB deficient mutant and to compare phenotypic carachteristics and gene transcription with the wild type. The growth curves under microaerophilic and anaerobic conditions were similar. There were differences in abilities to adhere and invade epithelial cells, to form biofilm, to adhere to saliva-coated hydroxyapatite and in hydrophobicity between the strains. Gene transcription analysis by real time PCR showed differential expression of apaH, vppA, vapA and omp29. These data indicate that in A. actinomycetemcomitans, ArcB is able to detect redox conditions and is associated with colonization factors of the oral cavity, by regulating transcription of genes associated with virulence.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à periodontite agressiva e produz CDT. Visando contribuir no entendimento do papel da CDT na regulação da resposta imune, foi determinada sua atividade sobre macrófagos e a resposta humoral contra a toxina. CDT inibiu a proliferação de células epiteliais OBA-9 e macrófagos Raw 264.7 e também a produção de NO por células Raw 264.7 e macrófagos peritoneais de camundongos C3H/HePas e C3H/HeJ, mas estimulou a produção de IL-12. Na imunidade humoral, 75% dos soros de indivíduos com PAgL e 81,8% dos PAgG foram reativos para A. actinomycetemcomitans. Não houve diferença na resposta contra CDTA e CDTB entre o soro de pacientes com diferentes condições periodontais. Todos os pacientes PAgG foram soropositivos para a CDTC, porém apenas 8,3% dos indivíduos com PAgL, nenhum dos PC e 25% dos saudáveis foram positivos. CDT tem atividade imunomodulatória e a resposta humoral difere entre indivíduos infectados pela bactéria. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is associated with aggressive periodontitis and produces CDT. Aiming to contribute in the understanding the CDT activity in the immune response regulation, its action on macrophages was determined and the response against the toxin analyzed. CDT inhibited the proliferation of OBA-9 epithelial cells and Raw 264.7 macrophages and also inhibited the NO production by Raw 264.7 cells and peritoneal macrophages of C3H/HePas and C3H/HeJ mice, however, stimulated the IL-12 production. In the humoral immunity, 75% of sera from LAgP subjects and 81.8% were reactive to A. actinomycetemcomitans. There was not difference in the response against CDTA and CDTB among sera of patients with different periodontal conditions. All GAgP subjects were sera-reactivity to CDTC, however only 8.3% LAgP subjects, none in CP and 25% of healthy subjects were positive. CDT has immunomodulatory activity and the humoral response differ among bacteria infected subjects.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à periodontite agressiva, caracterizada pela intensa reabsorção do osso alveolar. Esta espécie produz a toxina distensora citoletal (AaCDT) que possui atividade de DNAse, e promove o bloqueio das células alvo na fase G2 ou G1/ G2. Por outro lado, CDT ativa a cascata apoptótica pela atividade de PIP3, regulando a proliferação e sobrevivência de linfócitos, pelo bloqueio de Akt. Em monócitos, AaCDT induz aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias e inibe a produção de óxido nítrico e fagocitose. Células precursoras de osteoclastos têm origem hematopoiética e sofrem diferenciação em osteoclastos, mediada pelo RANKL, mas outros fatores co-estimulatórios estão envolvidos. A AaCDT induz a produção de RANKL por fibroblastos. Assim, formulamos a hipótese se CDT influenciaria a homeostase óssea por afetar a diferenciação de células precursoras de osteoclastos. O estudo visou determinar o efeito de AaCDT sobre a sobrevivência, diferenciação e atividade em RAW264.7 e BMC. Os dados sugerem que a CDT interfere na homeostase óssea, favorecendo a indução da diferenciação de células precursoras de osteoclastos e alterando o perfil de citocinas produzidas. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is associated with aggressive periodontitis, characterized by severe alveolar bone resorption. This species produces a distending toxin cytolethal (AaCDT) which has DNase activity, and promotes the blocking of target cells in G2 or G1 / G2 phase. On the other hand, CDT activates the apoptotic cascade by PIP3 activity, regulating lymphocyte proliferation and survival by blocking Akt. In monocytes, AaCDT enhances the production of proinflammatory cytokines and inhibits nitric oxide production and phagocytosis. Osteoclast precursor cells are of hematopoietic origin and must undergo differentiation into osteoclasts mediated by RANKL although other co-stimulatory factors are involved. AaCDT induces the production of RANKL by fibroblasts. Thus, CDT is hypothesized to influence bone homeostasis by affecting the differentiation of precursor cells into osteoclasts. This study aimed to determine the effect of AaCDT on survival, differentiation and activity of osteoclasts precursor cells. The data suggested that CDT interfere in bone homeostasis, favoring the differentiation of osteoclasts precursors cells and by altering their cytokines profile.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) é associado a periodontite agressiva. Na infecção, pode ocorrer ativação de vias de sinalização do hospedeiro e bacterianas. Objetivos: determinar a transcrição de genes relacionados à virulência bacteriana e das vias de transdução de sinais da célula epitelial após interação bactéria-célula epitelial. Métodos: cepas de A.a foram co-cultivadas com células epiteliais OBA-9. A transcrição dos genes bacterianos e das células epiteliais foi determinada por RT-qPCR e a concentração de citocinas determinada por ELISA. Resultados: A regulação da transcrição de certos genes de virulência de A.a é cepa e tempo específica. Quinze genes foram regulados positivamente nas células OBA-9 infectadas. Altos níveis de GM-CSF, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e ICAM-1 foram detectados em células OBA-9 infectadas e tecidos gengivais de pacientes com periodontite. Conclusão: a interação entre A. a e célula epitelial pode modular a resposta do hospedeiro com a indução da expressão de fatores que exacerbam o processo inflamatório. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) is associated with the etiology of aggressive periodontitis. The activation of signaling pathways by the host and bacterial cells occurs during infection. Objectives: to determine the transcription of genes related to bacterial virulence and epithelial cell after bacterial-epithelial cell interaction. Methods: A.a strains were co-cultured with epithelial cells OBA-9. The transcription of A.a virulence genes and genes belonging to signaling transduction pathway were determined by RT-qPCR and the concentration of cytokines was determined by ELISA. Results: the transcription of some virulence genes is strain and time specific. Fifteen genes were up-regulated in OBA-9 cells. High levels of GM-CSF, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 and ICAM-1 were detected in infected OBA-9 cells and tissues of patients with periodontitis. Conclusion: the interaction between A.a and epithelial cell can modulate the host response with induction of factors which exacerbate inflammatory process.

As doenças periodontais (DP) afetam os tecidos de suporte dos dentes e são desencadeadas por micro-organismos gram-negativos anaeróbios presentes no biofilme periodontal. A evolução da doença é influenciada pela resposta inflamatória e imunológica do hospedeiro e envolve a participação de diversos tipos celulares, que atuam no micro ambiente local modulando a resposta do hospedeiro em busca do controle da infecção. Acredita-se que citocinas inflamatórias, quimiocinas e seus receptores estão envolvidos na migração celular para os tecidos periodontais, contudo, pouco se sabe sobre os mecanismos de determinação de resistência ou susceptibilidade às DP; ou no desencadeamento do dano tecidual decorrente da resposta. Neste projeto, avaliou-se o papel das células CCR5+ na DP experimental induzida pela inoculação oral de Aggregatibacter actinomycetemcomitans em camundongos C57BL/6 wild type e camundongos CCR5-knockout. Os resultados mostram que a maioria das células CCR5+ possuem fenótipo compatível com células T do subtipo Th1, devido a co-expressão de CD3 e CXCR3; além de co-expressarem RANKL. Na ausência das células CCR5+, houve uma significativa diminuição da migração de células inflamatórias totais e RANKL+ para os tecidos periodontais, diminuição da reabsorção óssea alveolar, diminuição dos níveis de expressão de citocinas pró-inflamatórias TNF&#945;-, IL-1&#946; e IFN-&#947;, assim como diminuição na expressão de MMP-1, MMP-2 e MMP-13. Sua ausência não interferiu no controle da infecção periodontal apesar da diminuição dos níveis de iNOS. Estes resultados conduzem à conclusão de que a maioria das células CCR5+ são células T do subtipo Th1, que atuam como importantes moduladoras das citocinas TNF&#945;-, IL-1&#946; e IFN-&#947;, das metaloproteinases de matriz MMP-1, MMP-2 e MMP-13, e que também expressam e modulam a expressão de RANKL, tendo participação importante na imunopatogenese da DP experimental, sem interferir no controle da infecção periodontal. Estes fatos tornam as células CCR5+ potenciais alvos para intervenção terapêutica visando ao controle das doenças periodontais. / The periodontal diseases (PD) affect the supportive tissues of the teeth and are triggered by periodontopathogens present in the dental biofilm. The clinical outcome is highly influenced by the host inflammatory and immune response with participation of many cellular types, that act in the local microenvironment modulating the host response to control the infection. Inflammatory cytokines, chemokines and its receptors are thought to be involved in the cellular migration to the periodontal tissues, but there is little knowledge about the mechanisms of determination of resistance or susceptibility to the PD and in the triggering of tissue damage by immune response components. This study evaluated the role of CCR5+ cells in the experimental PD induced by oral inoculation of Aggregatibacter actinomycetemcomitans in C57BL/6 wild type mice and CCR5-knockout mice. The phenotypic analysis of inflammatory infiltrate demonstrated that the most of CCR5+ cells coexpress CD3 and CXCR3, suggesting a phenotype compatible with Th1-type cells, and also co-express RANKL. In the absence of CCR5+ cells there was a significant overall reduction of inflammatory cells and RANKL+ cells influx to the periodontal tissues, reduction in the alveolar bone resorption, reduction in the levels of pro-inflammatory cytokines TNF&#945;-, IL-1&#946; and IFN-&#947; expression, as a reduction in the expression of MMP-1, MMP-2 and MMP-13. The absence of CCR5+ cells did not impair the control of periodontal infection, despite the reduction of iNOS levels. In conclusion, these data demonstrate that the most of CCR5+ cells are Th1 cells, which act as important modulators of TNF&#945;-, IL-1&#946; and IFN-&#947;, MMP-1, MMP- 2 and MMP-13 levels, and which also express and modulate the expression of RANKL, playing an important role in the immunopathogenesis of experimental PD, without impairing the control of periodontal infection. These facts point to CCR5+ cells as potentials targets to therapeutic interventions aimed to control periodontal diseases.

Dentro do contexto do novo paradigma da doença periodontal, alguns estudos têm sugerido que a doença periodontal poderia influenciar o desenvolvimento de doenças sistêmicas, incluindo os acidentes vasculares cerebrais. O objetivo deste estudo foi avaliar as condições periodontais de pacientes com acidente vascular cerebral (AVC), comparativamente à amostra populacional sem AVC, bem como identificar e quantificar o nível de bactérias periodontopatogênicas presentes nas áreas de bolsa periodontal com a finalidade de investigar a correlação da doença periodontal com acidente vascular cerebral. Para tanto, foram selecionados 80 pacientes de ambos os sexos, com idade entre 30-80 anos. O grupo experimental foi constituído por 20 pacientes internados em ambiente hospitalar devido à ocorrência de AVC. O grupo controle foi constituído de 60 pacientes provenientes da amostra populacional da cidade de Bauru que não apresentavam sinais e sintomas clínicos ou história familiar de AVC. Um questionário de saúde investigando as possíveis causas do AVC e outras condições sistêmicas foi aplicado a todos os pacientes. Os dois grupos foram avaliados periodontalmente quanto às medidas de profundidade de sondagem, nível de inserção, sangramento à sondagem e índice de placa. Para identificar e quantificar as bactérias periodontopatogênicas, Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, em ambos os grupos, foi coletada amostra de placa dentomicrobiana subgengival dos dois sítios com maior profundidade de sondagem de todos os pacientes, por meio da introdução de tira de papel esterilizada (PerioPaper) no sulco gengival. A análise qualitativa e quantitativa dessas bactérias foi realizada por meio de PCR convencional e em tempo real. Os dados obtidos foram analisados por meio de análise de variância (ANOVA) complementado pelo método de Tukey, teste de correlação de Spearman, teste \"t\" de Student, Mann-Whitney, Qui-Quadrado e \"Odds Ratio\" para avaliar a correlação entre os diferentes parâmetros clínicos periodontais com o AVC e os resultados obtidos pelo PCR convencional e PCR em tempo-real, com nível de confiança de 95%. Os resultados obtidos mostraram maior prevalência da doença periodontal no grupo teste (95%) do que no controle (28,3%). O nível de inserção à sondagem, índice de placa e índice gengival estavam significativamente aumentados nos pacientes com AVC (p<0,001). Entretanto, as medidas de profundidade de sondagem não mostraram diferenças significantes entre os grupos (p=0,051), embora estivessem aumentadas para o grupo teste. A presença e quantidade da P.gingivalis foi estatisticamente maior no grupo teste do que no controle (p<0,05). Não foi encontrado A.actinomycetemcomitans em nenhum dos grupos estudados. Do total de pacientes com AVC, 65% desenvolveram AVC-I e 35% AVC-H. Pacientes com AVC-H abrigavam maiores níveis de P.gingivalis do que pacientes com AVC-I. Entretanto, nesse grupo, houve correlação positiva entre bolsas mais profundas e contagem de bactérias (p<0,05), o que não foi observado para AVC-H. A análise de risco por \"odds ratio\" identificou que pacientes com doença periodontal apresentam risco elevado de desenvolvimento de AVC (OR=48,06, IC=95%). Esses achados indicam que a doença periodontal é mais prevalente e severa em pacientes com AVC-I ou AVC-H, com grande quantidade de bactérias, especialmente P. gingivalis, presente em bolsas periodontais mais profundas, sugerindo que a doença periodontal poderia atuar como fator de risco ao desenvolvimento de acidentes vasculares cerebrais. / Inside of the context of the new paradigm of the periodontal disease, some studies have suggested that the periodontal disease could influence the development of systemics diseases, including vascular cerebral accident. The aim of this study was to evaluate the periodontal conditions of patients with vascular cerebral accidents (VCAs), comparatively to the population sample without VCA, as well as identifying and quantifying the level of periodontopathic bacteria presents in the areas of periodontal pocket in order to investigate the correlation of the periodontal disease with vascular cerebral accident. For this study, it had been selected 80 patients of both genders, with age between 30-80 years. The experimental group consisted of 20 hospitalized patients presenting VCA. The control group was consisted of 60 patients proceeding from the population sample of Bauru who did not present clinical signs and symptoms or family history of VCA. A health questionnaire investigating the possible causes of the VCA and others systemics conditions was applied to all patients. The both groups were periodontally evaluated according to probing depth measures; bleed on probing and plaque index. In other to identify and quantify the periodontopathic bacteria Porphyromonas gingivalis and Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, in both groups, a sample of subgengival plaque was collected from the two deepest sites of all patients by the introduction of sterilized paper strip (PerioPaper). The qualitative and quantitative analysis of these bacteria was performed by conventional PCR and Real Time PCR. Data were analyzed by variance analysis test (ANOVA) complemented by the Tukey test, Pearson correlation test, Student \"t\" test, Mann-Whitney test, Qui-Square test and Odds Ratio to evaluate the different correlations between the different periodontal clinical parameters VCA, and the results obtained from the Real Time PCR, with a 95% confidence level. The analysis of the results showed significantly bigger prevalence of the periodontal disease in the test group (95%) than the control group (28,3%). The level of insertion, plaque index and bleeding on probing were significantly increased in the patients with VCA (p<0,001). However, the probing depth measures had not shown significant differences between the groups (p=0,051), even so were increased for the test group. The presence and amount of the P.gingivalis were statistically bigger in the test group than the control group (p<0,05). A.actinomycetemcomitans was not found in any of the studied groups. Considering all patients with VCA, 65% developed VCA-I and 35% VCA-H. Patients with VCA-H showed greater levels of P.gingivalis than patient with VCA-I. However, in this group, it had positive correlation between deeper pockets and number of bacteria (p<0,05), what it was not observed for VCA-H. The analysis of risk for \"odds ratio\" identified that patient with periodontal disease present high risk of VCA development (OR=48,06, IC=95%). These findings show that the periodontal disease is more prevalent and severe in patients with VCA-I or VCA-H, with great amount of bacteria, especially P. gingivalis, present in deeper periodontal pockets, suggesting that the periodontal disease could play as risk factor on the development of vascular cerebral accident.

As doenças periodontais (DP) afetam os tecidos de suporte dos dentes e são desencadeadas por micro-organismos gram-negativos anaeróbios presentes no biofilme periodontal. A evolução da doença é influenciada pela resposta inflamatória e imunológica do hospedeiro e envolve a participação de diversos tipos celulares, que atuam no micro ambiente local modulando a resposta do hospedeiro em busca do controle da infecção. Acredita-se que citocinas inflamatórias, quimiocinas e seus receptores estão envolvidos na migração celular para os tecidos periodontais, contudo, pouco se sabe sobre os mecanismos de determinação de resistência ou susceptibilidade às DP; ou no desencadeamento do dano tecidual decorrente da resposta. Neste projeto, avaliou-se o papel das células CCR5+ na DP experimental induzida pela inoculação oral de Aggregatibacter actinomycetemcomitans em camundongos C57BL/6 wild type e camundongos CCR5-knockout. Os resultados mostram que a maioria das células CCR5+ possuem fenótipo compatível com células T do subtipo Th1, devido a co-expressão de CD3 e CXCR3; além de co-expressarem RANKL. Na ausência das células CCR5+, houve uma significativa diminuição da migração de células inflamatórias totais e RANKL+ para os tecidos periodontais, diminuição da reabsorção óssea alveolar, diminuição dos níveis de expressão de citocinas pró-inflamatórias TNF&#945;-, IL-1&#946; e IFN-&#947;, assim como diminuição na expressão de MMP-1, MMP-2 e MMP-13. Sua ausência não interferiu no controle da infecção periodontal apesar da diminuição dos níveis de iNOS. Estes resultados conduzem à conclusão de que a maioria das células CCR5+ são células T do subtipo Th1, que atuam como importantes moduladoras das citocinas TNF&#945;-, IL-1&#946; e IFN-&#947;, das metaloproteinases de matriz MMP-1, MMP-2 e MMP-13, e que também expressam e modulam a expressão de RANKL, tendo participação importante na imunopatogenese da DP experimental, sem interferir no controle da infecção periodontal. Estes fatos tornam as células CCR5+ potenciais alvos para intervenção terapêutica visando ao controle das doenças periodontais. / The periodontal diseases (PD) affect the supportive tissues of the teeth and are triggered by periodontopathogens present in the dental biofilm. The clinical outcome is highly influenced by the host inflammatory and immune response with participation of many cellular types, that act in the local microenvironment modulating the host response to control the infection. Inflammatory cytokines, chemokines and its receptors are thought to be involved in the cellular migration to the periodontal tissues, but there is little knowledge about the mechanisms of determination of resistance or susceptibility to the PD and in the triggering of tissue damage by immune response components. This study evaluated the role of CCR5+ cells in the experimental PD induced by oral inoculation of Aggregatibacter actinomycetemcomitans in C57BL/6 wild type mice and CCR5-knockout mice. The phenotypic analysis of inflammatory infiltrate demonstrated that the most of CCR5+ cells coexpress CD3 and CXCR3, suggesting a phenotype compatible with Th1-type cells, and also co-express RANKL. In the absence of CCR5+ cells there was a significant overall reduction of inflammatory cells and RANKL+ cells influx to the periodontal tissues, reduction in the alveolar bone resorption, reduction in the levels of pro-inflammatory cytokines TNF&#945;-, IL-1&#946; and IFN-&#947; expression, as a reduction in the expression of MMP-1, MMP-2 and MMP-13. The absence of CCR5+ cells did not impair the control of periodontal infection, despite the reduction of iNOS levels. In conclusion, these data demonstrate that the most of CCR5+ cells are Th1 cells, which act as important modulators of TNF&#945;-, IL-1&#946; and IFN-&#947;, MMP-1, MMP- 2 and MMP-13 levels, and which also express and modulate the expression of RANKL, playing an important role in the immunopathogenesis of experimental PD, without impairing the control of periodontal infection. These facts point to CCR5+ cells as potentials targets to therapeutic interventions aimed to control periodontal diseases.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans está associado à periodontite agressiva, caracterizada pela intensa reabsorção do osso alveolar. Esta espécie produz a toxina distensora citoletal (AaCDT) que possui atividade de DNAse, e promove o bloqueio das células alvo na fase G2 ou G1/ G2. Por outro lado, CDT ativa a cascata apoptótica pela atividade de PIP3, regulando a proliferação e sobrevivência de linfócitos, pelo bloqueio de Akt. Em monócitos, AaCDT induz aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias e inibe a produção de óxido nítrico e fagocitose. Células precursoras de osteoclastos têm origem hematopoiética e sofrem diferenciação em osteoclastos, mediada pelo RANKL, mas outros fatores co-estimulatórios estão envolvidos. A AaCDT induz a produção de RANKL por fibroblastos. Assim, formulamos a hipótese se CDT influenciaria a homeostase óssea por afetar a diferenciação de células precursoras de osteoclastos. O estudo visou determinar o efeito de AaCDT sobre a sobrevivência, diferenciação e atividade em RAW264.7 e BMC. Os dados sugerem que a CDT interfere na homeostase óssea, favorecendo a indução da diferenciação de células precursoras de osteoclastos e alterando o perfil de citocinas produzidas. / Aggregatibacter actinomycetemcomitans is associated with aggressive periodontitis, characterized by severe alveolar bone resorption. This species produces a distending toxin cytolethal (AaCDT) which has DNase activity, and promotes the blocking of target cells in G2 or G1 / G2 phase. On the other hand, CDT activates the apoptotic cascade by PIP3 activity, regulating lymphocyte proliferation and survival by blocking Akt. In monocytes, AaCDT enhances the production of proinflammatory cytokines and inhibits nitric oxide production and phagocytosis. Osteoclast precursor cells are of hematopoietic origin and must undergo differentiation into osteoclasts mediated by RANKL although other co-stimulatory factors are involved. AaCDT induces the production of RANKL by fibroblasts. Thus, CDT is hypothesized to influence bone homeostasis by affecting the differentiation of precursor cells into osteoclasts. This study aimed to determine the effect of AaCDT on survival, differentiation and activity of osteoclasts precursor cells. The data suggested that CDT interfere in bone homeostasis, favoring the differentiation of osteoclasts precursors cells and by altering their cytokines profile.