FREITAS, Joao Vito Barroso de. Estudo Químico de Croton muscicarpa Müll. Arg. (Euphorbiaceae). 2012. 115 f. Dissertação (Mestrado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-06-02T18:11:15Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_jvbfreitas.pdf: 16138396 bytes, checksum: 58a6e83a333bfee2c50e765d85f94eb1 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-06-21T21:50:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_jvbfreitas.pdf: 16138396 bytes, checksum: 58a6e83a333bfee2c50e765d85f94eb1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-21T21:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_jvbfreitas.pdf: 16138396 bytes, checksum: 58a6e83a333bfee2c50e765d85f94eb1 (MD5) Previous issue date: 2012 / This work describes the chemical composition of Croton muscicarpa (Euphorbiacea), a native plant to Northeastern Brazil, popularly known as “velame-decheiro”. The species was collected in the Chapada Diamantina, Bahia, and its phytochemical investigation was carried out through the isolation and characterization of secondary metabolites present in the ethanol extract from stems and hexane extract from roots. The sesquiterpenes, spathulenol and 6-methoxy-cyperene, this latter is reported for the first time in the literature, were isolated from the stems. From roots, the triterpene, acetyl aleuritolic acid (AAA) and the polimethoxyflavone, 5-hydroxy-3,6,7,3',4'- pentamethoxyflavone (artemetin) were isolated. The isolation of chemical constituents was performed by conventional chromatographic methods and structural determination of the isolated substances accomplished through the use of spectrometric techniques such as Infrared (IR), Mass Spectrometry (MS) and Nuclear Magnetic Resonance Hydrogen (1H NMR) and Carbon-13 (13C NMR), including two-dimensional techniques (COSY, HSQC, HMBC and NOESY) and comparison with the data described in the literature. / Este trabalho descreve o estudo químico de Croton muscicarpa (Euphorbiaceae), planta nativa do Nordeste do Brasil, popularmente conhecida como “velame-de-cheiro”. A espécie foi coletada na Chapada Diamantina no estado da Bahia, e sua investigação química foi realizada através do isolamento e caracterização de metabólitos secundários presentes nos extratos etanólico dos talos e hexânico das raízes. Foram isolados dos talos os sesquiterpenos, espatulenol e 6 -metóxi-cipereno, este último de descrição inédita na literatura. Das raízes foram isolados o triterpeno, ácido acetil aleuritólico (AAA) e uma polimetoxiflavona, a 5-hidroxi-3,6,7,3’,4’-pentametoxiflavona (artemetina). O isolamento dos constituintes químicos foi realizado por métodos cromatográficos convencionais e a determinação estrutural das substâncias isoladas realizada através do uso de técnicas espectrométricas como: Infravermelho (IV), Espectrometria de Massa (EM) e Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio (RMN 1H) e Carbono-13 (RMN 13C), incluindo técnicas bidimensionais (COSY, HSQC, HMBC e NOESY) e comparação com os dados descritos na literatura.

Exercise is an important tool for maintaining health and preventing several diseases like diabetes, hypertension and obesity. Additional treatments have been implemented for these patients and physical exercise stands out in this context. However, acute weathered exercise high intensity favors the production of free radicals, which can cause oxidative stress that leads to injury in the body. Have tried different ways to reduce this process, for example, through the use of natural products such as extracts of plants to alleviate the effects of free radicals due to the presence of antioxidants in that. This study aimed to investigate the phytochemical profile of the hydroethanolic extract of C. argyrophyllus and evaluate its effect on free radicals and in vitro against oxidative stress induced by acute weathered exercise high intensity in female rats. In the present study, the phytochemical profile of the hydroethanolic extract of stem bark of C. argyrophyllus was investigated by colorimetric reactions or precipitation, while the content of total phenols was quantified using the Folin-Ciocalteu method. The extract also was tested in vitro on the model radical DPPH and to study its effect on oxidative stress, female Wistar rats (200-250 g) were divided into 4 groups: 1) Group sedentary vehicle (TW-EE, n = 7) - composed of sedentary animals treated with vehicle (Tween 80, orally), 2) Group trained vehicle (TW-EX n = 6) - consists of animals treated with vehicle (Tween 80) and subjected to protocol weathered training; 3) Group sedentary extract (EHE-EE, n = 6) - composed of sedentary animals treated with extract of C. argyrophyllus (200 mg/kg); 4) Group trained extract (EHE-EX, n = 7) composed of trained animals with weathered exercise and treated with EHE of the C. argyrophyllus (200 mg/kg). The results were presented as mean ± standard error of the mean, using p <0.05. All analyzes were performed in triplicate. After evaluating the normality of the data through the Shapiro-Wilk test, they were evaluated using the Student t test or one-way analysis of variance followed by post hoc Bonferroni. Graph Pad Prism 5.0 software was used. The animals received the extract or vehicle 1h before performing the exercise, being euthanized 1h after training. The substances found in the extract were steroids, flavanones, flavananóis, flavones, flavonoids, tannins, xanthones and terpenes. Due to the low phenolic content (64.68 ± 9.06 mg-eq AG/g) in the extract, was observed percentage inhibition of DPPH next to 40% with low AAI (0.12). Acute administration of the extract reduced, the trained group, CK concentrations in plasma (54.13%) and muscle (46.35%); LDH in the plasma (30.53%); and MDA (65.51%) compared to those receiving the vehicle Tween 80. The extract also reduced in the sedentary group, plasma LDH (47.14%) and muscle (65.43%). Thus, the results show that the hydroethanolic extract of C. argyrophyllus has several antioxidant compounds. Although it has not shown good effect in the model of radical DPPH , was observed significant protection against oxidative stress based on markers of tissue injury CK, LDH and MDA. / O exercício físico é uma importante ferramenta para manutenção da saúde e prevenção de diversas doenças como o diabetes, hipertensão arterial e obesidade. Tratamentos adicionais vêm sendo implementados para estes pacientes e o exercício físico se destaca neste contexto. Todavia, o exercício resistido agudo de alta intensidade favorece a produção de radicais livres, os quais podem gerar estresse oxidativo que resulta em lesões no organismo. Tem-se buscado diversas maneiras de reduzir esse processo, por exemplo, através da utilização de produtos naturais, como extratos de plantas para amenizar os efeitos dos radicais livres, devido à presença nos mesmos, de substâncias antioxidantes. Este estudo teve como objetivo investigar o perfil fitoquímico do extrato hidroetanólico de C. argyrophyllus e avaliar seu efeito antioxidante in vitro e contra o estresse oxidativo induzido por exercício físico resistido agudo de alta intensidade em ratas. No presente estudo, o perfil fitoquimico do extrato hidroetanólico da entrecasca de C. argyrophyllus foi investigado através de reações colorimétricas ou de precipitação, enquanto o teor de fenóis totais foi quantificado usando o método de Folin-Ciocalteu. O extrato também foi testado in vitro no modelo radicalar de DPPH e para estudar seu efeito sobre o estresse oxidativo, ratas Wistar (200-250 g) foram divididos em 4 grupos: 1) Grupo veículo sedentário (TW-EE, n = 7) composto por animais sedentários tratados com veículo (Tween 80, via oral (vo); 2) Grupo veículo treinado (TW-EX, n = 6) - composto por animais tratados com veículo (Tween 80, vo) e submetidas a protocolo de treinamento resistido; 3) Grupo extrato sedentário (EHE-EE, n = 6) - composto por animais sedentários e tratados com extrato de C. argyrophyllus (200 mg/kg, vo); 4) Grupo extrato treinado (EHE-EX, n = 7) composto por animais treinados com exercício resistido e tratados com EHE de C. argyrophyllus a (200 mg/kg, vo). Os resultados foram representados como média ± erro padrão da média, utilizando p < 0,05. Todas as análises foram realizadas em triplicata. Após avaliação da normalidade dos dados, através do teste Shapiro Wilk, os mesmos foram avaliados através do teste t de Student ou da análise de variância de uma via seguida de multiplo teste de Bonferroni. Foi utilizado o software Graph Pad Prism 5.0. Os animais receberam o extrato ou o veículo 1h antes de executarem o exercício, sendo eutanazidados 1h após o treinamento. As substâncias encontradas no extrato foram esteróides, flavanonas, flavananóis, flavonas, flavonoides, taninos, xantonas e terpenos. Devido ao baixo teor fenólico (64,68 ±9,06 mg de eq-AG/g) no extrato, foi constatado percentual de inibição do radical DPPH próximo de 40% com baixo IAA (0,12). A administração aguda do extrato reduziu, no grupo treinado, as concentrações de CK no plasma (54,13%) e no músculo (46,35%); de LDH no plasma (30,53%); e de MDA muscular (65,51%) em comparação aos que receberam o veículo Tween 80. O extrato também reduziu no grupo sedentário, a LDH plasmática (47,14%) e muscular (65,43%). Desta forma, os resultados mostram que o extrato hidroetanólico da C. argyrophyllus possui vários compostos antioxidantes. Apesar de o mesmo não ter apresentado bom efeito no modelo sequestrador do radical DPPH , foi verificada considerável proteção contra o estresse oxidativo in vivo baseado nos marcadores de lesão tecidual CK, LDH e MDA.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The species Croton argyrophyllus Kunth possesses an essential oil, composed of terpenes, flavonoids and alkaloids that has anti-inflammatory, antiulcerous antioxidant and analgesic activity, being thus a causative agent with gastroprotective action. Thus, the present study investigated the gastroprotective action of OE Of C. argyrophyllus (1, 3 and 10 mg / kg, vol) and the mechanisms of pharmacological action to this gastroprotective effect in acute acid induced ethanol induced ulcers in Swiss and male Swiss mice. In addition, the ability of this OE (1, 3, 10, 30 and 100 μg / mL) to inhibit K +, H + -ATPase pump activity was investigated in which homogenate prepared from rabbit gastric mucosa To isolate gastric microsomes. OE of C. argyrophyllus (1, 3 and 10 mg / kg) produced dose-dependent gastroprotection, reducing (P <0.001) the total and relative areas of the lesion in the acidified ethanol-induced ulcer model. The gastroprotective response caused by OE (3 mg / kg) was significantly attenuated (P <0.001) by the intraperitoneal treatment of the mice with yohimbine, N-ethylmaleimide (NEM), glibenclamide and indomethacin. The gastroprotection response of OE (3 mg / kg) was also reversed (P <0.01) by intraperitoneal pretreatment of mice with Nw-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride (L-NAME). The EO of the leaves of C. argyrophyllus (10, 30 and 100 μg / mL) was able to inhibit concentration of the proton pump activity (K +, H + -ATPase) in 37.0%, 80.5% and 76.8%, respectively (P <0.01), when using microsomes of the rabbit gastric mucosa. Collectively, the results demonstrate that C. argyrophyllus OE has gastroprotective and antisecretory activity. The results show that the essential oil of C. argyrophyllus has gastroprotective activity and the ability to inhibit proton pump activity. / A espécie Croton argyrophyllus Kunth posssui óleo essencial, composto por terpenos, flavonóides e alcaloides que possui atividades anti-inflamatória, antioxidante antiulcerosa e analgésica, sendo assim um pontecial agente com ação gastroprotetora, sendo assim, o presente estudo investigou a ação gastroprotetora do OE da C. argyrophyllus (1, 3 e 10 mg/kg, v.o.) e os mecanismos de ação farmacológicos a este efeito gastroprotetor em úlcera aguda induzida por etanol acidificado em camundongos Swiss de ambos os sexos e lagomorfos. Adicionalmente, investigou-se a capacidade deste OE (1, 3, 10, 30 e 100 μg/mL) em inibir a atividade da bomba de K+,H+-ATPase, no qual utilizou-se homogenato preparado a partir de mucosa gástrica de coelho para isolar microssomas gástricos. O OE da C. argyrophyllus (1, 3 e 10 mg/kg) produziu gastroproteção dose-dependente, reduzindo (P<0,001) as áreas total e relativa da lesão no modelo de úlcera induzida por etanol acidificado. A resposta gastroprotetora causada pelo OE (3 mg/kg) foi significativamente atenuada (P<0,001) pelo tratamento intraperitoneal dos camundongos com ioimbina, N-etilmaleimida (NEM), glibenclamida e indometacina. A resposta gastroprotetora do OE (3 mg/kg) foi também revertida (P< 0,01) pelo pré-tratamento intraperitoneal dos camundongos com Nw-nitro-L-arginina cloridrato do éster metílico (L-NAME). O OE das folhas de C. argyrophyllus (10, 30 e 100 μg/mL) foi capaz de inibir de forma concentração dependente a atividade da bomba de prótons (K+,H+-ATPase) em 37,0%, 80,5% e 76,8%, respectivamente (P<0,01), quando utilizou-se microssomas da mucosa gástrica de coelho. Coletivamente, os resultados demonstram que o OE da C. argyrophyllus possui atividade gastroprotetora e antissecretória. Os resultados encontrados demonstram que o óleo essencial da C. argyrophyllus possui atividade gastroprotetora e capacidade de inibir a atividade da bomba de prótons.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniasis is a complex of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted to humans and other vertebrate hosts through the bite of an infected phlebotomine insect. Currently, all drugs used in the treatment of this disease have low efficacy, high toxicity and are associated with parasitic resistance. In this sense, scientific research that indicates a new compounds with leishmanicidal activity are quite promising. The objective of this study was to evaluate in vitro the leishmanicidal activity of the crude ethanol extract of C. blanchetianus on L. amazonensis and L. infantum as well as their toxic and immunomodulator effect on murine macrophages. Promastigotes in the logarithmic growth phase were subjected to treatment with different concentrations of the extract for 24 and 72 hours at 26ºC, and the viability was measured by the method of Alamar Blue . A greater inhibition was observed in L. amazonensis with an IC50 of 73.6 μg/ml in 24 hours of incubation and 42.6 μg/ml at 72 hours. In L. infantum extract showed an IC50 of 208.7 μg/ml in 24 hours and 108.9 μg/ml at 72 hours. Regarding the reduction of viability, L. amazonensis showed a death percentage of 68.8% with 100 μg/ml of the extract after 24 hours of treatment and approximately 100% after 72 hours, whereas for L. infantum this level of inhibition was not seen with 250 μg/ml of the extract. For the analysis of antiamastigota activity, infected macrophages were treated with different concentrations of the extract and incubated for 72h at 37° C, and the rate of infection was determined by staining method with hematologic pigment and counts in optical microscopy. It was found a higher dose-dependent inhibition in L. amazonensis with an IC50 of 3.10 μg/ml. In L. infantum there was a lower activity of the extract which present an IC50 of 8.83 μg/ml. At lower concentration tested (3 μg/ml) there was a reduction in the viability of L. amazonensis around 44%, while in L. infantum, this level of inhibition was only observed with 7 μg/ml of extract. The cytotoxicity was performed on murine macrophages incubated with different concentrations of the extract for 72 hours at 37°C and the viability was measured by Alamar Blue method. The LD50 observed was 83.79 μg/ml and the selectivity index calculated was 27 to L. amazonensis and 9.5 for L. Infantum, revealing a higher toxicity of the extract in the parasites than in macrophages.Treatment with the extract not modulated the macrophage for nitric oxide synthesis, as verified by Griess reaction. However, interfered in the morphology of promastigote forms, being observed parasites with a rounded body and/or double scourge. Therefore, the data presented in this study indicate that the ethanol extract of C. blanchetianus presents leishmanicidal activity on promastigote and amastigote forms of L. amazonensis and L. infantum, being more effective against the species L. amazonensis, especially on the amastigote form, without causing, however, toxicity to the host cell. / A leishmaniose é um complexo de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas ao ser humano e outros hospedeiros vertebrados por meio da picada de um inseto flebotomíneo infectado. Atualmente, todos os medicamentos utilizados no tratamento dessa doença apresentam baixa eficácia, alta toxicidade e estão associados à resistência parasitária. Nesse sentido, pesquisas científicas que indiquem novos compostos com atividade leishmanicida são bastante promissoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a atividade leishmanicida do extrato etanólico bruto de C. blanchetianus sobre L. amazonensis e L. infantum, bem como o seu efeito tóxico e imunomodulador sobre macrófagos murinos. Promastigotas na fase logarítmica de crescimento foram submetidos ao tratamento com diferentes concentrações do extrato por 24 e 72 horas a 26ºC, e a viabilidade foi mensurada por meio do método de Alamar Blue . Uma maior inibição foi vista em L. amazonensis com um IC50 de 73,6 μg/ml em 24 horas de incubação e de 42,6 μg/ml em 72 horas. Em L. infantum o extrato apresentou um IC50 de 208,7 μg/ml em 24 horas e de 108,9 μg/ml em 72 horas. Em relação à redução da viabilidade, L. amazonensis apresentou um percentual de morte de 68,8%, com 100 μg/ml do extrato, em 24 horas de tratamento e aproximadamente 100% em 72 horas, enquanto que em L. infantum este nível de inibição só foi visto com 250 μg/ml do extrato. Para a análise da atividade antiamastigota, macrófagos infectados foram tratados com diferentes concentrações do extrato e incubados por 72h a 37ºC, e o índice de infecção foi determinado por coloração com corante hematológico e contagem em microscopia óptica. Verificou-se uma inibição dose-dependente maior em L. amazonensis com um IC50 de 3,10 μg/ml. Em L. infantum houve uma menor atividade do extrato que apresentou um IC50 de 8,83 μg/ml. Na menor concentração testada (3 μg/ml) houve uma redução na viabilidade de L. amazonensis por volta de 44%, enquanto que em L. infantum, este nível de inibição só foi observado com 7 μg/ml do extrato. A avaliação da citotoxicidade foi realizada em macrófagos murinos, incubados com diferentes concentrações do extrato por 72h a 37ºC e a viabilidade foi mensurada pelo método de Alamar Blue . O LD50 observado foi de 83,79 μg/ml e o Índice de Seletividade calculado foi de 27 para L. amazonensis e 9,5 para L. Infantum, revelando uma maior toxicidade do extrato nos parasitos do que nos macrófagos. O tratamento com o extrato não modulou o macrófago para a síntese de óxido nítrico, como verificado pela Reação de Griess. Contudo, interferiu na morfologia das formas promastigotas, sendo observados parasitos com corpo arredondado e/ou flagelo duplo. Portanto, os dados apresentados nesse estudo indicam que o extrato etanólico de C. blanchetianus apresenta atividade leishmanicida sobre as formas promastigota e amastigota de L. amazonensis e L. infantum, sendo mais efetivo frente à espécie L. amazonensis, principalmente sobre a forma amastigota, sem causar, no entanto, toxicidade à célula hospedeira.