Neste trabalho, estudou-se o uso de glicerol como fonte de carbono para o crescimento celular e a produção de 2,3-butanodiol/acetoína em cultivo de Enterobacter aerogenes ATCC 13048. A influência da concentração inicial do substrato (S0) e da velocidade de transferência de oxigênio (OTR) foi avaliada em ensaios em regime descontínuo. Inicialmente, foram realizados cultivos com S0 na faixa aproximada de 20 a 180 g/L, frequência dos agitadores de 500 rpm e fluxo específico de ar de 0,50 vvm, correspondendo a uma OTR característica entre 10 e 13 mmol/L/h, aproximadamente. Na sequência, foram conduzidos ensaios com S0 na faixa de 40 a 180 g/L, com variações da frequência dos agitadores (650 a 750 rpm) e do fluxo específico de ar (0,50 a 0,87 vvm), a fim de manter a concentração de oxigênio dissolvido próxima a 30% da saturação pelo mais longo período possível durante o processo. Os valores de OTR característica para as condições de maiores frequência de agitadores (750 rpm) e fluxo específico de ar (0,87 vvm), com a mais alta e a mais baixa concentrações de glicerol, foram de cerca de 34 e 24 mmol/L/h, respectivamente. Em regime descontínuo, S0 de até 60 g/L não provocou inibição do crescimento de E. aerogenes, independentemente da OTR utilizada, sendo obtidos valores de máxima velocidade específica de crescimento (μXm) de 0,70 e 0,73 h-1, respectivamente para baixa e alta OTR. Por outro lado, S0 da ordem de 180 g/L provocou forte inibição no crescimento celular, especialmente sob baixa OTR, não havendo consumo completo do glicerol. No grupo dos ensaios com baixa OTR, maior concentração final de 2,3-butanodiol/acetoína (63,6 g/L) foi obtida com S0 quantificada de 146,4 g/L, mas o mais alto rendimento (91,8 %) foi alcançado com S0 = 92,7 g/L. Nos cultivos com alta OTR, a máxima concentração de produtos de 46,8 g/L foi atingida com S0 de 183,9 g/L, enquanto o rendimento máximo de 70% foi alcançado com S0 = 102,5 g/L. O incremento de OTR favoreceu a produtividade e o rendimento em células, mas prejudicou a conversão de glicerol em produtos. Em seguida, foram realizados dois cultivos em regime descontínuo alimentado, a fim de evitar-se a inibição provocada por altas concentrações de glicerol e permitir que elevadas concentrações de 2,3-butanodiol/acetoína fossem atingidas. O primeiro ensaio foi realizado sob as condições de alta OTR definidas e o ensaio seguinte sob frequência de agitadores de 750 rpm e fluxo específico de ar de 0,50 vvm. A massa de glicerol empregada correspondeu à que seria necessária para ter-se um S0 de 240 g/L em batelada. No cultivo com alta OTR, foi atingida concentração de produtos de 90,4 g/L após 56 h, correspondendo a um rendimento de 83,2% e a uma produtividade de 1,61 g/L/h. No ensaio com 750 rpm e 0,50 vvm, foram obtidos 102,6 g/L de produtos em 74 de processo, com rendimento de 94,7% e produtividade de 1,37 g/L/h. Nos tempos finais dos cultivos alimentados, foi observado aumento da concentração de oxigênio no meio, redução da demanda de oxigênio e consumo incompleto do glicerol, dados que indicam a ocorrência de inibição da atividade respiratória da bactéria pelas altas concentrações de produtos presentes no meio. Os resultados permitem concluir que o glicerol é um substrato adequado para a produção de 2,3-butanodiol/acetoína por E. aerogenes. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-24T18:03:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Viviane Girardi.pdf: 1933119 bytes, checksum: 48fbb6c1d99076424fa5bb788dbe12bf (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-24T18:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Viviane Girardi.pdf: 1933119 bytes, checksum: 48fbb6c1d99076424fa5bb788dbe12bf (MD5) / In this work, the use of glycerol as carbon source for cell growth and 2,3-butanediol/acetoin production in the in cultivation of Enterobacter aerogenes ATTT 13048 was studied. The influence of initial substrate concentration (S0) and oxygen transfer rate (OTR) was assessed in batch-mode experiments. Initially, cultivations with S0 of approximately 20 to 180 g/L, impeller speed of 500 rpm and specific air flow rate of 0.50 volume of air per volume of medium per minute (vvm), corresponding to characteristic OTR values between 10 and 13 mmol/L/h approximately, were performed. In the sequence, runs with S0 in the range 40 to 180 g/L, with varying impeller speed (650 to 750 rpm) and specific air rate (0.50 to 0.87 vvm) were carried out to maintain the dissolved oxygen concentration close to 30% of saturation as long as possible during the process. Characteristic OTR values for the conditions with the upper-limit impeller speed (750 rpm) and specific air flow rate (0.87 vvm) were about 34 and 24 mmol/L/h for the lowest and highest glycerol concentrations, respectively. In batch mode, for any OTR evaluated, S0 values up to 60 g/L did not result in growth inhibition of E. aerogenes, with maximum specific growth rates (μX,m) of 0.70 and 0.73 h-1 being measured for low and high OTR, respectively. On the other hand, an S0 of about 180 g/L led to a strong cell growth inhibition, especially under low OTR condition, and glycerol consumption was incomplete. In the group of runs performed with low OTR, the largest final 2,3-butanediol/acetoin final concentration (63.6 g/L) was achieved with a measured S0 of 146.4 g/L, but the highest yield was attained with S0 = 92.7 g/L. In the cultivations under high OTR, the maximum final product concentration (46.8 g/L) was obtained with S0 = 92.7 g/L, whereas the maximum yield of 70% was achieved with S0 = 102.5 g/L. Increasing OTR values favored productivity and cell yield but, however, resulted in decreasing conversion of glycerol to products. Afterwards, two fed-batch cultivations were done to avoid the strong inhibition due to high glycerol concentrations, and to allow that elevated concentrations of 2,3-butanediol/acetoin could be achieved. The first fed-batch run was carried out at the high-OTR conditions previously defined and the second one with impeller speed of 750 rpm and specific air flow rate of 0.50 vvm. The mass of glycerol employed corresponded to that needed to have an S0 of 240 g/L in batch-mode. With high OTR, a final product concentration of 90.4 g/L was quantified after 56 h of process, that means a yield of 83.2% and a productivity of 1.61 g/L/h,. In the experiment with 750 rpm and 0.50 vvm, 102.6 g/L of products were obtained after 74 h, with a yield of 94.7% and a productivity of 1.37 g/L/h. During the final hours of the fed-batch cultivations, increasing oxygen concentrations, decreasing oxygen uptake rate and incomplete glycerol consumption were observed, these data indicating the occurrence of inhibition of the bacterium respiratory activity by the high product concentrations which were present in the medium. The results allow concluding that glycerol is an adequate substrate for the production of 2,3-butanediol/acetoin by E. aerogenes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-16Bitstream added on 2014-06-13T20:38:53Z : No. of bitstreams: 1 tebaldi_r_me_arafcf.pdf: 300893 bytes, checksum: dc69e3a75aeeb349d9af75e741a2e2ca (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A constante preocupação com a qualidade da água destinada ao consumo, a presença de sabores e odores desagradáveis decorrentes da adição de flúor e cloro nas águas de abastecimento público e a falta de suprimentos adequados de água potável, tem provocado uma contínua demanda por água mineral. A relativa escassez de estudos envolvendo a qualidade microbiológica da água mineral, principalmente na água mineral gaseificada artificialmente, gerou esta pesquisa que tem por objetivo, avaliar e comparar a qualidade bacteriológica de águas minerais sem gás e gaseificadas artificialmente, em embalagens descartáveis, de oito marcas comercializadas em supermercados das cidades de Ribeirão Preto e Araraquara - SP. As duzentos e quarenta amostras analisadas foram divididas em três lotes com cinco unidades gaseificadas e cinco sem gás de cada marca. Foram realizadas análises para determinação de bactérias do grupo coliforme, bactérias heterotróficas e Pseudomonas aeruginosa. Para análise de coliformes totais e E. coli utilizou-se a técnica de substratos cromogênicos, para Pseudomonas aeruginosa utilizou-se a técnica de tubos múltiplos específica e para contagem de bactérias heterotróficas foi utilizada a técnica de cultivo em profundidade. Para as cento e vinte amostras não gaseificadas analisadas (100%), verificou-se a presença de coliformes totais em oito amostras (6,67%), presença de E. coli em seis amostras (5%), presença de Pseudomonas aeruginosa em cinco amostras (4,2%), e 102 amostras (85%) apresentaram contagem de bactérias heterotróficas maior que 500 UFC/mL. Para as cento e vinte amostras gaseificadas analisadas verificou-se que nenhuma delas apresentou contaminações para o grupo coliforme (totais e E. coli) e para Pseudomonas aeruginosa. Apenas três amostras (2,5%) apresentaram contagens superiores a 500 UFC/mL para bactérias heterotróficas... / The constant concern with the water quality reserved to human consumption, the presence of tastes and odors caused by the addition of fluoride and chlorine in public water supplies and the destitution of adequate supplies of potable water has challenged a continuous demand for mineral water. The relative privation of studies on the bacteriological quality of mineral water, mainly in artificially carbonated mineral water generated this project that purpose to value and to compare the microbiological quality of mineral water without gas and carbonated artificially, in dismissible tacking, of eight types, sold in supermarkets in the cities of Araraquara/SP and Ribeirão Preto/SP. The two hundred forty analyzed samples were divided in shares with five unities carbonated mineral water and five without gas. There were put into practice analysis for determination of coliform bacteria, heterotrophic bacteria and Pseudomonas aeruginosa. To analysis of total coliform and E. coli it was used the chromogenic substrates technique, for Pseudomonas aeruginosa used the multiple tube specific technique and to counting heterotrophic bacteria, it was used the technique of growing in depth. To the one hundred twenty samples no carbonated water analyzed (100%), was checked the presence of total coliforms in eight samples (6,67%), presence of E. coli in six samples (5%), presence of Pseudomonas aeruginosa in five samples (4,2%), and one hundred two samples (85%) was with counts above 500 CFU/mL for heterotrophic bacteria. To the one hundred twenty carbonated water samples analyzed (100%), was checked that no samples analyzed was contaminated to the coliform group (total and E. coli) and to Pseudomonas aeruginosa. Just three samples (2,5%) present counts above 500 CFU/mL for heterotrophic bacteria. All the brands of the samples no carbonated water tested (100%) presents out of the specifications of Brazilian legislation in one or more parameters analyzed

Made available in DSpace on 2015-09-30T02:38:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475295-Texto+Parcial-0.pdf: 563 bytes, checksum: 4a169fcc2d293d6f288381480124104f (MD5) Previous issue date: 2015 / The species of the “C. parapsilosis complex” are common etiological agents of nosocomial candidemia, and C. parapsilosis sensu stricto is one of non-albicans Candida species with the highest incidences in clinical infections, primarily related to implanted medical devices. In this study, we identified 29 isolates comprising the “C. parapsilosis complex” to species level, all previously obtained from the hospital environment and medical tools. The isolates were also characterized for in vitro activity of aspartyl proteinase and phospholipase, as well as for their ability to form biofilms. The isolates identified as C. parapsilosis sensu stricto were also evaluated for their capability to interact with Staphylococcus aureus and Acinetobacter sp. in two-species polymicrobial biofilms. These biofilms were then analyzed for their tolerance to treatments with increasing concentrations of antimicrobials drugs and sanitizers. The results indicated that 75. 9% of the isolates were identified as C. parapsilosis sensu stricto, 24. 1% as Candida metapsilosis and none as Candida orthopsilosis. Regarding C. parapsilosis sensu stricto, all isolates were very strong producers of aspartyl proteinase, and 13. 6% of phospholipase. Regarding C. metapsilosis, 71. 4% and 14. 3% of the isolates showed very strong aspartyl proteinase and phospholipase activity, respectively. Moreover, all isolates were able to form biofilm on polystyrene surface. Among the C. parapsilosis sensu stricto isolates, 9. 1%, 45. 4% and 45. 4% were strong, moderate and weak biofilm producers, respectively. Regarding C. metapsilosis, 71. 4% were moderate and 28. 6% were weak biofilm producers. We also demonstrated that C. parapsilosis sensu stricto was capable of associating synergistically with both bacteria tested, since in polymicrobial biofilms a significantly higher number of bacterial cells adhered, compared to their own monomicrobial condition. However, bacterial cells did not interfere on the efficiency of yeast biofilm formation. When testing sanitizers, we showed that 70% ethyl alcohol and 1% sodium hypochlorite were effective to significantly decrease the number of viable cells, although they have not been able to eliminate the microbial populations of the biofilms. Our data also showed that the cells from all monomicrobial biofilms exhibited elevated tolerance to their respective antimicrobial drugs, at higher doses than their pre-determined minimal inhibitory concentration values. Nevertheless, biofilms of 6, 12 and 24 h of C. parapsilosis sensu stricto presented some decrease in cell viability to the treatment with ketoconazole, whereas 48 h biofilms were resistant to this antifungal. In polymicrobial biofilms, the bacterial cells did not affect the tolerance of yeast isolates to this antimicrobial. Conversely, S. aureus and Acinetobacter sp. cells were even more tolerant to the treatment with vancomycin and polymyxin B, respectively, when they were in polymicrobial biofilms, which was significantly different from their respective monomicrobial condition. The results from this work revealed the ability of “C. parapsilosis complex” isolates from nosocomial environment to express important virulence factors, as well as to interact synergistically with bacterial species of clinical importance. This data is clinically relevant, since such phenotypic features may represent an important risk in terms of nosocomial infection to hospitalized patients. / As espécies do “complexo Candida parapsilosis” mostram-se como frequentes agentes etiológicos de candidemias nosocomiais, sendo a C. parapsilosis sensu stricto uma das espécies não-albicans de Candida de maior incidência em infecções clínicas, estando relacionada principalmente com dispositivos médicos implantados. Neste estudo, identificamos, em nível de espécie, 29 isolados pertencentes ao “complexo Candida parapsilosis”, todos previamente obtidos a partir do ambiente hospitalar e de dispositivos médicos. Os isolados também foram caracterizados quanto à atividade in vitro de aspartil proteinase e fosfolipase, e quanto à habilidade de formar biofilmes. Os isolados identificados como C. parapsilosis sensu stricto foram avaliados quanto à capacidade de interagir com Staphylococcus aureus e Acinetobacter sp. no desenvolvimento de biofilmes polimicrobianos de duas espécies. Estes biofilmes foram então analisados quanto à sua capacidade de tolerar o tratamento com concentrações crescentes de fármacos antimicrobianos e sanitizantes. Como resultados, 75,9% dos isolados foram identificados como C. parapsilosis sensu stricto, 24,1% como Candida metapsilosis e nenhum como Candida orthopsilosis. Em relação à C. parapsilosis sensu stricto, todos os isolados mostraram-se como produtores muito fortes de aspartil proteinase e 13,6% de fosfolipase. Em relação à C. metapsilosis, 71,4% e 14,3% dos isolados apresentaram atividade muito forte de aspartil proteinase e fosfolipase, respectivamente. Além disso, todos os isolados foram capazes de formar biofilme em superfície de poliestireno. Dentre os isolados de C. parapsilosis sensu stricto, 9,1%, 45,4% e 45,4% mostraram-se como produtores fortes, moderados e fracos de biofilme, respectivamente. Em relação aos de C. metapsilosis, 71,4% foram moderados e 28,6% foram fracos formadores de biofilme. Demonstramos também que a C. parapsilosis sensu stricto foi capaz de se associar de forma sinérgica com ambas as bactérias testadas, pois nos biofilmes polimicrobianos um número significativamente maior de células bacterianas se aderiram em comparação à sua condição monomicrobiana. Entretanto, as bactérias não interferiram na eficiência de formação de biofilmes da levedura. O tratamento com sanitizantes mostrou que o álcool etílico a 70% e o hipoclorito de sódio a 1% foram eficazes em diminuir significativamente o número de células viáveis, mas não foram capazes, mesmo assim, de eliminar as populações microbianas dos biofilmes. Além disso, nossos dados mostraram que as células integrantes de todos os biofilmes monomicrobianos avaliados apresentaram elevada tolerância aos seus respectivos antimicrobianos, em doses superiores aos seus valores de concentração inibitória mínima, previamente determinados. Mesmo assim, os biofilmes de C. parapsilosis sensu stricto de 6, 12 e 24 h mostraram alguma perda de viabilidade celular ao tratamento com cetoconazol, enquanto biofilmes de 48 h se mostraram resistentes a este antifúngico. Nos biofilmes polimicrobianos, a presença das células bacterianas não influenciou a tolerância das leveduras ao antimicrobiano. Por outro lado, as células de S. aureus e Acinetobacter sp. foram ainda mais tolerantes ao tratamento com vancomicina e polimixina B, respectivamente, quando em biofilmes polimicrobianos, de forma significativa em comparação às suas respectivas condições monomicrobianas. Os resultados deste trabalho revelaram a capacidade de isolados do “complexo C. parapsilosis” do ambiente nosocomial de expressar importantes fatores de virulência, bem como de interagir sinergicamente com bactérias de importância clínica. Em conjunto, estas informações mostram-se de grande relevância clínica, em função de tais características fenotípicas representarem um importante risco em termos de infecção hospitalar a pacientes internados.

Submitted by Allan Hisashi Nakao (allanhisashinakao@gmail.com) on 2018-05-14T14:09:30Z No. of bitstreams: 2 TESE Allan 14_05_18.pdf: 4680132 bytes, checksum: 3ffb8cd50cdafc4f36363126af1ce298 (MD5) 5748-28337-1-PB.pdf: 108311 bytes, checksum: 02731de2d214b4a692147053e38389fe (MD5) / Approved for entry into archive by Cristina Alexandra de Godoy null (cristina@adm.feis.unesp.br) on 2018-05-15T12:24:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nakao_ah_dr_ilha.pdf: 4680132 bytes, checksum: 3ffb8cd50cdafc4f36363126af1ce298 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-15T12:24:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nakao_ah_dr_ilha.pdf: 4680132 bytes, checksum: 3ffb8cd50cdafc4f36363126af1ce298 (MD5) Previous issue date: 2018-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A agricultura brasileira tem se destacado na produção de grãos e na pecuária, principalmente no bioma Cerrado pelo aumento tecnológico e, sobretudo pelo aspecto de aliar um sistema que integraliza conjuntamente lavoura e pecuária. Objetivou-se avaliar o desempenho produtivo, qualidade bromatológica, componentes da produção de cultivares de sorgo inoculados ou não com bactérias diazotróficas, exclusivamente ou em consórcio com capim-paiaguás, bem como da produtividade de matéria seca da rebrota juntamente com o capim sobre os atributos químicos e físicos do solo e produtividade da soja em sucessão. Os experimentos foram realizados nos anos de 2015 e 2016, em Selvíria-MS. O delineamento utilizado foi o de blocos casualizados, em esquema fatorial 2 x 2 x 2, com quatro repetições. Os tratamentos corresponderam a dois anos agrícolas (2015 e 2016); com cultivo de sorgo granífero e de dupla aptidão solteiros ou em consórcio com o capim-paiaguás, com ou sem a inoculação das sementes de sorgo com Azospirillum brasilense. O consórcio do sorgo granífero com capim-paiaguás em cultivo outonal, não alterou sua produtividade de matéria seca e de grãos, entretanto, para o de dupla aptidão, por efeito competição reduziu a produção de matéria seca de folhas, colmo e panículas. De modo geral, o consórcio dos sorgos com o capim-paiaguás e a inoculação com A. brasilense pouco influenciaram na quantidade e qualidade bromatológica da silagem. O aproveitamento da rebrota dos sorgos, principalmente em consórcio com o capim-paiaguás, apresentaram-se viáveis na produção de palhada remanescente no período de entressafra, pela maior produtividade de matéria seca, com maior acúmulo de nutrientes que resultaram em melhores condições de fertilidade do solo. A inoculação com A. brasilense nas sementes de sorgo granífero e de dupla aptidão proporcionou maior desenvolvimento, tanto do sorgo quanto do capim-paiaguás em consórcio, proporcionando incrementos na matéria seca da parte aérea de ambas as espécies vegetais, e assim incrementando a ciclagem de nutrientes e a fertilidade do solo. Com efeito da palhada do consórcio dos sorgos (granífero e de dupla aptidão) com o capim-paiaguás, e principalmente quando do uso da inoculação com A. brasilense houve incrementos do número de vagens por planta e da produtividade da soja em sucessão. / Brazilian agriculture has been highlighte in grain production and livestock production, especially in the Cerrado biome, due to the technological increase and, above all, to the aspect of allying a system that jointly integrates agriculture and livestock. The objective of this study was to evaluate the productive performance, bromatological quality, components of the production of sorghum inoculated or not with diazotrophic bacteria, exclusively or in a consortium with Paiaguás grass, as well as the dry matter yield of the regrowth together with the grass on the chemical and physical characteristics of the soil and soybean yield in succession. The experiments were carried out in the years 2015 and 2016, in Selvíria-MS. The experimental design was a randomized block design, in a 2 x 2 x 2 factorial scheme, with four replications. The treatments corresponded: two agricultural years (2015 and 2016); cultivation of grain sorghum and dual aptitude singles or in consortium with Paiaguás grass, with or without the inoculation of sorghum seeds with Azospirillum brasilense. The consortium of grain sorghum with Paiaguás grass in autumnal cultivation does not alter its dry matter and grain yield. However, for the double suitability, the competition effect reduces the dry matter yield of leaves, stem and panicles. In general, the consortium of sorghum with Paiaguás grass and inoculation with A. brasilense had little influence on the quantity and the bromatological quality of the silage. The use of sorghum regrowth, mainly in a consortium with Paiaguás grass, were viable in the production of straw remaining during the off-season, due to the greater of dry matter yield, with greater accumulation of nutrients, which resulted in better fertility conditions of soil. As a result of the sorghum consortium (graniferous and double suitability) with Paiaguás grass, and especially when using inoculation with A. brasilense, there were increases in the number of pods per plant and soybean yield in succession.

Resumo: Doenças de diversas naturezas e etiologias acometem a cultura do milho. O controle dos fitopatógenos, na maioria das vezes, é realizado através de cultivares resistentes e/ou pulverizações com fungicidas, cuja utilização indiscriminada resulta em uma série de problemas, como a contaminação ambiental, dos alimentos e dos consumidores, no aparecimento de populações resistentes de patógenos e na diminuição de populações de organismos benéficos ou não-alvos. Nesse contexto, os microrganismos endofíticos aparecem como ferramentas de controle biológico de pragas e doenças. Eles compreendem, principalmente, fungos e bactérias que habitam o interior das plantas sem causar, aparentemente, danos aos seus hospedeiros. Sua capacidade de biocontrole pode advir de vários mecanismos, como a produção de substâncias deletérias a fitopatógenos ou competindo por espaço e nutrientes. Indiretamente, induzindo resistência sistêmica no hospedeiro ou pela produção de substâncias promotoras de crescimento. No presente ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diseases of several natures and etiologies affect the cultivation of maize. The control of plant pathogens, in most cases, is realized by resistant cultivars and/or spraying with fungicides, whose indiscriminate use results in a series of problems such as environmental contamination, food and consumers, the emergence of resistant populations of pathogens and the decrease in populations of beneficial organisms or non-targets. In this context, the endophytes appear as tools for the biological control of pests and diseases. They include, principally, fungi and bacteria that inhabit the inside of plants without cause, apparently, damage to their hosts. His ability to biocontrol may arise from various mechanisms, such as the production of deleterious substances to the plant pathogens or competing for space and nutrients. Indirectly, inducing systemic resistance in the host or by plant-growth promoting. In the present work, 95 maize endophytes strains and a strain of Bacillus subtilis 0G; Bacillus lentimorbus and Streptomyces sp. were individually tested in vitro and in vivo conditions, on the antagonism to several fungi plant pathogens and in control of the Exserohilum turcicum leaf spot under greenhouse conditions, by the seed microbiolization and by spraying the aerial part of the plants, 72 and 24 hours before and on the same day of the inoculation of the pathogen. It was also tested, ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Coorientador: Itamar Soares de Melo / Banca: Antonio Carlos Maringoni / Banca: Harllen Sandro Alves Silva / Banca: Daniel Andrade de Siqueira Franco / Banca: Gisèle Maria Fantin / Doutor

Orientador: Marcos Rogério André / Coorientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho / Banca: José Maurício Barbanti Duarte / Resumo: Patógenos transmitidos por vetores artrópodes são mundialmente importantes, podendo causar enfermidades tanto no homen quanto nos animais. Recentemente, diversos estudos têm sido realizados a fim de elucidar o papel dos animais selvagens na epidemiologia desses patógenos. A identificação desses microrganismos, assim como dos seus vetores e hospedeiros, permite mapear áreas de ocorrência desses patógenos, auxiliando os órgãos competentes na elaboração de medidas de controle. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo detectar e caracterizar, por métodos moleculares, micoplasmas hemotróficos e bartonelas em amostras de baço de roedores selvagens e sinantrópicos distribuídos em cinco biomas brasileiros. Para tal, foram analisadas 500 amostras de roedores pertencentes a 51 espécies distribuídas em 13 estados. Dentre as 457 amostras de DNA positivas nos ensaios de PCR baseados nos genes Interphotoreceptor retinoid binding protein [IRBP] ou Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase [GAPDH], 100 (21,9%) mostraram-se positivas para Mycoplasma spp. por meio da cPCR baseada no gene 16S rRNA. A análise filogenética de 24 sequências do gene 16S rRNA mostrou a presença de dez diferentes clusters, todos agrupados dentro do grupo Mycoplasma haemofelis. O posicionamento filogenético associado com a baixa porcentagem de identidade entre as sequências amplificadas no presente estudo e aquelas previamente depositadas no Genbank sugere a circulação de novas espécies de hemoplasmas em roedo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Arthropod-borne pathogens are wordwide important, causing diseases in humans and animals. Recently, several studies have been performed in order to elucidate the role of wild animals in the epidemiology of these pathogens. The identification of these microorganisms, as well as their vectors and hosts, allow to map the areas of occurrence of these pathogens, helping competent agencies in the development of control measures. Therefore, the present study aimed to detect and characterize, using molecular methods, hemotrophic mycoplasmas and Bartonella in wild and sinantropic rodent spleen samples distributed in five Brazilian biomes. For this purpose, 500 rodent samples belonging to 51 species distributed in 13 states were analyzed. Among 457 DNA samples positive to PCR assays based on the Interphotoreceptor retinoid binding protein [IRBP] or Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase [GAPDH]) genes, 100 (21.9%) were positive to Mycoplasma spp. by cPCR based on 16S rRNA gene. The phylogenetic analysis of 24 sequences of the 16S rRNA gene showed the presence of ten different clusters, which grouped within the Mycoplasma haemofelis group. The phylogenetic position associated with the low percentage of identity between the sequences amplified in the present study and those previously deposited in Genbank suggest the circulation of new hemoplasmas species in rodents in Brazil. Additionally, 117 (25.6%) samples were positive to Bartonella sp. by qPCR. The diversity analysis of the gltA ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sergio Antonio De Bortoli / Banca: Fernando Hercos Valicente / Banca: Roberto Marchi Goulart / Banca: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Nilza Maria Martinelli / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a biologia de linhagens de P. xylostella em criações para fins de pesquisa e verificar o efeito de B. thuringiensis sobre P. nigrispinus em associação de métodos para o manejo da praga em ambiente protegido. As larvas de P. xylostella foram coletadas em Brassica oleracea var. italica - brócolis Piracicaba, e mantidas em Brassica oleracea var. acephala - couve Manteiga híbrida HS-20. A cada geração aspectos biológicos dos insetos foram avaliados em ensaios de laboratório. As características biológicas analisadas foram: período larval, viabilidade de larvas, período pupal, viabilidade de pupas, peso pupal, razão sexual, número de ovos por fêmea, fertilidade de ovos, longevidade de machos e longevidade de fêmeas. Também, com os dados obtidos foi construída a tabela de vida de fertilidade. Já com predador, P. nigrispinus, foi avaliada a história de vida, o consumo de lagartas de P. xylostella em plantas de couve tratadas com bioinseticidas à base de Bacillus thuringiensis e também sua atividade de fitofagia nestas plantas, em casa de vegetação. Nas avaliações de P. xylostella, indivíduos coletados no campo apresentaram duração larval (8,2 dias) e pupal (3,8 dias) maiores, diminuindo ao longo de gerações. A viabilidade pupal (86,9%) e a fertilidade (93,0%) também foram maiores para essa população, com menor peso de pupa (4,7 mg). Além disso, apresentaram menor taxa líquida de aumento populacional (Ro), com 39 fêmeas/fêmea/dia, enquanto que, na... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the biology of P. xylostella strains in mass rearing for research and verify the effects of B. thuringiensis on P. nigrispinus in association methods for the management of this pest in protected environment. Larvae collected from Brassica oleracea var. italica - broccoli Piracicaba, were kept in Brassica oleracea var. acephala - kale Manteiga hibrida HS-20. The biological aspects of insects generations were evaluated in laboratory bioassays. The biological parameters evaluated were: larval period, larval viability, pupal period, pupal viability, pupal weight, sex ratio, number of eggs per female, eggs fertility, longevity of males and females. The data were used to construc of a life table fertility. The predator consuming P. xylostella larvae in kale plants treated with bionsecticides based on Bacillus thuringiensis and also their phytophagy activity in these plants, in green house was evaluated. The individuals collected in the field presented larval period (8.2 days) and pupal (3.8 days) longer, decreasing over generations. 86.9% of pupal viability and 93.0% of fertility were also high in this population, however prepal weight was significanthy low (4.7 mg). In addition, the lower net rate of population increase (Ro) with 39 females / female / day, whereas in P. xylostella population from the laboratory was 47.8 females / female / day. In general, the biological characteristics of predators did not change when the predators consumed prey direct... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: A vesiculite seminal possui grande relevância na clínica reprodutiva devido à dificuldade de tratamento, elevados índices de recidiva, risco de contaminação de fêmeas com agentes patogênicos, inutilização de animais e baixos índices de fertilidade. O tratamento local tem sido apontado por diversos autores como a melhor alternativa terapêutica, porém nenhum estudo avaliou seus efeitos na qualidade e longevidade seminal. Nesse sentido, os objetivos do presente estudo incluíram: investigar quais são as principais bactérias envolvidas na enfermidade e os principais fatores de risco para os garanhões; avaliar e comparar o efeito do tratamento local de vesiculite seminal quanto aos índices de cinética e morfologia espermática, integridade de membrana plasmática, porcentagem de leucócitos e contagem de unidades formadoras de colônias (UFC) de amostras seminais frescas, refrigeradas e congeladas e o teor de óxido nítrico no plasma seminal, antes (M0), após uma semana (M1) e um mês (M2) da terapia. Os resultados obtidos permitiram inferir que a vesiculite seminal foi mais prevalente em animais adultos e idosos, a evolução da enfermidade ocorreu de forma crônica em todos os animais selecionados, a monta natural constituiu um fator predisponente para o surgimento da doença, a coloração amarelada do sêmen e a dificuldade na ejaculação são sinais indicativos de alteração da glândula e a bactéria mais prevalente envolvida na etiopatogenia da infecção foi a Pseudomonas aeruginosa. De maneira geral, o tratamento local levou a uma melhora da qualidade seminal após uma semana (M1), no sêmen a fresco, refrigerado e congelado, quanto aos índices de cinética espermática e integridade de membrana plasmática (p<0,05). No sêmen a fresco promoveu redução do volume seminal, incremento da concentração espermática, redução da porcentagem de leucócitos e de UFC/mL no M1 em relação aos demais momentos ... / Abstract: Seminal vesiculitis has great relevance in reproductive clinic due to the difficulty of treatment, high rates of recurrence, risk of female contamination with pathogenic agents, retirement of animals and low fertility rates. Local treatment has been reported as the best therapeutic alternative, although no other studies have evaluated its effects on seminal quality and longevity. The aims of this study included: to investigate what are the main bacteria involved in the disease and the risk factors for stallions; to evaluate and to compare the effect of local treatment of seminal vesiculitis on the sperm kinetic parameters, morphology and viability (plasma membrane integrity), percentage of leukocytes and counting colony forming units (CFU) of fresh, cooled and frozen semen samples and the content of nitric oxide in the seminal plasma, before (M0) and after one week (M1) and one month (M2) therapy. The results allow us to infer that the seminal vesiculitis was more prevalent in adults and aged animals, the evolution of the disease appeared chronically in all selected animals, natural breeding was a risk factor for onset of the disorder, the bege coulor of semen and ejaculatory dysfunction were signs indicative of abnormalities in the gland and the most common bacteria involved in the pathogenesis of the infection was Pseudomonas aeruginosa. In general, the local treatment produced an improvement in semen quality after a week (M1) in fresh, cooled and frozen semen on the kinetic parameters and sperm viability (p<0.05). In fresh semen promoted reduction in the volume of ejaculate, sperm concentration increased, reducing the percentage of leukocytes and CFU/mL in M1 compared to the other moments (p<0.05). In frozen semen promoted reduction of lipid peroxidation and of ROS content in M1 compared to other moments (p<0.05). The cooled semen for 24 hours at 5°C and 15°C demonstrated similar efficiency in the pre and post-treatment ... / Mestre

Orientador: Fabiana Pilarski / Coorientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Rogério Salvador / Banca: Fabiana Garcia / Resumo: Com a intensificação da piscicultura brasileira, caracterizada por densidade de estocagem cada vez maior, especialmente em tanques-rede, tem-se observado um número crescente de enfermidades, principalmente de origem bacteriana, ocasionando alta mortalidade e prejuízos econômicos expressivos em todas as fases da criação. Um dos problemas relacionados ao controle de enfermidades na piscicultura é o uso constante e equivocado de antimicrobianos e quimioterápicos nas criações, que provocam problemas de resistência bacteriana e impactos ambientais que comprometem a qualidade do produto final. Assim, a busca por alternativas rápidas e eficazes de diagnóstico são cada vez mais necessárias, uma vez que contribuem para o controle de enfermidades antes que estas provoquem sinais clínicos irreversíveis e taxas de mortalidade elevada. Em vista disso, o diagnóstico molecular, representado pelas técnicas da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e suas variações, tais como sequenciamento e PCR em tempo real, constituem alternativas a serem exploradas. Desse modo, os objetivos deste trabalho foram: a) adaptar a metodologia de PCR de colônia aliada ao sequenciamento do gene 16S rRNA para bactérias que causam doenças em peixes, b) determinar a sensibilidade aos antimicrobianos florfenicol e oxitetraciclina dos gêneros bacterianos de maior frequencia, c) validar testes de PCR em tempo real para detecção e quantificação de Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae e avaliar sua especificidade e sensibilidade analítica d) aplicar a metologia validada no diagnóstico de infecções por esses patógenos em grupos de tilapias infectadas experimentalmente. Nas metodologias desenvolvidas, buscou-se redução de custos e tempo para diagnóstico. Os resultados encontrados demonstraram que a PCR de colônia apresentou redução de custos e tempo quando comparada às técnicas tradicionais de isolamento, identificação bioquímica ... / Abstract: With the intensification of the Brazilian fish farming, characterized by increasing density storage, especially in cages, it has been observed a growing number of diseases, mainly bacterial, causing high mortality and significant economic losses in all phases of breedin. One of the problems related to the control of diseases in fish farming is the constant misuse of antibiotics and chemotherapeutics that cause problems of bacterial resistance and environmental impacts which affect the quality of the final product. Thus, the search for rapid and effective diagnostic alternative is increasingly necessary, since they contribute to control of diseases before they cause irreversible clinical signs and high mortality rates. In view of this, the molecular diagnostic techniques represented by the Polymerase Chain Reaction (PCR) and its variations, such as sequencing and real time PCR, constitute alternatives to be explored. Thus, the objectives of this work were: a) adapting the methodology of colony PCR coupled with sequencing of the 16S rRNA gene for bacteria that cause disease in fish, b) determine the sensitivity to antimicrobial florfenicol and oxytetracycline bacterial genera of higher frequency, c) validate real-time PCR assay for detection and quantification of Aeromonas hydrophila and Streptococcus agalactiae and to evaluate its sensitivity and analytical specificity d) applying the validated Methodology for the diagnosis of infections caused by these pathogens in infected experimentally tilapias groups. In the developed methodologies, we attempted to reduce costs and time to diagnosis. The results showed that: colony PCR showed a reduction of costs and time compared to traditional isolation techniques, biochemical identification, DNA extraction and conventional PCR; the alliance of colony PCR and 16S rRNA gene sequencing allowed identification of all tested bacterial pathogens, not being necessary the design of specific ... / Doutor

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro da Cunha / Banca: Fábio Bernardi Dalpino / Resumo: S. aureus é, sem duvida, o patógeno humano mais importante entre os estafilococos. O surgimento e a disseminação progressiva da resistência a meticilina tiveram grande impacto na terapia das infecções estafilocócicas. O mecanismo de resistência a meticilina desenvolvido por S. aureus está relacionado com a alteração das proteínas ligadoras de penicilinas, as PBPs. Os Staphylococcus. aureus produzem 5 tipos de PBPs: 1,2,3,3', e 4. As cepas de S. aureus resistentes a meticilina produzem uma nova PBP, a PBP2a, adquirida de outras cepas de estafilococos. Diversos métodos são utilizados para detecção da resistência a meticilina no S. aureus. Dentre eles, a detecção da PBP2a por meio de métodos de aglutinação em látex utilizando anticorpo monoclonal específico dirigido para o antígeno PBP2a. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais murinos dirigidos contra a PP2a do S. aureus resistente a meticilina foram produzidos através de fusão celular utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados.Cinco fusões MRSA foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por testes Elisa indireto . Foram construídos e testados 1236 híbridos e nove híbridos se mostraram reativos após o 4º. teste de Elisa indireto. Os nove híbridos foram testados frente a diferentes bactérias para observar inibição do crescimento. Este trabalho teve como foco, a produção de anticorpo monoclonal murino para uso em testes de detecção rápida / Abstract: S. aureus is, without doubt, the most important human pathogen among staphylococci. The emergence and dissemination of progressive resistance to methicillin had great impact on therapy of staphylococcal infections. The mechanism of resistance to methicillin developed by S. aureus is related to the alteration of penicillin binding proteins, the PBPs. Staphylococcus. aureus produces five types of PBPs: 1,2,3,3 ', and 4. Strains of S. aureus resistant to methicillin produce a new PBP, PBP2a the acquired from other strains of staphylococci. Several methods are used for detection of methicillin resistance in S. aureus. Among them, the detection of PBP2a by latex agglutination methods using monoclonal antibody specific for the antigen directed PBP2a. In the present study, murine monoclonal antibodies directed against the PP2A methicillin resistant S. aureus were produced by cell fusion using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five MRSA fusions were performed and the culture supernatants were screened by testing indirect ELISA. Were built and tested in 1236 hybrids and nine of them were reactive after the 4th indirect ELISA test. The nine hybrids were tested against different bacteria to observe inhibition of growth. This work focused on the production of murine monoclonal antibody for use in rapid detection tests / Mestre