Orientador: Maeli Dal Pai / Coorientador: Francis Lopes Pacagnelli / Banca: Adriana Pertile / Banca: Thiago Luiz de Russo / Banca: Selma Maria Michelin Matheus / Banca: Ines Cristina Giometti / Resumo: Pesquisas recentes na área de fisioterapia buscam elucidar as alterações envolvidas na regeneração do músculo esquelético após a aplicação de recursos terapêuticos. Neste contexto, a aplicação da Laserterapia de Baixa Intensidade tem se mostrado eficaz para melhorar o processo de regeneração muscular, entretanto, o tipo de laser, os parâmetros de radiação, período avaliado e os mecanismos moleculares envolvidos no processo de regeneração demonstram resultados discrepantes. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Laserterapia de Baixa Intensidade, tipo (AsGa), comprimento de onda de 904 nm, 7 dias após a lesão e verificar se o tipo de laser e a dose escolhida tem influência no processo de regeneração muscular. Foram utilizados nesse estudo trinta ratos Wistar, machos, adultos (três meses de idade), peso corporal médio de 210-340g. Os animais foram randomizados em três grupos: Grupo Controle (C, n= 10), Grupo lesado não tratado (L, n=10) e o Grupo lesado e tratado (LT, n= 10). Após anestesia dos animias, a lesão muscular foi induzida por congelamento (criolesão) na região central do ventre do músculo tibial anterior (TA) de ambos os membros posteriores, por meio de uma haste de ferro previamente imersa em nitrogênio líquido. Como recurso terapêutico foi utilizado o laser de AsGa, comprimento de onda de 904 nanômetros. As aplicações do laser foram iniciadas 24 horas após a lesão, diariamente, com densidade de energia de 69 J/cm², (48 segundos), durante cinco dias, em dois pontos na área da lesão. Aos 7 dias, os animais foram pesados e mortos; o músculo TA de ambos membros posteriores foi retirado e processado para as análises morfológica e molecular. O músculo TA esquerdo foi congelado em nitrogênio líquido e cortes histológicos obtidos em criostato foram submetidos às coloraçõe s Hematoxilina e Eosina (para análise morfológica) e Picrosirius (para análise do colágeno). O músculo TA... / Abstract: Recent research in the field of physiotherapy has aimed to elucidate the main changes involved in skeletal muscle regeneration after application of therapeutic resources. In this context, the application of Low Level Laser Therapy has proven to be effective at improving the muscle regeneration process. However, the type of laser, irradiation parameters, evaluation period and molecular mechanisms involved in the regeneration process present conflicting results. The aim of this study was to evaluate the effects of Low Level Laser Therapy, type GaAs at 904 nm, during the muscle regeneration process, for seven days after the lesion, and verify whether both the GaAs laser and chosen dose influence the muscle regeneration process. Thirty Wistar male adult rats (three-month old), mean body weight 210 - 340 g were used in this study. The animals were randomized into three groups: Control Group (C, n=10), Untreated Lesion Group (L, n=10) and Treated Lesion group (TL, n=10). After anesthetizing the animals, muscle lesion was induced by freezing (cryoinjury) in the middle belly portion of the tibialis anterior muscle (TA) of both hind limbs, using an iron rod previously immersed in liquid nitrogen. A GaAs laser, with a wavelength of 904 nm was used as a therapeutic resource. Daily laser applications were initiated 24 hours after lesion, with an energy density of 69 J/cm2, (48 seconds), for five consecutive days, at two points in the lesion area. On the seventh day, the animals were euthanized and weighed; the TA muscles from both hindlimbs were removed and processed for morphological and molecular analysis. The left TA muscle was frozen in liquid nitrogen and histological sections obtained in a cryostat were submitted to Hematoxylin and Eosin (for morphological analysis) and Picrosirius (for collagen analysis) staining. The right TA muscle was used for the analysis of gene expression of MyoD, myogenin, TNF-α and TGF-β by using the Polymerase... / Doutor

O presente trabalho avaliou os efeitos provocados pela laserterapia de baixa intensidade (LTBI) no \'lâmbda\' 780 nm, 30 mW de potência e tempo de exposição de 150 segundos, resultando em uma fluência de 112,5 J/\'CM POT.2\' e energia total de 4,5 J, sobre o comportamento osteocondutor da vitrocerâmica elaborada a partir do genérico do biovidro de composição: 45% \'SI\'O IND.2\', 24,5% \'NA IND.2\'O\', 24,5% \'CA\'O\' e 6% \'P IND.2\'O IND.5\' em perfurações ósseas em tíbias de ratos. O biovidro foi recozido em cuba de inox acima de sua temperatura de transição vítrea, a 620 graus Celsius por 30 minutos e mantido a 790 graus Celsius por 60 minutos, em seguida foi realizada a espectroscopia Raman para verificar a cristalinidade. Foram realizadas perfurações abaixo da tuberosidade da tíbia direita de 64 machos de ratos da raça Wistar (Rattus norvegicus albinus) na idade adulta. Os mesmos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos sendo eles: um controle e três submetidos à procedimento experimental de implante e/ou irradiação laser de baixa intensidade. Em todos os grupos foram utilizados 16 indivíduos. Posteriormente, os animais de cada grupo foram subdivididos em dois subgrupos cada, de acordo com o tempo de vida antes da eutanásia, que ocorreu com 7 e 13 dias P.O. A análise das características das fibras colágenas para determinar a neoformação tecidual, bem como seu estado de maturação, foi realizada através de corpos de prova em forma de lâminas coradas com HE observadas à microscopia de luz comum para verificar a presença de células no foco de lesão, lâminas coradas com Picro Sirius sob luz polarizada a fim de verificar o estado organizacional e microscopia eletrônica de varredura, utilizando métodos técnico-experimentais para avaliar a interação do biomaterial com o tecido ósseo. Os valores de birrefringência demonstraram uma melhor organização tecidual dos grupos irradiados com ou sem o implante de vitrocerâmico (p < 0,05), os grupos com vitrocerâmico apresentaram o tecido mais difuso, até mesmo nas regiões mais centrais da lesão aos 13 dias. O vitrocerâmico estimulou a proliferação osteoblástica (p < 0,05), assim como a radiação laser (p < 0,01). Pode-se concluir que o vitrocerâmico utilizado apresenta capacidade osteocondutora e que a radiação laser acelerou o processo de reparo na presença ou não do vitrocerâmico. / The present study evaluated the effects caused by the low level laser therapy (LLLT) at \'lâmbda\' 780 nm, power of 30 mW and dose of 112.5 J/\'CM POT.2\' and total energy of 4.5 J on the behavior osteoconductor of the glass-ceramic drafted from generic of bioglass of composition: 45% \'SI\'O IND.2\', 24.5% \'NA IND.2\'O\', 24.5% \'CA\'O\' and 6% \'P IND.2\'O IND.5\' in drillings in tibia bone of rats. The bioglass was anneal in cuba of stainless above its glass transition temperature, to 620 Celsius degrees for 30 minutes and maintained at 790 Celsius degrees for 60 minutes, then was held to Raman spectroscopy to verify the crystallinity. Drillings were made below the tuberosity of the right tibia of 64 males of the race Wistar rats (Rattus Norvegicus Albinus) in adult age. They were randomly divided into 4 groups which are: a control and three underwent experimental procedure to implant and/or of low intensity laser irradiation. In all groups were used 16 individuals. Later, the animals in each group were further divided into two subgroups each, according to the time of life before euthanasia, which occurs with 7 and 13 days postoperative. The analysis of the characteristics of collagen fibers was conducted through: slides stained with HE seen the light microscopy, to quantify the presence of cells in the focus of injury, slides stained with Picro Sirius Red under polarized light to verify the organizational state, microscope electronic scanning, using technical experimental methods to evaluate the interaction of biomaterial with the bone tissue. The values of birefringence showed better tissue organization of groups irradiated with or without the implant of glass-ceramic (p < 0.05), the groups with glass-ceramic showed collagen fibers more diffuse, even in the most central of injury to 13 days. The glass-ceramic stimulated the osteoblast proliferation (p < 0.05) as well as laser radiation (p < 0.01). Thus it is possible to conclude that the glass-ceramic has osteoconductive capacity and that laser radiation accelerated the process of repairing in the presence or not of glass-ceramic.

Foi utilizado na presente pesquisa o ultra-som pulsado de baixa intensidade, com a finalidade de avaliar, experimentalmente, seus efeitos físicos sobre a regeneração do músculo esquelético de ratos. Foram empregados no experimento 10 animais de ambos os sexos. Após eleição do músculo glúteo maior, foram feitas incisões perpendiculares (pós anestesia) às suas fibras, alcançando aproximadamente dois terços de sua espessura. Seguinte às incisões, realizou-se síntese do músculo e dos planos superficiais. Foi convencionado estudar os efeitos do ultra-som pulsado após 3, 6 e 10 dias de estímulo. Antes do sacrifício dos animais foi-lhes administrado Colchicina, com a finalidade de bloquear a células em divisão. Mediante análise histopatológica comparativa dos músculos, constatou-se que enquanto nos animais não estimulados desenvolveu-se, aos 3 dias, áreas de necrose e inflamação, naqueles estimulados houve uma diminuição das mesmas. Além disso, nos animais estimulados, ocorre intensa neovascularização nas áreas de lesão. Observou-se também uma migração de células miogênicas (satélites) para restos de bainhas remanescentes de fibras musculares regeneradas. Constatou-se um aumento de mioblastos com núcleos em metáfase. Aos 10 dias, os animais estimulados exibiam inúmeros miotubos com formação de miofibrilas, caracterizando células musculares em franca maturação. Longe da área estimulada, o ultra-som foi capaz de induzir mitoses em células satélites. Notou-se que os efeitos do ultra-som pulsado aceleram a regeneração de fibras musculares mediante uma intensa neoformação vascular, acelerando a reparação da necrose e formação de mioblastos, os quais agregam-se em miotubos formando novas células. / It was used in the present research the low intensity pulsed ultrasound with aim of evaluating, experimentally, its physical effects on the regeneration of rats skeletal muscle. Ten male and female animals were used in this experiment. After election of the gluteus maximus muscle, perpendicular incisions were made (after anesthesia) in its fibers, reaching approximately two thirds of its thickness. After the incisions, a synthesis of the muscles and superficial plans was performed. It was established to study the effects of the pulsed ultrasound after 3, 6 and 10 day-stimuli. Before sacrificing the animals Colchinine was given aiming to block cells in division. By means of comparative histopathological analysis of the muscles, it was verified that in non-stimulated animals an area of necrosis developed in three days, while in those that were simulated there was a decrease of the same. Moreover, on the stimulated animals, there is intense neovascularization in the damaged area. A migration of myogenic cells (satellites) to rests of remaining sheaths from regenerated muscle fiber was also observed. It was verified an increase of myoblasts with nuclei in metaphase. In ten days, the stimulated animals showed countless myotubes with formations of myofibrils, characterizing mature muscle cells. Far from the stimulated area, the ultrasound was able of inducing mitosis to satellite cells. It was noticed that the effects of the pulsed ultrasound accelerate muscle fiber regeneration by means of an intense vascular neoformation, accelerating the restoration of the necrosis and the formation of myoblasts, which aggregates in myotubes forming new cells.

Estas células, cultivadas em meio de cultura MEMα suplementado com soro fetal bovino (SFB) 10%, entre a 10ª e 15ª passagem, foram submetidas a déficit nutricional com SFB 1% a 1 hora ou 24 horas antes da irradiação (protocolos A ou B, respectivamente). O meio foi mantido com suplementação de SFB 1% durante a irradiação e ao longo do tempo experimental nos grupos de I a IV, enquanto que para os grupos de V a VIII, o meio foi trocado para MEMα suplementado com SFB 10%. As células foram irradiadas com laser vermelho (660 nm) nas seguintes dosimetrias: 2,5 J/cm2 (grupos I e V), 5,0 J/cm2 (grupos II e VI) e 7,5 J/cm2 (grupos III e VII). As células não irradiadas constituíram os controles negativo (grupo IV) e positivo (grupo VIII). A avaliação da citotoxicidade/integridada da membrana celular foi realizada pela quantificação da desidrogenase lática (LDH) no meio de cultura após a irradiação. A viabilidade celular foi avaliada pelo método MTT 24, 48 e 72 horas após a irradiação. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA a 2 critérios seguido pelo teste de Tukey (P<0,05). Os níveis de LDH no meio de cultura em que as SHED eram mantidas foram semelhantes quando comparados os protocolos A e B para a mesma densidade de energia e mesma concentração de SFB no momento da irradiação. No protocolo A, as células estavam mais viáveis 24 horas após a irradiação independente da densidade de energia, já no protocolo B, não houve alteração na viabilidade celular nos grupos IV (controle negativo), V, VI, VII e VIII (controle positivo) ao longo do tempo. Portanto, a indução de estresse celular por meio da suplementação do meio de cultura com SFB 1%, uma hora antes da irradiação, foi mais favorável para a manutenção da viabilidade de SHED após a irradiação, sem alterar os níveis de LDH extracelular, em comparação com os resultados após déficit nutricional por 24 horas. / The purpose of the present study was to analyze in vitro the effects of different nutritional deficit conditions to induce the state of cellular stress, prior to irradiation with different dosimetries of Low Level Laser Therapy (LLLT), on the biomodulation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). These cells, cultured in MEMα culture medium supplemented with 10% FBS, between the 10th and 15th passage, were subjected to nutritional deficit with 1% FBS one hour or 24 hours prior to irradiation (protocols A or B, respectively). In both protocols, cells were irradiated with red laser (660 nm) in the following dosimetries: 2.5 J/cm2 (groups I and V), 5.0 J/cm2 (groups II and VI) and 7.5 J/cm2 (groups III and VII). Non-irradiated cells constituted the negative (group IV) and positive (group VIII) controls. Evaluation of citotoxicity/integrity of cellular membrane was performed by the quantification of lactate dehydrogenase (LDH) in the culture medium after irradiation. Cell viability was assessed by MTT method 24, 48 and 72 hours after irradiation. Data were submitted to two-way ANOVA followed by Tukey test (P<0.05). The levels of LDH at the culture medium where SHED were grown were similar when compared protocols A and B for the same energy density and same concentration of FBS during irradiation. In protocol A, cells were more viable 24 hours after irradiation, irrespective of the energy density, while in protocol B, there was no alteration in cell viability in groups IV (negative control), V, VI, VII and VIII (positive control) over time. Therefore, the induction of cellular stress by culture medium supplementation with 1% FBS, one hour prior to irradiation, was more favorable for maintaining SHED viability after irradiation, with no alteration in the levels of extracellular LDH, in comparison with the results after 24-hour nutritional deficit.

A fotobiomodulação (PBM) utiliza a luz nas porções do espectro visível e infravermelho para estimular a produção de trifosfato de adenosina (ATP), síntese de ácidos nucleicos, geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e proliferação celular, promovendo resultados teraupêuticos benéficos, como a aceleração do reparo tecidual, analgesia e ativação de células do sistema imune. Deste modo, a presente pesquisa visou elucidar os efeitos da PBM sobre monócitos humanos in vitro, a fim de possivelmente estimular o burst oxidativo e, consequentemente, potencializar a defesa imune celular contra micro-organismos, além de analisar a expressão gênica em nível de RNA mensageiro (mRNA) de CD68, CD80, CD163, CD204, IL-6, TNF-α, IL-10 e SOD1 em macrófagos derivados destas células. Neste contexto, culturas primárias de monócitos humanos foram irradiadas com o laser de diodo InGaAlP (660nm)/ GaAlAs (780nm) - Twin Flex® (MMO, São Carlos, SP, Brasil), operando com potência de 40mW, área de feixe de 0,04cm2, densidade de potência de 1W/cm2 e doses independentes de 200J/cm2, 400J/cm2 e 600J/cm2. Após isto, as células foram submetidas ao ensaio de quimioluminescência para avaliação do burst oxidativo e quantificação da produção de ROS intracelulares e extracelulares. Ensaio da atividade microbicida foi realizado contra o fungo Candida albicans. Como controles positivo e negativo, utilizou-se o forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) e o diphenyleneiodonium (DPI), respectivamente. A viabilidade celular foi verificada por meio do reagente azul de Trypan. Adicionalmente, os monócitos humanos irradiados foram cultivados por 72 horas, a fim de observar a diferenciação destas células em macrófagos mediante estímulos relacionados a macrófagos ativados pela via clássica (M1) (LPS e Candida albicans) e a macrófagos ativados pela via alternativa (M2) (M-CSF). O RNA total foi extraído de cada grupo experimental e submetido à transcrição reversa e PCR em tempo real. GAPDH foi utilizado como controle endógeno e a expressão relativa de cada gene foi calculada utilizando o método 2-ΔCt. A produção de nitrito (NO2) também foi mensurada através da reação de Griess. Os resultados obtidos foram analisados por ANOVA e teste de Tukey ao nível de significância de 5%. Para dados com variâncias desiguais, utilizou-se o Kruskal-Wallis e pós-teste de Newman-Keuls. Desta forma, os monócitos irradiados apresentaram um aumento significativo na produção de ROS intracelulares e extracelulares comparativamente ao grupo controle (P < 0,001), sendo o comprimento de onda de 660nm e a dose de 400J/cm2, os parâmetros que mais se destacaram (P < 0,001). Como consequência deste perfil funcional elevado dos monócitos irradiados, a capacidade fungicida dos mesmos contra Candida albicans mostrou-se bastante aumentada (P < 0,001). Além disso, observou-se que a PBM (660nm; 400J/cm2) não causou danos à viabilidade celular dos monócitos nos dias subsequentes à irradiação laser. A análise da expressão gênica revelou que a PBM (660nm; 400J/cm2) aumentou significativamente a expressão da citocina pró-inflamatória TNF-α pelos monócitos irradiados (P = 0,0302), aproximando-os de uma resposta imune Th1. Complementarmente, um aumento significativo na produção de NO2 pelos monócitos irradiados também foi observado (P < 0,05). Portanto, a PBM, como empregada neste estudo, foi capaz de aumentar a geração de ROS e NO2, intensificar a atividade microbicida contra Candida albicans e aumentar a expressão de TNF-α, sugerindo uma modulação da PBM na indução de agentes pró-inflamatórios relacionados ao perfil funcional de M1. Vislumbramos em um futuro próximo, a reprodução desses resultados em monócitos humanos in vivo, colaborando no tratamento de candidoses orais, por exemplo. / Photobiomodulation (PBM) comprises the use of light within the visible and infrared spectrum to stimulate the production of adenosine triphosphate (ATP), nucleic acid synthesis, generation of reactive oxygen species (ROS) and cell proliferation, thus promoting beneficial therapeutical results, such as the acceleration of tissue repair, analgesia and activation of cells of the immune system. In that way, the present research aimed to elucidate the effects of PBM on human monocytes in vitro by possibly stimulating the oxidative burst of these cells and, consequently, enhancing the cellular immune defense against microorganisms, in addition to analyzing the gene expression at the messenger RNA (mRNA) level of CD68, CD80, CD163, CD204, IL-6, TNF-α, IL-10 and SOD1 in macrophages derived from these cells. Thus, primary cultures of human monocytes were irradiated with an InGaAlP (660nm)/ GaAlAs (780nm) - Twin Flex® diode laser (MMO, São Carlos, SP, Brazil), operating with power of 40mW, beam area of 0.04cm2, power density of 1W/cm2 and independent doses of 200J/cm2, 400J/cm2 e 600J/cm2. Cells were then submitted to the chemiluminescence assay for oxidative burst evaluation and quantification of intracellular and extracellular ROS production. A microbicidal activity assay was performed against the fungus Candida albicans. As positive and negative controls, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and diphenyleneiodonium (DPI) were used, respectively. Cell viability was verified by Trypan blue reagent. Besides, irradiated human monocytes were cultured for 72 hours in order to observe the differentiation of these cells into macrophages by stimuli related to macrophages activated by the classical pathway (M1) (LPS and Candida albicans) and macrophages activated by the alternative pathway (M2) (M-CSF). Total RNA was extracted from each experimental group and submitted to reverse transcription and real-time PCR. GAPDH was used as endogenous control and the relative expression of each gene was calculated using the 2-ΔCt method. The production of nitrite (NO2) was also measured by the Griess reaction. The results obtained were analyzed by ANOVA and Tukey's test at a significance level of 5%. For data with unequal variances, Kruskal-Wallis and Newman-Keuls post-test were used. In that way, irradiated monocytes presented a significant increase in intracellular and extracellular ROS production compared to the control group (P < 0.001). The wavelength of 660nm and the dose of 400J/cm2 were the most relevant parameters (P < 0.001). As a consequence of this high functional profile of the irradiated monocytes, the fungicidal capacity of the monocytes against Candida albicans was shown to be greatly increased (P < 0.001). In addition, it was observed that PBM (660nm; 400J/cm2) did not cause damage to the cell viability of monocytes in the days following laser irradiation. Analysis of the gene expression revealed that PBM (660nm; 400J/cm2) significantly increased the expression of the proinflammatory cytokine TNF-α by the irradiated monocytes (P = 0.0302), bringing them closer to a Th1 immune response. Additionally, a significant increase in NO2 production by irradiated monocytes was also observed (P < 0.05). Therefore, PBM, as employed in this study, was able to increase ROS and NO2 generation, enhance microbicidal activity against Candida albicans and increase TNF-α expression, suggesting a modulation of PBM in the induction of related pro-inflammatory agents to the functional profile of M1. We envisage in a near future, the reproduction of these results in human monocytes in vivo, which would collaborate to the treatment of oral candidoses, for example. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O sucesso do tratamento com implantes osseointegráveis dependente do processo de reparo da ferida e do potencial osteogênico das células. Com o objetivo de aumentar a formação óssea na superfície dos implantes, vários tratamentos têm sido propostos, entre eles, a terapia com laser de baixa intensidade. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do laser diodo de Arseneto-Gálio-Alumínio (AsGaAl) em culturas osteogênicas humanas crescidas sobre titânio. Após exposição das culturas, aos 3 e 7 dias, a uma dose de 3 J/cm2, foram avaliados os seguintes parâmetros: 1) proliferação celular aos 10 e 14 dias; 2) atividade de fosfatase alcalina (ALP) em 10, 14 e 17 dias; 3) formação de matriz mineralizada em 17 dias; 4) imunolocalização de proteínas não-colágenas e do antígeno nuclear Ki-67 por fluorescência indireta em 8, 10, 14 e 17 dias; 5) expressão de genes relacionados ao desenvolvimento do fenótipo osteoblástico aos 14 dias. Os resultados dos ensaios de proliferação celular mostraram que a radiação laser aumentou a proliferação de 10 para 14 dias, mas tanto a atividade de ALP como a formação de matriz mineralizada aparentemente não foram afetadas. A análise das culturas por epifluorescência mostrou que as culturas controle e irradiadas apresentaram comportamento distintos. Aos 14 dias, foi demonstrado que a exposição à radiação laser, na dose utilizada, promoveu aumento na expressão relativa dos genes ALP, OC, BSP, BMP-7 e OPG e redução dos níveis de expressão de Runx2 e osteopontina, mas não afetou a expressão gênica de COL I, RANK-L e ICAM. As culturas irradiadas apresentaram áreas sem células após 24 h da última irradiação, que posteriormente foram repovoadas por células mais proliferativas e menos diferenciadas. Em conclusão, os resultados indicam que a radiação do laser diodo de AsGaAl estimula a expressão do fenótipo osteoblástico de culturas osteogênicas humanas crescidas sobre titânio. / The success of treatment with osseointegrated implants depends on wound healing and the osteogenic potential of cells. Aimed at increasing bone formation onto implant surfaces, several treatments have been proposed and low-intensity laser therapy is one of them. Thus, the purpose of this study was to investigate the effect of the Gallium-Aluminum-Arsenic (GaAlAr) diode laser on human osteogenic cultures grown on titanium. After irradiation of osteogenic cultures with 3 J/cm2 of GaAlAr laser at the days 3 and 7, the following parameters were evaluated: 1) cell proliferation at 10 and 14 days; 2) alkaline phosphatase activity (ALP) at 10 days; 3) mineralized matrix formation at day 17, 4) non-collagenous bone proteins and nuclear antigen Ki-67 immunolocalization by indirect fluorescence at 8, 10, 14 and 17 days; and 5) Expressions of a panel of genes related to osteoblastic phenotype at day 14. Apparently cell proliferation, ALP activity and mineralized matrix formation were not significantly different between irradiated and control cultures in any period. Epifluorescence revealed that control and irradiated cultures had presented different behaviors. At 24 h after irradiation procedures, irradiated cultures displayed areas with no cells, which were repopulated later on by proliferative and apparently less-differentiated cells. Laser radiation increased relative gene expression of ALP, OC, BSP, BMP-7, and OPG; reduced the gene expression of Runx2 and OPN; and did not affect the expression of COL-1, RANK-L and ICAM. Altogether these results indicated that the GaAlAr laser stimulates the expression of osteoblastic phenotype of human osteogenic culture cells grown on titanium.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000399357-Texto+Completo-0.pdf: 1396496 bytes, checksum: 2fad2df47997209231d151979b59a483 (MD5) Previous issue date: 2008 / The purpose of this study was to investigate the potential effect of low level laser therapy (LLLT) on modulating the pro-inflammatory and antiinflammatory mediators of acute inflammation in rat pleurisy model. In the classic model of pleurisy there is little evidence of anti-inflammatory effects from LLLT and dosage characteristic, such as wavelength, total energy, number and pattern of treatment, with the necessity for more studies. A sample of 48 female Wistar rats were divided into control and experiential groups. An inflammation was induced by carrageenan (0. 2mL) injected into the pleural cavity. At 1, 2, and 3 h after induction the continuous wave (20 mW) diode laser of the InGaAlP (660nm) type was used in laser groups different doses and treatment patterns and with a total energy delivered of 0. 9, 2. 1 and 4. 2 joules. At 4 h after the exudate volume, total and differential leukocytes, protein concentration, nitric oxide (NO), interleukin (IL)-6, interleukin (IL)-10, tumor necrosis factor (TNF)-J and monocyte chemoattractant protein (MCP)-1 were measured from the aspirated liquid. Any treatment pattern and quantity of energy can reduce a significantly volume of the exudate (P<0,05). The final energy lower than 2. 1 joules reduces significantly (P<0,05) only NO, IL-6, MCP-1 and IL-10, while 2. 1 joules reduce significantly all variables independently of the treatment pattern. The neutrophil migration has significant correlation with the TNF-J concentration (r=0,551). The LLLT (660nm) induced an anti-inflammatory effect characterized by inhibition of both total and differential leukocyte influx, exudation, total protein, NO, IL-6, MCP-1, IL-10 and TNF-J, but keeping a highly dose-dependent outline. Under these conditions, laser with 2. 1 joules was more effective than 0. 9 joule and 4. 2 joules. / A proposta deste estudo foi investigar o efeito potencial da terapia laser de baixa intensidade na modulação de mediadores pró-inflamatórios e antiinflamatórios na fase aguda da inflamação no modelo de pleurisia em ratos. No modelo clássico de pleurisia temos poucas evidencias do efeito antiinflamatório do laser e das características de dosagem, como o comprimento de onda, energia total, números e formas de tratamento, necessitando ainda de mais estudos. A amostra de 48 ratas Wistar foram divididas em grupos controle e experimentais. A inflamação foi induzida por carragenina (0. 2 mL) injetada na cavidade pleural. Na 1ª, 2ª e 3ª hora após a indução o laser diodo de InGaAlP (660 nm) no modo contínuo (20 mW) foi usado nos grupos laser diferentes doses e formas de tratamento, com uma energia total de 0. 9, 2. 1 e 4. 2 joules. Após 4 horas o volume de exsudato, leucócitos totais e diferencial, concentração de proteínas, oxido nítrico (NO), interleucina (IL)-6, interleucina (IL)-10, fator de necrose tumoral (TNF)-J e proteína quimioatrativa de monócitos (MCP)-1 foram mensuradas no liquido pleural aspirado. Todas as formas de tratamento e quantidade de energia reduzem significativamente o volume do exsudato (P<0,05). A energia final abaixo de 2. 1 joules somente reduz significativamente (P<0,05) o NO, IL-6, MCP-1 e IL-10, enquanto que 2. 1 joules reduz significativamente todas as variáveis independente da forma de tratamento. A migração de neutrófilos tem uma correlação significativa com a concentração de TNF-J (r=0,551). A terapia laser de baixa intensidade (660 nm) induz um efeito antiinflamatório caracterizado pela inibição de ambos leucócitos totais e diferencial, exsudato, proteínas totais, NO, IL-6, MCP-1, IL-10 e TNF-J, mas mantendo um alto perfil dose-dependente. Nestas condições acima, o laser com 2. 1 joules foi mais efetivo que 0. 9 joule e 4. 2 joules.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-05T21:48:08Z No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-11T20:24:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T20:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RomuloAugustoDePaivaMacedo_DISSERT.pdf: 1406598 bytes, checksum: 872fd8fc67bafca4beb6d8332bade82f (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / A fotobiomodulação (PBM) estimula a proliferação de diferentes tipos celulares, incluindo células-tronco. A células-tronco da polpa do dente decíduo esfoliado (SHEDs) apresentam um potencial de diferenciação maior do que as demais célulastronco mesenquimais, sendo o foco de diversas pesquisas na área da engenharia tecidual. Para que as células proliferarem e se diferenciem in vitro é necessário o desenvolvimento de um microambiente favorável, o qual pode ser fornecido por um biomaterial que mimetize a matriz extracelular natural, destacando-se para esta finalidade o ácido poliláctico (PLA) por suas propriedades de biocompatibilidade e biodegradabilidade, além do baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da PBM em diferentes doses na proliferação e viabilidade de SHEDs cultivadas sobre arcabouços bidimensionais de PLA. As SHEDs foram cultivadas sobre os filmes e divididas em três grupos: (C) controle não irradiado; (L1) irradiadas com dose de 1 J/cm2; e (L4) irradiadas com dose de 4 J/cm2. As irradiações foram realizadas com laser diodo InGaAlP, com comprimento de onda de 660 nm e potência de 30 Mw, em dose única. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas nos intervalos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação, através do ensaio do Alamar Blue, enquanto a morfologia e a distribuição das células na superfície dos filmes foram avaliadas por MEV no intervalo de 72 horas. Os dados quantitativos foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos. Os dados do ensaio do Alamar Blue mostraram que os grupos L1 e L4 exibiram uma maior proliferação celular em comparação ao grupo C, sendo as diferenças significativas entre L1 e C em 48 e 72 h (p<0,0001) e entre L4 e C em 24 (p<0,01), 48 (p<0,001) e 72 h (p<0,0001). O percentual de redução do Alamar blue mostrou-se significativamente maior em L4 em comparação com L1 em 24 e 72 h (p<0,05). A análise das amostras por MEV mostrou que nos grupos irradiados as células apresentavam uma distribuição mais homogênea ao longo da superfície dos filmes e uma maior densidade celular em comparação com o grupo C, sendo esta diferença ainda mais evidente no grupo L4. Conclui-se que a PBM nos parâmetros estudados, especialmente na dose de 4 J/cm2, estimula a proliferação de SHEDs em contato com filmes de PLA, constituindo assim uma ferramenta metodológica com potencial aplicação nas técnicas de engenharia tecidual / Photobiomodulation (PBM) stimulates the proliferation of different cell types, including stem cells. Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) present a greater differentiation potential compared to other mesenchymal stem cells, being the focus of several studies in the field of tissue engineering. In order for cells to proliferate and differentiate in vitro it is necessary to develop a favorable microenvironment, which can be provided by a biomaterial that mimics the natural extracellular matrix, with polylactic acid (PLA) being distinguished for this purpose due to its properties of biocompatibility and biodegradability, as well as low cost. The aim of this study was to evaluate the effect of PBM in different doses on the proliferation and viability of SHEDs cultured on two-dimensional PLA scaffolds. SHEDs were cultured on the films and divided into three groups: (C) non-irradiated control; (L1) irradiated with a dose of 1 J/cm2; and (L4) irradiated with a dose of 4 J/cm2. The irradiations were performed with an InGaAlP diode laser, with wavelength of 660 nm and power of 30 Mw, in a single dose. Cell viability and proliferation were evaluated at 24, 48 and 72 h after irradiation by Alamar Blue assay, while cell morphology and distribution on the surface of the films were evaluated by SEM at 72 hours. The quantitative data were submitted to non-parametric statistical tests. Data from Alamar blue assay showed that groups L1 and L4 exhibited greater cell proliferation compared to group C, with significant differences between L1 and C at 48 and 72 h (p<0.0001) and between L4 and C in 24 (p<0.01), 48 (p<0.001) and 72 h (p<0.0001). The percentage of reduction of Alamar blue was significantly higher in L4 compared to L1 at 24 and 72 h (p<0.05). Analysis of the samples by SEM showed that in the irradiated groups the cells had a more homogeneous distribution along the surface of the films and a higher cell density compared to the group C, with this difference being even more evident in the group L4. We conclude that PBM in the studied parameters, especially with the dose of 4 J/cm2, stimulates the proliferation of SHEDs in contact with PLA films, thus constituting a methodological tool with potential application in tissue engineering techniques.

Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar a influência do laser de baixa energia na prevenção ou redução de mucosite oral em crianças e adolescentes. Pacientes e Métodos: Este trabalho foi um ensaio clínico randomizado cego. Pacientes de três a 18 anos tratados com quimioterapia ou transplante de células progenitoras hematopoéticas entre maio de 2003 e fevereiro de 2005 foram incluídos no estudo. Nos pacientes do grupo intervenção foi aplicado laser na mucosa oral por cinco dias, a partir do primeiro dia da quimioterapia. As avaliações orais foram realizadas no primeiro dia, no oitavo e no 15º dia após o início do tratamento, utilizando-se a escala para avaliação do grau de mucosite oral recomendada pela Organização Mundial de Saúde de 1998. As avaliações foram realizadas pelo mesmo examinador, sem envolvimento na randomização. Resultados: Sessenta pacientes foram incluídos no estudo, 39 (65%) foram meninos, 35 (58%) tinham diagnóstico de leucemias e linfomas e 25 (42%) tinham diagnóstico de tumores sólidos. A média de idade foi 8,7 ± 4,3 anos. Vinte e nove pacientes foram randomizados para receber a intervenção e 31 para o grupo controle. Nenhum paciente teve evidência de mucosite oral na primeira avaliação. Na segunda avaliação, no dia oito, 20 pacientes (36%) desenvolveram mucosite, 13 deles eram do grupo que recebeu laser e sete do grupo controle. Na terceira avaliação, no dia 15, 24 (41%) pacientes desenvolveram mucosite oral, 13 deles foram do grupo laser e 11 do grupo controle. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos para o grau de mucosite oral no dia oito (P=0,234), nem no dia 15 (P=0,208). Conclusão: O uso do laser de baixa intensidade não mostrou evidências suficientes que possam justificar a sua recomendação como medida preventiva para mucosite oral em crianças e adolescentes submetidas à quimioterapia.

OBJETIVO: O estudo foi conduzido para determinar o quanto o Laser de Baixa Intensidade (LBI), em adição com um protocolo de higiene oral, pode reduzir a duração da mucosite oral (MO) induzida por quimioterapia e/ou radioterapia. PACIENTES E MÉTODOS: Um ensaio clínico randomizado placebo controlado foi desenvolvido utilizando o LBI ou controle (sham-treatment) em 2 centros de tratamento do câncer - a Unidade de Oncologia Pediátrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) e a Unidade de Oncologia do Hospital São Vicente de Paulo de Passo Fundo (HSVP). Pacientes em tratamento quimioterápico e/ou radioterápico entre os meses de outubro de 2005 e maio de 2006 foram elegíveis tão logo desenvolvessem MO. Os pacientes receberam intervenção por 5 dias. O grupo LBI foi tratado com GaAlAs, comprimento de onda: 830nm (infravermelho), potência: 100mW, dose: 4J/cm2 e o grupo controle com o sham-treatment. O grau de MO foi avaliado clinicamente através da escala da World Health Organization - National Cancer Institute - Common Toxicity Criteria (WHO-NCI-CTC). RESULTADOS: Os resultados foram expostos de acordo com cada centro envolvido. UOP - HCPA: vinte e um pacientes desenvolveram MO no grupo pediátrico e foram submetidos à análise; 18 (86%) pacientes possuíam diagnóstico de leucemia ou linfoma e 3 (14%) de tumores sólidos. A média de idade foi de 8,2 (± 3,1) anos. Nove pacientes foram randomizados no grupo laser e doze no grupo sham-treatment. A MO foi mensurada quando os sintomas foram manifestados em cada paciente, sendo a duração e o grau de MO graduados diariamente até a completa cicatrização das lesões. No dia 7 após o diagnóstico da MO, 11% dos pacientes permaneciam com lesões no grupo laser e 75% no grupo sham-treatment (P=0,029). No grupo tratado com laser a média de duração da MO foi de 5,8 ± 2 dias e no grupo sham-treatment 8,9± 2,4 dias (P=0,004). UO-HSVP: trinta e quatro pacientes desenvolveram MO no grupo dos adultos e foram submetidos à análise; 22 (65%) dos pacientes possuíam diagnóstico de tumores sólidos e 12 (35%) de leucemia ou linfoma. A média de idade foi de 41 (± 20 anos). 18 pacientes foram randomizados no grupo laser e 16 no grupo sham-treatment. A MO foi mensurada quando os sintomas foram manifestados em cada paciente, sendo a duração e o grau de MO graduados diariamente até a completa cicatrização das lesões. No dia 7 após o diagnóstico da MO, 32% dos pacientes permaneciam com lesões no grupo laser e 94% no grupo sham-treatment (P=0,001). No grupo tratado com laser a média de duração da MO foi de 6,8 ± 2,2 dias e no grupo sham-treatment 11,5± 3,5 dias (P<0,001). CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou evidências que a laserterapia em adição com um protocolo de higiene oral pode reduzir a duração da MO induzida por quimioterapia e radioterapia. Em decorrência destes achados, esta modalidade de tratamento pode ser difundida e aplicada no intuito de promover qualidade de vida aos pacientes durante os tratamentos quimioterápicos e radioterápicos. / BACKGROUND: The study was conducted to determine whether Low level laser therapy (LLLT) in addition to oral care can reduce the duration of chemotherapy and/or radiotherapy induced oral mucositis (OM). PROCEDURE: A placebo-controlled randomized study was carried out using LLLT or placebo (sham-treatment) in two centers of cancer treatment - Pediatric Oncology Unit (POU) of HCPA and Oncology Unit (OU) of HSVP. Patients treated with chemo and/or radiotherapy between Oct, 2005 and May, 2006 were eligible as soon as they developed OM. Patients received intervention for 5 days. The LLLT group was treated with Laser GaAlAs, wavelenght: 830nm (infrared), power: 100mW, dose: 4J/cm2 and the control group with sham-treatment. The grade of OM was clinically assessed by the WHONCI- CTC scale. RESULTS: Results were showed according with the center. POU-HCPA: Twenty-one patients developed OM in the children group and were submitted for analysis; 18 (86%) patients had a diagnosis of leukemia or lymphoma and 3(14%) had solid tumors. The mean age was 8.2 (± 3.1) years. Nine patients were randomized in the laser group and twelve patients in the placebo-control group. OM was measured when symptoms were manifest and the duration of OM and the grade of lesions found in each patient were recorded at the start of laser therapy and daily until complete healing of the lesions. On day 7 after OM diagnosis, 11% of patients presented lesions in laser group and 75% of patients in the sham-treatment group (P=0.029). In the group treated with laser the mean of OM duration was 5.8 ± 2 days and in the sham-treatment group 8.9± 2.4 days (P=0.004). OU-HSVP: Thirty-four patients developed OM and were submitted for analysis; 22 patients (65%) had diagnosis of solid tumors and 12 (35%) leukemia or lymphoma. The mean age was 41 (± 20) years. Eighteen patients were randomized in the laser group and 16 patients in the placebo-control group. Once OM was diagnosed, the patients had daily OM grading assessments before laser application, and thereafter until complete healing process of lesions. On day 7 after OM diagnoses , 32% of patients presented lesions in laser group and 94% of patients in the sham-treatment group (P=0.001). In the laser group the mean of OM duration was 6.8 ± 2.2 days and in the sham-treatment group was 11.5 ± 3.5 days (P<0.001). CONCLUSION: Our study has shown evidence that laser therapy in addition to oral care can decrease the duration of chemotherapy induced OM. It should encourage clinicians to use this technique to improve quality of life of cancer patients during the oncology treatment.