?rea de concentra??o: Ci?ncias farmac?uticas. / Data de aprova??o ausente. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-08-01T18:51:24Z No. of bitstreams: 2 leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T16:34:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_figueiredo_cunha.pdf: 6440587 bytes, checksum: 74ac0e7008e3cbee954ff6c0815803c4 (MD5) Previous issue date: 2016 / As plantas, por serem fonte de subst?ncias biologicamente ativas, s?o utilizadas com a finalidade terap?utica desde o in?cio da civiliza??o humana. O Brasil, por sua vez, ? detentor de uma vasta diversidade biol?gica e possui uma grande quantidade de esp?cies vegetais com potencial medicinal. Dentre os diversos biomas do territ?rio brasileiro, o Cerrado representa o segundo maior, registrando-se muitas esp?cies medicinais. Apesar de sua rica biodiversidade muitas plantas end?micas deste bioma foram pouco estudadas do ponto de vista qu?mico e biol?gico. Consequentemente, ? necess?rio maior investimento em pesquisas com plantas medicinais para tratamento de doen?as, principalmente, as cr?nicas degenerativas e parasit?rias, como Doen?a de Chagas, Leishmanioses, C?ncer e as infec??es causadas por bact?rias e fungos, cujo o tratamento apresenta importantes limita??es. Assim, o objetivo deste estudo foi realizar a triagem fitoqu?mica e de atividades biol?gicas de extratos etan?licos de 12 esp?cies de plantas oriundas do Cerrado, coletadas no mun?cipio de Diamantina, Vale do Jequitinhonha/MG. Para a triagem fitoqu?mica preliminar destes extratos foram realizadas rea??es cromog?nicas, de precipita??es e an?lises em cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC). A citotoxicidade para c?lulas normais de mam?feros foi avaliada em fibroblastos de camundongos (L929). A linhagem celular de c?ncer de mama MDA-MB-231 foi a utilizada para a avalia??o da atividade antitumoral dos extratos. A avalia??o da atividade antitripanossomat?deo foi realizada sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de Trypanossoma cruzi e, sobre as formas promastigotas das cepas BH46 de Leishmania (leishmania) infantum e cepa M2269 de Leishmania (leishmania) amazonensis. Para a avalia??o destas atividades foi empregada a t?cnica colorim?trica de MTT. A avalia??o das atividades antibacteriana e antif?ngica foi realizada por meio da determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima (CIM), empregando a t?cnica colorim?trica da Resazurina. As esp?cies de bact?rias utilizadas foram Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Na atividade antif?ngica foram utilizadas quatro esp?cies de leveduras (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei e Candida tropicalis) e duas esp?cies de fungos filamentosos (Aspergillus niger e Penicillium expansum). Dos 13 extratos avaliados com rela??o a citotoxicidade sobre fibroblastos de camundongos da linhagem L929, todos apresentaram algum grau de citotoxicidade. Alguns destes extratos apresentaram elevada toxicidade sobre esta linhagem celular, sendo que o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus foi o mais t?xico. Na avalia??o da atividade antitumoral, com exce??o do extrato etan?lico das folhas de P. rigida, todos os outros extratos avaliados apresentaram atividade. Destes o mais promissor tamb?m foi o extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade tripanocida sobre formas epimastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi, nove extratos foram ativos contra este parasito. Destes os mais promissores foram os extratos das folhas de A. aculeata e das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade leishmanicida para a cepa M2269 os extratos etan?licos das folhas de E. erythropappus e das folhas de B. oxyclada apresentaram como os mais promissores e, para a cepa BH46 o extrato etan?lico de toda esp?cie T. catahartica foi o mais promissor, seguido tamb?m do extrato etan?lico das folhas de E. erythropappus. Na avalia??o da atividade antibacteriana somente os extratos etan?licos das folhas de B. oxyclada, de P. tomentosa e S. rugosa foram ativos e, as ?nicas bact?rias sens?veis foram P. aeruginosa e S. aureus. Destes o extrato etan?lico de P. tomentosa inibiu um maior n?mero de bact?rias com a??o bactericida. Os fungos filamentosos, A. niger e P. expansum, se mostraram resistentes a todos os extratos avaliados e C. krusei foi a levedura mais sens?vel. Os extratos das folhas de B. oxyclada e das folhas de P. tomentosa foram os extratos que inibiram o maior n?mero de esp?cies f?ngicas com os menores valores de CIM. Atrav?s destes resultados, sugere-se que os extratos etan?licos das folhas de Eremanthus erythropappus, de Peixotoa tomentosa e de Banisteriopsis oxyclada apresentaram o maior n?mero de atividades biol?gicas e com os melhores resultados, o que torna estas esp?cies as mais promissoras como fontes potenciais de mol?culas bioativas para o tratamento de C?ncer, Doen?a de Chagas, Leishmanioses e infe??es bacterianas e f?ngicas, necessitando de mais estudos a fim de identificar as subst?ncias respons?veis por tais atividades e pela citotoxicidade e, valid?-las atrav?s de outros modelos in vitro e in vivo. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2016]. / Plants are a potencial source of biologically active substances and they are used for therapeutic purposes since the beginning of human civilization. Brazil, in turn, holds a vast biological diversity and has a lot of plant species with medicinal potential. Among the various biomes of Brazil, the Cerrado is the second largest, registering many medicinal species. Consequently, it is necessary to invest more in research of medicinal plants as possible new treatments, especially for the degenerative and chronic disease such as Chagas, Leishmaniasis, cancer and infections caused by bacteria and fungi, whereof treatment has big limitations. The objective of this study was the phytochemical screening and biological activities studies of ethanolic extracts of 12 plants species from the Cerrado, collected in the municipality of Diamantina, Vale do Jequitinhonha / MG.For the preliminary phytochemical screening were made chromogenic and precipitation reactions and analysis in thin-layer chromatography. Cytotoxicity for normal mammalian cells was evaluated in mouse fibroblasts (L929) and the cell line of breast cancer MDA-MB-231 was used to analyze the antitumor activity of the extracts. The evaluation of antitripanossomatideo activity was performed using epimastigotas of Colombiana Trypanosoma cruzi strain and promastigotes of BH46 Leishmania (Leishmania) infantum strain and M2269 Leishmania (Leishmania) amazonensis strain. The analyze of these activities were based at the colorimetric MTT technique. The evaluation of antibacterial and antifungal activities was performed by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) employing the colorimetric Resazurin technique. Species of bacteria used were Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. In the antifungal activity were used four species of yeast (Candida albicans, Candida famata, Candida krusei and Candida tropicalis) and two species of filamentous fungi (Aspergillus niger and Penicillium expansum). Of the 13 extracts evaluated for cytotoxicity using the L929 strain mouse fibroblasts, all they had some cytotoxicity level. Some of these extractsthen showed a high toxicity in this assay cell line, wherein the ethanolic extract of E. erythropappus leaves was the most toxic. In the evaluation of antitumor activity all extracts showed activity, exception for the extract of P. rigida leaves. Among these the most promising was either the ethanolic extract of the leaves of E. erythropappus. Evaluation of trypanocidal activity using Colombian strain of T. cruzi epimastigotas, present active for nine extracts against this parasite, been the A. aculeata and leaves E. erythropappus leaf extract the most promising. Leishmanicidal activity for the M2269 strain of E. erythropappus B. oxyclada leaf extract presented as the most promising and, for the BH46 strain the T. catahartica role plant extract shows the best results, followed by the E. erythropappus leaf extract. In the antibacterial activity assay only the B. oxyclada, P. tomentosa and S. rugosa leaf extracts were active, and the only for P. aeruginosa and S. aureus. Among these the P. tomentosa extract inhibited a greater number of bacteria with bactericidal action. Filamentous fungus A. niger and P. expansum were resistant to all extracts evaluated and C. krusei was the most sensitive yeast. P. tomentosa and B. oxyclada leaf extracts inhibited more yeast species but with the lowest MIC values. Due these results, it is suggested that the E. erythropappus of P. tomentosa and B. oxyclada leaf ethanolic extracts showed the greatest of biological activities, making these the most promising species as potential sources of bioactive molecules for the treatment of cancer, Chagas disease, Leishmaniasis and bacterial and fungal infections, yet requiring further studies to identify the substances responsible for such activities and cytotoxicity and validate them through other models in vitro and in vivo.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniasis is a complex of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted to humans and other vertebrate hosts through the bite of an infected phlebotomine insect. Currently, all drugs used in the treatment of this disease have low efficacy, high toxicity and are associated with parasitic resistance. In this sense, scientific research that indicates a new compounds with leishmanicidal activity are quite promising. The objective of this study was to evaluate in vitro the leishmanicidal activity of the crude ethanol extract of C. blanchetianus on L. amazonensis and L. infantum as well as their toxic and immunomodulator effect on murine macrophages. Promastigotes in the logarithmic growth phase were subjected to treatment with different concentrations of the extract for 24 and 72 hours at 26ºC, and the viability was measured by the method of Alamar Blue . A greater inhibition was observed in L. amazonensis with an IC50 of 73.6 μg/ml in 24 hours of incubation and 42.6 μg/ml at 72 hours. In L. infantum extract showed an IC50 of 208.7 μg/ml in 24 hours and 108.9 μg/ml at 72 hours. Regarding the reduction of viability, L. amazonensis showed a death percentage of 68.8% with 100 μg/ml of the extract after 24 hours of treatment and approximately 100% after 72 hours, whereas for L. infantum this level of inhibition was not seen with 250 μg/ml of the extract. For the analysis of antiamastigota activity, infected macrophages were treated with different concentrations of the extract and incubated for 72h at 37° C, and the rate of infection was determined by staining method with hematologic pigment and counts in optical microscopy. It was found a higher dose-dependent inhibition in L. amazonensis with an IC50 of 3.10 μg/ml. In L. infantum there was a lower activity of the extract which present an IC50 of 8.83 μg/ml. At lower concentration tested (3 μg/ml) there was a reduction in the viability of L. amazonensis around 44%, while in L. infantum, this level of inhibition was only observed with 7 μg/ml of extract. The cytotoxicity was performed on murine macrophages incubated with different concentrations of the extract for 72 hours at 37°C and the viability was measured by Alamar Blue method. The LD50 observed was 83.79 μg/ml and the selectivity index calculated was 27 to L. amazonensis and 9.5 for L. Infantum, revealing a higher toxicity of the extract in the parasites than in macrophages.Treatment with the extract not modulated the macrophage for nitric oxide synthesis, as verified by Griess reaction. However, interfered in the morphology of promastigote forms, being observed parasites with a rounded body and/or double scourge. Therefore, the data presented in this study indicate that the ethanol extract of C. blanchetianus presents leishmanicidal activity on promastigote and amastigote forms of L. amazonensis and L. infantum, being more effective against the species L. amazonensis, especially on the amastigote form, without causing, however, toxicity to the host cell. / A leishmaniose é um complexo de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas ao ser humano e outros hospedeiros vertebrados por meio da picada de um inseto flebotomíneo infectado. Atualmente, todos os medicamentos utilizados no tratamento dessa doença apresentam baixa eficácia, alta toxicidade e estão associados à resistência parasitária. Nesse sentido, pesquisas científicas que indiquem novos compostos com atividade leishmanicida são bastante promissoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a atividade leishmanicida do extrato etanólico bruto de C. blanchetianus sobre L. amazonensis e L. infantum, bem como o seu efeito tóxico e imunomodulador sobre macrófagos murinos. Promastigotas na fase logarítmica de crescimento foram submetidos ao tratamento com diferentes concentrações do extrato por 24 e 72 horas a 26ºC, e a viabilidade foi mensurada por meio do método de Alamar Blue . Uma maior inibição foi vista em L. amazonensis com um IC50 de 73,6 μg/ml em 24 horas de incubação e de 42,6 μg/ml em 72 horas. Em L. infantum o extrato apresentou um IC50 de 208,7 μg/ml em 24 horas e de 108,9 μg/ml em 72 horas. Em relação à redução da viabilidade, L. amazonensis apresentou um percentual de morte de 68,8%, com 100 μg/ml do extrato, em 24 horas de tratamento e aproximadamente 100% em 72 horas, enquanto que em L. infantum este nível de inibição só foi visto com 250 μg/ml do extrato. Para a análise da atividade antiamastigota, macrófagos infectados foram tratados com diferentes concentrações do extrato e incubados por 72h a 37ºC, e o índice de infecção foi determinado por coloração com corante hematológico e contagem em microscopia óptica. Verificou-se uma inibição dose-dependente maior em L. amazonensis com um IC50 de 3,10 μg/ml. Em L. infantum houve uma menor atividade do extrato que apresentou um IC50 de 8,83 μg/ml. Na menor concentração testada (3 μg/ml) houve uma redução na viabilidade de L. amazonensis por volta de 44%, enquanto que em L. infantum, este nível de inibição só foi observado com 7 μg/ml do extrato. A avaliação da citotoxicidade foi realizada em macrófagos murinos, incubados com diferentes concentrações do extrato por 72h a 37ºC e a viabilidade foi mensurada pelo método de Alamar Blue . O LD50 observado foi de 83,79 μg/ml e o Índice de Seletividade calculado foi de 27 para L. amazonensis e 9,5 para L. Infantum, revelando uma maior toxicidade do extrato nos parasitos do que nos macrófagos. O tratamento com o extrato não modulou o macrófago para a síntese de óxido nítrico, como verificado pela Reação de Griess. Contudo, interferiu na morfologia das formas promastigotas, sendo observados parasitos com corpo arredondado e/ou flagelo duplo. Portanto, os dados apresentados nesse estudo indicam que o extrato etanólico de C. blanchetianus apresenta atividade leishmanicida sobre as formas promastigota e amastigota de L. amazonensis e L. infantum, sendo mais efetivo frente à espécie L. amazonensis, principalmente sobre a forma amastigota, sem causar, no entanto, toxicidade à célula hospedeira.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-02T14:22:40Z No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-09-06T14:17:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T14:17:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade leishmanicida de análogos de alcalóides marinhos e bioisósteros do resveratrol em L. amazonensis. Foram testados 12 análogos de alcalóides marinhos 3-alquil piridinas e 7 biosósteros do resveratrol, sendo 4 complexados a ouro, em formas promastigotas de L. amazonensis e em macrófagos peritoneais. Em ambos os casos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico do MTT. Os compostos que apresentaram significante atividade antipromastigota e foram seletivos para o parasito, em comparação com a célula hospedeira, foram testados em amastigotas intracelulares de L. amazonensis, cujo efeito dos compostos foi avaliado pela contagem das formas intracelulares. Além disso, foi coletado o sobrenadante para a dosagem de óxido nítrico (NO), através do método de Griess. A maioria dos compostos testados apresentou efeito antipromastigota, destacando os compostos 4 e 5 do grupo dos análogos de alcalóides marinhos, com CI50 de 1,07 e 1,09 µM, respectivamente. Em relação à série dos bioisósteros do resveratrol, destacam-se aqueles complexados a ouro, sendo o composto 17 o mais ativo (CI50 de 5,18 µM). Todos os compostos que foram testados em amastigotas apresentaram atividade, destacando-se, o composto 10 (CI50 = 0,27 µM), dentre os análogos de alcalóides marinhos, e o composto 19, da série dos bioisósteros do resveratrol complexados a ouro (CI50 = 5,77 µM). A maioria dos análogos de alcalóides marinhos mostrou significante toxicidade em macrófagos peritoneais, enquanto somente dois bioisósteros do resveratrol complexados a ouro foram tóxicos para a célula hospedeira. No entanto, todos os compostos testados em amastigotas apresentaram significante seletividade pelo parasito em seu estágio intracelular. Com relação à especificidade das moléculas, os análogos marinhos foram específicos para amastigotas, sugerindo que o alvo desses compostos é exclusivo desse estágio, já a maioria dos bioisósteros do resveratrol complexados a ouro mostraram efeito semelhante em formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis, sugerindo alvos comuns desses compostos nos dois estágios do parasito. Nenhum dos compostos testados induziu significante produção de NO por macrófagos infectados com L. amazonensis, sugerindo que essa molécula não está diretamente relacionada ao efeito antiparasitário. Em resumo, o trabalho mostrou que os compostos testados possuem significativo potencial leishmanicida e abrem perspectivas para estudos em modelos in vivo, bem como estudo do mecanismo de ação. / The aim of this study was to evaluate the leishmanicidal activity of marine alkaloid analogues and bioisosteres of resveratrol in L. amazonensis. We tested 12 3alkylpyridine marine alkaloid analogues of and 7 bioisosteres of resveratrol, 4 complexed to gold, in promastigotes of L. amazonensis and in peritoneal macrophages. In both cases, the viability of the cells was checked using the MTT colorimetric method. Compounds with significant antipromastigote activity and selectivity by the parasite, when compared to the host cell, were tested on intracellular amastigotes of L. amazonensis, which effect of the compounds was determined by counting the number of intracellular parasites. Supernatant was also collected for measure of the nitric oxide (NO), by the Griess method. Most compounds showed antipromastigote effect, especially compounds 4 and 5 of the marine alkaloid analogues, with IC50 of 1.07 and 1.09 µM, respectively. Regarding the bioisosteres of resveratrol, the gold complex 17 was the most active (IC50 of 5.18 µM). All compounds tested in amastigotes exhibited activity, including the compound 10 (IC50 = 0.27 µM), among marine alkaloid analogues, and the compound 19, among gold complexes with bioisosteres of resveratrol (IC50 = 5.77 µM). Most marine alkaloid analogues showed significant toxicity in peritoneal macrophages, while only two bioisosteres of resveratrol complexed to gold were toxic to host cell. However, all compounds tested in amastigotes showed significant selectivity for intracellular parasite. Regarding the specificity of the molecules, marine analogues were specific to amastigote forms, suggesting that the target of these compounds is unique to this stage, while most of bioisosteres of resveratrol complexed to gold showed similar effect on promastigotes and amastigotes of L. amazonensis, suggesting common targets of these compounds in both stages of the parasite. None of compounds induced significant NO production by L. amazonensis-infected macrophages, suggesting that this molecule is not directly related with the antiparasitic effect. In summary, the study showed that the compounds have significant potential leishmanicidal and encourages in vivo studies, as well as the action mechanism.

The arsenal of drugs available for treating Leishmania infections is limited and presents high toxicity. Therefore, new, effective, and less toxic leishmaniasis treatments are still needed. In this work, two series of derivatives, containing a semicarbazone or hydrazide-N- acylhydrazone scaffolds was designed and synthetized as protease inhibitors. From these series, derivatives LASSBio 1483, LASSBio 1705, LASSBio 1707 and LASSBio 1736 highlighted, showing in vitro and in vivo leishmanicidal activities. Thus, these derivatives presented a potent leishmanicidal activity against amastigotes of L. major (IC50 of 1.5 µΜ to LASSBio 1483, 8.5 µΜ to LASSBio 1705 and 1.,9 µΜ to LASSBio 1707) , L. amazonensis (IC50 of 3.5 µΜ to LASSBio 1483 and 84.0 µΜ to LASSBio 1736), L. braziliensis (IC50 of 31.7 µΜ to LASSBio 1483, 8.0 µΜ to LASSBio 1705 and 5.3 µΜ to LASSBio 1736) and L. chagasi (IC50 of 53.3 µΜ to LASSBio 1707 and 57,6 µΜ to LASSBio 1736). Also, the leishmanicidal activity of derivatives LASSBio-1483, LASSBio 1705, LASSBio 1707 and LASSBio 1736 were mediated via induction of apoptosis as evidenced by externalization of phospholipids, despolarization of mitochondrial membrane and elevation of activation of caspases. The ultrastructural morphological effects against the parasite of LASSBio 1483 and LASSBio 1736 against L. chagasi promastigotes were also verified. The treatment of L. amazonensis -infected BALB/c mice with derivatives LASSBio 1483 (effect of 30.5% and 33.3% in infected ear, by p.o and i.p., respectively), LASSBio 1705 1483 (effect of 58.5% in infected ear and 61.1% in lymph node, i.p.), LASSBio 1707 (effect of 56.5% in lymph node, i.p.) and LASSBio 1736 (effect of 53.6% in infected ear, i.p.)or the treatment of L. chagasi - infected hamsters with LASSBio 1707 (effect of 53.6, i.p.)and LASSBio 1736 (effect of 46.0%, i.p.) led to a significant reduction of parasite burden when compared to controls that received PBS. The treatment with these derivatives did not result in hepatic or renal toxicity in these animals models of leishmaniasis. These data make LASSBio 1483, LASSBio 1705, LASSBio 1707 and LASSBio 1736 new lead-candidates against cutaneous and visceral leishmaniasis. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O arsenal de fármacos disponíveis para o tratamento das infecções por Leishmania spp. é limitada e de elevada toxicidade. Portanto, novos tratamentos, eficazes e menos tóxicos para leishmaniose ainda são necessários. Neste trabalho, duas séries de derivados contendo as subunidades semicarbazona ou hidrazida-N-acilhidrazona foram desenhados e sintetizados como inibidores de proteases. A partir destas séries, os derivados LASSBio 1483, LASSBio 1705, LASSBio 1707 e LASSBio 1736 se destacaram, mostrando atividade leishmanicida in vitro e in vivo . Assim, esses derivados apresentaram atividade leishmanicida potente contra amastigotas de L. major (CI 50 de 1,5 µΜ para LASSBio 1483, 8,5 µΜ para LASSBio 1705 e 15,9 µΜ para LASSBio 1707) , L. amazonensis (CI 50 de 3,5 µΜ para LASSBio 1483 e 84,0 µΜ para LASSBio 1736) , L. braziliensis (CI 50 de 31,7 µΜ para LASSBio 1483, 8,0 µΜ para LASSBio 1705 e 5,3 µΜ para LASSBio 1736) e L. chagasi (CI 50 de 53,3 µΜ para LASSBio 1707 e 57,6 µΜ para LASSBio 1736). Além disso, a atividade leishmanicida dos derivados LASSBio 1483, LASSBio 1705, LASSBio1707 e LASSBio 1736 foi mediada via indução de apoptose como evidenciado pela externalização de fosfolipídeos de membrana, despolarização da membrana mitocondrial e ativação de caspases. Os efeitos morfológicos ultra-estruturais de LASSBio 1483 e LASSBio 1736 em promastigotas de L. chagasi também foram verificados. O tratamento de camundongos BALB/c infectados por L. amazonensis com os derivados LASSBio 1483 (efeito de 30,5% e 33,3% na orelha infectada, por v.o. e i.p., respectivamente), LASSBio 1705 (efeito de 58,1% na orelha infectada e de 61,1% no linfonodo, i.p.) , LASSBio 1707 (efeito de 56,5% no linfonodo, i.p.) e LASSBio 1736 (efeito de 38,8% na orelha infectada , i.p.) ou o tratamento de hamsters infectados por L. chagasi com LASSBio 1707 (efeito de 53,6%, i.p.) e LASSBio 1736 (efeito de 46,0%, i.p.), na dose de 30 µmols/kg/dia, levaram a uma redução significativa da carga parasitária quando comparados aos controles que receberam PBS. O tratamento com estes derivados não resultaram em toxicidade hepática ou renal nestes modelos animais de leishmaniose. Estes dados fazem de LASSBio-1483, LASSBio-1705, LASSBio-1707 e LASSBio-1736 novos candidatos a protótipos a fármacos contra leishmaniose cutânea e visceral

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Richard Pereira Dutra.pdf: 10110933 bytes, checksum: 21ac06ca1d01c91986e9b53d029d42ea (MD5) Previous issue date: 2012-09-19 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / Melipona fasciculataSmith, occurs in Brazil, especially in the state of Maranhão, where it is popularly known as tiúba . The tiúba produces honey, wax, pollen and geopropolis. The aim of this study was to evaluate the leishmanicidal activity of different samples of geopropolis Melipona fasciculata, aiming to produce a product with leishmanicidal activity. Geopropolis samples were collected in different localities of the municipality of Fernando Falcão-MA and subjected to extractive process withhydroalcoholic solution, obtaining the hydroalcoholic extracts of geopropolis (HEG1, and HEG2 HEG3). The extracts were used for in vitro evaluation of leishmanicidal action, using promastigotes of Leishmania amazonensis. The HEG1, with the highest leishmanicidal activity, was subjected to liquid-liquid partition, resulting in hexanefraction (FH), chloroform fraction (CF), ethyl acetate fraction (AF) and hydroalcoholic fraction (FHA). The fractions were assessed for leishmanicidal activity and antioxidant, and also analyzed for total polyphenol concentration and chemical composition. Extracts of geopropolis showed inhibitory concentration (IC50) between 47-229 μg/mL. The most active extract was EHG1 and its most active fraction was the FA with IC50 of 29.89 μg/mL, while the IC50 FC fractions and FHA showed IC50of 43.21 μg/mL and 49.48 μg/mL, respectively. The HEG1 and fractions leishmanicidalshowed antioxidant activity towards DPPH and high levels of total polyphenols. The hexane fraction showed no leishmanicidal action, and had the lowest antioxidant concentrations of polyphenols. The extracts showed phenolic acids, organic acids, fatty acids, anthraquinones, sugars and alcohols, the analysis by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The most active fraction (AF) showed mainly gallic acid, while the other fractions were identified fatty acids, organic acids, anthraquinones, diterpenes, triterpenes, steroids, sugars and alcohols. In the analysis by High performance liquidchromatographycoupled tomass spectrometry (HPLC-MS) extract the most active fraction were identified phenolic acids, ellagitannins and gallotannins, confirming the data obtained by GC-MS. Based on the results obtained was a byproduct that when tested under the same conditions also showed leishmanicidal action. In conclusion, the leishmanicidal activity of geopropolis Melipona fasciculata is likely to be related to the presence of gallic acid derivaties and ellagic. / Melipona fasciculataSmith, ocorre no Brasil, especialmente no estado do Maranhão, onde é popularmente conhecida como tiúba. A tiúba produz mel, cera, geoprópolis e acumula pólen. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade leishmanicida de diferentes amostras da geoprópolis de Melipona fasciculata, visando à obtenção de um produto com atividade leishmanicida. As amostras de geoprópolis foram coletadas em diferentes localidades do município de Fernando Falcão-MA e submetidas a processo extrativo com solução hidroalcoólica, obtendo-se os extratos hidroalcoólicos da geoprópolis (EHG1, EHG2 e EHG3). Os extratos foram utilizados para avaliação in vitro da ação leishmanicida, utilizando formas promastigotas de Leishmania amazonensis. O EHG1, que apresentou maior atividade leishmanicida, foi submetido à partição líquido-líquido, resultando nas frações hexânica (FH), fração clorofórmica (FC), fração acetato de etila (FA) e fração hidroalcoólica (FHA). As frações foram avaliadas quanto à atividade leishmanicida e antioxidante, e ainda analisadas quanto à concentração de polifenóis totais e composição química. Os extratos da geoprópolis apresentaram concentração inibitória (CI50) entre 47 a 229 μg/mL. O extrato mais ativo foi EHG1 e a sua fração mais ativa foi a FA com CI50 de 29,89 μg/mL, enquanto as frações FC e FHA apresentaram CI50 de 43,21 μg/mL e 49,48 μg/mL, respectivamente. OEHG1 e as frações leishmanicidas apresentaram atividade antioxidante frente ao radical DPPH e elevados teores de polifenóis totais. A fração hexânica não apresentou ação leishmanicida, antioxidante e apresentou as menores concentrações de polifenóis. Os extratos apresentaram ácidos fenólicos, ácidos orgânicos, ácidos graxos, antraquinonas, açúcares e álcoois, nas analises por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM). A fração mais ativa (FA) apresentou principalmente o ácido gálico, enquanto nas demais frações foram identificados ácidos graxos, ácidos orgânicos, antraquinonas, diterpenos, triterpenos, esteróides, açúcares e álcoois. Nas análises por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas (CLAE-EM) do extrato fração mais ativos foram identificados ácidos fenólicos, galotaninos e elagitaninos, corroborando com os dados obtidos por CG-EM. Com base nos resultados foi obtido um bioproduto que quando testado nas mesmas condições também apresentou ação leishmanicida. Concluímos que a atividade leishmanicida e antioxidante da geoprópolis de Melipona fasciculataestãopossivelmente relacionadas à presença de derivados dos ácidos gálico e elágico.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese M nodosa Final I.pdf: 3081089 bytes, checksum: 1751ddbcf974cb6b37ba7e8b90043507 (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / Memora nodosa (Silva Manso) Miers is a native savannah plant popularly used for wound cicatrization (leaves and stems) and for treating abdominal pains and scabies (roots). The purpose of this work is to study the morphoanatomy and determine the composition and variability of the constituents of the essential oil obtained from the M. nodosa leaves, as well as its antimicrobial, leishmanicidal, cicatrizing activity and toxicity. Morphologically, M. nodosa is a bush with clumps of straight or curved stems. It has a deep, pivoting root and presents a chandelier shaped structure in the upper part from where the stems sprout. It presents compound, bipinnate, imparipinnate, oppositely crossed leaves. The inflorescence is racemose with golden-yellow flowers. It is characterized by septifrague capsule type fruit with replum and winged seeds. Anatomically the leaves are hypostomatic with predominantly paracytic stomates. The epidermis is uniseriate with a thick cuticle and glandular trichomes throughout the structure of the young leaves. The essential oil from the M. nodosa leaves collected from seven different locations in the Brazilian savannah was analyzed by GC(FID) and GC/MS. Five substances were identified, benzaldehyde and 1- octene-3-ol were the main constituents. Two different classes regarding sampling location and constituents were identified by means of the principal component and grouping analyses. The antimicrobial activity of the ethanolic extracts from leaves, stems, roots and of essential oil from leaves, and the fractions obtained from the roots, were assessed against Grampositive and Gram-negative bacteria, as well as the Candida albicans fungus, using well diffusion test and the agar dilution method. The ethanolic extract from the roots presented small antimicrobial activity while the hexane and dichloromethane fractions obtained from this extract presented MIC 0.39 mg/mL and 0.78 mg/mL against a number of Gram-positive bacteria and the Candida albicans fungus. The essential oil presented MIC 0.78 mg/mL to 1.56 mg/mL. The antimicrobial activity of the essential oil was the result of synergic action between the benzaldehyde, 1-octene-3-ol, 1-octanol, linalool and the mandelonitrile, constituents of the essential oil. Promastigote forms of Leishmania chagasi were used for the leishmanicidal assessment and it was verified that the ethanol extract from the leaves presented an IC50 of 93.2 μg/mL and from the roots presented an IC50 of 95.87 μg/mL. The hexane fraction from the roots presented an IC50 of 13.51μg/mL. A mixture of β-sitosterol and stigmasterol was isolated and identified in the hexane fraction obtained from the ethanol extract from the roots. This mixture was tested against L. chagasi resulting in an IC50 of 69.79 μg/mL. The cicatrizing activity of the ethanol extract from the leaves and roots was assessed on skin wounds in rats, and it be noted reepithelization occurred faster only in the group treated with a 2% aqueous solution of the ethanol extract from the roots. This action may be related to the alantoine isolated in the ethanol extract from the roots. The toxicity assessment of the ethanol extracts from roots, leaves and hexane fraction obtained from M . nodosa roots, tested on rats, mice and Artemia salina proved that this plant is not potentially toxic. In conclusion, according to the tests performed, the best results were obtained with ethanolic extract and it presented antimicrobial, wound cicatrization and leishmanicidal activities. Hexane and dichloromethane fractions obtained from roots extract presented antimicrobial activity against Gram-positive bacteria and the Candida albicans fungus and hexane fraction strong leishmanicidal activity. / A Memora nodosa (Silva Manso) Miers é uma planta nativa do Cerrado e utilizada popularmente na cicatrização de feridas (folhas e caules) e no tratamento de dores abdominais e sarnas (raízes). Este trabalho objetivou realizar o estudo morfoanatômico, determinar a composição química e a variabilidade dos constituintes do óleo essencial obtido das folhas e avaliar a atividade antimicrobiana, leishmanicida e cicatrizante e a toxicidade dos extratos e frações da M. nodosa. Morfologicamente, observou-se que a M. nodosa é um arbusto com caules retos ou escandentes reunidos em touceiras. A raiz é pivotante, profunda e apresenta, na parte superior, uma estrutura em candelabro de onde se originam os caules. As folhas são opostas cruzadas, recompostas, bipinadas, imparipinadas, com foliólulos lanceolados. A inflorescência é racemosa com flores de cor amarelo-ouro. O fruto é do tipo cápsula septífraga com abertura longitudinal e sementes aladas. Anatomicamente, as folhas são hipoestomáticas, com estômatos predominantemente paracíticos. A epiderme é unisseriada, com cutícula espessa em todas as estruturas das folhas. Tricomas glandulares e tectores são observados nas folhas e caules jovens. O óleo essencial das folhas da M. nodosa coletadas em sete localidades diferentes do Cerrado brasileiro foi analisado por CG (DIC) e CG/EM. Cinco substâncias foram identificadas, sendo o benzaldeído e o 1-octen-3-ol os principais constituintes. A análise dos componentes principais e dos agrupamentos possibilitou a distinção de duas classes diferenciadas em relação ao local da amostragem e aos constituintes. As atividades antimicrobianas dos extratos etanólicos das folhas, dos caules e das raízes, do óleo essencial das folhas e das frações obtidas das raízes foram avaliadas usando teste de difusão em poço e o método de diluição em ágar. O extrato etanólico das raízes apresentou atividade antimicrobiana fraca, enquanto as frações hexano e diclorometano, obtidas desse extrato, mostraram atividade de forte a moderada contra várias bactérias Gram-positivas e contra o fungo Candida albicans. O óleo essencial obtido das folhas apresentou CIM de 0,78 mg/mL a 1,56 mg/mL contra bactérias Gram-positivas e Candida albicans. Constatou-se que a atividade antimicrobiana do óleo essencial se deve a ação sinérgica entre o benzaldeído, o 1- octen-3-ol, o 1-octanol, o linalol e a mandelonitrila, constituintes do óleo essencial. A atividade cicatrizante dos extratos etanólicos das folhas e raízes foi avaliada em feridas cutâneas de ratos e observou-se uma aceleração na reepitelização apenas no grupo tratado com solução aquosa a 2% do extrato etanólico das raízes. Essa ação pode estar relacionada com a alantoína, isolada do extrato etanólico das raízes. Na avaliação da atividade leihsmanicida, empregaram-se culturas com formas promastigotas de Leishmania chagasi e verificou-se que o extrato etanólico das folhas apresentou IC50 de 93,2 μg/mL e as raízes IC50 de 95,87 μg/mL. A fração hexano obtida das raízes apresentou IC50 de 13,51 μg/mL. Da fração hexano obtida do extrato etanólico das raízes foi isolado e identificado uma mistura de β-sitosterol e estigmasterol. Essa mistura foi testada contra L. chagasi, obtendo-se IC50 de 69,79 μg/mL. A avaliação da toxicidade aguda dos extratos etanólicos das folhas, das raízes e da fração hexano obtidas das raízes empregando como modelos experimentais ratos e camundongos e o teste de citotoxicidade utilizando Artemia salina mostraram que essa planta não é potencialmente tóxica. Conclui-se que os melhores resultados foram obtido com extrato etanólico das raízes, que apresentou atividade antimicrobiana, cicatrizante e leishmanicida.As frações hexano e diclorometano, obtidas das raízes, apresentaram bom potencial antimicrobiano contra bactérias Gram-positivas e o fungo C. albicans e a fração hexano forte atividade leishmnicida.