Žemėje kasdien bandoma atrasti vis daugiau elementų, tačiau ieškojimai labai daug kainuoja, todėl vis daugiau mokslininkų kuria modelių, kurie padėtų apskaičiuoti masyvių branduolių stabilumą. Darbą sudaro: • Įvadas • Literatūros apžvelgimas • Tyriamsis darbas • Išvados Atlikus darbą buvo prieta išvados, kad reliatyvistinės pataisos sudaro didelę reikšmę masyvių branduolių stabilumui. / Earth's daily attempt to find more items, but the searches are very costly, so an increasing number of researchers designed models to calculate the massive nuclear stability. The work consists of: • Introduction • Reviewing the literature • Test work • Findings After work, it was concluded that the relativistic corrections of great importance to the stability of massive nuclei.

Orientador: Dora Maria Grassi-Kassisse / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francesconi_ElainePatriciaMaltezSouza_D.pdf: 3201819 bytes, checksum: 12b57dbd9c491f94ccbc38e657b254fe (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O adipócito é a unidade funcional do tecido adiposo branco e o principal reservatório de energia, tendo um papel chave na investigação fisiológica dos mecanismos controladores da estocagem e mobilização de lipídeos e hoje sabe-se ser um importante sítio produtor de lactato. A obesidade e o diabetes tipo II estão associados, no homem, com um aumento na concentração de lactato sanguíneo e é mediado pelo adrenoceptor subtipo a1. Iniciamos este trabalho avaliando a relação das concentrações plasmáticas de glicose, insulina e lactato em indivíduos normais e indivíduos obesos mórbidos antes e durante a realização do clamp euglicêmico-hiperinsulinêmico. Apenas a insulinemia no jejum estava aumentada significativamente no grupo de homens obesos o que sugere fortemente que existe uma menor sensibilidade à insulina neste grupo experimental. O índice de HOMA neste estudo apontou para uma maior resistência insulinica no grupo de homens obesos, que foi significativamente maior principalmente ao final do clamp, sendo inclusive maior para homens obesos em relação a mulheres obesas. Verificamos uma inter-relação importante com a hiperinsulinemia, pois á medida que a insulina aumenta ao longo do clamp, a concentração de lactato decresce significativamente. As concentrações plasmáticas de lactato apresentaram-se bastante elevadas em indivíduos com IMC entre 40-55 Kg/m2, diminuindo â medida que o IMC estava próximo de 70 kg/m2. No tempo 180 de clamp do grupo obeso, a concentração de lactato caiu a ponto de alcançar numericamente os valores basais do seu respectivo grupo controle. Os adipócitos isolados de obesos mórbidos produziram mais glicerol em todas as concentrações utilizadas de noradrenalina em relação ao grupo de eutróficos, inclusive no basal. Quando foi adicionado o prazosin (mM), houve um aumento na produção de glicerol. Em nossos ensaios observamos que o tecido adiposo isolado de obesos apresenta uma produção basal de lactato significativamente elevada. Quando o estímulo utilizado foi a noradrenalina, a produção foi significativamente maior em adipócitos isolados de obesos quando comparados a eutróficos. A quantidade de lactato produzida pela noradrenalina em adipócitos isolados de obesos foi semelhante àquela produzida pela cirazolína, agonista seletivo de adrenoceptores a1. Nenhum antagonista utilizado, prazosin, WB4I04 ou BMY7378, produziu qualquer efeito sobre a produção de lactato, seja em eutróficos ou obesos. Quando a produção de lactato em adipócitos isolados foi induzida pela insulina, não houve diferença significativa na quantidade de lactato produzida por adipócitos de obesos quando comparados com eutróficos, exceto na concentração de 500 mU/ml. A estimulação máxima induzida pela insulina em eutróficos foi de 3 vezes e foi maior que aquela observada em adipócitos isolados de obesos que foi de 2,4 vezes. Estes resultados permitem inferir que não é a insulina o principal secretagogo de lactato responsável pela produção aumentada em adipócitos isolados de obesos. Por outro lado, quando co-íncubamos noradrenalina com crescentes concentrações de insulina pudemos observar uma produção de lactato significativamente mais elevada, em todos os pontos, proveniente de adipócitos isolados de obesos. Podemos concluir que os adipócitos de indivíduos obesos produzem lactato diferencial mente em relação ao gênero, e este lactato pode estar sendo usado em outras vias metabólicas auxiliando no desencadeamento das patologias relacionadas à obesidade / Abstract: The adipocyte is the functional unit of fat white and the main reservoir of energy, taking a key role in research physiological mechanisms of control of storage and mobilization of lipids and today it is known to be an important site producer of lactate. Obesity and type II diabetes are associated, in humans, with an increase lactate concentration in the blood. We started this work lactate and is mediated by adrenoceptor subtype evaluating the relationship plasma concentrations of glucose, insulin and lactate in normal and morbid obese subjects before and during the clamp euglicemico-hiperinsulinemico. Only in fasting insulin was increased significantly in the group of obese men which strongly suggests that there is less sensitivity to insulin in this group experimental. The HOMA index of this study pointed to a larger group of insulin resistance in obese men, which was significantly higher mainly the end of the clamp, and even higher for obese men regarding obesity women. We find an important inter-relationship with hyperinsulinemia, because that will measure the insulin increases over the clamp, the concentration of lactate decreases significantly. Plasma concentrations of lactate had to be quite high in individuals with BMI between 40-55 Kg/m2, decreasing as a BMI of 70 kg/m2 was next. At the time 180, clamp the obese group, the concentration of lactate fell about to reach numerically the baseline of their respective control group. The isolated adipocytes of obese morbid produced more glycerol concentrations used in all of norepinephrine in the group of eutrophic, including the basement. When the addition of prazosin (1 M) there was an increase in the production of glycerol. In our tests found m. that the fat isolated from obese presents a production base of lactate significantly high. When the stimulation was used to norepinephrine, the production was significantly higher in isolated adipocytes of obese compared to eutrophic. The amount of lactate produced by norepinephrine in isolated adipocytes of obese was similar to that produced by cirazolina, of selective I. None antagonist used, prazosin, WB4104 or BMY7378,a adrenoceptor agonist produced no effect on the production of lactate, in eutrophic or obese. When the production of lactate in isolated adipocytes was induced by insulin, there was no significant difference in the amount of lactate produced by adipocytes of mU / ml. The obese compared with eutrophic, except to the concentration of 500 maximum stimulation induced by insulin in eutrophic was 3 times and was higher than that observed in isolated adipocytes of obese which was 2.4 times. These results indicate that it is not the main insulin secretagogo of lactate responsible for increased production in isolated adipocytes of obese. On the other hand, when co-incubated with noradrenaline the concentrations of insulin have seen a lactate production significantly higher, at all points, from isolated adipocytes of obese. We can conclude that adipocytes of obese individuals produce lactate differentially in relation to gender, and this lactate may be being used in other metabolic pathways helping to trigger the diseases related to obesity / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Algunos aminoácidos ciclobutánicos de origen natural han presentado actividad biológica como antivíricos, analgésicos, antimicrobianos, antidepresivos y neurotróficos. Es por este motivo que en esta Tesis se prepararon diferentes a,b-deshidro-a-aminoácidos ciclobutílicos (DHAAs) ópticamente activos a partir de los precursores quirales a-pineno y (-)-verbenona. Dentro de estos DHAAs se sintetizaron pares de enantiómeros, DHAAs con la misma o inversa quiralidad, y con el doble enlace unido directamente al anillo de ciclobutano o a un metileno de distancia. La hidrogenación de estos compuestos, usando catalizadores aquirales (Pd/C y Wilkinson) y quirales ((S,S)-Chiraphos y Duphos), condujo a la síntesis de a-aminoácidos ciclobutílicos saturados, con elevadas estereoselectividades en algunos casos. Los APNs son pseudopéptidos capaces de transportar la información genética, vía las bases nucleicas, de igual manera que el ADN o el ARN. Ésta y otras propiedades, como por ejemplo la capacidad de actuar como agente antisense con elevada eficiencia, hacen posible que el oligómero de APN sea muy interesante en diferentes disciplinas: química, biología molecular y por supuesto en medicina. Así pues, en esta Tesis a partir de un a-aminoácido ciclobutílico saturado, se sintetizó el primer ácido péptidonucleico (APN) con un anillo de ciclobutano en su estructura. Se incorporó el monómero sintetizado en un decámero y se realizó un estudio de la estabilidad térmica en la hibridación del decámero con cadenas complementarias de ADN, ARN y APN. Los resultados de este estudio confirmaron que la incorporación del monómero en un oligómero no mejora ni empeora la afinidad por una cadena complementaria, en comparación con la afinidad que presenta un oligómero estándar de APN.Por otra parte, a partir de un a,b-deshidro-a-aminoácido ciclobutílico se prepararon dos a,b-deshidro-a-péptidos ciclobutílicos ópticamente activos (dipéptidos) con buenos rendimientos. Uno de ellos contiene una unidad de glicina en su estructura, mientras que el otro contiene el aminoácido (S)-fenilalanina. Se realizó un estudio posterior de hidrogenación de estos compuestos, obteniéndose a-péptidos ciclobutílicos saturados con muy buenos excesos diastereoisoméricos, próximos al 100% en algunos casos. Se realizaron espectros de dicroismo circular de los a-péptidos, tanto insaturados como saturados, obteniéndose curvas con la misma tendencia que la de otros péptidos descritos en la bibliografía, los cuales se ha demostrado que poseen capacidad de ser inductores de giros b, debido a una conformación determinada, muy congelada, para estás moléculas. / Some natural cyclobutane amino acids have displayed activities as antiviral or antimicrobial agents, neurotropics and analgesics. Therefore, in this Thesis were prepared different chiral a,b-dehydro-a-cyclobutyl amino acids (DHAAs) from quiral precursors: a-pinene and (-)-verbenone. These DHAAs were synthesized in enantiomeric form, with the same and reverse chirality, and with the double bond directly attached to the cyclobutane ring or separated from the carbocycle by a methylene group. Some cyclobutyl saturated a-amino acids were produced with high stereoselectivity in some cases, in the hydrogenation of the DHAAs employing different achiral catalysts (Pd/C and Wilkinson) and chiral catalysts ((S,S)-Chiraphos and Duphos).PNA is a pseudopeptide with the potential of carrying genetic information (via the nucleobase) code in a manner identical to DNA or RNA. This property and other, as for instance the ability of working like an antisense agent with high efficiency, make the molecule of PNA of significant interest in many disciplines of chemistry, molecular biology and of course in medicine. Therefore, in this Thesis, from a saturated cyclobutyl amino acid, we synthesized the first peptide nucleic acid (PNA) with a cyclobutane ring. The monomer was incorporated in a decamer and it was hybridized to complementary DNA, RNA and PNA. We studied the thermal stability (Tm) of the hybrids. The results of this researches confirmed that the incorporation of the cyclobutanyl PNA monomer in an oligomer doesn't change the affinity to a complementary oligonucleotide, if we compare it with the affinity that displays a standard PNA oligomer.On the other hand, some chiral a,b-dehydro-a-cyclobutyl peptides (dipeptides) were synthesized, in high yields, from one DHAA. One with the amino acid glycine, and the other one with a (S)-phenylalanine. The hydrogenation of these compounds afforded cyclobutyl saturated a-peptides with high de (~100% in some cases). The CD spectra of the a-peptides, unsaturated and saturated, showed the same tendency as other peptides with the capacity of being b-turn inducers, due to a fixed conformation for these.

Fibrose hepática é caracterizada pelo acúmulo de matriz extracelular fibrótica, cuja presença danifica as funções do fígado. Células estreladas hepáticas (HSCs) participam ativamente deste processo, modificando seu fenótipo quiescente, rico em lipídios no citoplasma, para o fenótipo ativado, em resposta ao insulto fibrogênico. A regressão do processo fibrótico pode, inclusive, estar relacionada com a apoptose das HSCs e também com sua reversão fenotípica, do estado ativado ao estado quiescente. Adenosina tem papel hepatoprotetor bem conhecido e medeia várias ações antiinflamatórias em diferentes tipos celulares e condições patológicas. TNF-α é uma citocina pró-inflamatória com importantes funções no início e perpetuação do processo fibrogênico. Tendo em vista o papel antiinflamatório da adenosina, este trabalho investigou, em linhagem de HSC em cultura - GRX -, as ações desse nucleosídeo em presença ou ausência dos sinais inflamatórios que acompanham o tratamento com TNF- α. Assim, foram analisados os efeitos da adenosina extracelular na síntese lipídica, avaliando a reversão fenotípica da GRX, e a apoptose em resposta à adenosina e/ou TNF-α. Além disso, a regulação dos níveis de adenosina extracelular, bem como a presença dos receptores de adenosina foram investigadas. O efeito de adenosina e/ou TNF-α sobre a produção de óxido nítrico (NO) e atividade e expressão de gelatinases (MMP-9 e -2), ambos importantes mediadores na fibrose hepática, também foram alvo deste estudo. Nossos resultados mostram a presença do receptor de adenosina A2B (A2BR), e a regulação dos níveis extracelulares de adenosina por TNF-α, através do aumento da atividade ecto-adenosina deaminase. Além disso, demontramos que adenosina extracelular não modifica a síntese de lipídios nas células GRX. Os dados ainda indicam que adenosina, em presença ou ausência de TNF-α, não resulta em apoptose, e que esta citocina também não induz à formação de corpos apoptóticos nas células tratadas. O estudo mostra que a produção de NO foi aumentada com TNF-α, com potencialização deste efeito na presença de adenosina, provavelmente mediado pelo A2BR e não por inosina, produto da hidrólise de adenosina. Com relação às gelatinases, o tratamento com adenosina diminui a atividade de MMP-9 tanto em ausência, quanto em presença de TNF-α, revertendo a ação da citocina, a níveis de controle, com o envolvimento do receptor A2BR mediando os efeitos do nucleosídeo. No entanto, a expressão da MMP-9 não foi afetada pelo tratamento com adenosina, porém, o nucleosídeo diminui os efeitos de TNF-α sobre a expressão da gelatinase. Com relação à MMP-2, ambos tratamentos com adenosina e com TNF-α, bem como o tratamento com adenosina, em presença da citocina, diminuem a atividade da gelatinase, sem efeitos aditivos. A expressão do mRNA de MMP-2 aumentou em resposta aos tratamentos com adenosina e TNF-α, isolados ou em associação, indicando a presença de mecanismo pós-transcricional de regulação para MMP-2. Este trabalho mostra, claramente, que adenosina extracelular e TNF-α estão envolvidos na regulação da produção de NO e nas ações das gelatinases. Além disso, este estudo demonstrou que adenosina não atua através de conversão fenotípica via aumento da síntese de lipídios, bem como não estimula apoptose, junto com TNF-α. Estes resultados e a existência da regulação dos níveis de adenosina extracelular por TNF-α sugerem uma participação da adenosina em alguns aspectos importantes da fisiologia da.HSC, talvez via A2B. / Hepatic fibrosis is characterized by fibrotic matrix accumulation, which damage the liver functions. Hepatic stellate cells (HSC) participate activelly of this process, modifying their quiescent phenotype, with the cytoplasm rich in lipid dropplets, to activated phenotype, in response to the fibrogenic insult. HSC can be responsible for the regression of fibrosis through mechanisms that involve their apoptosis, or even the phenotype reversion to quiscence. Adenosine has a well-know hepatoprotective role and mediates several anti-inflammatory actions in different cellular types and pathological conditions. TNF-α is a pro-inflammatory cytokine with important functions in the beginning and perpetuation of that fibrogenic process. In view the antiinflammatory role of adenosine, this work investigated, in cultured hepatic stellate cell line - GRX -, the actions of this nucleoside in the presence or absence of inflammatory signs that come with treatment with TNF-α. So, the effects of extracellular adenosine and/or TNF-α on the lipid synthesis, evaluating the phenotypic reversion of GRX, and the apoptosis in response to adenosine and/or TNF-α were analysed. Moreover, the regulation of extracellular levels of adenosine, as well as the presence of adenosine receptors were studied in cultured GRX. The effects of adenosine and/or TNF-α production of nitric oxide (NO) and activity and expression of gelatinases - MMP-9 and -2 -, both important mediators presents in liver fibrosis, were also target of this study. Our results show the presence of A2B receptor (A2BR) in GRX, and the regulation of extracellular hidrolysis of adenosine by TNF-α, through ecto-ADA activity improvement. Moreover, we demonstrate that extracellular adenosine does not modify the lipid synthesis in the GRX cells. The data still indicate that adenosine, at presence or absence of TNF-α, does not imply apoptosis, and that this cytokine does not induce the apoptotic bodies formation. The study shows that the production of NO was increased with TNF-α, with potentiation of this effect at the presence of adenosine, probably due to to A2BR, and not mediated by inosine, the product of adenosine hydrolysis. About the gelatinases, the treatment with adenosine decreases the MMP-9 activity in the absence, as well as in the presence of TNF-α, reversing the action of cytokine, at control group levels, with involvement of A2BR. However, the expression of MMP-9 was not affected by the treatment with adenosine, but the nucleoside reduces the effects of TNF-α on the expression of this gelatinase. About MMP-2, both treatment with adenosine and TNF-α, as well as the treatment with adenosine, in the presence of the cytokine, diminish the activity of gelatinase, without additive effects. The expression of MMP-2 mRNA increased in reponse to the treatments with adenosine and TNF-α, alone or in association, suggesting post-transcriptional mechanisms for the regulation of this enzyme. Our results clearly indicate that extracellular adenosine and TNF-α are involved in the regulation of NO production and actions of gelatinases. Moreover, this study demonstrated that adenosine do not act in phenotype conversion, through lipid synthesis, as well as do not stimulate apoptosis, toghether with TNF-α. This results and the existence of regulation of extracellular of adenosine in response to TNF-α further support that adenosine modulate some important aspects of HSC phisiology, maybe through A2B pathway.

FIGUEIREDO, Aline Almeida. Efeito do anticorpo anti-TNF-α, infliximabe, sobre a mucosite intestinal experimental induzida por irinotecano. 2011. 78 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:23Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Intestinal mucositis (IM) is a common limiting side effect of anticancer therapy with irinotecan. Previous studies have reported the involvement of cytokines, such as TNF-α, IL-1β e IL-18 in the pathogenesis of irinotecan-induced IM, besides demonstrating that nonselective inhibitors of cytokines such as pentoxifylline, attenuate chemotherapy-induced IM. The role of cytokines is well established in the context of inflammatory bowel disease. It is used in clinical practice treatments that target inflammatory cascade components, for example, the anti-TNF monoclonal antibody, infliximab, which has a beneficial effect in the treatment of Crohn’s disease, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis. There is a lack of information regarding the effect of selective cytokine target therapy on anticancer drug toxicity. Aims: To investigate the protective role of a selective TNF-α inhibitor, infliximab, on irinotecan-induced IM. Methods: C57BL6 mice were divided into groups (n=5-9) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (75 mg/kg/4 days, i.p) or were given infliximabe (5 mg/kg, e.v, single dose) 1 hour before the first irinotecan injection. Body weight and mortality were assessed daily. On the 5th day the diarrhea was evaluated using scores and the blood was collected for white blood cell count (WBC). After euthanasia, samples of duodenum was collected for myeloperoxydase assay, tissue IL-1β dosage, western blot (WB) of the inducible nitric oxide synthase, morphometric analysis and in vitro evaluation of duodenal contractility. Results: Irinotecan induced IM demonstrated by the significant (p<0,05) increase in diarrhea, decrease in length and area of the villi increased MPO activity, increased IL-1β dosage and expression of iNOS and intestinal smooth muscle over-contractility when compared with saline treated group. The group treated with irinotecan also presented leucopenia, when compared with control group. The group treated with infliximab previously to irinotecan showed a significant improvement of inflammatory parameters (MPO activity, IL-1β, expression of iNOS), when compared withn irinotecan-treated group. However, animal weight loss, mortality and gut disfunction (diarrhea and intestinal contractility) were not affected by infliximab treatment (p>0,05). Conclusion: The results suggest for the first time the proeminent anti-inflammatory effect of the target therapy anti-TNF-α with infliximab on irinotecan-induced IM. However, such treatment did not alter the survival and did not protect against intestinal dysfunction in irinotecan-induced IM. Additionally accentuated leukopenia induced by irinotecan, which can increase the risk of infections. / Introdução: A mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral comum e limitante da quimioterapia com irinotecano. Estudos sugerem a participação de citocinas, como TNF-α, IL-1β e IL-18 na fisiopatologia da MI, além de demonstrar que inibidores não seletivos de citocinas, como pentoxifilina, atenuam a MI por irinotecano. O papel das citocinas está bem estabelecido no âmbito das doenças inflamatórias intestinais, inclusive com utilização de tratamentos visando inibir seletivamente componentes da casacata inflamatória, como, por exemplo, o anticorpo monoclonal anti-TNFα, infliximabe, que tem um efeito benéfico comprovado no tratamento da doença de Crohn, artrite reumatóide e espondilite anquilosante. Há escassos estudos na literatura de terapia alvo anti-citocinas inflamatórias no contexto da mucosite intestinal induzida por quimioterápico. Objetivo: Avaliar o papel do Infliximabe sobre as alterações inflamatórias e disfunção intestinal associados à MI induzida por Irinotecano. Métodos: Camundongos C57BL6 foram divididos em grupos (n=5-9) e tratados por 4 dias com salina (5 mlkg, i.p) ou irinotecano (75 mgkg, i.p) ou pré-tratados com infliximabe (5 mgkg, e.v, dose única) 1 hora antes da primeira injeção de irinotecano. O peso e mortalidade foram avaliados diariamente. No 5o dia avaliou-se a diarréia por escores, o leucograma e, após sacrifício, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO) e de IL-1β, expressão de óxido nítrico sintase induzida (iNOS), análise de escores histopatológicos, morfometria e contratilidade in vitro ao carbacol. Resultados: Os animais tratados com irinotecano apresentaram mucosite intestinal, evidenciada por aumento significativo (p<0,05) nos escores de diarréia, diminuição do comprimento e área do vilo, aumento da atividade de MPO, aumento no nível tecidual de IL-1β e de expressão de iNOS e hipercontratilidade da musculatura lisa duodenal, além de terem apresentado leucopenia, quando comparado com o grupo tratado com salina. O grupo de animais que recebeu infliximabe previamente ao tratamento com irinotecano apresentou melhora significativa (p<0,05) nos parâmetros inflamatórios avaliados (atividade de MPO, nível tecidual de IL-1β, expressão de iNOS), comparado com o grupo tratado apenas com irinotecano. Contudo, a perda ponderal, a mortalidade e a disfunção intestinal (diarréia e contratilidade intestinal in vitro) não foram afetadas pelo tratamento com infliximabe (p>0,05). Conclusões: Os resultados mostram o proeminente efeito antiinflamatório da terapia anti TNF-α com infliximabe na MI induzida por irinotecano. Tal droga, no entanto, não foi capaz de alterar a sobrevida e de proteger contra a disfunção na MI experimental por irinotecano. Adicionalmente, acentuou a leucopenia induzida pelo irinotecano, o que pode aumentar o risco de complicações infecciosas.

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Fibrose hepática é caracterizada pelo acúmulo de matriz extracelular fibrótica, cuja presença danifica as funções do fígado. Células estreladas hepáticas (HSCs) participam ativamente deste processo, modificando seu fenótipo quiescente, rico em lipídios no citoplasma, para o fenótipo ativado, em resposta ao insulto fibrogênico. A regressão do processo fibrótico pode, inclusive, estar relacionada com a apoptose das HSCs e também com sua reversão fenotípica, do estado ativado ao estado quiescente. Adenosina tem papel hepatoprotetor bem conhecido e medeia várias ações antiinflamatórias em diferentes tipos celulares e condições patológicas. TNF-α é uma citocina pró-inflamatória com importantes funções no início e perpetuação do processo fibrogênico. Tendo em vista o papel antiinflamatório da adenosina, este trabalho investigou, em linhagem de HSC em cultura - GRX -, as ações desse nucleosídeo em presença ou ausência dos sinais inflamatórios que acompanham o tratamento com TNF- α. Assim, foram analisados os efeitos da adenosina extracelular na síntese lipídica, avaliando a reversão fenotípica da GRX, e a apoptose em resposta à adenosina e/ou TNF-α. Além disso, a regulação dos níveis de adenosina extracelular, bem como a presença dos receptores de adenosina foram investigadas. O efeito de adenosina e/ou TNF-α sobre a produção de óxido nítrico (NO) e atividade e expressão de gelatinases (MMP-9 e -2), ambos importantes mediadores na fibrose hepática, também foram alvo deste estudo. Nossos resultados mostram a presença do receptor de adenosina A2B (A2BR), e a regulação dos níveis extracelulares de adenosina por TNF-α, através do aumento da atividade ecto-adenosina deaminase. Além disso, demontramos que adenosina extracelular não modifica a síntese de lipídios nas células GRX. Os dados ainda indicam que adenosina, em presença ou ausência de TNF-α, não resulta em apoptose, e que esta citocina também não induz à formação de corpos apoptóticos nas células tratadas. O estudo mostra que a produção de NO foi aumentada com TNF-α, com potencialização deste efeito na presença de adenosina, provavelmente mediado pelo A2BR e não por inosina, produto da hidrólise de adenosina. Com relação às gelatinases, o tratamento com adenosina diminui a atividade de MMP-9 tanto em ausência, quanto em presença de TNF-α, revertendo a ação da citocina, a níveis de controle, com o envolvimento do receptor A2BR mediando os efeitos do nucleosídeo. No entanto, a expressão da MMP-9 não foi afetada pelo tratamento com adenosina, porém, o nucleosídeo diminui os efeitos de TNF-α sobre a expressão da gelatinase. Com relação à MMP-2, ambos tratamentos com adenosina e com TNF-α, bem como o tratamento com adenosina, em presença da citocina, diminuem a atividade da gelatinase, sem efeitos aditivos. A expressão do mRNA de MMP-2 aumentou em resposta aos tratamentos com adenosina e TNF-α, isolados ou em associação, indicando a presença de mecanismo pós-transcricional de regulação para MMP-2. Este trabalho mostra, claramente, que adenosina extracelular e TNF-α estão envolvidos na regulação da produção de NO e nas ações das gelatinases. Além disso, este estudo demonstrou que adenosina não atua através de conversão fenotípica via aumento da síntese de lipídios, bem como não estimula apoptose, junto com TNF-α. Estes resultados e a existência da regulação dos níveis de adenosina extracelular por TNF-α sugerem uma participação da adenosina em alguns aspectos importantes da fisiologia da.HSC, talvez via A2B. / Hepatic fibrosis is characterized by fibrotic matrix accumulation, which damage the liver functions. Hepatic stellate cells (HSC) participate activelly of this process, modifying their quiescent phenotype, with the cytoplasm rich in lipid dropplets, to activated phenotype, in response to the fibrogenic insult. HSC can be responsible for the regression of fibrosis through mechanisms that involve their apoptosis, or even the phenotype reversion to quiscence. Adenosine has a well-know hepatoprotective role and mediates several anti-inflammatory actions in different cellular types and pathological conditions. TNF-α is a pro-inflammatory cytokine with important functions in the beginning and perpetuation of that fibrogenic process. In view the antiinflammatory role of adenosine, this work investigated, in cultured hepatic stellate cell line - GRX -, the actions of this nucleoside in the presence or absence of inflammatory signs that come with treatment with TNF-α. So, the effects of extracellular adenosine and/or TNF-α on the lipid synthesis, evaluating the phenotypic reversion of GRX, and the apoptosis in response to adenosine and/or TNF-α were analysed. Moreover, the regulation of extracellular levels of adenosine, as well as the presence of adenosine receptors were studied in cultured GRX. The effects of adenosine and/or TNF-α production of nitric oxide (NO) and activity and expression of gelatinases - MMP-9 and -2 -, both important mediators presents in liver fibrosis, were also target of this study. Our results show the presence of A2B receptor (A2BR) in GRX, and the regulation of extracellular hidrolysis of adenosine by TNF-α, through ecto-ADA activity improvement. Moreover, we demonstrate that extracellular adenosine does not modify the lipid synthesis in the GRX cells. The data still indicate that adenosine, at presence or absence of TNF-α, does not imply apoptosis, and that this cytokine does not induce the apoptotic bodies formation. The study shows that the production of NO was increased with TNF-α, with potentiation of this effect at the presence of adenosine, probably due to to A2BR, and not mediated by inosine, the product of adenosine hydrolysis. About the gelatinases, the treatment with adenosine decreases the MMP-9 activity in the absence, as well as in the presence of TNF-α, reversing the action of cytokine, at control group levels, with involvement of A2BR. However, the expression of MMP-9 was not affected by the treatment with adenosine, but the nucleoside reduces the effects of TNF-α on the expression of this gelatinase. About MMP-2, both treatment with adenosine and TNF-α, as well as the treatment with adenosine, in the presence of the cytokine, diminish the activity of gelatinase, without additive effects. The expression of MMP-2 mRNA increased in reponse to the treatments with adenosine and TNF-α, alone or in association, suggesting post-transcriptional mechanisms for the regulation of this enzyme. Our results clearly indicate that extracellular adenosine and TNF-α are involved in the regulation of NO production and actions of gelatinases. Moreover, this study demonstrated that adenosine do not act in phenotype conversion, through lipid synthesis, as well as do not stimulate apoptosis, toghether with TNF-α. This results and the existence of regulation of extracellular of adenosine in response to TNF-α further support that adenosine modulate some important aspects of HSC phisiology, maybe through A2B pathway.

Fibrose hepática é caracterizada pelo acúmulo de matriz extracelular fibrótica, cuja presença danifica as funções do fígado. Células estreladas hepáticas (HSCs) participam ativamente deste processo, modificando seu fenótipo quiescente, rico em lipídios no citoplasma, para o fenótipo ativado, em resposta ao insulto fibrogênico. A regressão do processo fibrótico pode, inclusive, estar relacionada com a apoptose das HSCs e também com sua reversão fenotípica, do estado ativado ao estado quiescente. Adenosina tem papel hepatoprotetor bem conhecido e medeia várias ações antiinflamatórias em diferentes tipos celulares e condições patológicas. TNF-α é uma citocina pró-inflamatória com importantes funções no início e perpetuação do processo fibrogênico. Tendo em vista o papel antiinflamatório da adenosina, este trabalho investigou, em linhagem de HSC em cultura - GRX -, as ações desse nucleosídeo em presença ou ausência dos sinais inflamatórios que acompanham o tratamento com TNF- α. Assim, foram analisados os efeitos da adenosina extracelular na síntese lipídica, avaliando a reversão fenotípica da GRX, e a apoptose em resposta à adenosina e/ou TNF-α. Além disso, a regulação dos níveis de adenosina extracelular, bem como a presença dos receptores de adenosina foram investigadas. O efeito de adenosina e/ou TNF-α sobre a produção de óxido nítrico (NO) e atividade e expressão de gelatinases (MMP-9 e -2), ambos importantes mediadores na fibrose hepática, também foram alvo deste estudo. Nossos resultados mostram a presença do receptor de adenosina A2B (A2BR), e a regulação dos níveis extracelulares de adenosina por TNF-α, através do aumento da atividade ecto-adenosina deaminase. Além disso, demontramos que adenosina extracelular não modifica a síntese de lipídios nas células GRX. Os dados ainda indicam que adenosina, em presença ou ausência de TNF-α, não resulta em apoptose, e que esta citocina também não induz à formação de corpos apoptóticos nas células tratadas. O estudo mostra que a produção de NO foi aumentada com TNF-α, com potencialização deste efeito na presença de adenosina, provavelmente mediado pelo A2BR e não por inosina, produto da hidrólise de adenosina. Com relação às gelatinases, o tratamento com adenosina diminui a atividade de MMP-9 tanto em ausência, quanto em presença de TNF-α, revertendo a ação da citocina, a níveis de controle, com o envolvimento do receptor A2BR mediando os efeitos do nucleosídeo. No entanto, a expressão da MMP-9 não foi afetada pelo tratamento com adenosina, porém, o nucleosídeo diminui os efeitos de TNF-α sobre a expressão da gelatinase. Com relação à MMP-2, ambos tratamentos com adenosina e com TNF-α, bem como o tratamento com adenosina, em presença da citocina, diminuem a atividade da gelatinase, sem efeitos aditivos. A expressão do mRNA de MMP-2 aumentou em resposta aos tratamentos com adenosina e TNF-α, isolados ou em associação, indicando a presença de mecanismo pós-transcricional de regulação para MMP-2. Este trabalho mostra, claramente, que adenosina extracelular e TNF-α estão envolvidos na regulação da produção de NO e nas ações das gelatinases. Além disso, este estudo demonstrou que adenosina não atua através de conversão fenotípica via aumento da síntese de lipídios, bem como não estimula apoptose, junto com TNF-α. Estes resultados e a existência da regulação dos níveis de adenosina extracelular por TNF-α sugerem uma participação da adenosina em alguns aspectos importantes da fisiologia da.HSC, talvez via A2B. / Hepatic fibrosis is characterized by fibrotic matrix accumulation, which damage the liver functions. Hepatic stellate cells (HSC) participate activelly of this process, modifying their quiescent phenotype, with the cytoplasm rich in lipid dropplets, to activated phenotype, in response to the fibrogenic insult. HSC can be responsible for the regression of fibrosis through mechanisms that involve their apoptosis, or even the phenotype reversion to quiscence. Adenosine has a well-know hepatoprotective role and mediates several anti-inflammatory actions in different cellular types and pathological conditions. TNF-α is a pro-inflammatory cytokine with important functions in the beginning and perpetuation of that fibrogenic process. In view the antiinflammatory role of adenosine, this work investigated, in cultured hepatic stellate cell line - GRX -, the actions of this nucleoside in the presence or absence of inflammatory signs that come with treatment with TNF-α. So, the effects of extracellular adenosine and/or TNF-α on the lipid synthesis, evaluating the phenotypic reversion of GRX, and the apoptosis in response to adenosine and/or TNF-α were analysed. Moreover, the regulation of extracellular levels of adenosine, as well as the presence of adenosine receptors were studied in cultured GRX. The effects of adenosine and/or TNF-α production of nitric oxide (NO) and activity and expression of gelatinases - MMP-9 and -2 -, both important mediators presents in liver fibrosis, were also target of this study. Our results show the presence of A2B receptor (A2BR) in GRX, and the regulation of extracellular hidrolysis of adenosine by TNF-α, through ecto-ADA activity improvement. Moreover, we demonstrate that extracellular adenosine does not modify the lipid synthesis in the GRX cells. The data still indicate that adenosine, at presence or absence of TNF-α, does not imply apoptosis, and that this cytokine does not induce the apoptotic bodies formation. The study shows that the production of NO was increased with TNF-α, with potentiation of this effect at the presence of adenosine, probably due to to A2BR, and not mediated by inosine, the product of adenosine hydrolysis. About the gelatinases, the treatment with adenosine decreases the MMP-9 activity in the absence, as well as in the presence of TNF-α, reversing the action of cytokine, at control group levels, with involvement of A2BR. However, the expression of MMP-9 was not affected by the treatment with adenosine, but the nucleoside reduces the effects of TNF-α on the expression of this gelatinase. About MMP-2, both treatment with adenosine and TNF-α, as well as the treatment with adenosine, in the presence of the cytokine, diminish the activity of gelatinase, without additive effects. The expression of MMP-2 mRNA increased in reponse to the treatments with adenosine and TNF-α, alone or in association, suggesting post-transcriptional mechanisms for the regulation of this enzyme. Our results clearly indicate that extracellular adenosine and TNF-α are involved in the regulation of NO production and actions of gelatinases. Moreover, this study demonstrated that adenosine do not act in phenotype conversion, through lipid synthesis, as well as do not stimulate apoptosis, toghether with TNF-α. This results and the existence of regulation of extracellular of adenosine in response to TNF-α further support that adenosine modulate some important aspects of HSC phisiology, maybe through A2B pathway.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9197_1.pdf: 3941997 bytes, checksum: 43b4249a0c13170ded5faf1838bea163 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / O uso de água como solvente em reações orgânicas foi relatado por Ronald Breslow nos anos 80 e vem sendo cada vez mais utilizado por ser um solvente benigno. A partir de então, inúmeras reações vem sendo estudadas em meio aquoso com sucesso, entre elas a reação de Reformatsky. Neste trabalho, a reação de Reformatsky de &#945;-halocetonas mediadas por zinco ou estanho em meio aquoso foi investigada, sendo observada a necessidade do uso de duas metodologias distintas; uma para aldeídos aromático e outra para os alifáticos. A metodologia utilizada para os aldeídos aromáticos consiste em utilizar solução salina de CaCl2/ NH4Cl, peróxido de benzoíla ou acetato de chumbo e zinco metálico, chegando-se a rendimentos na faixa de 50-95% da &#946;-hidroxicetona. Os aldeídos alifáticos foram submetidos a uma metodologia diferente onde foi utilizado apenas água pura e estanho. Os resultados ficaram na faixa de 55-90%. A reação de &#945;-halocetonas com aldeídos aromáticos apresentou um comportamento similar ao observado anteriormente com &#945;-bromoésteres, principalmente a necessidade de um iniciador radicalar, o que indicada um mecanismo radicalar em cadeia. Os dados para a reação com aldeídos alifáticos não são conclusivos em relação a um mecanismo, no entanto, as melhores condições foram com estanho metálico e ausência de iniciador radicalar, descartando o mecanismo radicalar em cadeia. Esta reação pode estar ocorrendo através da formação de um organometálico discreto ou via um mecanismo de transferência simples de elétrons (SET) similar ao proposto por Chan. A diastereosseletividade foi analisada sendo os melhores resultados obtidos quando há substituintes há substituintes na posição beta do anel aromático do aldeído, sendo observado a formação do isômero syn como preferencial. A reação de Reformatsky com aldeídos alifáticos não apresentou boa diastereosseletividade nas condições testadas. Durante o estudo da reação de benzaldeído com 2-cloroacetona foi observada a formação do acetato de metila, mas não da &#946;-hidroxicetona. Este resultado levou a um estudo sistemático desta reação, bem como de um estudo computacional que permitiram inferir que o mecanismo deste rearranjo deveria ser radicalar em cadeia, passando por um intermediário do tipo R1CO OHR2. Este intermediário sofre um processo de fragmentação/ recombinação que pode levar aos pré-produtos radicalares R1O C(OH)R2 e R1(OH)C OR2. Devido à diferença significativa de estabilidade dos dois pré-produtos radicalares somente o éster resultante do intermediário mais estável foi observado experimentalmente. Esta seletividade de migração para a formação do éster segue o padrão de amplitude de migração da reação de Baeyer-Villiger tradicional, apesar do intermediário deste novo rearranjo ser um radical. Cabe ressaltar que a seletividade observada na migração foi muito maior que a obtida pela reação de Baeyer-Villiger. O rearranjo foi otimizado, sendo as melhores condições observadas em água pura, zinco metálico e peróxido de benzoíla. As condições estabelecidas podem ser racionalizadas pelo mecanismo proposto onde a etapa determinante é a de fragmentação/ recombinação que deve sofrer uma grande influência do solvente devido ao efeito de armadilhamento (cage-effect) do intermediário radicalar. Um aspecto importante das reações estudadas é a sua dependência com as condições reacionais, especialmente com a granulometria, superfície do metal utilizado e a necessidade de uma agitação vigorosa