Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-11-09T18:31:25Z No. of bitstreams: 1 JessicaHelenaPires_dissert.pdf: 3617808 bytes, checksum: 1df14ad1ee40275580d520f969311d14 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-09T18:31:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JessicaHelenaPires_dissert.pdf: 3617808 bytes, checksum: 1df14ad1ee40275580d520f969311d14 (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Breast cancer represents the second type of tumor that has the highest mortality rates, being the most common among women. The causes of these high mortality rates are related to high proliferation and metastasis, and for tumor progression, the growth of new blood vessels, angiogenesis is required. This event can be stimulated by several factors, such as insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R), hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Several molecules are involved in the control of angiogenesis such as melatonin and microRNAs (miRNAs). The miRNAs can induce the gene silencing of genes related to angiogenesis by pairing with certain specific messenger RNA (mRNA), resulting in the degradation of this molecule. Melatonin (N-acetyl-5-methoxytryptamine), the main hormone produced and secreted by the pineal gland, has several physiological functions and a proven antiangiogenesis action. This hormone can regulate miRNAs and genes related to this process. Objective: To evaluate the ability of melatonin to modulate miR-152-3p and its targets in triple-negative breast cancer cells. Material and Method: After the determination of the melatonin concentration to be used, the differential expression of the miRNAs in the MDA-MB-468 strain after the melatonin treatment was evaluated using the plate RT² Profiler™ PCR Array Human Breast Cancer containing 84 miRNAs related to breast cancer. An in-silico analysis was performed to select a miRNA involved in angiogenesis and its potential target genes. Overexpression of miR-152-3p was performed on MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells by transient transfection and after relative quantification of their expression and their target genes IGF-1R, VEGF and HIF-1α was evaluated by real-time PCR. Quantification of the protein expression of the genes was verified by immunocytochemistry. Results: The cell viability assay in the MDA-MB-468 cell line demonstrated that cells treated with 1 mM melatonin had the lowest viability (p <0.05). Analysis of the miRNAs by PCR Array in the MDA-MB-468 cell line showed six positively regulated miRNAs and seven negatively regulated miRNAs after treatment with melatonin. Evaluation of gene expression demonstrated that miR-152-3p overexpression was influenced by melatonin, leading to increased expression of the genes IGF-1R, HIF-1α and VEGF in MDA-MB-468 cells. In the MDA-MB-231 cell line, melatonin did not influence the expression of miR-152-3p and decreased the expression of the target genes. Finally, immunocytochemistry revealed that melatonin and overexpression of miR-152-3p were able to decrease the protein expression of IGF-1R, HIF-1α and VEGF in the MDA-MB-468 and MDA-MB-231 cells. Conclusions: Melatonin was able to modulate the expression of miR-152-3p and its target genes involved in angiogenesis in triple-negative breast cancer. Therefore, this study confirms the action of melatonin on the important cellular event of angiogenesis, a determinant process for the progression of the disease and also indicates it as a potential therapeutic protocol for triple-negative breast cancer. / O câncer de mama representa o segundo tipo tumoral que possui os maiores índices de mortalidade, sendo o mais comum entre as mulheres. As causas desses altos índices de mortalidade têm relação com a alta proliferação e formação de metástases, e para a progressão tumoral, é necessário o crescimento de novos vasos sanguíneos, a angiogênese. Este evento pode ser estimulado por diversos fatores, como o receptor tipo 1 do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-1R), o fator induzido por hipóxia 1 alfa (HIF-1α) e o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Os miRNAs podem induzir o silenciamento de genes relacionados com a angiogênese pelo pareamento com determinado RNA mensageiro (RNAm) específico, resultando na degradação desta molécula. A melatonina (N-acetil-5-metoxitriptamina), principal hormônio produzido e secretado pela glândula pineal, possui diversas funções fisiológicas e comprovada ação antitumoral, inclusive ação antiangiogênica. Esse hormônio pode regular miRNAs e genes relacionados a esse processo. Objetivo: Avaliar a capacidade da melatonina em modular o miR-152-3p e seus alvos, em células de câncer de mama triplo-negativo. Material e Método: Após a definição da concentração de melatonina a ser utilizada pelo ensaio de viabilidade celular, foi avaliada a expressão diferencial dos miRNAs na linhagem MDA-MB-468, após o tratamento com melatonina, utilizando-se a placa RT² Profiler™ PCR Array Human Breast Cancer que contêm 84 miRNAs relacionados ao câncer de mama. Uma análise in silico foi realizada para seleção de um miRNA envolvido na angiogênese e seus potenciais genes-alvo. A superexpressão do miR-152-3p foi realizada nas células MDA-MB-468 e MDA-MB-231 por transfecção transiente e após, a quantificação relativa de sua expressão e de seus genes-alvo IGF-1R, VEGF e HIF-1α foram avaliadas por PCR em tempo real. A quantificação da expressão proteica dos genes foi verificada por imunocitoquímica. Resultados: O ensaio de viabilidade celular na linhagem MDA-MB-468, demonstrou que as células tratadas com 1 mM de melatonina tiveram os menores valores de viabilidade (p<0,05). A análise dos miRNAs por PCR Array na linhagem MDA-MB-468 apontou seis miRNAs regulados positivamente e sete miRNAs regulados negativamente, após o tratamento com a melatonina. A avaliação da expressão gênica demonstrou que a superexpressão do miR-152-3p foi influenciada pela melatonina, levando ao aumento da expressão dos genes IGF-1R, HIF-1α e VEGF na linhagem MDA-MB-468. Já na linhagem MDA-MB-231 a melatonina não influenciou a expressão do miR-152-3p e diminuiu a expressão dos genes-alvo. Por fim, a imunocitoquímica revelou que a melatonina e a superexpressão do miR-152-3p foram capazes de diminuir a expressão proteica de IGF-1R, HIF-1α e VEGF nas linhagens MDA-MB-468 e MDA-MB-231. Conclusões: A melatonina foi capaz de modular a expressão do miR-152-3p e de seus genes-alvo envolvidos com a angiogênese no câncer de mama triplo-negativo. Portanto, este estudo confirma a ação da melatonina no importante evento celular de angiogênese, processo determinante para a progressão da doença e ainda indicá-la como potencial protocolo terapêutico para o câncer de mama triplo-negativo.

A interação materno fetal na espécie equina depende exclusivamente da complexidade anatômica e fisiológica da placenta e este órgão endócrino provisório é a peça chave do presente estudo, onde objetivou-se avaliar a influência do número de partos sob a eficiência placentária. Buscando, por meio da morfometria das macro e microrregiões, além da expressão do VEGF, VEGFR-1/Flt-1 e VEGFR-2/FLK-1 na membrana corioalantóide a termo, dados referentes à inter-relação da pluriparidade, contato materno fetal e peso dos neonatos da raça Puro Sangue Inglês. O delineamento experimental consistiu em um estudo analítico, observacional, transversal, prospectivo. Foram acompanhados cinquenta partos de éguas divididas em três grupos de acordo com a pluriparidade: primíparas (n=18), 2 a 5 partos (n=14) e 6 a 10 partos (n=18). Foram coletados e fixados em formol fragmentos de 3 cm2 das regiões do corpo do útero (Cut), corno uterino gestante (CG) e corno uterino contralateral (CnG) da membrana corioalantóide a termo pós delivramento. Após processamento foram corados pela técnica de Hematoxilina & Eosina e Picro-Sirus-Red. Os estudos imunohistoquímico (método avidina-biotina) e esterológico foram realizados ao microscópio óptico. Foram correlacionados número de partos, altura e perímetro torácico (PT) maternos; idade, altura e PT paternos; composição volumétrica dos compartimentos placentários juntamente com as áreas de superfície de contato materno-fetal e peso, altura e escore de vitalidade neonatal. A paridade, além de diretamente relacionada ao peso do neonato, demonstrou na avaliação morfofuncional ser determinante ao ganho de eficiência placentária. As membranas corioalantóides das éguas pluríparas tenderam a apresentar maior volume total no CG, aumento na porcentagem e volume total de vilos, além de maior densidade microcotiledonária e expressão do VEGF na região do CG. Entre as muitas correlações determinadas no grupo primíparas as mais relevantes foram peso da membrana com variáveis neonatais como peso (r=0,598), PT (r=0,775), tempo para mamar (r=0,553) e tempo de gestação (r=-0,527), além do PT da mãe com o tempo para ruptura do cordão umbilical (r=0,564), reflexo de sucção (r=0,625), para levantar (r=0,756) e decúbito esternal (r=-590). Da mesma forma no grupo 2 a 5 partos, neonatos que nasceram com maior peso, altura, e PT apresentaram menor tempo para levantar (r=-0,546; r=-0,869, r=-0,892), eliminação do mecônio (r=-0,535) e ruptura do cordão umbilical (r=-0,528; r=-0,881). Assim como no grupo 6 a 10 partos, o peso do potro apresentou correlação com o peso (r=0,793), PT (r=0,716) e altura (r=0,667) materna. O volume total do CG correlacionou com volume total do parênquima (r=-0,816) e epitélio nos vilos placentários do CG (r=-0,915), tempo de gestação (r=-0,483), tempo para reflexo de sucção (r=-0,672), para mamar (r=-0,525), e para eliminação do mecônio (r=-0,525). No que diz respeito às variáveis paternas, o peso paterno correlacionou com o volume total do parênquima nos vilos placentários do CnG (r=0,393) , além do PT do garanhão com o peso (r=0,316) e PT (r=0,425) do potro e volume total do CG (r=0,319). Desta forma, acredita-se que estes resultados possam fornecer ferramentas práticas para auxiliar na escolha das fêmeas e machos mais indicados para geração de potros neonatos com desenvolvimento adequado. / Fetomaternal interaction in equine species depends exclusively on the complexity of placental anatomy and physiology. This transient endocrine organ is the key of the present study, which aimed to evaluate the influence of parity on placental efficiency. Morphometric of macro and micro regions, expression of VEGF, VEGFR-1/Flt-1 and VEGFR-2/FLK-1 in term corioallantois were performed and data regarding parity, fetomaternal contact and neonatal weight were evaluated in Thoroughbred. The experimental study consisted of an analytical, observational, cross-sectional, prospective study. Fifty deliveries were monitored in mares divided into three groups according to parity: nulliparous (n=18), 2 to 5 deliveries (n=14) and 6 to 10 deliveries (n=18). Tissue sections measuring 3 cm 2 were collected and fixed in formol saline from term chorioallantois regions: uterine body (UtB), pregnant uterine horn (PH) and contralateral uterine horn (CtH). After processing, samples were stained using Hematoxylineosin and Picro-Sirus-Red. Imunnohistochemistry (avidin-biotin method) and stereology were performed using an optic microscope. Correlations between parity, maternal height and thoracic perimeter; paternal age, height and thoracic perimeter; volume composition of placental compartments, surface area of fetomaternal contact and weight, height and neonatal vitality score were performed. Parity was directly related to weight of the neonate and demonstrated in morphofunctional evaluation to be determinant for placental efficiency. Chorioallantoic membranes from pluriparous mares tended to have greater total PH volume, higher percentage and total villi volume, and greater microcotiledonary density and VEGF expression in PH region. There were several correlations found in nulliparous group, the most relevant were membrane weight and neonatal parameters such as weight (r=0,598), thoracic perimeter (r=0,775), time to nurse (r=0,553) and gestational length (r=-0,527) and also mares thoracic perimeter with time to rupture the umbilical cord (r=0,564), suckle reflex (r=0,625), time to stand (r=0,756) and to achieve sternal recumbency (r=-590). Likewise, for the 2 to 5 deliveries group, neonates that were born heavier, taller and with greater thoracic perimeter took less time to stand (r=-0,546; r=-0,869, r=-0,892), pass meconium (r=-0,535) and rupture the umbilical cord (r=-0,528; r=-0,881). In the group of mares between 6 and 10 deliveries, foals weight was correlated to maternal weight (r=0,793), thoracic perimeter (r=0,716) and height (r=0,667). Total PH volume correlated to total parenchyma (r=-0,816) and epithelium in placental villi in PH (r=-0,915), gestational lenght (r=-0,483), time to suckle reflex (r=- 0,672), to nurse (r=-0,525), and pass meconium (r=-0,525). Regarding Paternal variables, paternal weight correlated to total parenchyma volume in placental villi of the CtH (r=0,393). Also thoracic perimeter of the stallion correlated to neonatal weight (r=0,316) thoracic perimeter (r=0,425) and total volume of the PH (r=0,319). Therefore, these data provides rationale for an adequate choice of mares and stallions to generate well-developed neonates.

Objetivos: Avaliar as alterações retinianas em modelo experimental de hipóxia em coelhos aclimatizados em ambiente hipóxico-normobárico e investigar os efeitos do tratamento com bevacizumabe intravítreo (IV). Métodos: Vinte e dois coelhos New Zealand, com pesos entre 2,4 a 3,8 kg, foram divididos em quatro grupos. Os grupos S12% (n=5) e B12% (n=5) foram aclimatizados durante três dias consecutivos em concentrações de oxigênio (O2) a 12%. Os grupos S8% (n=5) e B8% (n=7) foram aclimatizados durante três dias consecutivos, com reduções graduais da concentração de O2, até atingir o nadir de 8%. Os olhos direitos (OD) foram mantidos como controle e os olhos esquerdos (OE) dos animais dos grupos S12% e S8% receberam injeção IV de 0,05 ml de solução salina balanceada (SSB), enquanto os OE dos grupos B12% e B8% receberam 0,05 ml (1,25 mg) de bevacizumabe IV. Foram realizados exames de tomografia de coerência óptica (OCT) para avaliação da espessura dos segmentos retinianos (SR) e coroidianos (SC), angiografia por fluoresceína sódica (AF) para observação da presença ou ausência de vasodilatação e tortuosidade da vasculatura retiniana e quantificação do Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) do humor aquoso e soro no primeiro dia (D0), antes do tratamento, no terceiro dia de hipóxia (D7) e no décimo primeiro dia (D11), utilizando-se a técnica do Luminex®. Após, os animais foram sacrificados e amostras do tecido retiniano foram avaliadas por histologia e imuno-histoquímica (IHQ). Resultados: Comparando-se os cortes horizontais dos OD (controle) nos períodos D0 e D7, notou-se redução de 8% (p<0,0001) e 10% (p<0,0001) da espessura do SR nas concentrações de O2 a 12% e 8%, respectivamente. Comparando-se os cortes verticais nos mesmos períodos, verificou-se redução da espessura do SR de 7%, tanto nas concentrações a 12% (p<0,0001) como a 8% (p<0,0001). Nos olhos tratados com bevacizumabe, a redução das médias das espessuras do SR para os cortes horizontais entre os períodos D0 e D7 foi de 6% (<0,0001) e 9% (<0,0001), para as concentrações de O2 a 12 e 8%, respectivamente. Enquanto que nos olhos tratados com SSB no mesmo período, observou-se redução de 8% (<0,0001) e 6% (<0,0001) para as concentrações de O2 a 12 e 8%, respectivamente, nos cortes horizontais. Nos cortes verticais, para os olhos tratados com bevacizumabe, houve redução de 5% (p=0,0005) e 8% (<0,0001) para concentrações de O2 a 12% e 8%, respectivamente; e para os olhos tratados com SSB foi encontrada redução de 7% (<0,0001) e 8% (<0,0001) nas concentrações de O2 a 12% e 8%, respectivamente. As espessuras dos SC não apresentaram alterações. O grupo B8 apresentou diferença estatisticamente significativa na análise da proporção dos olhos que não evidenciaram vasodilatação e tortuosidade dos vasos retinianos durante o período hipoxêmico, e não foram observados neovasos retinianos. A histologia e IHQ dos olhos tratados com SSB e bevacizumabe não demonstraram alterações quando comparados com os controles. Conclusões: A aclimatização de coelhos em ambiente hipóxico-normobárico resultou na redução da espessura do SR no terceiro dia de hipóxia. Notou-se, ainda, aumento da tortuosidade e vasodilatação. O bevacizumabe IV não inibiu a redução da espessura retiniana, mas sim a vasodilatação e tortuosidade vascular. / Objectives: Evaluate retinal changes in experimental model of hypoxia in rabbits acclimatized in normobaric-hypoxic environment and to investigate the effects of the treatment by intravitreal (IV) bevacizumab drug. Methods: Twenty two New Zealand rabbits weighing between 2,4 to 3,8 kg were divided into 4 groups. The groups S12 (n=5) and B12 (n=5) were acclimatized for 3 consecutive days in oxygen concentration (O2) to 12%. The groups S8 (n=5) and B8 (n=7) were acclimatized for 3 consecutive days with gradual reductions in O2 concentration until the nadir of 8%. The right eye (RE) were kept as controls and the left eye (LE) of the animals belonging to S12 and S8 groups received IV injection of 0,05 ml of balanced salt solution (BSS), while the LE belonging to groups B12 and B8 received 0,05 ml (1,25 mg) of bevacizumab IV. Optical coherence tomography (OCT) to evaluate the thickness of the retinal segments (RS) and choroidalsegments (CS), sodium fluorescein angiography (FA) for evaluation of the presence or absence of vasodilation and tortuosity of the retinal vasculature and quantification of VEGF in the aqueous fluid and peripheral blood sample were conducted at the first day (D0) before treatment, on the third day of hypoxia (D7) and day 11 (D11) using the Luminex® technique. After the animals were sacrificed, the retinal tissue samples were evaluated by histology and immunohistochemistry (IHC). Results: Comparing the horizontal sections of the RE (control) in D0 and D7 periods, a reduction of 8% (p<0,0001) and 10% (p<0,0001) the thickness of the RS in O2 concentration at 12% and 8%, respectively. Comparing the vertical cuts in the same period, there was reduced RS thickness of 7% in both concentrations to 12% (p<0,0001) and 8% (p<0,0001). In the eyes treated with bevacizumab, to reduce the average thickness of the retinal segment for horizontal cuts between D0 and D7 periods were 6% (<0,0001) and 9% (<0,0001) for O2 concentrations to 12 and 8%, respectively. While in the eyes treated with BSS in the same period, there was an 8% reduction (<0,0001) and 6% (<0,0001) for the O2 concentration at the 12% and 8%, respectively, in the horizontal cuts. In the vertical sections is observed for the eyes treated with bevacizumab, 5% reduction (p=0.0005) and 8% (<0,0001) O2 concentration at 12% and 8%, respectively; and BSS treated eyes was reduced by 7% (<0,0001) and 8% (<0,0001) in the O2 concentrations of 12% and 8%, respectively. The thickness of the CS did not show changes. The B8 group showed statistical difference in the analysis of the eyes that did not have vasodilation and tortuosity of the retinal vessels during the hypoxic period. Retinal neovascularization were not observed. Histology and IHC of the eyes treated with BSS and bevacizumab showed no changes compared to the control eyes. Conclusions: The acclimatization of the rabbits in normobaric-hypoxic environment has the effect of reducing the thickness RS on the third day of hypoxia. It is observed also increased tortuosity and vasodilation. The intravitreal bevacizumab does not inhibit retinal thickness decrease, but inhibits vasodilation and vascular tortuosity.

O reconhecimento de subtipos de carcinomas mamários baseados em suas características moleculares trouxe novas perspectivas na investigação do câncer de mama. Algumas proteínas chaves reguladoras da angiogênese e da infiltração tumoral foram avaliadas em carcinomas de mama de fenótipo basal (CK5+). Foi realizado estudo Imunoistoquímico com 14 anticorpos primários em 100 casos de carcinoma ductal. A positividade para citoqueratina 5 correlacionou-se com indicadores de mau prognóstico, incluindo idade precoce, alto grau histológico, linfonodos positivos, estádio patológico avançado, negatividade para receptores hormonais, e uma alta taxa de proliferação celular, avaliado pelo Ki67. A positividade para a CK5 também se correlacionou com a expressão do VEGF, mas não com a densidade da microvascularização. Considerando que a superexpressão de VEGF pelas células neoplásicas da mama leva a um aumento da atividade proliferativa in vitro independente de seu efeito angiogênico, a expressão diferencial do VEFG pode contribuir para o comportamento mais agressivo da neoplasia. Houve correlação do CK5 com TIMP1, mas não com MMP1, MMP2, EMMPRIN, TIMP2 and PAI, indicando que o estimulo antiproteolítico pode ser preponderante nesta neoplasia. / The recognition of subtypes of breast carcinomas based on their molecular features has brought new perspectives in breast cancer investigation. Some key regulators of angiogenesis and tumor infiltration were evaluated in breast carcinomas of basal-phenotype (CK5+). Immunohistochemistry with 14 primary antibodies was performed in 100 formalin-fixed paraffin-embedded samples of invasive ductal carcinomas. Cytokeratin 5 correlated with indicators of poor outcome, including precocious age, high histological grade, lymph node positivity, advanced pathological stage, negativity for hormonal receptors, and a high proliferative rate (Ki67 labeled index). CK5 also correlated with VEGF expression but not with the microvessel density. Considering that VEGF overexpressing neoplastic mammary cells display increased proliferative activity in vitro regardless its angiogenic effect, the differential expression of VEGF may contribute for the more aggressive behavior of these neoplasms. CK5 correlated with TIMP1, but not MMP1, MMP2, EMMPRIN, TIMP2 and PAI, indicating that anti-proteolytic stimuli may be preponderant in these neoplasms.

O glioblastoma multiforme (GBM) é o tumor mais agressivo do Sistema Nervoso Central (SNC) e caracteriza-se por um alto poder angiogênico que está diretamente relacionado com a capacidade invasiva e inversamente com o prognóstico. A angiogênese contribui para a malignidade por prover a oxigenação e o suprimento nutricional necessários para o crescimento e invasão do tumor. O GBM prolifera sob um ambiente de hipóxia e o fator induzido por hipóxia (HIF-1) apresenta um papel fundamental na ativação da transcrição de genes alvo que favorecem a angiogênese e evitam a morte celular. O fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e o fator de crescimento derivado da plaqueta C (PDGF-C) são agentes de grande interesse na angiogênese tumoral e que podem ser modulados pelo HIF-1. Foi realizado tissue microarray(TMA) de 208 casos de GBM e estudados pelo método de imunoistoquímica os marcadores HIF-1, VEGF e PDGFC. Os resultados foram correlacionados com a angiogênese avaliada através da densidade microvascular (DMV) pelo CD34, CD105, VEGF e PDGF-C, com a proliferação celular endotelial através da marcação nuclear pelo KI-67 e também com a sobrevida. A expressão tumoral do HIF-1 foi observada em 184 casos (88,5%), a do VEGF em 131 (63%) e a do PDGF-C em 160 (77%). As DMVs medianas pelo CD34, PDGF-C, VEGF e CD105 foram, respectivamente, 20, 16, 5 e 6. Os GBMs com marcação positiva pelo HIF-1 tiveram uma DMV mediana pelo CD34 de 30, enquanto que nos negativos a DMV mediana foi 14 (p<0,001). A expressão tumoral positiva pelo HIF-1 teve correlação com a marcação tumoral pelo VEGF e PDGF-C (p<0,001). Houve também uma correlação entre a marcação do VEGF e do PDGF-C tanto no tumor (p=0,001) como na célula endotelial (p<0,001). A expressão do VEGF no tumor teve correlação com a sua expressão no vaso (p<0,001). Células endoteliais marcadas pelo PDGF-C e pelo VEGF também foram marcadas pelo CD105 e seus núcleos pelo KI-67 confirmando seu padrão neoangiogênico e proliferativo. A marcação nuclear das células tumorais pelo VEGF teve impacto na sobrevida (p=0,002), bem como as marcações nucleares pelo HIF-1 e VEGF (p=0,005). Em conclusão, este estudo mostrou que a expressão do HIF-1 está associada com as expressões do VEGF e do PDGF-C e que houve uma correlação desses marcadores com a angiogênese no GBM. / Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive tumour of the central nervous system (CNS) and is characterized by a high angiogenic power that is directly related to the invasiveness and inversely to the prognosis. Angiogenesis contributes to malignancy by providing the necessary oxygenation and nutritional supplement for the tumour\'s growth and invasion. GBM proliferates under a hypoxia environment and the hypoxia-inducible factor (HIF-1) plays a key role on the transcription of essential genes which promote angiogenesis and prevent cellular death. The vascular endothelial growth factor (VEGF) and the platelet-derived growth factor C (PDGF-C) are agents of great interest on tumour angiogenesis and may be modulated by the HIF-1. Tissue micro-array (TMA) was conducted on 208 cases of GBM and the HIF-1, VEGF and PDGF-C markers were studied under immunohistochemistry method. The results were correlated with angiogenesis assessed by micro-vessel density (MVD) for CD34, CD105, VEGF and PDGF-C, with endothelial cell proliferation by nuclear staining for KI-67, and also with survival. The tumour expression by HIF-1 was observed in 184 cases (88.5%), by VEGF in 131 (63%) and by PDGF-C in 160 (77%). The median MVD for CD34, PDGF-C, VEGF and CD105 was respectively 20, 16, 5 and 6.The GBMs which stained positive for HIF-1 showed a median MVD of 30 for CD34, whereas in negative ones, median MVD was 14 (p <0.001). The positive tumour expression for HIF-1 was correlated with tumour markings for VEGF and PDGF-C (p <0.001). There was also a correlation between the markings for VEGF and PDGF-C in both the tumour (p = 0.001) and endothelial cell (p <0.001). VEGF expression in the tumour was correlated with its expression in the blood vessel (p <0.001). Endothelial cells marked for the PDGF-C and VEGF were also marked for CD105 and their nuclei for KI-67 confirming its neoangiogenic and proliferative pattern. The nuclear staining on tumour cells for VEGF had an impact on survival (p = 0.002), as well as the cases with nuclear staining for HIF-1 and VEGF (p = 0.005). In conclusion, this study showed that HIF-1 expression is associated with VEGF and PDGF-C and correlated with angiogenesis on GBM.

A odontologia moderna, mesmo usando as suas técnicas mais primorosas, na prática, ainda recupera a perda dental com implantes metálicos recobertos por coroas protéticas. Há um empenho coletivo dos cientistas em criar técnicas de desenvolvimento dental in vitro na busca por maneiras de recuperar, de maneira biológica, a ausência dental. Já é possível criar estruturas similares a dentes a partir de células-tronco de origem dental (polpa de dentes permanentes e decíduos) e não dental (células-tronco embrionárias, células-tronco da medula óssea e da crista neural) por meio de recombinação dos tecidos epiteliais e mesenquimais de germes dentais. As técnicas de reconstrução tecidual nunca estiveram tão perto do desenvolvimento da terceira dentição mas a ciência ainda tem muito a aprender no que concerne o estudo da biologia dental e engenharia de tecidos. Não basta saber como um dente se desenvolve; há de se entender como ele interage com o organismo do qual faz ou fará parte. É com esta preocupação que nos propomos a estudar se pode haver uma correlação entre o desenvolvimento do sistema nervoso e vascular de um germe dental transplantado com a posição que ele é implantado e/ou com a presença de tecido ósseo que no leito receptor. Ademais, buscamos saber se o estágio de desenvolvimento do germe dental a ser transplantado pode influenciar a formação de tecido nervoso e vascular na polpa dental ou não. Nossos resultados revelaram que o local do sítio do implante influencia diretamente o desenvolvimento dental e que isto é tempo dependente. A vascularização e a reinervação da polpa dental nos espécimes implantados nas tíbias é mais semelhante ao grupo controle que os implantados nos rins e isto independe da posição de implantação dental. Entretanto, a polpa dental dos germes implantados nos rins parece estar comumente mais sadia, conter mais odontoblastos viáveis e ser capaz de produzir tecidos mineralizados como a osteodentina. / Contemporary dentistry, even using modern techniques, still deal with missing teeth using metal implants coated by prosthetic crowns. However, there is a worldwide effort to develop a biotooth using in vitro techniques. In this way it is already possible to generate structures similar to teeth using recombination of odontogenic and non odontogenic cells in tissue engineering experiments. The transplant of the recombined cells into a host is a necessary and major step to obtain the biotooth. In this context, at the same time that the development of an appropriate sensorial and vascular system in the biotooh is required, there are many unclear questions about it. Therefore, herein we intend to analyze (I) whether may exist a correlation between the stage of development and vascular and nervous re-growth in the dental pulp after tooth transplantation; (II) if the absence or presence of bone could influence this processes or (III) if the position of implantation could change the vascular and/or nervous development in the transplanted tooth. Our results showed that the site of implantation directly alter tooth development modifying morphogenesis and expression of different vascular, perivascular and neural markers in a time dependant way. The re-growth of the vascular and neural tissue on samples transplanted to the tibia is more similar to the control group than the kidney ones and it is non dependant of the position of implantation. However, the pulp tissue of the samples transplanted under the kidney capsule seemed to be healthier as they were capable of producing mineralized tissue such as osteodentin and still had live odontoblasts.

Os carcinomas de cabeça e pescoço representam um problema na saúde pública, sendo a oitava causa no mundo de morte por câncer. A taxa de crescimento do tumor, o seu local de expansão, bem como a metástase das células cancerígenas depende muito da vascularização do tumor, sendo que esta é a responsável pelo fornecimento constante de nutrientes e de oxigênio para o crescimento tumoral. Sendo assim a angiogênese é considerada um processo essencial dentro do processo neoplásico. A avaliação dos vasos sanguíneos tumorais neoformados em carcinomas espinocelulares de boca, usando o anticorpo CD105, mostra um crescimento significativo da densidade microvascular. Baseado nestes, o objetivo do trabalho é avaliar através da imunoistoquímica a possível correlação de aumento no número de vasos sanguíneos correlacionando com diferentes grupos de processo inflamatório divididos em: pouco, moderado e intenso infiltrado inflamatório no front tumoral. Na literatura os autores de um modo geral correlacionam infiltrados inflamatórios e angiogênese, neste trabalho tentamos correlacionar se um maior ou menor infiltrado inflamatório tem influência nessa angiogênese. As lâminas foram avaliadas microscopicamente por dois profissionais de forma que eles não sabiam da classificação dada pelo outro e só quando ambos estavam em comum acordo essas lâminas foram classificadas. Para a análise estatística foi realizado a comparação múltipla entre os 03 grupos através da Análise de variância (comparação das três médias) e também o teste de Tukey, onde se observou diferença entre os grupos I e III e nos grupos II e III, porém entre os grupos I e II não houve diferença significativa. Com isso os resultados nos mostram uma correlação positiva entre a presença de maior quantidade de vasos sanguíneos, onde se encontra maior quantidade de infiltrado inflamatório, quando comparado com áreas de menor infiltrado inflamatório. / Carcinomas of the head and neck represent a public health problem, being the eighth leading cause of worldwide cancer deaths. The growth rate of the tumor, its location expansion and metastasis of cancer cells depends greatly on tumor vascularity, and this is responsible for the constant supply of oxygen and nutrients for tumor growth. Thus angiogenesis is considered an essential process within the neoplastic process. The evaluation of newly formed tumor blood vessels in oral squamous cell carcinoma using the CD105 antibody, shows a significant increase in microvascular density. Based on these, the goal is to evaluate by immunohistochemistry the possible correlation of an increased number of blood vessels correlate with different groups of inflammatory process divided into: minor, moderate and intense inflammatory infiltrate in the tumor front. In the literature, authors generally correlated angiogenesis and inflammatory infiltrates, in this work we try to correlate to a greater or lesser inflammatory infiltrate that affects angiogenesis. The slides were evaluated microscopically by two professionals so that they did not know the rating given by others and only when both were in agreement these slides were classified. For statistical analysis, the multiple comparisons between the three groups was performed by analysis of variance (comparison of three average) and also the Tukey test, where a difference was observed between groups I and III and groups II and III, but between groups I and II significativa.Com that there was no difference in the results show a positive correlation between the presence of a larger amount of blood vessels, where it is most inflammatory infiltrate when compared to areas of lesser amounts of inflammation.

As células T regulatórias (Tregs) suprimem a população de células T efetoras e podem capacitar células tumorais a evadir a resposta imune do hospedeiro. Além disso, estas células têm sido correlacionadas com angiogênese em alguns tipos de câncer. O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de células Tregs e sua correlação com angiogênese em carcinomas espinocelulares (CEC) de boca. Amostras de um total de 61 pacientes com CEC de boca, localizados no lábio e na língua e assoalho bucal obtidos dos Departamentos de Patologia dos Hospitais de Base e Estadual da cidade de Bauru, São Paulo, Brasil, no período de 2005 a 2012 foram analisados quanto às características clínicas e demográficas. Avaliou-se também, o índice histopatológico de malignidade e a expressão imunoistoquímica de células Tregs (FOXP-3), densidade microvascular intratumoral (MVD) e VEGF-A. A associação da marcação do anticorpo anti-FOXP-3 e as variáveis clínicas e microscópicas foram avaliadas através do teste qui quadrado. A análise estatística da expressão dos marcadores entre CECs de lábio e CECs de Língua e assoalho bucal foi realizada através do teste t. As correlações entre a frequência de células Treg e MVD, células Tregs e VEGF-A, foram obtidas através do coeficiente de correlação de Pearson, bem como a correlação entre MVD e VEGF-A. Não houve associação da expressão de FOXP-3 com as características clínicas, demográficas e índice de malignidade tumoral. Foram observados valores similares da frequência de células Tregs, índices de MVD e expressão de VEGF-A em CECs de lábio e CECs de língua e assoalho bucal. Uma correlação positiva entre a frequência de células Tregs e a MVD foi observada, embora não estatisticamente significativa (P-valor=0,682). Além disso, uma correlação positiva estatisticamente significativa foi detectada entre a frequência de células Tregs e a expressão de VEGF-A (P-valor=0,029). Não foi observada correlação entre a MVD e a expressão de VEGF-A. Estes resultados sugerem que embora exista uma associação entre a frequência de células Tregs e a angiogênese em CECs de boca, a expressão de FOXP-3 parece não estar associada ao desenvolvimento tumoral. / Regulatory T (Treg) cells suppress effector T-cell populations and can enable tumor cells to evade the host immune response. Moreover, Tregs cells have been correlated with angiogenesis in certain types of cancers. The aim of this study was to evaluate the frequency of Treg cells and its correlation with angiogenesis in oral squamous cell carcinomas (OSCC), as well as its implication on growth and tumor aggressiveness. Samples from a total of 61 patients with OSCC, located on the lip and tongue and floor of the mouth were analyzed for clinical and demographic characteristics. The histopathological malignancy index and immunoexpression of Treg cells (FOXP-3), IMD (CD105) and VEGF-A were also evaluated. The association of FOXP-3 expression and the clinical and microscopic changes were evaluated using the chi square test. Statistical analysis of the expression of markers between SCCs lip and SCCs of the tongue and floor of the mouth was performed using the t test. Pearsons rank correlation was performed to evaluate the correlation between the frequencies of both, Tregs cells and VEGF-A expression and Tregs cells and IMD determinations, as well as between VEGF-A expression and IMD values. There was no association of FOXP-3 expression with clinical and demographic characteristics, and tumor malignancy index. Similar values were observed for the frequency of Treg cells, IMD values and VEGF-A expression in OSCCs of the lip and tongue and floor of mouth. A positive correlation between FOXP-3 expression with IMD values was also detected, however, statistically that was non-significant (P-value=0.682). Furthermore, a significant positive correlation was observed between the frequency of tumor-infiltrating Tregs with VEGF-A expression (P-value=0.029). No correlation was observed between IMD values and with VEGF-A expression. These results suggest that although there is an association between the frequency of Treg cells and angiogenesis in OSCC, FOXP-3 expression was not associated with increased tumor aggressiveness.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-04-19T11:44:34Z No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA RACHID COSTA.pdf: 740066 bytes, checksum: 10863a04e188cbf0c2ad0d2d4fd873fd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T11:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA RACHID COSTA.pdf: 740066 bytes, checksum: 10863a04e188cbf0c2ad0d2d4fd873fd (MD5) Previous issue date: 2018-04-19 / The malignant neoplasms are a public health problem worldwide, being the biggest cause of premature mortality of the planet. In Brazil, in 2012, more than 200 thousand people died, and it is estimated that within 20 years, there will be an increase of approximately 70% of new cases. Therefore, since a long time, the alternative therapies constitute a way of promoting "miracle" for the cure of cancer. However, the miraculous empiricism has no scientific basis and not enough documentation to prove the efficacy and quality these substances used in this self-treatment. Thus, the fosfoetanolamina, an experimental substance caused a great international repercussion and expos Brazil to an embarrassing situation. A governmental law, imposed the use of synthetic fosfoetanolamina for cancer treatment, without scientific bases for the confirmation of the effects and efficacy of anticancer treatment, by means of experimental laboratory studies and clinical trials. Thus the objective of this work was to evaluate the angiogenic activity/Antiangiogenic, mutagênica/antimutagênica this substance. The test of angiogenesis was performed using an experimental model (MCA) corioalantóide membrane of chicken egg. While the tests for mutagenicity and antimutagenicity, were performed by a micronucleus test in mouse bone marrow. The results were significant in all tests performed. / As neoplasias malignas são um problema de saúde pública mundial, sendo a maior causa de mortalidade prematura do planeta. No Brasil, em 2012, mais de 200 mil pessoas foram a óbito, e estima-se que num prazo de 20 anos, haverá aumento de cerca de 70% de novos casos. Por isso, desde muito tempo, as terapias alternativas constituem uma forma de promover o "milagre" para a cura do câncer. Contudo, o empirismo milagroso não tem base científica e nem documentação suficiente para comprovar a eficácia e qualidade destas substancias utilizadas neste autotratamento. Assim sendo, a fosfoetanolamina, uma substância experimental causou uma grande repercussão internacional e expos o Brasil a uma situação embaraçosa. Uma lei governamental, impôs a utilização da fosfoetanolamina sintética para o tratamento do câncer, sem bases científicas para a confirmação dos efeitos e eficácia do tratamento anticâncer, por meio de estudos laboratoriais experimentais e ensaios clínicos. Assim o objetivo deste trabalho, foi avaliar as atividades angiogênica/antiangiogênica, mutagênica/antimutagênica desta substância. O teste de angiogênese foi realizado através do modelo experimental em membrana corioalantóide (MCA) de ovo de galinha. Enquanto os testes de mutagenicidade e antimutagenicidade, foram realizados pelo Teste de Micronúcleo em medula óssea de camundongo. Os resultados foram significativos em todos os testes realizados.

O uso de biotecnologias pode ser um método eficaz para melhorar a eficiência da reprodução e aumentar a produção de animais geneticamente superiores. O tratamento superovulatório é uma técnica comum utilizada com o objetivo de difundir o material genético desejado, embora seu uso em búfalos ainda apresente limitações, principalmente relacionada à baixa taxa de recuperação de embriões. O corpo lúteo (CL) é uma glândula reprodutiva transitória que produz progesterona, requerida para o estabelecimento e manutenção da prenhez e regulação do ciclo reprodutivo. O desenvolvimento e as funções do corpo lúteo são afetados pela hiperestimulação ovariana. As células luteínicas de animais superovulados apresentam características compatíveis com alta síntese de proteína. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e o fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF) são reguladores importantes do desenvolvimento e função do CL, e também são afetados pelo tratamento superovulatorio. Vários estudos sugerem que o LH (hormônio luteinizante) e hCG (gonadotrofina coriônica humana) modulam a expressão dos fatores de crescimento. Este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão gênica e protéica dos sistemas VEGF e bFGF em corpo lúteo cíclico de búfalas não tratadas e superovuladas. Foram utilizados vinte corporea lutea (CLL) divididos em 5 grupos de acordo com o estágio do ciclo estral (2, 6, 12, 17 e 26 dias após ovulação p.o.) e o grupo 6 era composto de CLL de animais superovulados no dia 6 p.o. Os CLL foram coletados em abatedouro, dissecados e congelados imediatamente em nitrogênio líquido para posterior extração de proteína e de mRNA. A análise protéica do VEGF, KDR, bFGF, FGFR-2 e FGFR-3 foi determinada por western blotting, enquanto a análise da expressão gênica de VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 a 4, por RT-PCR em tempo real. No CL de búfalas superovuladas observou-se maior expressão protéica dos sistemas VEGF e bFGF, em relação aos animais não tratados (p<0,05). Por outro lado, a expressão do mRNA de todos os genes estudados decresceu (sistema VEGF-A p<0.001, bFGF, FGFR-1 e FGFR-3, p<0.05) ou apresentou tendência a decrescer (FGFR-2 e FGFR-4, p<0.1) nos animais superovulados. Durante o ciclo estral, a expressão protéica do VEGF não variou, apesar da expressão de todas as outras proteínas e mRNA estudados apresetarem variações de acordo com a fase do ciclo estral. Os resultados obtidos sugerem que o tratamento superovulatório aumenta a taxa de tradução dos fatores angiogênicos no CL de búfalas, e que a expressão dos sistemas VEGF e bFGF ao longo do ciclo estral é tempo-dependente, indicando um papel importante destes fatores na regulação das funções do CL. / Biotechniques can be an effective way of improving reproduction efficiency and enhancing the production of genetically superior animals. The superovulatory treatment is a common technique aiming to spread desired genetical material, although its use in buffalos still presents limitations, mainly the low embryo recovery rate. The corpus luteum (CL) is a temporary endocrine gland that produces progesterone (P), which is required to the establishment and maintenance of pregnancy and regulation of reproductive cycle. CL development and function are affected by ovarian hyperestimulation. The luteal cells of superovulated animals are described to show characteristics compatible with higher protein synthesis. The vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) are important regulators of CL and are also affected by superovulatory treatment. Several studies suggest that LH (luteinizing hormone) and hCG (human chorionic gonadotropin) modulate expression of growth factors. The aim of this work was to access gene and protein expression of VEGF and bFGF systems in cyclic CL of nontreated and superovulated water buffalos. Twenty water buffaloes corpora lutea (CLL) were divided in five groups according to estrous cycle stage (days 2, 6, 12, 17 and 26 after ovulation - p.o.) and the sixth group was composed by superovulated CLL from day 6 p.o. The CLL were collected at the slaughterhouse, dissected and frozen immediately in liquid nitrogen for posterior protein and mRNA extraction. Protein expression of VEGF and its receptors KDR and Flt-1 as well as bFGF and its receptors FGFR-2 and FGFR-3 was measured by western blotting (WB). For the relative gene expression of VEGF, KDR, Flt-1, bFGF, FGFR-1 to 4, we used real time RT-PCR. VEGF and bFGF systems protein expression showed an increase (p <0.05) in superovulated CLL compared to non-treated CLL on day 6 after p.o. On the other hand, mRNA expression from all studied genes was decreased (VEGF-A system p<0.001, bFGF, FGFR-1 and FGFR-3, p<0.05) or tended to decrease (FGFR-2 and FGFR-4, p<0.1) in superovulated CLL. In estrous cycle CLL VEGF protein did not show a time dependent expression although all other proteins and mRNAs expression were dependent on estrous cycle stage. These results indicate that the superovulatory treatment increased transduction rate of angiogenic factors in CL and that VEGF and bFGF systems are expressed in a time-dependent manner during the estrous cycle, indicating that these growth factors are important regulators of CL function.