Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-05-18T14:02:23Z No. of bitstreams: 1 Luiz Andre Rodrigues de Lima.pdf: 2120469 bytes, checksum: 547b856a4a41c79b0e6825587dbb6569 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T14:02:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Andre Rodrigues de Lima.pdf: 2120469 bytes, checksum: 547b856a4a41c79b0e6825587dbb6569 (MD5) Previous issue date: 2011-02-10 / The directly heat applied on the testis has given new information about the mechanisms triggers of spermatogenesis damages. Pecan nut shell [Carya illinoensis (Wangenh) K. Koch], is a vegetal by-product with low cost and elevated antioxidant potential and therefore can be considered a promissory substance, because it is rich in polifenols, condensed tannins, flavonoids substances and proanthocyanidis. The aim of this study was to verify whether the pecan nut tea has been protective effects against deleterious actions, produced by heat in the testicular parenchyma and its capacity to accelerate the spermatogenesis recovery process. Forty-five male Wistar rats (Rattus norvegicus, var. albinus) were used and divided in three groups. The testicular heat shock (HS) were been applied in all animals. The first one group G1 hadn’t received pecan nut tea on its diet; the second G2, only received the cited tea before (HS) and the third group G3 received the pecan nut tea before and after HS. The animals were evaluated on 15, 30 and 60 days after heat shock according to histopathological and histometrical testis alterations as well plasmatic testosterone. The occurrence of oxidative stress (OS) was observed through the determination of lipid peroxidation (LP), measured by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Carbonil group, reduced glutathione (GSH), vitamin C levels, catalase activity and protein content in testis were evaluated. In this work was observed a recover of testis weight recover in animals belong to G1 and G2 groups at 30 and 60 days. The epididymal weight of G3, at 15 and 30 days showed an improvement when related with G1 and G2 groups. The prostate and seminal gland weight in G2 and G3 had an improvement in weight when compared with G1 group, at 30 day. The pecan nut tea prevented a total Leydig cell volume reduction at 30 day post thermal injury. The total volume of seminiferous tubules was quickly recovered on G2 and G3 groups at 30 days than G1 group. The seminiferous tubule volume followed the same pattern of seminiferous tubule. Regarding to tunica propria and blood vessel, animals treated with pecan nut tea had a reduction of this parameter at 60 days. The total length of seminiferous tubules was maintained in animals that took continuously pecan nut tea. The plasmatic levels of testosterone were maintained at 15 days in G2 and G3 groups, and after that was noted a lower testosterone levels tendency at 30 and 60 days. By the other side, testosterone levels in animals of G1 group become higher gradually at 15 until 60 days. According to histopathological findings was noted that prior administration of pecan nut tea, before heat shock had better effect on recovery of spermatogenic process at 30 and 60 days. The treatment with pecan nut tea was able to prevent the TBARS increase and GSH depletion in testis. There weren’t significative changes on the plasmatic vitamin C levels, carbonil groups, catalase activity and protein content in the testis of animals. / O calor aplicado diretamente sobre o testículo tem fornecido novas informações sobre os mecanismos desencadeadores dos danos à espermatogênese. A casca da noz pecã [Carya illinoensis (Wangenh) K. Koch] é um sub-produto de origem vegetal de baixo custo e com elevado potencial antioxidante, constituída por polifenóis, taninos condensados, substâncias flavonóides e proantocianinas. O objetivo deste trabalho foi verificar se o chá de noz-pecã apresenta efeito preventivo e/ou restaurador contra as ações deletérias produzidas pelo calor no parênquima testicular, assim como avaliar a capacidade deste em acelerar a recuperação do processo espermatogênico. Foram utilizados 45 ratos Wistar machos (Rattus norvegicus, var. albinus) divididos em três grupos: G1- choque térmico, G2 - chá de noz-pecã pré-choque térmico e G3 - chá de noz-pecã pré e pós-choque térmico. Os animais foram avaliados aos 15, 30 e 60 dias pós-choque térmico quanto às alterações histopatológicas e histomorfométricas dos testículos, assim como, determinou-se níveis plasmáticos de testosterona. Parâmetros de estresse oxidativo (EO) foram avaliados no homogenato de testículo através da peroxidação lipídica (LPO), medida por meio da formação de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Grupo carbonil, glutationa reduzida (GSH), níveis de vitamina C (VIT C), atividade da catalase e conteúdo protéico também foram determinados. Neste trabalho foi constatada tendência de recuperação do peso testicular dos animais dos grupos G2 e G3 aos 30 e 60 dias. O peso epididimário dos animais do grupo G3, aos 15 e 30 dias apresentou uma melhora significativa em relação aos grupos G1 e G2. Os pesos da próstata e vesícula seminal em G2 e G3 aumentaram em relação ao grupo G1, aos 30 dias. A administração do chá da casca de noz-pecã preveniu a redução do volume total de células de Leydig no período de 30 dias pós-injúria. O volume total de túbulos seminíferos foi recuperado mais rapidamente nos grupos G2 e G3 aos 30 dias do que o grupo G1. O volume de epitélio seminífero seguiu o mesmo padrão do túbulo seminífero, porém aos 60 dias. No tocante à túnica própria e vasos sanguíneos, os animais tratados com chá tiveram redução volumétrica neste parâmetro aos 60 dias. O comprimento total dos túbulos seminíferos foi preservado nos animais que fizeram uso contínuo do chá de noz-pecã. Os níveis plasmáticos de testosterona foram mantidos aos 15 dias nos grupos G2 e G3, e posteriormente notou-se tendência de diminuição destes níveis aos 30 e 60 dias. Por outro lado, os níveis plasmáticos de testosterona nos animais do grupo G1 aumentaram gradativamente dos 15 aos 60 dias. De acordo com os achados histopatológicos, constatou-se que a administração prévia de chá de noz-pecã ao insulto térmico proporcionou uma melhor qualidade na recuperação do processo espermatogênico aos 30 e 60 dias. O tratamento com chá de noz-pecã foi capaz de prevenir o aumento do TBARS e diminuição do GHS nos testículos. Não houve diferença significativa nos níveis de VIT C, grupos carbonil, atividade da catalase e no conteúdo protéico dos testículos dos animais. Os resultados obtidos demonstraram que o tratamento com chá da casca de noz-pecã, tanto administrado previamente aos animais como depois da injúria térmica testicular apresentaram efeitos preventivos e restauradores da espermatogênese.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-05-19T12:41:06Z No. of bitstreams: 1 Tatiana Pereira Shiu Lin Liu.pdf: 880008 bytes, checksum: 5eed3ce34aa09053744a3f45eca49b25 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T12:41:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Pereira Shiu Lin Liu.pdf: 880008 bytes, checksum: 5eed3ce34aa09053744a3f45eca49b25 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Tannin acylhydrolase (TAH) known as tannase (E.C:3.1.1.20) is an enzyme which hydrolizes esters and lateral bonds of hydrolizable tannins. The tannic acid is a typical hydrolizable tannin, which can be hydrolized by tannase along with glucose and gallic acid. Tannase can be obtained from vegetables, animal and microbial sources. From those, the last is the most important source to obtain the enzyme. Green tea has several substances, among which catechins are a major source of antioxidant, which help in maintaining the organism.The activity and purification of tannase produced by Aspergillus melleus URM 5827 was evaluated by semi solid fermentation using seeds of mangosteen (Garcinia humilis (Vahl) C. D. Adam) as substract. Forty two cultures fungical cultures of Aspergillus were used for qualitative selection purposes in order to verify potential for tannase production. After selecting cultures, it was performed a semi solid fermentation using seeds of mangosteen as substrate. A factorial planning (2³) was used to verify the influence of production variables such as: quantity of substrate; initial moisture and amount of tannic acid over tannase activity. The purification was evaluated by ionic change chromatography at DEAE-Sephadex. Maximum activity was produced by Aspergillus melleus URM 5827 with 452.55 units per gram of dry-based substract (U/gss) using 5.0 grams of substrate, with initial moisture of 60% and 2% of tannic acid through 48 hours fermentation. The purified enzyme has a molecular weight of 69.52 kDa on Superdex G-75, while on SDS-PAGE electrophoresis showed 66.5 kDa. As for the characterization, the optimum pH and temperature was 5.5 and 40ºC, respectively, achieving thermostability at 30ºC. Coughing increases the antioxidant activity of green tea significantly. The results obtained in this study show the promising potential of tannase produced by Aspergillus melleus URM 5827 and its use in improving the antioxidant potential of green tea. / Tanino acil hidrolase (TAH) conhecida como tanase (E.C:3.1.1.20) é uma enzima que hidrolisa ésteres e ligações laterais de taninos hidrolisáveis. O ácido tânico é um típico tanino hidrolisável, que pode ser hidrolisado por tanase em glicose e ácido gálico. A tanase pode ser obtida a partir de fontes vegetais, animais e microbianas, sendo o meio microbiológico a fonte mais importante de obtenção desta enzima. O chá verde apresenta várias substâncias, dentre elas, as catequinas que são uma importante fonte de antioxidante, que ajudam na manutenção do organismo.A atividade e a purificação de tanase produzida por Aspergillus melleus URM 5827 foi avaliada por fermentação em estado sólido utilizando como substrato sementes de achachairú (Garcinia humilis (Vahl) C. D. Adam). Foram utilizadas 42 culturas de fungos do gênero Aspergillus para seleção qualitativa das culturas com potencial para produção da tanase. Com a cultura selecionada foi realizada uma fermentação em estado sólido utilizando sementes de achachairú como substrato. Um planejamento fatorial (23) foi utilizado para analisar a influência das variáveis de produção: quantidade de substrato, umidade inicial e quantidade de ácido tânico sobre a atividade da tanase. A purificação foi avaliada por cromatografia de troca iônica em DEAE- Sephadex. A máxima atividade foi produzida por Aspergillus melleus URM 5827 com 452,55 unidades por grama de substrato na base seca (U/gss) utilizando 5,0 g de substrato, com umidade inicial de 60% e 2,0% de ácido tânico em 48 horas de fermentação. A enzima purificada apresentou peso molecular de 69,52 kDa em Superdex G-75, enquanto que em eletroforese SDS-PAGE apresentou 66,5 kDa. Quanto a caracterização, apresentou pH e temperatura ótima de 5,5 e 40ºC respectivamente, obtendo termoestabilidade a 30ºC. A atividade enzimática na presença de íons, surfactantes e inibidores de protease, foi inibida na presença dos íons ZnCl2, ZnSO4 e dos surfactantes triton X-100, SDS, reduzida com os íons CaCl2, KCl, NaCl, MgSO4, CuSO4, dos surfactantes Tween 20, Tween 80 e dos inibidores de protease EDTA e β-mercaptoetanol. A tanase aumentou a atividade antioxidante do chá verde significativamente. Os resultados obtidos no presente estudo, mostram o potencial promissor da tanase produzida por Aspergillus melleus URM 5827 e na sua utilização no aumento do potencial antioxidante do chá verde.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-06T12:35:48Z No. of bitstreams: 1 Roberto Afonso da Silva.pdf: 2721235 bytes, checksum: 24016f1b467a859590520cd6ccf8448e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T12:35:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberto Afonso da Silva.pdf: 2721235 bytes, checksum: 24016f1b467a859590520cd6ccf8448e (MD5) Previous issue date: 2012-05-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Artisanal “Coalho” cheese is a product typically northeastern and very popular, widely consumed by local population, representing an important socioeconomic activity for this region. The aim of this study was to obtain the microbiological, physicochemical, proteomics and bioactive characterizations of the Artisanal “Coalho” cheeses produced in the Agreste region of Pernambuco State - Brazil. The milks used as raw material in the manufacture of cheese and the cheeses were obtained from factures located in six Towns: Arcoverde, Cachoeirinha, Capoeiras, Correntes, São Bento do Una and Venturosa. The milk samples were analyzed for somatic cell counts (CCS) by flow cytometry in Somacount300®, physico-chemical parameters (total solids, total protein, total fat and lactose) by absorbance from infrared absorption equipment Bentley2000®. The cheeses were evaluated about physico-chemical parameters (proteins, lipids, moisture and lactose) according to Instruction n°68 of 12/12/2006 - MAPA, microbiological testing for the presence of total [AOAC/2002 (991.14)] and termotolerants [AOAC/2002 (986.33)] coliforms. Lactic microbiota was analyzed by polymerase chain reaction (PCR) using species-specific primers in spite of Lactobacillus genus, and the following: species Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium. The profiles of proteins of the aqueous extracts from cheeses were analyzed by SDS-PAGE electrophoresis and peptides by mass spectrometry (MALDI-ToF). Water-soluble peptides (WSP) from “Coalho” cheeses were tested for following activities: antioxidant (ABTS method); zinc-biding (AOAC method, 2000) and antimicrobial (NCCLS method, 2003). The results obtained for the physico-chemical and CCS parameters of milks used as raw material were within the limits established by Brazilian law, showing these results: proteins (2.99 – 3.48%); fats (3.24 – 4.0%); total dried extract (10.79 – 12.49%); lactose (4.26 – 4.61%) and CCS (9.2 x 104 – 5.28 x 105 cells/mL). The cheeses also had values for the physico-chemical and microbiological parameters within the standards established by law, such as: moisture (52.76 – 58.37%); proteins (17.04 – 21.59%); fats (21.25- 27%) and lactose (3.54 – 5.01%). It was observed that the “coalho” cheeses can be classified as high to very high moisture and non-fat to semi-fat cheese. All the cheese samples had total and thermotolerant coliforms according to the sanitarian standards of quality necessary for human consumers. The profile of lactic microbiota of cheeses evaluated showed heterogeneous comprising all genus (lactobacillus, lactococcus, estreptococcus e enterococcus) and e species (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Streptococcus thermophilus e Lactococcus lactis) tested. In spite of the proteic profile using aqueous extracts, it was possible to detect the presence of lactoferrin, lactoglobulin, lactoglobulin, serum albumin, casein, casein, casein and para casein and more 12 different proteins compared to the protein standard. The peptide profiles of the WSP samples showed high degree of proteolysis resulting in an average of 66 peptides containing 32 known peptides by literature obtained as product from casein hydrolysis (11 S1-Casein, 3 S2-Casein, 15 -casein and 3 -casein) and 7 caseinphosphopeptides. Among non-identified peptides, three of them showed peak at high intensity in all “Coalho” cheeses studied, with a molecular weight of 1597, 1725/1726, 2778/2779 Da, suggesting that these peptides may be a possible molecular marker for the “Coalho” cheese of Agreste Pernambuco State-Brazil. Regarding to bioactivities using WSP samples, the results showed the following activities: antioxidant (91.1 ± 0.43 -75.92 ± 0.7% inhibition); zinc-binding (75.47 ± 0.5 - 61.67 ± 0.65% of bind) and antimicrobial for bacteria Enterococcus faecalis, Bacillus subtilis, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. Finally, this work showed the great biotechnological potential of this cheese that lead to the high aggregation value for regional “Coalho” cheeses collaborating to socioeconomic development of the productive sector in the Pernambuco State. / O queijo de Coalho Artesanal é um produto tipicamente Nordestino e muito popular, amplamente consumido pela população local, sendo sua produção uma importante atividade no âmbito socioeconômico da Região. O objetivo deste trabalho foi estudar as características microbiológica, físico-química, proteômica e bioativa de queijos de Coalho Artesanais produzidos na Região Agreste do Estado de Pernambuco-Brasil. Os leites utilizados como matéria prima e os queijos foram obtidos em queijarias localizadas em 6 municípios da Região Agreste: Arcoverde, Cachoeirinha, Capoeiras, Correntes, São Bento do Una e Venturosa. As amostras de leite foram analisadas quanto à contagem de células somáticas (CCS) por citometria de fluxo no Somacount300®, e quanto aos parâmetros físico-químicos (sólidos totais, proteínas totais, gordura total e Lactose) por leitura de absorção infravermelha no equipamento Bentley2000®. Os queijos foram avaliados em relação aos parâmetros físico-químicos (proteínas, lipídeos, umidade e Lactose) de acordo com a Instrução Normativa n° 68 de 12/12/2006 – MAPA e microbiológicos: coliformes totais [AOAC/2002 (991.14)] e coliformes termotolerantes [AOAC/2002 (986.33)]. A microbiana láctica foi analisada através da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando primers espécies-específicos para o gênero Lactobacilos e as espécies: Lactococcus lactis, Streptococcus thermophilus, Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium. Os perfis proteicos dos extratos aquosos dos queijos foram analisados utilizando eletroforese SDS-PAGE e os peptídicos usando espectrometria de massa (MALDI-ToF). Os peptídeos solúveis em água (WSP) dos queijos foram testados quanto às atividades: antioxidante (método do ABTS), carreadora de zinco (método AOAC, 2000) e antimicrobiana (método NCCLS, 2003). Os resultados obtidos para os parâmetros físico-químicos e CCS dos leites estavam dentro dos padrões estabelecidos pela legislação brasileira, apresentando os seguintes valores: proteínas (2,99 - 3,48%); gorduras (3,24 - 4,0%); extrato seco total (EST) (10,79 - 12,49%); lactose (4,26 - 4,61%) e CCS (9,2 x 104 - 5,28 x 105 células/mL). Os queijos também apresentaram parâmetros físico–químicos e microbiológicos dentro dos padrões estabelecidos pela legislação, tais como: umidade (52,76 - 58,37%); proteína (17,04 - 21,59%); lipídeos (21,25- 27%) e lactose (3,54 - 5,01%). Foi observado também que o queijo de coalho pode ser classificado como de alta a muito alta umidade e magro a semi-gordo. Todas as amostras de queijo analisadas apresentaram coliformes totais e termotolerantes dentro dos padrões de qualidade sanitária exigida para consumo humano. Os perfis das microbianas ácido-láticas dos queijos avaliados foram heterogêneos, constituídos por todos os gêneros testados (lactobacilos, lactococos, estreptococos e enterococos) e pelas espécies (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Streptococcus thermophilus e Lactococcus lactis). Em relação ao perfil proteico, foi possível detectar a presença de lactoferrina, -lactoglobulina, - lactoglobulina, soroalbumina, -caseína, -caseína, -caseína e para- -caseína, além de 12 proteínas que migraram diferente dos padrões utilizados. Quanto aos perfis peptídicos dos extratos, observou-se elevado grau de proteólise originando uma média de 66 peptídeos dentre os quais 32 identificados na literatura como produtos da hidrólise das caseínas (11 S1-Casein, 3 S2-Casein, 15 -caseína e 3 -caseína) e 7 caseinofosfospeptídeos. Dentre os peptídeos não identificados, três apresentaram picos de alta intensidade com pesos moleculares de 1597, 1725/1726,37 2778/2779 Da, sugerindo que estes podem ser um possível marcador molecular para os queijos de coalho do agreste de Pernambuco. Os extratos aquosos dos queijos de Coalho apresentaram as seguintes bioatividades: antioxidante (91,1 ± 0,43 - 75,92 ± 0,7% de inibição); carreadora de zinco (75,47 ± 0,5 - 61,67 ± 0,65 % de carreamento) e antimicrobiana para as bactérias Enterococcus faecalis, Bacillus subtilis, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Enfim, este trabalho mostra o grande potencial biotecnológico que confere alto valor agregado ao queijo de coalho regional contribuindo para o desenvolvimento do setor produtivo do Estado de Pernambuco.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T11:36:05Z No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T11:36:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / With the aim of identify the best method to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, semen samples were diluted in skimmed milk (Glycerol 7%) and Tris-egg yolk (Glycerol 5%) extenders, respectively, and frozen (-196 °C). After thawing (37°C/30s), samples were analyzed to lipid peroxidation by spectrophotometry and high performance liquid chromatography – DAD (TBARS method) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591). It was observed that peroxidation levels obtained by spectrophotometry were significantly higher than those found by HPLC method. C11-BODIPY581/591 complemented the data obtained by TBARS (HLPC) method, helping to better understand the results and providing an overview of damaged caused to cells. In conclusion, the dosage method of TBARS by HPLC and C11-BODIPY581 are more appropriated to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, and it can be used with success together or separated,. After determine the best method to assess plasma membrane lipid peroxidation of goat and sheep sperm cryopreserved with Trolox, semen samples were diluted in skimmed milk (goat) or tris-egg yolk (sheep) extenders, without antioxidants (control group) or with Trolox at 20 μM or 40 μM/mL. After thawing at 37oC for 30 seconds, samples were submitted to assessment of lipid peroxidation by high performance liquid chromatography (HPLC) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591), as well as plasma membrane integrity, acrosomal integrity and sperm kinematics. Semen extenders and fresh semen samples were also assessed by HPLC. No significant difference (P>0.05) was observed among experimental groups of both species to sperm kinematics, plasma membrane and acrosomal integrity. Significant difference also was not observed (P>0.05) among treatment groups to lipid peroxidation reductionIn conclusion, the cryopreservation process did not trigger lipid peroxidation on goat and sheep sperm plasma membrane, independent of Trolox addiction (20 e 40 μM). / Objetivando identificar o melhor método para avaliar a peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos, amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (Glicerol 7%) e Tris-gema de ovo (Glicerol 5%), respectivamente, e congeladas (-196 °C). Após descongelação (37 °C/30s), as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por espectrofotometria e cromatografia líquida de alta performance - DAD (método de TBARS) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Observou-se que as concentrações de malonaldeído obtidas por espectrofotometria foram significativamente maiores que as encontradas pelo método de HPLC. O C11-BODIPY581/591 complementou os dados obtidos pelo método do TBARS (HPLC), auxiliando na melhor compreensão dos resultados, evidenciando danos ocorridos às células. Concluindo-se que o método de dosagem de TBARS pelo HPLC e C11-BODIPY581/591 são os mais indicados para avaliação da peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos podendo ser utilizados com sucesso juntas ou isoladamente. Determinados os melhores métodos, avaliou-se a ocorrência de peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos criopreservados com diluidor suplementado com Trolox, onde amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (caprino) ou tris-gema de ovo (ovinos), sem antioxidante (grupo controle) ou adicionadas de Trolox nas concentrações de 20μM ou 40 μM /mL (tratamentos). Após descongelação a 37 °C/30s, as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por cromatografia líquida de alta performance (HPLC-DAD) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Analisou-se ainda a integridade de membrana plasmática, acrossomal e cinética espermática. Amostras dos diluidores e do sêmen fresco foram também avaliadas por HPLC. Não foi constatada diferença significativa (P>0,05) entre os grupos experimentais de ambas as espécies para os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal. Também não foi observada diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos para redução da peroxidação lipídica. Conclui-se que o processo de criopreservação não desencadeia a peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos independente da adição de Trolox (20 e 40 μM).

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-26T12:47:23Z No. of bitstreams: 1 Cristiane Rodrigues de Araujo.pdf: 1357200 bytes, checksum: e679be2445ef965c1948578b245819fa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T12:47:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane Rodrigues de Araujo.pdf: 1357200 bytes, checksum: e679be2445ef965c1948578b245819fa (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work had as objective to characterize of freeze-dried bark of mango Tommy Atkins, come from organic farming, and defining the conditions of the polyphenols extraction process. The peels were crushed and the flour was submitted to the determination of proximate composition, minerals and bioactive phytochemicals and antioxidant potential employing techniques titrimetric, spectrophotometric and chromatographic. To define the optimal conditions of the process was applied the of factorial design 2² as independent variables: temperature 25-50° C and time stirring 30 to 90 min), and as response the total phenolics concentration in the extract. This experimental design was applied in the following process types: a) Extraction sequentially- hydroacetonic solution (80%), followed by hydromethanolic solution (80%); b) Extraction sequentially- hydromethanolic solution (80%), followed by hydroacetonic solution (80% ); c) Extraction non-sequential-hydroacetonic solution (80%) and d) extraction non-sequential- hydromethanolic solution (80%). The extracts were submitted to antioxidant assays, capture radicals in model system (DPPH, ABTS, ORAC) and antioxidant assays in lipid systems (coupled oxidation of β -carotene-linoleic acid, peroxidation of linoleic acid - ferric thiocyanate method, and accelerated storage test in an oven) and high performance liquid chromatography analyses for identification of polyphenols. The mango flour showed high levels of carbohydrates, potassium, sodium, calcium and phosphorus, total phenolics, ascorbic acid and β-carotene. The factorial design defined as the ideal sequential extraction (80% methanol, followed by 80% acetone) and the following process conditions: temperature 37.5°C and 25ºC; time stirring of 30 and 60 min, whose extracts showed, respectively, higher total phenolic content (2407.16μg. mL-1) (Ext-5), and increased sequestration capacity DPPH (95%) (Ext-7). Both extracts exhibited significant antioxidant capacity against free radicals ABTS, DPPH and ORAC, and in lipid system. The chromatographic analysis revealed the presence in both extracts of the phenolic acids (benzoic acid and cinnamic acid derivatives), flavonoids and a xanthone, but with quantitative and qualitative differences between the profiles of the extracts. Synaptic acid, syringic acid, taxofoline, isoquercetine and mangiferin were the major constituents of these extracts. Thus, considering the chemical composition and antioxidant capacity, the agro-industrial waste of Tommy Atkins mango emerges as a potential source of natural antioxidant. / Este trabalho teve como objetivo caracterizar cascas liofilizadas de manga Tommy Atkins, provenientes de um cultivo orgânico, quanto à composição centesimal, de minerais, de fitoquímicos bioativos, e o potencial antioxidante além de definir as condições ideais para obtenção de extratos com elevado teor de polifenóis. As cascas liofilizadas foram trituradas, e a farinha submetida às determinações analíticas empregando-se técnicas titulométricas, espectrofotométricas e cromatográficas. Para definição das condições ideais de processo (tempo de agitação; temperatura e tipo de processo) aplicou-se o planejamento fatorial 2² , tendo como variáveis independentes: temperatura de 25 a 50°C e tempo de agitação de 30 a 90 min; e como resposta o teor de fenólicos e a capacidade de sequestrar o radical DPPH. O planejamento foi aplicado aos seguintes tipos de processo: a) Extração sequencial-solução hidroacetônica (80%), seguida da solução hidrometanólica (80%); b) Extração sequencial-solução hidrometanólica (80%), seguida da solução hidroacetônica (80%); c) Extração não sequencial-solução hidroacetônica (80%); d) Extração não sequencial-solução hidrometanólica (80%). Os extratos obtidos utilizando as condições ideais foram submetidos aos ensaios antioxidantes, de captura de radicais, em sistema modelo (DPPH; ABTS; ORAC) e aos ensaios antioxidantes em sistemas lipídicos (oxidação acoplada do B-caroteno/ácido linoléico; da peroxidação do acido linoleico – método tiocianato férrico; e do teste acelerado em estufa), e a cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC) para identificação dos polifenóis. A farinha de manga apresentou elevados teores de carboidratos, potássio, sódio, cálcio e fósforo, fenólicos totais, ácido ascórbico e β-caroteno. O planejamento fatorial definiu como ideal a extração sequencial (metanol 80%, seguido por acetona 80%) e as seguintes condições de processo: temperatura de 37,5ºC e 25ºC e tempo de extração de 30 e 60min; cujos extratos apresentaram, respectivamente, maior teor de fenólicos totais (2407,16μg. mL-1) (Ext-5), e maior capacidade de sequestro do radical DPPH (95%) (Ext-7). Os dois extratos exibiram expressiva capacidade antioxidante frente aos radicais livres ABTS, DPPH e ORAC; bem como em meio lipídico. A análise cromatográfica revelou a presença, nos dois extratos, de ácidos fenólicos (derivados do ácido benzóicos e cinâmicos), flavonóides e uma xantona, porém com diferenças quantitativas e qualitativas entre os perfis dos extratos. O ácido siríngico, ácido sináptico, a taxofolina, a isoquercetina e a mangiferina foram os constituintes majoritários nestes extratos. Assim, considerando a composição química e a ação antioxidante, o resíduo agroindustrial de manga Tommy Atkins surge como uma fonte potencial de antioxidante natural.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:06:12Z No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T13:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) Previous issue date: 2007-02-12 / The antioxidant substances prevent the oxidative damages during freezing/thawing processes and incubation period caused by ROS to sperm cells, improving the sperm parameters (vigor, motility and acrosome integrity), besides avoid damages to DNA. The aim of this study was to evaluate the effect of vitamin C and Trolox addition to diluent used to ram semen cryopreservation. The ejaculates of eleven rams were harvested by artificial vagina. After macrocospic (aspect, color and viscosity) and microscopica (motility and vigor) evaluation the pool was diluted in Tris-egg yolk (Exp. 1, 2 and 3) and Fiser (Exp. 2) and supplemented with antioxidant substances: G1) Diluent (Control); G2) Diluent + 600 mM/L of vitamin C; G3) Diluent + 60 mM/L of Trolox and G4) Diluent + 600 mM/L of vitamin C + 60 mM/L of Trolox. The freezing was done by automatized method using two curves: fast(C2= –0.5 oC/minute of 25 to 5 oC, and -12.5 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exps. 1 and 2, and slow (C1= –0.25 oC/minute of 25 to 5 oC, and –20 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exp. 2, and by conventional method (90 minutes), where after the refrigeration (5 °C) the samples were placed in liquid nitrogen during 10 minutes until reaching -120 oC (Exp. 2 and 3). The straws with 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 and 3) and 200 (Exp. 2) x 106 spermatozoa were transferred into the liquid nitrogen storage container (-196 oC). The semen samples were evaluated after thawing (0 min; Exp. 1, 2, and 3) and after 30 (Exp. 1 and 2) and 60 min (Exp. 1, 2 and 3) of the incubation at 37 ºC according to progressive motility, vigor, oxidative stress, acrosome and DNA integrity (Exp. 1, 2 and 3) and sperm kinetics (MT, MT, VSL,VCL, VAP, LIN, STR, ALH, and BCF; Exp. 3). In the Exp. 1, there was significant difference (p<0.05) among evaluation times (0, 30 and 60 min) in the parameters of acrosome integrity and oxidative stress for the groups supplemented with vitamin C and Trolox and the Control group (p>0.05). However, in the Exp. 2 the percentages of PM, vigor and acrosome integrity had significant difference (p<0.05) between incubation times (0 and 60 min), being that the group supplemented with Trolox (G3) presented greater cell percentages with oxidative stress (p<0.05) when compared to the vitamin C group (G2). On the Exp. 3, there was evidence that the incubation time intervened on the sperm kinetics (MT, MP, VSL, VAP, LIN and STR), acrosome integrity and oxidative stress of sperm cells, besides presenting negative correlation between acrosome integrity and oxidative stress for the G3 group(Trolox), positive correlation between acrosome integrity and progressive motility to the G2 group (vitamin C) and negative correlation between oxidative stress and LIN to the G2 group(vitamin C) after 60 minutes of incubation. However, it can be concluded that the incubation time intervenes negatively on in vitro viability of the sperm cells independent of the vitamin C and Trolox adition; using the conventional method of cryopreservation of ram semen diluted in Tris-egg yolk, the vitamin C addition provides less oxidative stress on the spermatozoa after post-thawing; Using the automatized method of cryopreservation of ram semen diluted in Fiser, it should be used the slow curve of refrigeration (0.25 ºC/min) without necessity of vitamin C (600μM/L) and Trolox (60μM/L) addition and; Based on the kinetics, acrosome integrity, and oxidative stress, the addition of ascorbic acid and Trolox do not minimizes the negative effects of the cryopreservation and the incubation of ram semen at temperature of 37 oC after thawing. / Os antioxidantes previnem os danos oxidativos durante processos de congelação/descongelação e período de incubação causados pelas ROS/RNS às células espermáticas, melhorando os parâmetros espermáticos (vigor, motilidade e integridade acrossomal), além de evitar danos ao DNA. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da adição de vitamina C e Trolox ao diluidor utilizado para criopreservação de sêmen ovino, utilizando o ejaculado de onze carneiros colhidos através de vagina artificial. Após avaliação macroscópica (aspecto, cor e viscosidade) e microscópica (motilidade e vigor), o pool foi diluído em Tris-gema (Exp. 1, 2 e 3) e Fiser (Exp. 2) e suplementado com antioxidantes: G1) Diluente (Controle); G2) Diluente + 600 mM/L de vitamina C; G3) Diluente + 60 mM/L de Trolox e G4) Diluente + 600 mM/L de vitamina C + 60 mM/L de Trolox. A congelação foi realizada pelo método automatizado utilizando duas curvas: Rápida (C2= –0,5 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a -12,5 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) para os Exp. 1 e 2 e Lenta (C1= –0,25 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a –20 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) apenas para o Exp. 2, e pelo método convencional (90 minutos), onde após a refrigeração (5 °C) as amostras foram colocadas em nitrogênio líquido por 10 minutos até atingirem –120 oC (Exp. 2 e 3). As palhetas foram envasadas com 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 e 3) e 200 (Exp. 2) x 106 espermatozóides e, em seguida, armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a descongelação (0 min; Exp. 1, 2, e 3) e depois de 30 (Exp. 1 e 2) e 60 min (Exp. 1, 2 e 3) de incubação a 37 ºC (30 e 60 minutos), quanto à motilidade progressiva (MP), vigor, estresse oxidativo, integridade de acrossoma e de DNA (Exp. 1, 2 e 3) e quanto a motilidade cinética espermática (MT, MP, VSL, VCL,VAP, LIN, STR, ALH, e BCF; Exp. 3). No Exp. 1, houve diferença significativa (p<0,05) entre os tempos de avaliação (0, 30 e 60 min) nos parâmetros de integridade de acrossoma e estresse oxidativo para os grupos tratados com vitamina C e Trolox e o grupo controle (p>0,05). Todavia, no Exp. 2 os porcentuais para MP, vigor e integridade de acrossoma diferiram (p<0,05) entre tempos de incubação (0 e 60 min), sendo que o grupo suplementado com Trolox (G3) apresentou maiores porcentuais de células com estresse oxidativo (p<0,05), quando comparado ao grupo suplementado com vitamina C (G2). Para o Exp. 3, constatou-se que o tempo de incubação interferiu na cinética espermática (MT, MP, VSL, VAP, LIN e STR), na integridade acrossomal e no grau de estresse oxidativo, além de apresentar correlação negativa entre integridade acrossomal e estresse oxidativo para o G3 (Trolox), correlação positiva entre integridade do acrossoma e MT para o G2 (vitamina C) e negativa para estresse oxidativo e LIN para o G2 (vitamina C), após 60 minutos de incubação. Contudo, pode-se concluir que o tempo de incubação interfere negativamente na viabilidade in vitro das células espermáticas independente da adição de vitamina C e Trolox; ao se utilizar o método convencional de congelação de sêmen ovino diluído em Tris-gema, a adição de vitamina C e Trolox proporciona menos estresse oxidativo às células espermáticas imediatamente após a descongelação; Ao se usar o método automatizado de congelação de sêmen ovino diluído em Fiser, deve-se utilizar a curva lenta de refrigeração (0,25 ºC/min), sem necessidade da suplementação de vitamina C (600 mM/L) e Trolox (60 mM/L) ao diluente e, Com base na avaliação da cinética, da integridade acrossomal e do estresse oxidativo, a adição de ácido ascórbico e Trolox não minimiza os efeitos negativos da criopreservação e da incubação de sêmen ovino à temperatura de 37 oC, pós-congelação.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-06T12:44:45Z No. of bitstreams: 1 Ellen Cordeiro Bento Silva.pdf: 751581 bytes, checksum: b7e4f33697071f1105ffa3e9cf312bdc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T12:44:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellen Cordeiro Bento Silva.pdf: 751581 bytes, checksum: b7e4f33697071f1105ffa3e9cf312bdc (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Aiming to evaluate the effect of adding different cryoprotectants (glycerol, ethylene glycol or acetamide) and antioxidants (resveratrol and quercetin) on in vitro viability of ram thawed semen samples, four adult males, Santa Ines crossbred, were used. After collect semen using an artificial vagina, aliquots of semen were evaluated macroscopic and microscopically and the pool of semen was divided and diluted in Tris-yolk medium, according to experiments and experimental groups. For the Experiment I, which evaluated the cryoprotectants addition, the experimental groups were classified as: G1 = Tris-yolk egg + 5% glycerol, G2 = Tris-yolk egg + 3% ethylene glycol, G3 = Tris-yolk egg + 5% ethylene glycol; G4 = Tris-yolk egg + 2% acetamide, G5 = Tris-yolk egg + 7% acetamide. However, the Experiment II, which were used the antioxidant treatments, was divided in three sub experiments: Exp 1 [resveratrol (0, 5, 10, 15 and 20 μg/mL, respectively, R0, R5, R10, R15 and R20)]; Exp 2 [quercetin (0, 5, 10, 15 and 20 μg/mL, respectively, Q0, Q5, Q10, Q15 and Q20)], and Exp 3 [without antioxidant (RQ0), 10 μg/mL of resveratrol (R10), 5 μg/mL of quercetin (Q5), and 10 μg/mL of resveratrol + 5 μg/mL of quercetin (R10Q5)]. After dilution, aliquots of semen were packed in straws (0.25 mL), frozen (-196 °C) and evaluated after thawing (37 oC/30 seconds) for progressive motility (PM), vigor, plasma membrane integrity (PMi), mitochondrial membrane potential (MMP) and acrosome integrity (ACi). It was found that in Experiment I, G1 showed higher PM (P<0.05) than G3, G4 and G5; vigor was higher (P<0.05) than G4 and G5; and PMi higher (P<0.05) than G2, G3, G4 and G5. However, there was no significant difference (P>0.05) among groups on the MMP and ACi parameters. In Experiment II, there was no difference among groups on the PM, vigor, PMi and ACi. MMP had significant difference (P<0.05) among experimental groups of their three sub experiments. So, in Exp 1, R0 group (36.67±8.01%) was higher than R20 (22.33±6.16%); in Exp 2, Q0 group (36.25±8.12%) was higher (P<0.05) than Q10 (9.33±6.54%), Q15 (6.25±5.98%) and Q20 (5.17±5.08%), and the Q5 (20.58±12.05%) was higher (P<0.05) than Q15 (6.25±5.98%) and Q20(5.17±5.08%) groups; and in Exp 3, RQ0 group (39.00±16.79%) was higher (P<0.05) than Q5 (18.00±13.76%) and R10Q5 (14.42±7.47%) groups. It can be concluded that glycerol (5%) is more effective in protecting ram spermatozoa submitted to deleterious effects of freezing than ethylene glycol (3 and 5%) and acetamide (2 and 7%); the addition of resveratrol and quercetin phenolic antioxidants, alone or in combination, reduces mitochondrial membrane potential of sperm frozen ram; and other studies should be performed to evaluate different concentrations and the effect of the addition on the fertility rate of ewes inseminated artificially. / Objetivando-se avaliar o efeito da adição de diferentes crioprotetores (glicerol, etileno glicol ou acetamida) e antioxidantes (resveratrol – R e quercetina – Q) na viabilidade in vitro de amostras congeladas de sêmen ovino, foram utilizados quatro reprodutores adultos, mestiços da raça Santa Inês. Após colheita com vagina artificial, alíquotas de sêmen foram avaliadas macroscópica e microscopicamente e o pool de sêmen foi subdividido e diluído em Tris-gema, de acordo com os experimentos e grupos experimentais. No Experimento I, no qual foram avaliados os crioprotetores, os grupos experimentais foram classificados como: G1 = Tris-gema + 5% de glicerol; G2 = Tris-gema + 3% de etileno glicol; G3 = Tris-gema + 5% etileno glicol; G4 = Tris-gema + 2% de acetamida; e G5 = Tris-gema + 7% de acetamida. Em contrapartida, o Experimento II, no qual foram utilizados os tratamentos com antioxidantes, foi dividido em três subexperimentos: Exp. 1 [resveratrol (0, 5, 10, 15 e 20 μg/mL, respectivamente, R0, R5, R10, R15 e R20)]; Exp. 2 [quercetina (0, 5, 10, 15 e 20 μg/mL, respectivamente, Q0, Q5, Q10, Q15 e Q20)]; e Exp. 3 [sem antioxidante (RQ0), 10 μg/mL de resveratrol (R10), 5 μg de quercetina/mL (Q5), e 10 μg/mL de resveratrol + 5 μg/mL de quercetina (R10Q5)]. As alíquotas de sêmen, devidamente diluidas, foram então envasadas em palhetas (0,25 mL) e congeladas (-196 oC), sendo avaliadas após descongelação (37 oC/30 segundos) quanto a motilidade progressiva (MP), vigor, integridade de membrana plasmática (iMP), potencial de membrana mitocondrial (PMM) e integridade do acrossoma (iAC). Constatou-se que no Experimento I, o G1 apresentou MP superior (P<0,05) a G3, G4 e G5; vigor superior (P<0,05) a G4 e G5 e iMP superior (P<0,05) a G2, G3, G4 e G5, sem evidenciar diferença significativa (P>0,05) para PMM e iAC. No Experimento II, não se verificou diferença significativa (P>0,05) entre os grupos para os parâmetros MP, vigor, iMP e iAC. O PMM apresentou diferença significativa (P<0,05) entre os grupos experimentais de seus três subexperimentos, de modo que no Exp. 1, o grupo R0 (36,67±8,01%) foi superior ao R20 (22,33±6,16%); no Exp. 2, o grupo Q0 (36,25±8,12%) foi superior (P<0,05) ao Q10 (9,33±6,54%), Q15 (6,25±5,98%) e Q20(5,17±5,08%), assim como o Q5 (20,58±12,05%) foi superior (P<0,05) ao Q15 (6,25±5,98%) e Q20 (5,17±5,08%); e no Exp. 3, o grupo RQ0 (39,00±16,79%) foi superior (P<0,05) ao Q5 (18,00±13,76%) e R10Q5 (14,42±7,47%). Conclui-se que o glicerol (5%) é mais eficaz na proteção dos espermatozoides ovinos submetidos aos efeitos deletérios da congelação do que o etileno glicol (3 e 5%) e a acetamida (2 e 7%), e que a adição dos antioxidantes fenólicos resveratrol e quercetina, isolados ou em associação, reduz o potencial de membrana mitocondrial de espermatozoides ovinos submetidos à congelação, devendo outros estudos serem realizados visando avaliar diferentes concentrações, bem como o efeito da adição na taxa de fertilidade de ovelhas inseminadas artificialmente.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T16:09:33Z No. of bitstreams: 1 Karen Mascaro Goncalves da Silva.pdf: 349376 bytes, checksum: df0b08aa2b38c52538bbf3e08f2e8413 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T16:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karen Mascaro Goncalves da Silva.pdf: 349376 bytes, checksum: df0b08aa2b38c52538bbf3e08f2e8413 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / To evaluate the effect of the season in the sperm quality of the equine semen and the use of antioxidant substances in the extender before and after thawed, three experiments was performed. In the Exp. 1, in natura semen of three Mangalarga Marchador stallions, in the breeding season (BS) and not breedii station (NBS), which had been frooze in machine using comrnercial extender FR.5 (Tris-egg yolk with glicerol 5%). After thawed at 37 'C for 30 sec.. the samples had been evaluated to volume (Vo),concentration (Co), total motility (TM) and progressive motility (MP), vigor (v), acrossomal (Aci) and DNA (DNAi) integrity, in BS and NBS, as well as proteins of sperm membrane of in natura semen. The Vo and the Co at NBS were higher than BS.TM and PM in the in natura semen in the BS were higher (P<0.05) than those at NBS. On the thawed semen. there was no difference at BS and NBS. In the same way, the V at in nahrra semen was higher (P<0.05) in the samples collect at BS. After thawing, there was no significant variation and the values were lower than to those at in natura semen. The Aci analysis was similar on in natura semen at two stations. The sperm cells have intact DNA at in natura samples, on both seasons, with values similar on the thawed semen at BS and NBS. It was observed 33 spots on the in natura semen at BS and 46 spots at NBS referring to sperm membrane proteins on the semen pool of each stdlion. The 36 to 97 kDa proteins were present only at BS. It was obsewed that the spots of membrane proteins of the three stallions were concentrated between 4 and 6 iso-electric points. On the Exp. 2, it was analysed the effect of the antioxidants on the fieezing INRA82-HEPES, on stallions of different breeds classified as fertile and subfertile.It was used INRA82-HEPES without antioxidants (TI), supplemented with 120 mM of Trolox (T2) or 2 mM of Phvate (T3). The thawed samples were evaluated according to PM, membrane integrity (Mi), Aci and DNAi, membrane stability (MS) and mitochondrial membrane potential (AY). It was observed that the fertile animals had higher TM and PM in relation to the subfertile animals, independent of the antioxidant addition. To comparing the sperm parameters of the stallions, in accordance with fertiíity and antioxidant substance addition, it was observed that the phvate addition pmvided results higher (P<0.05) than those of Trolox in TM. In the Exp. 3, it was observed the use of antioxidants after semen thawing on the same stallions and freezing technique of Exp. 1. After thawing, it was used the treatments: T1= 150 pL of semen + 150 pL of Tris (Control); T2= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 120 p W m L of Trolox; T3= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 3,5 mM of Pentoxyfiline; T4= 150 pL of semen + 150 pL of Tris + 3,5 mM of Pentoxyfiline + 120 pM/rnL of Tmlox, and the samples were analyzed at 0, 60 and 120 minutes of incubation (37 "C) according to TM, PM, Aci and DNAi. Significant dserences (P~0.05)w as seen due tothe incubation time period on TM and PM at 120 min., however no difference was seen in the treatment x time incubation interaction. Based on the results we hypothethized that proteins with molecular weights between 97 and 36 kDa can be possible fertility L pointers of sperm quality; the phvate addition improve TM of fertile and sub-fertile I stallions and the Trolox addition at extender after thawing of the equine semèn preserve I the TM and PM of the sperm cells submitted to incubation (37 'C) during 120 minutes. / Para avaliar o efeito da esta60 do ano na qualidade espermática do sêmen eqüino e uso de antioxidantes na diluiqão antes e depois da congelaqão, foram realizados três experimentos. No Exp. 1, colheu-se amostras de sêmen de três garanhóes da raça Mangalarga Marchador, na estação reprodutiva (ER) e estação não reprodutiva (ENR), as quais foram congeladas em máquina de congelação utilizando o diluidor comercial FR5 (Tris-gema com glicerol a 5%). Após descongelação a 37 "C por 30 segundos, as amostras foram avaliadas quanto a volume (Vo), concentração (Co), motilidades total (MT) e progressiva (MP), vigor (V), acrossoma (Aci) e DNA @NA) integ;os, na ER e ENR, assim como proteínas de membrana espermática do sêmen in natura. O VO e a CO na ENR foram maiores do que na ER. A MT e MP no sêmen in natura colhidos na ER foram superiores (P<0,05) aqueles da ENR. No sêmen descongelado, não se constatou diferença significativa entre as estações do ano. Da mesma forma, o V do sêmen in natura foi superior (P<0,05) nas amostras colhidas na ER. Após a descongelação, não houve variação significativa e os valores foram inferiores aqueles evidenciados in natura. Não houve diferença significativa para Aci, apresentando porcentual médio no sêmen descongelado semelhante ao in natura, nas duas estações, assim como na avaliação do DNA. Foram encontrados 33 e 46 pontos protéicos no sêmen in nattrra na ER e ENR, respectivamente, referentes as proteinas de membrana espermática do pool de sêmen de cada garanhão. A maioria das proteínas de 97 a 36 kDa estiveram presentes apenas na ENR. Observou-se também que os pontos protéicos de membrana dos três garanhões concentraram-se entre os pontos isoelétricos 4 e 6. No Exp. 2, analisou-se o efeito da aqão de antioxidantes ao diluidor de congelaqão INRA82-HEPES, sendo utilizados animais de raças distintas classificados como férteis e subférteis. Utilizou-se INRA82-HEPES sem antioxidantes (TI), acrescido de 120 mM de Trolox (T2) ou 2mM de Pimvato (T3). As amostras descongeladas foram avaliadas quanto a MP, integridade de membrana (Mi), Ai e DNAi, estabilidade membranar (EM) e potencial de membrana mitocondrial (AY) logo após a descongelação. Observou-se que os animais férteis apresentaram superioridade nas MT e MP em relação aos animais sub-férteis, independente da adição de antioxidante. Ao se comparar os parâmetros espedticos dos garanhões, de acordo com a fertilidade e a adiqão de substâncias antioxidantes, constatou-se que a adição do Piruvato proporcionou resultados superiores (P<0,05) aqueles obtidos com Trolox na MT. No Exp. 3, avaliou-se o uso de antioxidantes após a congelação do sêmen dos mesmos garanhões do Exp. 1, usando a mesma técnica de congelação. Após descongelação, utilizaram-se os tratamentos: T1= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris (Controle); T2= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 120 pIWmL de Trolox; T3= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 3,5 mM de Pentoxifilina e T4= 150 pL de sêmen + 150 pL de Tris + 3,5 mM de Pentoxifilina + de 120 pMImL Trolox, e asamostras foram analisadas aos 0,60 e 120 minutos de incubação (37 'C) quanto a MT, MP, Aci e DNAi. Em função do tempo de incubação das amostras verificaram-se diferenças (P<0,05) na MT e MP aos 120 minutos, porém na interação tratamento x tempo não foi constatada qualquer significância. Por conseguinte, julga-se que as proteínas entre 97 e 36 kDa podem ser possíveis indicadores de qualidade espermática; a adição de Piruvato melhora a motilidade total em garanhões férteis e subférteis; e a adição de Trolox ao diluente utilizado após a descongelaflo do sêmen equino preserva a MT e MP das células espermáticas submetidas a incubação a 37 'C durante 120 minutos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T15:47:28Z No. of bitstreams: 1 Lawrence de Oliveira Barros.pdf: 277797 bytes, checksum: 1f959a5c506b9c509d884cc0aa17f644 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T15:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lawrence de Oliveira Barros.pdf: 277797 bytes, checksum: 1f959a5c506b9c509d884cc0aa17f644 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The cryopreservation of equine semen represents an important applied reproductive biotechnology of this species. When exposed to low temperatures, spermatozoa suffer structural modifications, occurring oxidative stress when there is imbalance between the production of reactive oxygen species (- ROS) and the amount of antioxidants present in seminal plasma. The objective of this study was to analyze the effect of the addition of different concentrations of the antioxidants glutathione peroxidase (GPx) and cysteine in equine frozen semen medium. Five Quarter Horse stallions, with proven fertility were used. Semen samples were collected with artificial vagina and diluted in Botu Crio added with antixodants: G1= Control (without antioxidants); G2= 0.5 mM of N-Acetil-Cysteine; G3= 1 mM of N-Acetil-Cysteine; G4 = 1 U of Glutathione Peroxidase (GPx) and G5= U of Glutathione Peroxidase (GPx). Semen samples were packed straws (0.5 mL; 150 x 106 concentration of spermatozoa/straw), frozen in automated method and stored in liquid Nitrogen (– 196 °C). Semen samples were thawed (37 °C per 30 seconds) and submitted to sperm analyses (kinematic, plasma membrane and acrosome integrity, and potential of mitocondrial membrane), immediately after thawing (T0) and after 60 minutes (T60). Semen samples supplemented with GPx 5 U and cysteine 0.5 mM did not show difference (P>0.05) on the percentage of sperms with high percentage of potential of mitocondrial membrane, as well as with intact acrosome and plasma membrane between T0 and T60 times. Frozen samples with cisteine 1 mM showed high (P<0.05) of gametes with intact acrosome than those of GPx 1 and 5 U and cisteine 0.5mM. Spermatozoa with higher percentage of potential of mitocondrial membrane was founded in T60 (P<0.05) in stallion 5 than stallions 1 and 2. The sperm kinematic evidenced a high values of VCL and VAP (P<0.05) in control samples, in T0 than T60. In general, the stallion 4 presented high values (P<0.05) of kinematic parameters than other stallions. It can be concluded that addition of cysteine (1mM) in equine frozen semen medium preserved better the acrosome integrity and that the individual response of each stallion influence significantly the results of the sperm analysis. / A criopreservação de sêmen equino representa uma importante biotécnica aplicada ao manejo reprodutivo desta espécie. Quando exposto a baixas temperaturas, os espermatozoides sofrem modificações estruturais, ocorrendo estresse oxidativo quando há desequilíbrio entre a produção de ROS e a quantidade de substâncias antioxidantes presentes no plasma seminal. Objetivando-se analisar o efeito da adição de diferentes concentrações de glutationa peroxidase (GPx) e cisteína ao diluidor de congelação do sêmen de eqüinos, foram utilizados cinco garanhões da raça Quarto-de-Milha, com fertilidade comprovada. Amostras de sêmen foram colhidas com vagina artificial e diluídas em Botu Crio, acrescido de antioxidantes: G1= Controle (Sem antioxidantes); G2= 0,5 mM de N-Acetil-Cisteina; G3= 1 mM de N-Acetil-Cisteina; G4 = 1 U de Glutationa Peroxidase (GPx) e G5= 5 U de Glutationa Peroxidase (GPx). A seguir, as amostras de sêmen foram envasadas em palheta (0,5 mL; na concentração de 150 x 106 espermatozóides/palheta), congeladas utilizando o método automatizado e armazenadas em botijão criogênico à – 196°C. As amostras foram descongeladas (37 °C por 30 segundos) e submetidas às análises espermáticas (cinética, integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma e potencial de membrana mitocondrial), imediatamente após a descongelação (T0) e após 60 minutos (T60). Amostras de sêmen suplementadas com GPx 5 U e cisteína 0,5 mM não apresentaram diferenças (P>0,05) na porcentagem de espermatozóides com alto potencial de membrana mitocondrial, assim como com acrossomas e membrana plasmática íntegras, entre os tempos T0 e T60. Amostras congeladas com cisteína 1 mM apresentaram maior (P<0,05) porcentual de gametas com acrossomas íntegros do que os de GPx 1 e 5 U e cisteína 0,5 mM. Espermatozoides com alto potencial de membrana mitocondrial foram encontrados no T60 em maior (P<0,05) porcentual no garanhão 5 em relação aos garanhões 1 e 2. A cinética espermática evidenciou maiores (P<0,05) valores de VCL e VAP nas amostras controle, no T0 do que no T60. De maneira geral, o cavalo 4 apresentou maiores (P<0,05) valores cinéticos que os demais animais. Conclui-se que a adição de cisteína 1mM preservou melhor a integridade de acrossoma espermático, e que a resposta individual de cada garanhão influencia significativamente os resultados dos parâmetros analisados.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-21T13:36:14Z No. of bitstreams: 1 Paulo Cesar Vasco de Albuquerque Peixoto.pdf: 344249 bytes, checksum: dd3eefd193ab58cfcdb099090c32ef23 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T13:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Cesar Vasco de Albuquerque Peixoto.pdf: 344249 bytes, checksum: dd3eefd193ab58cfcdb099090c32ef23 (MD5) Previous issue date: 2008-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In order to evaluate the effect of adding antioxidants Trolox and Glutathione reduced on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of the breeds French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), through digital manipulation. Then proceeded to the evaluation macroscopic (color, appearance, volume) and microscopic (progressive motility, vigor, DNA, acrosome integrity and oxidative stress), followed by dividing the volume of semen on four aliquots, according to the experiments and experimental groups: Experimental 1 - G1 = Tris- Egg yolk (control group); G2 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox and G3 = Tris- Egg yolk + 300 uM of Trolox; Experimental 2 - G1 = Tris- Egg yolk (Control group); G2 = Tris- Egg yolk + 2 uM of GSH and G3 = Tris-Egg yolk + 5 uM of GSH; Experimental 3 - G1 = Tris- Egg yolk (control group); G2 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox; G3 = Tris- Egg yolk + 2 uM of GSH and G4 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox + 2 uM of GSH. The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine (TK3000) and stored in liquid nitrogen (-196 oC). After thawing a 37 oC and incubation during 60 minutes, it was detected that MP, vigor and sperm with intact acrosomes had significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In the Exp. 2, G2 and G3 groups had higher (P<0,05) percentage of sperm with oxidative stress. So, it can be concluded that the incubation time interfere on the in vitro viability of the sperm cells, independently of Trolox and GSH addition; and GSH, on the concentration of 2 and 5 uM, should be added to diluent of dog semen cryopreservation. / Com o objetivo avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozóides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), através de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica (cor, aspecto, volume) e microscópica (motilidade progressiva, vigor, concentração, integridade do acrossoma e do DNA, e estresse oxidativo), e divisão do volume de sêmen em quatro alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais. Experimento 1: G1 = Tris-gema (Grupo Controle); G2 = Tris-gema + 200uM de Trolox e G3 = Tris-gema + 300 uM de Trolox; Experimento 2: G1 = Tris-gema (Grupo Controle); G2 = Tris-gema + 2 uM de GSH e G3 = Tris-gema + 5 uM de GSH; Experimento 3: G1) Tris-Gema (Grupo Controle); G2) Tris-Gema + 200 uM de Trolox; G3) Tris-Gema + 2 uM de GSH; G4) Tris-Gema + 200 uM Trolox + 2 uM de GSH. As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação (TK 3000) e armazenadas em nitrogênio líquido (–196 oC). Após descongelação a 37 oC (0 min) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de MP, vigor e porcentual de espermatozóides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. II, os grupos experimentais (G2 e G3) apresentaram maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Conclui-se que o tempo de incubação interfere na viabilidade in vitro das células espermáticas, independente da adição de antioxidantes Trolox e/ou GSH; recomenda-se a adição do antioxidante GSH, nas concentrações de 2 uM e 5 uM, ao diluente utilizado para criopreservação do sêmen de cães.