Este estudo in situ investigou o efeito de um bochecho com lactato de cálcio aplicado previamente ao dentifrício fluoretado na desmineralização do esmalte hígido e na remineralização do esmalte com lesão de cárie artificial, bem como na composição da placa bacteriana. Durante 4 fases de 14 dias cada, 10 voluntários utilizaram dispositivos palatinos contendo 4 blocos de esmalte bovino (4X4X2.5mm): dois hígidos que foram submetidos a um baixo desafio cariogênico (H) e dois com lesão de cárie artificial (L) formada in vitro, usandose uma solução tampão de acetato (16 h, 37° C). Três vezes ao dia, logo após as refeições, a solução de sacarose a 20% era gotejada em uma fileira de blocos (H, 3 gotas/bloco), enquanto na outra fileira (L) nada foi realizado. Após 5 minutos de espera, o aparelho retornou a boca e o voluntário bochechou, durante 1 min, 10 mL de solução de lactato de cálcio 150 mM ou água deionizada (placebo). Em seguida, o voluntário removeu o aparelho e gotejou uma solução de dentifrício (1:3) com ou sem flúor (placebo) nos quatro blocos (3 gotas/bloco). Durante 1 minuto, o voluntário escovou seus dentes com o mesmo dentifrício aplicado nos blocos. Ao finalizar o tempo, o aparelho retornou a boca e por fim, enxaguou-se a boca com 10 mL de água da torneira (0,7 ppm F). As alterações do esmalte foram avaliadas pela porcentagem de alteração da dureza (%SMHC), perda mineral (\'delta\' Z) e biópsia básica para remoção de flúor fracamente ligado, solúvel em álcali. A placa bacteriana foi coletada para posterior análise de F e Ca. Os dados foram analisados por ANOVA. O uso do bochecho de Ca previamente ao dentifrício fluoretado, produziu um aumento significativo nas concentrações de F na placa e nos blocos com lesão de cárie artificial, em comparação ao uso apenas do dentifrício fluoretado. Entretanto, o bochecho prévio com Ca, não reduziu a desmineralização. / This in situ blind crossover study investigated the effect of calcium lactate rinse prior to the use fluoride (F) dentifrice on demineralization of the sound enamel and on remineralization of the artificial enamel caries, as well as on the composition of dental biofilm. During 4 phases of 14 days each, 10 volunteers wore palatal appliances containing 4 blocks of bovine enamel (4X4X2.5mm): two sound enamel blocks that were subjected to the low cariogenic challenge (H) and two other enamel blocks with artificial caries lesion (C) formed in vitro, using buffer acetate solution (16h, 37oC). Three times a day, after the meals, the volunteers dripped a fresh 20% w/v sucrose solution on sound enamel, whereas on the carious enamel no treatment was performed. After five minutes, the appliance returned into the mouth and they rinsed with 10 mL of a 150 mM calcium lactate or placebo solution, during 1 minute. In sequence, a solution of fluoride or placebo dentifrice (1:3 w/v) was dripped onto the both blocks. During 1 minute, the volunteers brushed your teeth with 0,3 g of respective dentifrice. After that the time elapsed, the appliance returned into the mouth and they rinsed the mouth with 10 mL of water (0.7 ppm F). The enamel alterations were evaluated by the percentage of surface microhardness change (%SMHC), longitudinal microhardness (% min. vol.) and alcali-soluble F analysis. The dental biofilm formed on the blocks was collected and analyzed for F and Ca. Data were analyzed by ANOVA (p<0,05). The Ca pre-rinse before the use of the F dentifrice produced a significant increase in biofilm F concentrations and in the remineralization of artificial enamel caries, in comparison to fluoride dentifrice alone. However, the Ca pre-rinse did not reduce enamel demineralization.

Este estudo avaliou a eficiência da oleuropeína (OLE) (composto fenólico extraído das folhas de Oliveira) isolada e associada aos sanitizantes comerciais ácido peracético 2% (APA), hipoclorito de sódio 2% (HS), peróxido de hidrogênio 3% (PH), digluconato de clorexidina 2% (DC), cloreto de benzalcônio 1% (CB) e iodofor 2% (IO), para inativação de células em suspensão e biofilmes monoespécie e multiespécie formados em superfícies de aço inoxidável ou microplaca de poliestireno por Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922), todas classificadas como fortes produtores de biofilmes. Os isolados foram semeados em caldo TSB (caldo tripticase soja), incubados (37°C/24h) e corrigidos a ~108células/mL (escala 0,5 McFarland). Para bactérias em suspensão, a resistência a sanitizantes foi determinada pela Concentração Inibitória Mínima (CIM) em tubos e pelo método de Disco Difusão em Ágar (DDA), no qual as bactérias foram plaqueadas em ágar TSA contendo discos de 6mm de papel filtro embebidos nos sanitizantes. Após a incubação, a medição dos halos de inibição foi feita com paquímetro. Para os ensaios de resistência dos biofilmes aos compostos sanitizantes, foram utilizadas microplacas de poliestireno 96 poços, as quais foram preparadas para incubação-fixação dos biofilmes e submetidas à leitura em espectrofotômetro de ELISA (600 nm). Em seguida, as placas foram lavadas com solução salina tamponada (PBS, pH 7.4) e os sanitizantes inseridos por 1 minuto. Após neutralização com tiossulfato de sódio (5 minutos), as placas foram lavadas com PBS e metanol, coradas com cristal violeta 1% e coradas com ácido acético glacial (33%) para nova leitura a 570nm. A eficácia da remoção do biofilme pelos sanitizantes foi comparada pelo índice de formação de biofilme (IFB). As imagens do aço inoxidável após tratamento com sanitizante foram feitas através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Microscopia Confocal, para visualizar a persistência dos biofilmes. Os valores de CIM (diluição 1:2) mostraram que OLE não teve atividade bactericida. No método DDA, L. monocytogenes, foi resistente à OLE, enquanto E. coli e S. aureus apresentaram resistência intermediária. Os sanitizantes comerciais apresentaram boa atividade bactericida nos ensaios de CIM e DDA, sendo que as associações de OLE aos sanitizantes comerciais aumentaram o efeito germicida. Nos ensaios com biofilmes em monoespécie, somente os sanitizantes comerciais, isolados ou associados com OLE, foram eficazes de reduzir o valor de BFI em microplaca de poliestireno. Em biofilmes multiespécie, OLE apresentou efeito antimicrobiano, sobretudo sobre a associação de L. monocytogenes + E. coli + S. aureus (redução: 91,49%). Nenhum dos compostos avaliados foi capaz de inativar completamente os biofilmes nas superfícies de aço inoxidável, uma vez que células viáveis foram observadas após os tratamentos com os sanitizantes, indicando persistência dos biofilmes. Os resultados indicam que a oleuropeína apresentou potencial para incrementar o efeito bactericida de sanitizantes comerciais para eliminação de biofilmes em superfícies inertes, sendo necessários estudos para compreender os mecanismos de ação dessas combinações. / This study evaluated the efficiency of oleuropein (OLE) (a phenolic compound extracted from Oliveira leaves) alone or in association with commercial sanitizers peracetic acid 2% (PPA), sodium hypochlorite 2% (SH), hydrogen peroxide 3% (HP), chlorhexidine digluconate 2% (CD), benzalkonium chloride 1% (BC) and iodophor 2% (IO), for inactivation of suspended cells and monospecies or multispecies biofilms formed on stainless steel surfaces or microplate polystyrene by Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) and Escherichia coli (ATCC 25922), all classified as strong producers of biofilms. The isolates were grown in TSB (trypticase soy broth), incubated (37°C/24 h) and adjusted to ~108 cells/mL (0.5 McFarland scale). For the bacterial suspensions, resistance to sanitizers was determined by Minimum Inhibitory Concentration (MIC) in tubes and by Agar Disk Diffusion (ADD), in which the bacteria were plated on TSA agar containing 6mm disks of filter paper soaked in sanitizers. After incubation, measurement of the inhibition halos was done using a caliper rule. For the sanitizer resistance assays with biofilms, polystyrene 96-well microplates were prepared for incubation-fixing of biofilms and read in an ELISA spectrophotometer (600 nm). After, the plates were washed with phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) and the sanitizers were placed for 1 minute. After neutralization with sodium thiosulfate (5 minutes), the plates were washed with PBS and methanol, stained with 1% crystal violet and stained with glacial acetic acid (33%) for a new reading at 570 nm. The effectiveness of biofilm removal by each sanitizer was compared using a Biofilm Formation Index (IFB). The images from stainless steel coupons after treatments with sanitizers were obtained by Scanning Electron Microscopy (SEM) and Confocal Microscopy, to view the persistence of biofilms. MIC values (dilution 1: 2) showed that OLE had no bactericidal activity. In the ADD assays, L. monocytogenes was resistant to OLE, while E. coli and S. aureus showed intermediate resistance. Commercial sanitizers showed good bactericidal activity in both CIM and DDA assays, and the associations of OLE with commercial sanitizers increased their germicidal effect. In the monospecies biofilm assays, only commercial sanitizers, isolated or associated with OLE, were effective for reducing the BFI values in polystyrene microplates. In multispecies biofilms, OLE had an antimicrobial effect, especially on the association of L. monocytogenes + E. coli and S. aureus (reduction: 91.49%). None of the compounds evaluated was able to completely inactivate the biofilms on the stainless steel surfaces, since viable cells of bacteria were observed after treatment with sanitizers, indicating persistence of biofilms. The results indicate that oleuropein has the potential to enhance the bactericidal effect of commercial sanitizers to eliminate biofilms on inert surfaces. Further studies are needed to understand the mechanisms of action of these combinations.

Este estudo avaliou a eficácia de métodos de higiene na remoção do biofilme da prótese total inferior reembasada com reembasador resiliente à base de silicone. Trinta pacientes tiveram suas próteses inferiores reembasadas (Mucopren soft) e, aleatoriamente, foram distribuídos em três grupos: A) Método mecânico escovação com dentifrício (Corega Brite) e escova (Johnson & Johnson) específicos para prótese total; B) Método químico imersão em solução à base de Ricinus communis; C) Método associado associação A+B. O período experimental foi de 60 dias e para a quantificação do biofilme, a superfície interna da prótese total inferior foi evidenciada (Fluoresceína sódica 1%) e fotografada, após 15, 30 e 60 dias de utilização dos métodos. As áreas, total da prótese e a corada (biofilme), foram mensuradas com o software Image Tool 3.0 e os resultados expressos em porcentagem. A análise microbiológica foi realizada pela técnica de hibridização DNA-DNA checkerboard. Para a avaliação qualitativa do material reembasador, às próteses foram atribuídos escores (0, 1 e 2) em função da apresentação do material após os períodos avaliados. Os testes estatístico iniciais indicaram a distribuição não normal ou homogênea dos dados, optando-se pela transformação dos mesmos em raiz quadrada de forma a aplicar estatística paramétrica. Quanto a quantificação do biofilme, empregou-se o teste Anova seguido pelo teste complementar de Tukey considerando P<0,05. Houve diferença significante entre os métodos (P=0,009) e períodos (P=0,003) avaliados. Não houve interação entre os fatores (P=0,5). O método mecânico apresentou a menor média de porcentagem de biofilme (1,45±1,03) se comparado ao químico (2,96±1,98) e associado (2,71±1,76). Após 60 dias (3,37±2,04), o acúmulo de biofilme foi maior que após 15 (1,28±0,77) e 30 (2,46±1,54) dias de utilização dos métodos. Para análise da eficácia antimicrobiana, foi empregado o método linear generalizado, não havendo interação entre os tempos e métodos de higiene. Entre estes, das 38 espécies estudadas, em 10 houve diferença estatística para, sendo que o método de imersão apresentou os valores mais baixos de contagem destes microorganismos. Apenas uma espécie apresentou diferença entre os períodos. Após a análise visual, verificou-se que o nível de deterioração foi menor após os 60 dias de análise nos materiais reembasadores higienizados por meio da escovação. As próteses higienizadas pelo método mecânico apresentaram a menor porcentagem de área de biofilme e o menor nível de degradação do reembasador. O método químico apresentou maior eficácia na diminuição de contagem de microorganismos, inclusive nas espécies de Candida. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness of hygiene methods on biofilm removal of the lower denture relined with a silicone material. Thirty patients had their lower dentures relined (Mucopren soft) and randomly divided into three groups: A) Mechanical method brushing with toothpaste (Corega Brite) and toothbrush (Johnson) specific for complete dentures; B) Chemical method immersion in Ricinus communis based solution; C) Associate method association of A and B. The experimental period lasted 60 days and for the biofilm quantification, the internal surface of the lower denture was evidenced (Sodium fluorescein 1%) and photographed, after 15, 30 and 60 days of use of the prostheses. Total and evidenced (biofilm) area of the dentures were measured by the software Image Tool 3.0 and the results were expressed in percentages. Microbiological analysis was performed by the DNA-DNA checkerboard technique. For the qualitative evaluation of the soft liner, scores were attributed to the prostheses (0, 1 and 2) according to the presentation of the material after evaluation periods. After verification of distribution and homogeneity of data, it was found that the distribution was not normal or homogeneous, opting for transformation in square root in order to apply parametric statistics. For the biofilm quantification, Anova was employed followed by the Tukeys test considering P<0,05. There were significant difference between the methods (P=0,009) and periods (P=0,003) evaluated. There was no interaction between the factors (P=0,5). Mechanical method presented the lowest mean percentage of biofilm. (1,45±1,03) when compared to the chemical (2,96±1,98) and to the associated method (2,71±1,76). After 60 days (3,37±2,04), the accumulation of biofilm was greater than after 15 (1,28±0,77) and 30 (2,46±1,54) days of the methods use. To analyze the antimicrobial efficacy, the generalized linear method was used. The test showed no interaction between periods and groups. Between groups, 10 of the 38 species evaluated presented statistical difference; and the immersion method showed the lowest counting values of those microorganisms. Only one specie presented statistical difference between the periods. After the visual analysis, it was found that the level of the dentures cleaned by the mechanical method exhibited the lowest percentage of biofilm area and presented the lowest level of degradation of the liner. The chemical method was more efficient in reducing the count of bacteria, including the Candida spp.

Na aquacultura de recirculação são utilizados filtros biológicos para o tratamento do efluente antes que este retorne aos tanques. Estas unidades de tratamento têm como finalidade a transformação de nitrogênio amoniacal em nitrato, pois a amônia e o nitrito são tóxicos para os peixes. O nitrogênio amoniacal tende a se acumular na água de cultivo, pois é um importante produto de excreção dos organismos aquáticos e degradação da ração não consumida. Nestes filtros biológicos, os microorganismos responsáveis pelo tratamento da água residuária se encontram aderidos no meio de preenchimento, formando um biofilme. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar as comunidades microbianas presentes no biofilme associado ao filtro biológico de uma unidade experimental de tratamento de efluente de aquacultura. Durante o experimento, realizado em dois sistemas paralelos representando unidades de aquacultura com e sem recirculação de água, também foram monitorados parâmetros de qualidade da água. Os tanques experimentais foram povoados com juvenis de tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus), que foram submetidos a pesagens a cada quinze dias para avaliar seu ganho de biomassa. As bactérias foram identificadas através da técnica de análise microbiológica da hibridização fluorescente in situ (FISH). A estrutura do biofilme foi avaliada através de microscopia eletrônica de varredura. Os resultados indicam que a nitrificação teve um papel mais importante no controle da qualidade da água no sistema com recirculação em relação ao tanque sem recirculação. A análise microbiológica do meio de preenchimento do filtro revelou uma presença marcante (com proporções de Cy3/DAPI variando entre 0,5% e 7,6%) de células ativas de organismos nitrificantes (oxidadores de amônia e de nitrito), pertencendo a gêneros distintos como Nitrobacter, Nitrococcus e Nitrosomonas, além de outros grupos de presença expressiva, como bactérias filamentosas (com proporções de 11,2% a 17,3% da contagem de células marcadas com DAPI). As imagens de Microscopia Eletrônica de Varredura revelaram a natureza do arranjo destas bactérias no meio filtrante, caracterizando um biofilme bem desenvolvido, composto por diversos morfotipos microbianos. O conhecimento das bactérias que compõe este biofilme pode tornar possível a geração de melhorias que podem ser implementadas para aumentar a eficiência do sistema. / In recirculating aquaculture, biological filters are used for treating the effluent before it returns to tanks. These treatment units are intended for transforming ammoniacal nitrogen into nitrate, since ammonia and nitrite are toxic to fish. Ammoniacal nitrogen tends to accumulate in culture water, because it is an important excretion product from aquatic organisms and also due to degradation of non consumed feed. In these biological filters, microorganisms responsible for the treatment of waste water adhere to the filler, forming a biofilm. The present work intended to characterize the microbial community present in the biofilm associated to the biological filter at an experimental aquaculture effluent treatment unit. During the experiment, conducted in two parallel systems representing aquaculture units with and without water recirculation, water quality parameters were also monitored. Experimental tanks were populated with juvenile Nile Tilapias (Oreochromis niloticus), which were subjected to weighing every 15 days in order to assess their biomass gain. Bacteria were identified through the microbiological analysis technique of Fluorescent In Situ Hybridization (FISH). The biofilm structure was assessed using scanning electron microscopy. The results indicate that nitrification had a more important role in the control of water quality in the system with recirculation compared with the tank without recirculation. The microbiological analysis of the filter media revealed a significant presence (with Cy3/DAPI range between 0.5% e 7.6%) of active cells from nitrifying organisms (ammonia and nitrite oxidizers), which belonged to different genera such as Nitrobacter, Nitrococcus and Nitrosomonas, in addition to groups that had an expressive presence, such as filamentous bacteria (representing 11.2% to 17.3% of the total DAPI stained cells). Scanning Electron Microscopy images revealed the nature of the arrangement of these bacteria in the filtering media, characterizing a well developed biofilm made up of diverse microbial morphotypes. The knowledge about the bacteria making up the biofilm may enable improvements that can be implemented to increase system effectiveness.

Foram avaliados 528 isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa de 131 pacientes fibrocísticos atendidos em um centro de referência em fibrose cística (FC) durante o período de 2005 a 2008. 135 isolados clínicos (25,6%) apresentaram subpopulação hipermutante (isolados com altas taxas de mutações) utilizando teste modificado de suscetibilidade aos antimicrobianos. Destes, 9 isolados (6,7%) de 7 pacientes foram classificados como hipermutantes (HPM) segundo estimativa da freqüência de mutação. Após seqüenciamento do gene mutS e análise de mutações relacionadas à inativação do sistema de reparo de erros no pareamento do DNA (Mismatch Repair System - MRS), foi possível observar este tipo de mutação em 5 isolados HPM de 4 pacientes. Avaliamos a formação de biofilme em 45 isolados NHPM, 9 HPM e suas respectivas subpopulações por duas metodologias. Segundo o primeiro método, 24 (53,3%) e 3 (21,4%) isolados NHPM e HPM, respectivamente, foram classificados como não-formadores de biofilme. Pelo segundo método, apenas 4 (8,9%) isolados NHPM e nenhum isolado HPM foram classificados nessa categoria. Os percentuais de resistência aos antibióticos ceftazidima, ciprofloxacino e tobramicina em condições de biofilme foram mais elevados que aqueles obtidos em crescimento plantônico e, em ambas as condições, foi possível evidenciar forte associação entre hipermutabilidade e aumento de resistência antibiótica. A associação dos macrolídeos azitromicina e claritromicina, em concentrações sub-inibidoras, com os antibióticos anti-pseudomonas, demonstrou ação inibitória sobre isolados clínicos de P. aeruginosa em condições de biofilme, o que sugere sua indicação no tratamento de infecções por P. aeruginosa pela sua ação anti-biofilme. / We evaluated 528 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa in 131 CF patients attended at a referral center for cystic fibrosis (CF) during the period of 2005 to 2008. 135 clinical isolates (25.6%) presented hypermutable subpopulation (isolates with high mutation rates) using a modified antimicrobial susceptibility method. Of these, 9 isolates (6.7%) of 7 patients were classified as hypermutable (HPM) according to the estimate of mutation frequency. After gene sequencing and analysis of mutS mutations related to inactivation of the repair system errors in DNA pairing (Mismatch Repair System - MRS), we observed this type of mutation in 5 HPM isolates of 4 patients. We evaluated the biofilm formation in 45 isolates NHPM, 9 HPM and their subpopulations by two methods. According the first method, 24 (53.3%) and 3 (21.4%) isolates NHPM and HPM, respectively, were classified as non-biofilm formers. According the second method, only 4 (8.9%) isolates NHPM and none HPM were classified in this category. The percentages of resistance to antibiotics ceftazidime, ciprofloxacin and tobramycin in conditions of biofilm were higher than those obtained in planktonic growth, and in both conditions, it was observed a strong association between hypermutability and increased antibiotic resistance. The association of macrolides azithromycin and clarithromycin, in sub-inhibitory concentrations, with anti-pseudomonas antibiotics, has shown inhibitory activity on clinical isolates of P. aeruginosa in biofilm conditions, which should be recommended for treatment of CF P. aeruginosa infections due to its anti-biofilm action.

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

Esta dissertação é constituída de dois artigos e teve como objetivo avaliar se o uso adicional de solução fluoretada para bochecho (SF) ao uso de dentifrício fluoretado (DF) é equivalente ao aumento da freqüência de aplicação do DF em relação (1) às mudanças clínicas na superfície do esmalte, na sua desmineralização e no seu conteúdo de flúor; (2) à concentração de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após os tratamentos. No primeiro artigo, quinze voluntários participaram de um estudo in situ, onde utilizaram dispositivos mandibulares contendo blocos de esmalte dental bovino. Durante os 3 períodos experimentais, de 14 dias cada, os espécimes foram expostos a um alto desafio cariogênico pelo gotejamento de solução de sacarose 20%, 8 vezes ao dia. O estudo teve um delineamento cruzado e os voluntários foram submetidos aos seguintes tratamentos: (T I) escovação com DF (1100 ppm F na forma de NaF) 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O + SF (225 ppm F na forma de NaF) 1x/dia; (T III) DF 3x/dia + H2O. Ao final deste período, os blocos foram removidos e avaliados em relação às mudanças nas características clínicas de superfície e submetidos às análises de microdureza superficial e transversal e do conteúdo de flúor no esmalte. De acordo com os resultados, o uso do DF 3x/dia foi o único tratamento que diferiu do uso do DF 2x/dia em relação às mudanças na superfície do esmalte e na sua desmineralização (p<0,05). Em relação ao conteúdo de flúor no esmalte, as diferenças entre os tratamentos não foram estatisticamente significativas (p>0,05). No segundo artigo, através de um estudo in vivo foram avaliadas as concentrações de flúor na saliva e no biofilme dental 8 horas após o uso dos tratamentos. Quarenta voluntários foram submetidos a diferentes freqüências de uso de DF ou dentifrício placebo (DP) por 1 semana, seguido de enxágüe com água ou água e SF, de acordo com o delineamento cruzado, em 4 grupos de tratamento: (T I) DP 2x/dia + H2O; (T II) DF 2x/dia + H2O; (T III) DF 2x/dia + H2O + SF 1x/dia; (T IV) DF 3x/dia + H2O. Após cada período experimental, as amostras de saliva e biofilme dental foram coletadas para análise dos níveis de flúor. As concentrações de flúor nas amostras de saliva e biofilme dental não diferiram significativamente entre os tratamentos, assim como não diferiram do período livre de flúor (p>0,05). Podemos concluir em relação ao primeiro artigo que o aumento da freqüência de uso do DF pode substituir o uso adicional de SF aos procedimentos convencionais de escovação com DF. Em relação ao segundo artigo, os resultados sugerem que o uso do DF 2x/dia seguido por SF ou escovação extra com DF não aumenta a retenção de flúor na saliva e no biofilme dental após 8 horas. / This master thesis presents two articles aiming to assess whether the additional daily use of fluoride mouthrinse (FR) (225 ppm F as NaF) to the use of fluoride dentifrice (FD) (1100 ppm F as NaF) is equivalent to increase the FD application frequency (1) on enamel surface changes, demineralization and fluoride content; and (2) on the fluoride levels in saliva and dental biofilm samples 8 hours after treatments. In the first article, the subjects (15) used a mandibular appliance containing blocks of bovine enamel with microhardness determinated previously. During the three experimental phases, 14 days each, the specimens were exposed to a high cariogenic challenge from dripping 20% sucrose solution 8 times/day. The volunteers were submitted, under a crossover design, to 3 treatment groups: (T I) 2x/day FD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T III) 3x/day FD + H2O. At the end of each experimental phase, the enamel blocks were assessed with respect to surface clinical changes, surface and cross-sectional microhardness and total fluoride content. The 3x/day FD usage was the only treatment tested that differed from the conventional twice daily toothbrushing procedures on reducing enamel surface changes and demineralization (p<0.05). Regarding to the enamel fluoride content, the differences among treatments were not statistically significant (p>0.05). In the second article, the fluoride concentrations in saliva and dental biofilm 8 hours were analyzed after the use of treatments. The subjects (40) were submitted to different frequencies of use of FD or placebo dentrifice (PD) for 1 week to 4 treatment group: (T I) 2x/day PD + H2O; (T II) 2x/day FD + H2O; (T III) 2x/day FD + H2O + 1x/day FR; (T IV) 3x/day FD + H2O. After each experimental period, samples of saliva and dental biofilm were collected for fluoride levels analysis. Fluoride concentrations in saliva and dental biofilm did not differ statistically among treatments, as well as they did not differ from the F-free period (p>0.05).

Staphylococcus aureus destaca-se como principal micro-organismo associado à mastite bovina contagiosa, sendo que as infecções crônicas podem ser causadas pelo crescimento bacteriano na forma de biofilmes, o que pode estar associado à persistência desta bactéria na glândula mamária e à resistência a diversos antimicrobianos. Estudos epidemiológicos empregando técnicas como a macrorestrição seguida de eletroforese em campo pulsado (PFGE) têm sido realizados, com a finalidade de identificar clones e caracterizar as infecções por S. aureus. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a frequência de isolamento de S. aureus em amostras de leite colhidas periodicamente em um grupo de propriedades leiteiras do Vale do Taquari, RS; avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos dos isolados de S. aureus identificados; classificar esses isolados em grupos clonais; avaliar a distribuição e a permanência dos grupos clonais nas propriedades leiteiras ao longo do tempo, além de verificar a presença de genes relacionados à formação de biofilmes (icaA e icaD). Foram colhidas amostras de leite de todas as vacas em lactação de 21 propriedades, amostradas semestralmente durante dois anos, totalizando 1060 amostras. A presença de S. aureus nas amostras foi detectada por isolamento e a identificação foi realizada de acordo com o National Mastitis Council. Isolados confirmados foram testados, pela técnica de disco difusão em ágar, quanto à suscetibilidade frente a treze antimicrobianos. Os isolados também foram submetidos à macrorrestrição do DNA total – PFGE e posteriormente testados pela PCR para detecção dos genes icaA e icaD. Das 1060 amostras avaliadas, 395 não apresentaram crescimento bacteriano. Staphylococcus sp. coagulase negativa foram identificados em 262 amostras, seguido de 136 amostras em que identificou-se S. aureus. A frequência de isolamento de S. aureus variou de 3,45% a 70,59% nas 17 propriedades em que este agente estava presente. No teste de suscetibilidade aos antimicrobianos, a maioria (75,7%) dos 132 isolados testados apresentaram perfil de sensibilidade, sendo a resistência mais frequente à penicilina (18,2%) e ampicilina (14,4%). Em apenas 27,3% dos isolados detectou-se os genes associados à formação de biofilmes pesquisados, sendo o gene icaD o mais prevalente, seguido da presença de ambos os genes. Os 122 isolados clivados pela enzima SmaI e submetidos à PFGE foram classificados em 38 grupos clonais. Observaram-se poucos grupos clonais persistentes, pois somente seis foram descritos consecutivamente em pelo menos duas coletas. O grupo clonal 16 foi o mais prevantente, apresentando isolados em uma mesma propriedade ao longo de dois anos. Conclui-se que Staphylococcus aureus está presente na glândula mamária de bovinos em lactação em pequenas propriedades da região. Esses isolados apresentam baixa frequência de resistência aos antimicrobianos. Há uma grande variabilidade de pulsotipos entre os isolados presentes nessas propriedades, porém poucos grupos clonais persistem nas propriedades amostradas. Não foi possível associar a permanência dos grupos clonais nos rebanhos à presença dos genes icaA e icaD ou ao perfil de resistência a antimicrobianos. / Staphylococcus aureus stands out as the main microorganism associated with bovine contagious mastitis, whereas chronic infections can be caused by bacterial growth in the form of biofilms, which can be associated with the persistence of the bacteria in the mammary gland and resistance to various antibiotics. Epidemiological studies employing techniques such as macrorestriction followed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) have been carried out, aiming to identify clones and characterize S. aureus infections. The objectives of this study were: to assess the frequency of S. aureus isolation in milk samples collected periodically in a group of dairy farms from Taquari Valley, RS; evaluate the profile of antimicrobial susceptibility of S. aureus identified isolates; classify these isolates in clonal groups; assess the distribution and retention of clonal groups in dairy herds over time and to verify the presence of genes related to biofilm formation (icaA and icaD). Milk samples were collected from all lactating cows from 21 properties that were sampled every six months for two years, totaling 1060 samples. The presence of S. aureus in the samples was detected by isolation and the identification was performed according to National Mastitis Council. Confirmed isolates were tested for susceptibility to thirteen antimicrobial by disk diffusion technique in agar. The isolates also underwent macro-restriction of total DNA - PFGE and were subsequently tested by PCR for detection of genes icaA and icaD. Of the 1060 samples tested, 395 showed no bacterial growth. Staphylococcus sp. coagulase-negative samples were identified at 262, followed by 136 samples in which S. aureus was identified. The frequency of isolation of S. aureus ranged from 3.45% to 70.59% in 17 properties wherein this agent was present. In antimicrobial susceptibility testing, the majority (75.7%) of the 132 isolates tested showed sensitivity profile, being most frequent resistance to penicillin (18.2%) and ampicillin (14.4%). In only 27.3% of the isolates were detected genes associated with biofilm formation surveyed and icaD was the most prevalent, followed by the presence of both genes. The 122 isolates cleaved by SmaI and submitted for PFGE were classified into 38 clonal groups. There were few persistent clonal groups, because only six groups were described consecutively in at least two collections. The clonal group 16 was the most prevalent, presenting isolates at the same property over two years. Is conclusive that Staphylococcus aureus is present in the mammary gland of lactating cattle on small farms in the region. These isolates have low frequency of antimicrobial resistance. There is great variability of pulsotypes among isolates in those properties, but few clonal groups persist in the sampled properties. It was not possible to associate the permanence of clonal groups in herds to the presence of icaA and icaD or to the profile of antimicrobial resistance.

A maioria das pessoas não consegue desenvolver em forma adequada, a remoção total do biofilme por médios mecânicos. Em decorrência a complementação com coadjuvantes químicos disponibilizados através de cremes dentais resulta em uma opção valida. O triclosan demonstrou ser efetivo na redução dos depósitos de biofilme supragengival em estudos clínicos com ausência de remoção mecânica por até quatro dias. Contudo, não se sabe o impacto dessa medida na inibição da formação do biofilme subgengival. O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito inibitório sobre a formação inicial do biofilme subgengival de uma suspensão de dentifrício contendo 0,3% de Triclosan e 2% de Copolimero com uma suspensão control sem triclosan. Para tanto um ensaio clínico controlado cruzado, randomizado, duplo-cego com quatro dias de duração sem medidas de higiene mecânica foi desenvolvido. Vinte e Seis indivíduos completaram os dois períodos previstos com uma fase de “wash-out” de 10 dias entre os dois. Os indivíduos bochecharam por um minuto com as suspensões a cada 12 horas. Ao longo desse período a presença da zona livre de placa foi registrada a cada 24 horas por um examinador calibrado. A formulação teste inibiu de forma significativa a formação do biofilme subgengival por até 72 horas. Pode-se concluir que bochechos diários com uma suspensão de dentifrício contendo triclosan inibiu de forma significativa a formação inicial do biofilme subgengival por um período de até 72 h comparado com um controle. / Daily systematic removal of dental biofilm in the vast majority of people does not prevent gingivitis and periodontits. Therefore the complement with chemical products delivered through toothpastes results in promising option. Triclosan has been shown effective in reducing supragingival biofilm on 4-days without tooth brushing, but unknown the impact on inhibition of biofilm subgingival. The aim of this study was to compare the inhibitory effect on the early formation of subgingival biofilm from a slurrie of toothpaste containing 0.3% Triclosan and 2% Copolymer vs. control slurrie without triclosan. A randomized crossover controlled double-blind clinical trial of 4-day period without mechanical hygiene was developed. 26 subjects completed 2 periods with wash-out period between them. People were rinsed with slurries at 12hs. A trained examiner evaluated every 24 hours, the plaque-free zone. In conclusion the triclosan/copolymer retards the early formation of biofilm subgingival up to 72 hours.

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kawaichi_MarisaEmiko_M.pdf: 2974509 bytes, checksum: a8445980822038413faf0819712260d1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Casos de estufamento de carne bovina embalada à vácuo, causado por Clostridium estertheticum e Clostridium gasigenes, mantida sob temperatura de refrigeração vêm sendo observados em diversas regiões do Brasil, principalmente no Centro-Oeste, onde foi detectada a presença destes microrganismos em ambientes de abatedouros-frigoríficos. A complexidade analítica da técnica utilizada em pesquisas com esses microrganismos faz com que sejam escassos os trabalhos que visam o controle desse tipo de deterioração. Diante do exposto e considerando-se a importância da exportação de carne para a economia brasileira, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da inoculação de esporos de Clostridium estertheticum e Clostridium gasigenes em carne bovina embalada a vácuo e a eficiência esporicida in vitro do uso de ácidos orgânicos sobre estes microrganismos. Além disso, avaliou-se a capacidade de formação de biofilmes por C. estertheticum em superfície de aço inoxidável, e a eficiência de agentes químicos para sua remoção. Observou-se em carnes embaladas a vácuo, que C. gasigenes produzem maiores quantidades de gases, promovendo o estufamento da embalagem mais rápido em relação ao C. estertheticum. O primeiro indício da formação de bolhas por C. gasigenes foi observado aos 21 dias de incubação à temperatura de 7°C de armazenamento, enquanto que para C. estertheticum observou-se somente aos 35 dias na mesma temperatura. Notou-se uma produção de gás mais intensa à temperatura de armazenamento mais alta. Na carne inoculada com C. gasigenes houve um aumento progressivo no valor do pH, atingindo valores maiores em temperaturas mais elevadas, por volta de 49-77 dias, seguido por uma queda. Por sua vez, a inoculação com C. estertheticum não promoveu a mesma variação de pH, notando-se uma acentuada queda até 21-35 dias, seguido por um progressivo aumento. A utilização, de ácidos orgânicos mostrou reduzido ou nenhum efeito sobre esporos, de C. gasigenes e C. estertheticum, não sendo viável sua aplicação em cortes de carnes bovinas com a finalidade de inibir ou minimizar o blown pack. Observou-se que tanto a cepa de C. estertheticum padrão DSM 8809T quanto a cepa LHCE-13 isolada de equipamento (rolete de retirada do couro) foram capazes de formar biofilmes após 07 dias de contato com a superfície de aço inoxidável e os sanitizantes, ácido peracético (500mg/L) e peróxido de hidrogênio (200 mg/L) em contato por 15 minutos, mostraram-se eficientes no controle destes. São necessários programas de higienização mais rigorosos e efetivos para o controle de C. estertheticum e C. gasigenes nos abatedouros-frigoríficos, pois eles podem estar presentes no ambiente em forma de esporos e também como biofilmes, em locais com grande acúmulo de material orgânico ou em associações com outros microrganismos / Abstract: Occurrence of blown pack in vacuum packaged refrigerated meat caused by Clostridium estertheticum and Clostridium gasigenes have been reported by studies from several Brazilian states where these microorganisms were detected in abattoir environment such as the Midwestern region. Analytical complexity of the researches with C. estertheticum e C. gasigenes makes the studies to prevent or to control this spoilage scarce. For these reasons and it is considering the importance of Brazil¿s beef export to economy, the current study aim to assess the effect of inoculated spores of C. estertheticum and C. gasigenes on vaccum packaged meat and the efficiency in vitro of organic acid on reported microorganisms spores. Furthermore this study tested, for the first time, the ability of C. estertheticum to form biofilm in stainless steel surface and the use of some sanitizers to remove it. Results obtained from behavior analysis of C. estertheticum and C. gasigenes spores inoculated in vacuum packaged meat, showed us differences in growth between these microorganisms. C. gasigenes produced more amount of gas, leading the blown pack faster than C. estertheticum. The first evidence of gas bubble production by C. gasigenes was observed after 21 storage days at 7°C, whereas C. estertheticum started to produce bubbles only after 35 days at the same storage conditions. Gas production was intense in higher storage temperatures. Through the pH measurement it was possible verify that C. gasigenes increases progressively the pH, reaching maximum values after 49-77 days at higher storage temperatures, followed by decreasing. Moreover C. estertheticum do not cause variation in the pH, but it may be seen an accentuated decrease until 21-35 days, followed by an increase of the values, probably because of C. estertheticum ability to revert a falling pH through fast lactate fermentation, started when availability of glucose ends. Regarding to use of organic acids, there is reduced or none effect on C. gasigenes and C. estertheticum spores, it becomes this technique no viable to reduce or control blown pack in vacuum packaged meat. For the first time is demonstrate that C. estertheticum forms biofilm. Strains of C. estertheticum DSM 8809T and C. estertheticum LHCE-13 isolated from abattoir equipment (leather removal drums) are able to colonize surfaces of stainless steel in 07 days. The sanitizers peracetic acid (500mg/L) and hydrogen peroxide (200 mg/L) exposure in 5-25 day-old biofilms at least 15 minutes were effective to control them. Severe and effective hygienization program is needed to control C. estertheticum and C. gasigenes in abattoir environment, mainly because they may be present on equipment surfaces in spore forms and also through biofilm formation in places with high organic material presence / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos