Enterococos são bactérias que exercem um papel muito importante na produção de vários alimentos fermentados e também podem ser usadas como probióticos. A presença e o crescimento de enterococcos em alimentos fermentados como queijos e lingüiças conferem a esses produtos características organolépticas únicas. Em contrapartida, sua presença nos alimentos também está associada com falta de higiene durante a manipulação. Estes microrganismos também estão relacionados com o desenvolvimento de algumas doenças, como endocardites, septicemia, infecções do trato geniturinário, entre outras. A presença de características de virulência aumenta o potencial de infecção do microrganismo e a severidade da doença a ele relacionada. Com o objetivo de avaliar possíveis modificações fenotípicas e genotípicas de amostras de enterococos isoladas de frango, durante a subcultura destas cepas no laboratório, várias análises foram realizadas como: a presença dos fatores de virulência; proteína de superfície (esp) e gelatinase (gelE), do operon fsr-regulador do gelE, a expressão fenotípica do gelE, a capacidade de formação de biofilme e a resistência a antimicrobianos, desinfetantes e antisépticos. Quarenta isolados de Enterococcus sp. foram avaliados quanto a presença dos genes gelE, esp, operon-fsr, sprE por PCR, a atividade gelatinolítica por testes bioquímicos convencionais, resistência a antimicrobianos, antisépticos e desinfetantes por antibiograma e formação de biofilme pelo método cristal violeta. Todos os testes foram realizados na 1º geração e na 12º geração das cepas. 85% dos isolados produziram gelatinase e em 92,5% dos isolados o gene gelE estava presente na 1º geração. A análise do fsr-operon destes isolados do primeiro cultivo demonstrou que o gene fsrA estava presente em 35 isolados e o fsrC em 37 isolados e a presença destes genes pareceu não ter correlação com a atividade gelationolítica. O gene fsrB estava presente em todos os isolados (35) que apresentaram atividade gelatinolítica sugerindo que a presença deste gene é importante na expressão desta enzima. Após o subcultivo, apenas um isolado perdeu a atividade gelatinolítica e 15 perderam o gene gelE. Doze isolados perderam pelo menos um gene do fsr-operon durante a subcultura, porém nenhum destes perdeu a capacidade de expressar a enzima gelatinase talvez devido à presença do gene fsrB. O gene sprE foi detectado em 34 isolados na primeira geração e na 12º geração em apenas 20 isolados. O gene da proteína de superfície de Enterococcos (Esp), não foi encontrado em nenhum dos isolados. O antibiograma do isolados no primeiro cultivo demonstrou que 100% dos isolados foram sensíveis a ampicilina e a gentamicina, 95% sensíveis a vancomicina, 85% a ciprofloxacina, 5% a tetraciclina, 65% a eritromicina e 52,5% a cloranfenicol tanto na 1º quanto na 12º geração. Após a subcultura a susceptibilidade dos isolados aumentou a eritromicina (67,5%) e ao cloranfenicol (80%). Quanto ao perfil de resistência aos detergentes e anti-sépticos de uso comercial, todos os isolados apresentaram fenótipo de resistentes ao linear alquilbenzeno sulfonato (LAS) e ao triclosan durante a subcultura. Todos isolados foram suscetíveis ao formaldeído, mas se tornaram resistentes ao 8,5% hipoclorito de sódio e a clorexidina durante a subcultura. Em geral, todos os isolados foram formadores de biofilme e a produção de gelatinase parece ser necessária para esta formação. O perfil genético não pareceu ter relação com a formação de biofilme. Tanto o perfil genotípico quanto o fenotípico pode sofrer alterações durante a subcultura das cepas no laboratório. / Enterococci are bacteria that have a very important role in the production of various fermented foods and can also be used as probiotics. The presence and growth of enterococci in fermented foods like cheese and sausages bring to these products unique organoleptic characteristics. However, their presence in foods is also associated with lack of hygiene during handling. These microorganisms are also related to the development of some diseases such as endocarditis, septicemia, genitourinary infections, among others. The presence of virulence characteristics increases the potential infection of the organism and severity of disease related to it. The aim of the present study is analyze the possible changes of phenotypic and genotypic of enterococci isolated from chicken, during the subculture of the strains in the laboratory, the presence of virulence factors: enterococcal surface protein (esp) and gelatinase (gelE), operon-fsr gelE regulator, gelE phenotypic expression, the ability of biofilm formation and antibiotic, disinfectant and antiseptic resistance were determined in samples of enterococci isolated from chicken. The presence of gelE, esp operon-fsr and sprE genes were evaluated by PCR, gelatinase activity were observed by conventional biochemical tests, antibiotics resistance, antiseptics and disinfectants resistance were analyzed by standard disk diffusion method and biofilm formation were detected following the crystal violet staining method in forty enterococci isolates from chicken. All tests were performed in the 1st generation and 12th generation. 85% of the isolates produced gelatinase and in 92.5% of the isolated the gelE gene was present in the 1st generation. The analysis of operon-fsr in the 1st generation of these isolates showed that the fsrA gene was present in 35 isolates and fsrC gene was present in 37 isolates and the presence of these genes seemed to have no correlation with the gelatinase activity. The fsrB gene was present in all isolates (35) with gelatinase activity suggesting that the presence of this gene is important in the expression of this enzyme. After subculture, only one isolate lost the gelatinase activity and 15 isolates lost the gelE gene. Twelve isolates lost at least one gene of the operon-fsr during laboratory subculture, but none of these isolates lost the ability to express the enzyme gelatinase probably due the presence of the fsrB gene. The sprE gene was detected in 34 isolates in the 1st generation and in 12th generation only 20 isolates maintained this gene. The protein surface of enterococci gene (Esp), was not found in any isolate. The antibiogram of the isolates showed that 100% of the isolates were susceptible to ampicillin and gentamicin, 95% susceptible to vancomycin, 85% to ciprofloxacin, tetracycline 5%, 65% to erythromycin and 52.5% to chloramphenicol in the 1st generation. After subculture the susceptibility of isolates to erythromycin (67.5%) and chloramphenicol (80%) increased. As the profile of resistance to detergents and antiseptics for commercial use, all isolates showed resistance phenotype of the linear alkylbenzene sulfonate (LAS) and triclosan during subculture. All isolates were susceptible to formaldehyde, but became resistant to 8.5% sodium hypochlorite and chlorhexidine during the subculture. In general, all isolates were biofilm formers. Gelatinase production appears to be required for biofilme formation. The genetic profile did not appear to have relation with the formation of biofilms. Genotypic and the phenotypic profile may change during the subculture of the strains in the laboratory.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós Graduação em Nutrição Humana, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-03-23T19:28:59Z No. of bitstreams: 1 2017_IzabelLucenaGadioli.pdf: 2079465 bytes, checksum: e0fecca414f0d711c10963616666e820 (MD5) / Rejected by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br), reason: Boa tarde, Por favor, adicione o campo Orientador. Atenciosamente. on 2018-03-26T19:19:35Z (GMT) / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-03-26T20:31:17Z No. of bitstreams: 1 2017_IzabelLucenaGadioli.pdf: 2079465 bytes, checksum: e0fecca414f0d711c10963616666e820 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-04-19T16:38:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_IzabelLucenaGadioli.pdf: 2079465 bytes, checksum: e0fecca414f0d711c10963616666e820 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T16:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_IzabelLucenaGadioli.pdf: 2079465 bytes, checksum: e0fecca414f0d711c10963616666e820 (MD5) Previous issue date: 2018-04-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Introdução: as passifloras são plantas estratégicas no contexto dos alimentos funcionais e fitoterapia. O objetivo do presente estudo foi caracterizar extratos de folhas, polpas e sementes de Passiflora alata e P. setacea, nativas do Cerrado, quanto à sua composição química e propriedades biológicas, para formulação de nanoemulsões. Métodos: frutos maduros e folhas de passifloras silvestres, nativas do Cerrado, foram colhidos. As folhas foram secas a 50°C por cinco dias e depois pulverizadas. A partir dos frutos, obtiveram-se as polpas e as sementes, com o auxílio de uma despolpadeira. O preparo dos extratos de folhas foi realizado por infusão. Os extratos de polpas e sementes foram preparados com etanol e acetona 70%, a 80°C, por 30 minutos. Os extratos foram submetidos à liofilização. As nanoemulsões foram formuladas pelo processo de inversão de fase por temperatura (PIT). No experimento 1, os extratos de polpas, folhas e sementes de passifloras silvestres foram caracterizados quanto à sua composição em compostos fenólicos, aminas bioativas e aminoácidos, bem como avaliadas as atividades antioxidante e antimicrobiana. Os extratos com melhores resultados seguiram para o experimento 2, que visou a formular nanoemulsões de extratos de polpas e sementes de passifloras. Para isso, foram realizados testes de caracterização, estabilidade, além de avaliação das atividades antioxidante e antimicrobianas. Resultados: As sementes de P. setacea apresentaram maiores quantidade de compostos fenólicos (4.754,6 mg AGE/100 g MF), taninos (645,3 mg PB2E/100 g FW) e atividade antioxidante. Foi realizada a tentativa de identificação de 15 compostos fenólicos, compreendidos em 10 flavonoides e cinco ácidos fenólicos. A dosagem e identificação dos aminoácidos resultou num total de 16, dos quais 9 eram essenciais. A poliamina espermina só foi quantificada na polpa de P. alata, que também apresentou a maior quantidade de espermidina (1,6 mg/100 g FW). A concentração inibitória mínima das polpas e sementes variou de 0,5 a 8,0 mg/mL. Foi observada atividade bactericida nas sementes, contra E. coli (4,0-8,0 mg/mL). As nanoemulsões apresentaram diâmetro hidrodinâmico pequeno, menor que 30 nm, e índice de polidispersão baixo, menor que 0,2. O potencial zeta foi levemente negativo e variou de -0,6 a -0,8 mV para as polpas e -1,5 a -1,9 mV para as sementes. As nanoemulsões se mantiveram estáveis na maior parte do tempo do teste de estabilidade. A avaliação da atividade antioxidante das nanoemulsões demonstrou que os extratos potencializam sua atividade quando na escala manométrica, exceto o extrato de semente de P. setacea, que manteve a mesma atividade antioxidante. Os resultados de MIC das nanoemulsões não foram satisfatórios. Conclusão: as passifloras apresentaram boa qualidade em compostos fenólicos, aminas bioativas e aminoácidos, principalmente as sementes de P. setacea, com elevadas atividades antioxidante e atividade antimicrobiana. A nanoemulsificação dos extratos das passifloras foi um processo viável e contribuiu para manter a estabilidade dos compostos bioativos e melhorar a atividade antioxidante dos extratos. / Introduction: the present study aimed to characterize chemical composition and biological properties of extracts of leaves, pulps and seeds of Passiflora alata and P. setacea from the Brazilian savanna for nanoemulsions formulation. Methods: ripe fruits and leaves of wild passifloras from the Brazilian savanna were harvested. The leaves were dried at 50°C for five days. From the fruits, pulps and seeds were obtained with a depulper. Levaes extracts were prepared by infusion. The pulp and seed extracts were prepared with 70% ethanol and acetone at 80°C for 30 minutes. The extracts were lyophilized. Nanoemulsions were formulated by the phase inversion by temperature (PIT) process. In the experiment 1, extracts of pulps, leaves and seeds of wild passifloras were characterized for their composition in phenolic compounds, bioactive amines and amino acids, as well as the antioxidant and antimicrobial activities. The extracts with better results followed for experiment 2, which formulated nanoemulsions of pulps and seeds extracts of passifloras. For this, tests of characterization, stability, and evaluation of antioxidant and antimicrobial activities were performed. Results: P. setacea seeds showed higher total phenolic compounds (4,754.6 mg GAE/100 g FW), tannins (645.3 mg PB2E/100 g FW) and antioxidant activity. Fifteen phenolic compounds were tentatively identified, comprising 10 flavonoids and 5 phenolic acids. Amino acids identification and quantification resulted in a total of 16, of which 9 were essential. The polyamine spermine was only quantified in P. alata pulp, which also had the highest amount of spermidine (1.6 mg / 100 g FW). The minimum inhibitory concentration (MIC) of pulps and seeds ranged from 0.5 to 8.0 mg/mL. Only bactericidal effects were observed for the seeds against E. coli (4.0-8.0 mg/mL). The nanoemulsions presented small hydrodynamic diameter, >30 nm, and low polydispersity index, >0.2. The zeta potential was slightly negative and ranged from -0.6 to -0.8 mV for pulps and -1.5 to -1.9 mV for seeds. Nanoemulsions remained stable most of the time in the stability test. The evaluation of the antioxidant activity of the nanoemulsions demonstrated that the extracts potentiate their activity when in the manometric scale, except for P setacea seeds, which maintained the same antioxidant activity. The MIC results of the nanoemulsions were not satisfactory. Conclusion: the results showed that wild passifloras from Brazilian savanna presented good quality in phenolic compounds, bioactive amines and amino acids, especially the seeds of P. setacea, with high antioxidant activity and antimicrobial activity. Nanoemulsification of passifloras extracts was a viable process and contributed to maintain the the bioactive compounds stability and to improve the antioxidant activity of the extracts.

Flavonóides são compostos fenólicos de ampla ocorrência na natureza exercendo diversas funções fisiológicas nos vegetais. Na família Leguminosae estes metabólitos secundários exercem o papel de antimicrobianos (fitoalexina e/ou fitoanticipinas) e como moléculas sinalizadoras, na simbiose com bactérias do solo no processo de fixação biológica do Nitrogênio. O gênero Lupinus, pertencente a esta família, é encontrado em todas as regiões fisiográficas do estado do Rio Grande do Sul. Entretanto, não existem relatos de estudos químicos ou microbiológicos. Neste trabalho, foi analisado o perfil químico de folhas, flores, raízes, nódulos e legumes da espécie Lupinus lanatus. Foram isolados oito compostos fenólicos, dois deles não foram identificados devido ao baixo rendimento, um derivado do ácido cafeico isolado a partir das raízes teve sua estrutura parcialmente identificada. Quatro flavonóides tiveram suas estruturas elucidadas por métodos espectroscópicos e espectrométricos; três flavonas-C-glicosiladas: citisosídeo a partir das flores e folhas, ramnosil-O-vitexina e ramnosil-O-citisosídeo, a partir das folhas; e a isoflavona angustona A, a partir dos nódulos. Foi analisada a atividade antimicrobiana das flavonas pelo método da bioautografia frente a Bradyrhizobium sp. e Agrobacterium sp., microrganismos simbionte e patógeno, respectivamente, sendo que nenhum metabólito obteve resultado positivo, entretanto quando analisados pelo mesmo método frente a Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli o resultado foi positivo para ramnosil-O-vitexina. Foi avaliada a atividade antioxidante pelo método da DPPH para as flavonas, onde citisosídeo obteve resultado positivo.

As bactérias do gênero Paenibacillus são isolados de uma grande variedade de ambientes e tem como característica a produção e secreção de enzimas extracelulares, antimicrobianos e compostos antifúngicos inibidores de vários patógenos animais e vegetais. Os 55 isolados de 15 espécies de Paenibacillus foram testados frente a diversos substratos a fim de verificar a produção de enzimas extracelulares. Foram também testados frente a uma variedade de bactérias e fungos fitopatógenos, humanos e animais para a produção de antibióticos. Nessa triagem, P. validus, P. chibensis, P. koreensis e P. peoriae se destacaram inibindo a maioria das bactérias indicadoras. As espécies P. validus, P. chibensis e P. peoriae foram bons produtores de substancias que inibiram o crescimento de fungos, demonstrando que o gênero possui um amplo espectro de atuação. O tradicional procedimento de triagem para obterem-se novos microrganismos produtores de enzimas para fins biotecnológicos foi executado neste trabalho. As 55 linhagens foram avaliadas na sua capacidade de produzir amilase, proteases (caseinase), celulase, xantanase, xilanase, pectinase, quitinase e lipase. Os isolados se mostraram bons produtores de enzimas hidrolíticas, já que 26 apresentaram atividade xilanolítica, 17 atividade pectinolítica, 49 atividade proteolítica, 43 atividade xantanolítica, 40 atividade celulolítica, 17 atividade lipolítica, 39 atividade amilolítica em condições neutras (pH 7) e 26 atividade amilolítica em condições alcalinas (pH 10), e apenas 4 apresentaram atividade quitinolítica. Sendo assim, esses isolados são candidatos a serem utilizados como agentes biocontroladores ou podem ser explorados como produtores de antimicrobianos e de enzimas hidrolíticas de interesse.

As enterocinas são compostos de natureza protéica que apresentam atividade antimicrobiana contra bactérias patogênicas e deteriorantes de alimentos. Por esta razão, nos últimos anos, o interesse por estas substâncias tem aumentado devido ao seu uso potencial como biopreservante de alimentos. Realizando uma triagem com 352 cepas de Enterococcus spp para detectar atividade antimicrobiana, foram encontradas 18 cepas (5%) produtoras de enterocinas, pertencentes às espécies E. faecalis, E. faecium e E. mundtii todas provenientes de amostras de fezes de humanos. Destas cepas foram produzidos sobrenadantes livres de células e realizados testes para caracterização das enterocinas produzidas. As enterocinas produzidas pelas 18 cepas apresentaram o mesmo espectro de atividade antimicrobiana, inibindo 4 espécies do gênero Listeria, Lactobacillus plantarum e Salmonella Enteritidis. Todas foram parcialmente estáveis ao aquecimento (121ºC por 10 minutos), a variações de pH de 2 a 10 e a estocagem por 60 dias a 4ºC e a -20ºC. A sensibilidade a proteases confirmou a natureza protéica destas substâncias antimicrobianas. Com cinco sobrenadantes livres de células foram realizadas curvas de produção de enterocinas e todas iniciaram a produção na fase logarítmica de crescimento, indicando cinética de metabólito primário. Com estes sobrenadantes foi determinado o peso molecular aproximado de 3 KDa, utilizando a técnica de SDS-PAGE. As cepas com atividade antimicrobiana no sobrenadante livre de células não apresentaram os genes para produção das enterocinas A e B, mas 14 cepas de E. faecium apresentaram o gene para enterocina A e 9 para enterocina B, sendo que apenas uma cepa apresentou ambos os genes. Nenhuma das 18 cepas produtoras de enterocinas apresentou atividade hemolítica e presença de adesinas, todas apresentaram cápsula. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que estas enterocinas demonstram um potencial aplicabilidade em novos estudos relacionados aos biopreservantes.

A Salmonella permanece um importante problema na avicultura mundial e considerando os patógenos transmitidos por alimentos, a Salmonella aparece como um dos agentes principais em surtos de toxinfecções alimentares. Existem vários relatos de isolamento de Salmonella em frangos vivos e surtos alimentares, porém em carcaças de frangos e cortes a disponibilidade de dados é menor, assim como estudos de determinação do número de Salmonella presentes nas amostras, também são poucos. No presente estudo, foram analisadas 180 carcaças de frangos resfriadas, adquiridas em varejos, para determinação da ocorrência de contaminação por Salmonella pelo método de microbiologia convencional, ensaio imunoenzimático (ELISA) e determinação do número de células da bactéria pelo método do número mais provável (NMP) nos ágares para isolamento verde brilhante com novobiocina (BGN) e xilose-lisina tergitol 4 (XLT4). Neste mesmo estudo, foi determinado o perfil de resistência a antimicrobianos de 13 amostras de Salmonella isoladas das carcaças de frangos, e analisados 101 suabes de arrasto de camas aviárias, pelo método microbiológico convencional, para a presença do agente. Os resultados mostraram 15,8% de ocorrência de Salmonella nos suabes de arrasto e 12,2% de ocorrência nas carcaças de frangos resfriadas, pelo método de microbiologia convencional. O teste de ELISA detectou 11,3% de positividade para Salmonella nas carcaças de frangos resfriadas. A média de NMP de Salmonella por mL, na leitura pelo ágar XLT4 foi de 2,674 células e BGN foi de 1,282 células. As cepas de Salmonella apresentaram resistência aos antimicrobianos lincomicina, penicilina e estreptomicina (100%), josamicina e enrofloxacina (69,23%), amoxicilina (30,76%), clortetraciclina (23,07%), estreptomicina e estreptomicina + penicilina (15,83%) e 7,69% de resistência a doxiciclina e polimixina B. Os sorovares de Salmonella isolados no estudo foram Enteritidis, Agona, Risssen, Heidelberg e Livingstone, nas carcaças de frangos, e, Enteritidis, Agona, Ohio, Rissen, Tennessee, entérica O: 3,10 e entérica O: 6,71 nos suabes de arrasto. A análise dos resultados apresentou contaminação por Salmonella nas camas aviárias e presença de cepas de Salmonella, isoladas das carcaças, multiresistentes a antimicrobianos. Também demonstrou existir um número variável de células de Salmonella contaminando as carcaças de frango resfriadas que estão à venda ao consumidor.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-31T18:25:44Z No. of bitstreams: 1 2018_LeandradeAlmeidaRibeiroOliveira_PARCIAL.pdf: 1234480 bytes, checksum: 0957d97570306cd3ce2f542f06f701e7 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-09-10T19:35:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_LeandradeAlmeidaRibeiroOliveira_PARCIAL.pdf: 1234480 bytes, checksum: 0957d97570306cd3ce2f542f06f701e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T19:35:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_LeandradeAlmeidaRibeiroOliveira_PARCIAL.pdf: 1234480 bytes, checksum: 0957d97570306cd3ce2f542f06f701e7 (MD5) Previous issue date: 2018-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ). / O objetivo desta pesquisa foi avaliar as atividades antimicrobiana e anti-inflamatória de vouacapanos de Pterodon emarginatus Vogel (Fabaceae). Foram utilizados frutos coletados nos municípios de Campestre e Bela Vista de Goiás (Estado de Goiás, Brasil). Somente na oleorresina dos frutos de Bela Vista de Goiás foram detectados diterpenos vouacapânicos e por isso essa amostra foi fracionada por partição. A fração diclorometano:hexano da oleorresina foi submetida a cromatografia em coluna aberta. Foi utilizada como fase estacionária Diaion HP-20 e como fase móvel acetonitrila:água, com força de eluição crescente. Foi desenvolvido um método analítico por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para monitorar o fracionamento cromatográfico. As subfrações 7-12 (Grupo 1) foram reunidas e submetidas à separação por CLAE semi-preparativa em fase reversa. A atividade antimicrobiana dos vouacapanos e da oleorresina de Pterodon foi determinada frente a 8 cepas Gram-positivas, 11 cepas Gram-negativas e 4 espécies de Candida por meio do ensaio de microdiluição em placa. A citotoxicidade foi avaliada em células HaCaT pelo método colorimétrico do MTT - brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-ila)-2,5-difeniltetrazólio)]. O potencial anti-inflamatório foi determinado pelas seguintes avaliações: atividade inibitória frente à fosfolipase A2 por método fluorimétrico, expressão de COX-2 e NRF2, e quantificação das citocinas inflamatórias IL-6 e IL-8 por citometria de fluxo. As amostras foram testadas nas concentrações que mantiveram a viabilidade de 90% (CV90) das células HaCaT, para evitar o uso de concentrações citotóxicas nos ensaios anti-inflamatórios. Três compostos foram identificados via RMN: 6α,19β-diacetoxi-7β,14β-diidroxivouacapano (V1), 6α-acetoxi-7β,14β-diidroxivouacapano (V2) e 6α-acetoxi-7β-hidroxivouacapan-17β-oato de metila (V3). Os três vouacapanos e a oleorresina foram mais ativos frente às cepas Gram-positivas. Com relação às cepas Gram-negativas, as amostras testadas se mostraram ativas apenas frente à Pseudomonas aeruginosa. O vouacapano V2 foi o que exibiu melhor atividade antibacteriana, apresentando-se ativo frente a 7 das 8 bactérias Gram-positivas avaliadas, com valores de concentração inibitória mínima entre 62,5 e 125 μg/mL. As amostras testadas não apresentaram atividade inibitória frente às cepas C. glabrata, C. kruzei, C. parapsilosis e C. albicans. A oleorresina e os vouacapanos V1, V2 e V3 apresentaram CV90 de 7,5 μg/mL, 19,0 μg/mL, 13,8 μg/mL e 4,00 μg/mL, respectivamente, frente às células HaCaT. A oleorresina de Pterodon e os vouacapanos V2 e o V3 inibiram a atividade da fosfolipase A2 em 30,78%, 24,96% e 77,64%, respectivamente. Foi observado que os vouacapanos V2 e V3 nas CV90 inibiram a expressão de COX-2 em 28,3% e 33,17%, respectivamente. A oleorresina de sucupira foi capaz de inibir a produção de IL-6 em 35,47%. A expressão de NRF2 e a produção de IL-8 não foram alteradas pelas substâncias testadas, em relação ao controle. Os resultados dão sustentação ao uso popular dos frutos de sucupira como antibacteriano e anti-inflamatório e mostram que estas atividades podem estar associadas à presença de vouacapanos. / This research aimed to evaluate the antimicrobial and anti-inflammatory activities of Pterodon emarginatus Vogel (Fabaceae). The fruits were collected in the municipalities of Campestre and Bela Vista de Goiás (State of Goiás, Brazil). Diterpene vouacapanes were detected only in the oleoresin of the fruits of Bela Vista de Goiás, and so this sample was fractionated by partition. The dichloromethane: hexane fraction of this oleoresin was subjected to open column chromatography. Diaion HP-20 was the stationary phase and the mobile phase was acetonitrile: water with increasing elution force. An HPLC method was developed in order to monitor chromatographic fractionation. Subfractions 7-12 (Group 1) were pooled and subjected to reverse-phase semi-preparative HPLC separation. The antimicrobial activity of voucapans and Pterodon oleoresin was determined against 8 Gram-positive strains, 11 Gram-negative strains and 4 Candida species by plaque microdilution assay. Cytotoxicity was evaluated in HaCaT cells by the colorimetric method of MTT - [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide]]. The anti-inflammatory potential was determined by the following evaluations: phospholipase A2 inhibitory activity by fluorimetric method, expression of COX-2 and NRF2 and quantification of inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 by flow cytometry. Samples were tested at concentrations which maintained 90% viability (CV90) of HaCaT cells, in order to avoid the use of cytotoxic concentrations in anti-inflammatory assays. Three compounds were identified via NMR: 6α, 19β-diacetoxy-7β, 14β-dihydroxyivouacapane (V1), 6α-acetoxy-7β, 14β-dihydroxyivouacapane (V2) and methyl α-acetoxy-7β-hydroxyivacapan-17β-oate (V3). All three vouacapans and oleoresin were more active against Gram-positive strains. Regarding Gram-negative strains, the samples were only active against Pseudomonas aeruginosa. Vouacapane V2 showed the best antibacterial activity, proving to be active against 7 of the 8 Gram-positive bacteria evaluated, presenting values of minimum inhibitory concentration between 62.5 and 125 μg/mL. Samples had no inhibitory activity against the strains C. glabrata, C. kruzei, C. parapsilosis and C. albicans. The olororesin and V1, V2 and V3 had CV90 of 7.5 μg/mL, 19.0 μg/mL, 13.8 μg/mL and 4.00 μg/mL, respectively, against HaCaT cells. The Pterodon oleoresin and the V2 and V3 vouacapans inhibited phospholipase A2 activity by 30.78%, 24.96% and 77.64%, respectively. V2 and V3 vouacapans at CV90 inhibited COX-2 expression in 28.3% and 33.17%, respectively. Sucupira oleoresin was able to inhibit IL-6 production by 35.47%. The expression of NRF2 and the production of IL-8 were not altered by the substances tested, in comparison to the control. Results support the popular use of sucupira fruits as antibacterial and anti-inflammatory and show that these activities may be associated with the presence of vouacapans.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-09Bitstream added on 2014-06-13T18:31:36Z : No. of bitstreams: 1 almeida_ecsl_me_rcla.pdf: 707599 bytes, checksum: 0a3da92d2dd3d76af8c1529693ff75df (MD5) / O tratamento das infecções micóticas, incluindo as dermatofitoses, tem sido motivo de muita preocupação em todo o mundo. Esse fato é justificado pelo aumento da prevalência dessas doenças no cenário mundial, pela necessidade de ampliação dos poucos antifúngicos hoje disponíveis, e pelo aparecimento de cepas resistentes aos antifúngicos empregados na terapêutica clínica. No presente estudo visou-se testar a atividade antifúngica do precipitado, parte sólida proveniente da centrifugação do suco extraído da mucilagem, resíduo obtido do desfibramento da folha do sisal (Agave sisalana). A mucilagem foi processada por prensagem ou trituração e o suco obtido foi submetido a diferentes técnicas de purificação através de extrações por solventes orgânicos. O precipitado foi avaliado quanto à atividade antimicrobiana tanto em sua forma úmida como seca; que após secagem, este foi reidratado em água para a obtenção de um concentrado. Com esses tipos de tratamentos, foram realizados testes de Concentração Inibitória Mínima (CIM) pela técnica de macrodiluição em tubos, a fim de determinar ação antifúngica contra os micro-organismos descritos. Para o precipitado obtido da centrifugação do suco proveniente da prensagem da mucilagem, a CIM foi de: 98 μg/mL para Candida albicans, 783 μg/mL para Tricophyton mentagrophytes e 3125 μg/mL para Malassezia pachydermatis; resultados expressos em base seca. Para o precipitado obtido da centrifugação do suco resultante da trituração e filtração da mucilagem, a CIM foi de 128 μg/mL para C. albicans, 512 μg/mL para T. mentagrophytes e 2965 μg/mL M. pachydermatis, resultados em base seca. Na segunda etapa os precipitados secos após fracionamento com os solventes orgânicos foram reidratados em água e avaliados para os testes de CIM. A fração hexânica do precipitado do suco... / The treatment of fungal infections, including dermatophytosis, has been the subject of intense concern worldwide. This fact is explained by the increased prevalence of these diseases on the global stage, the need for expansion of the few antifungal drugs available today, and the emergence of strains resistant to antifungal agents used in clinical therapy. The present study aimed to test the antifungal activity of the precipitate, the solid part from the centrifugation of the juice extracted mucilage residue obtained from shredding the leaf of sisal (Agave sisalana). The mucilage was processed by pressing or crushing and the juice obtained was subjected to various purification techniques using extractions by organic solvents. The wet and dried precipitate were evaluated for antimicrobial activity both in the wet and dry, which, after drying, this was rehydrated in water to obtain a concentrate. After these treatments, tests of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) were performed by the macrodilution technique in tubes, in order to determine antifungal action against the microorganisms described. The precipitate obtained by centrifuged juice from the pressing of mucilage, showed MIC = 98 μg/mL for Candida albicans, 783 μg/mL for Trichophyton mentagrophytes and 3125 μg/mL for Malassezia pachydermatis, results expressed on dried basis. The precipitate obtained by centrifuged juice from the crushing and filtration of mucilage, the MIC was 128 μg/mL for C albicans, 512 μg/mL for T. mentagrophytes and 2965 μg/mL for M. pachydermatis results on dried basis. In a second step, the new precipitates obtained from the fractionation of the dried precipitate with organic solvents were rehydrated in water and evaluated for MIC testing. The hexane fraction of the precipitate juice obtained from the pressing of mucilage had a remarkable... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:57:22Z : No. of bitstreams: 1 kogawa_ac_me_arafcf.pdf: 783357 bytes, checksum: 330145f53ce10033f6de1406faecdc62 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O hiclato de doxiciclina é um antimicrobiano de amplo espectro derivado sintético da oxitetraciclina utilizado em vários países. Tem sido utilizado no tratamento de doenças infecciosas e como aditivo na alimentação de animais para facilitar o seu crescimento. No Brasil este fármaco é comercializado pela indústria farmacêutica União Química na forma farmacêutica comprimidos de 80 mg e 200 mg com o nome Doxitrat ® e pó liofilizado de 10 mL com o nome Calmium ® . Este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar metodologias analíticas mais dinâmicas para o hiclato de doxiciclina, incluindo análises espectrofotométricas, cromatográficas e microbiológicas, comparar o teor e a ação antimicrobiana do hiclato de doxiciclina e o seu complexo de inclusão com a β-ciclodextrina, realizar estudo de dissolução, bem como dispor de técnicas de identificação qualitativa para a forma farmacêutica comprimido e matéria-prima. A análise qualitativa foi realizada por determinação do ponto de fusão, cinzas sulfatadas, cromatografia em camada delgada e espectrofotometria no ultravioleta (UV) possibilitando a identificação das amostras. Os métodos de análise quantitativos empregados e validados foram: (i) espectrofotometria no UV a 268 nm, na faixa de concentração de 6,0 - 21,0 μg/mL no qual foram avaliados os parâmetros de linearidade, precisão, exatidão, seletividade, limites de detecção e de quantificação e robustez, com teor médio nos comprimidos de 111,34 %; (ii) CLAE, coluna Luna CN e fase... / Doxycycline hyclate is a broad-spectrum antibiotic synthetically derived of oxytetracycline and is used in several countries to treat infectious diseases and additive in animal nutrition to facilitate growth. In Brazil this compound is marketed by União Química Indústria Farmacêutica as 80 mg and 200 mg tablets under the name Doxitrat®. Calmium® is the name of the vial 10 mL. This study aimed to develop and validate analytical methods more dynamic for the doxycycline hyclate, including spectroscopic, chromatographic and microbiological analysis, compare the content and the antimicrobial action of doxycycline hyclate and the inclusion complex with β-cyclodextrin, conduct study of dissolution as well as providing qualitative identification techniques for the dosage form compressed and raw materials. Qualitative analysis was performed by determining the melting point, sulphated ash, thin layer chromatography and spectrophotometry in the ultraviolet (UV) allowing the identification of samples. The quantitative analysis validated methods were: (i) UV spectrophotometry at 268 nm in the concentration range of 6.0 -21.0 μg/mL in which the parameters were evaluated for linearity, precision, accuracy, selectivity, limit of detection, limit of quantification and robustness, with an average content of 111.34% (ii) HPLC Luna CN... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:49:48Z : No. of bitstreams: 1 nicolaslorenzon_e_me_araiq.pdf: 1141028 bytes, checksum: 6886093f73fd039fe1ed73b26a3d43dd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho foi avaliado o efeito da dimerização e do comprimento/polaridade do espaçador utilizado na formação dos dímeros, na estrutura e atividade biológica do peptídeo antimicrobiano: Gly-Trp-Leu-Asp-Val-Ala-Lys-Lys-Ile-Gly-Lys-Ala-Ala-Phe-Asn-Val-Ala-Lys-Asn-Phe-Leu-CONH2. Nesse sentido, o monômero e três dímeros com diferentes espaçadores foram sintetizados pelo método de síntese de peptídeo em fase sólida (SPFS) utilizando uma combinação das químicas Fmoc e Boc. Análises por cromatografia de fase reversa e espectrometria de massas confirmaram o sucesso das sínteses e das purificações. Os ensaios de atividade antimicrobiana, em termos de CIM mostraram que a dimerização não aumentou a capacidade do peptídeo de inibir o crescimento de bactérias e fungos. No entanto, quando analisada a capacidade dos peptídeos de matar E. coli, um menor tempo para produzir o efeito inibitório foi observado para os dímeros. Adicionalmente, a atividade hemolítica dos peptídeos também foi avaliada, encontrando-se um aumento significativo, aproximadamente 40 vezes, para os dímeros em relação ao monômero. Com o objetivo de tentar explicar esses efeitos, o teste de proteção osmótica foi realizado. No entanto, o tamanho dos poros foi semelhante, o que não permite explicar as diferenças em termos desta variável. Conhecendo seus diâmetros, foi possível determinar que o poro é formado por 6 moléculas monoméricas ou 3 diméricas. Estudos de permeabilização mostraram que a porcentagem e a velocidade de liberação de carboxifluoresceína foram maiores para os dímeros quando comparados com o monômero, especialmente em vesículas contendo esfingomielina. Este ensaio também mostrou que a duplicação da concentração de monômeros não é suficiente para atingir a capacidade de permeabilização dos dímeros, confirmando que a proximidade das cadeias é um fator... / This work analyzed the effect of dimerization and the length/polarity of the spacer used in the formation of dimers, in the structure and biological activity of the antimicrobial peptide: Gly-Trp-Leu-Asp-Val-Ala-Lys-Lys-Ile-Gly-Lys-Ala-Ala-Phe-Asn-Val-Ala-Lys-Asn-Phe-Leu-CONH2. In this way, the monomer and three dimers (Lys-branched) with different spacer groups were synthesized by solid phase peptide synthesis methodology using a combination of Fmoc and Boc chemical approaches. Analysis by reverse phase chromatography and mass spectrometry confirmed the success of the synthesis and purifications. The antimicrobial activity assay, in terms of MICs showed that dimerization did not increase the ability of the peptides to inhibit the growth of bacteria and fungi. Nevertheless, when analyzing the peptides activity against E. coli in terms of kinetics, an increased velocity was observed for the dimers. The hemolytic activity of peptides was also evaluated, finding a very significant difference, approximately 40 times greater for dimers. Aiming to explain this difference, the osmotic protection test was performed, but the pore size was similar, which can not explain the differences in terms of this variable. Knowing the diameter of the pores, it was possible to determine that the pore is formed by six monomeric or three dimeric molecules. Additionally, permeabilization studies showed that the percentage and rate of carboxyfluorescein release were larger for the dimers compared with monomer, especially in vesicles containing sphingomyelin. This test also showed that the use of two times more monomer concentration´s is not sufficient to reach dimers permeabilization capacity, confirming that the proximity of the chains is an important factor in the activity of this peptide. Analysis by circular dichroism revealed that peptides in aqueous solution are in random coil, whereas... (Complete abstract click electronic access below)