The thesis focuses on description of specific area of Doksy region, situated in northern Bohemia. This region was affected by fifty years of military management. Vegetation composition, species richness and several environmental characteristics were measured and statistically tested to determine the effect of military area on landscape and vegetation. No significant difference in species richness, but important changes in species composition were discovered. Also the environmental (soil) characteristics of the area were probably changed by the military history of landscape. There were no major changes in Beta diversity uncovered, probably because of different management leading to the same resulting changes applied in the landscape. Also four invasive plant species were found in high numbers present in the area connected with past military land-use.

Os aplicadores clínicos de 90Sr+90Y são instrumentos utilizados em procedimentos de braquiterapia e devem ser calibrados periodicamente, de acordo com normas e recomendações internacionais. Neste trabalho, foram estudados quatro métodos de calibração de aplicadores dermatológicos e oftálmicos, comparando-se os resultados com os fornecidos pelos certificados de calibração dos fabricantes dos aplicadores. Os métodos envolveram o aplicador clínico padrão do Laboratório de Calibração de Instrumentos (LCI), calibrado pelo laboratório padrão primário americano do National Institute of Standards and Technology, como referência; um aplicador da Amersham, também pertencente ao LCI, como referência; uma mini-câmara de extrapolação desenvolvida no IPEN como padrão absoluto; e dosimetria termoluminescente. A mini-câmara de extrapolação e uma câmara de extrapolação comercial PTW foram estudadas com relação ao seu desempenho por meio de testes de controle de qualidade, como corrente de fuga, repetitividade e reprodutibilidade. A distribuição de dose em profundidade na água, estudo de grande importância na dosimetria de aplicadores clínicos, foi determinada utilizando-se a mini-câmara de extrapolação e dosímetros termoluminescentes. Os resultados obtidos foram considerados satisfatórios para os dois casos, quando comparados com os dados fornecidos pela norma IAEA (2002). Além disso, foi desenvolvido um sistema postal dosimétrico para a calibração de aplicadores clínicos por meio da técnica da termoluminescência, para ser enviado para clínicas e hospitais, sem a necessidade do transporte das fontes ao LCI do IPEN para calibração. / 90Sr+90Y clinical applicators are instruments used in brachytherapy procedures and they have to be periodically calibrated, according to international standards and recommendations. In this work, four calibration methods of dermatological and ophthalmic applicators were studied, comparing the results with those given by the calibration certificates of the manufacturers. The methods included the use of the standard applicator of the Calibration Laboratory (LCI), calibrated by the National Institute of Standards and Technology; an Amersham applicator (LCI) as reference; a mini-extrapolation chamber developed at LCI as an absolute standard; and thermoluminescent dosimetry. The mini-extrapolation chamber and a PTW commercial extrapolation chamber were studied in relation to their performance through quality control tests of their response, as leakage current, repetibility and reproducibility. The distribution of the depth dose in water, that presents high importance in dosimetry of clinical applicators, was determined using the miniextrapolation chamber and the thermoluminescent dosimeters. The results obtained were considered satisfactory for the both cases, and comparable to the data of the IAEA (2002) standard. Furthermore, a dosimetry postal kit was developed for the calibration of clinical applicators using the thermoluminescent technique, to be sent to clinics and hospitals, without the need of the transport of the sources to IPEN for calibration.

A integração de fatores contemporâneos locais e procesos biogeográficos fornece uma visão ampla e promissora a respeito da diversidade de espécies e seus padrões de diversidade. Utilizando ferramentas recentes para análises espaciais, eu integro fatores históricos e contemporâneos para analisar a distribuição e beta diversidade espécies de anuros do Cerrado. Forneço informações atualizadas a respeito da composição e distribuição das espécies de anuros no Cerrado, com base em um extensivo levantamento em coleções zoológicas e estudos de campo. Analiso a distribuição e beta diversidade em um contexto histórico, enfocando as relações do Cerrado com seus domínios vizinhos, e suas condições ambientais. Registrei 204 espécies de anuros no Cerrado, das quais 50% são endêmicas. Espécies que ocorrem no Cerrado e mais um domínio apresentam alta estruturação espacial, na qual espécies amazônicas estão restritas à porção noroeste e as espécies atlânticas estão restritas à porção sudeste do Cerrado. Registrei espécies endêmicas em quase todas as localidades e em todas as regiões, enquanto espécies de distribuição restrita ocorrem apenas em regiões montanhosas no centro, sudeste e sudoeste do Cerrado. Gêneros originado na Mata Atlântica e Amazonia estão distribuídos em um padrão de \"tabuleiro de xadrez\" dentro do Cerrado, e co-ocorrem menos do que seria esperado ao acaso. Essa estruturação espacial no Cerrado é influenciada pela ação combinada das condições ambientais e restrições históricas: gêneros atlânticos estão predominantemente distribuídos em áreas de montanha, com baixa precipitação e próximas ao limite com a Mata Atlântica, enquanto gêneros amazônicos estão distribuídos em vales mais próximos ao limite com a amazônia. Da mesma forma, os padrões de beta diversidade no Cerrado parece estar fortemente influenciados pelos gradientes ambientais, uma vez que metade da dissimilaridade na composição de espécies entre taxocenoses foi explicada por estes preditores. Espécies endêmica responderam às condições ambientais regionais de forma mais intensa que todas as espécies em conjunto. A resposta das espécies endêmicas parece estar relacionada na similaridade do ambiente em que ocorrem em relação aos domínios vizinhos, uma vez que suas espécies-irmãs estão principalmente distribuídas por estas regiões. Meus resultados reforçam a importância de se considerar a história biogeográfica das linhagens nas análises dos padrões regionais de disversidade. Demonstro também que a heterogeneidade na distribuição das espécies de anuros pode ter uma base histórica, que interage com restrições atuais, como o clima, disponibilidade de habitat e interações ecológicas na montagem de comunidades. / Integrating local contemporary factors and biogeographic processes allows a promising and broad view on species diversity and distribution patterns. Building on the development of new tools for spatial analysis, I integrate historical and contemporary factors that may explain species distribution and beta diversity patterns of anuran amphibians in Brazilian Cerrado. Especifically, I update information about species composition and distribution of anurans in the Cerrado, based on an extensive search in zoological collections and fieldwork. I analyze distribution and beta diversity in a historical framework, focusing on the relationship of the Cerrado with its adjoining domains, and its environmental conditions. I found 204 anuran species occurring within the Cerrado, from which 50% are endemics. Species occurring in the Cerrado and one more domain present a highly structured spatial pattern, in which Amazonian species are restricted to the northwestern part of the Cerrado and Atlantic species are restricted to the southeastern part. I found Cerrado endemics in most of the localities, in all regions, whereas narrow endemics are restricted to mountain ranges in central, southeastern, and southwestern Cerrado. Cerrado anuran genera originated in Atlantic Forest and Amazon are distributed in a checkerboard pattern, and co-occur less than it would be expected by chance. This spatial structure within the Cerrado is influenced by the interplay of environmental conditions and historical constrains: Atlantic genera are mostly distributed in mountainous and upland areas, with low precipitation and closer to the boundaries of Atlantic Forest, whereas Amazonian genera are distributed in valleys closer to the boundaries of the Amazon. Similarly, patterns of beta diversity in the Brazilian Cerrado appear to be strongly influenced by the environmental gradients, since half of the dissimilarity in species composition was explained by these predictors. Endemic species responded to regional environmental conditions stronger than all species. Endemics may be responding to environment based on how similar they are to the conditions of adjoining phytogeographical domains, since their sister-species are mostly distributed in these regions. My results reinforce the importance of taking biogeographical history into account when analyzing spatial patterns of species diversity at a regional scale. I also show that the heterogeneity in anuran distribution in the Cerrado may have a historical basis, which interacts with present-day constraints, such as climate, habitat availability and ecological interactions, to shape local and regional assemblages.

Os aplicadores clínicos de 90Sr+90Y são instrumentos utilizados em procedimentos de braquiterapia e devem ser calibrados periodicamente, de acordo com normas e recomendações internacionais. Neste trabalho, foram estudados quatro métodos de calibração de aplicadores dermatológicos e oftálmicos, comparando-se os resultados com os fornecidos pelos certificados de calibração dos fabricantes dos aplicadores. Os métodos envolveram o aplicador clínico padrão do Laboratório de Calibração de Instrumentos (LCI), calibrado pelo laboratório padrão primário americano do National Institute of Standards and Technology, como referência; um aplicador da Amersham, também pertencente ao LCI, como referência; uma mini-câmara de extrapolação desenvolvida no IPEN como padrão absoluto; e dosimetria termoluminescente. A mini-câmara de extrapolação e uma câmara de extrapolação comercial PTW foram estudadas com relação ao seu desempenho por meio de testes de controle de qualidade, como corrente de fuga, repetitividade e reprodutibilidade. A distribuição de dose em profundidade na água, estudo de grande importância na dosimetria de aplicadores clínicos, foi determinada utilizando-se a mini-câmara de extrapolação e dosímetros termoluminescentes. Os resultados obtidos foram considerados satisfatórios para os dois casos, quando comparados com os dados fornecidos pela norma IAEA (2002). Além disso, foi desenvolvido um sistema postal dosimétrico para a calibração de aplicadores clínicos por meio da técnica da termoluminescência, para ser enviado para clínicas e hospitais, sem a necessidade do transporte das fontes ao LCI do IPEN para calibração. / 90Sr+90Y clinical applicators are instruments used in brachytherapy procedures and they have to be periodically calibrated, according to international standards and recommendations. In this work, four calibration methods of dermatological and ophthalmic applicators were studied, comparing the results with those given by the calibration certificates of the manufacturers. The methods included the use of the standard applicator of the Calibration Laboratory (LCI), calibrated by the National Institute of Standards and Technology; an Amersham applicator (LCI) as reference; a mini-extrapolation chamber developed at LCI as an absolute standard; and thermoluminescent dosimetry. The mini-extrapolation chamber and a PTW commercial extrapolation chamber were studied in relation to their performance through quality control tests of their response, as leakage current, repetibility and reproducibility. The distribution of the depth dose in water, that presents high importance in dosimetry of clinical applicators, was determined using the miniextrapolation chamber and the thermoluminescent dosimeters. The results obtained were considered satisfactory for the both cases, and comparable to the data of the IAEA (2002) standard. Furthermore, a dosimetry postal kit was developed for the calibration of clinical applicators using the thermoluminescent technique, to be sent to clinics and hospitals, without the need of the transport of the sources to IPEN for calibration.

A utilização de bioativos naturais como ingredientes está em constante expansão na indústria alimentícia, devido ao aumento das exigências pelos consumidores por alimentos mais saudáveis. Por isso, há uma busca constante de tecnologias que possibilitem a incorporação de tais substâncias em alimentos. O β-caroteno é uma substância hidrofóbica, cujos benefícios estão relacionados principalmente à sua ação antioxidante. Devido à sua característica hidrofóbica, a utilização deste pigmento implica em desafios tecnológicos para ser incorporado em formulações alimentícias de base aquosa. Por este motivo, a encapsulação em lipossomas pode ser uma ótima alternativa, devido à capacidade de englobar tais substâncias em sua bicamada lipídica. Além da proteção, essas matrizes encapsulantes podem proporcionar a liberação controlada dos ingredientes encapsulados, bem como aumento de sua biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar dispersões de lipossomas encapsulando β-caroteno estabilizadas com a adição de hidrocolóides(goma xantana ou mistura de goma xantana e goma guar). O diâmetro médio hidrodinâmico, a distribuição de tamanho das partículas e a morfologia foram avaliadas. Os lipossomas produzidos foram vesículas multilamelares (MLV), as distribuições de tamanho dos lipossomas apresentaram-se heterogêneas e as micrografias revelaram a forma esférica dos lipossomas dispersos no meio aquoso, assim como a integridade da sua bicamada lipídica. Foram realizadas análises de quantificação do β-caroteno e colorimetria instrumental, sendo que todas as dispersões mostraram-se eficientes na preservação do β-caroteno ao longo do período de armazenamento. Os hidrocolóides adicionados foram eficazes no aumento da viscosidade da fase contínua, evitando a agregação das vesículas ao longo do tempo, exceto para dispersão estabilizada com a mistura de goma xantana e goma guar, com 0,15% de goma total. Em relação à adição das dispersões de lipossomas em iogurte, as formulações mostraram-se homogêneas, com ausência de grumos ou qualquer tipo de separação de fases, e também foram aprovados por uma parcela de painelistas na análise sensorial. / The use of natural bioactives as ingredients is in constant expansion in the food industry, due to increasing consumer demands for healthier foods. Therefore, there is a constant search for technologies capable of incorporating such substances in food. β-carotene is a hydrophobic substance, whose benefits are mainly related to its antioxidant action. Because of its hydrophobic characteristics, the use of this pigment implies technical challenges to be incorporated into aqueous-based food formulations. For this reason, encapsulation in liposomes may be a good alternative, because of their ability to incorporate such substances in their lipid bilayer. Besides the protection, these encapsulants matrix can provide controlled release of the encapsulated ingredients, as well as increasing its bioavailability. The objective of this study was to produce and characterize dispersions of liposomes encapsulating β-carotene, which were stabilized with the addition of hydrocolloids: xanthan gum or a mixture of xanthan gum and guar gum. The mean hydrodynamic diameter, distribution of particle size and its morphology were studied. The obtained dispersions were multilamellar vesicles (MLV), the liposomes size distributions were heterogeneous and the micrographs revealed the liposomes spherical shape dispersed in aqueous medium, as well as the integrity of their lipid bilayer. The quantification of β-carotene and instrumental colorimetry analyses indicated the liposomes were efficient in the preservation of β-carotene during the storage period. The hydrocolloids added in the dispersions were highly efficient to increase the viscosity of the continuous phase. Therefore, the hydrocolloids were responsible for the prevention of aggregation of the vesicles during the storage period, except for stabilized dispersion with the mixture of xanthan gum and guar gum, with 0.15% gum total. Regarding the dispersions of liposomes added in yoghurt, the formulations were homogeneous, with absence of lumps or any phase separation, and also have been approved by a significant number of the panelists.

Glicosídeos essenciais a vida podem ser sintetizados por métodos enzimáticos com altíssima especificidade. O mecanismo de reação de β-glicosidases GH1 por dupla-substituição envolve a formação de intermediário covalente (glicosil-enzima) que pode seguir duas rotas. Uma envolve sua hidrólise na ligação β-glicosídica entre glicone e aglicone do substrato, liberando o monossacarídeo da extremidade não-redutora; enquanto na outra rota, transglicosilação ou síntese por controle cinético, o intermediário é atacado por um aceptor glicosídico (2ª molécula de substrato), gerando um novo glicosídeo. BglB possui resíduos (W e H) que formam um \"canal\" por onde a água ataca o intermediário covalente no sítio ativo, sendo alvos de potenciais mutações que alteram o balanço entre as rotas e ampliando a eficiência de transglicosilação. Para caracterizar as bases moleculares da razão entre essas duas rotas catalíticas, β-glicosidases da família GH1 Spodoptera frugiperda (Sfβglu; AF052729) e Tenebrio molitor (Tmβglu; AF312017) foram produzidas como enzimas recombinantes em leveduras Pichia pastoris GS115, concentradas com 90% (p/v) de sulfato de amônio e diálise reversa com PEG 10000, e dialisadas em tampão CP 100 mM pH 6. A pureza foi confirmada por banda única com tamanho semelhante a 50 kDa (Sfβgly) e 56 kDa (Tmβgly) em SDS-PAGE. A atividade recuperada após purificação é 152% (Sfβgly) e 171% (Tmβgly) e a concentração protéica de 0,134 µg/µL (Sfβgly) e 0,217 µg/µL (Tmβgly). A razão entre as reações de hidrólise e transglicosilação (vH/vT) foi analisada utilizando os substratos pNPβ-gluco (0,1 mM a 8 mM) e MUβ-gluco (0,1 mM a 40 mM), a partir da velocidade de formação dos produtos pNP ou MU e glicose, respectivamente. Tmβgly catalisa reações de transglicosilação com ambos, mas vH/vT depende da [S] variando de +∞ (vH>>vT) a 1,5 para pNPβ-gluco e +∞ a 1 para MUβ-gluco. Sfβgly, ao contrário, não transglicosila com substrato MUβ-gluco. Além disso, vH/vT para pNPβ-gluco é 2 e independe da [S]. Já Sfβgly K201F conjuga propriedades de ambas, pois não transglicosila com MUβ-gluco, mas para pNPβ-gluco há ocorrência de transglicosilação dependente da [S], variando de +∞ (vH>>vT) a 1,25. Os parâmetros cinéticos (Vmax e Km) foram ajustados no Enzifitter e por simulação numérica na equação do modelo cinético ping-pong para dois substratos, e mostram maior (Km2) em Tmβgly e Sfβgly K201F do que em Sfβgly. Também foi avaliado o efeito da adição de aceptores alternativos que substituem a água em ensaios com pNPβ-gluco 4mM na presença de alcóois. Para as três enzimas a adição de metanol torna a vglc menor do que de vpNP, indicando ocorrência de transglicosilação. Com adição de n-propanol vH/vT diminui cerca de 7 vezes em Sfβgly e 2 vezes em Tmβgly. Os efeitos destes alcoóis sobre Sfβgly são maiores do que para Tmβgly e Sfβgly K201F, sugerindo acesso mais fácil destes ao intermediário covalente em Sfβgly, indicando diferenças entre as enzimas na configuração desta região. Portanto, notamos que vH/vT não está ligada à afinidade pela segunda molécula de substrato, podendo ser modulada por mutação do resíduo K201 de Sfβgly, posição relacionada ao acesso da água ou aceptor alternativo ao sítio ativo. / Glycosides are essential to life and can be synthesized by enzymatic methods with high specificity. The reaction mechanism of GH1 β-glucosidases by double-substitution involves the formation of covalent intermediate (glycosyl-enzyme) which may follow two routes. One of them involves hydrolysis in β-glycosidic bond between aglycone glucone and the substrate, releasing a monosaccharide from the non-reducing end, whereas in the other route, transglycosylation or synthesis by kinetic control, the intermediate is attacked by a glucosyl acceptor (second substrate molecule), generating a new glucoside. BglB has two residues (W and H) that form a \"channel\" through which water attacks the covalent intermediate on the active site. Thus, the residues are potential targets for mutations that alter the balance between routes, increasing the efficiency of transglycosylation. To characterize the molecular basis of the ratio between these two catalytic routes, two β-glycosidases from GH1 family, Spodoptera frugiperda (Sfβgly; AF052729) and Tenebrio molitor (Tmβgly; AF312017) were produced as recombinant enzymes in Pichia pastoris GS115, concentrated using 90% (w/v) ammonium sulfate and reverse dialysis with PEG 10000, and dialyzed in 100 mM CP buffer pH 6. SDS-PAGE confirmed that Sfβgly (~50 kDa) and Tmβgly (~56 kDa) were pure after that procedure. The activity recovered after purification were 152% (Sfβgly) and 171% (Tmβgly) and protein concentration were 0.134 mg/mL (Sfβgly) and 0.217 mg/mL (Tmβgly). The ratio between the hydrolysis and transglycosylation (vH/vT) was analyzed using pNPβ-gluco substrates (0.1 mM to 8 mM) and MUβ-gluco (0.1 mM to 40 mM), the rate of formation of pNP or MU and glucose. Tmβgly catalyzes transglycosylation reactions with both substrates, but vH/vT depends on [S] ranging from +∞ (vH>>vT) to 1.5 for pNPβ-gluco and + ∞ to 1 for MUβ-gluco. In contrast, Sfβgly did not catalyses transglycosilation with MUβ-gluco. Moreover, vH/vT for pNPβ-gluco-is 2 and is independent of [S]. Sfβgly K201F combines properties of both, because it does not catalyse transglycosylation with MUβ-gluco, but for pNPβ-gluco the occurrence of transglycosylation is dependent on [S], ranging from + ∞ (vH>>vT) to 1.25. The kinetic parameters (Vmax e Km) were adjusted in Enzfitter and numerical simulation showing that Km2is higher for Tmβgly and Sfβgly K201F than Sfβgly. We also evaluated the effect of adding alternative acceptors that replace the water in pNPβ gluco-4 mM. For the three enzymes the addition of methanol makes vglc less than pNP, indicating the occurrence of transglycosylation. Addition of n-propanol decreases vH/vT about 7 times in Sfβgly and 2 times Tmβgly. The effects on Sfβgly are higher than on Tmβgly and Sfβgly K201F, suggesting easier access to the covalent intermediate in Sfβgly. We observe that vH/vT is not related to affinity for the second substrate molecule and may be modulated by mutation of residue K201 Sfβgly, position related to the access of water or alternative acceptor to the active site.

Diversos estudos compreendem a análise de variáveis definidas no intervalo (0, 1), como porcentagens ou proporções. Os modelos mais adequados são os de regressão baseados nas distribuições beta e simplex. Neste trabalho, apresentamos o modelo de regressão beta proposto por Ferrari & Cribari-Neto (2004) e desenvolvemos o modelo de regressão simplex. Definimos um resíduo para o modelo de regressão simplex, muito útil na análise de diagnóstico, a partir do trabalho de Espinheira, Ferrari & Cribari-Neto (2008). Apresentamos uma forma geral para algumas medidas de diagnóstico, que podem ser aplicadas para os dois modelos. Avaliamos os modelos de regressão beta e simplex por meio de duas aplicações a dados reais, utilizando essas medidas. / Many studies consider the analysis of variables restricted to the interval (0, 1), as percentages and proportions. The most recommended models are based upon the beta and simplex distributions. In this work, we present the beta regression model proposed by Ferrari and Cribari-Neto (2004) and develop the simplex regression model. We propose a residual for the simplex regression model, which is very useful for the diagnostic analysis, based upon the work of Espinheira et al. (2008). We generalize some diagnostic techniques that can be applied to both models. We evaluate the beta and simplex models by two applications to real data, using those techniques.

O câncer é uma doença que aflige pessoas no mundo todo, e mata muitas todos os anos. Muitos estudos são desenvolvidos para sintetizar novos compostos com atividade antitumoral cada vez melhor. O maior número de compostos possibilita um maior número de possibilidades de cura, já que alguns tumores podem adquirir resistência ao medicamento, sendo necessária a troca por outro.<br /> Para que não seja feita uma síntese aleatória de compostos, desperdiçando tempo, reagentes e dinheiro sintetizando compostos inativos, um estudo teórico prévio para orientar a síntese é válido. Um estudo QSAR pode orientar a síntese indicando quais compostos são mais interessantes de serem sintetizados e quais são menos interessantes. Assim, há o desenvolvimento de mais compostos ativos em um menor tempo, do que se fosse realizada sínteses e testes para todos os compostos possíveis.<br /> O presente estudo tem esse foco, avaliar a relação quantitativa entre a estrutura molecular e a atividade antitumoral de compostos &beta;-carbolínicos substituídos nas posições 1 e 3. Nesse estudo será possível elucidar quais características são relevantes para que os compostos sejam ativos no tratamento de câncer de pulmão e melanoma. / Cancer is a disease that afflicts people worldwide and kills many every year. Many studies are developed to synthesize new compounds with better antitumor activity. The largest number of compounds allows a greater number of curability, because some tumors may acquire used drug resistance and are necessary different drugs.<br /> To avoid a random synthesis of compounds, wasting time, money and reagents in synthesizing inactive compounds, a previous theoretical study as guide of synthesis is valid. A QSAR study can guide the synthesis indicating which compounds are most interesting to be synthesized and which are less interesting. Thus, more compounds active are developed in a shorter time.<br /> The present study has this focus, assess the quantitative relationship between molecular structure and antitumor activity of &beta;-carboline compounds substituted in positions 1 and 3. In this study will be possible to elucidate characteristics that are relevant to the compounds under study be active in the treatment of lung cancer and melanoma.

A ?-talassemia, uma hemoglobinopatia, é caracterizada como um distúrbio hereditário monogênico onde a síntese das cadeias globínicas ? está alterada. Devido desiquilíbrio na relação entre as cadeias ? e ? produzidas, observa-se um excesso de cadeias ? livres, determinante da fisiopatologia da doença. As manifestações observadas são eritropoese ineficaz, hemólise extramedular, anemia, expansão medular, esplenomegalia, deformidades ósseas e acúmulo de ferro. Clinicamente classifica-se como ?-talassemia major (BTM) a forma mais grave da doença, devido à ausência de cadeias ? (?0) ou redução acentuada (?+) acarretando em dependência de transfusões sanguíneas periódicas, para sobrevivência. O traço ?-talassêmico (BTT) antes vistos como assintomáticos, também apresentam alterações, inclusive acúmulo de ferro e eritropoese ineficaz, mas não são dependentes de transfusão e tampouco passam por acompanhamento médico. Extremamente heterogênea, apresenta diversos fenótipos e mais de 300 alterações moleculares causadoras de ?-talassemia já foram descritas em todo mundo. O objetivo deste estudo foi identificar as mutações de ?-talassemia em Ribeirão Preto-SP e procurar associar tais alterações à avaliação hematológica e do status férrico, na tentativa de estabelecer uma relação genótipo-fenótipo. Para tanto, 27 BTM, 23 BTT e 28 controles foram recrutados no Ambulatório de Hemoglobinopatias, do HC/FMRP-USP de Ribeirão Preto. Por meio de PCR-Alelo Específico, pesquisamos as quatro mutações mais comuns no Brasil: CD39 (CAG->TAG), IVS1-110 (G->A), IVS1-6 (T->C) e IVS1-1 (G ->A). A distribuição foi 64% CD39, 26% IVS1-110 e 4% IVS1-6. A análise de covariância e comparação múltiplas, entre os grupos formados e o controle, revelou alterações hematológicas e no status férrico. Os pacientes BTM com a mutação CD39, em sua forma heterozigota ou homozigota, e heterozigotos para a IVS1-110, revelaram anemia grave e intensa sobrecarga de ferro. Os BTT heterozigotos para CD39 demonstraram comprometimento do metabolismo ferro e/ou eritropoese. A adoção de medidas paliativas e de monitoramento aos BTT faz-se necessária, uma vez que, alterações apresentadas associam-se a desordens graves, mas quando não negligenciadas podem ser facilmente prevenidas. A metodologia adotada demonstrou-se eficaz para a pesquisa das mutações estudadas. Embora tenhamos conseguido observar uma relação genótipo-fenótipo, um estudo multicêntrico da população brasileira proporcionará a identificação de mais relações, principalmente nos fenótipos menos prevalentes em nossa região, contribuindo para a compreensão da heterogeneidade da ?-talassemia. / The ?-thalassemia, one haemoglobinopathies, is characterized as a monogenic hereditary disorder where the synthesis of ? globin chains is modified. Due to imbalance in the relationship between production of ? and ? chains, there is an excess of free ? chain that determines the pathophysiology of the disease. Manifestations observed are ineffective erythropoiesis, extra medullary hemolysis, anemia, bone marrow expansion, splenomegaly, bone deformities and iron accumulation. Clinically is classified as ?-thalassemia major (BTM), the most severe form of the disease, as a result of the absence of ? chains (?0) or very large reduction of these (?+) resulting in dependence on regular blood transfusions to survive. The ?-thalassemia trait (BTT) before seen as asymptomatic, also show changes, including iron accumulation and ineffective erythropoiesis, despite of that they aren\'t dependent on transfusion nor undergo medical care. It is extremely heterogeneous, presents several phenotypes and more than 300 molecular changes that causing ?-thalassemia have been described worldwide. The purpose of this study was to identify ?-thalassemia mutations in Ribeirao Preto-Brazil and to explore changes in hematological evaluation and iron status in an attempt to establish a genotype-phenotype relationship. Therefore, a group of 27 BTM, 23 BTT and 28 controls were recruited from the outpatient clinic of hemoglobinopathies, from The Clinical Hospital of Medical School of Ribeirao Preto (HC / FMRP-USP), Brazil. Adopting the technique ARMS (Amplification Refractory Mutation System), we searched for the four most common mutations in Brazil: CD39 (CAG -> TAG), IVS1-110 (G -> A), IVS1-6 (T -> C) and IVS1-1 (G -> A). The distribution was 64% presents CD39 mutation, followed by IVS1-110 e IVS1-6, with 26% and 4% respectively. Covariance Analysis and multiple comparison between the studies groups and control, showed differences in hematological parameters and in iron status either. The BTM heterozygous or homozygous for CD39 mutation and heterozygous for IVS1-110 revealed severe anemia and iron overload. The BTT heterozygous for CD39 showed impairment of iron metabolism and / or erythropoiesis. It is necessary the monitorization of the BTT patients is necessary, since changes presented by them are associated with serious disorders, the adoption of mitigation measures which when are not neglected can be easily prevented. The methodology proved to be effective for the investigation of mutations studied. While we were able to observe a genotype-phenotype relationship, a multicenter study of the Brazilian population will provide the identification of more relations, especially in less prevalent phenotypes in our region, contributing to the understanding of the heterogeneity of ?-thalassemia.

Submitted by Natalia Vieira (natalia.vieira@famerp.br) on 2016-05-30T18:51:03Z No. of bitstreams: 1 julianatiemitakahashi_dissert.pdf: 1874616 bytes, checksum: 4b57c05bf0ee3402a9384302e26ebd23 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-30T18:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianatiemitakahashi_dissert.pdf: 1874616 bytes, checksum: 4b57c05bf0ee3402a9384302e26ebd23 (MD5) Previous issue date: 2015-11-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Bacterial resistance to antimicrobials is an important public health problem, which results in increased treatment period, increase in mortality and in health care costs. This phenomenon is considered a result of the indiscriminate use of antimicrobials in human and veterinary medicine, and along the food chain. In recent years, it has been observed the frequent isolation of resistant bacteria from animal production and food of animal origin. In this context, have been highlighted the resistance to beta-lactâmicos and to quinolones, the first, due to extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production and the second, resultant from the acquisition of qnr genes encoding proteins that interfere in quinolone action on DNA gyrase and topoisomerase IV. Several bacterial species with antimicrobial resistance have been isolated from farm animals. Objective: This study evaluated the antimicrobial susceptibility profile and the presence of resistance genes blaCTX-M, blaSHV, blaTEM, qnrA, qnrB, qnrS and oqxAB in Enterobacteriaceae isolated from meat market in the municipality of São José do Rio Preto- SP, acquired between November 2010 and August 2012. Material and Methods: The antimicrobial susceptibility was determined by disk diffusion according to CLSI. Strains resistant to beta-lactams and quinolones were submitted to PCR using specific primers for detection and sequencing of these genes for identification. Results: A total of 75 isolates were resistant to beta-lactam and 125 to quinolones. Among these, 6.6% blaCTX-M, 6.6% blaTEM, 16% blaSHV, 21.6% had qnr variants and 13.6% oqxAB. In a strain of Aeromonas sobria was detected the coexistence of qnrA and qnrS genes; the qnrB gene was detected in five strains of E. coli, five K.pneumoniae, two Salmonella spp. and 12 Citrobacter spp. The qnrB19 gene was detected in two K. pneumoniae, duas E. coli and one Citrobacter braakii. qnrB2 was detected in three K. pneumoniae. The qnrS1 gene was detected in a strain of K. pneumoniae. The sequencing blaCTX-M revealed blaCTX-M-2, all of which were derived from chicken meat samples. Conclusion: These data demonstrate there nay be association between excessive use of antimicrobials in animal production and isolation of bacteria resistant to these antimicrobials. The presence of bacteria resistant to antimicrobials in meat intended for human consumption consists in a public health problem and can affect commercials relationships of the country, since it the Brazil is one of the world's largest meat exporters. / Introdução: A resistência bacteriana aos antimicrobianos é um importante problema de saúde pública, que prolonga o período de tratamento, aumenta as taxas de mortalidade e custos da assistência à saúde. Este fenômeno pode ter considerado consequência do uso indiscriminado de antimicrobianos na medicina humana e veterinária, e ao longo da cadeia produtiva de alimentos. Nos últimos anos tem sido observado o frequente isolamento de bactérias resistentes a partir de animais de produção e alimentos de origem animal. Neste contexto, têm-se destacado a resistência aos beta-lactâmicos, devido à produção de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL) e às quinolonas pela aquisição de genes qnr que codificam proteínas que interferem na ação das quinolonas sobre a DNA-girase e a topoisomerase IV. Diversas espécies bacterianas apresentando resistência aos antimicrobianos têm sido isoladas a partir de animais de produção. Objetivo: Este estudo teve como objetivo isolar enterobactérias resistentes aos beta-lactâmicos e quinolonas e detectar os genes blaCTX-M, blaSHV, blaTEM, qnrA, qnrB, qnrS e oqxAB em Enterobacteriaceae resistentes isoladas de carnes resfriadas de frango, suína e bovina comercializadas no município de São José do Rio Preto-SP, adquiridas entre novembro de 2010 e agosto de 2012. Material e Métodos: A suscetibilidade aos antimicrobianos foi determinada por disco-difusão de acordo com as normas do CLSI. As cepas resistentes aos beta-lactâmicos e às quinolonas foram submetidas à PCR com primers específicos para a detecção destes genes e ao sequenciamento para a identificação dos mesmos. Resultados: Um total de 75 isolados apresentou resistência aos beta-lactâmicos e 125 às quinolonas. Entre estes, 6,6% blaCTX-M, 6,6% blaTEM, 16% blaSHV, 21,6% apresentaram variantes de qnr e 13,6% oqxAB. Em uma cepa de Aeromonas sobria foi detectada a coexistência dos genes qnrA e qnrS; o gene qnrB foi detectado em cinco cepas de E. coli, cinco K.pneumoniae, duas Salmonella spp. e 12 Citrobacter spp. O gene qnrB19 foi detectado em duas K. pneumoniae, duas E. coli e uma Citrobacter braakii. qnrB2 foi detectado em três K. pneumoniae. O gene qnrS1 foi detectado em uma cepa de K. pneumoniae. O sequenciamento de blaCTX-M revelou blaCTX-M-2, sendo que todas foram provenientes de amostras de carne de frango. Conclusão: Esses dados revelam que pode haver associação entre o excessivo uso de antimicrobianos em animais de produção e o isolamento de bactérias resistentes aos mesmos. A presença de bactérias resistentes aos antimicrobianos em carnes destinadas ao consumo humano consiste em um problema de saúde pública e pode afetar as relações comerciais do país, já que o Brasil é um dos maiores exportadores de carne do mundo.