Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-19Bitstream added on 2014-06-13T19:13:00Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_vd_me_jabo.pdf: 283434 bytes, checksum: 55c39afb6bcd96d7c4e6560b79e11617 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O experimento foi implantado na área do projeto Crer-ser, próximo ao Câmpus da UNIMONTES em Janaúba - MG, com o objetivo de avaliar o crescimento e a produção das bananeiras Prata Anã, Caipira e Thap Maeo em diferentes sistemas de plantio, influenciados pela Sigatoka amarela no primeiro e segundo ciclo. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados, com seis tratamentos e quatro repetições, com 25 plantas nas parcelas dos tratamentos 1, 2, 3 e 5, e com 49 plantas nas parcelas dos tratamentos 4 e 6. Entre cada parcela plantou-se três linhas com a variedade Prata Anã. Para as características vegetativas como circunferência do pseudocaule e altura de planta no primeiro ciclo, número de folhas vivas na colheita no primeiro e segundo ciclo, a variedade Thap Maeo foi superior em relação à Caipira. Nas características de produção circunferência do engaço, peso da ráquis, peso do cacho, números de pencas/cacho, número de frutos/cacho e produtividade, a Thap Maeo apresentou as maiores médias nos dois ciclos de plantio, diferenciando-se estatisticamente da Caipira. Os tratamentos com uma linha de bordadura das variedades Thap Maeo e Caipira foram superiores aos com duas linhas de bordaduras, na maioria das características produtivas avaliadas, não se diferenciando estatisticamente do interplantio. A análise da Prata Anã, dentro dos seis sistemas de plantio, não apresentou diferenças significativas para as características vegetativas avaliadas, exceto número de folhas vivas na colheita, no segundo ciclo. Nas características produtivas apresentou diferença significativa para número de pencas/cacho e número de frutos/cacho. Embora não tenham sido detectadas diferenças significativas para outros caracteres avaliados, houve uma tendência inferior para o sistema de plantio convencional da Prata Anã. Nas avaliações... / The experiment was implanted in the area of the project Crer-ser, near to the Campus of UNIMONTES in Janaúba - MG, with the purpose of evaluating growth and production of the banana 'Prata Anã', 'Caipira' and 'Thap Maeo' in different planting systems, under the influence of yellow Sigatoka in the first and second cycle. The experimental design was of randomized blocks, with six treatments and four repetitions, with 25 plants in the plots of the treatments 1, 2, 3 and 5, and with 49 plants in the plots of the treatments 4 and 6. Between each plot, three rows were planted with the variety Prata Anã. Concerning to vegetative characteristics like circumference of the pseudostem and plant height in the first cycle, number of alive leaves in the crop in the first and second cycle, the variety Thap Maeo was superior in relation to the Caipira. Concerning to the characteristics of production, circumference and weight of the stalk, weight of the bunch, numbers of hands/bunch, number of fingers/ bunch and productivity the 'Thap Maeo' presented the largest averages in the two planting cycles differentiating significantly of the Caipira. The treatments in a row of border of the varieties Thap Maeo and Caipira were superior to the one with two rows of borders in the most evaluated productive characteristics do not differentiating significantly of the variety mixture. The analysis of the 'Prata Anã' inside of the six planting systems did not present significant differences for the evaluated vegetative xi characteristics, except number of alive leaves in the crop in the second cycle, while in the productive characteristics... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maurício Lacerda Nogueira / Banca: Fátima Pereira de Souza / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Eurico de Arruda Neto / Banca: Luciana Barros de Arruda / Resumo: O vírus da Febre Amarela (YFV) pertence ao gênero Flavivirus e causa uma importante doença. Nos últimos anos, uma alarmante ressurgência da circulação viral e expansão do vírus em áreas endêmicas têm sido detectadas na África e América do Sul. NS5 é uma proteína viral não estrutural com duas atividades essenciais para a replicação viral, uma de metiltransferase e outra de RNA Polimerase dependente de RNA (RdRp). Para o melhor entendimento dos mecanismos de replicação viral, interações entre NS5 e proteínas celulares têm sido amplamente estudadas. Assim, os objetivos desse estudo foram caracterizar a interação da proteína NS5 e eIF3L, avaliar a função de eIF3L na replicação do vírus da febre amarela, e caracterizar estruturalmente a proteína eIF3L. Métodos. Para identificar a interação de NS5 YFV com eIF3L, foi realizado ensaios em sistema duplo-híbrido usando RdRp NS5 YFV contra eIF3L. Para o mapeamento da interação, foram construídos mutantes deletantes de RNApol e analisados em sistema duplo-híbrido. A região de interação de RNApol foi segmentada em três fragmentos e analisada na presença de eIF3L. Para mapear os resíduos de NS5 críticos para a interação, foi realizada mutagênese sítio-dirigida no segmento 3 de ID. A interação foi analisada em ensaios in vitro e em cultura de células de mamíferos. A significância de eIF3L para a replicação do YFV foi investigada usando superexpressão de eIF3L em células BHK21-RepYF17D LucNeoIres. A proteína eIF3L foi purificada usando uma combinação de cromatografia de afinidade e de exclusão molecular para subsequente caracterização estrutural. Resultados. Nesse estudo, foi caracterizada a interação de NS5 com o fator eucariótico de início de tradução... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Yellow fever virus (YFV) belongs to the Flavivirus genus and causes an important disease. An alarming resurgence of viral circulation and expansion of the YFV endemic zones have been detected in Africa and South America in recent years. NS5 is a viral protein that contains the methyltransferase and RNA-dependent RNA polymerase domains, which are essential during viral replication. Interactions among NS5 and cellular proteins have been studied for the understanding of viral replication. The aim of this study was to characterize the interaction of NS5 protein with EIF3L and evaluate the role of EIF3L in yellow fever replication. Methods. To identify the interaction of YFV NS5 with cellular proteins, we performed a two-hybrid screen using YFV NS5 RdRp domain as bait and a human cDNA library. For mapping the interaction, RNApol deletions mutants were performed and analyses in two-hybrid system. The RNApol region of interaction was segmented in three fragments and analyses into yeast containing eIF3L. To map residues of NS5 that are critical for its interaction, we performed a site-direct mutagenesis in segment 3 of ID. The interaction was confirmed in vitro assays and by in vivo coimmunoprecipitations. The significance of eIF3L for replication of YFV was investigated using overexpression of eIF3L in BHK21-RepYF17D LucNeoIres cells. eIF3L was purified using a combination of affinity and subsequent size exclusion chromatography for subsequent structural characterization. Results. In this work we describe and characterize the interaction of NS5 with the translation factor eIF3L. The interaction between NS5 and eIF3L was confirmed by in vitro binding and in vivo coimmunoprecipitation assays. This interaction occurs in a region (Interaction Domain of RNApol domain) that is conserved in several... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-25T13:06:25Z No. of bitstreams: 1 2012_AnaRaquelLiraVieira.pdf: 7254071 bytes, checksum: 5f843bedd6da32272d943d126dadc5b3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-09-28T12:05:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AnaRaquelLiraVieira.pdf: 7254071 bytes, checksum: 5f843bedd6da32272d943d126dadc5b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-28T12:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AnaRaquelLiraVieira.pdf: 7254071 bytes, checksum: 5f843bedd6da32272d943d126dadc5b3 (MD5) / A febre amarela (FA) é uma doença infecciosa de transmissão vetorial, que se mantem endêmica ou enzoótica na África e Américas do Sul e Central. A veiculação do vírus da FA está associada a insetos hematófagos da família Culicidae. No continente americano, os principais vetores desta arbovirose pertencem aos gêneros Haemagogus e Sabethes. O Parque Nacional de Brasília (PNB) é um ponto turístico, situado a 10km do centro da cidade e a 2km do Setor Habitacional Noroeste. No parque estão presentes primatas não-humanos (PNH) e mosquitos Haemagogus e Sabethes. Durante o surto de FA ocorrido no Distrito Federal (DF) entre dezembro de 2007 e março de 2008 foram registradas mortes de PNH no PNB. Estes elementos sinalizam para o risco de transmissão do vírus amarílico neste local. Com isso, dá-se a importância de se conhecer as espécies de culicídeos no PNB, bem como identificar precocemente a circulação do vírus amarílico nesta unidade de conservação. Os objetivos do trabalho foram: 1) analisar a riqueza e abundância das espécies de culicídeos capturadas em diferentes estratos da mata de galeria e entre as estações climáticas no PNB, com ênfase aos potenciais vetores de FA; 2) Verificar, dentre os mosquitos capturados, o percentual de infectados pelo vírus amarílico. Entre setembro de 2010 e agosto de 2011, culicídeos foram capturados, mensalmente, durante cinco dias consecutivos, entre 9 e 15 horas em solo e copa das árvores. Os mosquitos foram examinados para verificar infecção por flavivirus pela técnica de isolamento em células de Aedes albopictus, seguida por imunofluorescência indireta. Foram identificados 2677 culicídeos, distribuídos em 29 espécies. A maioria dos mosquitos foi capturada ao nível do solo (69%) e na estação chuvosa (86%). Dentre as espécies identificadas neste estudo, 11 já foram encontradas naturalmente infectadas com o vírus da FA. As espécies mais abundantes foram Sabethes albiprivus, Limatus durhamii, Haemagogus leucocelaenus, Haemagogus janthinomys, Aedes scapularis, Psorophora ferox e Aedes serratus. Hg. janthinomys, Li. durhamii, Ps. ferox, Ae. scapularis e Ae. serratus apresentaram diferenças significativas (p<0,05) quanto ao uso do habitat. Hg. janthinomys foi mais capturado em copa, ao contrário das demais espécies. Na estação chuvosa, as espécies mais abundantes foram Sa. albiprivus, Hg. leucocelanus e Hg. janthinomys. Na estação seca, os potenciais vetores de FA apresentaram baixa frequência e abundância, exceto Ae. scapularis e Ae. serratus. Apesar do flavivirus não ter sido detectado nos 2677 mosquitos examinados, recomenda-se a continuação do monitoramento entomológico no parque e em outras áreas vulneráveis à transmissão da FA no DF. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The yellow fever (YF) is an infectious disease transmission vector that keeps endemic or enzootic in Africa and South and Central Americas. The transmission of YF virus is associated with hematophagus insects of the family Culicidae. In the American continent, the main vectors of arbovirus belonging to the genera Haemagogus and Sabethes. The Brasilia National Park (BNP) is a tourist place, located 10km from the city center and 2km Northwest Housing Sector. Are present in the park nonhuman primates (NHP) and mosquitoes Haemagogus e Sabethes. During the outbreak of YF occurred in Distrito Federal (DF) between december 2007 and march 2008 deaths were recorded from NHP in the BNP. These elements point to the risk of transmission of YF virus in this location. Thus, there is the importance of knowing the species of mosquitoes in the park, as well as early identification of YF virus circulation in BNP. The objectives were: 1) to analyze the richness and abundance of species was captured in different strata of gallery forest and between seasons in park, with emphasis on potential vectors of YF; 2) verify, among captured mosquitoes, the percentage of mosquitoes infected with YF virus. Between september 2010 and august 2011, mosquitoes were captured monthly for five consecutive days, from 9 to 15 hours in ground and treetops. Mosquitoes were examined to verify the natural infection with flavivirus by the technique of isolation in Aedes albopictus cells, followed by indirect immunofluorescence. We identified 2677 culicids distributed in 29 species. Most mosquitoes were captured at ground level (69%) and in the rainy season (86%). Among the species identified in this study, 11 have been found naturally infected with YF virus. The most abundant species were Sabethes albiprivus, Limatus durhamii, Haemagogus leucocelaenus, Haemagogus janthinomys, Aedes scapularis, Psorophora ferox and Aedes serratus. Hg. janthinomys, Li. durhamii, Ps. ferox, Ae. scapularis and Ae. serratus showed significant differences (p<0.05) for habitat use. Hg. janthinomys was more caught in canopy, unlike the other species. In the rainy season the most abundant species were Sa. albiprivus, Hg. leucocelaenus and Hg. janthinomys. In the dry season the potential vectors of YF showed a very low frequency and abundance, except Ae. scapularis and Ae. serratus. Despite the flavivirus was not detected in 2677 mosquitoes examined, it is recommended the continuation of entomological monitoring in the park, and other areas vulnerable to the transmission of YF in DF.

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T10:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felippe_PauloAnselmoNunes_M.pdf: 1330148 bytes, checksum: d967293882138043d69f9b910c8a220a (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Com o objetivo de verificar a existência de anticorpos reativos aos antígenos virais da dengue e da febre amarela no sangue de macacos prego (Cebus apella) cativos no Brasil, procedeu-se a coleta de sangue de 227 animais, oriundos de 17 cidades, (concentradas nas regiões sul e sudeste) de 4 estados do Brasil, no período compreendido entre os anos de 2000 e 2001. Para tanto realizamos o teste de inibição da hemaglutinação e também padronizamos um ELISA indireto utilizando um conjugado comercial. O teste de Inibição da Hemaglutinação não detectou nenhuma reatividade dos soros estudados frente aos antígenos da dengue (DENI, DEN II). Encontramos, no teste de ELISA, uma reatividade de cerca de 97 % das amostras ao DEN I; 68% ao DII, 74% ao DEN III e 81% a febre amarela (FA). Não observamos diferenças estatisticamente significativas de reatividade entre machos e fêmeas, porém a observamos entre animais adultos e velhos para DEN I e FA. Os soros previamente tratados com a extração pela acetona, utilizada no teste de inibição da hemaglutinação apresentaram uma significativa perda de reatividade quando testados de forma pareada com amostras não tratadas ao ELISA indireto. Os resultados encontrados não são compatíveis com a epidemiologia da dengue e da febre amarela no Brasil, uma vez que primatas oriundos de dois estados da federação onde sabidamente não havia a transmissão por ocasião da coleta apresentaram uma reatividade importante, o que sugere a existência de anticorpos naturais reagentes aos antígenos virais pesquisados e aponta no sentido de que estes possam ter alguma importância na resistência destes primatas a estas enfermidades / Abstract: With the objective to verify the existence of reactive antibodies to viral antigens to dengue and yellow fever in the blood of capuccin monkeys (Cebus apella) captive in Brazil, it was proceeded collection from blood of 227 deriving animals of 17 cities (concentrate in south and southeast regions) of 4 states of the federacy in the understood period enters the years of 2000 and 2001. For in such a way we carry through the test of Hemaglutination Inhibition and also we standardize an indirect ELISA using one commercial conjugate. The test of Hemaglutination Inhibition did not detect reactivity of the studied seruns front to studied antigens of the dengue (DENI, DEN II). We find, in the test of ELISA, a reactivity of about 97 % of the samples to DEN I; 68% to the DII, 74% to DEN III and 81% the yellow fever (FA). We do not observe statistical significant differences of reactivity between males and females, however we observe it between adult and old animals for DEN I and FA. The seruns previously treated with the extraction for acetone, used in the test of Hemaglutination Inhibition had presented a significant loss of reactivity when tested bodily with samples not treated to the indirect ELISA. The results are not compatible with the epidemiology of the dengue and of the yellow fever in Brazil, a time that deriving primates of two states of the federacy where knew did not have the transmission for occasion of the collection had presented an important reactivity, what it suggests the existence of reacting natural antibodies to viral antigens searched and points in the direction of that these can have some importance in the resistance of these primates to these diseases / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-05T16:27:54Z No. of bitstreams: 1 francis-reisdorfer.pdf: 950272 bytes, checksum: cd830ca14cc83c70d5e0bee55d4e68e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-05T16:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 francis-reisdorfer.pdf: 950272 bytes, checksum: cd830ca14cc83c70d5e0bee55d4e68e6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A febre amarela (FA) é uma doença viral aguda, transmitida por mosquitos vetores, que pode causar doença grave e morte. O vírus da FA é um membro da família Flaviviridae do gênero Flavivírus. No Brasil, todas as regiões já apresentaram casos da doença e o número de casos fatais tem aumentado. Até hoje, a vacinação é o meio mais eficaz para prevenir e controlar a FA. A partir de 2011, o quantitativo solicitado tanto pelo Ministério da Saúde quanto para exportação aumentou, e este é um dos motivos que leva a discussão para a formação de um estoque estratégico deste produto em Bio-Manguinhos. Portanto, para que seja garantido o suprimento da vacina febre amarela (atenuada) aos órgãos nacionais e internacionais em momentos de maior demanda, assim como aumentar a oferta e melhorar o aproveitamento de doses distribuídas, evitando o desperdício de uma vacina estável, estudos de estabilidade foram realizados visando à extensão do prazo de validade das vacinas febre amarela (atenuada) 05 e 10 doses de 24 para 36 meses, quando armazenadas a -20ºC e a 2-8ºC. Para aanálise da estabilidade da vacina 10 doses, foram avaliados dados retrospectivos de potência, termoestabilidade, umidade residual, e outros parâmetros menos críticos, obtidos a partir de estudos de estabilidade longa duração (-20ºC e 2-8ºC / 48 meses) e pós-reconstituição (2-8ºC / 08 horas), assim como dados obtidos nos períodos de 2009 e 2010. Para a análise da estabilidade da vacina 05 doses, foram avaliados dados retrospectivos de potência obtidos de estudos de acompanhamento da estabilidade realizados entre 2003 e 2009 (-20ºC / 36 meses), além de estudos complementares de acompanhamento da estabilidade, realizados com lotes produzidos entre2005 e 2006 (-20ºC e 2-8ºC / 48 meses). Os dados obtidos para ambas as apresentações puderam ser comparados, pois elas são constituídas pela mesma formulação, diferenciando-se somente no volume de envase. Para a análise estatística dos dados foram utilizados a regressão linear, a análise de covariância (ANCOVA), além do cálculo de intervalos de confiança, intervalos preditivos e extrapolação de dados. Os resultados de potência e termoestabilidade tanto para a vacina05 doses quanto para a 10 doses decaem ao longo do tempo de armazenamento em ambas as temperaturas, entretanto permanecem de acordo com as respectivas especificações. Já os resultadosde umidade residual obtidos para a vacina 10 doses revelaram um incremento na umidade ao longo do tempo, mas também se mantêm de acordo com a respectiva especificação. Os resultados de potência e esterilidade, obtidos para a vacina 10 doses em estudos pós-reconstituição, também demonstraram a estabilidade deste produto armazenado por 08 horas a 2-8ºC. Portanto, o prazo de validade das vacinas febre amarela (atenuada) 05 e 10 doses pode ser estendidopara 36 meses, quando armazenado a -20ºC ou a 2-8ºC, sem alteração de sua qualidade. / Yellow fever (YF) is an acute viral disease, transmitted by mosquitoes, which can cause serious illness and death. The YF virus is a member of the Flaviviridaefamily, Flavivirus genus. In Brazil, all regions have already had cases of the disease and the number of fatalities has increased. Until now, vaccination is the only effective means to prevent and control YF. From 2011, the amount of vaccine requested by Ministry of Health and for exports increased, and this is one of the reasons leading the discussion for the formation of a strategic stock of this product in Bio-Manguinhos. Therefore, to ensure the regularsupply of yellow fever vaccine (attenuated) to the national and international agencies in timesof high demand, as well as increase supply and improve the use of doses distributed, avoiding the waste of a stable vaccine, stability studies were performed to propose the extension of the shelf-life of yellow fever vaccine 05 doses (YFV-05) and 10 doses (YFV-10) from 24 to 36 months when stored at -20ºC and 2-8°C. For the stability analysis of YFV-10 were evaluated retrospective potency, thermostability and residual moisture data, and other parameters less critical, obtained from studies of long-term stability (-20ºC and 2-8ºC / 48 months) and after reconstitution (2-8ºC / 08 hours) as well as data obtained during the periods of 2009 and 2010. To analyze the stability of YFV-05 were evaluated retrospective potency data obtained from annual stability studiesconducted between 2003 and 2009 (-20ºC / 36 months) in addition to complementary annual stability studies, carried out with batches produced between 2005 and 2006 (-20ºC and 2-8ºC / 48 months). The data obtained for both presentation could be compared because both have the same formulation, differing only in filling volume. For the statistical analysis were used linear regression, analysis of covariance (ANCOVA), and the calculation of confidence intervals, predictive intervals and data extrapolation. The results of potency and thermostability for both YFV-05 and YFV-10 decay over time at both storage temperatures and remain according to specifications. However, the results obtained for residual moisture to YFV-10 revealed an increase in moisture over time, but remaining according to specification. Analysis of potency and sterility obtained for YFV-10 after reconstitution study also demonstrated the stability of the product stored for 08 hours to 2-8°C. Therefore, the shelf-life of yellow fever vaccine 05 and 10 doses may be extended for 36 months when stored at -20 C or 2-8ºC, without changing itsquality.

O risco de transmissão placentária para o feto, associados à susceptibilidade de neuroinvasão pelo vírus 17D levaram à recomendação de que a vacina contra febre amarela (FA) não fosse administrada durante a gravidez. Pretendeu-se avaliar o efeito desta no desempenho gestacional de camundongos prenhes. Os resultados mostraram decréscimo na viabilidade fetal causado pela vacinação. Reatividade ao antígeno da FA foi observada nos tecidos hepáticos maternos e de fetos vivos. Na placenta, o antígeno viral não foi observado na barreira materno-fetal. Nos fetos natimortos e em reabsorção, esta passagem pareceu mais acentuada; reatividade foi observada em diversos órgãos. O antígeno viral foi detectado em todas as regiões placentárias. A detecção de RNA viral nas amostras indica que há atividade viral nos tecidos fetais. Nossos achados indicam que há fases gestacionais mais susceptíveis à infecção viral vacinal e que podem determinar perdas fetais. A presença do antígeno e de atividade viral no fígado fetal sugere que o vírus vacinal é transmitido da mãe para o feto. / The risk of placental transmission to the fetus, associated with susceptibility to neuroinvasion of the 17D virus led to the recommendation that the vaccine against yellow fever (YF) was not administered during pregnancy. Intended to evaluate the effect of the vaccine in gestational performance of pregnant mice. The results showed a decrease in fetal viability caused by vaccination. Antigen reactivity of YF was observed in maternal and live fetuses liver tissue. In the placenta, the viral antigen was not observed in maternal-fetal barrier. In the stillborn fetuses and resorption, this passage seemed more pronounced; reactivity was observed in several organs. The viral antigen was detected in all placental regions. The detection of viral RNA in the samples indicates that there is viral activity in fetal tissues. Our findings indicate that there are stages of pregnancy more susceptible to viral vaccine infection that could determine fetal loss. The presence of the antigen and viral activity in fetal liver suggests that the vaccine virus is transmitted from mother to fetus.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-12T18:43:04Z No. of bitstreams: 1 ricardo-de-carvalho.pdf: 1945198 bytes, checksum: 8586b33e6fabb5d0036c0443e9c26caa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T18:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ricardo-de-carvalho.pdf: 1945198 bytes, checksum: 8586b33e6fabb5d0036c0443e9c26caa (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Esta dissertação investiga a aplicação do Controle Estatístico de Processo (CEP) nas principais fases da produção da suspensão viral (SV) da vacina contra febre amarela produzida em Bio-Manguinhos/FIOCRUZ, Brasil. Empregada na formulação do produto final, a SV é preparada em várias etapas, utilizando a tecnologia aperfeiçoada no Brasil (egg passage), desde 1937. O sistema de CEP implantado está baseado em recursos computacionais, perfeitamente adaptados à realidadeda Instituição. Os gráficos de controle foram a principal ferramenta estatística empregada.Sete variáveis relativas às etapas da produção da SV foram estudadas: perdas de ovos no transporte; ovos não embrionados; embriões mortos na primeira incubação; perdas na inoculação; embriões mortos na segunda incubação; perdas na coleta de embriões e rendimento na coleta de embriões. Dentre as variáveis investigadas, perdas por transporte e fertilidade dos ovos não sofrem interferência direta da produção, porém são de fundamental importância para as fases seguintes e, por esse motivo, foram estudadas. Os resultados mostraram que seis variáveis, das sete analisadas, apresentaram resultados sob controle, ainda que duas delas não tenham atendido a uma das regras sensibilizantes estabelecidas: ovos não embrionados e perdas na coleta. A variável rendimento ficou caracterizada como não controlada.Em relação à capacidade, os processos de transporte de ovos e ovos não embrionados foram classificados como processos incapazes (Cpk< 1,00). Os processos com as variáveis embriões mortos na primeira incubação e perdas na inoculação foram considerados como relativamentecapazes (1,00 ≤Cpk < 1,33) e, finalmente, os processos com variáveis embriões mortos na segunda incubação e perdas na coleta foram considerados capazes (Cpk ≥1,33). Pela análise do conjunto, os resultados indicam a necessidade de ajustes, intensificação e controle contínuo dos processos que estão sendo praticados. / This work deals with the application of Statistical Control Process (SCP) to the main parts of the production of Viral Suspension (VS) ofthe yellow fever vaccine manufactured by Bio-Manguinhos/FIOCRUZ, Brazil. The VS is used in the formulation of the final product and is prepared in several steps, using a technology (egg passage), which has been being improved in Brazil since 1937. The SCP system used is based on computational resources that are well adapted to the Institution reality. Control graphs were the main statistical tools employed. Seven variables related to the productionof the VS were investigated: transporting losses of eggs; non-germinated eggs; dead embryos during the first incubation; losses during inoculation; dead embryos during the second incubation; losses during embryo collect and efficiency in collecting embryo. Among the studied variables, transporting losses and fertility of eggs do not relate directly to the production, but are of fundamental importance for the subsequent steps, and were also studied for this reason. The results showed that six out of seven analyzed variables were under control, although two of them did not attend one of the established sensitivity rules: non germinated eggs and losses in collecting. Efficiency ended up characterized as a non-controlled variable. As far as capacity is concerned, transporting of eggs and non-germinated eggs were classified as uncapable processes (Cpk < 1,00). Dead embryos during the first incubation and losses during inoculation were considered as relatively capable processes (1,00 ≤Cpk < 1,33). Finally, dead embryos during the second incubation and losses in collecting embryo were considered capable processes (Cpk ≥1,33). The results, thus, show a necessity of adjustments,intensification and continuous control of the currently used processes.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-10T13:43:12Z No. of bitstreams: 1 marisol-simoes.pdf: 2202112 bytes, checksum: 3f9f53685909ddd3fdd381f8f3692f14 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-10T13:43:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marisol-simoes.pdf: 2202112 bytes, checksum: 3f9f53685909ddd3fdd381f8f3692f14 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A febre amarela é causada pelo vírus protótipo do gênero Flavivirus e é transmitida ao homem através da picada de mosquitos hematófagos infectados com o agente viral. A doença permanece endêmica em regiões das florestas tropicais da África e América do Sul, apesar da disponibilidade de vacinas eficazes contra o vírus da FA – 17D-204 e 17DD – consideradas seguras e altamente imunogênicas, capazes de induzir uma rápida resposta imune específica, com a formação de anticorpos neutralizantes que aparecem precocemente, são protetores e de longa duração. O teste de neutralização por redução de placas de lise (PRNT) é considerado o teste mais sensível e mais específico para a detecção e quantificação dos anticorpos neutralizantes, sendo o método de referência para a avaliação da resposta imune protetora após a vacinação. Este estudo avaliou a confiabilidade e a acurácia do micro PRNT50 (aplicado em placas de 96 poços) tomando como referência o PRNT 50 (aplicado em placas de 6 poços) e comparou o desempenho do micro PRNT50 com o micro PRNT90 (redução de 50% e 90% das placas de lise, respectivamente). Foram selecionados 200 soros de indivíduos brasileiros que participaram de um estudo clínico de dose-resposta da vacina 17DD produzida em Bio-Manguinhos. A repetibilidade foi aferida a partir de três repetições independentes do teste para cada um dos 200 soros por uma dupla operadora e o mesmo procedimento foi realizado pelas outras duas duplas operadoras, com a finalidade de determinar a reprodutibilidade do micro PRNT50 . Foram determinados o Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI) e o Coeficiente de Correlação de Pearson. As medidas de acurácia determinadas neste estudo foram sensibilidade, especificidade, acurácia global, prevalência e valores preditivos positivo (VPP) e negativo (VPN). A curva ROC também foi utilizada para determinar o melhor ponto de corte do micro PRNT50 . Na avaliação da repetibilidade, os CCIs das duplas operadoras variaram entre 0,62 e 0,76; e os coeficientes de correlação de Pearson apresentaram-se entre 0,62 e 0,78. Para a reprodutibilidade, o CCI obtido foi de 0,72 e os coeficientes de correlação de Pearson variaram entre 0,70 e 0,76. As melhores medidas de acurácia foram alcançadas considerando o ponto de corte para o micro PRNT50 de 2,9 Log 10 mUI/mL, o qual apresentou sensibilidade de 91,1%, especificidade de 72,9% e acurácia global de 78%. O melhor desempenho do micro PRNT50 com este ponto de corte foi ratificado pela análise da curva ROC. Considerando um cenário hipotético de surto de FA, a prevalência seria de 28%, com VPP de 56,7% e VPN de 95,5%. O micro PRNT50 apresentou níveis satisfatórios de confiabilidade e de acurácia, mas o micro PRNT90 mostrou desempenho superior com sensibilidade de 100%, especificidade de 94,7% e acurácia global de 95%. Modificações na metodologia do teste e alterações nos critérios de classificação nas leituras dos resultados obtidos serão importantes para melhorar a acurácia do micro PRNT. / Yellow fever is caused by the prototype virus of the genus Flavivirus and it is transmitted to humans through the bite of bloodsucking mosquitoes infected with the viral agent. The disease remains endemic in tropical forest regions from Africa and South America, despite the availability of effective vaccines against yellow fever virus - 17D-204 and 17DD - considered safe and highly immunogenic, capable of inducing a rapid specific immune response, with the formation of neutralizing antibodies that appear early, are protective and long lasting. The plaque reduction neutralization test (PRNT) is considered the most sensitive and most specific test for detection and quantification of neutralizing antibodies, and the reference method for assessing the protective immune response after vaccination. This study evaluated the reliability and accuracy of micro PRNT50 (applied in 96-well plates) with reference to the PRNT50 (applied in 6-well plates) and compared the performance of the micro PRNT50 with the micro PRNT90. Two-hundred serum samples from Brazilian individuals who participated in a clinical study of dose-response of 17DD vaccine produced in Bio-Manguinhos were selected. The repeatability was measured from three independent repetitions of the test for each of the 200 sera by a dual operator and the same procedure was performed by the other two dual operators, in order to determine the reproducibility of the micro PRNT50. The intraclass correlation coefficient (ICC) and Pearson correlation coefficient were determined. Accuracy measures determined in this study were sensitivity, specificity, overall accuracy, prevalence and positive predictive values (PPV) and negative (NPV). The ROC curve was also used to determine the best cut-off point of micro PRNT50 . In the assessment of repeatability, ICCs for dual operators ranged from 0.62 to 0.76, and Pearson correlation coefficients were between 0.62 and 0.78. For reproducibility, the ICC obtained was 0.72 and the Pearson correlation coefficients ranged between 0.70 and 0.76. The best measures of accuracy were achieved considering the cut-off point for the micro PRNT50 of 2.9 log10 mIU/mL, which had a sensitivity of 91.1%, specificity of 72.9% and overall accuracy of 78%. The best performance of micro PRNT50 with this cut-off point was ratified by the ROC curve analysis. Considering a hypothetical scenario of an outbreak of YF, the prevalence would be 28%, with PPV of 56.7% and NPV of 95.5%. The micro PRNT50 showed satisfactory levels of reliability and accuracy, however the micro PRNT90 showed higher performance with sensitivity of 100%, specificity of 94.7% and overall accuracy of 95%. Modifications in the test methodology and changes in the classification criteria in the readings of the results obtained will be important to improve the accuracy of micro PRNT.

Made available in DSpace on 2016-03-04T13:55:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 11.pdf: 2838569 bytes, checksum: ff9adb4c0a3745d7fcf024b9e53b8b37 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O gerenciamento de riscos à qualidade é um processo sistemático de avaliação, controle, comunicação e revisão dos riscos à qualidade, sendo um componente valioso de um sistema da qualidade efetivo e robusto. Visando uma abordagem pró-ativa do monitoramento dos controles existentes e das ações implementadas para o controle dos riscos dos processos produtivos de Bio-Manguinhos, realizou-se um estudo de caso do insumo farmacêutico ativo (IFA) da vacina febre amarela, cujo objetivo foi propor uma metodologia para o monitoramento deste processo produtivo através dos resultados obtidos no gerenciamento de riscos à qualidade. O IFA produzido no Laboratório de Febre Amarela (LAFAM) do Departamento de Vacinas Virais (DEVIR), é obtido a partir da cepa atenuada 17DD do vírus da febre amarela cultivada em ovos embrionados de galinha spf (ovos livres de agentes patogênicos específicos) e este é utilizado na produção da vacina febre amarela, que atualmente encontra-se com a tecnologia 100% brasileira. O LAFAM é uma unidade reconhecida internacionalmente como fabricante da vacina antiamarílica. Devido à sua importância para Bio-Manguinhos, somado à experiência e conhecimento dos especialistas do Instituto no processo, este foi o primeiro IFA a ter uma avaliação de riscos das etapas do processo produtivo através da ferramenta FMEA (Failure Mode and Effect Analysis). Para alcançar o objetivo proposto, utilizou-se a folha de verificação que é uma ferramenta da qualidade, tendo como critério para o monitoramento das atividades, os controles existentes e as ações implementadas para o controle dos riscos com as suas respectivas frequências, que foram definidas de acordo com o nível do modo de falha identificados na avaliação de riscos do processo produtivo. Como resultado do estudo, foram elaboradas 9 folhas de verificação, sendo uma para cada etapa do processo produtivo, além da metodologia para o monitoramento, foram sugeridas propostas de melhoria nos documentos internos (protocolos) usados para o registro do processo produtivo. A utilização da folha de verificação, mesmo na ausência de aplicação desta, demonstrou ser bastante útil na medida em que se tem a necessidade de saber com que frequência certos eventos acontecem? e para obter dados factíveis da efetividade dos controles existentes e das ações implementadas para controlar os riscos dos modos de falhas identificados neste processo. Devem ser realizados estudos futuros para a revisão das folhas de verificação com o objetivo de propor novos monitoramentos e/ou novas ferramentas, ampliando o escopo da metodologia, que venha a abranger efetivamente todas as etapas críticas do processo e que esta possa ser implementada em outros processos produtivos de Bio-Manguinhos que já tenham o seu mapeamento concluído. / The quality risk management is a systematic process of evaluation, control and review of risks that could be related to quality, it is an important component of an effective and robust quality system. Aiming a proactive approach of monitoring, existing controls and implemented actions to control the risks of Bio-Manguinhos’ manufacture processes, were conducted a case study of Active Pharmaceutical Ingredient (API) of yellow fever vaccine. The objective of this study was suggesting a methodology to monitor this process based on the quality risk management results. The API produced in Yellow Fever Lab of Viral Vaccines Department is obtained from 17DD, attenuated strain of yellow fever virus, grown in chicken embryonic SPF eggs (Specifics Pathogens Free) and this API is used on the yellow fever vaccine, that actually is produced by a 100% Brazilian technology. The Yellow Fever Lab is internationally recognized as the lab of vaccine against yellow fever. Due to its importance to Bio-Manguinhos and the experience and knowledge of its staff, this was the first API to have a risk evaluation of the manufacture process based on FMEA (Failure Mode and Effect Analysis) tool. To achieve the proposed objective, the check sheet was used which is a tool having as criteria for monitoring activities, the controls and the actions taken to control the risks with their respective frequencies, that were defined considering the identified fail mode level during the manufactured process risk evaluation. The results of this study allow the elaboration of 9 check sheets, one for each manufacture process step, besides of monitoring methodology, were suggest improvement proposals in the internal documents (forms) that are used to record the manufacture process. The check sheet utilization, even if in the absence of its application, demonstrated that is very useful when we have to know what is the frequency that certain events occurs? And to obtain real data of effectiveness of existent controls and implemented actions to control the risks of fail modes identified during this process. Future studies should be conducted to review the check sheets in order to propose new monitoring and / or new tools, expanding the scope of the methodology, which will effectively cover all critical process steps and that can be applied in other to manufacture processes of Bio-Manguinhos which have already your completed mapping.

Orientador: Cristina de Campos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Geociências / Made available in DSpace on 2018-08-22T20:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HernandezTasco_Aleidys_M.pdf: 2499047 bytes, checksum: 236f6901a7068d237ee969ad03880acc (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Em 1927 a luta contra a febre amarela parecia finalizada no continente americano. A Fundação Rockefeller, instituição filantrópica estadunidense que tinha como principal objetivo o combate da febre amarela na primeira metade do século XX, assegurava que a doença estava quase erradicada. No entanto, a ocorrência das epidemias de febre amarela no Rio de Janeiro em 1928 (Brasil) e em Socorro em 1929 (Colômbia), colocou em dúvida as medidas profiláticas recomendadas e aplicadas tanto pelos órgãos nacionais de Saúde Pública como os da Fundação Rockefeller que participou da luta contra essa doença em ambos os países. Ao mesmo tempo em que ocorriam as epidemias, uma controvérsia instalou-se em torno à descoberta de Stokes, Bauer e Hudson na África, em 1927, que demonstrou que a febre amarela era facilmente inoculável no Macacus Rhesus. Tal descoberta acabou por rejeitar a concepção etiológica estabelecida em 1919 por Noguchi. A nova descoberta dos pesquisadores, as epidemias e a rejeição da teoria de Noguchi geraram uma enorme desconfiança na época, dando a sensação de que nada era seguro em assuntos relacionados à febre amarela, despertando uma crise nos estudos da doença. Esta pesquisa assume a responsabilidade de fazer um estudo comparativo a partir da ciência, da política e da técnica que ambos os países usaram no combate à doença, com intuito de conhecer as experiências desenvolvidas com o fenômeno da febre amarela. Assim, a dissertação tem dois objetivos principais. Primeiro, analisar o processo histórico da febre amarela, a fim de entender a crise que predominou nos estudos da doença entre os anos de 1927 e 1930. Para isso iremos analisar os múltiplos atores locais, nacionais e internacionais no domínio teórico e técnico da doença, durante a epidemia de febre amarela no Rio de Janeiro, em 1928-29, e em Socorro, em 1929. O segundo objetivo é analisar as manifestações científicas contra o avanço da febre amarela no Brasil e na Colômbia, a partir das duas últimas grandes epidemias registradas no Rio de Janeiro (1928-1929) e em Socorro (1929), através das tensões entre o ideal de uma ciência médica universal, representada pela Fundação Rockefeller e pelas Conferências Pan-Americanas, e as práticas de saúde pública, representadas por médicos e pesquisadores, elaboradas localmente para minimizar o alcance da febre amarela no período de 1930 a 1948 / Abstract: In 1927 the fight against yellow fever seemed to have concluded in American continent. In the first half of the twentieth century, a philanthropic American organization had as primary goal the fight against that outbreak (The Rockefeller Foundation) and, they ensured that epidemic was almost completely eradicated in that time. Nonetheless, two yellow fever outbreaks recorded in Rio de Janeiro in 1928 (Brazil) and Socorro in 1929 (Colombia) put in doubt the prophylactic measures recommended and implemented by the National Agencies of Public Health and the Rockefeller Foundation. This later institution took part in the fight against the disease in both countries. A controversy was established, while those epidemics took place in both countries, due to the discovery made by Stokes, Bauer e Hudson in Africa in 1927, which demonstrated Macacus Rhesus could be easily inoculated with the virus of yellow fever. That discovery eventually rejected the etiological agent theory established by Noguchi in 1919. In this fashion, with the new discovery, the epidemics and the rejecting of Noguchi's theory, a huge distrust grew up in those days, giving the impression that nothing was safe in issues related to yellow fever, and generating a crisis in studies of disease. Therefore, a comparative study from science, policy and technical that both Colombia and Brazil used in fighting against disease is carried out in this research in order to know the experiences developed with the yellow fever. In this manner, this dissertation has two mains objectives. First, the historical process of yellow fever will be analyzed by this research to understand the crisis that prevailed in studies of that disease between 1927 and 1930. For this reason, the multiple local actors, national and international in theoretical and technical field of the disease were analyzed during yellow fever outbreak in 1928-29 in Rio de Janeiro and in 1929 in Socorro. Second, several scientific manifestations against the progress of yellow fever in Brazil and Colombia were also studied from the last two major epidemics recorded in Rio de Janeiro (1928-1929) and Socorro (1929). Thus, controversies between an ideal of universal medical science represented by Rockefeller Foundation and Pan-American Conference, and the local public health practices developed to minimize the propagation of yellow fever in the period between 1930 and 1948 / Mestrado / Politica Cientifica e Tecnologica / Mestra em Política Científica e Tecnológica