Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-20T10:39:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1774719 bytes, checksum: 05d8e4ef7c8278c1f92b4bfc814b463b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T10:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1774719 bytes, checksum: 05d8e4ef7c8278c1f92b4bfc814b463b (MD5) Previous issue date: 2016-06-28 / As plantas vêm sendo utilizadas pela população para várias finalidades, porém muitas não têm ação comprovada. Desta forma, pesquisas que buscam identificar produtos naturais com atividade biológica representam uma alternativa para tratamento de doenças, entre elas infecções bacterianas. O uso de fitoterápicos tem sido uma opção terapêutica dos profissionais de saúde que procuram novas alternativas com potencial atividade farmacológica, menor toxicidade e menores custos a população. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana e antibiofilme de treze óleos essenciais (canela, cravo, orégano, tomilho, laranja, lima, tangerina, eucalipto, hortelã, noz moscada, alecrim, gengibre e melaleuca) puros e incorporados a cremes dentais frente a bactérias causadoras de patologias na cavidade oral. Foram utilizadas cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus sp. e Enterococcus sp. Inicialmente foi realizado o teste de difusão em ágar e apenas os óleos de C. zeylanicum (canela), E. caryophyllata (cravo), O. vulgare (orégano) e T. vulgaris (tomilho) apresentaram atividade antibacteriana. O teste de concentração inibitória mínima (CIM) foi realizado com os óleos essenciais ativos sendo observada uma potente atividade do óleo de C. zeylanicum contra a bactéria S. mutans (0,156 mg/mL). A seguir, os óleos essenciais foram testados para verificar a atividade antibiofilme tendo o óleo de E. caryophyllata apresentado atividade contra o biofilme de S. mutans de 39% a 44%, os quatro óleos ativos inibindo o biofilme de S. aureus de 92% a 95% e o óleo de O. vulgare apresentado atividade contra o biofilme de Enterococcus sp. de 43% a 60%. Posteriormente os óleos ativos foram incorporados a cremes dentais nas concentrações de 3% e 5%, puros e em associações, totalizando 18 cremes dentais fitoterápicos. O teste de difusão em ágar foi utilizado para verificar a atividade antibacteriana dos cremes dentais sendo observadas atividades significativas nas duas concentrações utilizadas. Os cremes dentais também foram submetidos ao teste de inibição do biofilme pré-formado, sendo verificado que para a bactéria S. mutans a associação dos quatro óleos essenciais inibiu 100% do biofilme. Para S. aureus 12 dos 18 cremes dentais inibiram em mais de 50% do seu biofilme e para Enterococcus sp. todos os cremes dentais obtiveram mais de 45% de ação. No presente estudo também foi observado o sinergismo entre a clorexidina e o óleo essencial de T. vulgaris para bactéria S. mutans. Os óleos ativos foram submetidos a cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa para elucidação dos componentes majoritários. Assim, os óleos essenciais de canela, cravo, tomilho e orégano e os cremes dentais fitoterápicos utilizados no presente estudo apresentaram atividade antibacteriana e antibiofilme contra bactérias cariogênicas, sendo, portanto, uma alternativa para a prevenção e terapia das doenças da cavidade oral. / Plants have been used throughout human history for various therapeutic purposes. However, for many of these plants, the supposed medicinal activities have not been proven. Thus, studies toward the identification of bioactive plant metabolites constitutes a promising alternative for the treatment of diseases, including bacterial infections. Due to the potential pharmacological activities, low toxicity, and lower costs, herbal medicines have been used by health professional as an alternative to synthetic drugs. The objective of the present work was to evaluate the antibacterial and biofilm inhibition activities of thirteen essential oils (cinnamon, cloves, oregano, thyme, orange, lime, tangerine, eucalyptus, mint, nutmeg, rosemary, ginger, and melaleuca), both in pure forms and incorporated into toothpastes, against bacteria causative of pathologies of oral cavity. Staphylococcus aureus ATCC 25923 Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus sp. and Enterococcus sp. Were used in this study. In the preliminary investigations, results from agar diffusion tests showed that only C. zeylanicum (cinnamon), E. caryophyllata (clove), O. vulgare (oregano), and T. vulgaris (thyme) showed antibacterial activity. These oils were tested to determine their miminal inhibitory concentration (MIC), and a pontent antibacterial activity was observed for C. zeylanicum against S. mutans (0.156 mg/mL). Following, the essential oils were tested for their biofilm inhibition activities. E. caryophyllata oil inhibited S. mutans biofilm from 39% ato 44%. The four active oils inhibited S. aureus biofilm from 92% to 95%, and O. vulgare oil inhibited Enterococcus sp. biofilm from 43% to 60%. Following, the active essential oils were incorporated in toothpastes at concentrations of 3% and 5%, pures and in associations, totalizing 18 herbal toothpastes. All these toothpastes showed significant activities at both concentrations tested. Toothpaste containing association of the four active oils inhibited by 100% the formation of biofilm by S. mutans. Twelve of the eighteen toothpastes were capable of inhibiting Enterococcus sp. biofilm in 50 %, and all formulations showed more than 45% of inhibition. In these studies, a synergistic action between chlorexidine and T. vulgaris against S. mutans was observed. Finally, the active oils were analysed by gas Chromatography-Mass spectrometry and their major chemical constituents were identified. In conclusion, the essential oils of cinnamon, cloves, thyme, and oregano, as well as the herbal toothpastes containing these essential oils, showed antibacterial activities against cariogenic bacteria, indicating their potential as alternative to treatment and prevention of diseases of oral cavity.

Avaliou-se a atividade antibacteriana e a compatibilidade tecidual dos seguintes materiais obturadores de canais radiculares de dentes decíduos: cimento de óxido de zinco e eugenol, pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento EndoREZTM. A atividade antibacteriana foi avaliada in vitro, por meio do teste de difusão em ágar, frente a 5 microrganismos indicadores (Kocuria rizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli e Staphylococcus aureus), sendo os resultados submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao pósteste de Tukey. A compatibilidade tecidual foi avaliada in vivo, por implantação subcutânea, em camundongos isogênicos BALB/c, de tubos de polietileno contendo os materiais obturadores. Foram efetuadas análises descritiva e semi-quantitativa do fibrosamento e do infiltrado inflamatório e quantitativa da área e maior espessura do tecido reacional granulomatoso. Os resultados foram submetidos à análise estatística por meio dos testes de Kruskal-Wallis, análise de variância (ANOVA) e pós-teste de Tukey. Para todos os testes o nível de significância foi de 5%. Com relação à atividade antibacteriana, evidenciaram-se diferenças estatisticamente significantes (p<0,0001) entre os halos de inibição ocasionados pelos diferentes materiais, para todos os microrganismos avaliados. A Kocuria rizophila foi inibida mais eficazmente pelo cimento de óxido de zinco e eugenol (p<0,05), enquanto que o Enterococcus faecalis foi inibido mais eficazmente pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco (p<0,05). O Streptococcus mutans foi inibido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento de óxido de zinco e eugenol na mesma intensidade (p>0,05). A Escherichia coli foi inibida mais eficazmente pelo cimento de óxido de zinco e eugenol, seguido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco e pelo cimento Sealapex® (p<0,05). O Staphylococcus aureus foi inibido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco e pelo cimento de óxido de zinco e eugenol na mesma intensidade (p>0,05), e menos intensamente pelo cimento Sealapex® (p<0,05). O cimento EndoREZTM apresentou atividade antibacteriana apenas frente a Kocuria rizophila e ao Staphylococcus aureus. Com relação à compatibilidade tecidual, não observou-se diferença entre os materiais, com relação ao fibrosamento e à maior espessura do tecido reacional granulomatoso (p>0,05). A pasta Calen® espessada com óxido de zinco foi o material que apresentou infiltrado inflamatório de menor intensidade (p<0,05). A área do tecido reacional granulomatoso foi menor para a pasta Calen® espessada com óxido de zinco e para o cimento Sealapex® (p>0,05) em comparação aos cimentos EndoREZTM e óxido de zinco e eugenol (p<0,05). Com base nos resultados obtidos nas metodologias empregadas pôde-se concluir que: 1- A atividade antibacteriana, in vitro, em ordem decrescente foi: cimento de óxido de zinco e eugenol, pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento EndoREZTM; 2- A pasta Calen® espessada com óxido de zinco foi o material que apresentou a melhor compatibilidade tecidual, seguido pelos cimentos Sealapex® e de óxido de zinco e eugenol. O cimento EndoREZTM apresentou resposta tecidual insatisfatória. / This study evaluated the antibacterial activity and tissue compatibility of the following root canal filling materials for primary teeth: zinc oxide and eugenol cement, Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and EndoREZTM sealer. The antibacterial activity of these materials against 5 indicator microorganisms (Kocuria rizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli and Staphylococcus aureus) was evaluated in vitro using the agar diffusion test. The results were analyzed statistically by the analysis of variance (ANOVA) and Tukeys post-hoc test. Tissue compatibility was evaluated in vivo by the implantation of polyethylene tubes containing the root canal filling materials in the subcutaneous tissue of isogenic BALB/c mice. Descriptive and semi-quantitative analyses of the rate of fibrosis and the inflammatory infiltrate were performed, as well as a quantitative analysis of the area and the greater thickness of the granulomatous reactionary tissue. The results were analyzed statistically by the Kruskal-Wallis test, ANOVA and Tukeys post-hoc test. For all tests, the significance level was set at 5%. Regarding the antibacterial activity, there were statistically significant differences (p<0.0001) among the zones of inhibition of microbial growth produced by the different materials for all target microorganisms. Kocuria rizophila was inhibited more effectively by the zinc oxide and eugenol cement (p<0.05), while Enterococcus faecalis was inhibited more effectively by the Calen® paste thickened with zinc oxide (p<0.05). Streptococcus mutans was inhibited by the Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and zinc oxide and eugenol cement in the same intensity (p>0.05). Escherichia coli was inhibited more effectively by the zinc oxide and eugenol cement, followed by the Calen® paste thickened with zinc oxide and Sealapex® sealer (p<0.05). Staphylococcus aureus was inhibited by the Calen® paste thickened with zinc oxide and by the zinc oxide and eugenol cement in the same intensity (p>0.05), and was less effectively inhibited by Sealapex® sealer (p<0.05). EndoREZTM sealer presented antibacterial activity only against Kocuria rizophila and Staphylococcus aureus. Regarding tissue compatibility, there was no statistically significant difference among the materials with respect to the rate of fibrosis or the greater thickness of the granulomatous reactionary tissue (p>0.05). The Calen® paste thickened with zinc oxide produced the inflammatory infiltrate with lowest intensity of all materials (p<0.05). The area of the granulomatous reactionary tissue was smaller for the Calen® paste thickened with zinc oxide and Sealapex® sealer (p>0.05) compared to EndoREZTM sealer and the zinc oxide and eugenol cement (p<0.05). Based on the results obtained with the methodologies employed in the present study, it may be concluded that: 1- The in vitro antibacterial activity in a decreasing order was: zinc oxide and eugenol cement, Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and EndoREZTM sealer; 2- The in vivo tissue compatibility in a decreasing order was: Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer, zinc oxide and eugenol cement and EndoREZTM sealer. The Calen® paste thickened with zinc oxide permitted the occurrence of an adequate tissue response, while Sealapex® sealer and the zinc oxide and eugenol cement produced a fair tissue response. EndoREZTM sealer did not induce tissue repair.

A própolis é uma resina elaborada por abelhas que há anos tem sido utilizada na medicina popular devido as suas atividades biológica sendo que estas são atribuídas principalmente aos compostos fenólicos. Apesar disto, o mecanismo de ação da própolis permanece obscuro e a maioria dos estudos de atividade antimicrobiana realizados utilizaram métodos clássicos in vitro, que embora confirmem esta ação, não explicam como ela ocorre. Neste estudo foram avaliadas as características físico-quimicas dos extratos de própolis verde, dourada, vermelha e extrato padronizado comercial (EPP-AF®). Também foi verificada a atividade antibacteriana destes extratos contra Staphylococcus aureus ATCC 25.923, Streptococcus pneumoniae ATCC 49.619 e Klebsiella pneumoniae ATCC 10.031 utilizando metodologia de microdiluição em caldo e avaliação em cultura de células eucarióticas. Finalmente, foi avaliada a influência do extrato de própolis verde em concentrações bactericidas na morfologia das bactérias citadas. Os resultados obtidos mostraram que todos os extratos possuem grande quantidade de compostos fenólicos, entretanto a própolis vermelha apresentou melhor atividade antimicrobiana para todas as bactérias avaliadas, com concentração bactericida mínima entre 0,19 - 0,77mg/ml . Apesar disto, o extrato de própolis vermelha foi o mais instável, havendo perda significativa dos flavonoides, uma das principais substâncias pertencentes aos compostos fenólicos relacionados à atividade antimicrobiana. Além disso, verificouse que o extrato de própolis não influenciou na adesão e invasão bacteriana em células de carcinoma de laringe humano (HEp-2). As morfologias das bactérias tratadas com própolis avaliada por microscopia eletrônica de varredura evidenciou lise na superfície das bactérias gram-positivas e alteração morfológica na gramnegativa. A partir dos dados obtidos foi possível caracterizar diferentes extratos de própolis e confirmar a sua atividade antimicrobiana. Além disso, embora o mecanismo de ação não tenha sido completamente elucidado, os resultados indicam que ele está relacionado a danos estruturais provocados pela própolis e não a uma ação direta na adesão e invasão bacteriana nas células eucarióticas / Propolis is a resin produced by bees used since antiquity in folk medicine because of biological properties, especially due to phenolic compounds. However, the mechanism of action of propolis is unknown and the majority of studies on antimicrobial activity were based on in vitro classical methods that confirmed this action, but do not explain how. This present work compared the chemical composition of green, golden, red and commercial extract of propolis (EPP-AF®). Also antimicrobial activity was evaluated against Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 and Klebsiella pneumoniae ATCC 10031. Microdilution method and cell culture experiments were carried out. Finally, it evaluated the influence of bactericidal concentration of green propolis on the morphology of bacteria. The results indicated there were high levels of phenolic compounds in all extracts, however red propolis presented the best antimicrobial activity against all bacteria studied, with bactericide concentration in the range of 0.19 - 0.77mg/ml. Nevertheless, red propolis extract was the most unstable, with significant loss of flavonoids, one the main substances associated with antimicrobial activity. Furthermore, the extract of propolis did not influence the adhesion and invasion of bacteria in human larynx carcinoma cell (HEp-2). The study of scanning electron microscopy of bacteria treated with propolis showed cell lysis in the grampositive and morphological changes in the gram-negative bacteria. This study contributed to characterize and confirm antimicrobial activity of different propolis extracts. Although the mechanism of action was not completely elucidated, the results indicate that the antimicrobial activity is associated with bacterial cell damage by propolis and it is not due to influence direct of propolis on bacterial adhesion and invasion of the eukaryotic cells.

Annona hypoglauca Mart. foi coletada em área inundada da Floresta Amazônica, próximo à Manaus (Brasil). Os alcalóides foram obtidos do extrato bruto do caule por partição ácido-base, e a partir do resíduo dessa extração foi realizada a partição com solventes de diferentes polaridades, originando as frações livres de alcalóides. A partir da análise de CG-EM dos alcalóides totais foi possível caracterizar sete alcalóides aporfínicos (actinodafinina, anonaina, glaucina, isoboldina, isodomesticina, nornuciferina e roemerina) e possivelmente duas protoberberinas (esculerina e caseadina). Os alcalóides totais foram fracionados em coluna cromatográfica e posteriormente purificados em placa cromatográfica preparativa permitindo o isolamento de dois alcalóides aporfínicos: actinodafinina e isoboldina. As estruturas desses produtos naturais foram definidos com base em espectros de dados, incluindo 1H RMN, 13C RMN, 13C DEPT e CG-EM. Pela primeira vez a ocorrência da actinodafinina esta sendo reportada em uma espécies de Annona. O extrato bruto, as frações livres de alcalóides, os alcalóides totais e suas frações foram submetidos a avaliação da atividade antibacteriana por microdiluição e atividade citotóxica in vitro frente a células de tumores humanos. Para todos os extratos testados, somente os alcalóides totais e suas frações apresentaram atividade frente a bactérias Gram +. No ensaio de citotoxicidade com linhagens de células de tumores, o extrato bruto foi capaz de inibir o crescimento de todas as linhagens celulares testadas, apresentando efeito letal para a linhagem de Câncer de Cólon (KM-12), enquanto as frações livres de alcalóides demonstraram baixa atividade. Por outro lado, as frações livres de alcalóides apresentaram atividade mais pronunciada para a linhagem de Câncer de Pulmão (NCIH-460) do que os alcalóides. Assim, a atividade citotóxica encontrada no extrato bruto é decorrente do sinergismo ou complementação entre os componentes das frações alcaloídicas e não alcaloídicas, isto é, nenhuma das frações isoladamente é responsável pela atividade observada no extrato bruto. / Annona hypoglauca Mart. was collected in the flooded areas of the Amazonian Forest near Manaus (Brazil). The alkaloids were obtained from the stems crude extract by acid-base partitioning and the remaining alkaloid-free extract was partitioned with organic solvents of different polarity. The GC/MS analysis of the total alkaloids allowed the identification of seven aporphine alkaloids (actinophanine, anonaine, glaucine, isoboldine, isodomesticine, nornuciferine and roemerine) and possibly two proberberine alkaloids (scoulerine and caseadine). The total alkaloids were fractionated by column chromatography and further purified by preparative thin-layer chromatography allowing the isolation of two aporphine alkaloids: actinodaphnine and isoboldine. The structures of these natural products were defined based on their spectral data, including 1H NMR, 13C NMR, 13C DEPT and CG/MS. This is the first report for the occurrence of actinodaphnine in Annona species. The crude extract, alkaloid-free organic extracts, total alkaloids and its fractions were tested for their antibacterial activity by the microdilution broth assay and cytotoxic activity against in vitro tissue culture cells of human. From all the extracts assayed, only the total alkaloids and their fractions showed a relevant antibacterial activity against Gram positive organisms. In the cytotoxicity assay with human tumor cell lines, the crude extract was able to inhibit the growth of all cell lines tested, with a lethal effect for the colon cancer (KM-12) cell line. The evaluation of this activity with the total alkaloid and alkaloid-free fractions indicated selectivity for the different cellular lines. The alkaloid fraction presented high growth inhibition for the colon cancer cell line (KM-12), while the alkaloid-free fractions displayed lower activity. On the other hand, the alkaloid free fractions showed a higher activity for the lung cancer cell line (NCIH-460) than the total alkaloids. Thus, the cytotoxic activity found in the crude extract is the result of the synergism or complementary activity among the components of the alkaloid and alkaloid-free fractions, e.g, none of the fractions separately is responsible for the activity observed in the crude extract.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 YASMINE M PUPO.pdf: 8545137 bytes, checksum: 4a5dc17fead5ffe17a36e9b6d7acb198 (MD5) Previous issue date: 2013-05-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of bioactive restorative materials, with the ability to reduce biofilm development and to present direct action against cariogenic microorganisms, has grown in the dental market and a trend in Adhesive Dentistry. This study aims to describe the synthesis, the characterization, the antimicrobial properties, the vascular permeability and the mechanical properties of the quaternary ammonium methacrylate polymer [QAMP], for incorporation into dental adhesive systems, in order to provide increase the durability of dental restorations. QAMP was obtained through chemical modification (alkylation) of a preformed polymer [Eudragit™ E100] and n-octyl bromide. The resulting product [QAMP] was characterized by infrared spectroscopy, Raman spectroscopy, Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy, Visible spectrophotometry, X-ray diffraction and thermogravimetric analysis (TGA). The in vitro susceptibility testing against Streptococcus mutans of QAMP was performed prior and after incorporation into a commercial adhesive system (Clearfil™ SE Bond). Clearfil™ Protect Bond containing antimicrobial standard [MDPB] and Clearfil™ SE Bond without QAMP were used as positive and negative controls, respectively. To evaluate percentage of quaternary ammonium compound released from the experimental adhesive system a test was conducted, after intervals of predetermined time (1, 7, 14, 21 and 30 days). Spectroscopic data confirmed that QAMP was successfully acquired. Thermal analysis indicated that QAMP was heat-stable. The antimicrobial effect against the Streptococcus mutans, prior and after incorporation in a dental adhesive system, was proven. The release of the quaternary ammonium compound [QAMP], embedded in an adhesive system, was reduced when compared to the commercial product [MDPB]. Additionally, the effect of Clearfil™ SE Bond containing QAMP on the vascular permeability using Evans blue and laser!"!Doppler flowmetric methods was investigated in order to define the influence on the exudative phase of the inflammatory process in the subcutaneous tissue of rats. Results support that the adhesive system containing QAMP had lower effect on this phase indicating an adequate biocompatibility. In an attempt to determine the stability of QAMP, the bond strength of adhesive systems was evaluated in extracted human teeth through microtensile test immediately, after 6 and 12 months of storage of the stick-shaped specimens. The degree of conversion of the bonding interfaces was investigated, using micro-Raman spectroscopy, and in vitro by infrared Fourier Transform. Data obtained confirm that a self-etching adhesive system with the quaternary ammonium methacrylate polymer [QAMP] could produce the effective bond strength under in vitro conditions and stability of the degree of conversion in situ and in vitro. In the evaluation of mechanical properties, hardness and elastic modulus, slices of restored teeth were prepared with adhesives under study and were submitted to artificial methods for producing caries lesions during, pH-cycling or microbiological assay, for subsequent nanoindentation test performed in the region of the interface resin-dentin, leading to check the quality of the formed substrate. In general, Clearfil™ SE Bond containing QAMP provided better mechanical properties for the resin-dentin interface than other commercial selfetching adhesives after cariogenic challenges. These data include the development of quaternary ammonium polymers to provide additional benefits for dental adhesive systems widely used in dentistry. / A utilização de materiais restauradores bioativos, com capacidade de reduzir o desenvolvimento do biofilme e de apresentar ação direta contra microrganismos cariogênicos, tem crescido dentro do mercado odontológico, sendo uma tendência na Odontologia Adesiva. O presente estudo teve como objetivo descrever a síntese, a caracterização e as propriedades antimicrobianas, de permeabilidade vascular e mecânicas de um polímero metacrílico quaternário de amônio [QAMP], quando incorporado em sistemas adesivos odontológicos, com o propósito de aumentar a durabilidade das restaurações dentais. QAMP foi obtido por modificação química (alquilação) de um polímero pré-formado [Eudragit E100] com brometo de n-octila. O produto resultante [QAMP] foi caracterizado por espectroscopia na região do infravermelho, espectroscopia Raman, espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear, espectrofotometria na região do visível, difração de raios X e análise termogravimétrica (TGA). O teste de susceptibilidade in vitro da cepa de Streptococcus mutans frente ao QAMP foi realizado antes e após a incorporação no sistema adesivo Clearfil SE Bond. Clearfil Protect Bond, o qual contém um antimicrobiano padrão [MDPB] e Clearfil SE Bond sem QAMP foram usados como controles positivo e negativo, respectivamente. Realizou-se também a avaliação da porcentagem de liberação do composto quaternário de amônio a partir do sistema adesivo em estudo, após intervalos de tempo prédeterminados (1, 7, 14, 21 e 30 dias). Os dados espectroscópicos confirmaram que QAMP foi obtido com sucesso. A análise térmica indicou que QAMP foi estável ao calor. O efeito antimicrobiano contra Streptococcus mutans, antes e após a incorporação ao sistema adesivo odontológico, foi comprovado. A liberação de compostos quaternários de amônio do sistema adesivo em estudo foi muito reduzida, quando comparada ao do produto comercial [MDPB]. Além ! *+! disso, investigou-se o efeito de Clearfil® SE Bond contendo QAMP sobre a permeabilidade vascular usando os métodos de azul de Evans e fluxometria por laser-Doppler a fim de avaliar a influência sobre a fase exsudativa do processo inflamatório no tecido subcutâneo de ratos. Resultados confirmam que o sistema adesivo contendo QAMP teve um menor efeito sobre esta fase, o que é indicativo de uma adequada biocompatibilidade. Na tentativa de cercar a estabilidade do QAMP foram avaliadas a resistência de união dos sistemas adesivos em estudo em dentes humanos extraídos, por meio do ensaio de microtração imediatamente, após 6 e 12 meses de armazenamento dos espécimes em forma de palitos. O grau de conversão in situ por análise micro- Raman da interface adesiva estabelecida por esses sistemas e in vitro por espectroscopia de infravermelho com Transformada de Fourier também foram avaliados. Dados obtidos confirmaram que o sistema adesivo autocondicionante com QAMP produz uma resistência de união eficaz sob condições in vitro e estabilidade do grau de conversão in situ e in vitro. Na avaliação das propriedades mecânicas, dureza e módulo de elasticidade, foram preparados dentes restaurados com os adesivos em estudo, sendo submetidos à indução de lesões artificiais de cárie por meio de ciclagem de pH e de cárie microbiológica. Posteriormente, os dentes foram cortados e as fatias submetidas ao teste de nanoindentação na região da interface de união resinadentina, conduzindo a verificação da qualidade do substrato formado. Em geral, Clearfil® SE Bond contendo QAMP proporcionou melhores propriedades mecânicas da interface resina-dentina do que outros adesivos autocondicionantes comerciais após desafios cariogênicos. Esses dados contemplam o desenvolvimento de polímeros quaternários de amônio para fornecer benefícios adicionais para os sistemas adesivos dentais amplamente utilizados em Odontologia.

O presunto cozido é um dos embutidos cárneos mais consumidos no Brasil, sendo também um dos mais sensíveis à deterioração por bactérias ácido láticas (BAL) e a contaminação por Listeria monocytogenes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana da nisina (Nisaplin®) aplicada em presunto cozido, a fim de controlar L. monocytogenes e BAL. Para tanto, presuntos cozidos foram preparados e fatiados individualmente pelas empresas DuPont e Marsul. No ensaio 1, o presunto foi injetado com salmoura contendo 12,5 mg de nisina por kg (dosagem aprovada no Brasil para queijos fundidos). O potencial bioconservante da nisina foi avaliado contaminando artificialmente as fatias do presunto com um pool composto por 5 cepas de L. monocytogenes. Os resultados do ensaio 1 demonstraram que o tratamento com nisina não teve efeito significativo sobre a população de L. monocytogenes. Já as BAL foram inibidas por 2 dias. No ensaio 2, a adição da nisina na mesma dosagem foi feita no tambleamento, inibindo a população de L. monocytogenes por 6 dias e BAL por 10 dias Em vista dos resultados obtidos nos 2 primeiros ensaios foi determinada a concentração mínima bactericida (CMB) do pool e dos isolados de L. monocytogenes, a fim de verificar a sensibilidade das cepas individualmente e em conjunto e o efeito da nisina sem a matriz cárnea. Além disso, também foi avaliado o efeito sinérgico ou antagônico da salmoura sobre a ação bactericida da nisina. Pôde-se constatar que as diferentes cepas de L. monocytogenes demonstraram perfis de sensibilidade diferentes e que o pool de cepas foi menos sensível ao efeito da nisina. Os resultados obtidos conduziram a avaliação de dosagem maior de nisina no presunto cozido. No ensaio 3, 32 mg/kg de nisina foram adicionadas a salmoura do presunto cozido e testados contra o pool de L. monocytogenes e a cepa ATCC 7644, separadamente. Os resultados demonstraram que a nova dosagem de nisina inibiu significativamente a multiplicação do pool de L. monocytogenes e da cepa ATCC 7644, durante 10 dias, sugerindo ser uma barreira efetiva no controle de L. monocytogenes em presunto cozido. / Precooked ham is one of the most consumed meats in Brazil. It is also one of the most sensitive to spoilage by lactic acid bacteria (LAB) and contamination by Listeria monocytogenes. The objective of this study is to evaluate the antimicrobial activity of Nisin (Nisaplin®) when applied to precooked ham, in order to control the growth of L. monocytogenes and LAB. For the purposes of this study, the precooked ham prepared and sliced individually by the DuPont and Marsul company was used. For trial 1, brine containing 12.5 mg of nisin was injected per kg of ham (dosage approved in Brazil for processed cheese). The biopreservative potential of nisin was evaluated by artificially contaminating slices of control and test ham with a pool of 5 different strains of L. monocytogenes. The results of this first trial showed that treatment with this amount of nisin had no significant effect on the growth of the L. monocytogenes population. However, the LAB population was indeed inhibited by 2 days. In trial number 2, the addition of nisin to the same amount of precooked ham by tumbling inhibited the growth of the L. monocytogenes population by 6 days and of the LAB population by 10 days. In light of the results obtained in these first 2 trials, the minimum bactericidal concentration (MBC) pool and L. monocytogenes isolates were determined in order to verify the sensitivity of the strains individually and together as well as the effects of nisin without the meat matrix Additionally, the synergistic or antagonistic effects of brine on the antimicrobial properties of nisin were also evaluated. Results suggest that different strains of L. monocytogenes have different sensitivity profiles and that the pool of strains was less sensitive to the effects of the nisin. These results prompted an increase in the dosage of nisin added to the precooked ham in trial number 3. In this trial, 32mg/kg of nisin was added to the brine of the precooked ham and tested against the L. monocytogenes pool and ATCC 7644 strain, separately. Results demonstrated that this increase in amount of nisin significantly reduced the growth of the L. monocytogenes pool and of the ATCC strain for 10 days. This suggests that nisin can be an effective barrier against the growth of L. monocytogenes in precooked ham.

A Achyrocline satureioides (Lam.) D.C. – ASTERACEA – (“macela”) é uma planta nativa no estado do Rio Grande do Sul/BR, tradicionalmente considerada medicinal para distúrbios do sistema digestivo, tendo estudos evidenciado sua atividade antimicrobiana frente bactérias padrões internacionais. Com os objetivos de verificar a presença de marcador fitoquímico e avaliar a atividade antibacteriana do decocto sobre isolados em situações-problema sanitários em saúde e produção animal, amostra da planta foi colhida de vegetação espontânea e as inflorescências submetidas a cocção por 15 min, repondo-se o volume perdido na evaporação. A técnica de cromatografia analítica em camada delgada (CCD) detectou a presença de quercitina. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo método de diluição, técnica pour plate, em dois tempos de contato (1 h e 24 h), sem neutralizador químico (placa indicando inibição bacteriana) e com neutralizador (placa indicando inativação bacteriana). Inicialmente foram confrontados os padrões S. aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 11229 em 3 proporções planta : volume, tendo a de 7,5 g : 100 mL demonstrado maior atividade de inativação. Pelo mesmo método, técnica e proporção de maior atividade, confrontou-se o decocto com 26 isolados em leite de vacas com mastite: 14 S. aureus, 5 Streptococcus dysgalactiae, 1 Streptococcus uberis, 3 Corynebacterium sp., 1 E. coli, 1 Klebsiella sp. e 1 P. aeruginosa. Sobre as bactérias Gram positivas, com 1 h de contato a leitura das placas evidenciou que 70,83% delas estavam inibidas, tendo sido confirmado que 12,5% delas estavam inativadas; com 24 h de contato 87,5% estavam inibidas e 79,17% inativadas. Sobre as bactérias Gram negativas, em 100 % das vezes as ações de inibição e inativação ocorreram na leitura do tempo de contato de 24 h. Concluiu-se que o indicador fitoquímico flavonóide está presente também na forma decocto, e que esta solução apresenta atividade antimicrobiana tanto sobre amostras padronizadas quanto sobre isolados “de campo”. / The Achyrocline satureioides (Lam.) DC - Asteraceae - ("camomile") is a native plant in the state of Rio Grande do Sul / BR, traditionally considered medicinal for disorders of the digestive system, studies have demonstrated its antimicrobial activity against bacteria standards. Aiming to verify the presence of phytochemical marker and to evaluate the antibacterial activity of the decoction on isolated situations-health problem in animal health and production, the plant sample was collected from weeds and inflorescences subjected to cooking for 15 minutes, replacing them the volume lost to evaporation. The technique of analytical thin layer chromatography (TLC) detected the presence of quercetin. Antimicrobial activity was evaluated by the dilution pour plate technique in two contact times (1 h and 24 h) without neutralizing chemical (sign indicating bacterial inhibition) and neutralizing (sign indicating bacterial inactivation). Initially the standards were confronted S. aureus ATCC 25923 and E. coli ATCC 11229 in 3 proportions plant: volume, with 7.5 g: 100 mL demonstrated higher activity of inactivation. By the same method, technique and proportion of higher activity, confronted the decoction with 26 isolates in milk from cows with mastitis: 14 S. aureus, 5 Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis 1, 3 Corynebacterium sp., 1 E. coli, 1 Klebsiella sp. and 1 P. aeruginosa. On the Gram positive bacteria, with 1 h contact reading of the plates showed that 70.83% were inhibited, it was confirmed that 12.5% were inactivated, with 24 h of contact 87.5% were inhibited and 79,17% inactivated. On the Gram negative bacteria, in 100% of the time the actions of inhibition and inactivation occurred in reading the contact time of 24 h. It was concluded that the flavonoid phytochemical indicator is also present in the decoction form, and that this solution has antimicrobial activity on both standard sampling as on isolated "field".

Avaliou-se a atividade antibacteriana e a compatibilidade tecidual dos seguintes materiais obturadores de canais radiculares de dentes decíduos: cimento de óxido de zinco e eugenol, pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento EndoREZTM. A atividade antibacteriana foi avaliada in vitro, por meio do teste de difusão em ágar, frente a 5 microrganismos indicadores (Kocuria rizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli e Staphylococcus aureus), sendo os resultados submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao pósteste de Tukey. A compatibilidade tecidual foi avaliada in vivo, por implantação subcutânea, em camundongos isogênicos BALB/c, de tubos de polietileno contendo os materiais obturadores. Foram efetuadas análises descritiva e semi-quantitativa do fibrosamento e do infiltrado inflamatório e quantitativa da área e maior espessura do tecido reacional granulomatoso. Os resultados foram submetidos à análise estatística por meio dos testes de Kruskal-Wallis, análise de variância (ANOVA) e pós-teste de Tukey. Para todos os testes o nível de significância foi de 5%. Com relação à atividade antibacteriana, evidenciaram-se diferenças estatisticamente significantes (p<0,0001) entre os halos de inibição ocasionados pelos diferentes materiais, para todos os microrganismos avaliados. A Kocuria rizophila foi inibida mais eficazmente pelo cimento de óxido de zinco e eugenol (p<0,05), enquanto que o Enterococcus faecalis foi inibido mais eficazmente pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco (p<0,05). O Streptococcus mutans foi inibido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento de óxido de zinco e eugenol na mesma intensidade (p>0,05). A Escherichia coli foi inibida mais eficazmente pelo cimento de óxido de zinco e eugenol, seguido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco e pelo cimento Sealapex® (p<0,05). O Staphylococcus aureus foi inibido pela pasta Calen® espessada com óxido de zinco e pelo cimento de óxido de zinco e eugenol na mesma intensidade (p>0,05), e menos intensamente pelo cimento Sealapex® (p<0,05). O cimento EndoREZTM apresentou atividade antibacteriana apenas frente a Kocuria rizophila e ao Staphylococcus aureus. Com relação à compatibilidade tecidual, não observou-se diferença entre os materiais, com relação ao fibrosamento e à maior espessura do tecido reacional granulomatoso (p>0,05). A pasta Calen® espessada com óxido de zinco foi o material que apresentou infiltrado inflamatório de menor intensidade (p<0,05). A área do tecido reacional granulomatoso foi menor para a pasta Calen® espessada com óxido de zinco e para o cimento Sealapex® (p>0,05) em comparação aos cimentos EndoREZTM e óxido de zinco e eugenol (p<0,05). Com base nos resultados obtidos nas metodologias empregadas pôde-se concluir que: 1- A atividade antibacteriana, in vitro, em ordem decrescente foi: cimento de óxido de zinco e eugenol, pasta Calen® espessada com óxido de zinco, cimento Sealapex® e cimento EndoREZTM; 2- A pasta Calen® espessada com óxido de zinco foi o material que apresentou a melhor compatibilidade tecidual, seguido pelos cimentos Sealapex® e de óxido de zinco e eugenol. O cimento EndoREZTM apresentou resposta tecidual insatisfatória. / This study evaluated the antibacterial activity and tissue compatibility of the following root canal filling materials for primary teeth: zinc oxide and eugenol cement, Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and EndoREZTM sealer. The antibacterial activity of these materials against 5 indicator microorganisms (Kocuria rizophila, Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Escherichia coli and Staphylococcus aureus) was evaluated in vitro using the agar diffusion test. The results were analyzed statistically by the analysis of variance (ANOVA) and Tukeys post-hoc test. Tissue compatibility was evaluated in vivo by the implantation of polyethylene tubes containing the root canal filling materials in the subcutaneous tissue of isogenic BALB/c mice. Descriptive and semi-quantitative analyses of the rate of fibrosis and the inflammatory infiltrate were performed, as well as a quantitative analysis of the area and the greater thickness of the granulomatous reactionary tissue. The results were analyzed statistically by the Kruskal-Wallis test, ANOVA and Tukeys post-hoc test. For all tests, the significance level was set at 5%. Regarding the antibacterial activity, there were statistically significant differences (p<0.0001) among the zones of inhibition of microbial growth produced by the different materials for all target microorganisms. Kocuria rizophila was inhibited more effectively by the zinc oxide and eugenol cement (p<0.05), while Enterococcus faecalis was inhibited more effectively by the Calen® paste thickened with zinc oxide (p<0.05). Streptococcus mutans was inhibited by the Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and zinc oxide and eugenol cement in the same intensity (p>0.05). Escherichia coli was inhibited more effectively by the zinc oxide and eugenol cement, followed by the Calen® paste thickened with zinc oxide and Sealapex® sealer (p<0.05). Staphylococcus aureus was inhibited by the Calen® paste thickened with zinc oxide and by the zinc oxide and eugenol cement in the same intensity (p>0.05), and was less effectively inhibited by Sealapex® sealer (p<0.05). EndoREZTM sealer presented antibacterial activity only against Kocuria rizophila and Staphylococcus aureus. Regarding tissue compatibility, there was no statistically significant difference among the materials with respect to the rate of fibrosis or the greater thickness of the granulomatous reactionary tissue (p>0.05). The Calen® paste thickened with zinc oxide produced the inflammatory infiltrate with lowest intensity of all materials (p<0.05). The area of the granulomatous reactionary tissue was smaller for the Calen® paste thickened with zinc oxide and Sealapex® sealer (p>0.05) compared to EndoREZTM sealer and the zinc oxide and eugenol cement (p<0.05). Based on the results obtained with the methodologies employed in the present study, it may be concluded that: 1- The in vitro antibacterial activity in a decreasing order was: zinc oxide and eugenol cement, Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer and EndoREZTM sealer; 2- The in vivo tissue compatibility in a decreasing order was: Calen® paste thickened with zinc oxide, Sealapex® sealer, zinc oxide and eugenol cement and EndoREZTM sealer. The Calen® paste thickened with zinc oxide permitted the occurrence of an adequate tissue response, while Sealapex® sealer and the zinc oxide and eugenol cement produced a fair tissue response. EndoREZTM sealer did not induce tissue repair.

Annona hypoglauca Mart. foi coletada em área inundada da Floresta Amazônica, próximo à Manaus (Brasil). Os alcalóides foram obtidos do extrato bruto do caule por partição ácido-base, e a partir do resíduo dessa extração foi realizada a partição com solventes de diferentes polaridades, originando as frações livres de alcalóides. A partir da análise de CG-EM dos alcalóides totais foi possível caracterizar sete alcalóides aporfínicos (actinodafinina, anonaina, glaucina, isoboldina, isodomesticina, nornuciferina e roemerina) e possivelmente duas protoberberinas (esculerina e caseadina). Os alcalóides totais foram fracionados em coluna cromatográfica e posteriormente purificados em placa cromatográfica preparativa permitindo o isolamento de dois alcalóides aporfínicos: actinodafinina e isoboldina. As estruturas desses produtos naturais foram definidos com base em espectros de dados, incluindo 1H RMN, 13C RMN, 13C DEPT e CG-EM. Pela primeira vez a ocorrência da actinodafinina esta sendo reportada em uma espécies de Annona. O extrato bruto, as frações livres de alcalóides, os alcalóides totais e suas frações foram submetidos a avaliação da atividade antibacteriana por microdiluição e atividade citotóxica in vitro frente a células de tumores humanos. Para todos os extratos testados, somente os alcalóides totais e suas frações apresentaram atividade frente a bactérias Gram +. No ensaio de citotoxicidade com linhagens de células de tumores, o extrato bruto foi capaz de inibir o crescimento de todas as linhagens celulares testadas, apresentando efeito letal para a linhagem de Câncer de Cólon (KM-12), enquanto as frações livres de alcalóides demonstraram baixa atividade. Por outro lado, as frações livres de alcalóides apresentaram atividade mais pronunciada para a linhagem de Câncer de Pulmão (NCIH-460) do que os alcalóides. Assim, a atividade citotóxica encontrada no extrato bruto é decorrente do sinergismo ou complementação entre os componentes das frações alcaloídicas e não alcaloídicas, isto é, nenhuma das frações isoladamente é responsável pela atividade observada no extrato bruto. / Annona hypoglauca Mart. was collected in the flooded areas of the Amazonian Forest near Manaus (Brazil). The alkaloids were obtained from the stems crude extract by acid-base partitioning and the remaining alkaloid-free extract was partitioned with organic solvents of different polarity. The GC/MS analysis of the total alkaloids allowed the identification of seven aporphine alkaloids (actinophanine, anonaine, glaucine, isoboldine, isodomesticine, nornuciferine and roemerine) and possibly two proberberine alkaloids (scoulerine and caseadine). The total alkaloids were fractionated by column chromatography and further purified by preparative thin-layer chromatography allowing the isolation of two aporphine alkaloids: actinodaphnine and isoboldine. The structures of these natural products were defined based on their spectral data, including 1H NMR, 13C NMR, 13C DEPT and CG/MS. This is the first report for the occurrence of actinodaphnine in Annona species. The crude extract, alkaloid-free organic extracts, total alkaloids and its fractions were tested for their antibacterial activity by the microdilution broth assay and cytotoxic activity against in vitro tissue culture cells of human. From all the extracts assayed, only the total alkaloids and their fractions showed a relevant antibacterial activity against Gram positive organisms. In the cytotoxicity assay with human tumor cell lines, the crude extract was able to inhibit the growth of all cell lines tested, with a lethal effect for the colon cancer (KM-12) cell line. The evaluation of this activity with the total alkaloid and alkaloid-free fractions indicated selectivity for the different cellular lines. The alkaloid fraction presented high growth inhibition for the colon cancer cell line (KM-12), while the alkaloid-free fractions displayed lower activity. On the other hand, the alkaloid free fractions showed a higher activity for the lung cancer cell line (NCIH-460) than the total alkaloids. Thus, the cytotoxic activity found in the crude extract is the result of the synergism or complementary activity among the components of the alkaloid and alkaloid-free fractions, e.g, none of the fractions separately is responsible for the activity observed in the crude extract.

In this work, six triazene compounds are assayed to DNA cleavage activity. The same six triazenes and the drug Asercit® (dacarbazine) are assayed to antibacterial activity and toxicity to Artemia salina Leach.: 1,3-bis-(phenyl)triazene-1-N-hidroxide (T1), 1-(4-bromophenyl)-3-(4-nitrophenyl)triazene, (T2), 1-(4-azophenyl)-3-(4-nitrophenyl)triazene (T3) ,1,3-bis-(4-azophenyl-triazene) (T4), 1,3-bis-(2-bromophenyl)triazene (T5), 1-(4-carboxyphenyl)-3-(4-azophenyl)triazene (T6) and 5-(3,3-dimethyl-1-triazenyl)imidazol-4-carboxamide (dacarbazine, Asercit®). Triazene T1 cleaves approximately 50 % of plasmid DNA (pBSKII and pUC18, 3.75 mM, 50ºC/24 hours, Tris.HCl buffer 200 mM pH 8.0). Hydroxyl radical scavengers (glycerol 0.1 and 1.0 %, DMSO 0.04 M and tiourea 0.04 M) and argon atmosphere not interfere in DNA cleavage by T1. The Kb of T1 determinated by spectrofotometric titrations with DNA are 4.50 x 101 M-1 (pH 6,5), 1.00 x 102 M-1 (pH 7,0) e 2.33 x 102 M-1 (pH 8,0). T1, T6 and Asercit® are the more actives in antibacterial activity with CIM/CBM of even 16/64 μg/ml. LC50 more lower determinated by toxicity to A. salina are to T1 (0.081 ± 0.008 μg/ml), T5 (0.076 ± 0.011 μg/ml) and T6 (0.077 ± 0.007 μg/ml). Theses studies show the wide biological activity conferred by triazene compounds. / Neste estudo, seis compostos triazenos são avaliados quanto à atividade de clivagem do DNA. Os mesmos seis triazenos e o medicamento Asercit® (dacarbazina) são avaliados quanto à atividade antibacteriana e toxicidade frente à Artemia salina Leach.: 1,3-bis-(fenil)triazeno-1-N-hidróxido (T1), 1-(4-bromofenil)-3- (4-nitrofenil)triazeno (T2), 1-(4-azofenil)-3-(4-nitrofenil)triazeno (T3), 1,3-bis-(4- azofenil)triazeno (T4), 1,3-bis-(2-bromofenil)triazeno (T5), 1-(4-carbóxifenil)-3-(4- azofenil)triazeno (T6) e 5-(3,3-dimetil-1-triazenil)imidazol-4-carboxamida (dacarbazina, Asercit®). O triazeno T1 cliva aproximadamente 50 % do DNA plasmidial (pBSKII e pUC18, a 3,75 mM, 50 ºC/24 horas, tampão Tris.HCl 200 mM pH 8,0). Seqüestradores de radicais hidroxil (glicerol 0,1 e 1 %, DMSO 0,04 M e tiouréia 0,04 M) e atmosfera de argônio não interferem na clivagem do DNA por T1. Os Kb de T1 determinados por titulação espectrofotométrica com DNA são 4,50 x 101 M-1 (pH 6,5), 1,00 x 102 M-1 (pH 7,0) e 2,33 x 102 M-1 (pH 8,0). T1, T6 e o Asercit® são os mais ativos na atividade antibacteriana com CIM/CBM de até 16/64 μg/ml. As LC50 mais baixas determinadas pela toxicidade para A. salina são para T1 (0,081 ± 0,008 μg/ml), T5 (0,076 ± 0,011 μg/ml) e T6 (0,077 ± 0,007 μg/ml). Esses estudos mostram a ampla atividade biológica conferida pelos compostos triazenos.