Orientador: Lin Chau Ming / Banca: Maria Christina de Mello Amorozo / Banca: Valdely Ferreira Kinupp / Banca: Izabel de Carvalho / Banca: Filipe Pereira Giardini Bonfim / Resumo: Mais de 3,3 milhões de pessoas no mundo estão expostas a malária. Os medicamentos utilizados no combate à doença já apresentam sinais de resistência. No Brasil 99% dos casos acontecem na Amazônia legal. É uma doença endêmica da região do Alto rio Negro, considerada uma região cultural sui generis, onde mais de 90% dos habitantes são indígenas, falantes de 23 línguas, e a floresta é preservada e pouco conhecida pela ciência acadêmica. É o primeiro trabalho etnobotânico sobre plantas antimaláricas na região. As negociações para obtenção de autorização de pesquisa foram intensas entre os anos de 2010 e 2013, a pesquisa de campo foi realizada entre setembro de 2011 e julho de 2012 e setembro a novembro de 2013 em cinco comunidades indígenas. Foram registradas 46 espécies utilizadas no tratamento da malária pertencentes a 24 famílias botânicas, a maioria nativa do domínio fitogeográfico da Amazônia. As percepções culturais acerca da doença foram registradas, assim como o nome de algumas plantas nas principais línguas da região e foi feito um estudo de fitonímia da Língua Geral Amazônica. Das 46 espécies 14 possuem estudos científicos comprovando sua atividade antimalárica e 25 podem ser consideradas interessantes para estudos científicos futuros. Apenas cinco espécies apresentaram consenso de uso. O grande número de espécies nativas utilizadas, os fatores históricos e as percepções culturais dos participantes a cerca da doença demonstram que há conhecimento local e sua aplicação, assim com a necessidade de proteção ambiental e cultural da área, e a urgência de programas que promovam a cultura medicinal local e auxiliem o entendimento intercultural / Abstract: More than 3.3 million people worldwide are exposed to malaria. The drugs used in combating the disease already show signs of resistance. In Brazil 99% of cases occur in Legal Amazônia. It is an endemic disease in the Upper Negro River considered a sui generis cultural region, where more than 90 % of inhabitants are native speakers of 23 languages, and the forest is preserved and unknown to science. It is the first ethnobotanical work on antimalarial plants in the region. Negotiations for obtaining research permission were intense between 2010 and 2013. And the fieldwork was carried out between September 2011 and July 2012 and September and November 2013, in five indigenous communities . 46 species are used to treat malaria were recorded belonging to 24 botanical families, most native of the Amazon phytogeographical area. Cultural perceptions of the disease were recorded, as well as the name of some plants in the two major languages of the region and a study of fitonímia in Língua Geral Amazônica was made. 14 of the 46 species have scientific studies proving its antimalarial activity and 25 can be considered interesting for future scientific studies. Only five species showed consensus in use. The large number of native species used and cultural perceptions of the participants about the disease demonstrate that there is local knowledge and its application as the need for environmental and cultural protection of these area, and the urgency of programs that promote the local medical culture and assist intercultural understanding. / Doutor

Malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium que causa um milhão de mortes anualmente. Quase 3 bilhões de pessoas vivem em áreas tropicais de risco de infecção com uma das 5 espécies evidenciando um problema mundial carente de solução imediata. Esse parasita apresenta um potencial para o rápido desenvolvimento de resistências contra os fármacos utilizados em seu tratamento, por isso uma das soluções preconizadas pela Organização Mundial de Saúde é o desenvolvimento de vacinas eficazes para seu controle.O objetivo desse trabalho foca-se no aperfeiçoamento de uma metodologia mais efetiva para a formulação de vacinas contra malária. Inicialmente no modelo roedor, foi utilizado o método de carregamento em nanopartículas lipossomais , com proteínas oriundas de merozoítos do gênero Plasmodium. Além da avaliação do potencial vacinal das nanopartículas (sobrevida/morbidade), avaliamos o efeito da vacina contra toxinas (por exemplo, domínios GPI). Concluímos de maneira concisa que proteolipossomos gerados com proteínas GPI ancoradas do gênero Plasmodium possuem efeitos notáveis em relação a controle de crescimento parasitológico, mostrando-se efetivo também em desafios de letalidade in vivo. No que diz respeito a aspectos que afetam humanos, os soros gerados contra proteínas do parasita são capazes de diminuir interleucinas relacionadas com sintomas graves e parecem ter grandes efeitos antiparasitários que se correlacionam diretamente com o perfil genético do hospedeiro imunizado em ensaios in vitro. / Malaria is a tropical disease caused by species of the protozoan Plasmodium and around one million people die of the disease each year, while 3 billion individuals live at risk to acquire infection with one of the five species known to infect humans. Due to the parasite\'s looming resistance against most of the antimalarial compounds used in therapy, the WHO preconizes the development of effective vaccine as an important goal. The purpose of this work was to evaluate the potential of a new method of vaccine formulation against malaria. Initially tested in the rodent model, we loaded liposomal nanostructures with merozoite-derived GPI-anchored proteins. We then monitored parameters such as survival and morbidity after challenge and measured the effect against parasite derived toxines. We observed significant effects in terms of control of parasitemy and in one model complete survival of mice. We also detected the generation of antiGPI antibodies which showed to be functional in decreasing TNF-<font face=\"Symbol\">a production in an in vitro model, however, we detected that this function was dependent on the genetic background of the antibody producing immunized animal.

Malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium que causa um milhão de mortes anualmente. Quase 3 bilhões de pessoas vivem em áreas tropicais de risco de infecção com uma das 5 espécies evidenciando um problema mundial carente de solução imediata. Esse parasita apresenta um potencial para o rápido desenvolvimento de resistências contra os fármacos utilizados em seu tratamento, por isso uma das soluções preconizadas pela Organização Mundial de Saúde é o desenvolvimento de vacinas eficazes para seu controle.O objetivo desse trabalho foca-se no aperfeiçoamento de uma metodologia mais efetiva para a formulação de vacinas contra malária. Inicialmente no modelo roedor, foi utilizado o método de carregamento em nanopartículas lipossomais , com proteínas oriundas de merozoítos do gênero Plasmodium. Além da avaliação do potencial vacinal das nanopartículas (sobrevida/morbidade), avaliamos o efeito da vacina contra toxinas (por exemplo, domínios GPI). Concluímos de maneira concisa que proteolipossomos gerados com proteínas GPI ancoradas do gênero Plasmodium possuem efeitos notáveis em relação a controle de crescimento parasitológico, mostrando-se efetivo também em desafios de letalidade in vivo. No que diz respeito a aspectos que afetam humanos, os soros gerados contra proteínas do parasita são capazes de diminuir interleucinas relacionadas com sintomas graves e parecem ter grandes efeitos antiparasitários que se correlacionam diretamente com o perfil genético do hospedeiro imunizado em ensaios in vitro. / Malaria is a tropical disease caused by species of the protozoan Plasmodium and around one million people die of the disease each year, while 3 billion individuals live at risk to acquire infection with one of the five species known to infect humans. Due to the parasite\'s looming resistance against most of the antimalarial compounds used in therapy, the WHO preconizes the development of effective vaccine as an important goal. The purpose of this work was to evaluate the potential of a new method of vaccine formulation against malaria. Initially tested in the rodent model, we loaded liposomal nanostructures with merozoite-derived GPI-anchored proteins. We then monitored parameters such as survival and morbidity after challenge and measured the effect against parasite derived toxines. We observed significant effects in terms of control of parasitemy and in one model complete survival of mice. We also detected the generation of antiGPI antibodies which showed to be functional in decreasing TNF-<font face=\"Symbol\">a production in an in vitro model, however, we detected that this function was dependent on the genetic background of the antibody producing immunized animal.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) renata_pedro_ipec_mest_2011.pdf: 1563772 bytes, checksum: 501b250be544969fc58268ae09a19bd8 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A malária é considerada um problema mundial amplamente distribuído pelas regiões tropicais e subtropicais e uma doença de evolução grave e potencialmente fatal quando não diagnosticada rapidamente e tratada corretamente. O objetivo deste estudo foi descrever o perfil de resposta ao tratamento farmacológico da malária em pacientes atendidos no IPEC/Fiocruz-RJ entre os anos de 2005 e 2010. Foram incluídos 88 pacientes provenientes da região Amazônica, África e Ásia. Desse total, sete pacientes foram tratados duas vezes e três foram tratados três vezes no IPEC. Com isso, foram realizados 101 tratamentos antimaláricos com dez diferentes esquemas terapêuticos. As espécies de plasmódio diagnosticadas foram Plasmodium vivax (65,0%), P. falciparum (23,0%), P.falciparum + P. vivax (9,0%), P. malariae (2,0%) e P. ovale (1,0%). A associação de cloroquina e primaquina foi utilizada em 94,0% das infecções por P. vivax e em 78,3% dos tratamentos para as infecções por P. falciparum foram utilizados os derivados de artemisinina associados a outros antimaláricos. Em relação à resposta terapêutica, a cura clínica e a cura parasitológica ocorreram em um período inferior a quatro dias (D3) após o início tratamento em 91,0% e 84,0% dos casos de P. vivax e P. falciparum, respectivamente A proporção de pacientes com sucesso terapêutico demonstra que pelo menos 52% dos tratamentos com os esquizonticidas sanguíneos foram efetivos. Foram identificadas duas falhas parasitológicas tardias: em um paciente com malária mista tratado com mefloquina e em um caso de malária por P. vivax tratado com cloroquina e primaquina. As 16 recaídas de malária por P. vivax observadas ocorreram em um tempo mediano de 57 dias após o início do tratamento. A análise de sobrevida demonstrou a associação de doses de primaquina sem ajuste por peso e a ocorrência de recaídas (p<0,02). Os pacientes utilizaram outros medicamentos concomitantemente aos antimaláricos em 39 tratamentos (38,6%). Esses foram predominantemente antiácidos e analgésicos. Registrou-se 53 eventos adversos (EAM) aos antimaláricos que foram considerados como 50 reações adversas a medicamentos (RAM) e três erros de medicação Houve predominância de distúrbios do sistema gastrointestinal. Foram em sua maioria de gravidade leve e considerados de causalidade possível segundo o algoritmo de Naranjo. O erro de administração de hidratação venosa não interferiu no tratamento antimalárico; diferente dos outros dois erros de prescrição observados. Em um, a monoterapia com cloroquina para malária por P. vivax ocasionou a recaída da doença; no outro, a instituição de terapia via oral para um paciente com sinais clínicos preditivos de gravidade de malária por P. falciparum levou à piora no quadro clínico do paciente revertida após instituição do tratamento venoso. A maioria dos pacientes entrevistados (88,5%) apresentou comportamento de adesão considerado alto de acordo com o questionário de Morisky. Após a implantação do acompanhamento farmacoterapêutico do paciente com malária, em 2009, houve um aumento das informações sobre os tempos de cura clínica e parasitológica e EAM e as perdas de acompanhamento foram reduzidas. Concluiu-se que a maioria dos tratamentos antimaláricos foi efetiva; as recaídas por P.vivax estão associadas à administração de doses subterapêuticas de primaquina; e houve uma melhoria na assistência prestada ao paciente com malária após implantação da farmacovigilância / Malaria is considered a world problem widely distributed in the tropical and subtropical regions which quickly becomes life - threatening if not early diagnosed and promptly treated. The aim of this study was to describe the pharma cological treatment profile for Malaria in patients followed at the Acute Febrile Disease Outpatient Clinics of IPEC, Fiocruz - RJ , from J anuary , 2005 to December , 2010 in a coh ort of 88 individuals that acquired malaria infection at the Amazon region, Afric a and Asia. Ten of them were treated at least twice resulting in 101 malaria treatments with ten different types of therapeutic regimens. The species diagnosed were Plasmodium vivax (65 .0 %), P. falciparum (23 .0 %), P.falciparum + P. vivax (9 .0 %), P. malaria e (2 .0 %) and P. ovale (1 .0 %). Association of chloroquine and primaquine was prescribed to 94.0% of P. vivax infections and artemisinin derivates associated with other antimalarials were used in 78.3% of P. falciparum treatments. Clinical and parasitologica l cure occurred in 91.0% and 84.0% of P. vivax and P. falciparum infections, respectively, in less than three days after the beginning of treatment. Most patients responded well to antimalarials and blood schizonticidal drugs’ effectiveness was observed in at least 52.0% of these treatments. Two late parasitological failures were identified: one case of mixed infection ( P. falciparum and P. vivax ) treated with mefloquine, and another case of vivax malaria treated with chloroquine plus primaquine. Sixteen re lapses occurred between days 36 a nd 369 (median = 57 day s) after vivax malaria treatment. Survival analyses demonstrated association between primaquine unadjusted doses and relapses of vivax malaria (p<0.02). In 39 treatments (38 .6%), patients used also med ications other than antimalarials, mostly antacids and analgesics. We observed 53 adverse events to antimalarials considered as 50 adverse drug reactions and three medication errors. The most commonly reported adverse reactions were gastrointestinal disord ers. Most adverse reactions were mild and considered possible in Naranjo algorithm. An error in the administration of venous hydration bruised the patient’s arm but didn’t interfere clinically with treatment response. On the other hand, prescription errors were observed. In one patient, chloroquine monotherapy for vivax malaria was prescribed resulting in relapse. Another patient with predictive signs of P. falciparum malaria severity presented clinical worsening with the introduction of oral treatment whic h reverted to normal after venous treatment. The majority of patients (88.5%) had a high adherence behavior according to Morisky’s questionnaire. Since 2009, when pharmacotherapy follow - up started, information related to adverse event, clinical and parasit ological cures increased and loss to follow - up after malaria treatment reduced. We concluded that most antimalarial treatments were effective. Cases of relapses showed association between underdoses of primaquine and P. vivax malaria relapse. And improveme nt in malaria patient’s care was achieved by surveillance activities, including pharmacovigilance

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-16T13:00:49Z No. of bitstreams: 1 2016_FernandaSoaresAurelioPatatt.pdf: 857546 bytes, checksum: 809d702d837b83ddfc5b50880b373b6e (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-02-23T14:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_FernandaSoaresAurelioPatatt.pdf: 857546 bytes, checksum: 809d702d837b83ddfc5b50880b373b6e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-23T14:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_FernandaSoaresAurelioPatatt.pdf: 857546 bytes, checksum: 809d702d837b83ddfc5b50880b373b6e (MD5) / Introdução: Estudos comprovam os efeitos ototóxicos dos antimaláricos em pessoas que fazem uso destes medicamentos, porém pouco se sabe sobre a toxicidade destes fármacos no sistema auditivo de neonatos quando ingeridos pelas mães no período gestacional. Objetivo: Verificar a incidência de perda auditiva em neonatos de mães tratadas para malária durante a gestação. Métodos: Trata-se de um estudo quantitativo, de coorte retrospectivo, desenvolvido no Hospital de Base Dr. Ary Pinheiro e na clínica de Avaliação e Reabilitação da Audição - Limiar, ambos em Porto Velho, Rondônia. Compuseram a amostra, 527 recém-nascidos divididos em dois grupos: grupo exposto e grupo não exposto. O primeiro grupo foi composto por 32 neonatos de mães que fizeram uso de antimalárico no período gestacional, porém sem qualquer outro indicador de risco para a deficiência auditiva associado e o segundo, por 495 recém-nascidos sem qualquer indicador de risco para a deficiência auditiva na infância. A coleta de dados ocorreu de setembro de 2014 a dezembro de 2015. Para a coleta realizou-se entrevista com as genitoras e/ou responsáveis pelo recém-nascido, investigação nos prontuários dos neonatos e das genitoras, bem como no cartão de vacina do recém-nascido e no cartão de gestante, banco de dados da triagem auditiva neonatal do hospital supracitado e no banco de dados da clínica Limiar. Os dados compilados foram tabulados e submetidos aos testes estatísticos ANOVA e Igualdade de Duas Proporções, ambos com nível de significância de 5% (p≤0,05). Além disso, foi calculado o risco relativo dos recémnascidos de ambos os grupos falharem nas emissões otoacústicas transientes da orelha esquerda. Resultados: Todos os neonatos do grupo exposto, avaliados por meio do registro das emissões otoacústicas transientes associado à realização do Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico Automático, passaram na triagem auditiva neonatal logo no primeiro exame. No entanto, dos 495 recém-nascidos que compõem o grupo não exposto, 30 apresentaram falha e foram retestados. Destes, apenas um continuou apresentando falha bilateral, sendo encaminhado para avaliação diagnóstica, na qual foram evidenciados resultados dentro da normalidade. Nos neonatos do grupo exposto, a infecção pelo Plasmodium vivax foi a mais frequente, mostrando distribuição semelhante entre os trimestres gestacionais, sendo a cloroquina o antimalárico mais utilizado e o tratamento medicamentoso realizado mais frequentemente no terceiro trimestre gestacional, porém tais achados não mostraram influência nos achados audiológicos dos neonatos estudados. Conclusão: O presente estudo não identificou casos de perda auditiva nos neonatos de mães que fizeram uso de antimaláricos (Cloroquina, Coartem®, Quinina e Primaquina) na gestação. / Background: Studies have demonstrated the ototoxic effects of antimalarials on users, but little is known regarding the toxicity of these drugs in the newborn auditory system when administered to the mother during pregnancy. Objective: To determine the incidence of hearing loss in neonates born to mothers treated for malaria during pregnancy. Methods: This quantitative retrospective cohort study was conducted at Hospital de Base Dr. Ary Pinheiro and at Limiar, a private clinic for Hearing Assessment and Rehabilitation. Both institutions are located in Porto Velho, state of Rondonia, northern Brazil. The sample consisted of 527 neonates divided into two groups: exposed and unexposed groups. The exposed group consisted of 32 neonates born to mothers who received antimalarial treatment during pregnancy, but without other risk indicators for associated hearing impairment. The unexposed group consisted of 495 neonates without risk indicators for childhood hearing impairment. Data were collected from September 2014 to December 2015 by interviewing the infant’s mother and/or legal guardian and by reviewing infants’ and mothers’ medical records as well as in the infant’s vaccination card, the mother’s health card, the newborn hearing screening databases of the above-mentioned institutions. Data were statistically analyzed by analysis of variance (ANOVA) and testing the equality of two proportions. For both tests, the level of significance was set 5% (p≥0.05). For both groups, the relative risk of infants failing the transient evoked otoacoustic emission screening of the left ear was also calculated. Results: All neonates in the exposed group, evaluated by transient evoked otoacoustic emission recording combined with and automated brainstem auditory evoked potential testing, passed the first newborn hearing screening test. Of 495 neonates in the unexposed group, 30 failed and were retested. Of these, only one continued to show bilateral failure and was referred for diagnostic assessment, whose results were within the normal range. In the exposed group, infection with Plasmodium vivax was the most common cause of malaria, with similar distribution across pregnancy trimesters. Chloroquine was the most frequently used drug, and antimalarial treatment was most commonly performed in the third trimester. However, these findings had no influence on the audiological findings of the neonates under study. Conclusion: The present study detected no cases of hearing loss in neonates born to mothers who received antimalarials (chloroquine, Coartem®, quinine, and primaquine) during pregnancy.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-03T18:34:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Jakeline VERSÃO Final .pdf: 3132042 bytes, checksum: 7e59d79ba4910a95abaeddc32c167c64 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-03T18:34:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Jakeline VERSÃO Final .pdf: 3132042 bytes, checksum: 7e59d79ba4910a95abaeddc32c167c64 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-03T18:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Jakeline VERSÃO Final .pdf: 3132042 bytes, checksum: 7e59d79ba4910a95abaeddc32c167c64 (MD5) Previous issue date: 2017-01-23 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The emergence of Plasmodium strains resistant to antimalarials commonly used has motivated the search for new antimalarial drugs. Natural products isolated from Amazonian plants and their semi-synthetic derivatives have been shown to be promising sources of antimalarial compounds. Several plants of the genus Xylopia (family Annonaceae) are used by folk medicine for the treatment of malaria and its symptoms. The genus presents a great variety of chemical compounds with important pharmacological properties, emphasizing alkaloids, terpenes and acetogenins. The present work has the objective of discovering new antimalarials through analysis of the chemical composition and evaluation of the antimalarial activity of Xylopia amazonica RE Fries, starting from previous studies carried out by the Laboratory of Active Principles of the Amazon (LAPAAM) Antimalarial activity in crude extracts. For the accomplishment of the work, fine branches and leaves of X. amazonica were collected in the Adolpho Ducke Forest Reserve. The thin branches and leaves were taken to LAPAAM / INPA, where they were weighed, dried and ground in a knife mill. Afterwards, extractions were carried out by means of maceration using ultrasound and solvents in order of increasing polarity, in addition to acid-base extraction to obtain extracts rich in alkaloids. The extracts obtained from in vitro antimalarial tests performed at the Malaria and Dengue Laboratory of the National Research Institute of the Amazon were submitted. Finally, chromatographic techniques were applied to the extracts considered active for the isolation and / or purification of fractions and / or substances and spectroscopic techniques for the identification or structural elucidation of the active substances. Using high performance liquid chromatography (HPLC) two active substances (nornantenin and anonaine) were isolated against chloroquine resistant P. falciparum K1 strains with IC50 of 5.23 g / mL and 4.8 g / mL, respectively. / O surgimento de cepas de Plasmodium resistentes aos antimaláricos habitualmente utilizados tem motivado a busca por novas drogas antimaláricas. Os produtos naturais isolados de plantas amazônicas e seus derivados semissintéticos têm se mostrado fontes promissoras de compostos antimaláricos. Diversas plantas do gênero Xylopia (família Annonaceae) são utilizadas pela medicina popular para o tratamento de malária e seus sintomas. O gênero apresenta uma grande variedade de compostos químicos com importantes propriedades farmacológicas, destacando-se os alcaloides, terpenos e as acetogeninas. O presente trabalho tem como objetivo a descoberta de novos antimaláricos através de análise da composição química e avaliação da atividade antimalárica de Xylopia amazonica R.E Fries, tendo como ponto de partida estudos prévios realizados pelo grupo de pesquisa Laboratório de Princípios Ativos da Amazônia (LAPAAM) no Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA) evidenciando atividade antimalárica em extratos brutos. Para a realização do trabalho foram coletados galhos finos e folhas de X. amazonica na Reserva Florestal Adolpho Ducke. Os materiais vegetais foram levados ao LAPAAM/INPA, aonde foram pesados, secos e moídos. Foram realizadas extrações por meio de maceração com uso de ultrassom e solventes em ordem de polaridade crescente, além de extração ácido-base para a obtenção de extratos ricos em alcaloides. Submeteram-se os extratos obtidos a testes antimaláricos in vitro realizados no Laboratório de Malária e Dengue do INPA. Por fim, aplicaram-se técnicas cromatográficas aos extratos considerados ativos para o isolamento e/ou purificação de frações e/ou substâncias e técnicas espectroscópicas para a identificação ou elucidação estrutural das substâncias ativas. Utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) isolaram-se duas substâncias (nornantenina e anonaina) ativas contra cepas K1 de P. falciparum resistentes a cloroquina com CI50 de 5.23 μg/mL e 4.8 μg/mL, respectivamente.

Atualmente, a malária é considerada a principal infecção parasitária existente e apresenta distribuição mundial. Dentre as alternativas terapêuticas utilizadas, destacam-se cloroquina (CQ), mefloquina (MQ) e, recentemente, arteméter (ART). Segundo a literatura, estudos farmacocinéticos destes fármacos têm sido dificultados pela ausência de métodos adequados de análise em fluidos biológicos e, no caso dos fármacos quirais (CQ e MQ), com capacidade de determinar os enantiômeros individualmente. Com isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar o emprego da microextração em fase líquida (LPME) na preparação de amostras para a determinação destes três fármacos antimaláricos e respectivos metabólitos em plasma. O método para análise enantiosseletiva de CQ e metabólitos teve a LPME como técnica de preparação de amostras, a qual apresentou valores de recuperação no intervalo de 28-66%. Estes analitos foram separados na coluna Chirobiotic V em fase polar-orgânica, com posterior detecção por espectrometria de massas (MS), com interface de eletronebulização (ESI) no modo positivo. O método desenvolvido foi linear no intervalo de 5-500 ng mL-1 para todos os analitos avaliados. A disposição cinética de CQ e do principal metabólito monodesetilcloroquina (DCQ) em ratos sugere enantiosseletividade após administração do fármaco na forma racêmica, com maiores concentrações de (+)-(S)-CQ e (-)-(R)-DCQ. O método para análise dos enantiômeros de MQ e do metabólito aquiral carboximefloquina (CMQ) também foi desenvolvido empregando LPME na preparação das amostras. A extração destes analitos foi realizada em duas etapas para eficaz recuperação dos mesmos (valores entre 35-38%). Os analitos foram separados na coluna Chirobiotic T em fase polarorgânica, com detecção por absorção no ultravioleta em 285 nm. O método apresentou linearidade no intervalo de 50-1500 e 50-3000 ng mL-1 para os enantiômeros de MQ e CMQ, respectivamente. A disposição cinética de MQ em ratos indica enantiosseletividade com maiores concentrações de (+)-(RS)- MQ após administração do fármaco na forma racêmica. A separação cromatográfica em fase reversa de ART e metabólito diidroartemisinina (DHA) foi alcançada utilizando-se coluna contendo Si-Zr-PMTDS como fase estacionária e a detecção destes analitos foi realizada empregando-se MS no modo ESI positivo. O procedimento otimizado de LPME em duas fases para extração de ART e DHA em plasma resultou em valores de recuperação de 32 e 25%, respectivamente. O método desenvolvido foi linear no intervalo de 5- 1000 ng mL-1 para ambos os analitos. O estudo piloto de disposição cinética em ratos evidenciou maiores concentrações de DHA. Os resultados obtidos confirmam a viabilidade da LPME para extração destes antimaláricos e respectivos metabólitos em plasma. / Currently, malaria is the main parasitic infection and shows worldwide distribution. Among therapeutic options used, chloroquine (CQ), mefloquine (MQ) and, more recently, artemether (ART) have been standing out. According to the literature, pharmacokinetic studies of these drugs have been hampered by the lack of proper methods of analysis in biological fluids and, regarding the chiral drugs (CQ and MQ), with the ability to determine the individual enantiomers. Therefore, the aim of this work was to evaluate the utilization of liquid-phase microextraction as the sample preparation technique for the determination of these antimalarial drugs and their metabolites in plasma. The enantioselective analysis of CQ and its metabolites was carried out using LPME as technique of sample preparation, which yielded recovery rates within 28- 66%. These analytes were resolved on a Chirobiotic V column in the polarorganic mode and further detected using mass spectrometry (MS) with electrospray interface (ESI) in the positive mode. The developed method was linear in the range of 5-500 ng mL-1 for all analytes studied. The kinetic disposition of CQ and its main metabolite monodesethylchloroquine (DCQ) in rats suggests enantioselectivity following the administration of the racemic drug, with higher concentrations of (+)-(S)-CQ and (-)-(R)-DCQ. The method for the analysis of the enantiomers of MQ and its achiral metabolite carboxymefloquine (CMQ) also had LPME as technique of sample preparation. The extraction of these analytes was carried out in two-steps to obtain efficient recovery rates (values within 35-38%). The analytes were resolved on a Chirobiotic T column in polar-organic mode and ultraviolet detection was performed at 285 nm. The method was linear in the range of 50-1500 and 50-3000 ng mL-1 for the enantiomers of MQ and CMQ, respectively. The kinetic disposition of MQ in rats indicates enantioselectivity with higher concentrations of (+)-(RS)-MQ following the administration of the racemic drug. The chromatographic resolution of ART and its metabolite dihydroartemisinin (DHA) in the reversed mode was achieved utilizing a column containing Si-Zr-PMTDS as stationary phase and their detection was conducted employing MS in the positive ESI mode. The optimized two-phase LPME procedure for the extraction of ART and DHA from plasma showed recovery values of 32 and 25%, respectively. The developed method was linear over the range of 5-1000 ng mL-1 for both analytes. The pilot study of kinetic disposition in rats showed higher concentrations of DHA. The obtained results confirm the feasibility of LPME for the extraction of these antimalarial drugs and their metabolites from plasma.

Apesar dos esforços mundiais a malária ainda é uma doença com altas taxas de morbidade e mortalidade. Investigamos o efeito de moléculas sintéticas relacionadas a melatonina e a triptamina no ciclo celular de P. falciparum, bem como mostramos que essa classe de compostos apresenta ação antimalárica significativa. Avaliamos também 5 novas hidroxinaftoquinonas sintéticas em cultura in vitro de P. falciparum, todas apresentaram atividade antimalárica, tendo N3 destacado-se por apresentar um IC50 na faixa nanomolar. Mostramos que o possível mecanismo de ação de N3 é inibindo o potencial de membrana mitocondrial. Em células de mamíferos HEK293, N3 não mostrou toxicidade significativa. No modelo de infecção utilizando P. berghei (ANKA GFP) o composto N3 não foi capaz de curar os animais infectados, apesar da redução significativa da parasitemia no quarto dia após a infecção. Nessa tese mostramos o uso da citometria de fluxo como uma ferramenta prática possibilitando a avaliação do ciclo do parasita. / Despite the worldwide effort the malaria is still a devastating disease. We have tested melatonin and synthetic related indoles molecules on P. falciparum cell cycle and showed the potential antimalarial activity. We have tested 5 new synthetic hydroxynaphthoquinones on in vivo culture of P. falciparum 3D7, all of them showed antimalarial activity, but only N3 showed an IC50 in the nanomolar range. We demonstrate that the probable mechanism of action of N3 is inhibiting the mitochondrial membrane potential. In mammalian cells, N3 did not show cytotoxicity. Subsequently, we tested the compound N3 in murine infection model of P. berghei. After 4 days the parasitemia was assessed and the survival monitored for 30 days. N3 was not able to cure the infected animals, despite the initial reduction of parasitemia on 4th day post-infection. In this thesis we have demonstrated the use of flow cytometry as a useful and powerful tool in malaria research.

O aumento da resistência do parasita da malária a maioria da drogas antimaláricas disponíveis, tornandose necessário pesquisar novos compostos com potencial atividade antimalárica. O objetivo desta tese foi inicialmente caracterizar a atividade do risedronato contra as formas intraeritrocitárias do parasita in vivo, além de identificar seu possível mecanismo de ação. A IC50 do risedronato foi de 20 <font face=\"Symbol\">mM em culturas de Plasmodium falciparum. Risedronato reduziu a biossíntese de FOH e GGOH e a isoprenilação de proteínas, inibindo a transferência do grupo FPP para as proteínas farnesiladas, entretanto, a transferência do GGPP para as proteínas geranilgeraniladas não foi inibida, isto também ocorreu quando proteínas ras e rab foram analisadas, sugerindo que a droga está inibindo a enzima FPPS. A enzima FPPS de P. falciparum foi expressa e obtivemos uma proteína recombinante fusionada a GST (rPfFPPS). Os substratos IPP, DMAPP, GPP e FPP foram utilizados para determinação da atividade catalítica da enzima, demonstrando FPP e GGPP como principais produtos. Os valores de Km para os diferentes substratos foi determinado. Demonstramos também que rPfFPPS é inibida por risedronato, podendo ser explorado como potencial alvo antimalárico. / The increased resistance of the malaria parasite most of antimalarial drugs are available, making it necessary to search for new compounds with potential antimalarial activity. The aim of this thesis was initially characterize the activity of risedronate against intraerythrocytic forms of the parasite in vivo, and identify its possible mechanism of action. The IC50 of risedronate was 20 <font face=\"Symbol\">mM in cultures of Plasmodium falciparum. Risedronate reduced biosynthesis and FOH, GGOH and protein isoprenylation, inhibiting the transfer of FPP group for farnesylated proteins, however, the transfer of GGPP to geranygeranylated proteins was not inhibited, this also occurred when ras and rab proteins were analyzed, suggesting that the drug is inhibiting the enzyme FPPS. The FPPS enzyme from P. falciparum was expressed and obtained a recombinant protein fused to GST (rPfFPPS). The substrates IPP, DMAPP, GPP and FPP were used to determine the catalytic activity of the enzyme, demonstrating FPP and GGPP as main products. The Km values for the various substrates were determined. We also demonstrate that rPfFPPS is inhibited by risedronate, which can be exploited as potential antimalarial target.

Nesta dissertação, identificou-se que as drogas esqualestatina, fosmidomicina, risedronato e nerolidol apresentam atividades sinérgicas e aditivas quando administradas em cultura de P. falciparum. Esses resultados contribuem para a compreensão da biologia do parasita e abrem estudos para possíveis antimaláricos. Identificou-se a especificidade da droga esqualestatina inibidora da enzima fitoeno sintase por meio de marcações metabólicas utilizando precursor radioativo ([3H]GGPP), e análise pela técnica de cromatografia (RP-HPLC). Realizou-se testes de inibição para determinar o valor da IC50 na linhagem pRM2-Fito-HA, a qual encontra-se super expressando enzima fitoeno sintase e encontrou-se um valor IC50 de 5 <font face=\"Symbol\">mM para o isolado 3D7 enquanto que para a linhagem pRM2-Fito-HA foi de 30 <font face=\"Symbol\">mM. Demonstrando assim que a enzima fitoeno sintase é o principal, senão único alvo da esqualestatina em P. falciparum, o que sugere que este composto ou derivado do mesmo são potenciais antimalaricos. / In this thesis, we found that the drug squalestatin, fosmidomicina, risedronate, nerolidol have synergistic and additive activity when administered in cultured P. falciparum. These results contribute to the understanding of the biology of the parasite and open studies for potential antimalarials. We identified the specific drug squalestatin inhibiting phytoene synthase enzyme by using metabolic markers radioactive precursor ([3H] GGPP) by the technique of analysis and chromatography (RP-HPLC). Held inhibition tests to determine the IC50 value of the strain in pRM2-Phyto-HA, which is super expressing phytoene synthase enzyme and met an IC50 value of 5 microM to isolate 3D7 whereas for strain pRM2 -Phyto-HA was 30 <font face=\"Symbol\">mM. Thus demonstrating that the enzyme phytoene synthase is the primary, if not sole target of squalestatin in P. falciparum, which suggests that this compound or derivative thereof as potential antimalarials.